一種治療神經(jīng)衰弱和預(yù)防老年癡呆癥的藥物組合物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開一種治療神經(jīng)衰弱和預(yù)防老年癡呆癥的藥物組合物，由下列質(zhì)量百分比的組分組成：蒜頭果神經(jīng)酸1～10%、豆腐果苷1～10%、薏苡仁內(nèi)酯1～10%、余量為輔料。本發(fā)明提供的藥物有助于老年人的睡眠時間的延長，薏苡仁內(nèi)酯能防癌抑制多種癌細(xì)胞增殖，三者合用能有效防止和控制老年癡呆癥的發(fā)生和治愈，給老齡化越來越嚴(yán)重的全世界帶來一種純植物萃取的安全有效的植物組合物。本發(fā)明采用的組方配伍合理，原料均來自天然植物，同時本發(fā)明提供的中藥組合物的制備方法，可操作性強(qiáng)，尤其是根據(jù)各味中藥有效成分化學(xué)性質(zhì)涉及提取工藝，所得提取物有效成分含量高，具有藥效高、臨床用量少等優(yōu)點(diǎn)，且工藝穩(wěn)定，適合工業(yè)大生產(chǎn)。
【專利說明】一種治療神經(jīng)衰弱和預(yù)防老年癡呆癥的藥物組合物

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥【技術(shù)領(lǐng)域】，涉及一種治療神經(jīng)衰弱和預(yù)防老年癡呆癥的藥物組合物。

【背景技術(shù)】
[0002]隨著我國經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，以及人口政策的實(shí)施，我國人口的年齡結(jié)構(gòu)發(fā)生了很大的轉(zhuǎn)變。中國的預(yù)期壽命從1990年的68.4歲上升到2008年的73.8歲，老年人口占總?cè)丝诘谋戎卦絹碓酱?，根?jù)經(jīng)濟(jì)合作與發(fā)展組織提供的數(shù)據(jù)，與中國的總?cè)丝谙鄬Χ?，估計超過65歲的人口比率將從2005年的7.8%上升到2030年的16.3%。
[0003]研究人員發(fā)現(xiàn)，鯊魚的腦組織受到重創(chuàng)后，能自動恢復(fù)功能，因?yàn)轷忯~的腦組織中含有一種叫“神經(jīng)酸”的物質(zhì)，能修復(fù)大腦神經(jīng)信息傳遞通道——神經(jīng)纖維，并促使神經(jīng)細(xì)胞再生。如今，神經(jīng)酸(NA)已經(jīng)被各國的科學(xué)家一直公認(rèn)為是大腦神經(jīng)纖維和神經(jīng)細(xì)胞的核心天然有效成分。神經(jīng)酸還能有效的治療老年癡呆、腦癱、腦萎縮、記憶力衰退、失眠健忘等腦部疾病。而人類和鯊魚不同，人類自身無法合成神經(jīng)酸，隨著年齡增長或腦部受到創(chuàng)傷，都有可能造成神經(jīng)酸的衰減，導(dǎo)致疾病。
[0004]從鯊魚中提取神經(jīng)酸必須殺死鯊魚，破壞海洋生態(tài)平衡，隨著國際組織禁止捕殺鯊魚的呼聲越來越高，歐美等國家都十分重視從植物中挖掘神經(jīng)酸資源，經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，含有2%以上神經(jīng)酸的植物有十余種，其中以中國特有單種植物——蒜頭果中神經(jīng)酸含量最高，并且高達(dá)62.6%，其開發(fā)價值和經(jīng)濟(jì)價值巨大，可稱為“植物中的黃金果”。
[0005]蒜頭果(Malaniaoleifera Chun et Lee)是鐵青樹科似/acaceae),蒜頭果屬(Malania)植物。又稱山桐果，馬蘭后。屬于國家二級保護(hù)植物。在云南的東南部如富寧、廣南、文山均有分布。蒜頭果的種仁富含豐富的油脂，是合成麝香酮的理想原料。蒜頭果種子含油量高達(dá)50?60%，經(jīng)皂化后的脂肪酸含有40?50%的二十四碳-15-烯酸，即神經(jīng)酸，它有助于恢復(fù)神經(jīng)末梢活性，促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞生長和發(fā)育，有抗老年癡呆的作用。
[0006]據(jù)統(tǒng)計，現(xiàn)在世界上有2400萬癡呆患者。在我國，老年癡呆癥的患病人數(shù)達(dá)500多萬，而且每年還有30萬的新發(fā)病例。老年癡呆癥的發(fā)病機(jī)理以及新藥研發(fā)正受到世界各國的高度重視。因此，以蒜頭果為原料，開發(fā)治療老年癡呆癥的食用油、保健品和藥物具有廣大的市場潛力和醫(yī)療價值。
[0007]薏該仁(Coix ,是禾本科多年生草本植物薏該(Coix lacryma-jobi L.)的成熟果仁，薏苡仁在我國大部分地區(qū)均有出產(chǎn)，由于薏苡的營養(yǎng)價值很高，被譽(yù)為世界禾本科植物之王。薏苡仁含有約2.7%左右的薏苡仁油，慧苡仁種仁含蛋白質(zhì)16.2%，脂肪4.65%，碳水化物79.17%，少量維生素薏苡種子含多種氨基酸(包括亮氨酸、賴氨酸、精氨酸、酪氨酸等)還含有薏苡素、薏苡酯、三萜化合物等物質(zhì)。薏苡仁中抑制多種腫瘤細(xì)胞增殖的有效成份是薏苡酯、薏苡仁內(nèi)酯，該類化合物還具有增強(qiáng)激素調(diào)節(jié)功能和促進(jìn)免疫系統(tǒng)和酶系統(tǒng)的功能，對細(xì)胞免疫和體液免疫也有促進(jìn)作用，大量動物實(shí)驗(yàn)和臨床證實(shí)薏苡仁油有增強(qiáng)免疫力和抗腫瘤作用。薏仁在我國各地都有種植，云南省以曲靖市師宗縣為代表，薏仁資源比較豐富，是我國重要的薏仁生區(qū)之一。薏苡仁營養(yǎng)豐富，并且具有很好的抗腫瘤、活血化瘀等藥用價值，市場上已陸陸續(xù)續(xù)出現(xiàn)了一些薏苡仁產(chǎn)品，薏仁保健酒、薏仁醋、薏仁粉、薏仁茶等，非常受廣大消費(fèi)者的歡迎。但與國外薏仁的產(chǎn)品相比，國內(nèi)薏仁產(chǎn)品開發(fā)相對不足，薏仁的利用基本還停留在人們的飲食中，深加工產(chǎn)品嚴(yán)重缺乏。
[0008]豆腐果，別稱母豬果，豆腐果提取物為豆腐果昔人對甲醛苯-O-β -D-阿咯批喃糖苷，又名昆明神衰果素，為云南野生植物山龍眼科蘿卜樹(HeIieiaerra6c:Hook.f)的果實(shí)(俗稱豆腐渣果)，其化學(xué)結(jié)構(gòu)類與天麻素相似。藥理和臨床研究表明，豆腐果昔對中樞神經(jīng)系統(tǒng)的作用與天麻素相似，但其鎮(zhèn)靜、止痛作用較天麻素強(qiáng)，對神經(jīng)官能癥引起的頭痛、頭昏、睡眠障礙的治療作用顯效快，同時對記憶力、思維力具有較好改善和調(diào)節(jié)作用，應(yīng)用前景廣闊。母豬果主要分布在云南省南部和西南部分地區(qū)，以普洱市和紅河州分布最多，大多數(shù)處于野生狀態(tài)，亟待人工育種保護(hù)和深加工產(chǎn)品的開發(fā)利用。
[0009]本發(fā)明以三種在云南省集中分布或栽培的藥用植物為研究對象，采用植物化學(xué)提取手段分別從這三種植物中提取預(yù)防老年癡呆癥、抗抑郁和抗腫瘤的有效成分，并采用藥劑學(xué)手段制備成中藥保健片劑或膠囊劑，為中老年患者提供一種安全有效的中藥保健品。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0010]為解決現(xiàn)有技術(shù)中預(yù)防老年癡呆癥、抗抑郁和抗腫瘤藥品的原料難以獲得以及目前藥品存在副作用等問題，本發(fā)明提供一種治療神經(jīng)衰弱和預(yù)防老年癡呆癥的藥物組合物，以使用純植物原料制備抗老年癡呆、神經(jīng)衰弱、抗腫瘤的藥物。
[0011]本發(fā)明通過下列技術(shù)方案實(shí)現(xiàn):一種治療神經(jīng)衰弱和預(yù)防老年癡呆癥的藥物組合物，其特征在于由下列質(zhì)量百分比的組分組成:
蒜頭果神經(jīng)酸I?10%、
豆腐果苷I?10%、
薏該仁內(nèi)酯I?10%、
余量為輔料。
[0012]所述輔料包括藥學(xué)領(lǐng)域常規(guī)的糊精、乳糖、羧甲基淀粉鈉、微晶纖維素、淀粉、羥丙基纖維素。
[0013]所述蒜頭果神經(jīng)酸按下列步驟進(jìn)行提取、純化:
(1)將蒜頭果種子去外殼和表皮，按固液比g/mL為I?10:5?50，用3?4°C的濃度為20mM、pH=6.0?7.0的磷酸鹽緩沖液進(jìn)行搗碎后，再經(jīng)超聲波粉碎處理30?50min，于3?4°C下進(jìn)行抽提過夜，然后過濾，再在3?4°C下以5000?8000 r/min的轉(zhuǎn)速進(jìn)行離心分離30?40 min，重復(fù)兩次，去除上清液得剩余物；
(2)將步驟(I)所得剩余物按固液比g/mL=l?5:5?20加入石油醚進(jìn)行攪拌，再靜置分層，經(jīng)過濾后收集濾液，再以濾液反復(fù)浸泡濾渣2-3次，每次浸泡30?60min后過濾，合并濾液，再在40?50°C下進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)以去除石油醚，得到蒜頭果油；
(3)按上樣量:硅膠量=1?10:10?100的質(zhì)量比稱取硅膠G，先按固液比g/mL=l?5:2?10加入石油醚溶解硅膠G，再攪拌20?30min后，將其倒入層析柱中，待硅膠層析柱不含有氣泡，沉降穩(wěn)定后，將步驟(2)所得蒜頭果油按固液比g/mL=l?5:1?10加入石油醚溶解后，裝入硅膠層析柱上層，采用石油醚-乙酸乙酯洗脫系統(tǒng)進(jìn)行梯度洗脫，按溶解有蒜頭果油的石油醚:乙酸乙酯=50:1?30:1 (V/V)的餾分，于40?50°C以下對餾分進(jìn)行減壓濃縮，得到無色塊狀結(jié)晶，即為蒜頭果神經(jīng)酸。
[0014]用薄層色譜法將神經(jīng)酸標(biāo)準(zhǔn)品與該無色結(jié)晶在同一薄層板上點(diǎn)樣，展開，進(jìn)行比對，結(jié)果該無色結(jié)晶和神經(jīng)酸標(biāo)準(zhǔn)品在同一薄層板的相同位置顯示相同紫的斑點(diǎn)，并且在三種不同展開系統(tǒng)中均具有相同顏色斑點(diǎn)和相同Rf值，證明該無色結(jié)晶即為神經(jīng)酸。此方法得到的神經(jīng)酸含量大于95%。
[0015]所述步驟(I)的磷酸鹽緩沖液按下列操作配制:將濃度為0.2M的磷酸氫二鈉溶液與濃度為0.2M磷酸二氫鈉溶液按體積比為12.3?61:87.7?39混合，即得到pH=6.0?7.0的磷酸鹽緩沖液。
[0016]所述步驟(I)的上清液經(jīng)后續(xù)純化分離得到蛋白質(zhì)沉淀。
[0017]所述步驟(3)的硅膠G的粒度為200?300目。
[0018]所述豆腐果苷按下列方法提取純化，經(jīng)過下列各步驟:
(1)豆腐果種子粉碎，過100目篩，再加入體積濃度為50?70%的乙醇在20?30°C下冷浸30?60min,再超聲波提取30?60min,過濾,濾液在45?55°C下進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，回收乙醇，得到母豬果乙醇提取物；
(2)在步驟(I)所得豆腐果乙醇提取物中按固液比g/mL為I?5:5?25加入純水進(jìn)行溶解，上大孔樹脂DlOl型，先用純水洗脫除去多糖、蛋白質(zhì)等水溶性雜質(zhì)，再用體積濃度為30?50%的乙醇洗脫4?5個保留體積，收集大孔樹脂體積濃度為30?50%的乙醇流出液，經(jīng)減壓濃縮，再加入濃縮物體積2?3倍的濃度為90?95%的乙醇，在3?4°C下靜置12?24h以析出結(jié)晶，再抽濾出結(jié)晶，即得到豆腐果苷純品。所得豆腐果苷純度大于95%。
[0019]所述薏苡仁內(nèi)酯按下列方法提取純化，經(jīng)過下列各步驟:
將薏苡仁粉碎，過100目篩，再將薏苡仁粉在溫度35?40°C、壓力37?40MPa、CO2流量為10?20kg/h的條件下進(jìn)行超臨界二氧化碳萃取I?2h，采用體積濃度為70?95%的乙醇溶解萃取物質(zhì)，再經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除乙醇，得到黃色的油脂，即為薏苡仁內(nèi)酯。
[0020]上述蒜頭果神經(jīng)酸、豆腐果苷、薏苡仁內(nèi)酯提取物按比例充分混合，再加入藥學(xué)上可接受的輔料制備成任何一種常用的口服制劑，如膠囊劑、顆粒劑、口服液、丸劑或片劑。
[0021]本發(fā)明具備的優(yōu)點(diǎn)和效果:本發(fā)明提供的藥物主要為脂肪酸、內(nèi)酯等小分子化合物的組合體，通過植物化學(xué)提取手段，從云南特有和大面積種植的幾種植物中提取有效成分，其中神經(jīng)酸具有顯著的抗老年癡呆癥的作用，豆腐果苷能舒緩老年癡呆患者焦慮緊張的情緒，有助于老年人的睡眠時間的延長，薏苡仁內(nèi)酯能防癌抑制多種癌細(xì)胞增殖，三者合用能有效防止和控制老年癡呆癥的發(fā)生和治愈，給老齡化越來越嚴(yán)重的全世界帶來一種純植物萃取的安全有效的植物組合物。本發(fā)明采用的組方配伍合理，原料均來自天然植物，同時本發(fā)明提供的中藥組合物的制備方法，可操作性強(qiáng)，尤其是根據(jù)各味中藥有效成分化學(xué)性質(zhì)涉及提取工藝，所得提取物有效成分含量高，具有藥效高、臨床用量少等優(yōu)點(diǎn)，且工藝穩(wěn)定，適合工業(yè)大生產(chǎn)。

【具體實(shí)施方式】
[0022]以下通過實(shí)施例來進(jìn)一步說明本發(fā)明。
[0023]實(shí)施例1 治療神經(jīng)衰弱和預(yù)防老年癡呆癥的藥物組合物，由下列質(zhì)量百分比的組分組成: 蒜頭果神經(jīng)酸2%、 ?腐果昔6%、
薏苡仁內(nèi)酯5%、
輔料87%，
其中輔料為糊精、乳糖、羧甲基淀粉鈉、微晶纖維素、淀粉。
[0024]其中蒜頭果神經(jīng)酸按下列步驟進(jìn)行提取、純化:
(1)將蒜頭果種子去外殼和表皮，按固液比g/mL為10:50，用4°C的濃度為20mM、pH=6.0的磷酸鹽緩沖液進(jìn)行搗碎后，再經(jīng)超聲波粉碎處理40min，于:TC下進(jìn)行抽提過夜，然后用4層紗布過濾，再在3°C下以6000 r/min的轉(zhuǎn)速進(jìn)行離心分離40 min,重復(fù)兩次，去除上清液得剩余物；其中磷酸鹽緩沖液按下列操作配制:將濃度為0.2M的磷酸氫二鈉溶液與濃度為
0.2M磷酸二氫鈉溶液按體積比為61:39混合，即得到pH=7.0的磷酸鹽緩沖液；上清液經(jīng)后續(xù)純化分離得到蛋白質(zhì)沉淀；
(2)將步驟(I)所得剩余物按固液比g/mL=3:20加入石油醚進(jìn)行攪拌，再靜置分層，經(jīng)過濾后收集濾液，再以濾液反復(fù)浸泡濾渣3次，每次浸泡50min后過濾，合并濾液，再在40°C下進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)以去除石油醚，得到淡黃色的蒜頭果油；
(3)按上樣量:硅膠量=5:60的質(zhì)量比稱取粒度為300目的硅膠G，先按固液比g/mL=3:8加入石油醚溶解硅膠G，再攪拌25min后，將其倒入層析柱中，待硅膠層析柱不含有氣泡，沉降穩(wěn)定后，將步驟(2)所得蒜頭果油按固液比g/mL=5:10加入石油醚溶解后，裝入硅膠層析柱上層，采用石油醚-乙酸乙酯洗脫系統(tǒng)進(jìn)行梯度洗脫，按溶解有蒜頭果油的石油醚:乙酸乙酯=40:1 (V/V)的餾分，于50°C以下對餾分進(jìn)行減壓濃縮，得到無色塊狀結(jié)晶，即為蒜頭果神經(jīng)酸。
[0025]用薄層色譜法將神經(jīng)酸標(biāo)準(zhǔn)品與該無色結(jié)晶在同一薄層板上點(diǎn)樣，展開，進(jìn)行比對，結(jié)果該無色結(jié)晶和神經(jīng)酸標(biāo)準(zhǔn)品在同一薄層板的相同位置顯示相同紫的斑點(diǎn)，并且在三種不同展開系統(tǒng)中均具有相同顏色斑點(diǎn)和相同Rf值，證明該無色結(jié)晶即為神經(jīng)酸。此方法得到的神經(jīng)酸含量大于95%。神經(jīng)酸得率為蒜頭果油的10.462%。
[0026]其中豆腐果苷按下列方法提取純化，經(jīng)過下列各步驟:
(1)豆腐果種子粉碎，過100目篩，再加入體積濃度為70%的乙醇在25°C下冷浸40min，再超聲波提取60min，過濾，濾液在45°C下進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，回收乙醇，得到母豬果乙醇提取物；
(2)在步驟(I)所得豆腐果乙醇提取物中按固液比g/mL為5:25加入純水進(jìn)行溶解，上大孔樹脂DlOl型，先用純水洗脫除去多糖、蛋白質(zhì)等水溶性雜質(zhì)，再用體積濃度為50%的乙醇洗脫5個保留體積，收集大孔樹脂體積濃度為30%的乙醇流出液，經(jīng)減壓濃縮，再加入濃縮物體積3倍的濃度為92%的乙醇，在3°C下靜置20h以析出結(jié)晶，再抽濾出結(jié)晶，即得到豆腐果苷純品。所得豆腐果苷純度大于95%，豆腐果苷的得率為母豬果種子的1.06%。
[0027]其中薏苡仁內(nèi)酯按下列方法提取純化，經(jīng)過下列各步驟:
將薏苡仁粉碎，過100目篩，再將薏苡仁粉在溫度40°C、壓力37MPa、CO2流量為15kg/h的條件下進(jìn)行超臨界二氧化碳萃取lh，采用體積濃度為70%的乙醇溶解萃取物質(zhì)，再經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除乙醇，得到黃色的油脂，即為薏苡仁內(nèi)酯。所得薏苡仁內(nèi)酯萃取得率為5.3%。
[0028]上述蒜頭果神經(jīng)酸、豆腐果苷、薏苡仁內(nèi)酯提取物按比例充分混合，再加入藥學(xué)上可接受的輔料制備成任何一種常用的膠囊劑。
[0029]實(shí)施例2
治療神經(jīng)衰弱和預(yù)防老年癡呆癥的藥物組合物，由下列質(zhì)量百分比的組分組成: 蒜頭果神經(jīng)酸1%、
豆腐果苷10%、
薏苡仁內(nèi)酯10%、
輔料79%，
其中輔料為糊精、乳糖、羧甲基淀粉鈉、微晶纖維素、淀粉、羥丙基纖維素。
[0030]其中蒜頭果神經(jīng)酸按下列步驟進(jìn)行提取、純化:
(1)將蒜頭果種子去外殼和表皮，按固液比g/mL為1:30，用3°C的濃度為20mM、pH=7.0的磷酸鹽緩沖液進(jìn)行搗碎后，再經(jīng)超聲波粉碎處理50min，于4°C下進(jìn)行抽提過夜，然后用4層紗布過濾，再在4°C下以5000r/min的轉(zhuǎn)速進(jìn)行離心分離35min，重復(fù)兩次，去除上清液得剩余物；其中磷酸鹽緩沖液按下列操作配制:將濃度為0.2M的磷酸氫二鈉溶液與濃度為0.2M磷酸二氫鈉溶液按體積比為12.3:87.7混合，即得到pH=6.0的磷酸鹽緩沖液；上清液經(jīng)后續(xù)純化分離得到蛋白質(zhì)沉淀；
(2)將步驟(I)所得剩余物按固液比g/mL=5:10加入石油醚進(jìn)行攪拌，再靜置分層，經(jīng)過濾后收集濾液，再以濾液反復(fù)浸泡濾渣2次，每次浸泡30min后過濾，合并濾液，再在45°C下進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)以去除石油醚，得到淡黃色的蒜頭果油；
(3)按上樣量:硅膠量=10:100的質(zhì)量比稱取粒度為250目的硅膠G，先按固液比g/mL=5:2加入石油醚溶解硅膠G，再攪拌20min后，將其倒入層析柱中，待硅膠層析柱不含有氣泡，沉降穩(wěn)定后，將步驟(2)所得蒜頭果油按固液比g/mL=3:l加入石油醚溶解后，裝入硅膠層析柱上層，采用石油醚-乙酸乙酯洗脫系統(tǒng)進(jìn)行梯度洗脫，按溶解有蒜頭果油的石油醚:乙酸乙酯=50:1 (V/V)的餾分，于45°C以下對餾分進(jìn)行減壓濃縮，得到無色塊狀結(jié)晶，即為蒜頭果神經(jīng)酸。
[0031]用薄層色譜法將神經(jīng)酸標(biāo)準(zhǔn)品與該無色結(jié)晶在同一薄層板上點(diǎn)樣，展開，進(jìn)行比對，結(jié)果該無色結(jié)晶和神經(jīng)酸標(biāo)準(zhǔn)品在同一薄層板的相同位置顯示相同紫的斑點(diǎn)，并且在三種不同展開系統(tǒng)中均具有相同顏色斑點(diǎn)和相同Rf值，證明該無色結(jié)晶即為神經(jīng)酸。此方法得到的神經(jīng)酸含量大于95%。神經(jīng)酸得率為蒜頭果油的11.054%。
[0032]其中豆腐果苷按下列方法提取純化，經(jīng)過下列各步驟:
(1)豆腐果種子粉碎，過100目篩，再加入體積濃度為60%的乙醇在20°C下冷浸60min，再超聲波提取45min，過濾，濾液在50°C下進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，回收乙醇，得到母豬果乙醇提取物；
(2)在步驟(I)所得豆腐果乙醇提取物中按固液比g/mL為3:19加入純水進(jìn)行溶解，上大孔樹脂DlOl型，先用純水洗脫除去多糖、蛋白質(zhì)等水溶性雜質(zhì)，再用體積濃度為40%的乙醇洗脫4個保留體積，收集大孔樹脂體積濃度為40%的乙醇流出液，經(jīng)減壓濃縮，再加入濃縮物體積2倍的濃度為95%的乙醇，在4°C下靜置24h以析出結(jié)晶，再抽濾出結(jié)晶，即得到豆腐果苷純品。所得豆腐果苷純度大于95%，豆腐果苷的得率為母豬果種子的1.57%。
[0033]其中薏苡仁內(nèi)酯按下列方法提取純化，經(jīng)過下列各步驟: 將薏苡仁粉碎，過100目篩，再將薏苡仁粉在溫度35°C、壓力40MPa、CO2流量為1kg/h的條件下進(jìn)行超臨界二氧化碳萃取2h，采用體積濃度為85%的乙醇溶解萃取物質(zhì)，再經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除乙醇，得到黃色的油脂，即為薏苡仁內(nèi)酯。所得薏苡仁內(nèi)酯萃取得率為5.9%。
[0034]上述蒜頭果神經(jīng)酸、豆腐果苷、薏苡仁內(nèi)酯提取物按比例充分混合，再加入藥學(xué)上可接受的輔料制備成任何一種常用的顆粒劑、丸劑或片劑。
[0035]實(shí)施例3
治療神經(jīng)衰弱和預(yù)防老年癡呆癥的藥物組合物，由下列質(zhì)量百分比的組分組成: 蒜頭果神經(jīng)酸10%、 ?腐果昔1%、
薏苡仁內(nèi)酯1%、
輔料88%，
其中輔料為糊精、乳糖、羧甲基淀粉鈉、微晶纖維素、淀粉、羥丙基纖維素。
[0036]其中蒜頭果神經(jīng)酸按下列步驟進(jìn)行提取、純化:
(1)將蒜頭果種子去外殼和表皮，按固液比g/mL為8:5，用4°C的濃度為20mM、pH=7.0的磷酸鹽緩沖液進(jìn)行搗碎后，再經(jīng)超聲波粉碎處理30min，于4°C下進(jìn)行抽提過夜，然后用4層紗布過濾，再在4°C下以8000 r/min的轉(zhuǎn)速進(jìn)行離心分離30min，重復(fù)兩次，去除上清液得剩余物；其中磷酸鹽緩沖液按下列操作配制:將濃度為0.2M的磷酸氫二鈉溶液與濃度為
0.2M磷酸二氫鈉溶液按體積比為46:68混合，即得到pH=7.0的磷酸鹽緩沖液；上清液經(jīng)后續(xù)純化分離得到蛋白質(zhì)沉淀；
(2)將步驟(I)所得剩余物按固液比g/mL=l:5加入石油醚進(jìn)行攪拌，再靜置分層，經(jīng)過濾后收集濾液，再以濾液反復(fù)浸泡濾渣3次，每次浸泡60min后過濾，合并濾液，再在50°C下進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)以去除石油醚，得到淡黃色的蒜頭果油；
(3)按上樣量:硅膠量=1:10的質(zhì)量比稱取粒度為200目的硅膠G，先按固液比g/mL=l: 10加入石油醚溶解硅膠G，再攪拌30min后，將其倒入層析柱中，待硅膠層析柱不含有氣泡，沉降穩(wěn)定后，將步驟(2)所得蒜頭果油按固液比g/mL=l:8加入石油醚溶解后，裝入硅膠層析柱上層，采用石油醚-乙酸乙酯洗脫系統(tǒng)進(jìn)行梯度洗脫，按溶解有蒜頭果油的石油醚:乙酸乙酯=30:1 (V/V)的餾分，于40°C以下對餾分進(jìn)行減壓濃縮，得到無色塊狀結(jié)晶，即為蒜頭果神經(jīng)酸。
[0037]用薄層色譜法將神經(jīng)酸標(biāo)準(zhǔn)品與該無色結(jié)晶在同一薄層板上點(diǎn)樣，展開，進(jìn)行比對，結(jié)果該無色結(jié)晶和神經(jīng)酸標(biāo)準(zhǔn)品在同一薄層板的相同位置顯示相同紫的斑點(diǎn)，并且在三種不同展開系統(tǒng)中均具有相同顏色斑點(diǎn)和相同Rf值，證明該無色結(jié)晶即為神經(jīng)酸。此方法得到的神經(jīng)酸含量大于95%。神經(jīng)酸得率為蒜頭果油的10.819%。
[0038]其中豆腐果苷按下列方法提取純化，經(jīng)過下列各步驟:
(1)豆腐果種子粉碎，過100目篩，再加入體積濃度為50%的乙醇在30°C下冷浸30min，再超聲波提取30min，過濾，濾液在55°C下進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，回收乙醇，得到母豬果乙醇提取物；
(2)在步驟(I)所得豆腐果乙醇提取物中按固液比g/mL為1:5加入純水進(jìn)行溶解，上大孔樹脂DlOl型，先用純水洗脫除去多糖、蛋白質(zhì)等水溶性雜質(zhì)，再用體積濃度為30%的乙醇洗脫4個保留體積，收集大孔樹脂體積濃度為50%的乙醇流出液，經(jīng)減壓濃縮，再加入濃縮物體積2倍的濃度為90%的乙醇，在4°C下靜置12h以析出結(jié)晶，再抽濾出結(jié)晶，即得到豆腐果苷純品。所得豆腐果苷純度大于95%，豆腐果苷的得率為母豬果種子的1.13%。
[0039]其中薏苡仁內(nèi)酯按下列方法提取純化，經(jīng)過下列各步驟:
將薏苡仁粉碎，過100目篩，再將薏苡仁粉在溫度38°C、壓力38MPa、CO2流量為20kg/h的條件下進(jìn)行超臨界二氧化碳萃取1.5h，采用體積濃度為95%的乙醇溶解萃取物質(zhì)，再經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除乙醇，得到黃色的油脂，即為薏苡仁內(nèi)酯。所得薏苡仁內(nèi)酯萃取得率為5.77%。
[0040]上述蒜頭果神經(jīng)酸、豆腐果苷、薏苡仁內(nèi)酯提取物按比例充分混合，再加入藥學(xué)上可接受的輔料制備成任何一種常用的口服液。
[0041]取上述實(shí)施例所得治療神經(jīng)衰弱和預(yù)防老年癡呆癥的藥物組合物，用于下列臨床治療:
一、治療對象
神經(jīng)衰弱患者的30例；老年癡呆癥患者的30例；抑郁癥患者的50例。
[0042]將上述各類病例隨機(jī)平分為治療組和對照組各55例。
[0043]二、用法
治療組服用上述實(shí)施例所得治療神經(jīng)衰弱和預(yù)防老年癡呆癥的藥物組合物，一次2g，一日I次，連服30日進(jìn)行觀察。
[0044]對照組中服用市購神衰康膠囊，一日數(shù)次，一次5粒，一日2次，連服30日進(jìn)行觀察。
[0045]三、結(jié)果
本發(fā)明提供的治療神經(jīng)衰弱和預(yù)防老年癡呆癥的藥物組合物臨床治療效果:顯效率達(dá)100%，對神經(jīng)衰弱患者癥狀有效率達(dá)83% ;對老年癡呆癥患者癥狀有效率達(dá)78% ;對抑郁癥患者癥狀有效率達(dá)90%。
[0046]而對照組對神經(jīng)衰弱患者癥狀有效率達(dá)75% ;對老年癡呆癥患者癥狀有效率達(dá)65% ;對抑郁癥患者癥狀有效率達(dá)43%。
[0047]四、結(jié)論
本發(fā)明提供的治療神經(jīng)衰弱和預(yù)防老年癡呆癥的藥物組合物是由蒜頭果神經(jīng)酸、豆腐果苷、薏苡仁內(nèi)酯提取物等組成的組合物，對抗老年癡呆、神經(jīng)衰弱、抗腫瘤有顯著療效，其作用優(yōu)于對照組。
[0048]該治療神經(jīng)衰弱和預(yù)防老年癡呆癥的藥物組合物完全利用植物提取純化，原料易獲得，有療效好、應(yīng)用安全、毒副作用小等優(yōu)點(diǎn)，所制得的產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定，使用方便，更適合于臨床用藥，無任何副作用，療效顯著。
【權(quán)利要求】
1.一種治療神經(jīng)衰弱和預(yù)防老年癡呆癥的藥物組合物，其特征在于由下列質(zhì)量百分比的組分組成: 蒜頭果神經(jīng)酸I?10%、 豆腐果苷I?10%、 薏該仁內(nèi)酯I?10%、 余量為輔料。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于:所述輔料包括藥學(xué)領(lǐng)域常規(guī)的糊精、乳糖、羧甲基淀粉鈉、微晶纖維素、淀粉、羥丙基纖維素。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于:所述蒜頭果神經(jīng)酸按下列步驟進(jìn)行提取、純化: (1)將蒜頭果種子去外殼和表皮，按固液比g/mL為I?10:5?50，用3?4°C的濃度為20mM、pH=6.0?7.0的磷酸鹽緩沖液進(jìn)行搗碎后，再經(jīng)超聲波粉碎處理30?50min，于3?4°C下進(jìn)行抽提過夜，然后過濾，再在3?4°C下以5000?8000 r/min的轉(zhuǎn)速進(jìn)行離心分離30?40 min，重復(fù)兩次，去除上清液得剩余物； (2)將步驟(I)所得剩余物按固液比g/mL=l?5:5?20加入石油醚進(jìn)行攪拌，再靜置分層，經(jīng)過濾后收集濾液，再以濾液反復(fù)浸泡濾渣2?3次，每次浸泡30?60min后過濾，合并濾液，再在40?50°C下進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)以去除石油醚，得到蒜頭果油； (3)按上樣量:硅膠量=1?10:10?100的質(zhì)量比稱取硅膠G，先按固液比g/mL=l?5:2?10加入石油醚溶解硅膠G，再攪拌20?30min后，將其倒入層析柱中，待硅膠層析柱不含有氣泡，沉降穩(wěn)定后，將步驟(2)所得蒜頭果油按固液比g/mL=l?5:1?10加入石油醚溶解后，裝入硅膠層析柱上層，采用石油醚-乙酸乙酯洗脫系統(tǒng)進(jìn)行梯度洗脫，按溶解有蒜頭果油的石油醚:乙酸乙酯=50:1?30:1 (V/V)的餾分，于40?50°C以下對餾分進(jìn)行減壓濃縮，得到無色塊狀結(jié)晶，即為蒜頭果神經(jīng)酸。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的藥物組合物，其特征在于:所述步驟(I)的磷酸鹽緩沖液按下列操作配制:將濃度為0.2M的磷酸氫二鈉溶液與濃度為0.2M磷酸二氫鈉溶液按體積比為12.3?61:87.7?39混合，即得到pH=6.0?7.0的磷酸鹽緩沖液。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的藥物組合物，其特征在于:所述步驟(I)的上清液經(jīng)后續(xù)純化分離得到蛋白質(zhì)沉淀。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的藥物組合物，其特征在于:所述步驟(3)的硅膠G的粒度為200 ?300 目。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于:所述豆腐果苷按下列方法提取純化，經(jīng)過下列各步驟: (1)豆腐果種子粉碎，過100目篩，再加入體積濃度為50?70%的乙醇在20?30°C下冷浸30?60min,再超聲波提取30?60min,過濾,濾液在45?55°C下進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，回收乙醇，得到母豬果乙醇提取物； (2)在步驟(I)所得豆腐果乙醇提取物中按固液比g/mL為I?5:5?25加入純水進(jìn)行溶解，上大孔樹脂DlOl型，先用純水洗脫除去多糖、蛋白質(zhì)等水溶性雜質(zhì)，再用體積濃度為30?50%的乙醇洗脫4?5個保留體積，收集大孔樹脂體積濃度為30?50%的乙醇流出液，經(jīng)減壓濃縮，再加入濃縮物體積2?3倍的濃度為90?95%的乙醇，在3?4°C下靜置12?24h以析出結(jié)晶，再抽濾出結(jié)晶，即得到豆腐果苷純品。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于:所述薏苡仁內(nèi)酯按下列方法提取純化，經(jīng)過下列各步驟: 將薏苡仁粉碎，過100目篩，再將薏苡仁粉在溫度35?40°C、壓力37?40MPa、CO2流量為10?20kg/h的條件下進(jìn)行超臨界二氧化碳萃取I?2h，采用體積濃度為70?95%的乙醇溶解萃取物質(zhì)，再經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除乙醇，得到黃色的油脂，即為薏苡仁內(nèi)酯。
【文檔編號】A61K36/8994GK104258193SQ201410551879
【公開日】2015年1月7日 申請日期:2014年10月17日 優(yōu)先權(quán)日:2014年10月17日
【發(fā)明者】王娟, 施蕊, 楊宇明, 陳中華, 吳飛林, 楊敏, 肖豐坤, 繆福俊, 原曉龍 申請人:云南省林業(yè)科學(xué)院