本發(fā)明屬于日用化妝品技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種含有乳酸菌的發(fā)酵上清的沐浴產(chǎn)品。
背景技術(shù)：
隨著現(xiàn)代文明建設(shè)和商業(yè)需要的不斷發(fā)展，人們?nèi)粘Ｉ钏降牟粩嗵岣?，對洗浴用品的要求也不斷提高。傳統(tǒng)上人們在沐浴時使用的是以脂肪酸為主要成分的皂類產(chǎn)品。皂類產(chǎn)品的pH值偏堿性，與人體皮膚的酸性pH值不協(xié)調(diào)，因而刺激性較大，而且脂肪酸抗硬水能力差，在沐浴時會形成鈣皂、鎂皂等，從而沉積于皮膚上，妨礙皮膚的呼吸與代謝。隨著科技的發(fā)展，市場上出現(xiàn)了沐浴露，能夠有效的去除皮膚的污垢，同時不會形成鈣皂、鎂皂等。
在使用沐浴露的過程中，人們不僅要求能夠去除污垢，還希望能殺滅身體上的病源微生物。在皮膚上，人們的汗液與空氣中的灰塵和人體的皮屑等一起形成了污垢。在污垢上聚集了大量的微生物，其中就有一些可能是病源微生物，對人們的健康帶來一定的威脅。普通的沐浴露不具備抑菌功能或抑菌功能較差，因此無法徹底清除和殺滅病源微生物。
乳酸菌(lactic acid bacteria，LAB)是一類能夠分解糖類以產(chǎn)生乳酸為主要代謝產(chǎn)物的細(xì)菌的通稱，其在自然界分布極為廣泛，具有豐富的物種多樣性。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是如何使沐浴產(chǎn)品具有良好的清潔效果，而且具有抑菌的功能。
為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明首先提供了一種沐浴產(chǎn)品。
本發(fā)明所提供的沐浴產(chǎn)品，可包括a1)或a2)或a3)或a4)：
a1)乳酸菌的發(fā)酵上清；
a2)所述乳酸菌的發(fā)酵物；
a3)所述乳酸菌的發(fā)酵上清的提取物；
a4)所述乳酸菌的發(fā)酵物的提取物。
上述沐浴產(chǎn)品中，所述乳酸菌的發(fā)酵物為包括所述乳酸菌的發(fā)酵上清和菌體在內(nèi)的整個發(fā)酵后體系。
上述沐浴產(chǎn)品中，所述乳酸菌可為乳酸球菌屬的乳酸菌，具體可為乳酸球菌屬乳酸亞種的菌種。所述乳酸球菌屬乳酸亞種的菌種具體可為菌株J-2或菌株C-10。
上述沐浴產(chǎn)品中，所述乳酸菌可為乳桿菌屬的乳酸菌，具體可為鼠乳桿菌的菌種或干酪乳桿菌干酪亞種的菌種。所述鼠乳桿菌的菌種具體可為菌株6-2。所述干酪乳桿菌干酪亞種的菌種具體可為菌株3-3。
上述沐浴產(chǎn)品中，所述乳桿菌屬的乳酸菌可為植物乳桿菌。所述植物乳桿菌具體可為菌株N-1或B16植物乳桿菌。
上述沐浴產(chǎn)品中，所述植物乳桿菌具體可為植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)Rs0228，該菌株已于2016年08月18日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(簡稱CGMCC，地址為：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號)，保藏編號為CGMCC No.12881。
所述菌株N-1、所述B16植物乳桿菌、所述菌株6-2、所述菌株3-3、所述菌株J-2和所述菌株C-10均記載于如下文獻(xiàn)中：四川地區(qū)自然發(fā)酵泡菜中乳酸菌的生物特性研究.周光燕.2006.四川農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文.
上述沐浴產(chǎn)品中，所述乳酸菌的發(fā)酵物的制備方法可為：發(fā)酵培養(yǎng)所述乳酸菌，得到乳酸菌的發(fā)酵物。所述發(fā)酵的起始時刻，所述乳酸菌的初始菌濃度可為6×105cfu/mL。所述發(fā)酵培養(yǎng)的條件：30℃振蕩培養(yǎng)24-72h(24h、48h或72h)。所述振蕩培養(yǎng)的參數(shù)具體可為搖速220rpm，旋轉(zhuǎn)半徑50mm。
上述沐浴產(chǎn)品中，所述乳酸菌的發(fā)酵上清的制備方法可為：取所述乳酸菌的發(fā)酵物，除菌，收集上清液，得到乳酸菌的發(fā)酵上清。所述收集上清液的實現(xiàn)方法為4000rpm離心10min。所述除菌的方法為過濾除菌(過濾孔徑可為0.45mm)。
上述沐浴產(chǎn)品中，所述發(fā)酵培養(yǎng)使用的培養(yǎng)基可用任何適合培養(yǎng)乳酸菌的培養(yǎng)基。
上述沐浴產(chǎn)品中，所述發(fā)酵培養(yǎng)使用的培養(yǎng)基具體可含有9.00～11.00g/L蛋白胨、9.00～11.00g/L牛肉膏、4.50～5.50g/L酵母膏、1.80～2.20g/L檸檬酸氫二銨、18.00～22.00g/L葡萄糖、0.90～1.10mL/L吐溫-80、1.80～2.20g/L磷酸氫二鉀、0.52～0.64g/L硫酸錳和0.25～0.31g/L硫酸鎂。
所述發(fā)酵培養(yǎng)使用的培養(yǎng)基具體可為含有9.00～11.00g/L蛋白胨、9.00～11.00g/L牛肉膏、4.50～5.50g/L酵母膏、1.80～2.20g/L檸檬酸氫二銨、18.00～22.00g/L葡萄糖、0.90～1.10mL/L吐溫-80、1.80～2.20g/L磷酸氫二鉀、0.52～0.64g/L硫酸錳和0.25～0.31g/L硫酸鎂的水溶液，pH值為6.2-6.6。
所述發(fā)酵培養(yǎng)使用的培養(yǎng)基具體可為含有10.00g/L蛋白胨、10.00g/L牛肉膏、5.00g/L酵母膏、2.00g/L檸檬酸氫二銨、20.00g/L葡萄糖、1mL/L吐溫-80、2.00g/L磷酸氫二鉀、0.58g/L硫酸錳和0.28g/L硫酸鎂的水溶液，pH值為6.4。
上述任一沐浴產(chǎn)品主要可由如下質(zhì)量份的原料組成：10.00～30.00質(zhì)量份所述乳酸菌的發(fā)酵上清、15.00～20.00質(zhì)量份月桂醇聚醚硫酸酯鈉、5.00～10.00質(zhì)量份椰油酰胺丙基甜菜堿、2.00～5.00質(zhì)量份月癸基葡糖苷、1.00～2.00質(zhì)量份PEG-7甘油椰油酸酯、0.50～1.00質(zhì)量份二(PPG-2肉豆蔻油醇聚醚-10)己二酸酯、0.50～2.00質(zhì)量份無患子提取物、0.30～0.50質(zhì)量份香精和0.50～1.50質(zhì)量份鹽。
上述任一所述沐浴產(chǎn)品具體可由如下質(zhì)量份的原料組成：10.00～30.00質(zhì)量份所述乳酸菌的發(fā)酵上清、15.00～20.00質(zhì)量份月桂醇聚醚硫酸酯鈉、5.00～10.00質(zhì)量份椰油酰胺丙基甜菜堿、2.00～5.00質(zhì)量份月癸基葡糖苷、1.00～2.00質(zhì)量份PGE-7甘油椰油酸酯、0.50～1.00質(zhì)量份二(PPG-2肉豆蔻油醇聚醚-10)己二酸酯、0.50～2.00質(zhì)量份無患子提取物、0.30～0.50質(zhì)量份香精、0.50～1.50質(zhì)量份鹽和28.00～66.00質(zhì)量份水。
上述任一所述沐浴產(chǎn)品具體可由10.00質(zhì)量份所述乳酸菌的發(fā)酵上清、15.00質(zhì)量份月桂醇聚醚硫酸酯鈉、5.00質(zhì)量份椰油酰胺丙基甜菜堿、2.00質(zhì)量份月癸基葡糖苷、1.00質(zhì)量份PGE-7甘油椰油酸酯、0.50質(zhì)量份二(PPG-2肉豆蔻油醇聚醚-10)己二酸酯、0.50質(zhì)量份無患子提取物、0.30質(zhì)量份香精、0.50質(zhì)量份鹽和65.20質(zhì)量份水組成。
上述任一所述沐浴產(chǎn)品具體可由20.00質(zhì)量份所述乳酸菌的發(fā)酵上清、17.50質(zhì)量份月桂醇聚醚硫酸酯鈉、7.50質(zhì)量份椰油酰胺丙基甜菜堿、3.50質(zhì)量份月癸基葡糖苷、1.50質(zhì)量份PGE-7甘油椰油酸酯、0.75質(zhì)量份二(PPG-2肉豆蔻油醇聚醚-10)己二酸酯、1.25質(zhì)量份無患子提取物、0.40質(zhì)量份香精、1.00質(zhì)量份鹽和46.60質(zhì)量份水組成。
上述任一所述沐浴產(chǎn)品具體可由30.00質(zhì)量份所述乳酸菌的發(fā)酵上清、20.00質(zhì)量份月桂醇聚醚硫酸酯鈉、10.00質(zhì)量份椰油酰胺丙基甜菜堿、5.00質(zhì)量份月癸基葡糖苷、2.00質(zhì)量份PGE-7甘油椰油酸酯、1.00質(zhì)量份二(PPG-2肉豆蔻油醇聚醚-10)己二酸酯、2.00質(zhì)量份無患子提取物、0.50質(zhì)量份香精、1.50質(zhì)量份鹽和28.00質(zhì)量份水組成。
上述任一所述沐浴產(chǎn)品的制備方法也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
上述任一所述沐浴產(chǎn)品的制備方法可包括將10.00～30.00質(zhì)量份所述乳酸菌的發(fā)酵上清、15.00～20.00質(zhì)量份月桂醇聚醚硫酸酯鈉、5.00～10.00質(zhì)量份椰油酰胺丙基甜菜堿、2.00～5.00質(zhì)量份月癸基葡糖苷、1.00～2.00質(zhì)量份PGE-7甘油椰油酸酯、0.50～1.00質(zhì)量份二(PPG-2肉豆蔻油醇聚醚-10)己二酸酯、0.50～2.00質(zhì)量份無患子提取物、0.30～0.50質(zhì)量份香精、0.50～1.50質(zhì)量份鹽和28.00～66.00質(zhì)量份水混合的步驟。
上述任一所述乳酸菌在制備沐浴產(chǎn)品中的應(yīng)用也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
上文中，月桂醇聚醚硫酸酯鈉為式(Ⅰ)所示的化合物。月桂醇聚醚硫酸酯鈉具體可為天津天智精細(xì)化工有限公司的產(chǎn)品，產(chǎn)品目錄號為E240n/E250n(n＝1-3)。香精為羅伯特香精香料(北京)有限公司的產(chǎn)品。椰油酰胺丙基甜菜堿為贏創(chuàng)德固賽(中國)投資有限公司的產(chǎn)品，產(chǎn)品目錄號為61789-40-0。月癸基葡糖苷為LG Household&Healthcare Ltd的產(chǎn)品，產(chǎn)品目錄號為110615-47-9。PEG-7甘油椰油酸酯為巴斯夫化工有限公司的產(chǎn)品，產(chǎn)品目錄號為68201-46-7。二(PPG-2肉豆蔻油醇聚醚-10)己二酸酯為禾大化學(xué)品(上海)有限公司公司的產(chǎn)品，產(chǎn)品目錄號為397247-05-1。鹽為北京京鹽金龍策商貿(mào)有限公司公司的產(chǎn)品。
上文中，無患子提取物具體可為昆明仟草生物科技有限公司的產(chǎn)品。
上文中，無患子提取物可為無患子果皮提取物。
上文中，無患子提取物可為無患子醇提物。所述醇具體可為乙醇。
所述無患子醇提物的制備方法可包括如下步驟：以無患子果皮為原料，依次進(jìn)行乙醇回流提取、水沉并去雜、醇沉并去雜和干燥。
所述“乙醇回流提取”具體可為采用乙醇水溶液進(jìn)行回流提取。所述乙醇水溶液具體可為78-82％(體積百分比)的乙醇水溶液。所述“乙醇回流提取”中，乙醇水溶液與原料的質(zhì)量配比可為(7.9-8.1)：1。所述“乙醇回流提取”的時間具體可為2h±10min。為了增加產(chǎn)率，可多次重復(fù)提取，再將回流液混合。所述重復(fù)提取的次數(shù)具體可為3次。
所述制備方法中，具體可將所述“乙醇回流提取”得到的回流液過濾，收集上清液進(jìn)行濃縮，然后將得到的濃縮液(濃縮液1)進(jìn)行所述“水沉”。
所述“水沉”中，所述濃縮液1與水的體積配比為1:3。
所述“水沉”的具體條件參數(shù)為：先攪拌5h，再靜置6h。
所述制備方法中，具體可將所述“水沉”得到的溶液過濾，收集上清液進(jìn)行濃縮，然后將得到的濃縮液(濃縮液2)進(jìn)行所述“醇沉”。
所述“醇沉”中，所述濃縮液2與水的體積配比為1:2。
所述“醇沉”的具體條件參數(shù)為：先攪拌5min，再靜置2-4h。
所述制備方法中，具體可將所述“醇沉”得到的溶液過濾，收集上清液進(jìn)行脫色，然后得到脫色后的溶液。
所述制備方法中，具體可將所述“脫色后的溶液”濃縮，然后依次進(jìn)行干燥、粉碎。
所述干燥的具體條件參數(shù)為：75℃條件下干燥至恒重。
所述粉碎的具體條件參數(shù)為：篩網(wǎng)目數(shù)100目。
獲得無患子的醇提物的步驟具體可如下：
(1)將無患子(Sap indusmukorossi Gaerth.)的果皮進(jìn)行粉碎(篩網(wǎng)目數(shù)：10目)，得到粒度小于1.0cm的原料。
(2)完成步驟(1)后，取原料，加入(8±0.1)質(zhì)量倍量78-82％(體積百分比)的乙醇水溶液進(jìn)行回流提取，提取分別進(jìn)行三次，每次提取時間為2h±10min，分別得到回流液1、回流液2和回流液3。
(3)完成步驟(2)后，取回流液1、回流液2或回流液3，過濾，收集上清液進(jìn)行濃縮(目的為回收乙醇)，然后將濃縮液進(jìn)行合并，得到溶液1。
(4)完成步驟(3)后，取溶液1，按體積比為1:3加入水，進(jìn)行水沉(攪拌時間5h，水沉?xí)r間6h；雜質(zhì)形成沉淀通過后續(xù)的過濾去除)，然后進(jìn)行過濾，收集上清液進(jìn)行濃縮，得到溶液2。
(5)完成步驟(4)后，取溶液2，按體積比為1:2加入水，進(jìn)行醇沉(攪拌時間5min，醇沉?xí)r間2-4h；雜質(zhì)形成沉淀通過后續(xù)的過濾去除)，然后進(jìn)行過濾，收集上清液進(jìn)行脫色，得到溶液3。
(6)完成步驟(5)后，取溶液3，先進(jìn)行濃縮(目的為回收乙醇)和干燥(在75℃條件下干燥至恒重)，然后粉碎(篩網(wǎng)目數(shù)：100目)，最后混合均勻，獲得無患子的醇提物。
實驗證明，本發(fā)明所提供的沐浴產(chǎn)品具有優(yōu)良的抑菌、滋潤和清潔的功能，具有重要的應(yīng)用價值。
具體實施方式
下面結(jié)合具體實施方式對本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步的詳細(xì)描述，給出的實施例僅為了闡明本發(fā)明，而不是為了限制本發(fā)明的范圍。
下述實施例中的實驗方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法。
下述實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。以下實施例中的定量試驗，均設(shè)置三次重復(fù)實驗，結(jié)果取平均值。
MRS培養(yǎng)基：將蛋白胨10.00g、牛肉膏10.00g、酵母膏5.00g、檸檬酸氫二銨2.00g、葡萄糖20.00g、吐溫-80 1mL、磷酸氫二鉀2.00g、硫酸錳0.58g和硫酸鎂0.28g溶于1L蒸餾水，調(diào)節(jié)pH值至6.4。
固體培養(yǎng)基：將胰蛋白胨5.0g、淀粉2.5g、瓊脂15.0g和葡萄糖1.0g溶于1L蒸餾水，調(diào)節(jié)pH值至5.5。
固體平板：用固體培養(yǎng)基制成固體平板。
無患子提取物為昆明仟草生物科技有限公司的產(chǎn)品。月桂醇聚醚硫酸酯鈉為式(Ⅰ)所示的化合物。月桂醇聚醚硫酸酯鈉為天津天智精細(xì)化工有限公司的產(chǎn)品，產(chǎn)品目錄號為E240n/E250n(n＝1-3)；月桂醇聚醚硫酸酯鈉在本實施例中簡稱AES。香精為羅伯特香精香料(北京)有限公司的產(chǎn)品。椰油酰胺丙基甜菜堿為贏創(chuàng)德固賽(中國)投資有限公司的產(chǎn)品，產(chǎn)品目錄號為61789-40-0；椰油酰胺丙基甜菜堿本實施例中簡稱F50。月癸基葡糖苷為LG Household&Healthcare Ltd的產(chǎn)品，產(chǎn)品目錄號為110615-47-9。PEG-7甘油椰油酸酯為巴斯夫化工有限公司的產(chǎn)品，產(chǎn)品目錄號為68201-46-7；PEG-7甘油椰油酸酯本實施例中簡稱HE。二(PPG-2肉豆蔻油醇聚醚-10)己二酸酯為禾大化學(xué)品(上海)有限公司公司的產(chǎn)品，產(chǎn)品目錄號為397247-05-1；二(PPG-2肉豆蔻油醇聚醚-10)己二酸酯本實施例中簡稱SCE。鹽為北京京鹽金龍策商貿(mào)有限公司公司的產(chǎn)品。
金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)ATCC No.6538和白色念珠菌(Monilia albican)ATCC No.10231均保藏于美國模式培養(yǎng)物集存庫(簡稱ATCC，地址：American Type Culture Collection(ATCC)10801University Boulevard Manassas，VA 20110USA)，公眾可從美國模式培養(yǎng)物集存庫獲得該菌株。金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)ATCC No.6538在下文中簡稱為金黃色葡萄球菌。白色念珠菌(Moni lia albican)ATCC No.10231在下文中簡稱為白色念珠菌。
下述實施例中的菌株N-1、B16植物乳桿菌、菌株6-2、菌株3-3、菌株J-2和菌株C-10均記載于如下文獻(xiàn)中：四川地區(qū)自然發(fā)酵泡菜中乳酸菌的生物特性研究.周光燕.2006.四川農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文.
實施例1、乳酸菌的分離與鑒定
一、菌的分離
1、樣品的采集
采集女性(均為對試驗內(nèi)容知情同意的志愿者)的陰道分泌物作為樣品，共10份。
2、菌的分離
(1)取樣品，用無菌水稀釋至10倍體積，得到樣品稀釋液。取1mL樣品稀釋液，攪拌接種于30-40℃的固體培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)24-72h。
(2)完成步驟(1)后，挑選單菌落，點接接種于含1.6％(質(zhì)量百分比)溴甲酚紫的雙層的固體平板上，37℃培養(yǎng)24-72h。
(3)完成步驟(2)后，挑選產(chǎn)生黃色色素的單菌落，劃線接種于含1.6％(質(zhì)量百分比)溴甲酚紫的雙層的固體平板上，37℃培養(yǎng)。
(4)完成步驟(3)后，挑選產(chǎn)生黃色色素的單菌落，接種于MRS培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)24-72h。
(5)完成步驟(4)后，革蘭氏染色涂片鏡檢。
革蘭氏染色涂片鏡檢陽性、過氧化氫陰性、含溴甲酚紫平板上形成黃色菌落的菌株初步判定為乳酸菌。按照上述分離方法，從10份樣品中分離到了7株乳酸菌，依次命名為菌株N1、菌株N2、菌株N3、菌株N4、菌株N5、菌株N6和菌株N7。
二、乳酸菌的鑒定
參考文獻(xiàn)(陳強(qiáng)，2004；胡清華，2002)中記載的方法，測定菌株N1、菌株N2、菌株N3、菌株N4、菌株N5、菌株N6和菌株N7的生理生化特征。生理生化試驗均設(shè)置重復(fù)、陰性對照和陽性對照。根據(jù)測定結(jié)果，與《伯杰細(xì)菌鑒定手冊》(R.E.布坎南，N.E吉本斯，1984)、《常見細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊》(東秀株，蔡妙英，2001)、《Bergey’s Manual of Systematic Bacteriology》(Peter H.A.Sneath，1984)和《乳酸菌分類鑒定及實驗方法》(凌代文，東秀珠1999)對照進(jìn)行判別。
菌株N1、菌株N2、菌株N3、菌株N4和菌株N5均無芽抱，革蘭氏陽性，過氧化氫酶陰性，明膠液化試驗、吲哚試驗、聯(lián)苯胺試驗、硝酸鹽還原試驗中反應(yīng)陰性，pH4.5生長，因此菌株N1、菌株N2、菌株N3、菌株N4和菌株N5均鑒定為乳桿菌屬的乳桿菌。菌株N1、菌株N2和菌株N3的糖發(fā)酵結(jié)果與《伯杰細(xì)菌鑒定手冊》和《乳酸菌分類鑒定及實驗方法》中的植物乳桿菌描述一致，菌株N1為植物乳桿菌，菌株N2具體為菌株N-1，菌株N3具體為B16植物乳桿菌。菌株N4能利用甘露醇、乳糖、棉籽糖、鼠李糖、七葉苷、海藻糖、纖維二糖、阿拉伯糖、麥芽糖、葡萄糖、山梨醇發(fā)酵產(chǎn)酸、不發(fā)酵核糖、木糖、葡萄糖酸鹽產(chǎn)酸，精氨酸不產(chǎn)氨，15℃不生長，所以菌株N4鑒定為鼠乳桿菌，具體為菌株6-2。菌株N5的糖發(fā)酵結(jié)果與《乳酸菌分類鑒定及實驗方法》中描述一致，因此，將菌株N5鑒定為干酪乳桿菌干酪亞種，具體為菌株3-3。
菌株N6和菌株N7的生理生化特征如下：在10℃生長，45℃不生長，4％NaCl生長，葡萄糖發(fā)酵產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，革蘭氏染色陽性的球形或卵球形細(xì)菌，在過氧化氫酶陰性，明膠液化試驗、聯(lián)苯胺試驗、硝酸鹽還原試驗中反應(yīng)陰性，因此菌株N6和菌株N7鑒定為乳酸球菌屬的乳酸菌。菌株N6能利用甘露醇、乳糖、核糖、麥芽糖、葡萄糖、山梨醇發(fā)酵產(chǎn)酸，不利用棉籽糖、鼠李糖、海藻糖、木糖、甘油、淀粉發(fā)酵產(chǎn)酸、精氨酸水解，符合《乳酸菌分類鑒定及實驗方法》的描述，將菌株N6鑒定為乳酸球菌屬乳酸亞種，具體為菌株J-2。菌株N7能夠發(fā)酵利用乳糖、海藻糖、核糖、麥芽糖、葡萄糖產(chǎn)酸，不利用棉籽糖、阿拉伯糖、山梨醇、木糖產(chǎn)酸，能從精氨酸產(chǎn)氨，并且能夠水解精氨酸，發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，在pH9.2、pH9.6的培養(yǎng)基中生長，符合《乳酸菌分類鑒定及實驗方法》的描述，將菌株N7鑒定為乳酸球菌屬乳酸亞種，具體為菌株C-10。
實施例2、沐浴產(chǎn)品的制備
一、發(fā)酵上清的制備
1、取菌株N1，接種至MRS培養(yǎng)基(乳酸菌的初始菌濃度為6×105cfu/mL)，30℃振蕩(搖速為220rpm，旋轉(zhuǎn)半徑為50mm)培養(yǎng)24h，收集整個培養(yǎng)體系，命名為體系1。
2、完成步驟1后，取體系1，按體積比為1:9接種至MRS培養(yǎng)基，30℃振蕩(搖速為220rpm，旋轉(zhuǎn)半徑為50mm)培養(yǎng)24h，收集整個培養(yǎng)體系，命名為體系2。
3、完成步驟2后，取體系2，4000rpm離心10min，收集上清液。將上清液過濾除菌(過濾孔徑為0.45mm)，即獲得菌株N1的發(fā)酵上清。
按照上述方法，將菌株N1分別替換為菌株N2、菌株N3、菌株N4、菌株N5、菌株N6和菌株N7，其它步驟均不變，得到菌株N2的發(fā)酵上清、菌株N3的發(fā)酵上清、菌株N4的發(fā)酵上清、菌株N5的發(fā)酵上清、菌株N6的發(fā)酵上清和菌株N7的發(fā)酵上清。
二、沐浴產(chǎn)品的制備
按照表2的配比，將水、AES、F50、月癸基葡糖苷、菌株的發(fā)酵上清、HE、SCE、無患子提取物、香精和鹽混合，獲得表2所示的沐浴產(chǎn)品。
表2不同沐浴產(chǎn)品的原料組成(g)
實施例3、實施例2制備的沐浴產(chǎn)品的沐浴效果
一、實施例2制備的沐浴產(chǎn)品的抑菌試驗
按照《消毒技術(shù)規(guī)范》2002版2.1.8.2的抑菌環(huán)試驗的方法，測定待測沐浴產(chǎn)品對待測菌的抑菌效果。待測沐浴產(chǎn)品為沐浴產(chǎn)品A1、沐浴產(chǎn)品A2、沐浴產(chǎn)品A3、沐浴產(chǎn)品B1、沐浴產(chǎn)品B2、沐浴產(chǎn)品B3、沐浴產(chǎn)品C1、沐浴產(chǎn)品C2、沐浴產(chǎn)品C3、沐浴產(chǎn)品D1、沐浴產(chǎn)品D2、沐浴產(chǎn)品D3、沐浴產(chǎn)品E1、沐浴產(chǎn)品E2、沐浴產(chǎn)品E3、沐浴產(chǎn)品F1、沐浴產(chǎn)品F2、沐浴產(chǎn)品F3、沐浴產(chǎn)品G1、沐浴產(chǎn)品G2、沐浴產(chǎn)品G3或沐浴產(chǎn)品K。待測菌為金黃色葡萄球菌或白色念珠菌。抑菌試驗重復(fù)三次，每次重復(fù)的步驟如下：
1、按照《消毒技術(shù)規(guī)范》2002版2.1.1.2.3的方法，制備待測菌的菌懸液，待測菌的菌懸液的濃度為5.2×106cfu/mL。
2、取20μL菌懸液，倒入15-20mL固體培養(yǎng)基中(固體培養(yǎng)基的溫度約為50-55℃)，混合均勻，獲得混合液。
3、取4個牛津杯置于培養(yǎng)皿，各牛津杯心之間相距25mm以上，與培養(yǎng)皿的周緣相距15mm以上，且各距離均勻；然后倒入混合液，冷卻。
4、完成步驟3后，向牛津杯中加入1mL待測沐浴產(chǎn)品(與培養(yǎng)皿中混合液的液面高度一致)，將培養(yǎng)皿置于37℃培養(yǎng)17h，然后用游標(biāo)卡尺測量抑菌環(huán)的直徑。
5、完成步驟3后，向牛津杯中加入1mL無菌水(與培養(yǎng)皿中混合液的液面高度一致)，將培養(yǎng)皿置于37℃培養(yǎng)17h，然后用游標(biāo)卡尺測量抑菌環(huán)的直徑，作為陰性對照。
抑菌試驗結(jié)果判斷：
(1)抑菌環(huán)直徑大于7mm者，判斷為有抑菌效果；抑菌環(huán)直徑為7mm以下者，判斷為無抑菌效果。
(2)三次重復(fù)試驗均有抑菌作用結(jié)果者，判為合格。
(3)陰性對照應(yīng)無抑菌環(huán)產(chǎn)生，否則試驗無效。
抑菌試驗結(jié)果見表3。結(jié)果表明，沐浴產(chǎn)品A1、沐浴產(chǎn)品A2、沐浴產(chǎn)品A3、沐浴產(chǎn)品B1、沐浴產(chǎn)品B2、沐浴產(chǎn)品B3、沐浴產(chǎn)品C1、沐浴產(chǎn)品C2、沐浴產(chǎn)品C3、沐浴產(chǎn)品D1、沐浴產(chǎn)品D2、沐浴產(chǎn)品D3、沐浴產(chǎn)品E1、沐浴產(chǎn)品E2、沐浴產(chǎn)品E3、沐浴產(chǎn)品F1、沐浴產(chǎn)品F2、沐浴產(chǎn)品F3、沐浴產(chǎn)品G1、沐浴產(chǎn)品G2和沐浴產(chǎn)品G3均對待測菌有抑菌效果，抑菌效果依次為：(沐浴產(chǎn)品A1、沐浴產(chǎn)品A2或沐浴產(chǎn)品A3)>(沐浴產(chǎn)品B1、沐浴產(chǎn)品B2、沐浴產(chǎn)品B3、沐浴產(chǎn)品C1、沐浴產(chǎn)品C2或沐浴產(chǎn)品C3)>(沐浴產(chǎn)品D1、沐浴產(chǎn)品D2、沐浴產(chǎn)品D3、沐浴產(chǎn)品E1、沐浴產(chǎn)品E2或沐浴產(chǎn)品E3)>(沐浴產(chǎn)品F1、沐浴產(chǎn)品F2、沐浴產(chǎn)品F3、沐浴產(chǎn)品G1、沐浴產(chǎn)品G2或沐浴產(chǎn)品G3)。沐浴產(chǎn)品K對待測菌無抑菌效果。
表3沐浴產(chǎn)品對金黃色葡萄球菌的抑菌效果
二、實施例2制備的沐浴產(chǎn)品的沐浴效果
1、沐浴試驗
將1150名志愿者(志愿者對試驗內(nèi)容均知情同意)隨機(jī)分成沐浴產(chǎn)品A1試驗組、沐浴產(chǎn)品A2試驗組、沐浴產(chǎn)品A3試驗組、沐浴產(chǎn)品B1試驗組、沐浴產(chǎn)品B2試驗組、沐浴產(chǎn)品B3試驗組、沐浴產(chǎn)品C1試驗組、沐浴產(chǎn)品C2試驗組、沐浴產(chǎn)品C3試驗組、沐浴產(chǎn)品D1試驗組、沐浴產(chǎn)品D2試驗組、沐浴產(chǎn)品D3試驗組、沐浴產(chǎn)品E1試驗組、沐浴產(chǎn)品E2試驗組、沐浴產(chǎn)品E3試驗組、沐浴產(chǎn)品F1試驗組、沐浴產(chǎn)品F2試驗組、沐浴產(chǎn)品F3試驗組、沐浴產(chǎn)品G1試驗組、沐浴產(chǎn)品G2試驗組、沐浴產(chǎn)品G3試驗組、沐浴產(chǎn)品K試驗組和對照組(每組50人)，然后進(jìn)行如下試驗：
沐浴產(chǎn)品A1試驗組：試驗第1天，采用沐浴產(chǎn)品A1沐?。辉囼灥?天，再次采用沐浴產(chǎn)品A1沐??；試驗第7天，再次采用沐浴產(chǎn)品A1沐浴。每人每次沐浴產(chǎn)品A1的使用量為4-6mL。
沐浴產(chǎn)品A2試驗組：按照沐浴產(chǎn)品A1試驗組的操作步驟進(jìn)行，僅將沐浴產(chǎn)品A1替換為沐浴產(chǎn)品A2。
沐浴產(chǎn)品A3試驗組：按照沐浴產(chǎn)品A1試驗組的操作步驟進(jìn)行，僅將沐浴產(chǎn)品A1替換為沐浴產(chǎn)品A3。
沐浴產(chǎn)品B1試驗組：按照沐浴產(chǎn)品A1試驗組的操作步驟進(jìn)行，僅將沐浴產(chǎn)品A1替換為沐浴產(chǎn)品B1。
沐浴產(chǎn)品B2試驗組：按照沐浴產(chǎn)品A1試驗組的操作步驟進(jìn)行，僅將沐浴產(chǎn)品A1替換為沐浴產(chǎn)品B2。
沐浴產(chǎn)品B3試驗組：按照沐浴產(chǎn)品A1試驗組的操作步驟進(jìn)行，僅將沐浴產(chǎn)品A1替換為沐浴產(chǎn)品B3。
沐浴產(chǎn)品C1試驗組：按照沐浴產(chǎn)品A1試驗組的操作步驟進(jìn)行，僅將沐浴產(chǎn)品A1替換為沐浴產(chǎn)品C1。
沐浴產(chǎn)品C2試驗組：按照沐浴產(chǎn)品A1試驗組的操作步驟進(jìn)行，僅將沐浴產(chǎn)品A1替換為沐浴產(chǎn)品C2。
沐浴產(chǎn)品C3試驗組：按照沐浴產(chǎn)品A1試驗組的操作步驟進(jìn)行，僅將沐浴產(chǎn)品A1替換為沐浴產(chǎn)品C3。
沐浴產(chǎn)品D1試驗組：按照沐浴產(chǎn)品A1試驗組的操作步驟進(jìn)行，僅將沐浴產(chǎn)品A1替換為沐浴產(chǎn)品D1。
沐浴產(chǎn)品D2試驗組：按照沐浴產(chǎn)品A1試驗組的操作步驟進(jìn)行，僅將沐浴產(chǎn)品A1替換為沐浴產(chǎn)品D2。
沐浴產(chǎn)品D3試驗組：按照沐浴產(chǎn)品A1試驗組的操作步驟進(jìn)行，僅將沐浴產(chǎn)品A1替換為沐浴產(chǎn)品D3。
沐浴產(chǎn)品E1試驗組：按照沐浴產(chǎn)品A1試驗組的操作步驟進(jìn)行，僅將沐浴產(chǎn)品A1替換為沐浴產(chǎn)品E1。
沐浴產(chǎn)品E2試驗組：按照沐浴產(chǎn)品A1試驗組的操作步驟進(jìn)行，僅將沐浴產(chǎn)品A1替換為沐浴產(chǎn)品E2。
沐浴產(chǎn)品E3試驗組：按照沐浴產(chǎn)品A1試驗組的操作步驟進(jìn)行，僅將沐浴產(chǎn)品A1替換為沐浴產(chǎn)品E3。
沐浴產(chǎn)品F1試驗組：按照沐浴產(chǎn)品A1試驗組的操作步驟進(jìn)行，僅將沐浴產(chǎn)品A1替換為沐浴產(chǎn)品F1。
沐浴產(chǎn)品F2試驗組：按照沐浴產(chǎn)品A1試驗組的操作步驟進(jìn)行，僅將沐浴產(chǎn)品A1替換為沐浴產(chǎn)品F2。
沐浴產(chǎn)品F3試驗組：按照沐浴產(chǎn)品A1試驗組的操作步驟進(jìn)行，僅將沐浴產(chǎn)品A1替換為沐浴產(chǎn)品F3。
沐浴產(chǎn)品G1試驗組：按照沐浴產(chǎn)品A1試驗組的操作步驟進(jìn)行，僅將沐浴產(chǎn)品A1替換為沐浴產(chǎn)品G1。
沐浴產(chǎn)品G2試驗組：按照沐浴產(chǎn)品A1試驗組的操作步驟進(jìn)行，僅將沐浴產(chǎn)品A1替換為沐浴產(chǎn)品G2。
沐浴產(chǎn)品G3試驗組：按照沐浴產(chǎn)品A1試驗組的操作步驟進(jìn)行，僅將沐浴產(chǎn)品A1替換為沐浴產(chǎn)品G3。
沐浴產(chǎn)品K試驗組：按照沐浴產(chǎn)品A1試驗組的操作步驟進(jìn)行，僅將沐浴產(chǎn)品A1替換為沐浴產(chǎn)品K。
對照組：按照沐浴產(chǎn)品A1試驗組的操作步驟進(jìn)行，僅將沐浴產(chǎn)品A1替換為無菌水。
2、效果評價
進(jìn)行步驟1的試驗過程中，分別在試驗的第1天至第10天觀察志愿者皮膚的基本情況，主要包括皮膚是否光滑細(xì)膩和皮膚單位面積的細(xì)菌數(shù)目是否減少。
試驗結(jié)果表明，與使用沐浴產(chǎn)品K的志愿者或使用無菌水的志愿者相比，使用沐浴產(chǎn)品A1、沐浴產(chǎn)品A2、沐浴產(chǎn)品A3、沐浴產(chǎn)品B1、沐浴產(chǎn)品B2、沐浴產(chǎn)品B3、沐浴產(chǎn)品C1、沐浴產(chǎn)品C2、沐浴產(chǎn)品C3、沐浴產(chǎn)品D1、沐浴產(chǎn)品D2、沐浴產(chǎn)品D3、沐浴產(chǎn)品E1、沐浴產(chǎn)品E2、沐浴產(chǎn)品E3、沐浴產(chǎn)品F1、沐浴產(chǎn)品F2、沐浴產(chǎn)品F3、沐浴產(chǎn)品G1、沐浴產(chǎn)品G2或沐浴產(chǎn)品G3的志愿者的皮膚單位面積的細(xì)菌數(shù)目顯著減少，皮膚更光滑細(xì)膩，使用效果依次為：(沐浴產(chǎn)品A1、沐浴產(chǎn)品A2或沐浴產(chǎn)品A3)>(沐浴產(chǎn)品B1、沐浴產(chǎn)品B2、沐浴產(chǎn)品B3、沐浴產(chǎn)品C1、沐浴產(chǎn)品C2或沐浴產(chǎn)品C3)>(沐浴產(chǎn)品D1、沐浴產(chǎn)品D2、沐浴產(chǎn)品D3、沐浴產(chǎn)品E1、沐浴產(chǎn)品E2或沐浴產(chǎn)品E3)>(沐浴產(chǎn)品F1、沐浴產(chǎn)品F2、沐浴產(chǎn)品F3、沐浴產(chǎn)品G1、沐浴產(chǎn)品G2或沐浴產(chǎn)品G3)。
可見，本發(fā)明提供的沐浴產(chǎn)品A1、沐浴產(chǎn)品A2、沐浴產(chǎn)品A3、沐浴產(chǎn)品B1、沐浴產(chǎn)品B2、沐浴產(chǎn)品B3、沐浴產(chǎn)品C1、沐浴產(chǎn)品C2、沐浴產(chǎn)品C3、沐浴產(chǎn)品D1、沐浴產(chǎn)品D2、沐浴產(chǎn)品D3、沐浴產(chǎn)品E1、沐浴產(chǎn)品E2、沐浴產(chǎn)品E3、沐浴產(chǎn)品F1、沐浴產(chǎn)品F2、沐浴產(chǎn)品F3、沐浴產(chǎn)品G1、沐浴產(chǎn)品G2和沐浴產(chǎn)品G3均具有良好抑菌效果。
按照上述實施例2的制備方法，將無患子提取物替換為無患子的醇提物，制備相應(yīng)的沐浴產(chǎn)品，然后將該沐浴產(chǎn)品按照實施例3的方法進(jìn)行檢測，結(jié)果表明，該沐浴產(chǎn)品的抑菌效果與沐浴產(chǎn)品A1、沐浴產(chǎn)品A2、沐浴產(chǎn)品A3、沐浴產(chǎn)品B1、沐浴產(chǎn)品B2、沐浴產(chǎn)品B3、沐浴產(chǎn)品C1、沐浴產(chǎn)品C2、沐浴產(chǎn)品C3、沐浴產(chǎn)品D1、沐浴產(chǎn)品D2、沐浴產(chǎn)品D3、沐浴產(chǎn)品E1、沐浴產(chǎn)品E2、沐浴產(chǎn)品E3、沐浴產(chǎn)品F1、沐浴產(chǎn)品F2、沐浴產(chǎn)品F3、沐浴產(chǎn)品G1、沐浴產(chǎn)品G2或沐浴產(chǎn)品G3相比，無顯著差異。獲得無患子的醇提物的步驟具體可如下：
(1)將市售的無患子(Sap indusmukorossi Gaerth.)的果皮進(jìn)行粉碎(篩網(wǎng)目數(shù)：10目)，得到粒度小于1.0cm的原料。
(2)完成步驟(1)后，取原料，加入(8±0.1)質(zhì)量倍量78-82％(體積百分比)的乙醇水溶液進(jìn)行回流提取，提取分別進(jìn)行三次，每次提取時間為2h±10min，分別得到回流液1、回流液2和回流液3。
(3)完成步驟(2)后，取回流液1、回流液2或回流液3，過濾，收集上清液進(jìn)行濃縮(目的為回收乙醇)，然后將濃縮液進(jìn)行合并，得到溶液1。
(4)完成步驟(3)后，取溶液1，按體積比為1:3加入水，進(jìn)行水沉(攪拌時間5h，水沉?xí)r間6h；雜質(zhì)形成沉淀通過后續(xù)的過濾去除)，然后進(jìn)行過濾，收集上清液進(jìn)行濃縮，得到溶液2。
(5)完成步驟(4)后，取溶液2，按體積比為1:2加入水，進(jìn)行醇沉(攪拌時間5min，醇沉?xí)r間2-4h；雜質(zhì)形成沉淀通過后續(xù)的過濾去除)，然后進(jìn)行過濾，收集上清液進(jìn)行脫色，得到溶液3。
(6)完成步驟(5)后，取溶液3，先進(jìn)行濃縮(目的為回收乙醇)和干燥(在75℃條件下干燥至恒重)，然后粉碎(篩網(wǎng)目數(shù)：100目)，最后混合均勻，獲得無患子的醇提物。
實施例1分離純化得到的菌株N1已于2016年08月18日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(簡稱CGMCC，地址為：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號)，保藏編號為CGMCC No.12881。菌株N1的全稱為植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)Rs0228CGMCC No.12881。