本發(fā)明涉及獸藥領(lǐng)域，具體而言，涉及一種調(diào)節(jié)動(dòng)物免疫功能的藥物組合物及其制備方法。

背景技術(shù)：

我國(guó)西南地區(qū)云、貴、川均為畜牧業(yè)生產(chǎn)大省，其中養(yǎng)豬業(yè)在全國(guó)首屈一指，家禽養(yǎng)殖業(yè)也日趨繁榮，并且養(yǎng)殖量逐年上升。但由于長(zhǎng)期使用各種化學(xué)藥品、抗生素等，動(dòng)物極易產(chǎn)生耐藥性。某些常見(jiàn)疾病，如大腸桿菌、雞白痢沙門氏菌、流行性感冒、流行性腹瀉、傳染性支氣管炎等病毒性疾病在畜、禽中普遍存在，發(fā)病死亡率較高。每年由于這類疾病，對(duì)整個(gè)畜牧業(yè)造成巨大的損失。

使用這些化學(xué)藥品的同時(shí)，存在兩大問(wèn)題：其一，由于家畜家禽的不規(guī)范用藥和長(zhǎng)期使用這類藥品，已產(chǎn)生了明顯的耐藥性，雖用藥量在不斷的增加，而療效卻并沒(méi)有明顯的提高甚至不斷下降；其二，由于這類藥品在實(shí)際應(yīng)用中，不嚴(yán)格限制休藥期，加之超劑量使用，導(dǎo)致藥物在動(dòng)物體內(nèi)的蓄積量不斷增加，在動(dòng)物源性食品中引起超量殘留。超量殘留，一方面嚴(yán)重影響這類食品的出口，給國(guó)家在出口創(chuàng)匯方面造成極大的損失；另一方面，人在食用這些食品后，對(duì)身體健康危害極大，引起人體耐藥性，當(dāng)需要使用這類藥品時(shí)，這時(shí)正常劑量、甚至超劑量都將達(dá)不到治療效果；同時(shí)，由于超量的攝入化學(xué)藥品，其副作用還將給人的身體器官帶來(lái)漸近性和不可復(fù)損害，因此，必須減少或者避免給動(dòng)物使用化學(xué)類藥品。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的第一目的在于提供一種調(diào)節(jié)動(dòng)物免疫功能的藥物組合物，該藥物組合物由黃芪和大青葉組成，通過(guò)黃芪和大青葉的相互配伍，能夠益氣固本、清瘟解毒，提高動(dòng)物的免疫能力。

本發(fā)明的第二目的在于提供一種調(diào)節(jié)動(dòng)物免疫功能的藥物組合物的制備方法，該方法以黃芪和大青葉為原料，通過(guò)提純工藝同時(shí)制備不同純度的藥材提取液，并最后同時(shí)得到多種劑型的藥物組合物，制劑工藝簡(jiǎn)便、穩(wěn)定，易于大批量生產(chǎn)，且生產(chǎn)成本低。

為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的上述目的，特采用以下技術(shù)方案：

一種調(diào)節(jié)動(dòng)物免疫功能的藥物組合物的制備方法，其包括：

采用溶劑提取法提取3～5份重量份的黃芪，減壓濃縮后制備多種純度的黃芪提取物；

采用溶劑提取法提取1～3份重量份的大青葉，減壓濃縮后制備多種純度的大青葉提取物；以及

將黃芪提取物與大青葉提取物混合，制備顆粒劑、口服液、注射劑或丸劑。

一種調(diào)節(jié)動(dòng)物免疫功能的藥物組合物，該藥物組合物由黃芪和大青葉組成，按重量份數(shù)計(jì)，黃芪為3～5份，大青葉為1～3份。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果為：

該藥物組合物由黃芪和大青葉組成，通過(guò)黃芪和大青葉的相互配伍，黃芪扶正補(bǔ)氣、調(diào)節(jié)免疫，大青葉抗菌病毒、增強(qiáng)免疫，兩者共奏益氣固本、清瘟解毒之功，且安全有效，提高動(dòng)物的免疫能力，且提高動(dòng)物的肉質(zhì)。該方法以黃芪和大青葉為原料，通過(guò)提純工藝同時(shí)制備不同純度的黃芪提取液和大青葉提取液，并通過(guò)不同純度的黃芪提取液和大青葉提取液之間的混合，能夠同時(shí)得到多種劑型的藥物組合物，即處理同一批次的黃芪和大青葉，便可同時(shí)得到顆粒劑、口服液、注射劑等劑型的藥物組合物，從而極大的減緩了工藝程序、降低了工作強(qiáng)度，且該方法工藝簡(jiǎn)便、成熟、穩(wěn)定，易于大批量生產(chǎn)，生產(chǎn)成本低。

具體實(shí)施方式

下面將結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的實(shí)施方案進(jìn)行詳細(xì)描述，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員將會(huì)理解，下列實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明，而不應(yīng)視為限制本發(fā)明的范圍。實(shí)施例中未注明具體條件者，按照常規(guī)條件或制造商建議的條件進(jìn)行。所用試劑或儀器未注明生產(chǎn)廠商者，均為可以通過(guò)市售購(gòu)買獲得的常規(guī)產(chǎn)品。

本實(shí)施方式提供一種調(diào)節(jié)動(dòng)物免疫功能的藥物組合物的制備方法，其包括：

S1:采用溶劑提取法提取3～5份重量份的黃芪，減壓濃縮后制備多種純度的黃芪提取物。

黃芪提取物包括第一黃芪提取物、第二黃芪提取物和第三黃芪提取物中的一種或多種，第一黃芪提取物、第二黃芪提取物和第三黃芪提取物的純度依次遞增。較高純度的黃芪提取物是由較低純度的黃芪提取物制備而來(lái)，即第三黃芪提取物是由第二黃芪提取物或者第一黃芪提取物提純制備而來(lái)；第二黃芪提取物是由第一黃芪提取物提純制備而來(lái)。

溶劑提取法包括水煎煮法、回流提取法、浸泡法、超聲波提取法等。在本發(fā)明較佳的實(shí)施例中，采用水煎煮法提取。

第一黃芪提取物的制備方法包括：采用水煎煮法提取黃芪，濾液減壓濃縮至其在55～65℃下的相對(duì)密度為1.2～1.3。優(yōu)選的，取黃芪藥材，加入8倍量的水煎煮3次，每次1.5h，合并濾液，將濾液減壓濃縮至相對(duì)密度為1.2～1.3(60℃)，即將濾液濃縮至其在60℃下的相對(duì)密度為1.2～1.3。

第二黃芪提取物的制備方法包括：將第一黃芪提取物與乙醇按照體積比1～2：1～3混合，即使所得溶液中乙醇的含醇量為50～60％，優(yōu)選為55％；靜置后，離心得第一黃芪沉淀和第一黃芪上清液；優(yōu)選為靜置12～48小時(shí)；第一黃芪上清液減壓濃縮至其在55～65℃下的相對(duì)密度為1.20～1.28，優(yōu)選為第一黃芪上清液減壓濃縮至其相對(duì)密度為1.20～1.28(60℃)。

由第一黃芪提取物制備第二黃芪提取物的過(guò)程，主要采用水提醇沉的純化工藝，將第一黃芪提取物中不易溶于水中的組分通過(guò)乙醇沉淀除去，進(jìn)而提高最后所得的第二黃芪提取物的純度。

第二黃芪提取物的制備方法還包括：用水溶解第一黃芪沉淀，再使其與乙醇按照體積比6～7：3～4混合，即使所得溶液中乙醇的含醇量為30～40％，優(yōu)選為35％，進(jìn)行醇沉法，以除去第一黃芪沉淀中不易溶于水中的組分；隨后，靜置12～48h，離心得第二黃芪上清液，第二黃芪上清液減壓濃縮至其在55～65℃下的相對(duì)密度為1.20～1.28，優(yōu)選為第二黃芪上清液減壓濃縮至其相對(duì)密度為1.20～1.28(60℃)。

第三黃芪提取物的制備方法包括：將第二黃芪提取液用水溶解，優(yōu)選為用5～10倍注射用水溶解；溶解后，加熱煮沸30～60min，優(yōu)選為45min；再與活性炭混合均勻，使溶液中活性炭的濃度為1～5g/L，優(yōu)選為0.8g/L，靜置后過(guò)濾澄清。

第二黃芪提取液溶解后，加熱煮沸30～60min，以使第二黃芪提取液中的水溶性蛋白在高溫下變性、聚集，有利于提高活性炭的吸附效果，從而得到純度更高的第三黃芪提取物。

優(yōu)選的，在將第二黃芪提取液用水溶解前，先加乙醇使所得溶液中乙醇的含醇量為85～95％，靜置12～48h，上清液加入活性炭進(jìn)行循環(huán)過(guò)濾澄清，濾液濃縮至相對(duì)密度1.20～1.28(60℃)；再加5～10倍注射用水，攪拌溶解，冷藏過(guò)夜，過(guò)濾澄清，加熱煮沸30min，加入活性炭攪拌10min，使溶液中活性炭的濃度為5～10g/L，過(guò)濾澄清。

S2:采用溶劑提取法提取1～3份重量份的大青葉，減壓濃縮后制備多種純度的大青葉提取物。

大青葉提取物包括第一大青葉提取物、第二大青葉提取物和第三大青葉提取物中的一種或多種，第一大青葉提取物、第二大青葉提取物和第三大青葉提取物的純度依次遞增；較高純度的大青葉提取物是由較低純度的大青葉提取物制備而來(lái)，即第三大青葉提取物是由第二大青葉提取物或者第一大青葉提取物提純制備而來(lái)；第二大青葉提取物是由第一大青葉提取物提純制備而來(lái)。

第一大青葉提取物的制備方法包括：采用水煎煮法提取大青葉，濾液減壓濃縮至其在55～65℃下的相對(duì)密度為1.18～1.28。優(yōu)選的，取大青葉藥材，加入10倍量的水煎煮2次，每次1h，合并濾液，將濾液減壓濃縮至相對(duì)密度為1.18～1.28(60℃)，即將濾液濃縮至其在60℃下的相對(duì)密度為1.18～1.28。

第二大青葉提取物的制備方法包括：將第一大青葉提取物與乙醇按照體積比1～2：1～3混合，即使所得溶液中乙醇的含醇量為50～60％，優(yōu)選為55％；靜置后，離心得大青葉上清液，大青葉上清液減壓濃縮至其在55～65℃下的相對(duì)密度為1.16～1.26。

第三大青葉提取物的制備方法包括：將第二大青葉提取液與水混合，優(yōu)選用5～10倍注射用水溶解；溶解后，加熱煮沸25～35min后，與活性炭混合，使溶液中活性炭的濃度為5～10g/L，靜置后過(guò)濾。

優(yōu)選的，在將第二黃芪提取液用水溶解前，先加乙醇使所得溶液中乙醇的含醇量為85～95％，靜置12～48h，上清液加入活性炭進(jìn)行循環(huán)過(guò)濾澄清，濾液濃縮至相對(duì)密度為1.20～1.28(60℃)；再加5～10倍注射用水溶解，冷藏過(guò)夜，過(guò)濾澄清，加熱煮沸30min；再與活性炭混合，攪拌均勻，過(guò)濾澄清。

S3:將黃芪提取物與大青葉提取物混合，制備顆粒劑、口服液、注射劑或丸劑。

藥物組合物為顆粒劑，該顆粒劑的制備方法包括：在將第一黃芪提取物與第一大青葉提取物混合，再與藥用輔料混合均勻并制粒、干燥，藥用輔料的質(zhì)量為黃芪提取物與大青葉提取物總質(zhì)量的5～10倍，藥用輔料包括蔗糖、糊精、可溶性淀粉等。

在本實(shí)施方式中，溶液減壓濃縮后的相對(duì)密度是在發(fā)明人多年的理論研究和實(shí)踐研究中得到的，若相對(duì)密度過(guò)高，則所得提取物的稠度過(guò)大，難以進(jìn)行有效濃縮；而當(dāng)相對(duì)密度過(guò)低，則不能很好的去除溶劑，不利于后續(xù)的純化步驟。

藥物組合物為口服液，該口服液的制備方法包括：將第二黃芪提取物和第二大青葉提取物混合并用水溶解，優(yōu)選的，用5～10倍的水溶解；調(diào)節(jié)其pH值為7.0～7.5后，優(yōu)選的，用10wt％的NaOH調(diào)節(jié)pH；隨后，再加熱煮沸30～60min，優(yōu)選為45min；隨后與活性炭混合，使溶液中活性炭的濃度為1～5g/L，過(guò)濾澄清；最后，加水定容后，再次用10wt％的NaOH調(diào)節(jié)pH值為7.0～7.5，過(guò)濾、灌裝、滅菌。

藥物組合物為注射液，該注射液的制備方法包括：將第三黃芪提取物與第三大青葉提取物混合，調(diào)節(jié)其pH值為7.0～7.5后，優(yōu)選的，用10wt％的NaOH調(diào)節(jié)pH；隨后，加熱煮沸55～65min，優(yōu)選為60min；隨后與活性炭混合，使溶液中活性炭的濃度為1～5g/L，保溫10min后過(guò)濾；濾液冷藏過(guò)夜，再次過(guò)濾后，用注射用水定容，再次用10wt％的NaOH調(diào)節(jié)pH值為7.0～7.5，過(guò)濾、灌裝、滅菌。

該制備方法以黃芪和大青葉為原料，通過(guò)提純工藝同時(shí)制備不同純度的黃芪提取液和大青葉提取液，并通過(guò)不同純度的黃芪提取液和大青葉提取液之間的混合，能夠同時(shí)得到多種劑型的藥物組合物，即處理同一批次的黃芪和大青葉，便可同時(shí)得到顆粒劑、口服液、注射劑等劑型的藥物組合物，從而極大的減緩了工藝程序、降低了工作強(qiáng)度，且該方法工藝簡(jiǎn)便、成熟、穩(wěn)定，易于大批量生產(chǎn)，生產(chǎn)成本低。

一種調(diào)節(jié)動(dòng)物免疫功能的藥物組合物，該藥物組合物由黃芪和大青葉組成，按重量份數(shù)計(jì)，黃芪為3～5份，大青葉為1～3份。

該藥物組合物由黃芪和大青葉組成，通過(guò)黃芪和大青葉的相互配伍，黃芪扶正補(bǔ)氣、調(diào)節(jié)免疫，大青葉抗菌病毒、增強(qiáng)免疫，兩者共奏益氣固本、清瘟解毒之功，且安全有效，具有調(diào)節(jié)免疫功能，促進(jìn)抗體形成，抗菌、抗病毒的功能，能夠有效的提高動(dòng)物的免疫能力，且能夠提高動(dòng)物的肉質(zhì)。

以下結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的特征和性能作進(jìn)一步的詳細(xì)描述：

實(shí)施例1

本實(shí)施例提供一種調(diào)節(jié)動(dòng)物免疫功能的藥物組合物，該藥物組合物為顆粒劑，其制備方法為：

稱取黃芪800g，加6400mL水煎煮3次，每次1.5小時(shí)，過(guò)濾，合并濾液，減壓濃縮至相對(duì)密度為1.28(60℃)，得第一黃芪提取液；

大青葉400g加4000mL水煎煮2次，每次1小時(shí)，過(guò)濾，濾液減壓濃縮至相對(duì)密度1.24(60℃)，得第一大青葉提取物。

合并第一黃芪提取液和第一大青葉提取物，加蔗糖粉850g混合均勻，制粒，80℃干燥，即得。

實(shí)施例2

本實(shí)施例提供一種調(diào)節(jié)動(dòng)物免疫功能的藥物組合物，該藥物組合物為顆粒劑，其制備方法為：

稱取黃芪600g，加4800mL水煎煮3次，每次1.5小時(shí)，過(guò)濾，合并濾液，減壓濃縮至相對(duì)密度為1.2(60℃)，得第一黃芪提取液；

大青葉200g加2000mL水煎煮2次，每次1小時(shí)，過(guò)濾，濾液減壓濃縮至相對(duì)密度1.18(60℃)，得第一大青葉提取物。

合并第一黃芪提取液和第一大青葉提取物，加蔗糖粉850g混合均勻，制粒，80℃干燥，即得。

實(shí)施例3

本實(shí)施例提供一種調(diào)節(jié)動(dòng)物免疫功能的藥物組合物，該藥物組合物為顆粒劑，其制備方法為：

稱取黃芪1000g，加8000mL水煎煮3次，每次1.5小時(shí)，過(guò)濾，合并濾液，減壓濃縮至相對(duì)密度為1.3(60℃)，得第一黃芪提取液；

大青葉600g加6000mL水煎煮2次，每次1小時(shí)，過(guò)濾，濾液減壓濃縮至相對(duì)密度1.28(60℃)，得第一大青葉提取物。

合并第一黃芪提取液和第一大青葉提取物，加蔗糖粉850g混合均勻，制粒，80℃干燥，即得。

實(shí)施例4

本實(shí)施例提供一種調(diào)節(jié)動(dòng)物免疫功能的藥物組合物，該藥物組合物為口服液，其制備方法為：

稱取黃芪800g，加6400mL水煎煮3次，每次1.5小時(shí)，過(guò)濾，合并濾液，減壓濃縮至相對(duì)密度為1.20(60℃)，加乙醇使含醇量為60％，攪拌均勻，靜置過(guò)夜，離心，得沉淀120g和上清液1100mL。取上清液減壓濃縮至相對(duì)密度為1.20(60℃)，得第二黃芪提取物；

稱取大青葉400g，加4000mL水煎煮2次，每次1小時(shí)，過(guò)濾，濾液減壓濃縮至相對(duì)密度1.20(60℃)，加乙醇至含醇量50％，靜置過(guò)夜，再將上清液濃縮至相對(duì)密度為1.16(60℃)，得第二大青葉提取物。

將第二黃芪提取物和第二大青葉提取物混合，加水800mL，攪拌溶解，用10wt％的NaOH溶液調(diào)pH值至7.0～7.5，加熱煮沸30min，加活性炭，使溶液中活性炭的濃度為1g/L攪勻，過(guò)濾澄清，冷藏過(guò)夜，過(guò)濾，加水定容至1000mL，用10wt％的NaOH溶液調(diào)pH值7.0～7.5，過(guò)濾，灌裝，滅菌，即得。

實(shí)施例5

本實(shí)施例提供一種調(diào)節(jié)動(dòng)物免疫功能的藥物組合物，該藥物組合物為口服液，其制備方法為：

稱取黃芪800g，加6400mL水煎煮3次，每次1.5小時(shí)，過(guò)濾，合并濾液，減壓濃縮至相對(duì)密度為1.3(60℃)，加乙醇使含醇量為50％，攪拌均勻，靜置過(guò)夜，離心，得沉淀120g和上清液1100mL。取上清液減壓濃縮至相對(duì)密度為1.28(60℃)，得第一浸膏；取沉淀，加720mL水?dāng)嚢枞芙猓右掖际购剂繛?0％，攪拌均勻，靜置過(guò)夜，離心，取上清液減壓濃縮至相對(duì)密度為1.20(60℃)，得第二浸膏，混合第一浸膏和第二浸膏，得到第二黃芪提取物；

稱取大青葉400g，加4000mL水煎煮2次，每次1小時(shí)，過(guò)濾，濾液減壓濃縮至相對(duì)密度1.20(60℃)，加乙醇至含醇量60％，靜置過(guò)夜，再將上清液濃縮至相對(duì)密度為1.26(60℃)，得第二大青葉提取物。

將第二黃芪提取物和第二大青葉提取物混合，加水800mL，攪拌溶解，用10wt％的NaOH溶液調(diào)pH值至7.0～7.5，加熱煮沸60min，加活性炭，使溶液中活性炭的濃度為1g/L攪勻，過(guò)濾澄清，冷藏過(guò)夜，過(guò)濾，加水定容至1000mL，用10wt％的NaOH溶液調(diào)pH值7.0～7.5，過(guò)濾，灌裝，滅菌，即得。

實(shí)施例6

本實(shí)施例提供一種調(diào)節(jié)動(dòng)物免疫功能的藥物組合物，該藥物組合物為口服液，其制備方法為：

稱取黃芪800g，加6400mL水煎煮3次，每次1.5小時(shí)，過(guò)濾，合并濾液，減壓濃縮至相對(duì)密度為1.25(60℃)，加乙醇使含醇量為55％，攪拌均勻，靜置過(guò)夜，離心，得沉淀120g和上清液1100mL。取上清液減壓濃縮至相對(duì)密度為1.24(60℃)，得第一浸膏；取沉淀，加720mL水?dāng)嚢枞芙?，加乙醇使含醇量?5％，攪拌均勻，靜置過(guò)夜，離心，取上清液減壓濃縮至相對(duì)密度為1.28(60℃)，得第二浸膏，混合第一浸膏和第二浸膏，得到第二黃芪提取物；

稱取大青葉400g，加4000mL水煎煮2次，每次1小時(shí)，濾過(guò)，濾液減壓濃縮至相對(duì)密度1.20(60℃)，加乙醇至含醇量55％，靜置過(guò)夜，再將上清液濃縮至相對(duì)密度為1.30(60℃)，得第二大青葉提取物。

將第二黃芪提取物和第二大青葉提取物混合，加水800mL，攪拌溶解，用10wt％的NaOH溶液調(diào)pH值至7.0～7.5，加熱煮沸45min，加活性炭，使溶液中活性炭的濃度為1g/L攪勻，過(guò)濾澄清，冷藏過(guò)夜，過(guò)濾，加水定容至1000mL，用10wt％的NaOH溶液調(diào)pH值7.0～7.5，過(guò)濾，灌裝，滅菌，即得。

實(shí)施例7

本實(shí)施例提供一種調(diào)節(jié)動(dòng)物免疫功能的藥物組合物，該藥物組合物為注射液，其制備方法為：

按照實(shí)施例6的方法得到第二黃芪提取物和第二大青葉提取物；

將第二黃芪提取物用水溶解，加熱煮沸60min，加活性炭攪拌10min，使溶液中活性炭的濃度為1g/L過(guò)濾澄清，得第三黃芪提取物；

將第二大青葉提取物用水溶解，加熱煮沸35min，加活性炭，使溶液中活性炭的濃度為5g/L攪勻，過(guò)濾澄清，得第三大青葉提取物。

混合第三黃芪提取物和第三大青葉提取物，用10wt％的NaOH溶液調(diào)pH值7.0～7.5，加熱煮沸65min，加活性炭保溫10min，使溶液中活性炭的濃度為1g/L過(guò)濾，濾液冷藏過(guò)夜，過(guò)濾，加注射用水至1000ml，再用10wt％的NaOH溶液調(diào)pH值7.0～7.5，精濾，灌裝，滅菌，即得本發(fā)明注射液。

實(shí)施例8

本實(shí)施例提供一種調(diào)節(jié)動(dòng)物免疫功能的藥物組合物，該藥物組合物為注射液，其制備方法為：

按照實(shí)施例6的方法得到第二黃芪提取物和第二大青葉提取物；

將第二黃芪提取物用水溶解，加熱煮沸30min，加活性炭使溶液中活性炭的濃度為5g/L，攪拌10min，過(guò)濾澄清，得第三黃芪提取物；

將第二大青葉提取物用水溶解，加熱煮沸25min，加活性炭，使溶液中活性炭的濃度為1g/L攪勻，過(guò)濾澄清，得第三大青葉提取物。

混合第三黃芪提取物和第三大青葉提取物，用10wt％的NaOH溶液調(diào)pH值7.0～7.5，加熱煮沸55min，加活性炭使溶液中活性炭的濃度為5g/L，保溫10min，過(guò)濾，濾液冷藏過(guò)夜，過(guò)濾，加注射用水至1000ml，再用10wt％的NaOH溶液調(diào)pH值7.0～7.5，精濾，灌裝，滅菌，即得本發(fā)明注射液。

實(shí)施例9

本實(shí)施例提供一種調(diào)節(jié)動(dòng)物免疫功能的藥物組合物，該藥物組合物為注射液，其制備方法為：

按照實(shí)施例6的方法得到第二黃芪提取物和第二大青葉提取物；

將第二黃芪提取物用水溶解，加熱煮沸45min，加活性炭使溶液中活性炭的濃度為2.5g/L，攪拌10min，過(guò)濾澄清，得第三黃芪提取物；

將第二大青葉提取物用水溶解，加熱煮沸30min，加活性炭使溶液中活性炭的濃度為8g/L，攪勻，過(guò)濾澄清，得第三大青葉提取物。

混合第三黃芪提取物和第三大青葉提取物，用10wt％的NaOH溶液調(diào)pH值7.0～7.5，加熱煮沸60min，加活性炭使溶液中活性炭的濃度為2.5g/L，保溫10min，過(guò)濾，濾液冷藏過(guò)夜，過(guò)濾，加注射用水至1000ml，再用10wt％的NaOH溶液調(diào)pH值7.0～7.5，精濾，灌裝，滅菌，即得本發(fā)明注射液。

實(shí)施例10

本實(shí)施例提供一種調(diào)節(jié)動(dòng)物免疫功能的藥物組合物，該藥物組合物為注射液，其制備方法為：

稱取黃芪800g，加6400mL水煎煮3次，每次1.5小時(shí)，過(guò)濾，合并濾液，減壓濃縮至相對(duì)密度為1.24(60℃)，得第一黃芪提取物。

將第一黃芪提取物加乙醇使含醇量為60％，攪拌均勻，靜置過(guò)夜，離心，得沉淀100g和上清液1000mL。取上清液減壓濃縮至相對(duì)密度為1.24(60℃)，用水溶解，加乙醇使含醇量為85％，靜置過(guò)夜，上清液加活性炭使溶液中活性炭的濃度為1g/L，循環(huán)過(guò)濾澄清，濾液減壓濃縮至相對(duì)密度1.25(60℃)，得第一浸膏。取沉淀，加600mL水?dāng)嚢枞芙?，加乙醇使含醇量?5％，攪拌均勻，靜置過(guò)夜，離心，取上清液減壓濃縮至相對(duì)密度為1.24(60℃)，得第二浸膏。第二黃芪提取物即為第一浸膏和第二浸膏的總和。

將第一浸膏加注射用水400mL，攪拌溶解，冷藏過(guò)夜，過(guò)濾澄清，加熱煮沸30min，加活性炭使溶液中活性炭的濃度為1g/L，攪拌10min，過(guò)濾澄清，得第一溶液；將第二浸膏加注射用水300mL溶解，加熱煮沸30min，加活性炭使溶液中活性炭的濃度為5g/L，，攪勻、過(guò)濾澄清，得第二溶液；混合第一溶液和第二溶液，得到第三黃芪提取物。

稱取大青葉400g，加4000mL水煎煮2次，每次1小時(shí)，濾過(guò)，濾液減壓濃縮至相對(duì)密度1.24(60℃)，得第一大青葉提取物；加乙醇至含醇量60％，靜置過(guò)夜，再將上清液濃縮至相對(duì)密度為1.20(60℃)，得第二大青葉提取物；用水溶解，加乙醇至含醇量60％，靜置過(guò)夜，上清液濃縮至相對(duì)密度1.20(60℃)，加乙醇至含醇量85％，靜置過(guò)夜，上清液加活性炭使溶液中活性炭的濃度為1g/L，過(guò)濾，濾液濃縮至相對(duì)密度1.20(60℃)，加注射用水300ml，攪拌溶解，冷藏過(guò)夜，過(guò)濾澄清，濾液加熱煮沸30min，加活性炭使溶液中活性炭的濃度為5g/L，攪勻，過(guò)濾澄清，得第三大青葉提取物。

混合第三黃芪提取物和第三大青葉提取物，用10wt％的NaOH溶液調(diào)pH值7.0～7.5，加熱煮沸1小時(shí)，加活性炭使溶液中活性炭的濃度為1g/L，保溫10min，過(guò)濾，濾液冷藏過(guò)夜，過(guò)濾，加注射用水至1000ml，再用10wt％的NaOH溶液調(diào)pH值7.0～7.5，精濾，灌裝，滅菌，即得本發(fā)明注射液。

實(shí)施例11

本實(shí)施例提供一種調(diào)節(jié)動(dòng)物免疫功能的藥物組合物，該藥物組合物為顆粒劑、口服液和注射劑，其制備方法為：

稱取黃芪800g，加6400mL水煎煮3次，每次1.5小時(shí)，過(guò)濾，合并濾液，減壓濃縮至相對(duì)密度為1.24(60℃)，得黃芪提取物。將黃芪提取物分為2份，其中一份為第一黃芪提取物，另一份采用實(shí)施例6的方法制備第二黃芪提取物；將第二黃芪提取物分為2份，一份留用，另一份采用實(shí)施例9的方法制備第三黃芪提取物。

稱取大青葉400g，加4000mL水煎煮2次，每次1小時(shí)，濾過(guò)，濾液減壓濃縮至相對(duì)密度1.24(60℃)，得大青葉提取物；將大青葉提取物分為2份，其中一份為第一大青葉提取物，另一份采用實(shí)施例6的方法制備第二大青葉提取物；將第二大青葉提取物分為2份，一份留用，另一份采用實(shí)施例9的方法制備第三大青葉提取物。

采用實(shí)施例3的方法將第一黃芪提取物與第一大青葉提取物混合，制得顆粒劑；采用實(shí)施例6的方法將留用的第二黃芪提取物與留用的第二大青葉提取物混合，制得口服液；采用實(shí)施例9的方法將第三黃芪提取物與第三大青葉提取物混合，制得注射液。

實(shí)驗(yàn)例

下面結(jié)合藥效試驗(yàn)對(duì)本發(fā)明實(shí)施例提供藥物組合物在調(diào)節(jié)動(dòng)物免疫功能，促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)，提高動(dòng)物肉質(zhì)等方面的效果進(jìn)行評(píng)價(jià)。

一、試驗(yàn)材料

1.1試驗(yàn)藥品

實(shí)施例11制備的顆粒劑和口服液。

1.2試驗(yàn)動(dòng)物

KM小鼠，體重16-18g；雛雞，21日齡左右；

1.3試驗(yàn)儀器、試劑

96孔細(xì)胞培養(yǎng)板；注射器；電子天平；玻璃毛細(xì)管；96孔V型血凝板；游標(biāo)卡尺；色差計(jì)，等；

環(huán)磷酰胺；生理鹽水；1640細(xì)胞培養(yǎng)基；小鼠外周血淋巴細(xì)胞分離液；CCK-8試劑盒；刀豆蛋白A(ConA)等

1.4陽(yáng)性藥物

陽(yáng)性藥物配方：黃芪150g、大青葉150g、黃連100g、黃芩150g、連翹250g。

制備方法：將上述藥物分別加入8～10倍量水，采用煎煮法提取三次，每次1～1.5h，分別將每味藥材的濾液合并，減壓濃縮至相對(duì)密度為1.2(60℃)后，合并所有藥材的提取物，加蔗糖粉850g混合均勻，制粒，80℃干燥，即陽(yáng)性藥物顆粒劑。

二、試驗(yàn)方法

取240只雌性KM小鼠分為12組，每組20只，適應(yīng)性喂養(yǎng)3天后，禁食12h，開(kāi)始按照表1進(jìn)行給藥，連續(xù)7天，在給藥第3天、第4天和第7天時(shí)對(duì)第9-12組進(jìn)行腹腔注射80mg/kg環(huán)磷酰胺免疫抑制劑，0.5ml/25g體重。

表1

最后一天給藥后間隔12h后，每組每只小鼠腿部肌肉注射雞新城疫疫苗，每只2頭份，給藥結(jié)束。

將雛雞40只分為8組，每組5只，按照表1中組別1-8的濃度進(jìn)行拌料給藥，自由采食7天。

2.1小鼠生長(zhǎng)發(fā)育試驗(yàn)

分別稱量各組小鼠的初始體重和給藥結(jié)束后第7、14、21天小鼠的體重并記錄，進(jìn)行數(shù)據(jù)比較。

2.2小鼠抗體水平檢測(cè)

于給藥后第7、14、21天每組隨機(jī)選擇3-5只小鼠，用毛細(xì)管采眼眶血0.2-0.4mL，分離血清，采用微量血凝抑制試驗(yàn)檢測(cè)抗體效價(jià)并記錄。

2.3小鼠淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率

給藥結(jié)束后第7、14、21天，分別每組隨機(jī)選擇3-5只，采集含抗凝劑眼眶外周血1mL，按照淋巴細(xì)胞分離液試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行淋巴細(xì)胞分離，將分離出的淋巴細(xì)胞加入96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，每孔100μL，以培養(yǎng)基作為空白對(duì)照，每個(gè)樣本做4個(gè)孔重復(fù)，其中兩孔加入50μL 50μg/ml Con A，另外兩孔不加，空白對(duì)照同樣進(jìn)行本處理。在含5％二氧化碳37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h。于培養(yǎng)結(jié)束前4h，每孔加入10μL CCK-8試劑，繼續(xù)培養(yǎng)3h，取出后用酶標(biāo)儀測(cè)定OD450值并記錄，按照下面公式進(jìn)行計(jì)算淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率：

2.4小鼠脾臟指數(shù)測(cè)定

于給藥結(jié)束后22天處死小鼠，并取出脾臟，稱量脾臟重量并按照下面公式計(jì)算脾臟指數(shù)：

脾臟指數(shù)＝脾臟重量(mg)/小鼠體重(g)

2.5雛雞肉質(zhì)測(cè)定

給藥結(jié)束后7天，將肉雞處死并去毛，剝離肉雞胸肌，靜置45min后，采用美國(guó)產(chǎn)WSC一II型色差計(jì)測(cè)定肌肉顏色(紅色色度，也稱Hunterα值)，測(cè)定并計(jì)算胸肌滴水損失率。

三、試驗(yàn)結(jié)果

3.1小鼠生長(zhǎng)發(fā)育試驗(yàn)

給藥結(jié)束后不同時(shí)間測(cè)量小鼠體重發(fā)現(xiàn)，給藥后7、14、21天免疫抑制-陰性對(duì)照組于陰性對(duì)照組比較均有顯著差異(P<0.05)，表明免疫抑制模型造模成功，且數(shù)據(jù)可信；給藥后7、14、21天后顆粒劑高濃度組和口服液高濃度組與陰性對(duì)照組差異極顯著(P<0.01)，免疫抑制給藥組(即口服液和顆粒劑的高、中、低濃度)與陰性對(duì)照組相比較接近，高于免疫抑制-陰性對(duì)照組；陽(yáng)性對(duì)照組與陰性對(duì)照組比較沒(méi)有明顯差異(P>0.05)，與免疫抑制-陰性對(duì)照組比較有明顯差異。

3.2小鼠抗體水平

結(jié)果表明經(jīng)過(guò)雞新城疫疫苗免疫后第7、14、21天，免疫抑制-陰性對(duì)照組抗體水平與陰性對(duì)照組相比均有顯著差異(P<0.05)，表明免疫抑制模型造模成功；免疫后第7、14、21天顆粒劑和口服液高劑量與陰性對(duì)照組差異均為顯著(P<0.05)，免疫抑制給藥組與陰性對(duì)照組差異趨勢(shì)相同；陽(yáng)性對(duì)照組抗體效價(jià)與陰性對(duì)照組差異并不顯著。

3.3小鼠淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率

給藥后不同時(shí)間各組小鼠外周淋巴細(xì)胞刺激指數(shù)說(shuō)明免疫后7、14、21天免疫抑制-陰性對(duì)照組與陰性對(duì)照組相比有顯著或者極顯著差異(P<0.05或P<0.01)，表明免疫抑制模型造模成功；免疫后第7天顆粒劑和口服液高劑量與陰性對(duì)照組差異極顯著(P<0.01)，免疫后14、21天顆粒劑和口服液高劑量與陰性對(duì)照組差異均為顯著或極顯著(P<0.05或P<0.01)，免疫抑制給藥組與陰性對(duì)照組差異趨勢(shì)相同，給藥組中、低劑量與陰性對(duì)照組差異不顯著(P>0.05)；陽(yáng)性對(duì)照組與陰性對(duì)照組差異不顯著(P>0.05)。

3.4提高雛雞肉質(zhì)

經(jīng)過(guò)對(duì)雛雞肉質(zhì)的測(cè)定發(fā)現(xiàn)，與陰性對(duì)照組比較，口服液和顆粒劑高濃度組紅色色度具有極顯著差異(p<0.05)；陽(yáng)性對(duì)照組與陰性對(duì)照組趨勢(shì)相同(p>0.05)；且給藥組(即顆粒劑與口服液)滴水損失率與陰性對(duì)照組相比有減少，差異顯著或極顯著(p<0.05或p<0.01)；陽(yáng)性對(duì)照組則與陰性對(duì)照組比較無(wú)顯著性差異(p>0.05)。

四、結(jié)論

本發(fā)明實(shí)施例11中提供的顆粒劑和口服液，相比與陽(yáng)性以及陰性對(duì)照組，能夠促進(jìn)動(dòng)物的生長(zhǎng)發(fā)育，提高動(dòng)物體內(nèi)的抗體水平以及淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率，并且能一定程度提高動(dòng)物肉質(zhì)，由此說(shuō)明，本發(fā)明提供的藥物組合物具有提高動(dòng)物免疫功能和增加體重的作用。

盡管已用具體實(shí)施例來(lái)說(shuō)明和描述了本發(fā)明，然而應(yīng)意識(shí)到，在不背離本發(fā)明的精神和范圍的情況下可以作出許多其它的更改和修改。因此，這意味著在所附權(quán)利要求中包括屬于本發(fā)明范圍內(nèi)的所有這些變化和修改。