本發(fā)明涉及天然有效成分提取技術(shù)。更具體地，涉及一種香菇總生物堿的提取方法。
背景技術(shù)：
香菇(Lentinusedodes(Berk)Sing),又名香蕈、香椹、香信、合蕈、陳仁玉、臺蕈,是著名的食用兼藥用真菌,早在一千多年前就開始采集利用.本草綱目》中有：香菇“甘、平、無毒”；《醫(yī)林纂要》記載；香菇“甘、寒”,“可托痘毒”；《日月本草》認為香菇“益氣、不饑、治風破血”；《本經(jīng)逢原》認為香菇“為補償維生素D的要劑，預(yù)防佝僂病,并治貧血”。香菇含有多種有效藥用成分，所含麥角甾醇(維生素D)，其含量比一般食物高)被人體吸收后，在光照下能轉(zhuǎn)變?yōu)榫S生素D，可增強人體的抵抗力，并能促進兒童骨骼和牙齒的生長，預(yù)防佝僂病。香菇所含的香菇素，具有降低血中膽固醇的作用，可預(yù)防因動脈硬化引起的冠心病、高血壓等中老年人常見病；香菇多糖能刺激機體的免疫系統(tǒng)，使免疫功能得到恢復(fù)和提高，從而起到防癌、抗癌作用。香菇還含有一種誘導(dǎo)機體產(chǎn)生干擾素的雙鏈核糖核酸，可預(yù)防由病毒引起的多種疾病。
生物堿是存在于自然界中的一類含氮的堿性有機化合物，有似堿的性質(zhì)，所以過去又稱為贗堿。大多數(shù)有復(fù)雜的環(huán)狀結(jié)構(gòu)，氮素多包含在環(huán)內(nèi)，有顯著的生物活性，是重要的天然有效成分之一，具有光學(xué)活性。大多數(shù)生物堿均幾乎不溶或難溶于水。能溶于氯仿、乙醚、酒精、丙酮、苯等有機溶劑。也能溶于稀酸的水溶液而成鹽類。一些生物堿因其具有抗癌、抗腫瘤、抗炎、抗病毒、降血脂、降血壓等作用，在食品、衛(wèi)生、醫(yī)藥等方面有著巨大的應(yīng)用潛力，近年來成為人們研究的熱點。
目前，生物堿的常規(guī)提取方法主要有浸漬法、滲漉法、回流法、微波輔助萃取、超聲波提取法等方法。傳統(tǒng)的方法溶劑消耗量大，操作復(fù)雜。從而，需要一種新的提取方法，既能保證生物堿的品質(zhì)和活性，又具有高的提取率。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于提供一種香菇總生物堿的提取方法，該提取方法簡單，易操作，提取效率高且提取得到的生物堿的品質(zhì)和活性高。
為達到上述目的，本發(fā)明采用下述技術(shù)方案：
香菇總生物堿的提取方法，包括如下步驟
1)將新鮮香菇去雜，于40～50℃溫度下恒溫干燥至無水，再粉碎、過篩至30～35目，得粉末；
2)將步驟1)所得粉末放入萃取釜中，進行超臨界CO2萃取，萃取2次，第一次的萃取條件為：萃取溫度45～55℃，萃取壓力22～26MPa，萃取時間為6～8min，夾帶劑為體積分數(shù)為60～80％的乙醇；第二次的萃取條件為：萃取溫度為40～42℃，萃取壓力25MPa，萃取時間為4～6min，夾帶劑為體積分數(shù)為60～80％的乙醇；
3)將萃取后的萃取液依次經(jīng)過第一分離釜、第二分離釜，分離出CO2，得提取液，其中：第一分離釜的溫度為35～38℃，壓力為12～16MPa，時間為4～6min；第二分離釜的溫度為30～35℃，壓力為12～14MPa，時間為2～3min；
4)將步驟3)得到的提取液用體積比1:1～1:3的水：氯仿進行萃取，將兩相溶劑充分混合，靜置12～24h，取氯仿層；
5)將步驟4)所得氯仿層溶液進行減壓濃縮，干燥，得香菇總生物堿。
進一步地，在本發(fā)明的一些優(yōu)選實施方式中，步驟2)中的萃取方法為，萃取2次，第一次的萃取條件為：萃取溫度45～50℃，萃取壓力23～25MPa，萃取時間為6～7min，夾帶劑為體積分數(shù)為60～80％的乙醇；第二次的萃取條件為：萃取溫度為42℃，萃取壓力25MPa，萃取時間為4～6min，夾帶劑為體積分數(shù)為75％的乙醇。
進一步地，在本發(fā)明的另一些優(yōu)選實施方式中，步驟3)中，第一分離釜的溫度為35～36℃，壓力為15～16MPa，時間為5min；第二分離釜的溫度為33～35℃，壓力為13MPa，時間為3min。
進一步地，在本發(fā)明的一些實施方式中，步驟4)中，水與氯仿的體積比為1:2～1:2.5。
如無特殊說明，本發(fā)明中的原料均可通過市售購買得到或通過本領(lǐng)域常規(guī)手段獲得。
另外需注意的是，如無特殊說明，本發(fā)明所記載的任何范圍包括端值以及端值之間的任何數(shù)值以及端值或者端值之間的任意數(shù)值所構(gòu)成的任意子范圍。
本發(fā)明的有益效果如下：
本發(fā)明的提取方法操作簡單，提取條件簡單易實施，且提取用的CO2作為流體可循環(huán)使用，無溶劑殘留，且CO2可提供惰性環(huán)境，有效避免產(chǎn)物氧化，不會使生物堿有效組分變性，有效的保證了提取得到的生物堿的品質(zhì)和活性。
附圖說明
下面結(jié)合附圖對本發(fā)明的具體實施方式作進一步詳細的說明。
圖1示出本發(fā)明的提取工藝流程圖。
具體實施方式
為了更清楚地說明本發(fā)明，下面結(jié)合優(yōu)選實施例和附圖對本發(fā)明做進一步的說明。附圖中相似的部件以相同的附圖標記進行表示。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當理解，下面所具體描述的內(nèi)容是說明性的而非限制性的，不應(yīng)以此限制本發(fā)明的保護范圍。
本發(fā)明中的提取流程如圖1所示。將粉末狀的香菇粉末置于萃取釜4中；再將來自鋼瓶1的CO2依次經(jīng)過第一隔膜壓縮機2、熱交換器3預(yù)熱后進入萃取釜4；同時，夾帶劑儲槽5中的夾帶劑經(jīng)過平流泵6泵入萃取釜中；設(shè)定萃取條件后，實現(xiàn)第一次萃取，再次設(shè)定萃取條件，實現(xiàn)第2次萃?。粚⑤腿『蟮妮腿∫航?jīng)萃取釜4底部的減壓閥依次經(jīng)過第一分離釜7和第二分離釜8，實現(xiàn)分離，收集分離釜中的萃取液，同時氣化后的CO2經(jīng)過過濾器9、流量計10控制流量、第二隔膜壓縮機11、熱交換器3可重新進入萃取釜4中實現(xiàn)重復(fù)使用，其中，上述各裝置間通過設(shè)有若干控制閥；得到的萃取液再經(jīng)液-液溶劑萃取，及減壓濃縮，得到香菇總生物堿。
實施例1
香菇總生物堿的提取方法，步驟如下：
1)將新鮮香菇去雜，于45℃溫度下恒溫干燥至無水，再粉碎、過篩至32目，收集粉末；
2)取步驟1)所得粉末5g放入萃取釜中，進行超臨界CO2萃取，萃取2次，第一次的萃取條件為：萃取溫度55℃，萃取壓力22MPa，CO2流速為25L/h，萃取時間為6min，夾帶劑為體積分數(shù)為65％的乙醇；第二次的萃取條件為：萃取溫度為41℃，萃取壓力25MPa，CO2流速為21Lh，萃取時間為6min，夾帶劑為體積分數(shù)為60～80％的乙醇；
3)將萃取后的萃取液依次經(jīng)過第一分離釜、第二分離釜，分離出CO2，得提取液，其中：第一分離釜的溫度為38℃，壓力為13MPa，時間為6min；第二分離釜的溫度為30℃，壓力為14MPa，時間為2min；
4)將步驟3)得到的提取液用體積比1:1.5的水：氯仿進行萃取，將兩相溶劑充分混合，靜置16h，取氯仿層；
5)將步驟4)所得氯仿層溶液進行減壓濃縮，干燥，得香菇總生物堿0.09g。
用紫外分光光度儀測產(chǎn)品吸光度，根據(jù)標準品得到的回歸方程計算產(chǎn)品中總生物堿含量為0.723％。
實施例2
重復(fù)實施例1，區(qū)別在于，步驟2)中的萃取方法為，萃取2次，第一次的萃取條件為：萃取溫度46℃，萃取壓力23MPa，萃取時間為6min，夾帶劑為體積分數(shù)為80％的乙醇；第二次的萃取條件為：萃取溫度為42℃，萃取壓力25MPa，萃取時間為4min，夾帶劑為體積分數(shù)為75％的乙醇。其余條件不變，提取得香菇總生物堿0.092g。
用紫外分光光度儀測產(chǎn)品吸光度，根據(jù)標準品得到的回歸方程計算產(chǎn)品中總生物堿含量為0.801％。
實施例3
重復(fù)實施例1，區(qū)別在于，步驟3)中分離釜的條件改為：第一分離釜的溫度為34℃，壓力為15MPa，時間為5min；第二分離釜的溫度為34℃，壓力為13MPa，時間為3min。其余條件不變，提取得香菇總生物堿0.091g。
用紫外分光光度儀測產(chǎn)品吸光度，根據(jù)標準品得到的回歸方程計算產(chǎn)品中總生物堿含量為0.735％。
實施例4
重復(fù)實施例1，區(qū)別在于，步驟3)中分離釜的條件改為：第一分離釜的溫度為36℃，壓力為16MPa，時間為5min；第二分離釜的溫度為33℃，壓力為13MPa，時間為3min。其余條件不變，提取得香菇總生物堿0.089g。
用紫外分光光度儀測產(chǎn)品吸光度，根據(jù)標準品得到的回歸方程計算產(chǎn)品中總生物堿含量為0.729％。
對比例1
重復(fù)實施例1，區(qū)別在于，步驟2)中僅進行1次萃取，萃取條件為：萃取溫度55℃，萃取壓力22MPa，CO2流速為25L/h，萃取時間為12min，夾帶劑為體積分數(shù)為65％的乙醇。其余條件不變，提取得香菇總生物堿0.078g。
用紫外分光光度儀測產(chǎn)品吸光度，根據(jù)標準品得到的回歸方程計算產(chǎn)品中總生物堿含量為0.679％。
對比例2
重復(fù)實施例1，區(qū)別在于，步驟2)中第2次萃取的條件與第1次相同，為：萃取溫度55℃，萃取壓力22MPa，CO2流速為25L/h，萃取時間為6min，夾帶劑為體積分數(shù)為65％的乙醇。其余條件不變，提取得香菇總生物堿0.084g。
用紫外分光光度儀測產(chǎn)品吸光度，根據(jù)標準品得到的回歸方程計算產(chǎn)品中總生物堿含量為0.694％。
顯然，本發(fā)明的上述實施例僅僅是為清楚地說明本發(fā)明所作的舉例，而并非是對本發(fā)明的實施方式的限定，對于所屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在上述說明的基礎(chǔ)上還可以做出其它不同形式的變化或變動，這里無法對所有的實施方式予以窮舉，凡是屬于本發(fā)明的技術(shù)方案所引伸出的顯而易見的變化或變動仍處于本發(fā)明的保護范圍之列。