本發(fā)明涉及心血管疾病的治療性干預(yù)領(lǐng)域。更具體涉及作為促炎肽的生長分化因子15。進一步涉及serelaxin，其是近期顯示有效治療心力衰竭的激素。

發(fā)明背景

心力衰竭是心臟無法提供足夠血滿足身體所需的疾病。這是65歲或以上人住院的主要原因，預(yù)期患病率會隨著人口老齡化及心肌梗塞后的存活率提高而上升。由于心力衰竭征兆和癥狀迅速出現(xiàn)或變化，急性心力衰竭與高的住院風(fēng)險和出院后死亡率相關(guān)。

肺動脈高壓患者呈現(xiàn)肺動脈壓持續(xù)提高以及較低的平均毛細血管楔壓和左心室舒張末期壓。肺動脈高壓可以是特發(fā)性(原發(fā)性)或能在其他失調(diào)背景下發(fā)展。主要血管變化是血管收縮、血栓形成和平滑肌及內(nèi)皮細胞增殖。血管舒張與血管收縮不平衡是肺內(nèi)皮細胞功能障礙或損傷的結(jié)果。因此，肺發(fā)展出內(nèi)膜纖維化、中層厚度增加、肺小動脈阻塞和叢狀病變。肺動脈高壓通常是病理狀態(tài)的末期表現(xiàn)，包括心力衰竭、膠原血管病、門脈高壓和HIV。

生長分化因子15(GDF-15)是TGF-β超家族成員。TGF-β家族成員對細胞運動和粘附、細胞周期和炎癥產(chǎn)生多重效應(yīng)。GDF-15是應(yīng)激反應(yīng)性細胞因子，已知對調(diào)節(jié)受損組織和疾病中的炎癥和凋亡通路起作用，以及具有一般抗炎和免疫抑制特性。其通常不表達于大部分組織，除了由病理過程誘導(dǎo)時。GDF-15在心臟、肝、腎臟和肺急性損傷后上調(diào)，其基線的上升已顯示與慢性心力衰竭的較差預(yù)后相關(guān)，而其隨著時間在心力衰竭患者中的增加顯示與超聲心動參數(shù)惡化和不良結(jié)果相關(guān)(Wang等.,Biomarkers 15:671(2010))。近期，一些初步研究表明GDF-15升高對于長期死亡率的預(yù)測性不小于其它生物標志物如NTproBNP、hsCRP、乳糖凝集素3或hsTnT(Lok等.,Lancet 381:29-39(2013))。然而，迄今為止，沒有研究曾評估過急性心力衰竭(AHF)患者中的GDF-15。

盡管提示GDF-15作為心力衰竭風(fēng)險的標志物，其對心血管疾病的作用依然未知。許多藥劑誘導(dǎo)通過多個通路的GDF-15表達。現(xiàn)有數(shù)據(jù)無法確定GDF-15在心血管疾病診斷、預(yù)后或治療中的作用。

盡管努力確定當(dāng)前療法是否能降低心血管疾病中的GDF-15上升風(fēng)險，調(diào)節(jié)GDF水平的因子仍然不明。關(guān)于當(dāng)前療法增加、減少GDF-1和對其不產(chǎn)生影響的發(fā)現(xiàn)均已報道。例如，PLATO試驗發(fā)現(xiàn)治療非ST段抬高型急性冠脈綜合征患者可降低其GDF-15水平，無論治療是侵入性或非侵入性且無論其是給予氯吡格雷或替格瑞洛(Wallentin等.,Circulation 129:293(2014))。植入心力衰竭末期患者的左心室輔助裝置也降低其GDF-15水平，所述裝置用于提供左心室容積和壓力降低(Lok等,Eur J Heart Failure 14:1249-1256(2012))。同樣，優(yōu)化β-受體阻滯劑治療可減少慢性收縮性心力衰竭患者的GDF-15(Apostolovic等.,J Heart Failure 12:增刊1,S200(2013))。

相反，觀察到優(yōu)化β-受體阻滯劑治療增加慢性舒張性心力衰竭患者的GDF-15且對慢性收縮性心力衰竭患者沒有效果(Eur J Heart Failure 11:增刊1,S45(2012))。纈沙坦治療癥狀性心力衰竭患者對GDF-15無效，但觀察到減少心力衰竭生物標志物B型利鈉肽(Anand等.,Circulation 122:1387-1395(2010))。類似地，盡管在動脈粥樣硬化斑塊巨噬細胞和梗塞心肌中檢測到GDF-15，他汀類藥物不影響GDF-15水平(Bonaca等.,Arterioscl Thromb Vasc Biol 31:203-210(2011))。

近期檢測替唑生坦、左西孟旦、托伐普坦和rolofylline的臨床試驗無法證明治療急性心力衰竭的安全性和/或功效。甚至已經(jīng)批準的藥物如米力農(nóng)、奈西立肽和左西孟旦有引起持續(xù)的安全顧慮。目前用于治療急性心力衰竭的藥劑在數(shù)十年中沒有大幅增加或改善。此外，沒有一種已批準或開發(fā)中的藥物與GDF-15水平相關(guān)。

Serelaxin是重組型人serelaxin-2(HR-2)，這是天然出現(xiàn)的肽激素，其在孕期增加，調(diào)節(jié)產(chǎn)婦生理心血管和腎臟適應(yīng)并且對器官損傷有潛在保護作用。Serelaxin結(jié)合腎和系統(tǒng)性脈管系統(tǒng)中以及腎上皮細胞中的RXFP1受體，介導(dǎo)急性心力衰竭中的多種有益效果，包括動脈順應(yīng)性、心輸出量和腎血流量增加。在近期完成的3期試驗中，serelaxin快速緩解呼吸困難并降低急性心力衰竭患者6個月的死亡率(Teerlink等.,Lancet 381:29-39(2013))。

發(fā)明者意外發(fā)現(xiàn)應(yīng)用serelaxin能用于降低心血管疾病患者的GDF-15水平，尤其用于降低急性心力衰竭患者的GDF-15水平。發(fā)明者也發(fā)現(xiàn)評價肺充血患者中肺負荷的方法。此外，發(fā)明者發(fā)現(xiàn)GDF-15提供評價肺血流動力學(xué)的生物標志物且提供關(guān)于心力衰竭診斷、預(yù)后和治療的信息。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本公開提供評價肺充血患者中肺負荷的方法，提供評價肺血流動力學(xué)的生物標志物且提供關(guān)于心力衰竭診斷、預(yù)后和治療的信息。提供通過serelaxin治療來降低心血管疾病患者GDF-15水平的方法，serelaxin是降低GDF-15水平的第一個藥物療法。

在一個實施方式中，本發(fā)明提供用于患者選擇的方法，包括臨床試驗患者。可提供納入或排除標準?？砂ǜ患赡茼憫?yīng)治療的試驗或患者群的方法。相反，可提供不太可能響應(yīng)治療的排除標準。

在另一個實施方式中，本發(fā)明提供評價疾病狀態(tài)或預(yù)后的方法。在另一個實施方式中，提供評價藥理作用方式機制、治療效果的機制或者毒性或不良反應(yīng)機制的的方法。

在另一個實施方式中，本發(fā)明提供劑量優(yōu)化方法。其可能有助于測定有效劑量范圍，在動物模型中沒有觀察到作用水平或動物模型中沒有觀察到不良影響水平。在另一個實施方式中，本發(fā)明提供通過指示或預(yù)測藥物功效使功效最大化的方法。

在一個實施方式中，本發(fā)明提供如下鑒定需要治療的肺充血患者的方法：提供來自患者的生物測試樣品，檢測樣品中的GDF-15水平，與來自健康對照對象的生物測試樣品作比較，其中GDF-15水平增加指示肺負荷增加。在一個相關(guān)實施方式中，本發(fā)明提供如下鑒定需要治療的肺充血患者的方法：分析來自患者的生物測試樣品的GDF-15，與來自健康對照對象的生物測試樣品作比較，其中GDF-15水平增加指示肺負荷增加。

在一個實施方式中，本發(fā)明提供如下鑒定需要治療的肺充血患者的方法：提供來自患者的生物測試樣品，檢測樣品中的GDF-15水平，與較早獲取的患者生物測試樣品作比較，其中GDF-15下降速度指示肺負荷減少。在一個相關(guān)實施方式中，本發(fā)明提供如下鑒定需要治療的肺充血患者的方法：分析來自患者的生物測試樣品的GDF-15，與來自健康對照對象的生物測試樣品作比較，其中GDF-15下降速度指示肺負荷減少。

在另一個實施方式中，本發(fā)明提供如下確定心力衰竭患者死亡率預(yù)測的方法：提供來自患者的生物測試樣品，檢測樣品中的GDF-15水平，與serelaxin治療后的患者生物測試樣品作比較，其中GDF-15下降速度指示存活可能性。在一個相關(guān)實施方式中，本發(fā)明提供如下確定心力衰竭患者死亡率預(yù)測的方法：分析來自患者的生物測試樣品的GDF-15，檢測樣品中的水平，與serelaxin治療后的患者生物測試樣品作比較，其中GDF-15下降速度指示存活可能性。

在另一個實施方式中，本發(fā)明提供選擇性降低先前測定GDF-15上升的患者肺負荷的方法，包括在GDF-15升高基礎(chǔ)上向患者選擇性給予治療量的serelaxin。在一個相關(guān)實施方式中，本發(fā)明提供serelaxin用于降低先前測定GDF-15上升的患者肺負荷，包括在GDF-15升高基礎(chǔ)上向患者選擇性給予治療量的serelaxin。

在另一個實施方式中，本發(fā)明提供選擇性降低患者肺負荷的方法，包括測量患者生物測試樣品的GDF-15量，在GDF-15升高基礎(chǔ)上向患者給予治療量的serelaxin。在一個相關(guān)實施方式中，本發(fā)明提供serelaxin用于降低患者肺負荷，包括測量患者生物測試樣品的GDF-15量，在GDF-15升高基礎(chǔ)上向患者選擇性給予治療量的serelaxin。

附圖簡要說明

圖1顯示相較安慰劑，serelaxin對GDF-15水平幾何平均數(shù)的影響。

圖2A-B分別代表基線和20小時后，GDF-15與PAP之間的關(guān)聯(lián)。

圖3A-B分別代表基線和20小時后，GDF-15與PVR之間的關(guān)聯(lián)。

圖4A-B分別代表基線和20小時后，GDF-15與NTproBNP之間的關(guān)聯(lián)。

發(fā)明詳述

起初，任何提及適合試驗的生物樣品應(yīng)理解為本領(lǐng)域已知的任何樣品，包括但不限于血液、血漿、血清、血沉棕黃層、白血球、淋巴、痰、尿、糞便、滑液、滑膜細胞、腦脊液、眼淚、唾液、毛球部細胞、腮抹試和組織樣品。本領(lǐng)域技術(shù)人員意識到一些樣品在分級分離或純化過程后更易分析。

類似地，測定方法可以是本領(lǐng)域任何已知方法，包括但不限于任何類型的免疫測定，如電化學(xué)發(fā)光免疫分析、ELISA或蛋白質(zhì)印跡、HPLC、流式細胞術(shù)、Southern印跡、電泳和聚合酶鏈式反應(yīng)。

術(shù)語“測定”指鑒定、篩選、探測或測定行為，該行為可通過任何常規(guī)方法進行。例如，可分析樣品是否存在特定試劑或測定其量，采用免疫測定、成像、Northern印跡等，用于確定樣品中是否存在試劑或測定樣品中試劑量的目的。術(shù)語“測定”和“確定”考慮物質(zhì)變換，如通過使樣品接受物理試驗的方法，將生物樣品從一個狀態(tài)轉(zhuǎn)換到另一狀態(tài)。

此外，本文所用的術(shù)語“測定”和“確定”用于指測試和/或測量。短語“分析來自患者的生物測試樣品用于...”等用于指可直接或間接測試樣品是否存在給定試劑(如GDF-15、基因、SNP、蛋白等)或具體試劑量。應(yīng)理解一種試劑量指示一個概率，不同試劑量指示另一概率，試劑量可用于指導(dǎo)診斷、預(yù)后或治療決策。應(yīng)理解當(dāng)試劑存在指示一個概率而缺乏試劑指示另一概率時，是否存在試劑可用于指導(dǎo)診斷、預(yù)后或治療決策。

如本文所用，涉及患者的“選擇”、“選擇性”、“挑選”和“選定”用于指從較大患者組特定選擇具體患者，條件為該患者滿足預(yù)定的標準。類似地，“選擇性治療”指從較大患者組特定選擇患者，條件為該患者滿足預(yù)定的標準?！斑x擇性給予”指向特定選自較大患者組的患者給予藥物，條件為該選定患者滿足預(yù)定的標準?！斑x擇”、“選擇性治療”和“選擇性給予”指基于患者特定生物學(xué)向患者遞送個性化治療，而不是僅基于患者具體疾病遞送標準治療方案。選擇不是指偶然診斷、預(yù)后或治療患者，而是指基于一種或多種預(yù)定標準周密選擇向患者給予治療。

本文所用的術(shù)語“預(yù)測”表明本文所述方法提供信息，使醫(yī)療服務(wù)人員能測定患病個體得到更精確診斷或預(yù)后或更有利響應(yīng)治療的可能性。這不意味著以100％準確性預(yù)測響應(yīng)的能力。技術(shù)人員應(yīng)理解其指概率提高。

本文所用的“可能性”和“可能”提供關(guān)于事件發(fā)生可能性的描述。其可與“概率”互換使用?？赡苄灾复笥诓聹y但小于確定的概率。因此，如果一個理性人用常識、訓(xùn)練或經(jīng)歷，鑒于當(dāng)前情況得出事件是可信的結(jié)論，則該事件是可能的。在一些實施方式中，一旦確定可能性，患者可進行預(yù)后、診斷、治療，或者治療可改變。

本文所用的術(shù)語“藥學(xué)上可接受”指不干擾活性成分生物活性效力的無毒材料。

如本文所用，涉及化合物如serelaxin或serelaxin受體激動劑的術(shù)語“給予”用于指通過任何途徑向患者遞送化合物。

本文所用的“治療有效量”指在單一或多劑量給予患者(如人)后有效的serelaxin或serelaxin激動劑含量，用于治療、預(yù)防，防止發(fā)生、治愈、延遲、降低嚴重度、緩解至少一種疾病或復(fù)發(fā)疾病的癥狀，或延長患者生存超過沒有這類治療情況下所預(yù)期的。應(yīng)用于單獨給藥的個體活性成分(如serelaxin)時，該術(shù)語指單獨成分。應(yīng)用于組合時，該術(shù)語指產(chǎn)生治療效果的活性成分組合量，無論聯(lián)合、連續(xù)或同時給藥。

本文所用的術(shù)語“治療”和“處理”指預(yù)防性或防治性治療(視情況而定)以及治愈或疾病減緩治療，包括治療有感染疾病風(fēng)險或疑似已感染疾病的患者以及患病或者診斷患病或處于病癥狀態(tài)的患者，包括抑制臨床復(fù)發(fā)或加重。治療可給予患病或最終可能患病的患者，用于預(yù)防、治愈、其發(fā)生、降低嚴重度、或緩解一種或多種疾病或復(fù)發(fā)疾病的癥狀，或者用于延長患者生存超過沒有這類治療情況下所預(yù)期的。

本文所用的單數(shù)形式“一個”、“一種”和“所述”包括復(fù)數(shù)指示物，除非上下文另有明確說明。因此，例如提及“蛋白質(zhì)”包括2種或更多蛋白質(zhì)的混合物，提及“試劑”包括指一種或多種試劑和本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的其等價物，等等。

顯然，除了上述說明和實施例特定所述，本發(fā)明可以另外方式實施。根據(jù)上述教授內(nèi)容，多種對本發(fā)明的修改和變化是可能的，并因而在所附權(quán)利要求范圍內(nèi)。

應(yīng)理解上面的一般說明和以下詳細說明僅是示范性和解釋性，不對所要求的本發(fā)明構(gòu)成限制。此外，必須理解本發(fā)明不限于所述具體實施方式，其本身當(dāng)然也可變。另外，用于描述具體實施方式的術(shù)語不意在限制，因為本發(fā)明范圍僅由其權(quán)利要求限制。

除非另有定義，本文所用的全部技術(shù)和科學(xué)術(shù)語含意是本發(fā)明所屬領(lǐng)域普通技術(shù)人員通常所理解的。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員也應(yīng)理解與本文所述類似或等同的任何方法和材料也能用于實施或測試本發(fā)明。

此外，本說明書和權(quán)利要求所用的表示成分量、反應(yīng)條件、％純度、多肽長度等的所有數(shù)字都由術(shù)語“約”修飾，除非另有說明。因此，本文所列數(shù)值參數(shù)是近似值，可根據(jù)本發(fā)明所需性質(zhì)而變化。至少且不意在限制權(quán)利要求范圍等同原則的應(yīng)用，各數(shù)值參數(shù)應(yīng)至少根據(jù)所報告有效位的數(shù)字理解，用常規(guī)舍入技術(shù)。

分析技術(shù)、診斷方法和生成可傳遞形式信息的方法

所公開的方法用于治療、預(yù)防或緩解心力衰竭，尤其是急性心力衰竭，以及預(yù)測心臟病患者響應(yīng)serelaxin治療的可能性。這些方法尤其測定患者是否有GDF-15作為來自患者樣品的生物標志物。

來自患者的生物樣品可通過任何適用常規(guī)方式分析GDF-15的存在，所述方式根據(jù)獲取特定生物樣品的簡易性進行選擇。

數(shù)種生物樣品可用于鑒定GDF-15的存在，如血液、滑液、血沉棕黃層、血清、血漿、淋巴、糞便、尿、眼淚、唾液、腦脊液、腮抹試、痰或組織。所述生物樣品優(yōu)選包括取自經(jīng)歷心臟疾病事件后不久或經(jīng)歷心臟疾病事件相關(guān)癥狀后不久的患者的血液。

本發(fā)明的一個創(chuàng)造性發(fā)現(xiàn)包括確定GDF-15可用于預(yù)測特定個體的肺負荷，使醫(yī)學(xué)專業(yè)人員能積極治療潛在心臟疾病事件如急性心力衰竭。

通常，一旦確定AIR標志物或多態(tài)性的存在，可告知醫(yī)師或患者或其他研究人員結(jié)果。特別地，所述結(jié)果可以是能交流或傳送給其他研究人員或醫(yī)師或患者的可傳遞信息形式。這種形式可變并且可以是有形或無形的。個別測試的結(jié)果可體現(xiàn)在描述性陳述、圖、照片、表、圖像或任何其它視覺形式中。例如，涉及GDF-15水平的陳述用于指示測試結(jié)果。這些陳述和視覺形式能記錄于有形媒介如紙，計算機可讀介質(zhì)如軟盤、光盤等，或無形媒介如采用email或者因特網(wǎng)或內(nèi)聯(lián)網(wǎng)網(wǎng)址形式的電子媒介。另外，所述結(jié)果還能以聲音形式記錄并經(jīng)任何合適媒介傳遞，如模擬或數(shù)字線纜、光纖等，通過電話、傳真、無線移動電話、網(wǎng)絡(luò)電話等。所有這類形式(有形和無形)會構(gòu)成“可傳遞信息形式”。因此，試驗結(jié)果的信息和數(shù)據(jù)能在世界任何地方生成并傳遞到不同位置。

治療方法

所公開的方法允許臨床醫(yī)生提供治療患者肺負荷的個性化療法，即其允許確定是否用組合物如serelaxin選擇性治療患者。由此，臨床醫(yī)生能使益處最大化并盡可能減少潛在致命心臟疾病事件的風(fēng)險。應(yīng)理解serelaxin用于治療或緩解急性心力衰竭。

患者經(jīng)提供藥物活性serelaxin(如合成、重組、類似物、激動劑等)的皮下泵治療，量的范圍是每天約1-1000μg/kg對象體重。在一個實施方式中，serelaxin劑量是10、30、100和250μg/kg/天。這些劑量產(chǎn)生約1、3、10、30、75或100ng/ml的serelaxin血清濃度。在一個優(yōu)選實施方式中，藥學(xué)上有效serelaxin或其激動劑以約30μg/kg/天給予。在另一個優(yōu)選實施方式中，藥學(xué)上有效serelaxin或其激動劑以約10-約250μg/kg/天給予。在另一個實施方式中，serelaxin連續(xù)給藥以維持約0.5-約500ng/ml的serelaxin血清濃度，更優(yōu)選約0.5-約300ng/ml，最優(yōu)選約1-約10ng/ml。最優(yōu)選地，serelaxin連續(xù)給藥以維持10ng/ml或更高的serelaxin血清濃度。這些serelaxin濃度能緩解或減少過度稀釋尿生成和NDI相關(guān)的伴隨并發(fā)癥。在一個優(yōu)選實施方式中，所述serelaxin是serelaxin。

Serelaxin組合物和制劑

Serelaxin、serelaxin激動劑和/或serelaxin類似物配制成藥物用于本公開方法。能刺激與生物或藥物活性serelaxin(如合成serelaxin、重組serelaxin)或serelaxin激動劑(如serelaxin類似物或serelaxin樣調(diào)節(jié)劑)結(jié)合serelaxin受體相關(guān)的生物反應(yīng)的任何組合物或化合物可用作本公開的藥物?？茖W(xué)文獻很好描述了用于配制和給藥的技術(shù)一般細節(jié)(參見賓夕法尼亞州伊斯頓Maack出版公司(Maack Publishing Co)的《雷明頓藥物科學(xué)》(Remington's Pharmaceutical Sciences))。含有藥物活性serelaxin的藥物制劑能根據(jù)本領(lǐng)域已知制造藥物的任何方法制備。用于本公開方法的含有藥物活性serelaxin或serelaxin激動劑的制劑能以任何常規(guī)可接受方式配制用于給藥，包括但不限于靜脈內(nèi)、皮下、肌肉內(nèi)、舌下、鼻內(nèi)、腦內(nèi)、腦室內(nèi)、局部、口頭、眼內(nèi)和經(jīng)吸入。說明性示例如下所列。在一個優(yōu)選實施方式中，serelaxin靜脈內(nèi)或皮下給藥。

Serelaxin通過靜脈內(nèi)或皮下注射(如輸注、大丸劑、泵)遞送時，含有藥物活性serelaxin或含有藥物有效性serelaxin激動劑的制劑能采用無菌可注射制劑形式，如無菌可注射制水性或油性懸液。此懸液能根據(jù)已知技術(shù)配制，采用合適的分散或潤濕劑以及上面提及的混懸劑。無菌可注射制劑還可以是溶于無毒胃腸外可接受稀釋劑或溶劑的無菌可注射溶液或懸液。能采用的可接受載劑和溶劑是水和林格溶液、等滲氯化納。另外，無菌固定油能常規(guī)用作溶劑或懸浮介質(zhì)。出于此目的，可采用任何無刺激性固定油，包括合成的單或雙甘油酯。另外，脂肪酸如油酸同樣能用于制備注射劑。

本公開的水性懸液包含serelaxin，混合適于制造水性懸液的賦形劑。這類賦形劑包括混懸劑，如羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、藻酸鈉、聚乙烯吡咯烷酮、黃芪膠和阿拉伯膠，以及分散或潤濕劑如天然產(chǎn)生的磷脂(如卵磷脂)、烯化氧與脂肪酸的縮合產(chǎn)物(如聚氧乙烯硬脂酸酯)、環(huán)氧乙烷與長鏈脂肪醇的縮合產(chǎn)物(如十七乙烯氧基鯨蠟醇)、環(huán)氧乙烷與由脂肪酸和己糖醇衍生的偏酯的縮合產(chǎn)物(如聚氧乙烯山梨醇單油酸酯)或環(huán)氧乙烷與由脂肪酸和己糖醇酐衍生的偏酯的縮合產(chǎn)物(如聚氧乙烯脫水山梨醇酐單油酸酯)。所述水性懸液還能包含一種或多種防腐劑如對羥基苯甲酸乙酯或?qū)αu基苯甲酸正丙酯，一種或多種著色劑，一種或多種或多種調(diào)味劑和一種或多種甜味劑如蔗糖、阿司帕坦或糖精?？烧{(diào)整制劑的摩爾滲透壓濃度。

通過將serelaxin懸于植物油如花生油、橄欖油、芝麻油或椰子油或者礦物油如液體石蠟，能配制油混懸劑。油混懸劑可包含增稠劑如蜂蠟、固體石蠟或鯨蠟醇?？杉尤胩鹞秳┮蕴峁┛煽诘目诜苿?。這些制劑能通過加入抗氧化劑如抗壞血酸來保存。

本公開的分散性粉末和顆粒適合通過加入水來制備水性懸液，其能從serelaxin與分散、混懸和/或潤濕劑以及一種或多種防腐劑的混合物配制。合適的分散或潤濕劑和混懸劑如上所公開例示。額外賦形劑例如甜味劑、調(diào)味劑和著色劑也可存在。

本公開的藥物制劑還能采用水包油乳劑形式。油相可以是植物油如橄欖油或花生油，礦物油如液體石蠟，或其混合物。合適的乳化劑包括天然產(chǎn)生的樹膠如阿拉伯膠和黃芪膠，天然產(chǎn)生的磷脂如大豆卵磷脂，衍生自脂肪酸和己糖醇酐的酯或偏酯如山梨醇酐單油酸酯，這些偏酯與環(huán)氧乙烷的縮合產(chǎn)物如聚氧乙烯山梨醇酐單油酸酯。

Serelaxin制劑的給藥和劑量方案

本公開方法所用含有藥物活性serelaxin或藥學(xué)上有效serelaxin激動劑的制劑能以任何常規(guī)可接受方式給藥，包括但不限于靜脈內(nèi)、皮下、肌肉內(nèi)、舌下、鼻內(nèi)、腦內(nèi)、腦室內(nèi)、局部、口頭、眼內(nèi)和經(jīng)吸入。給藥會隨著藥物的藥代動力學(xué)和其它特性以及患者健康狀況而變化。一般準則如下所示。

目前工藝水平允許臨床醫(yī)生就各個體患者確定serelaxin的劑量方案。作為說明性示例，下面就serelaxin提供的準則能用作確定劑量方案的指南，即實施本公開方法時所給予制劑的劑量方案和劑量水平，所述制劑包含藥物活性serelaxin。作為一般準則，預(yù)期藥物活性H1、H2和/或H3人serelaxin(如合成、重組、類似物、激動劑等)的日劑量范圍通常為每天約1-1000μg/kg對象體重。在一個實施方式中，serelaxin劑量是10、30、100和250μg/kg/天。在另一個實施方式中，這些劑量產(chǎn)生約1、3、10、30、75或100ng/ml的serelaxin血清濃度。在一個優(yōu)選實施方式中，藥學(xué)上有效serelaxin或其激動劑以約30μg/kg/天給予。在另一個優(yōu)選實施方式中，藥學(xué)上有效serelaxin或其激動劑以約10-約250μg/kg/天給予。在另一個實施方式中，serelaxin連續(xù)給藥以維持約0.5-約500ng/ml的serelaxin血清濃度，更優(yōu)選約0.5-約300ng/ml，最優(yōu)選約1-約10ng/ml。最優(yōu)選地，serelaxin連續(xù)給藥以維持10ng/ml或更高的serelaxin血清濃度。因此，本公開方法包括產(chǎn)生這些serelaxin血清濃度的給藥。這些serelaxin血清濃度能緩解或減少與水腫相關(guān)的積液，包括但不限于腦水腫、眼部水腫、肺水腫、腹水、遺傳性血管水腫、外周性水腫和全身性水腫。此外，這些serelaxin濃度能緩解或減少NDI中的慢性稀釋尿排出。根據(jù)對象，serelaxin給藥維持特定時間段，或長達實現(xiàn)對象中穩(wěn)定所需。例如，serelaxin治療持續(xù)時間根據(jù)患者優(yōu)選保持在約4小時-約96小時的范圍內(nèi)，更優(yōu)選8小時-約72小時，以及按需的一個或多個可選重復(fù)治療。

單一或多次serelaxin制劑給藥可根據(jù)所需劑量和頻率以及患有水腫和/或NDI的患者所耐受程度來給予。所述制劑應(yīng)提供足夠量的serelaxin以有效緩解病癥。用于靜脈內(nèi)皮下給藥serelaxin的典型藥物制劑取決于特定療法。例如，serelaxin可通過單一療法(即沒有其它聯(lián)合用藥)或與另一藥物聯(lián)合療法來給予患者。在一個實施方式中，serelaxin作為單一療法每日給予患者。在另一個實施方式中，serelaxin作為與另一藥物的聯(lián)合療法每日給予患者。值得注意地，給予患者的serelaxin劑量和頻率可根據(jù)年齡、疾病程度、藥物耐受性和聯(lián)合用藥及病癥而變化。

本公開一個或多個實施方式的細節(jié)如上面所附描述所列。盡管與本文所述類似或等同的任何方法和材料能用于實施或測試本公開，現(xiàn)在描述優(yōu)選的方法和材料。本公開的其它特征、目的和優(yōu)勢通過描述和權(quán)利要求顯而易見。在本說明書和所附權(quán)利要求中，單數(shù)形式包括復(fù)數(shù)指示物，除非上下文另有明確說明。除非另有定義，本文所用的全部技術(shù)和科學(xué)術(shù)語具有與本公開所屬領(lǐng)域普通技術(shù)人員通常所理解相同的含義。本公開的所有數(shù)值范圍包含全部整數(shù)終點、其間的小數(shù)和分數(shù)，無論是否特別說明。本說明書的所有專利和出版物通過引用納入。呈現(xiàn)以下實施例以更充分闡述本公開的優(yōu)選實施方式。這些實施例不應(yīng)解釋為對所公開專利主題范圍的限制，如所附權(quán)利要求所定義。

實施例1：Serelaxin對急性心力衰竭患者中GDF-15水平的影響

在國際、雙盲、安慰劑對照試驗(Teerlink等.,Lancet 381:29-39(2013))中，胸片展示肺充血并由于急性心力衰竭住院的患者隨機分配接受48小時靜脈輸注安慰劑或30ug/kg/d serelaxin，所述試驗的完整內(nèi)容通過引用納入本文。從到達醫(yī)院到靜脈給藥serelaxin經(jīng)過的時間小于9小時。Serelaxin顯著改善主要呼吸困難療效終點，如視敏度量表曲線下面積(p＝0.007)所評估且患者報告總體健康改善。Serelaxin治療組的平均住院時間顯著減少0.9天(p＝0.04)且強化護理或冠心病監(jiān)護病房中的時間減少0.4天(p＝0.03)。48小時輸注serelaxin在180天減少心血管死亡(p＝0.28)。先前急性心力衰竭患者的干預(yù)結(jié)果試驗沒有顯示對出院后死亡率的有益效果。

用于生物標志物分析的血液樣品在血清分離管中于開始serelaxin或安慰劑前(基線)和第2、5、14和60天收集，。血清樣品收集后30-60分鐘內(nèi)觀察到凝塊后離心，–20℃冷凍多至4周，然后用干冰運送到中心實驗室，-80℃保存直至進行分析。測量樣品的GDF-15，用羅氏診斷有限公司(Roche Diagnostics GmbH，德國曼海姆)提供的試商用電化學(xué)發(fā)光免疫分析。來自同一患者的所有樣品由不了解患者治療和研究數(shù)據(jù)的人員在經(jīng)認證中心實驗室同時分析。GDF-15的報告范圍是400-20,000ng/L。

評價到第5天的患者報告的呼吸困難變化，如視覺模擬量表評分中到第5天的相比基線變化下面積，其中在死亡或心力衰竭惡化(呼吸困難VAS AUC)后分配最差的可能得分。到第60天再入院的原因和到第180天死亡病因由盲法終點委員會集中確定。

就基線到第2和14天的GDF-15水平變化開發(fā)多元線性回歸模型，采用基線患者臨床特征和常規(guī)實驗測量；安慰劑組中使用后向消元，p<0.10作為保留于模型的標準。缺失預(yù)測因子用治療組特異連續(xù)變量中值和分類變量模式估算。GDF-15值進行對數(shù)轉(zhuǎn)換。關(guān)聯(lián)線性用限制性立方樣條評價，且如果發(fā)現(xiàn)顯著非線性(p<0.10)，根據(jù)單變量赤池信息量準則選擇二分、三分、線性樣條或二次或三次多項式轉(zhuǎn)換。呈現(xiàn)來自5折交叉驗證的校正R²值。然后，在所有患者中估計serelaxin對生物標志物變化的影響，用預(yù)測安慰劑組中這些變化的協(xié)變量的多變量校正。

表1.Serelaxin降低急性心力衰竭患者中的GDF-15

*相比基線的P>0.05采用幾何平均值95％置信區(qū)間

在第2和5天，標準護理以外用serelaxin治療的急性心力衰竭患者中的GDF-15水平顯著低于標準護理以外用安慰劑治療的那些患者。第14天，GDF-15水平接近統(tǒng)計顯著性。

影響從基線到serelaxin治療第2天的GDF-15水平變化的因素如表2所示。GDF-15增加與老年、外周血管疾病、主動脈狹窄和較低NT-pro-BNP在基線相關(guān)。

表2.影響serelaxin治療第2天的GDF-15水平的因素

第2天和第14天的GDF-15變化與急性心力衰竭患者中的不良結(jié)果相關(guān)。由于在第60天的心力衰竭或腎衰竭的再次入院、心血管死亡和第180天的心血管死亡與serelaxin治療后第2天和第14天觀察到的GDF-15水平變化強烈和獨立相關(guān)，如表3所示。從基線到第2天和第14天的GDF-15增加是這些負面結(jié)果非常重要的預(yù)測因子。

表3.GDF-15與急性心力衰竭患者中負面結(jié)果的關(guān)聯(lián)

數(shù)據(jù)的多變量分析證明GDF-15基線水平與由于心力衰竭或腎衰竭再入院率增加無關(guān)；也與到第60天或第180天的心血管死亡無關(guān)。從基線到第2天和第14天的GDF-15變化是這些結(jié)果非常重要的預(yù)測因子。Serelaxin治療與第14天的GDF-15更快速減少和第60天更低GDF-15趨勢相關(guān)。180天心血管死亡率的多變量分析結(jié)合serelaxin治療和到第2天的GDF-15變化，如表4所示，證明GSF-15減少是先前觀察到serelaxin治療降低急性心力衰竭患者死亡率的部分原因。在180天CV死亡率多變量模型中納入到第14天的GDF-15變化使預(yù)估的serelaxin危險比降至0.753，而GDF-15變化的影響仍非常顯著，表明GDF-15變化可調(diào)節(jié)serelaxin治療與180天死亡率減少的關(guān)聯(lián)。

表4. 180天心血管死亡率的多變量分析

實施例2：Serelaxin對急性心力衰竭患者的GDF-15和肺血流動力學(xué)的影響

在單獨研究中，評估serelaxin對急性心力衰竭住院患者的肺血流動力學(xué)影響(如肺負荷)(Ponikowski等.,Eur Heart J 35:431-441(2014))?；颊唠S機1:1分入serelaxin或安慰劑組，開始穩(wěn)定，隨后用30ug/kg/d劑量的serelaxin輸注20小時。報告時肺充血是所需納入標準。從入院到開始靜脈輸注serelaxin用去的時間小于29小時。Serelaxin迅速產(chǎn)生血流動力學(xué)效應(yīng)；在輸注的前30分鐘內(nèi)檢測到變化并持續(xù)整個治療期。Serelaxin在治療的前8小時(p＝0.0001)以及8-20小時期間(p＝0.03)減少自基線的時間加權(quán)平均肺毛細血管楔壓。Serelaxin顯著降低肺動脈收縮壓和舒張壓(4小時時p＝0001)，全身血管阻力和肺血管阻力同步減少。

在血清分離管收集的血液樣品中測量GDF-15。血清樣品在2小時內(nèi)離心且血漿保存于–20℃或更低，然后–80℃保存直至進行分析。通過羅氏診斷有限公司(德國曼海姆)提供的試商用電化學(xué)發(fā)光免疫分析來測量GDF-15。來自同一患者的所有樣品由不了解患者治療和研究數(shù)據(jù)的人員在經(jīng)認證中心實驗室同時分析。

測量肺毛細血管楔壓(PCWP)、平均肺動脈壓(PAP)和肺血管阻力(PVR)以及NTproBNP和GDF-15。分析GDF-15和NTproBNP與這些血流動力學(xué)指標的關(guān)聯(lián)。

如上面的實施例1，相比安慰劑，serelaxin顯著降低GDF-15水平(基線中值分別為3262和3192ng/ml，和如圖1所示)。如圖1所示，幾何平均值相比基線減少16％，而安慰劑顯示相比基線增加3％。這引起有利于serelaxin(p＝0.0204)的18％治療差異。另外，在20小時輸注期中，檢測肺毛細血管楔壓(PCWP)、平均肺動脈壓(PAP)和肺血管阻力(PVR)的改善以及NTproBNP和GDF-15。分析GDF-15和NTproBNP與這些血流動力學(xué)指標的關(guān)聯(lián)。

在20小時輸注期中，相較安慰劑，PCWP、PAP和PVR的改善更傾向serelaxin(所有p值<0.005)。serelaxin還顯著減少NTproBNP(p＝0.037)。

基線和20小時的GDF-15水平與PAP(圖2A-B,p<0.025)、PVR(圖3A-B,p<0.001)和NTproBNP(圖4A-B,p<0.001)顯著相關(guān)。GDF-15水平與20小時的PCWP顯著相關(guān)，而非基線(p<0.02；p＝0.7)。就PAP、PVR或PCWP而言，與基線和20小時NTproBNP水平的關(guān)聯(lián)在統(tǒng)計上不顯著。

此實施例顯示serelaxin不僅降低GDF-15水平，而且對肺血流動力學(xué)產(chǎn)生有利影響并顯著減少NTproBNP和GDF-15?；€和20小時的GDF-15水平與NTproBNP和數(shù)個肺血流動力學(xué)指標顯著相關(guān)。相反，NTproBNP與基線或20小時的肺指標無顯著關(guān)聯(lián)。因此，基線GDF-15以及GDF-15隨著時間減少比NTproBNP對預(yù)測肺負荷更有用。

總體而言，發(fā)明者意外發(fā)現(xiàn)基線并且之后持續(xù)多至14天的GDF-15水平能用于預(yù)測患者肺負荷。這進而允許預(yù)測潛在心臟事件，如所熟知的肺負荷增加可能導(dǎo)致心臟事件。因此，保健服務(wù)提供者可采取相應(yīng)措施并給予降低GDF-15的組合物如serelaxin。

實施例3：統(tǒng)計方法

就基線到第2和14天的生物標志物水平變化開發(fā)多元線性回歸模型，采用基線患者臨床特征和常規(guī)實驗測量；安慰劑組中使用后向消元，p<0.10作為保留于模型的標準。缺失預(yù)測因子用治療組特異連續(xù)變量中值和分類變量模式的估算。GDF-15值進行對數(shù)轉(zhuǎn)換。為實現(xiàn)用和不用生物標志物時模型的一致性和可比性，缺失后續(xù)生物標志物水平用線性插值或末次觀察結(jié)轉(zhuǎn)法估算(如果沒有跟蹤測量可用)。關(guān)聯(lián)線性用限制性立方樣條評價，且如果發(fā)現(xiàn)顯著非線性(p<0.10)，根據(jù)單變量赤池信息量準則選擇二分、三分、線性樣條或二次或三次多項式轉(zhuǎn)換。然后，估計serelaxin對GDF-15變化的影響，用預(yù)測安慰劑組中這些變化的協(xié)變量的多變量校正。結(jié)果列于下表5和6。

基線生物標志物值和變化與臨床結(jié)果的關(guān)聯(lián)用線性回歸和Cox回歸模型預(yù)估，所述線性回歸用于呼吸困難VAS AUC，Cox回歸模型用于60天心力衰竭或腎衰竭或心血管死亡引起的再入院和180天心血管死亡率。GDF-15值與結(jié)果關(guān)聯(lián)的線性如上評估。從重復(fù)測量方差分析模型預(yù)估生物標志物隨著時間的平均變化，不估算缺失值。

表5.對180天CV死亡的Serelaxin的剩余效應(yīng)和GDF-15從基線到第2天變化的效應(yīng)

當(dāng)加入serelaxin影響甚至就基線協(xié)變量調(diào)整后(P＝0.058)，GDF-15到第2天的變化仍是180天CV死亡率(P＝0.027)的重要預(yù)測因子。未就其它基線協(xié)變量調(diào)整，serelaxin治療與180天CV死亡率以0.619的危險比(95％CI 0.403-0.950)相關(guān)；就到第2天的GDF-15變化的調(diào)整減少觀察到的serelaxin影響(HR 0.832,95％CI 0.664-1.043)。多變量調(diào)整基線協(xié)變量后觀察到類似下降(分別為HR 0.665,95％CI 0.430-1.028和0.763,95％CI 0.481-1.208)。

就到第14天的GDF-15變化觀察到類似結(jié)果，如下表6所列。這些結(jié)果表明GDF-15變化調(diào)節(jié)serelaxin治療與180天死亡率減少的關(guān)聯(lián)。

表6.對180天CV死亡的Serelaxin的剩余效應(yīng)和GDF-15從基線到第14天變化的效應(yīng)

[1]排除死亡或者在第14天或之前檢查(censored)的患者(N＝1037)

如上所示，serelaxin與GDF-15更大減少在第2和5天統(tǒng)計上顯著的相關(guān)，在第14天有顯著差異的趨勢(p＝0.0534)，盡管這在就基線特征調(diào)整后減少。Serelaxin對GDF-15的影響看來具有特殊重要性。盡管報告GDF-15水平在末期HF的LVAD植入和心臟卸荷后減少，serelaxin似乎是降低心血管疾病患者GDF-15的第一個藥物療法。血管緊張素受體阻滯劑療法未減少CHF中的GDF-15且強化他汀療法在其它臨床試驗中對GDF-15沒有效果。