技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于日化產(chǎn)品領(lǐng)域，具體以富含肽混合物的未分化的白桑細(xì)胞為基礎(chǔ)成分的化妝品。
背景技術(shù)：
：目前市場(chǎng)已推出了大量以植物萃取成分為基礎(chǔ)成分的化妝品，主要用于抗衰老、抗皺或者皮膚再生。比如說(shuō)，以桑樹(shù)提取物，特別是白桑提取物為基礎(chǔ)成分的化妝品，已經(jīng)登記在EP296923號(hào)文件中，因?yàn)樯?shù)的提取物能夠產(chǎn)生一個(gè)水脂層，所以該成分可以產(chǎn)生淡化色素或消炎的作用。EP997140號(hào)文件中闡述了一種全新的化妝品和/或皮膚病學(xué)成分，其中結(jié)合了桑樹(shù)提取成分和至少一種水楊酸衍生成分，該成分具有淡化色素的作用。US7195787號(hào)文件中闡述了一種用于保護(hù)局部皮膚抵御自由基的化妝品成分，該成分具有防曬和保護(hù)皮膚免受大氣污染傷害的作用。該成分包含了三種抗自由基制劑，其中一種便是桑樹(shù)提取物。同時(shí)，EP1531782號(hào)文件中還闡述了一種以蛋白質(zhì)為基礎(chǔ)的用于皮膚清潔的成分，該成分包含一類與銅結(jié)合的蛋白質(zhì)或含酶活性成分，以混合植物提取物(其中包括桑樹(shù)提取物)和乙二胺四乙酸二鈉鹽的形式組成。本發(fā)明人現(xiàn)提出一種化妝品組合物，它不含色素，同時(shí)又擁有更多抗氧化和抗自由基的成分，能刺激皮膚再生，使皮膚更加光亮。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的是提供一種化妝品用組合物，它不含色素，同時(shí)又擁有更多抗氧化和抗自由基的成分，能刺激皮膚再生，使皮膚更加光亮。為實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案。本發(fā)明提供了一種化妝品用組合物，至少包含：(a)提取出的未分化的白桑細(xì)胞，(b)含肌肽、大米肽、Ala-Asp-Leu-Lys-Pro-Thr六肽和寡肽-1的肽混合物，以及(c)適用于化妝品的溶劑。所述未分化的白桑細(xì)胞為未被碾碎或未被充分碾碎的白桑細(xì)胞，同時(shí)最易分散在適用于化妝品的溶劑中。所述肽混合物含肌肽、大米肽、Ala-Asp-Leu-Lys-Pro-Thr六肽和寡肽-1。其中，肌肽是一種由β丙氨酸和組氨酸組成的二肽(CAS編號(hào)：305-84-0)，其分子量為226g，呈白色粉末狀。大米肽為大米蛋白質(zhì)經(jīng)蛋白酶作用后，再經(jīng)特殊處理而得到的蛋白質(zhì)水解產(chǎn)物，為溶液狀態(tài)，含少于1％的大米提取物和少于1％的防腐藥劑(例如抗菌藥劑和抗真菌藥劑)。本發(fā)明所述大米肽溶液是由Vincience以水解水稻提取蛋白質(zhì)(Thymophytane)之名進(jìn)行銷售的。Ala-Asp-Leu-Lys-Pro-Thr六肽中Asp是丙氨酸的縮寫(xiě)；Lys是山楊酸的縮寫(xiě)；Leu是亮氨酸的縮寫(xiě)；Lys是賴氨酸的縮寫(xiě)；Pro是脯氨酸的縮寫(xiě)；而Thr是蘇氨酸的縮寫(xiě))，即Ala-Asp-Leu-Lys-Pro-Thr六肽為丙氨酸-山楊酸-亮氨酸-賴氨酸-脯氨酸-蘇氨酸六肽。它是一種使用在面霜中的活性成分。這個(gè)成分在國(guó)際多肽研究與治療雜志(2013)19:217-224中，由安娜·奧勒杰尼克等人所發(fā)表的名為“質(zhì)譜法對(duì)于丙氨酸-山楊酸-亮氨酸-賴氨酸-脯氨酸-蘇氨酸六肽的測(cè)定”的一文中有相關(guān)說(shuō)明(可在Springerlink.com中找到該文章)。寡肽-1是一種含有少于60個(gè)氨基酸的肽。它也被認(rèn)為是一種小蛋白或表皮生長(zhǎng)因子。寡肽-1由BioOrganicConcepts公司(美國(guó)加利福尼亞州圣菲斯普林斯，郵編CA90670)以名為DermatienEGF進(jìn)行銷售，該產(chǎn)品為含有25％(重量)硫酸銨和低于0.01％(重量)寡肽-1的水溶液的形式。肽混合物優(yōu)選包括少于60個(gè)氨基酸，更優(yōu)選少于40個(gè)氨基酸，少于10個(gè)氨基酸的肽混合物最佳。肽混合物優(yōu)選多于50％重，更優(yōu)選多于70％重以及少于10個(gè)氨基酸。本發(fā)明所述化妝品用組合物還包含適用于化妝品的溶劑，尤其是用于局部。本發(fā)明所述化妝品用組合物優(yōu)選包含0.0005％-20％干重的提取出的未分化白桑細(xì)胞。更優(yōu)選0.001％-10％干重，最好是0.001％-1％干重的提取出的未分化白桑細(xì)胞。按照本發(fā)明，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解上述提取出的未分化白桑細(xì)胞優(yōu)選混合或分散在適用于化妝品的溶劑中，尤其優(yōu)選分散于甘油中。本發(fā)明所述化妝品用組合物優(yōu)選還包含0.0001％-10％干重的含肌肽、大米肽、Ala-Asp-Leu-Lys-Pro-Thr六肽和寡肽-1的肽混合物。更優(yōu)選0.0001％-5％干重，最好是0.0002％-1％干重的含肌肽、大米肽、Ala-Asp-Leu-Lys-Pro-Thr六肽和寡肽-1的肽混合物。按照本發(fā)明，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解所述含肌肽、大米肽、Ala-Asp-Leu-Lys-Pro-Thr六肽和寡肽-1的肽混合物優(yōu)選與提取出的未分化白桑細(xì)胞處于同一相中，特別是同一脂相。所述含肌肽、大米肽、Ala-Asp-Leu-Lys-Pro-Thr六肽和寡肽-1的肽混合物中，肌肽的重量占肽混合物重量1％-95％，優(yōu)選占5％-90％，更優(yōu)選占50％-85％；大米肽的重量占肽混合物重量1％-50％，優(yōu)選占3％-40％，更優(yōu)選占4％-20％；Ala-Asp-Leu-Lys-Pro-Thr六肽的重量占肽混合物重量1％-50％，優(yōu)選占3％-40％，更優(yōu)選占4％-20％；寡肽-1的重量占肽混合物重量1％-50％，優(yōu)選占3％-40％，更優(yōu)選占4％-20％。本發(fā)明所述提取出的未分化白桑細(xì)胞直徑平均≤200μm，優(yōu)選≤100μm，在一些實(shí)施例中，所述提取出的未分化白桑細(xì)胞直徑少于5μm。本發(fā)明對(duì)未分化白桑細(xì)胞的提取方法沒(méi)有特別限定。在一些實(shí)施方案中，所述提取出的未分化白桑細(xì)胞在提取時(shí)在二氧化碳的培養(yǎng)箱中操作，同時(shí)交替進(jìn)行30分鐘到6小時(shí)的照明處理和15分鐘到2小時(shí)的非照明處理。即進(jìn)行30分鐘到6小時(shí)的照明處理后需要進(jìn)行5分鐘到2小時(shí)的非照明處理，然后再進(jìn)行照明處理。所述含肌肽、大米肽、Ala-Asp-Leu-Lys-Pro-Thr六肽和寡肽-1的肽混合物中的大米肽優(yōu)選為水解的大米肽。更優(yōu)選為單水稻水解蛋白或多水稻水解蛋白，尤其多水稻水解蛋白。作為優(yōu)選，所述適用于化妝品的溶劑為甘油和/或丙三醇。本發(fā)明所述的化妝品用組合物具有以下至少一種用途：抗氧化和/或抗自由基；防御紫外線(UV-A和/或UV-B)，尤其是紫外線B(UV-B)；防止衰老，尤其是能限制或減緩面部肌膚松弛，減少臉部細(xì)紋，和/或延緩細(xì)紋的產(chǎn)生；保持肌膚水潤(rùn)；加強(qiáng)皮膚的抗氧化能力；確保內(nèi)分泌穩(wěn)定，促進(jìn)體內(nèi)平衡；減少角化細(xì)胞的脫落，保證角質(zhì)細(xì)胞的凝聚力；增殖皮膚細(xì)胞，促使并顯著加快細(xì)胞更新；促進(jìn)表皮細(xì)胞的分化；促進(jìn)表皮細(xì)胞再生；促進(jìn)和/或加快膠原蛋白的重新生成。優(yōu)選的，所述化妝品用組合物用于臉部皮膚，臉頰皮膚，顴骨皮膚，魚(yú)尾紋處，法令紋處，淚溝，特別是眼部皮膚。和/或所述化妝品用組合物呈霜狀，膏狀，啫喱狀，乳狀，流動(dòng)液體混合物，固體或半固體混合物，棍狀，棒狀，小管狀，固體或半固體狀凝膠型……。本發(fā)明提供了一種化妝品用組合物至少包含(a)提取出的未分化白桑細(xì)胞、(b)含肌肽、大米肽、Ala-Asp-Leu-Lys-Pro-Thr六肽和寡肽-1的肽混合物以及(c)適用于化妝品的溶劑。本發(fā)明所述化妝品組合物不含色素，同時(shí)又擁有更多抗氧化和抗自由基的成分，能刺激皮膚再生，使皮膚更加光亮。附圖說(shuō)明為了更清楚地說(shuō)明本發(fā)明實(shí)施例或現(xiàn)有技術(shù)中的技術(shù)方案，下面將對(duì)實(shí)施例或現(xiàn)有技術(shù)描述中所需要使用的附圖作簡(jiǎn)單地介紹。圖1A示未處理的再生表皮組織結(jié)構(gòu)圖；圖1B示在24小時(shí)之內(nèi)往再生表皮中加入0.5％的活性劑后的再生表皮組織結(jié)構(gòu)圖；圖1C示在24小時(shí)之內(nèi)往表皮中加入1％的活性劑后的再生表皮組織結(jié)構(gòu)圖；和圖1D示在24小時(shí)之內(nèi)往再生表皮中加入2.5％的活性劑后的再生表皮組織結(jié)構(gòu)圖；圖2示未處理的表皮以及24小時(shí)內(nèi)加入0.5％活性劑、1％活性劑和2％活性劑進(jìn)行處理后，570nm下的光密度的統(tǒng)計(jì)圖；圖3示未處理的表皮以及在24小時(shí)之內(nèi)0.5％活性劑、1％活性劑和2％活性劑進(jìn)行處理后表皮中羥基脯氨酸的含量統(tǒng)計(jì)圖，其中羥基脯氨酸濃度單位為mg/L；圖4示未處理的表皮以及在24小時(shí)之內(nèi)0.5％活性劑、1％活性劑和2％活性劑進(jìn)行處理后表皮中細(xì)胞增殖標(biāo)記物(Ki-67)的數(shù)量統(tǒng)計(jì)圖；圖5A示未處理組通過(guò)彩色顯影液染色后，使增殖細(xì)胞核抗原Ki-67得以顯現(xiàn)的再生表皮組織結(jié)構(gòu)圖；圖5B示在24小時(shí)之內(nèi)，往再生表皮中加入0.5％的活性劑后的再生表皮組織結(jié)構(gòu)圖；圖5C示在24小時(shí)之內(nèi)，往表皮中加入1％的活性劑后的再生表皮組織結(jié)構(gòu)圖；圖5D示在24小時(shí)之內(nèi)，往再生表皮中加入2.5％的活性劑后的再生表皮組織結(jié)構(gòu)圖；圖6A示未處理組凍結(jié)之后確定聚絲蛋白的存在的再生表皮組織結(jié)構(gòu)圖；圖6B示在24小時(shí)之內(nèi)，往再生表皮中加入0.5％的活性劑后的再生表皮組織結(jié)構(gòu)圖；圖6C示24小時(shí)之內(nèi)，往表皮中加入1％的活性劑后的再生表皮組織結(jié)構(gòu)圖；圖6D示在24小時(shí)之內(nèi)，往再生表皮中加入2.5％的活性劑后的再生表皮組織結(jié)構(gòu)圖。具體實(shí)施方式下面將結(jié)合本發(fā)明實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施例僅僅是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例。基于本發(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒(méi)有做出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。未分化白桑細(xì)胞的生產(chǎn)流程最好是采用WO03/077881中所述記載的流程。據(jù)現(xiàn)行文獻(xiàn)對(duì)植物未分化細(xì)胞的記載，我們可以從中得知，沒(méi)有一個(gè)植物細(xì)胞具備獨(dú)立于其他細(xì)胞而獨(dú)自生存的能力。白桑的未分化細(xì)胞可以從整個(gè)植株中提取，也可以從植株的某些部分提取，例如葉子、莖干、花朵、花瓣、根、果實(shí)、果皮、果殼、種子、花藥、汁液、刺棘、芽、莖皮、漿果以及它們的混合物。優(yōu)選的，白桑的未分化細(xì)胞從莖皮、汁液、芽和果皮中提取。白桑的未分化細(xì)胞可以從傳統(tǒng)繁殖的植物中提取，或者從組織培養(yǎng)出的植物中提取。傳統(tǒng)繁殖指的是傳統(tǒng)的培養(yǎng)方式，也就是說(shuō)在室外或在溫室中，在土地里、在非地表上或在溶液中進(jìn)行的培養(yǎng)。組織培養(yǎng)一般指本領(lǐng)域的技術(shù)人員通過(guò)人工方式從植物或植物的某部分中進(jìn)行提取。不同于傳統(tǒng)繁殖的是，當(dāng)白桑植物細(xì)胞在培養(yǎng)容器中生長(zhǎng)時(shí)，通過(guò)物理化學(xué)條件的壓力能夠過(guò)濾出雜質(zhì)，提取出合格的植物細(xì)胞，且該細(xì)胞能保鮮整年。按照本發(fā)明，最好可以使用組織培養(yǎng)的植物的未分化細(xì)胞。白桑未分化細(xì)胞的提取最好在培養(yǎng)基中進(jìn)行。白桑的未分化細(xì)胞可以使用之前記載的任意一種的方法進(jìn)行提取。比如由E.F.喬治和P.D.涉林頓在《商業(yè)實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)及目錄》(ExegeticsLtd1984)的“使用組織培養(yǎng)進(jìn)行植物繁殖”一文中描述的方法。根據(jù)本發(fā)明，可使用的最佳培養(yǎng)基一般為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的培養(yǎng)基。比如，B5培養(yǎng)基、MS培養(yǎng)基、赫勒培養(yǎng)基、WH培養(yǎng)基等等。在E.F喬治、DJM普托克和H.J喬治的“植物培養(yǎng)基：配制和用途”(ExegeticsLtd1987，1&2冊(cè))一文中記載了有關(guān)于這些培養(yǎng)基的完整說(shuō)明。按照本發(fā)明，最好能夠準(zhǔn)備一些白桑的未分化植物細(xì)胞培養(yǎng)在MS培養(yǎng)基中。按照本發(fā)明，成分的特殊性及相關(guān)細(xì)節(jié)將通過(guò)單獨(dú)示例的方式進(jìn)行說(shuō)明。本發(fā)明中關(guān)于化妝品成分的有效性的檢測(cè)將在下述內(nèi)容中進(jìn)行說(shuō)明。在檢測(cè)中，使用了以下物質(zhì)：1.白桑中的完整未分化細(xì)胞(最好是混合或分散在適用于化妝品的溶劑中)。這些白桑未分化細(xì)胞(最好是混合或分散在適用于化妝品的溶劑中)均采用以下方式提取而成：第一步：提取白桑細(xì)胞，并在組織培養(yǎng)基內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)。白桑細(xì)胞的提取采用的是傳統(tǒng)的方法，然后采用從莖部開(kāi)始連續(xù)移植的步驟。此次使用的是整套的B5培養(yǎng)基，購(gòu)自Sigma-Aldrich(德國(guó))公司。其他培養(yǎng)基也是可行的。第二步：從第一步中移植白桑細(xì)胞，并在組織培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，從而使白桑細(xì)胞得以增殖。第一步中白桑細(xì)胞的提取過(guò)程是在組織培養(yǎng)基中進(jìn)行的(例如B5培養(yǎng)基)，在含有氧氣和二氧化碳的體介質(zhì)中(富含二氧化碳的空氣能使其密度比達(dá)到2至5％)，在一個(gè)包含100次弱光照射的周期內(nèi)，光照強(qiáng)度少于10lx(1至5lx)，在空氣濕潤(rùn)的環(huán)境下放置1小時(shí)(濕度在75％左右)，富含二氧化碳(使其二氧化碳的密度達(dá)到5％)，溫度保持30℃。其第二步增殖過(guò)程是指分別在弱光照射以及在空氣潮濕(濕度在75％左右)富含二氧化碳(使空氣中二氧化碳的含量達(dá)到5％)的環(huán)境下用大于100000lx光照射，并使其濕度達(dá)到45％。此次培養(yǎng)在亮室中進(jìn)行，同時(shí)可以借助一個(gè)不透光的隔板，得以實(shí)現(xiàn)從黑暗環(huán)境到明亮環(huán)境的轉(zhuǎn)變過(guò)程。第三步：在組織培養(yǎng)基中進(jìn)行白桑細(xì)胞的提取，例如經(jīng)過(guò)一次或多次清洗進(jìn)行過(guò)濾，尤其要注意在操作過(guò)程中不破壞白桑細(xì)胞的細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)。第四步：白桑未分化細(xì)胞分散于載體中，比如分散甘油中。2.肽的混合物按照本發(fā)明，制備肽混合物需要使用以下成分：2.1肌肽肌肽是一種由β丙氨酸和組氨酸組成的二肽(CAS編號(hào)：305-84-0)，其分子量為226g，呈白色粉末狀。2.2大米肽大米肽為大米蛋白質(zhì)經(jīng)蛋白酶作用后，再經(jīng)特殊處理而得到的蛋白質(zhì)水解產(chǎn)物，為溶液狀態(tài)，含少于1％的大米提取物和少于1％的防腐藥劑(例如抗菌藥劑和抗真菌藥劑)。本發(fā)明所述大米肽溶液是由Vincience以水解水稻提取蛋白質(zhì)(Thymophytane)之名進(jìn)行銷售的大約含有0.3％的大米肽。2.3Ala-Asp-Leu-Lys-Pro-Thr六肽Ala-Asp-Leu-Lys-Pro-Thr六肽為丙氨酸-山楊酸-亮氨酸-賴氨酸-脯氨酸-蘇氨酸六肽是一種使用在面霜中的活性成分。這個(gè)成分在國(guó)際多肽研究與治療雜志(2013)19:217-224中，由安娜·奧勒杰尼克等人所發(fā)表的名為“質(zhì)譜法對(duì)于丙氨酸-山楊酸-亮氨酸-賴氨酸-脯氨酸-蘇氨酸六肽的測(cè)定”的一文中有相關(guān)說(shuō)明(可在Springerlink.com中找到該文章)。這種六肽以溶液的形式出現(xiàn)，含有0.5％至6％的六肽(一般約5％)，置于由水和丁二醇組成的混合液中。2.4寡肽-1寡肽-1是一種含有少于60個(gè)氨基酸的肽。它也被認(rèn)為是一種小蛋白或表皮生長(zhǎng)因子。寡肽-1由BioOrganicConcepts公司(美國(guó)加利福尼亞州圣菲斯普林斯，郵編CA90670)以名為DermatienEGF進(jìn)行銷售，該產(chǎn)品為含有25％(重量)硫酸銨和低于0.01％(重量)寡肽-1的水溶液的形式。肽混合物的制備(MP1)是在一個(gè)配備有磁攪拌機(jī)的容器中進(jìn)行，加入100ml的EGF(相當(dāng)于0.01g的寡肽-1)，在常溫下混合攪拌，再加入100ml含有5％(重量)Ala-Asp-Leu-Lys-Pro-Thr六肽溶液，最后加入100g的肌肽，之后將100ml的(相當(dāng)于0.3g的大米肽)進(jìn)行攪拌。相比寡肽-1、大米肽和Ala-Asp-Leu-Lys-Pro-Thr六肽的總干重，肽混合物MP1中肌肽的含量要多得多。其他從MP2到MP10的肽混合物，均是使用呈溶液狀的EGF(溶液形式)和Ala-Asp-Leu-Lys-Pro-Thr六肽(溶液形式)、肌肽(粉末狀)以及(溶液形式)按照不同比例制備得到，如下表1。表1MP2到MP10的肽混合物中各成分的比例混合物MP2MP3MP4MP5MP6MP7MP8MP9MP10寡肽-1100ml100ml100ml100ml100ml100ml100ml100ml50mlAla-Asp-Leu-Lys-Pro-Thr六肽100ml100ml50ml50ml25ml50ml50ml75ml20ml肌肽50g25g25g50g25g15g5g40g15g大米肽100ml100ml100ml50ml50ml100ml25ml75ml40ml肽的混合最好在用于化妝品的溶劑中進(jìn)行，例如甘油。按照本發(fā)明，本發(fā)明所述化妝品用組合物(水溶液)中包含一種或多種應(yīng)用于化妝品中的賦形劑。這類成分同時(shí)還可能包含一種或多種常規(guī)化妝品佐劑，可以是脂肪體、有機(jī)溶劑、離子或非離子增稠劑、親水性或親脂性增稠劑、軟化劑、保濕劑、遮光劑、穩(wěn)定劑、潤(rùn)膚劑、硅樹(shù)脂、消泡劑、香料、防腐劑、陰離子表面性劑、陽(yáng)離子或非離子以及兩性離子活性劑、載體、聚合物、推進(jìn)劑、堿化或酸化劑，以及其他常用于化妝品領(lǐng)域和/或皮膚病學(xué)領(lǐng)域的成分。脂肪體可以是由一種油或蠟，或它們的混合組成。油是指在常溫下的液體混合物。蠟是指在常溫下的固體混合物或基本成固態(tài)的混合物，熔點(diǎn)一般高于35攝氏度。油類比如有礦物油(石蠟油)、植物油(杏仁油、堅(jiān)果油、黑加侖籽油、西蒙得木油)、合成油(例如氫化角鯊烯)、醇類、草酰胺(月桂酰肌氨酸異丙酯)、酸類或者脂類(例如含有12至15個(gè)碳原子的苯甲酸醇，苯甲酸2-乙基己酯，棕櫚酸酯，酸異丙酯，甘油三酯，檸檬酸/辛酸)、硅油(環(huán)二甲基硅酮，聚二甲基硅氧烷)或氟化油、聚亞烷基二醇、三烷基偏苯三酸酯(例如偏苯三酸三癸酯)。關(guān)于蠟類，可以采用棕櫚蠟、蜂蠟、富氫化油、聚乙烯蠟、聚亞甲基蠟。關(guān)于有機(jī)溶劑，可以采用乙醇和低多元醇。有機(jī)溶劑可以在二元醇類和乙二醇醚中進(jìn)行選擇，比如乙二醇、聚乙二醇、丁二醇或二甘醇。親水性增稠劑可以選擇羧乙烯聚合物，如聚合物(Carbomer)以及路博潤(rùn)公司研發(fā)的聚合物(丙烯酸酯共聚物/含有10至30個(gè)碳原子的丙烯酸)；聚丙烯酰胺；聚合物和2-丙烯酰氨基-2-甲基丙烷的共聚物，最終使其成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，和/或使其中和；2-丙烯酰胺-2-甲基丙烷磺酸和丙烯酸羥乙酯的共聚物；纖維素衍生物，如羥乙基纖維素；多糖，特別是樹(shù)膠，如黃原膠；以及它們的混合物。親脂性增稠劑可以選擇合成聚合物，如聚丙烯酸烷基酯(含10至30個(gè)碳原子)或改性粘土，如鋰蒙脫石及其衍生物。本發(fā)明中的化妝品用組合物可以根據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員的已有技術(shù)來(lái)進(jìn)行制備。成分的形式可以是單一或復(fù)合型的乳化液(H表示油，E表示水：H/E、E/H、H/E/H或者E/H/E)，例如霜，乳或凝膠，可以是水凝膠或呈乳液的形式。還可以使用氣霧劑的形式進(jìn)行灌裝，還可酌情采用泡沫或噴霧的形式。本發(fā)明中的化妝品用組合物最好為以乳化液/懸浮油包水或水包油的形式呈現(xiàn)，可以含酒精，或者不含酒精，同時(shí)應(yīng)具有良好的白桑細(xì)胞分散性(特別是白桑)。一般情況下，乳化液應(yīng)含有兩性乳化劑、陰離子乳化劑、陽(yáng)離子乳化劑及非離子乳化劑中的其中一種，可單獨(dú)使用也可以混合使用。乳化劑應(yīng)根據(jù)需要實(shí)現(xiàn)乳化液需要的形式(E/H或H/E)進(jìn)行適當(dāng)?shù)倪x取。乳化液中還可以含有其他類型的穩(wěn)定劑，如載體，凝膠聚合物或增稠劑。作為水/油乳化液制備用的表面活性劑，舉例來(lái)說(shuō)，可以采用烷基酯或山梨糖醇酯，甘油醚，糖類醚；有機(jī)硅表面活性劑，例如二甲基硅氧烷共聚比如有環(huán)二甲基硅酮的混合物，二甲基硅氧烷共聚物，烷基二甲基硅氧烷共聚比如有十二烷基聚甲基硅氧烷共聚；十六烷基二甲基硅氧烷共聚以及十六烷基二甲基硅氧烷共聚物，硬脂酸聚乙二醇混合物以及己酯混合物。最好能從烷基酯多元醇組中選出一個(gè)或多個(gè)共同乳化劑加入到其中。對(duì)于烷基酯多元醇，舉例來(lái)說(shuō)，我們可以采用乳化劑、非離子乳化劑如脂肪酸酯和甘油酯氧化烯(尤其是聚氧乙烯)；脂肪酸酯和脫水山梨醇酯氧化烯；氧化烯酯脂肪酸(氧乙烯和/或環(huán)氧丙烷)，例如PEG-100硬脂酸酯/甘油硬脂酸酯的混合物；醇醚脂肪(氧乙烯和/或環(huán)氧丙烷)，糖醚例如蔗糖硬脂酸酯，主要是烷基聚葡糖苷(APG)例如癸基糖苷和月桂基葡糖苷，鯨蠟硬脂甙，例如醇花生四烯酸的混合物，苯醇混合物和花生糖苷醇混合物。在其他乳化穩(wěn)定劑或懸浮穩(wěn)定劑中，更多地會(huì)使用間苯二甲酸聚合物或硫代酸聚合物，尤其是鄰苯二甲酸鹽/間苯磺/乙二醇的聚合物，例如二甘醇/鄰苯二甲酸鹽/間苯二甲酸/1,4-環(huán)己二醇的聚合物(國(guó)際化妝品原料名：Polyester-5)。對(duì)于乳液/懸浮液，其水相可以包含運(yùn)用已知方法制備的非離子型多孔分散劑。為了進(jìn)一步理解本發(fā)明，下面結(jié)合具體實(shí)施例進(jìn)行闡述。本發(fā)明在下述實(shí)施例中給出了一些樣本，非限制性的，局部使用的化妝包成分。在這些樣本中，包括冷卻的未分化的白桑細(xì)胞(20毫升)、甘油(80毫升)以及MP1至MP10的混合物(20毫升)，在下文統(tǒng)稱為活化劑(MCF)。如無(wú)特殊說(shuō)明，試驗(yàn)所使用的材料或試劑均為市售產(chǎn)品，可以通過(guò)商業(yè)渠道購(gòu)買獲得，如試管重建人體表皮為法國(guó)里昂AlexandreFleming街4號(hào)Episkin公司銷售的皮膚模型(F-69366)，在該公司網(wǎng)址上，記載了重建表皮相關(guān)的詳細(xì)信息。專用培養(yǎng)基為加拿大安大略省IDLabs有限公司銷售的“ModifiedMCDB153Medium”培養(yǎng)基，產(chǎn)品目錄編號(hào)IS1141(www.idlabs.com)。MTT購(gòu)自Sigma-Aldrich公司，產(chǎn)品編號(hào)M5655。MIB-1抗體購(gòu)自Westbrook，ME(產(chǎn)品目錄編號(hào)0505)。如無(wú)特殊說(shuō)明，試驗(yàn)所使用的方法均為本領(lǐng)域公知的方法。如MTT檢測(cè)法可參見(jiàn)下述網(wǎng)址：web.mnstate.edu/provost/mtt％20proliferation％20assay％20protocol.pdf實(shí)施例1：膏霜配方：MCF(**)為提取出的未分化新鮮白桑細(xì)胞(20ml)和甘油(80ml)的混合液，其中還添加了20ml的肽混合物(MP1至MP10)，即MCF(**)中未分化新鮮白桑細(xì)胞、甘油和肽混合物(MP1至MP10)的體積比為1:4:1。配制好的膏體粒度非常細(xì)膩，未分化的白桑細(xì)胞分散均勻。經(jīng)化學(xué)特性分析，不含細(xì)菌、真菌，且成分穩(wěn)定性高。另外可以分別加入1wt％、2.5wt％的MCF，制得類似成分的膏體。同時(shí)，相應(yīng)減少水的用量，使總比例達(dá)到100％。實(shí)施例2：膏霜配方：MCF(**)為提取出的未分化新鮮白桑細(xì)胞(20ml)和甘油(80ml)的混合液，其中還添加了20ml的肽混合物(MP1至MP10)，即MCF(**)中未分化新鮮白桑細(xì)胞、甘油和肽混合物(MP1至MP10)的體積比為1:4:1。配制好的膏體粒度非常細(xì)膩，未分化的白桑細(xì)胞分散均勻。經(jīng)化學(xué)特性分析，不含細(xì)菌、真菌，且成分穩(wěn)定性高。另外可以分別加入1wt％、2.5wt％的MCF，制得類似成分的膏體。同時(shí)，相應(yīng)減少水的用量，使總比例達(dá)到100％。實(shí)施例3：乳霜水相A：在潤(rùn)膚品中加入去離子水油相B：乳化劑+潤(rùn)膚劑或潤(rùn)膚物質(zhì)+油C相：防腐劑、香精D相：活性產(chǎn)品：含提取出的未分化白桑細(xì)胞(分散于適合制作化妝品的溶劑中，特別是甘油)和肽混合物(MP1到MP10)，呈粘稠的懸浮液狀或啫喱狀。實(shí)施例4：爽膚水爽膚水只屬于水相A，由去離子水、丙二醇、防腐劑、香精和活性產(chǎn)品等基本成分組成。其中活性產(chǎn)品含提取出的未分化白桑細(xì)胞(分散于適合制作化妝品的溶劑中)和肽混合物(MP1至MP10)，呈粘稠的懸浮液狀或啫喱狀。實(shí)施例5：洗發(fā)水洗發(fā)水只屬于水相A，由去離子水、表面活性劑、起泡劑、增稠劑、香精和活性成分等基本成分組成。其中活性產(chǎn)品含提取出的未分化白桑細(xì)胞(分散于適合制作化妝品的溶劑中)和肽混合物(MP1至MP10)，呈粘稠的懸浮液狀或啫喱狀。實(shí)施例6：?jiǎn)ㄠ谒郃或油相B中添加乳化劑類和增稠劑類成分，可以配制出水凝膠和油凝膠。C相：香精、防腐劑D相：提取出的未分化白桑細(xì)胞(分散于適合制作化妝品的溶劑中)和肽混合物(MP1至MP10)，呈粘稠的懸浮液狀或啫喱狀。實(shí)施例7：化妝水化妝水只屬于水相A，由去離子水、香精、防腐劑和活性產(chǎn)品等基本成分組成。其中活性產(chǎn)品含提取出的未分化白桑細(xì)胞(分散于適合制作化妝品的溶劑中)和肽混合物(MP1至MP10)，呈粘稠的懸浮液狀或啫喱狀。實(shí)施例8：乳液水相A：主要由去離子水組成油相B：油+乳化劑+潤(rùn)膚劑C相：防腐劑+潤(rùn)膚成分D相：活性成分：含提取出的未分化白桑細(xì)胞(分散于適合制作化妝品的溶劑中)和肽混合物(MP1至MP10)，呈粘稠的懸浮液狀或啫喱狀。上述實(shí)驗(yàn)中，與乳霜、啫喱或乳液相關(guān)的相A、相B、相C、相D，按常規(guī)方法混合，可根據(jù)不同用途調(diào)整它們之間的比例，男士化妝品與其配制方法相同。對(duì)于爽膚水、化妝水和洗發(fā)水這類針對(duì)特定區(qū)域使用的化妝品，所含成分不同，只能在水相中根據(jù)不同用途調(diào)整用量并加以混合，男士化妝品與其配制方法相同。未分化白桑細(xì)胞(完整)和肽混合物(MP1至MP10)的比例取決于特定護(hù)理區(qū)域化妝品的性質(zhì)和期待的使用效果。很顯然，該發(fā)明并不僅限于上述幾種實(shí)驗(yàn)，還可根據(jù)特定區(qū)域的護(hù)理需求，配制其他質(zhì)地的化妝品，如油類、乳霜、發(fā)膠、脂粉(粉底，口紅，化妝筆，睫毛膏或其他可以突出眼部效果、為睫毛上色、增長(zhǎng)或增厚睫毛的化妝品、眼影)。試驗(yàn)例1：檢測(cè)發(fā)明中所含成分的有效性檢測(cè)前，需備好一份化妝品基底溶液(由乙醇和水組成)，用這種溶液分別準(zhǔn)備一份“對(duì)照溶液”(control)和一份按照本發(fā)明調(diào)配的、成分類似的“實(shí)驗(yàn)溶液”。在“試驗(yàn)溶液”中加入由分散在甘油中的未分化的完整白桑細(xì)胞和MP1肽混合物組成的活化劑(其中含干重2％的未分化的完整白桑細(xì)胞和干重大概為0.03％的MP1肽混合物)。檢測(cè)前，需使用一塊試管重建人體表皮，其中人體角化細(xì)胞已經(jīng)在空氣/液體交界面中用專用培養(yǎng)基培養(yǎng)了14天，該培養(yǎng)基每?jī)商旄鼡Q一次。經(jīng)過(guò)14天培養(yǎng)，重建表皮可用于檢測(cè)實(shí)驗(yàn)。A、毒性檢測(cè)1、試驗(yàn)試劑：對(duì)照溶液按照實(shí)施例1分散均勻，不含MCF(未分化的完整的白桑細(xì)胞、甘油和MP1肽混合物)試驗(yàn)溶液按照實(shí)驗(yàn)1分散均勻，加入MCF(未分化的完整的白桑細(xì)胞、甘油和MP1肽混合物)。2、試驗(yàn)方法：每平方厘米重建表皮分別用10μL兩種試驗(yàn)試劑與重建表皮接觸。放置24小時(shí)后，用10％濃度的甲醛水溶液固定表皮標(biāo)本。采用蘇木精－伊紅染色法對(duì)4μm厚的表皮垂直截面進(jìn)行染色，在光學(xué)顯微鏡下觀察表皮中不同層次細(xì)胞的染色情況。將兩種處理過(guò)的重建表皮與未處理過(guò)的重建表皮進(jìn)行對(duì)比。結(jié)果顯示，對(duì)照溶液處理過(guò)的表皮和試驗(yàn)溶液處理過(guò)的表皮與未經(jīng)處理的表皮結(jié)構(gòu)相似，從而確定在處理過(guò)的表皮中細(xì)胞可以存活，并且試驗(yàn)溶液不具毒性。B、組織切片檢測(cè)和MTT檢測(cè)試驗(yàn)中需使用水質(zhì)活化劑(下文中稱“活化劑”)。該活化劑由分散在甘油中的未分化的完整白桑細(xì)胞和MP1肽混合物組成(上述活化劑中，細(xì)胞干重占2％，MP1肽干重約占0.03％)。根據(jù)重建表皮的重量，分別以表皮重量的0.5wt％、1wt％、2.5wt％的比重涂抹活化劑進(jìn)行處理。以未經(jīng)活化劑處理的表皮做對(duì)照。對(duì)表皮細(xì)胞標(biāo)本進(jìn)行組織切片，采用蘇木精－伊紅染色法進(jìn)行染色，在光學(xué)顯微鏡下觀察表皮細(xì)胞的染色情況。將經(jīng)不同含量活化劑處理過(guò)的重建表皮與未處理過(guò)的重建表皮進(jìn)行對(duì)比，結(jié)果見(jiàn)圖1A到1D。結(jié)果顯示，放置24小時(shí)甚至48小時(shí)后，經(jīng)不同含量活化劑處理過(guò)的重建表皮與未經(jīng)處理的重建表皮相似。涂抹或未涂抹活化劑的重建表皮細(xì)胞在37℃條件下放置24小時(shí)后，用培養(yǎng)基沖洗，然后再放入另外的培養(yǎng)皿中，加入200μL的MTT溶液(MTT濃度為5mg/mL)。37℃培養(yǎng)4小時(shí)。這期間，形成的藍(lán)紫色結(jié)晶甲瓚(Formazan)的分量與琥珀酸脫氫酶成反比。加入200μL二甲基亞砜后，各個(gè)培養(yǎng)皿被清空，細(xì)胞溶化，藍(lán)紫色結(jié)晶甲瓚溶解。待顏色變均勻后，用分光光度計(jì)在570nm波長(zhǎng)下測(cè)定各個(gè)培養(yǎng)皿中的細(xì)胞顏色。對(duì)經(jīng)活化劑處理的表皮和未經(jīng)活化劑處理的表皮進(jìn)行分光光度分析，結(jié)果見(jiàn)圖2。結(jié)果顯示，在570nm波長(zhǎng)下，處理過(guò)的重建表皮和未經(jīng)處理的表皮之間不存在光學(xué)密度上的差異。并不存在570nm波長(zhǎng)上的顯著光學(xué)密度差異(平均差異低于1.5％)。表明活性劑對(duì)表皮無(wú)害。C、對(duì)合成膠原蛋白的檢測(cè)經(jīng)過(guò)處理和未經(jīng)處理的表皮在37℃條件下放置24小時(shí)后，進(jìn)行離心操作，回收纖維母細(xì)胞，放入4℃條件下、濃度為0.5mL/L的乙酸溶液中，在膠原酶作用下降解24小時(shí)。經(jīng)過(guò)1000g離心處理，膠原蛋白在NaCl溶液中沉淀出來(lái)。把沉淀出來(lái)的膠原蛋白物制成懸浮液，然后透析提取。用鄰苯二甲醛測(cè)定伯胺，以排除它們?cè)斐傻母蓴_。同樣，在4-氯-7-硝基苯并呋喃作用下測(cè)定脯氨酸和羥基脯氨酸。與羥基脯氨酸偶合的NBD由HPLC分離、測(cè)定(需要先進(jìn)行校準(zhǔn))。對(duì)處理和未經(jīng)處理的不同表皮的膠原蛋白樣本進(jìn)行HPLC分析，結(jié)果見(jiàn)圖3。結(jié)果顯示，僅用占表皮比重0.5％的活化劑處理后，表皮中的羥基脯氨酸含量就會(huì)顯著增加。與未經(jīng)處理的表皮相比，用活化劑處理過(guò)的表皮放置24小時(shí)后測(cè)定的羥基脯氨酸含量高出25％，用2.5％活化劑處理過(guò)的表皮中的羥基脯氨酸含量甚至高出將近40％。表明，與未經(jīng)處理的表皮相比，活化劑處理過(guò)的表皮(按照表皮重量的2.5％使用)可以促進(jìn)合成將近40％之多的膠原蛋白總量。D、對(duì)有絲分裂指數(shù)的測(cè)定經(jīng)過(guò)處理和未經(jīng)處理的表皮在37℃條件下放置24小時(shí)后，用10％濃度的甲醛水溶液固定表皮標(biāo)本。將固定在甲醛中的表皮放入石蠟包埋盒中，切成薄片后進(jìn)行免疫組化。使用MIB-1抗體完成這一化學(xué)反應(yīng)，經(jīng)熱預(yù)處理后，采用過(guò)氧化物酶-抗過(guò)氧化物酶法得出最終結(jié)果。顯影液DAB(3.3-二氨基聯(lián)苯胺)染色后，細(xì)胞切片中的Ki-67核抗原呈褐色，其增長(zhǎng)表達(dá)分成以下幾個(gè)階段：G1和S＝細(xì)胞潛伏及合成階段G2＝細(xì)胞化合物的釋放階段M＝有絲分裂250倍放大鏡下，在每層切片取10個(gè)區(qū)域，通過(guò)計(jì)算相應(yīng)的核抗原數(shù)量判定有絲分裂指數(shù)，并與未處理表皮最終測(cè)定的核抗原數(shù)量進(jìn)行對(duì)比，結(jié)果見(jiàn)圖4。結(jié)果顯示，僅用占表皮比重0.5％的活性劑處理后，表皮中細(xì)胞標(biāo)記物的數(shù)量就會(huì)顯著增加。圖5A、5B、5C、5D為經(jīng)過(guò)彩色顯影液染色后，從組織學(xué)角度顯示的未處理的表皮及處理的表皮中Ki-67核抗原的結(jié)果。結(jié)果顯示在用2.5％比重的活化劑作用后的表皮中，核抗原數(shù)量增長(zhǎng)量超過(guò)20％，有絲分裂指數(shù)增長(zhǎng)超過(guò)27％。E、對(duì)絲聚蛋白的測(cè)定將經(jīng)過(guò)處理和未經(jīng)處理的表皮在37℃條件下放置24小時(shí)后，轉(zhuǎn)移至-18℃凍存。將冷凍的細(xì)胞放入石蠟包埋盒中，然后切片，進(jìn)行免疫組化檢測(cè)。在顯微鏡下觀察檢測(cè)絲聚蛋白的數(shù)量變化，結(jié)果見(jiàn)圖6A、6B、6C、6D。結(jié)果顯示，經(jīng)過(guò)凍存后，未處理表皮中顆粒層的絲聚蛋白數(shù)量密集且持久；而經(jīng)過(guò)處理的表皮的顆粒層中，絲聚蛋白的鍥形構(gòu)象密度較低，說(shuō)明表皮分化的標(biāo)志物減少。上述實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明所述活化劑包含未分化的完整的白桑細(xì)胞和含肌肽、大米肽、Ala-Asp-Leu-Lys-Pro-Thr六肽、寡肽-1的肽混合物，為無(wú)毒的化妝品成分，未分化的完整的白桑細(xì)胞與含肌肽、大米肽、Ala-Asp-Leu-Lys-Pro-Thr六肽、寡肽-1的肽混合物之間存在某種化學(xué)作用，可以增加化妝品的使用功效，可以顯著促進(jìn)膠原蛋白的合成，促進(jìn)細(xì)胞增殖，同時(shí)減緩表皮分化。在化妝品基礎(chǔ)液中添加本發(fā)明所述活化劑還能顯著促進(jìn)表皮細(xì)胞再生。應(yīng)當(dāng)指出的是，上述實(shí)施方式不應(yīng)視為對(duì)本發(fā)明的限制，本發(fā)明的保護(hù)范圍應(yīng)當(dāng)以權(quán)利要求所限定的范圍為準(zhǔn)。對(duì)于本
技術(shù)領(lǐng)域：
的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明的精神和范圍內(nèi)，還可以做出若干改進(jìn)，這些改進(jìn)和也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3