技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及異類葉升麻苷在抑制淀粉樣β肽生成、積累或聚集的抑制劑的新用途，尤其涉及使用異類葉升麻苷預(yù)防或治療與淀粉樣β肽相關(guān)的疾病或狀況的新用途。
背景技術(shù)：
：：阿滋海默氏癥(Alzheimer’sdisease)被認(rèn)為與一種具有39-43個(gè)胺基酸的肽的積累相關(guān)，該肽被稱為淀粉樣β肽(amyloidβpeptides)(簡(jiǎn)稱Aβ)，其為類淀粉前體蛋白APP(amyloidprecursorprotein)的一種水解產(chǎn)物。其中Aβ1-40最為大量且毒性低，而Aβ1-42則對(duì)神經(jīng)元有較高的毒性，且具高度纖維形成性(fibrillogenic)，被認(rèn)為是與阿滋海默氏癥的發(fā)病最為相關(guān)的Aβ形式。Aβ單體可經(jīng)寡聚化而形成可溶性的Aβ寡聚體(oligomer)，進(jìn)一步聚集于細(xì)胞外形成不可溶性的纖維絲或老年斑塊(senileplaque)。一般認(rèn)為與Aβ相關(guān)的疾病或狀況包含唐氏癥(Downsyndrome)、荷蘭型遺傳性腦出血伴淀粉樣變病(Hereditarycerebralhemorrhagewithamyloid(HCHWA)Dutch)、關(guān)島帕金森氏癥-失智癥復(fù)合癥(Parkinsonism-dementiacomplexonGuam)(ClinicalNeurologyandNeurosurgery(1990)92:305-310)；大腦淀粉樣血管病(J.Neuropath.Exp.Neuro.(2002)61:282-293)；包涵體肌炎(Neurology(2006)66:65-68)；額顳葉型失智癥(Neuroreport(2002)13-5:719-723)；年齡相關(guān)黃斑變性(ExperimentalEyeResearch(2004)78:243-256)；皮克病(Pick’sdisease)(NeuroscienceLetters(1994)171:63-66)及其它。所述Aβ相關(guān)的疾病或狀況一般而言與Aβ的生成、積累或聚集有關(guān)，包括因先天如遺傳、或后天如老化或環(huán)境等因素而導(dǎo)致生物體中存在不正常的Aβ或Aβ聚集體數(shù)量。一般認(rèn)為如果能抑制Aβ的生成、積累或聚集，應(yīng)可作為有效預(yù)防或治療阿滋海默氏癥或其它與淀粉樣β肽相關(guān)的疾病或狀況的一種方式。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：鑒于淀粉樣β肽和其聚集體，容易在生物體內(nèi)引發(fā)各種疾病或狀況，因此本發(fā)明的目的之一是提供一種抑制淀粉樣β肽生成、積累或聚集的有效成份，其可作為食品、飲品、咀嚼物、貼片、皮膚保養(yǎng)品或其它添加劑。本發(fā)明的另一目的則是提供一種預(yù)防或治療淀粉樣β肽相關(guān)疾病或狀況的藥物及方法。為達(dá)到上述目的，本發(fā)明揭示了以異類葉升麻苷或其醫(yī)藥學(xué)上可接受的鹽抑制淀粉樣β肽生成、積累或聚集的用途，以及制備預(yù)防或治療淀粉樣β肽相關(guān)的疾病或狀況的藥物的用途。作為優(yōu)選，上述異類葉升麻苷或其醫(yī)藥學(xué)上可接受的鹽用以抑制該淀粉樣β肽導(dǎo)致神經(jīng)元的損傷或凋亡，進(jìn)而保留、改善或恢復(fù)學(xué)習(xí)與記憶能力。作為優(yōu)選，上述藥物對(duì)人類的有效劑量相當(dāng)于每日每公斤體重0.2毫克至4.0毫克的異類葉升麻苷或其醫(yī)藥學(xué)上可接受的鹽。為使本發(fā)明的上述目的、特征和優(yōu)點(diǎn)能更明顯易懂，下文特舉出實(shí)施例，并配合附圖作詳細(xì)說(shuō)明。附圖的簡(jiǎn)要說(shuō)明圖1示出了各井(well)的細(xì)胞外Aβ1-40含量百分比，結(jié)果顯示本發(fā)明的異類葉升麻苷(D)具有顯著降低Aβ1-40在細(xì)胞外積累的極佳活性；圖2示出了各井的細(xì)胞內(nèi)的Aβ1-40含量百分比；圖3示出了各測(cè)試樣品對(duì)APP表現(xiàn)量的影響；圖4示出了各測(cè)試樣品對(duì)Aβ1-40降解的影響；圖5示出了各測(cè)試樣品對(duì)Aβ1-42寡聚化的影響；圖6示意地示出了Aβ的生成、清除與聚集過(guò)程；圖7示出了動(dòng)物試驗(yàn)的時(shí)程表；圖8示出了各測(cè)試樣品對(duì)實(shí)驗(yàn)大鼠的探索能力影響；圖9示出了各測(cè)試樣品對(duì)實(shí)驗(yàn)大鼠的被動(dòng)回避反應(yīng)的影響；圖10示出了各測(cè)試樣品對(duì)實(shí)驗(yàn)大鼠進(jìn)行水迷宮空間表現(xiàn)的影響；圖11示出了各測(cè)試樣品對(duì)實(shí)驗(yàn)大鼠進(jìn)行水迷宮參考記憶試驗(yàn)的影響；圖12A-12E示出了實(shí)驗(yàn)大鼠的腦部組織染色結(jié)果；圖13A示出了實(shí)驗(yàn)大鼠腦部皮質(zhì)區(qū)和海馬區(qū)的乙酰膽堿含量檢測(cè)結(jié)果；圖13B示出了實(shí)驗(yàn)大鼠腦部皮質(zhì)區(qū)和海馬區(qū)的膽堿含量檢測(cè)結(jié)果；圖14A示出了實(shí)驗(yàn)大鼠腦部皮質(zhì)區(qū)所測(cè)得的乙酰膽堿酯酶活性結(jié)果；圖14B示出了實(shí)驗(yàn)大鼠腦部海馬區(qū)所測(cè)得的乙酰膽堿酯酶活性結(jié)果。實(shí)施發(fā)明的最佳方式許多由淀粉樣β肽引發(fā)的疾病均具有一種共通的特征，即淀粉樣β肽聚集體的形成。這些淀粉樣β肽聚集體可以如纖維或斑塊的形態(tài)出現(xiàn)，并且沉淀在生物體的系統(tǒng)、器官、組織或體液中，進(jìn)而引發(fā)各種疾病或狀況。如能有效抑制淀粉樣β肽的生成、積累或聚集，應(yīng)可避免淀粉樣β肽形成聚集體而引發(fā)的各種疾病或狀況，其應(yīng)可作為有效預(yù)防或治療淀粉樣β肽相關(guān)疾病或狀況的方式之一。有鑒于此，本發(fā)明以具有下式的異類葉升麻苷或其醫(yī)藥學(xué)上可接受的鹽作為抑制(例如降低或避免)淀粉樣β肽生成、積累或聚集的有效成份，尤其是抑制淀粉樣β肽于細(xì)胞外的生成、積累或聚集。美國(guó)專利7,087,252B2揭示了一種從管花肉蓯蓉(Cistanchetubulosa(Schenk)Wight)的肉質(zhì)莖所制備的含25-50wt％松果菊苷(echinacoside)及5-15wt％類葉升麻苷(acteoside)的制劑，其可用于抗老年癡呆癥(seniledementia)。異類葉升麻苷及多種其它苯乙醇苷類(phenylethanoidglycosides)已知被包含于該制劑中。在本發(fā)明中，異類葉升麻苷的水合物或其它溶劑溶合物、前藥及代謝物均被視為異類葉升麻苷的功能上的等同物。所述“前藥”指某種前趨化合物可于生物條件(活體內(nèi)或活體外)下水解、氧化或進(jìn)行其它反應(yīng)而產(chǎn)生異類葉升麻苷。所述“代謝物”指異類葉升麻苷于細(xì)胞或生物體內(nèi)被代謝所形成的化合物。當(dāng)異類葉升麻苷的“醫(yī)藥學(xué)上可接受鹽”施予生物體時(shí)，其通?？删哂信c異類葉升麻苷相同或類似的醫(yī)療功效，在生理上可忍受，且不會(huì)產(chǎn)生過(guò)敏或類似反應(yīng)。所述異類葉升麻苷的醫(yī)藥學(xué)上可接受鹽可包含但不限于鐵鹽、鈣鹽或鎂鹽等。所述“預(yù)防”指避免或延遲疾病或狀況在生物體中出現(xiàn)，而所述“治療”則指減緩或阻止疾病或狀況的發(fā)展，或使生物體的狀況回復(fù)至較佳或正常的狀態(tài)。所述“淀粉樣β肽相關(guān)性疾病或狀況”指此疾病或狀況的發(fā)生通常與淀粉樣β肽的生成、積累或聚集相關(guān)，尤其指此疾病或狀況的發(fā)生為淀粉樣β肽所導(dǎo)致。而當(dāng)在具有某種疾病或狀況的一定比例的生物體上發(fā)現(xiàn)有淀粉樣β肽的不正常生成、積累或聚集現(xiàn)象時(shí)，也可認(rèn)為此疾病或狀況為淀粉樣β肽相關(guān)。另外，當(dāng)?shù)矸蹣应码牡木奂幣c疾病或狀況所發(fā)生的病理特征影響位置相近時(shí)，亦可認(rèn)為此疾病或狀況為淀粉樣β肽相關(guān)。本發(fā)明所提供的抑制淀粉樣β肽的有效成份，亦可作為食品、飲品等添加劑使用，以達(dá)到抑制淀粉樣β肽生成、積累或聚集的方便性使用。本發(fā)明所提供的用于治療淀粉樣β肽相關(guān)性疾病或狀況的藥物或醫(yī)藥組合物，包含異類葉升麻苷或其醫(yī)藥學(xué)上可接受的鹽作為有效成份，并可包含適當(dāng)?shù)妮d劑、稀釋劑或賦形劑等，以呈現(xiàn)如散劑(powder)、顆粒劑(granule)、錠劑(tablet)、片劑(troche)、丸劑(pill)、膠囊(capsule)、水性或油性溶液(solution)、懸浮液(suspension)、乳膏(cream)、軟膏(ointment)、凝膠(gel)、氣霧劑(aerosol)、栓劑(suppository)、貼劑(patch)或其它所需形式。上述藥物或醫(yī)藥組合物可通過(guò)口腔、局部、非經(jīng)腸、皮膚、鼻、眼、眼內(nèi)或其它途徑給藥。在本文中，所述“或”一般定義為“及/或”，除非另有特別說(shuō)明。隨著世界人口老齡化的日益嚴(yán)重，與衰老有關(guān)的許多疾病例如失智癥(dementia)已然成為現(xiàn)今老年疾病的重點(diǎn)醫(yī)療研究之一，而在各種失智癥中又以阿滋海默氏癥最為普遍。阿滋海默氏癥是一種慢性的神經(jīng)退化性疾病，其特征為病人逐漸失去認(rèn)知能力且出現(xiàn)嚴(yán)重的行為異常，后續(xù)也會(huì)造成語(yǔ)言和運(yùn)動(dòng)能力的喪失，對(duì)病患本身與其家人的生活質(zhì)量容易造成極大的影響。有鑒于罹患阿滋海默氏癥的患者人數(shù)有逐漸增加的趨勢(shì)，造成家庭與社會(huì)的嚴(yán)重負(fù)擔(dān)，因此本發(fā)明特?fù)爝x與阿滋海默氏癥較為相關(guān)的Aβ進(jìn)行試驗(yàn)。在下列實(shí)施例中，利用表一所提供的測(cè)試樣品進(jìn)行Aβ試驗(yàn)，并且與未加入任何測(cè)試樣品處理的對(duì)照組(Vehicle)進(jìn)行比較。表一：進(jìn)行試驗(yàn)的樣品松果菊苷(Echinacoside)、類葉升麻苷(Acteoside)和異類葉升麻苷(Isoacteoside)分別具有下列結(jié)構(gòu)式：松果菊苷：類葉升麻苷：異類葉升麻苷：實(shí)施例一：神經(jīng)瘤母細(xì)胞株的培養(yǎng)將原生型(wildtype)人類神經(jīng)瘤母細(xì)胞SH-SY5Y培養(yǎng)于Eagle’sMinimumessentialMedium(EMEM)/Ham’sF12medium(1:1混合物)(含10％FBS,10units/mlpenicillin,10μg/mlStreptomycin)中，而原生型小鼠神經(jīng)瘤母細(xì)胞Neuro-2a則培養(yǎng)于minimumessentialmedium(MEM)培養(yǎng)基(含10％FBS,10units/mlpenicillin,10μg/mlStreptomycin)中。實(shí)施例二：各樣品對(duì)Aβ1-40于細(xì)胞外的積累測(cè)試將實(shí)施例一中的原生型人類神經(jīng)瘤母細(xì)胞SH-SY5Y的培養(yǎng)基置換成化學(xué)成份培養(yǎng)基(EMEM/F12medium(Cat.No.12500-062),Hepes5mM,葡萄糖0.6％,NaHCO33mM,麩酰胺2.5mM,胰島素25μg/ml,Transferin100μg/ml,Progestrone20nM,Putrescine60μM,亞硒酸鈉(Sodiumselenite)30nM,Heparin2μg/ml)。每個(gè)井(well)具有1x105個(gè)SH-SY5Y細(xì)胞，而培養(yǎng)基體積為300μl。30分鐘后，將表一中所示的測(cè)試樣品A-D分別以50μg/ml的濃度加入至不同井中處理24小時(shí)，接著以HumanAβ1-40Immunoassaykits(Catalog#KHB3482Invitrogen)分析各井的培養(yǎng)基中的Aβ1-40含量。人類神經(jīng)瘤母細(xì)胞SH-SY5Y會(huì)積累Aβ于細(xì)胞外的培養(yǎng)基中，而圖1示出了SH-SY5Y井分別經(jīng)各測(cè)試樣品A-D處理后，Aβ1-40于培養(yǎng)基中的含量百分比，其以未加入任何測(cè)試樣品處理的對(duì)照組為比較基準(zhǔn)。結(jié)果顯示為平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差，而對(duì)照組和測(cè)試樣品組間的統(tǒng)計(jì)差異標(biāo)示*表示P<0.05，**表示P<0.01，***表示P<0.001。參考圖1所示，測(cè)試樣品A(含苯乙醇苷的制劑)和測(cè)試樣品C(類葉升麻苷)減少培養(yǎng)基中的Aβ1-40含量約20％，而測(cè)試樣品D(異類葉升麻苷)則減少培養(yǎng)基中的Aβ1-40含量達(dá)47.44±16.62％。圖1結(jié)果顯示異類葉升麻苷(D)具有顯著降低Aβ1-40于細(xì)胞外積累的極佳活性。實(shí)施例三：各測(cè)試樣品對(duì)Aβ1-40于細(xì)胞內(nèi)的積累實(shí)驗(yàn)每個(gè)井均具有1x105個(gè)SH-SY5Y細(xì)胞，而培養(yǎng)基體積為300μl。將各井中的SH-SY5Y細(xì)胞以濃度50μg/ml的測(cè)試樣品A-D處理24小時(shí)后，分別將各井中的細(xì)胞部份制成細(xì)胞均質(zhì)液，并利用HumanAβ1-40Immunoassaykits(Catalog#KHB3482Invitrogen)分析其Aβ1-40含量。圖2示出了SH-SY5Y井的細(xì)胞內(nèi)的Aβ1-40含量百分比，以未加入任何測(cè)試樣品處理的對(duì)照組為比較基準(zhǔn)。如圖2所示，測(cè)試樣品A-D均未明顯造成Aβ于細(xì)胞中積累。實(shí)施例四：各測(cè)試樣品對(duì)APP在細(xì)胞中表現(xiàn)的影響實(shí)驗(yàn)每個(gè)井具有1x105個(gè)SH-SY5Y細(xì)胞，而培養(yǎng)基體積為300μl。將各井中的SH-SY5Y細(xì)胞以濃度50μg/ml的測(cè)試樣品A-D處理24小時(shí)后，將細(xì)胞部分以均質(zhì)緩沖液(50mMHepespH7.5,1mMEDTA,150mMNaCl,1％NP-40,1mMPMSF,5μg/mlaprotinin,10μg/mlleupeptin)進(jìn)行均質(zhì)，利用超高速離心除去不溶物質(zhì)。將蛋白質(zhì)以SDS-聚丙烯酰胺膠電泳(polyacrylamidegelelectrophoresis)分離，并轉(zhuǎn)漬到PVDF膜后再利用免疫轉(zhuǎn)漬法(immunoblot)(antiAβ1-17,6E10或antiAPP-c端抗體)來(lái)檢測(cè)holoAPP含量。圖3示出了測(cè)試樣品A-D對(duì)APP在細(xì)胞中表現(xiàn)的影響，其以百分比表示，并以未加入任何測(cè)試樣品處理的對(duì)照組(Vehicle)為基準(zhǔn)。如圖3所示，測(cè)試樣品A-D并未降低APP表現(xiàn)的活性。實(shí)施例五：各測(cè)試樣品對(duì)Aβ1-40于細(xì)胞外的降解實(shí)驗(yàn)小鼠神經(jīng)瘤母細(xì)胞neuro-2a會(huì)在化學(xué)成份培養(yǎng)基中釋放出分解Aβ的酵素，但不會(huì)在培養(yǎng)基中積累足以偵測(cè)的Aβ量。將neuro-2a在培養(yǎng)基中培養(yǎng)24小時(shí)，之后將不含細(xì)胞的培養(yǎng)基取出，并分別以濃度50μg/ml的測(cè)試樣品A-D及10ng人工合成的Aβ1-40處理24小時(shí)，之后檢視各測(cè)試樣品是否具有可促進(jìn)培養(yǎng)基中的酵素降解Aβ的活性。利用HumanAβ1-40Immunoassaykits(Catalog#KHB3482Invitrogen)分別檢驗(yàn)各井中的Aβ1-40之殘留量，其顯示為百分比，并以未加入任何測(cè)試樣品處理的對(duì)照組(Vehicle)為比較基準(zhǔn)。如圖4所示，測(cè)試樣品D(異類葉升麻苷)并未促進(jìn)Aβ于細(xì)胞外的降解。實(shí)施例六：各測(cè)試樣品對(duì)Aβ1-42寡聚化的實(shí)驗(yàn)將干燥的HumanAβ1-42自從冰箱取出靜置至室溫，加入1,1,1,3,3,3-Hexa-fluro-2-propanol(HFIP)溶解Aβ1-42至濃度為1mM，然后在室溫下靜置1小時(shí)。以Hamilton注射器將上述Aβ1-42/HFIP容易進(jìn)行分裝，并且以氮?dú)鈱FIP吹干，接著存放于-20℃。將HFIP處理后的Aβ1-42以PBS溶解，并分別以濃度50μg/ml的測(cè)試樣品A-D且于4℃下振蕩處理24小時(shí)，以制備Aβ1-42的寡聚物(oligomer)，并利用thioflavineT結(jié)合熒光(Ex＝450nm,Em＝482nm)以分析Aβ1-42的寡聚化程度。圖5示出了測(cè)試樣品A-D分別對(duì)Aβ1-42寡聚化(oligomerization)的影響，結(jié)果以百分比顯示，并以未加入任何測(cè)試樣品處理的對(duì)照組為基準(zhǔn)。參考圖5所示測(cè)試樣品A(含苯乙醇苷的制劑)、B(松果菊苷)、C(類葉升麻苷)和D(異類葉升麻苷)均具有抑制Aβ1-42寡聚化的活性，其中異類葉升麻苷(D)可抑制Aβ1-42寡聚化程度達(dá)98.93±1.70，亦即異類葉升麻苷(D)可有效降低Aβ1-42的寡聚化，進(jìn)而可抑制Aβ形成纖維絲或老年斑塊。圖6示意地示出了Aβ的生成、清除與聚集過(guò)程(參考來(lái)源：Pharmacology&Therapeutics(2005)108:131)。圖6表明培養(yǎng)基中細(xì)胞外的Aβ積累(1)會(huì)受到Aβ細(xì)胞內(nèi)積累量(2)、APP表現(xiàn)(3)、Aβ降解(4)、Aβ寡聚化(5)以及Aβ生成(6)等影響。根據(jù)上述實(shí)施例二至六的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果，相較于其它測(cè)試樣品A-C而言，異類葉升麻苷(D)具有降低細(xì)胞外Aβ積累(1)的作用，并且對(duì)于降低Aβ的寡聚化程度(5)有極佳的效用，應(yīng)可進(jìn)一步用以抑制Aβ的聚集。此外，異類葉升麻苷(D)降低Aβ于細(xì)胞外積累(1)的作用并非源于異類葉升麻苷增進(jìn)了Aβ于細(xì)胞內(nèi)的積累(2)、降低了細(xì)胞的APP表現(xiàn)(3)、或增進(jìn)了Aβ于細(xì)胞外進(jìn)行降解(4)，因此推測(cè)異類葉升麻苷(D)可直接減少Aβ的生成(6)。綜合上述結(jié)果，異類葉升麻苷(D)或其醫(yī)藥學(xué)上可接受的鹽可作為抑制Aβ生成、積累或聚集的有效成份，預(yù)計(jì)異類葉升麻苷(D)可有效抑制Aβ導(dǎo)致神經(jīng)元的損傷或凋亡，以進(jìn)而保留、改善或恢復(fù)學(xué)習(xí)與記憶能力。此外，根據(jù)上述結(jié)果，異類葉升麻苷(D)或其醫(yī)藥學(xué)上可接受鹽應(yīng)可用于預(yù)防或治療Aβ相關(guān)疾病或狀況，以及用于抑制Aβ的生成、積累或聚集。所述Aβ相關(guān)疾病或狀況可包含但不限于阿滋海默氏癥、輕度認(rèn)知障礙、路易氏體失智癥、唐氏癥、荷蘭型類淀粉變性癥、關(guān)島帕金森氏癥-失智癥復(fù)合癥、大腦淀粉樣血管病、包涵體肌炎、額顳葉型失智癥、年齡相關(guān)性黃斑變性、皮克病以及其它。另外，所述Aβ雖以Aβ中最大量的Aβ1-40或具有高度纖維形成性的Aβ1-42為例，但也可包含其它胺基酸片段。在上述測(cè)試樣品中，異類葉升麻苷(D)具有降低Aβ生成、積累和聚集的最佳效用。下列實(shí)施例七至十一中，首先于250～300公克重的雄性SD大鼠(購(gòu)自樂(lè)斯科股份有限公司)的側(cè)腦室內(nèi)輸注Aβ1-42，以造成大鼠的神經(jīng)損壞，影響大鼠的記憶與學(xué)習(xí)操作能力，并可誘導(dǎo)大鼠腦中形成似老年斑塊的沉積，以作為擬似阿滋海默氏癥的動(dòng)物模式。經(jīng)Aβ誘導(dǎo)的阿滋海默氏癥的動(dòng)物模式可參考Nabeshima等人的文獻(xiàn)數(shù)據(jù)(NeuroscienceLetters(1994)170:63-66)(BritishJournalofPharmacology(1999)126:235-244)。將大鼠麻醉后，在大鼠的左腦室設(shè)置輸注管，進(jìn)行縫合后歸回飼養(yǎng)籠中照顧。圖7示出了動(dòng)物試驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)排程，在開(kāi)始輸注Aβ1-42后的第7天進(jìn)行探索能力(explorationbehavior)評(píng)估，第8至9天進(jìn)行被動(dòng)回避反應(yīng)(passiveavoidancelearning)評(píng)估，第10至13天進(jìn)行水迷宮(watermaze)評(píng)估，第14天則進(jìn)行空間性探索實(shí)驗(yàn)(probetest)。實(shí)驗(yàn)組別設(shè)計(jì)如表二所示，其中假手術(shù)組(Sham)以TFA溶液(64.9％sterileddH2O,35％acetonitrile,0.1％trifluoroaceticacid)進(jìn)行處理，而其它實(shí)驗(yàn)組則每小時(shí)以0.5μl溶解于TFA溶液的Aβ1-42處理，相當(dāng)于每天給予300pmol/12μl的Aβ1-42(Tocris1428；MW：4514.08)。整個(gè)試驗(yàn)期間，在進(jìn)行探索能力、被動(dòng)回避反應(yīng)以及水迷宮等測(cè)試的訓(xùn)練前經(jīng)口投予測(cè)試樣品給實(shí)驗(yàn)大鼠。表二顯示各個(gè)實(shí)驗(yàn)組別的條件，其中測(cè)試樣品D為表一中的異類葉升麻苷，而Aricept則為市售用以治療失智癥例如阿滋海默氏癥的藥物。所有測(cè)試樣品均以二次蒸餾水每日制備，并以胃管經(jīng)口灌胃方式給予。在實(shí)施例七至十一中，結(jié)果顯示為平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差，而Aβ1-42對(duì)照組和其它實(shí)驗(yàn)組間的統(tǒng)計(jì)差異標(biāo)示*表示P<0.05，**表示P<0.01，***表示P<0.001。最后犧牲所有實(shí)驗(yàn)大鼠，取其腦部進(jìn)行切片和染色，并進(jìn)行神經(jīng)傳遞物質(zhì)的測(cè)定。表二：動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)實(shí)施例七：探索能力的設(shè)備與測(cè)定探索能力測(cè)定裝置系由一長(zhǎng)、寬、高均40cm及一個(gè)不銹鋼底板所組成，底板上有16個(gè)直徑3cm的洞，距兩側(cè)7cm，各洞的間距為4cm。每只大鼠的測(cè)定時(shí)間為10分鐘，測(cè)試大鼠穿洞的次數(shù)。圖8示出了根據(jù)表二所示的動(dòng)物探索行為(explorationbehavior)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。如圖8所示，Aβ1-42經(jīng)腦室輸注予實(shí)驗(yàn)大鼠后，會(huì)造成實(shí)驗(yàn)大鼠的探索能力低下，而測(cè)試樣品D(異類葉升麻苷)和Aricept均可有效增進(jìn)實(shí)驗(yàn)大鼠的探索能力，且測(cè)試樣品D(異類葉升麻苷)在5mg/kg的劑量下優(yōu)于Aricept0.75mg/kg的功效。實(shí)施例八：被動(dòng)回避反應(yīng)實(shí)驗(yàn)被動(dòng)回避裝置由一明室、一暗室以及一介于兩室間的閘門所構(gòu)成。將大鼠置入明室，同時(shí)開(kāi)啟閘門，以大鼠在90秒內(nèi)進(jìn)入暗室者，供做本實(shí)驗(yàn)。訓(xùn)練期：將篩選過(guò)的大鼠置入明室，同時(shí)開(kāi)啟閘門，待大鼠進(jìn)入暗室后，關(guān)閉閘門，同時(shí)將底板通以電流刺激5秒，之后自暗室取出大鼠，歸回飼養(yǎng)籠。于訓(xùn)練后24小時(shí)，再將大鼠置入明室，同時(shí)開(kāi)啟閘門，記錄大鼠在明室之滯留時(shí)間(step-throughlatency，STL)。圖9示出了根據(jù)表二所示動(dòng)物進(jìn)行被動(dòng)回避反應(yīng)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。參考圖9，實(shí)驗(yàn)大鼠經(jīng)腦室輸注給予Aβ1-42后，會(huì)顯著造成實(shí)驗(yàn)大鼠的被動(dòng)回避學(xué)習(xí)反應(yīng)的障礙，而經(jīng)測(cè)試樣品D(異類葉升麻苷)和Aricept的治療均可改善實(shí)驗(yàn)大鼠因腦室輸注Aβ1-42導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)大鼠被動(dòng)回避的學(xué)習(xí)障礙現(xiàn)象。如圖9所示，測(cè)試樣品D(異類葉升麻苷)于2.5mg/kg的劑量下與Aricept0.75mg/kg的效果相當(dāng)，而測(cè)試樣品D(異類葉升麻苷)于5mg/kg的劑量下則優(yōu)于Aricept0.75mg/kg的功效。實(shí)施例九：水迷宮實(shí)驗(yàn)本實(shí)驗(yàn)將泳池分成四個(gè)象限，將隱藏平臺(tái)固定置于第四象限上，并且置于水面下方1公分處。每一大鼠每天均給予兩次訓(xùn)練，兩次訓(xùn)練間隔為4小時(shí)，每次訓(xùn)練均給予2分鐘以找尋隱藏平臺(tái)。第一次訓(xùn)練為空間表現(xiàn)(spatialperformance)試驗(yàn)，每只大鼠最多給予120秒的時(shí)間游泳找尋隱藏平臺(tái)，若大鼠于120秒內(nèi)成功找到隱藏平臺(tái)，則讓大鼠于平臺(tái)上休息30秒鐘；而若大鼠于時(shí)間終止前尚未找到隱藏平臺(tái)，則將大鼠的分?jǐn)?shù)計(jì)為120秒，并將其抓至隱藏平臺(tái)休息30秒鐘。此空間表現(xiàn)試驗(yàn)一共進(jìn)行4天。于第5天將隱藏平臺(tái)自水迷宮泳池取走，再將大鼠置于第一象限，并且給予60秒鐘的時(shí)間游泳，記錄大鼠在泳池內(nèi)原隱藏平臺(tái)的象限所花的時(shí)間，以進(jìn)行參考記憶試驗(yàn)(probetest)。圖10示出了根據(jù)表二所示動(dòng)物進(jìn)行空間表現(xiàn)試驗(yàn)結(jié)果，而圖11示出了根據(jù)表二所示動(dòng)物進(jìn)行參考記憶試驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，并與假手術(shù)組(Sham)、Aβ1-42對(duì)照組和正對(duì)照組Aricept的結(jié)果作比較。參考圖10及圖11所示，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示測(cè)試樣品D和藥物Aricept均可改善Aβ1-42誘發(fā)水迷宮空間表現(xiàn)和參考記憶缺失的現(xiàn)象，而測(cè)試樣品D5mg/kg則優(yōu)于對(duì)照組Aricept0.75mg/kg的效果。實(shí)施例十：大鼠腦部組織染色結(jié)果將進(jìn)行水迷宮實(shí)驗(yàn)后的大鼠斷頭，并且快速將腦自頭蓋骨內(nèi)移開(kāi)，進(jìn)行腦部海馬區(qū)Aβ1-42免疫組織染色。圖12A至12E示出了腦部組織染色結(jié)果。在圖12B中，在連續(xù)輸注Aβ1-42的大鼠腦中發(fā)現(xiàn)大量的斑塊，而在圖12C和圖12D中，經(jīng)測(cè)試樣品D(異類葉升麻苷)2.5mg/kg處理后的大鼠腦中僅發(fā)現(xiàn)極少量的斑塊，而經(jīng)測(cè)試樣品D(異類葉升麻苷)5mg/kg處理后的大鼠腦中則幾乎沒(méi)有斑塊產(chǎn)生。比較圖12C至圖12E，經(jīng)測(cè)試樣品D(異類葉升麻苷)處理后的大鼠腦中，其斑塊數(shù)量明顯小于經(jīng)藥物Aricept處理過(guò)后的結(jié)果。由此結(jié)果可知，測(cè)試樣品D(異類葉升麻苷)可有效抑制Aβ經(jīng)聚集而形成斑塊，或者可消除斑塊。實(shí)施例十一：大鼠大腦皮質(zhì)區(qū)及海馬區(qū)中的神經(jīng)傳導(dǎo)物質(zhì)含量將進(jìn)行水迷宮實(shí)驗(yàn)后的大鼠犧牲掉，并快速將腦自頭蓋骨內(nèi)移開(kāi)，按Glowinski&Iversen的方法，將大腦皮質(zhì)區(qū)及海馬區(qū)分別取出，分別稱重，并加入50mMNa-phosphatebuffer(pH7.8)進(jìn)行均質(zhì)，以供進(jìn)行神經(jīng)傳遞物質(zhì)濃度及酶含量的測(cè)定。表三和表四分別為根據(jù)表二所示實(shí)驗(yàn)大鼠于其腦部皮質(zhì)區(qū)和海馬區(qū)的神經(jīng)傳導(dǎo)物質(zhì)多巴胺(DA)與其代謝物DOPAC和HVA的含量檢測(cè)結(jié)果。參考表三和表四所示的結(jié)果，Aβ1-42造成實(shí)驗(yàn)大鼠的皮質(zhì)區(qū)和海馬區(qū)的DA含量降低，而測(cè)試樣品D和Aricept均可改善Aβ1-42所造成的實(shí)驗(yàn)大鼠皮質(zhì)區(qū)和海馬區(qū)的DA含量降低的現(xiàn)象。表三：根據(jù)表二所示實(shí)驗(yàn)大鼠于其腦部皮質(zhì)區(qū)的神經(jīng)傳導(dǎo)物質(zhì)多巴胺(DA)與其代謝物DOPAC和HVA的含量檢測(cè)結(jié)果表四：根據(jù)表二所示實(shí)驗(yàn)大鼠于其腦部海馬區(qū)的神經(jīng)傳導(dǎo)物質(zhì)多巴胺(DA)與其代謝物DOPAC和HVA的含量檢測(cè)結(jié)果圖13A為根據(jù)表二所示實(shí)驗(yàn)大鼠于其腦部皮質(zhì)區(qū)和海馬區(qū)的神經(jīng)傳導(dǎo)物質(zhì)乙酰膽堿(Acetylcholine)的含量檢測(cè)結(jié)果，而圖13B則為根據(jù)表二所示實(shí)驗(yàn)大鼠于其腦部皮質(zhì)區(qū)和海馬區(qū)的膽堿(Choline)含量檢測(cè)結(jié)果。參考圖13A和圖13B所示結(jié)果，Aβ1-42造成實(shí)驗(yàn)大鼠之皮質(zhì)區(qū)和海馬區(qū)的乙酰膽堿含量降低，而測(cè)試樣品D和Aricept均可改善Aβ1-42所造成的實(shí)驗(yàn)大鼠皮質(zhì)區(qū)和海馬區(qū)的乙酰膽堿含量降低的現(xiàn)象，且其中以測(cè)試樣品D(異類葉升麻苷)5mg/kg的結(jié)果最佳。圖14A和圖14B分別示出了根據(jù)表二所示實(shí)驗(yàn)大鼠于其腦部皮質(zhì)區(qū)和海馬區(qū)所測(cè)得的乙酰膽堿酯酶(acetylcholinesterase)活性結(jié)果。參考圖14A和圖14B所示結(jié)果，Aβ1-42造成實(shí)驗(yàn)大鼠皮質(zhì)區(qū)和海馬區(qū)的乙酰膽堿酯酶活性增加，而測(cè)試樣品D和Aricept均可改善Aβ1-42所造成的實(shí)驗(yàn)大鼠皮質(zhì)區(qū)和海馬區(qū)的乙酰膽堿酯酶活性增加的現(xiàn)象。由于Aβ的聚集體會(huì)損傷細(xì)胞，進(jìn)而引發(fā)各種疾病或狀況。根據(jù)實(shí)施例二至六的細(xì)胞試驗(yàn)結(jié)果，異類葉升麻苷可有效抑制Aβ的生成、積累或聚集，進(jìn)而避免Aβ形成聚集體，其可用于預(yù)防或治療阿滋海默氏癥以及其它Aβ相關(guān)疾病或狀況。根據(jù)實(shí)施例七至九的動(dòng)物試驗(yàn)結(jié)果，異類葉升麻苷具有顯著改善Aβ所致的記憶或?qū)W習(xí)能力衰退的效果。而根據(jù)實(shí)施例十所示結(jié)果，異類葉升麻苷可有效抑制Aβ經(jīng)聚集而形成斑塊，或者消除斑塊。此外，根據(jù)實(shí)施例十一，異類葉升麻苷可有效改善神經(jīng)傳導(dǎo)物質(zhì)因Aβ而減少的現(xiàn)象，故可具有改善記憶或?qū)W習(xí)能力衰退的效果。根據(jù)上述細(xì)胞和動(dòng)物試驗(yàn)結(jié)果，如將異類葉升麻苷或其醫(yī)藥學(xué)上可接受的鹽以某種有效治療量，如相當(dāng)于約0.2毫克/公斤至4毫克/公斤(即對(duì)60公斤成人的建議劑量約為12毫克至240毫克)的異類葉升麻苷的每日劑量投予至某一人類個(gè)體，其應(yīng)可作為預(yù)防或治療阿滋海默氏癥以及其它Aβ相關(guān)疾病或狀況的方法。雖然本發(fā)明已以數(shù)個(gè)較佳實(shí)施例揭露如上，但其并非用以限定本發(fā)明，本領(lǐng)域技術(shù)人員在未脫離本發(fā)明所揭示的精神下所進(jìn)行的等效替換或修飾，均應(yīng)包含在本發(fā)明權(quán)利要求的范圍內(nèi)。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3 當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3