以類固醇復(fù)合物為中間載體的紫杉醇亞微乳的制作方法
【專利摘要】以類固醇復(fù)合物為中間載體的紫杉醇亞微乳，一種紫杉醇亞微乳劑，其制備方法和用途。所述亞微乳劑包含紫杉醇類固醇復(fù)合物、注射用油、注射用水、乳化劑、助乳化劑和等滲劑，所述的紫杉醇類固醇復(fù)合物中紫杉醇與類固醇摩爾比為1:0.2-4，優(yōu)選1:0.25-2。所述亞微乳劑用于惡性腫瘤治療，其平均粒徑在400nm以下、pH為3.5-6。
【專利說(shuō)明】W類固醇復(fù)合物為中間載體的紫杉醇亞微乳
[0001] 本申請(qǐng)是中國(guó)專利申請(qǐng)201080059672. X的分案申請(qǐng)，原申請(qǐng)201080059672. X的 申請(qǐng)日為2010年10月28日，優(yōu)先權(quán)為2009年10月29日，其名稱為"W類固醇復(fù)合物為 中間載體的紫杉醇亞微乳"。

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0002] 本發(fā)明涉及一種W類固醇復(fù)合物為中間載體的紫杉醇亞微乳劑及其制備方法，本 發(fā)明還涉及該紫杉醇亞微乳劑的用途，屬醫(yī)藥制劑【技術(shù)領(lǐng)域】。

【背景技術(shù)】
[0003] 紫杉醇（paditaxel，化XOl)具有重要的抗腫瘤活性，臨床上廣泛用于卵巢癌、和 乳腺癌、非小細(xì)胞肺癌、頭癌和頸癌等的治療。由于其幾乎不溶于水（〇.〇〇6yg/ml),目前 用于臨床的紫杉醇普通注射劑Tawl*系采用化emo地er EL (聚氧己基當(dāng)麻油）/己醇（50 : 50，V/V)的混合溶液5ml溶解30mg的紫杉醇制成。由于處方中含有大量的化emo地er EL， 易引起體內(nèi)組胺釋放，導(dǎo)致嚴(yán)重的過(guò)敏反應(yīng)。為此，臨床使用時(shí)需進(jìn)行如下脫敏處理：治療 前12小時(shí)口服地塞米松IOmg,治療前6小時(shí)再口服地塞米松IOmg,治療前30?60分鐘給 予苯海拉明肌注20mg、靜注西咪替了 300mg或雷尼替了 50mg。即使如此，臨床上仍有5%? 30%的病人出現(xiàn)不同程度的過(guò)敏反應(yīng)。此外，W化emo地er EL/己醇增溶的紫杉醇濃溶液， 稀釋后存在物理穩(wěn)定性問(wèn)題，如環(huán)境溫度偏低或滴注時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，均有可能析出藥物，存在安 全性隱患。
[0004] 針對(duì)紫杉醇注射劑存在的問(wèn)題，自紫杉醇上市后的二十余年來(lái)，國(guó)內(nèi)外藥劑學(xué)工 作者開(kāi)展了廣泛的新型釋藥系統(tǒng)研究，涉及的技術(shù)方案包括環(huán)糊精包合物、脂質(zhì)體、聚合物 膠束、納米粒等。
[0005] 環(huán)糊精包合物雖能增加紫杉醇溶解度，但由于環(huán)糊精用量太大易導(dǎo)致嚴(yán)重的腎毒 性，且加水稀釋后易析出藥物，因此，至今未能進(jìn)入臨床。
[0006] 脂質(zhì)體存在包封率低、長(zhǎng)期膽存易泄漏、加水稀釋后易析出藥物的缺陷，產(chǎn)業(yè)化發(fā) 展困難，國(guó)外雖經(jīng)歷了 20年的研究，但最終并未見(jiàn)產(chǎn)品上市。國(guó)內(nèi)早期（2004年上市)批準(zhǔn) 的紫杉醇脂質(zhì)體(力撲素）凍干粉針每支含藥物30mg，規(guī)格、臨床使用劑量與市售的普通注 射液完全一致，療效無(wú)明顯差異，但增加了中間配制環(huán)節(jié)，且同樣需采用脫敏預(yù)處理，未體 現(xiàn)出明顯的技術(shù)優(yōu)勢(shì)。
[0007] 關(guān)于紫杉醇聚合物膠束，國(guó)內(nèi)外研究異?；钴S，但因載藥量低、放置后質(zhì)量不穩(wěn) 定，需凍干保存，限制了產(chǎn)業(yè)化發(fā)展。近年來(lái)，隨著新型高分子材料的涌現(xiàn)，使得聚合物膠束 的研究技術(shù)得到快速發(fā)展，但將大量的全新結(jié)構(gòu)的聚合物材料引入體內(nèi)，其臨床用藥的安 全性有待進(jìn)一步考察。
[0008] 美國(guó)生物科學(xué)公司2005年獲FDA批準(zhǔn)上市的注射用白蛋白結(jié)合型紫杉醇納米 粒(代號(hào)ABI - 007)是迄今為止國(guó)際上最有影響力的獲得國(guó)際專利保護(hù)的紫杉醇新制劑， 其技術(shù)方案系使用人血白蛋白作為藥物載體，將紫杉醇制成白蛋白結(jié)合型的納米粒，經(jīng)無(wú) 菌過(guò)濾和冷凍干燥后，制成每支含紫杉醇IOOmg和白蛋白900mg的注射用凍干粉針。與普 通注射液相比，注射用白蛋白結(jié)合型紫杉醇納米粒的優(yōu)勢(shì)體現(xiàn)在兩個(gè)方面，1)處方中不含 化emo地er EL，徹底消除了過(guò)敏反應(yīng)，成為國(guó)際上唯一的不需要脫敏處理而直接使用的紫 杉醇新制劑；2)由于毒性降低、耐受性提高，臨床上患者使用劑量由普通注射液的135? 175mg/m 2提高至260mg/m2,臨床治療效果明顯優(yōu)于紫極醇的普通注射液。但因載體材料白 蛋白的用量過(guò)大，價(jià)格昂貴(每只售價(jià)高達(dá)6200元)，再加上中間配制操作環(huán)節(jié)極為復(fù)雜，要 求苛刻，限制了白蛋白結(jié)合型紫杉醇納米粒的臨床應(yīng)用。
[0009] 水包油亞微乳是利用藥物的親脂性，將藥物溶于油相，W天然磯脂為乳化劑，經(jīng)高 壓均質(zhì)乳化制備而得到的平均粒徑在600nm W下的乳液。由于藥物存在于內(nèi)油相，避免與 水及空氣接觸，能夠克服難溶性藥物因溶解度低和穩(wěn)定性差而不利于制成液體制劑的缺 陷。與脂質(zhì)體技術(shù)相比，亞微乳更具產(chǎn)業(yè)化發(fā)展優(yōu)勢(shì)；與白蛋白結(jié)合型的納米粒相比，亞微 乳制造成本低，可采用終端滅菌，臨床上可直接滴注，不易析出藥物，使用方便安全。因此， W亞微乳作為載體發(fā)展紫杉醇新制劑具有良好的前景。盡管國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)紫杉醇亞微乳進(jìn) 行了大量?jī)斣嚕捎谧仙即疾粌H難溶于水，同時(shí)在油中溶解度也很?。s0. 25mg/ml)，直 接制備亞微乳載藥量低于0.02mg/ml，且滅菌和膽存過(guò)程中藥物易從油相轉(zhuǎn)移至水相，導(dǎo)致 破乳、分層或聚集。受紫杉醇在油中溶解度低的限制，至今國(guó)際上未能研制出載藥量高、耐 熱壓滅菌、長(zhǎng)期膽存質(zhì)量穩(wěn)定的紫杉醇亞微乳制劑。
[0010] 為提高藥物在油相中溶解度、突破理化性質(zhì)對(duì)紫杉醇亞微乳劑研究的限制，我們 前期對(duì)"紫杉醇脂質(zhì)復(fù)合物"及"W脂質(zhì)復(fù)合物為中間載體的紫杉醇亞微乳劑"進(jìn)行了研 究，并申請(qǐng)了兩項(xiàng)發(fā)明專利：申請(qǐng)?zhí)枮?00810168213. X的"紫杉醇脂質(zhì)復(fù)合物"和申請(qǐng)?zhí)枮?200810168212. 5的脂質(zhì)復(fù)合物為中間載體的紫杉醇亞微乳劑"。
[0011] 200810168213. X公開(kāi)的紫杉醇脂質(zhì)復(fù)合物，優(yōu)選的脂質(zhì)材料為天然蛋黃卵磯脂、 大豆磯脂和膽固醇，紫杉醇和脂質(zhì)材料的重量比例為1:1?19,即脂質(zhì)材料的用量高達(dá)紫 杉醇的1?19倍(其中W磯脂為脂質(zhì)材料時(shí)，紫杉醇與脂質(zhì)材料的摩爾比約1:1?20 ; W 膽固醇為脂質(zhì)材料時(shí)，紫杉醇與脂質(zhì)材料摩爾比約1:2. 2?42 ; W膽酸類為脂質(zhì)材料時(shí)， 紫杉醇與脂質(zhì)材料摩爾比約為1:2. 1?40)。而200810168212. 5公開(kāi)的亞微乳劑，則是W 200810168213. X公開(kāi)的紫杉醇脂質(zhì)復(fù)合物為中間載體。
[0012] 紫杉醇脂質(zhì)復(fù)合物制備目的，旨在提高紫杉醇在油中的溶解度，為后續(xù)的亞微乳 制備提供良好的中間載體。但進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，200810168213. X和200810168212. 5專利中 提到的技術(shù)方案存在W下缺陷：
[0013] UW磯脂為脂質(zhì)材料制備復(fù)合物時(shí)，雖對(duì)藥物油溶性有明顯的改善效果，但最大 僅可達(dá)到2mg/ml左右，進(jìn)一步提高磯脂用量并不能繼續(xù)提高油中溶解度；受油中溶解度 低的限制，W磯脂復(fù)合物為中間載體制備亞微乳劑時(shí)，最大載藥量?jī)H可達(dá)到0. 5mg/ml左 右，且包封率低于80%，放置6個(gè)月后出現(xiàn)明顯分層，無(wú)法滿足臨床治療需求；載藥量達(dá)到 1. Omg/ml時(shí)則無(wú)法形成均勻乳劑。
[0014] 2、W膽固醇為脂質(zhì)材料制備復(fù)合物時(shí)，對(duì)藥物油溶性改善效果明顯優(yōu)于磯脂，但 膽固醇系類固醇類脂質(zhì)材料，其用量高達(dá)紫杉醇重量的1?19倍，存在多種弊端，（1)攝入 量過(guò)大：健康成人每天膽固醇的攝入量大多在在300mg?500mg(相當(dāng)于1?2個(gè)雞蛋黃中 含的膽固醇量)，紫杉醇臨床每次給藥劑量約300mg，根據(jù)200810168213. X專利涉及的膽固 醇復(fù)合物及其制劑，攝入的膽固醇相當(dāng)于300mg?5700mg，最高時(shí)已相當(dāng)于19個(gè)雞蛋黃，明 顯偏高，存在安全性隱患；（2)制備的亞微乳劑長(zhǎng)期膽存不穩(wěn)定；將膽固醇復(fù)合物作為中間 載體制備亞微乳劑時(shí)，根據(jù)臨床治療劑量和特定的紫杉醇濃度，復(fù)合物中的脂質(zhì)材料用量 越高，則亞微乳的內(nèi)油相中所包裹的復(fù)合物總量就越多。受內(nèi)油相油滴體積和油水界面的 限制，包裹的復(fù)合物總量超過(guò)油相和油水界面可容納的內(nèi)容物時(shí)，就有可能使部分藥物游 離到外水相中，從而導(dǎo)致包封率降低，且使制得的亞微乳劑不穩(wěn)定。經(jīng)對(duì)200810168212. 5 專利所述的亞微乳進(jìn)行考察，包封率在65%-85%，4°C膽存6個(gè)月質(zhì)量還比較穩(wěn)定，但膽存至 12個(gè)月時(shí)出現(xiàn)明顯的分層現(xiàn)象，標(biāo)示含量下降，紫杉醇雜質(zhì)明顯升高；（3)制備成本高；月旨 質(zhì)材料的用量高、制備過(guò)程中溶劑用量大、揮干溶劑所需時(shí)間長(zhǎng)，導(dǎo)致制造成本高，不符合 藥物經(jīng)濟(jì)學(xué)原則。
[0015] 為提供脂質(zhì)材料含量低、包封率高、穩(wěn)定性好的亞微乳劑，本申請(qǐng)經(jīng)過(guò)大量的試 驗(yàn)，采用脂質(zhì)材料用量低的類固醇復(fù)合物為中間載體制備亞微乳劑。類固醇復(fù)合物中，紫杉 醇/類固醇摩爾比為1:0. 2?4,優(yōu)選1:0. 25?2,更優(yōu)選1:0. 33?1 ;對(duì)應(yīng)地，紫杉醇與類 固醇的重量比例為1:0. 09?1:1. 94,優(yōu)選的為1:0. 11?1:0. 97,更優(yōu)選1:0. 15?1:0. 49。 與200810168212. 5專利相比，本申請(qǐng)的復(fù)合物在類固醇用量大幅減少的情況下，仍能使紫 杉醇復(fù)合完全，使藥物在油中溶解度得到最大程度的提高。進(jìn)一步增加類固醇用量，溶解度 趨于穩(wěn)定，并無(wú)進(jìn)一步增加作用。利用類固醇復(fù)合物對(duì)藥物油溶性的改善，將復(fù)合物溶解在 油相中，通過(guò)選用乳化劑、助乳化劑，得到了包封率高、長(zhǎng)期膽存質(zhì)量穩(wěn)定、類固醇含量低的 紫杉醇亞微乳，從而完成了本發(fā)明。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0016] 本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種紫杉醇亞微乳劑，其包含紫杉醇/類固醇復(fù)合物、 注射用油、注射用水、乳化劑、助乳化劑和等滲劑；所述的紫杉醇/類固醇復(fù)合物中的類固 醇為天然類固醇或其衍生物中的至少一種；所述的天然類固醇選自膽固醇、7-氨化膽固醇 (又稱7-脫氨膽固醇)、羊毛固醇、谷留醇、菜子固醇、真菌固醇、牡頓固醇、豆留醇、麥固醇醇 和麥角固醇，優(yōu)選膽固醇、7-氨化膽固醇和麥角固醇，更優(yōu)選膽固醇；所述的天然類固醇衍 生物選自膽酸、脫氧膽酸、鶴脫氧膽酸。
[0017] 本發(fā)明的亞微乳劑的乳滴平均粒徑在400nmW下，優(yōu)選300nmW下；油相的用量比 例為所述亞微乳劑總量的5%?35%(ml/ml)，優(yōu)選10%?30% (ml/ml) ; W紫杉醇計(jì)，載藥 量為 0. 25mg/ml ?5mg/ml，優(yōu)選 0. 5mg/ml ?2mg/ml。
[0018] 在本發(fā)明中，所述紫杉醇/類固醇復(fù)合物可W是按照如下方法1或2制備的，
[001引方法1包括步驟：
[0020] a.將紫杉醇與類固醇按比例混合，加入適量有機(jī)溶劑溶解，任選地加入抗氧化穩(wěn) 定劑；
[0021] b.在合適的溫度條件下攬拌，通過(guò)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)或噴霧干燥去除有機(jī)溶劑，真空干燥 即得；
[002引方法2包括步驟：
[0023] a.取一定比例的紫杉醇與類固醇，分別加入適量的不同的有機(jī)溶劑溶解，將其混 合，任選地加入抗氧化穩(wěn)定劑；
[0024] b.在合適的溫度條件下攬拌，通過(guò)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)或噴霧干燥去除有機(jī)溶劑，真空干燥 即得。
[0025] 在上述紫杉醇/類固醇復(fù)合物或其制備方法中，紫杉醇與類固醇的摩爾比為 1:0. 2?4,優(yōu)選1:0. 25?2,更優(yōu)選1:0. 33?1 ;相應(yīng)地，紫杉醇與類固醇的重量比例為 1:0. 09 ?1:1. 94,優(yōu)選地為 1:0. 11 ?1:0. 97,更優(yōu)選 1:0. 15 ?1:0. 49。
[0026] 在上述紫杉醇/類固醇復(fù)合物的制備方法中，所述有機(jī)溶劑可選自二氯甲焼、己 醇、甲醇、苯甲醇、丙麗、己酸己醋、四氨巧喃、叔了醇中的一種或多種；優(yōu)選地，可選自己醇、 丙麗、己酸己醋和四氨巧喃中的一種或多種。"適量的有機(jī)溶劑"中的"適量"是指本領(lǐng)域 技術(shù)人員按照常規(guī)技術(shù)可確定用于溶解紫杉醇與類固醇的混合物的量，具體地說(shuō)，紫杉醇 與類固醇復(fù)合物在溶液中的濃度W紫杉醇計(jì)算，控制在0. 5?16mg/ml或更高，優(yōu)選1. 0? 8. Omg/ml 合適的溫度條件"系指控制在IOC -7(TC，優(yōu)選35-55°C，例如25C、35°C、45°C、 55°C或7(TC。攬拌反應(yīng)的時(shí)間和真空干燥的時(shí)間都可W由本領(lǐng)域技術(shù)人員按照常規(guī)技術(shù)確 定，比如攬拌反應(yīng)的時(shí)間可W是0. 5-3. 0小時(shí)，例如0. 5小時(shí)、1. 0小時(shí)、1. 5小時(shí)或2. 0小 時(shí)，真空干燥的時(shí)間可W是8小時(shí)-48小時(shí)，例如8小時(shí)、12小時(shí)、16小時(shí)或24小時(shí)。所述 抗氧化穩(wěn)定劑可W選自亞硫酸氨軸、焦亞硫酸軸、維生素C、邸TA及其鹽、維生素E及其衍生 物中的至少一種，抗氧化穩(wěn)定劑的用量是本領(lǐng)域在制備脂質(zhì)復(fù)合物中通常采用的用量，一 般不超過(guò)復(fù)合物總量的1% (重量)。
[0027] 在本發(fā)明中，所述的注射用油選自長(zhǎng)鏈油和中鏈油中的一種或它們的混合物。所 述的長(zhǎng)鏈油選自長(zhǎng)鏈脂肪酸、長(zhǎng)鏈脂肪酸醋和長(zhǎng)鏈脂肪醇中的一種，具體可W選自大豆油、 當(dāng)麻油、亞油酸、玉米油、橄攬油、花生油、棉巧油、油酸、單硬脂酸甘油醋、單油酸甘油醋、 十六醇；所述的中鏈油選自中鏈脂肪酸和中鏈脂肪酸醋中的一種。優(yōu)選的長(zhǎng)鏈油為長(zhǎng)鏈脂 肪酸醋，具體地為注射用大豆油；優(yōu)選的中鏈油為中鏈脂肪酸甘油醋。
[0028] 在本發(fā)明中，所述的乳化劑為非離子表面活性劑或天然表面活性劑。非離子表面 活性劑選自脂肪酸甘油醋、聚氧己帰脂肪醇離類、聚氧己帰失水山梨醇脂肪酸醋、山梨醇及 失水山梨醇脂肪酸醋、聚氧己帰脂肪酸醋類、維生素E衍生物類和聚氧帰姪共聚物中的至 少一種；所述的天然表面活性劑選自蛋黃卵磯脂、豆磯脂、膽留醇和膽酸類、海藻酸軸和殼 聚糖中的至少一種。優(yōu)選的乳化劑為天然表面活性劑，最優(yōu)選的乳化劑為天然的蛋黃卵磯 脂和大豆卵磯脂。乳化劑在本發(fā)明的亞微乳劑中的含量為亞微乳劑組合物總量的0. 5%-5% (g/ml),優(yōu)選地為 1.0%-4. 0% (g/ml),最優(yōu)選地為 1.0%-2. 0% (g/ml)。
[0029] 在本發(fā)明中，所述的助乳化劑選自聚己二醇（PEG)類和泊洛沙姆類。助乳化劑 的含量為本發(fā)明亞微乳劑總量的〇%-5% (g/ml)，優(yōu)選地為0. 5%-3% (g/ml)，最優(yōu)選地為 1. 0%-2. 0% (g/ml)。
[0030] 在本發(fā)明中，紫杉醇亞微乳的滲透壓調(diào)節(jié)劑(等滲劑）選自甘油、木糖醇、山梨醇 (糖)醇和甘露醇中的一種或多種，優(yōu)選甘油和葡萄糖，更優(yōu)選甘油。甘油含量為本發(fā)明的紫 杉醇亞微乳劑總量的1. 0-3. 0% (g/ml)，優(yōu)選地為1. 5-2. 5% (g/ml)。
[0031] 在本發(fā)明中，所述的紫杉醇亞微乳劑還可加入穩(wěn)定劑，選自油酸、油酸軸和PEG類 中的一種，優(yōu)選的穩(wěn)定劑為油酸和PEG,更優(yōu)選地為油酸。油酸的含量為本發(fā)明的紫杉醇亞 微乳劑總量的 0. 05-0. 5% (g/ml)，優(yōu)選地為 0. 1-0. 2% (g/ml)。
[0032] 本發(fā)明的紫杉醇亞微乳劑，還可包含抗氧劑，可W選自維生素E或維生素E醋衍生 物，優(yōu)選維生素E。
[0033] 在本發(fā)明中，所述的"一種或其混合物"或"至少一種"是指可W為所選物質(zhì)中的 一種，或者兩種的混合物，或者更多種的混合物。
[0034] 本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供本發(fā)明所述的紫杉醇亞微乳劑的一種制備方法，其 包括如下步驟：
[0035] ?取注射用水，加入乳化劑、助乳化劑和等滲劑，置組織搗碎機(jī)或剪切機(jī)中分散制 成均勻水相，加熱至40-80°C，保溫；
[0036] *另取紫杉醇/類固醇復(fù)合物，任選地和穩(wěn)定劑一起溶于預(yù)熱至40-8(TC的注射用 油中，置組織搗碎機(jī)或剪切機(jī)中分散制成均勻油相；
[0037] 在攬拌條件下，將水相緩緩加入至油相中，10000-20000轉(zhuǎn)/min剪切5-lOmin，使 形成均勻初乳，迅速轉(zhuǎn)移至高壓均質(zhì)機(jī)中均質(zhì)乳化至粒徑控制在400nm W下，優(yōu)選300nm W 下，收集全部乳液，用鹽酸節(jié)抑至3. 5-6. 0,優(yōu)選4. 0-5. 0,并加水適量（至全量），即得。
[0038] 本發(fā)明還提供紫杉醇亞微乳劑的另一種制備方法，其包括如下步驟：
[0039] .取注射用水，加入助乳化劑和等滲劑，攬拌制成水相，加熱至40-80。保溫；
[0040] k另取紫杉醇/類固醇復(fù)合物、乳化劑和/或穩(wěn)定劑，溶于預(yù)熱至40-8(TC的注射用 油中，置組織搗碎機(jī)或剪切機(jī)中分散制成均勻油相；
[0041] ?在攬拌條件下，將水相緩緩加入至油相中，10000-20000轉(zhuǎn)/min剪切5-lOmin，使 形成均勻初乳，迅速轉(zhuǎn)移至高壓均質(zhì)機(jī)中乳化，粒徑控制在400nm W下，優(yōu)選100-300nm，收 集全部乳液，用鹽酸調(diào)節(jié)抑至3. 5-6. 0,優(yōu)選4. 0-5. 0,并加水適量（至全量），即得。
[0042] 在本發(fā)明的制備方法中，在高壓均質(zhì)機(jī)中乳化也可W采用其它乳化方法來(lái)實(shí)現(xiàn)， 只要能夠乳化均勻，并且達(dá)到所述的粒徑即可；溫度40-8(TC可W為比如4(TC、5(TC、6(TC、 70°C或 80°C等。
[0043] 在本發(fā)明的制備方法中，調(diào)節(jié)抑的鹽酸的濃度可W本領(lǐng)域常規(guī)采用調(diào)節(jié)抑的鹽 酸濃度，比如可W為0. Imol/L，或0. Olmol/L ;其中注射用水、注射用油的用量，本領(lǐng)域技術(shù) 人員根據(jù)本發(fā)明所給出的油相的比例完全可W確定；"加水適量（至全量）"是指除了在制 備水相時(shí)所采用的水的用量之外，本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)常規(guī)技術(shù)加入水W達(dá)到符合本發(fā)明 所給出的載藥量的水的用量。
[0044] 本發(fā)明還提供一種制劑，其包含本發(fā)明所述的紫杉醇亞微乳劑，該制劑可W為臨 床上任何可W使用的劑型，包括輸液劑或干乳劑的形式。其中的輸液劑是通過(guò)如下方法制 備的：將本發(fā)明所述的紫杉醇亞微乳劑灌裝后，經(jīng)流通蒸汽滅菌或熱壓滅菌無(wú)菌工藝處理， 即得；其中的干乳劑是通過(guò)如下方法制備的：向本發(fā)明所述的紫杉醇亞微乳劑中加入適量 支撐劑，經(jīng)無(wú)菌過(guò)濾處理后，采用冷凍干燥工藝制成干乳劑。優(yōu)選的支撐劑為甘露醇，比女口 5% (w/v)的甘露醇。
[0045] 本發(fā)明還提供本發(fā)明的紫杉醇亞微乳劑在制備抗癌藥物中的應(yīng)用，所述的癌為實(shí) 體瘤，包括卵巢癌、乳腺癌、宮頸癌、非小細(xì)胞肺癌、頭癌或頸癌、食道癌、腎癌、肝癌和胃癌。
[0046] 在本發(fā)明中，如果沒(méi)有特別地指出，本文所用的科學(xué)和技術(shù)術(shù)語(yǔ)W及名稱都具有 與本發(fā)明所屬領(lǐng)域普通技術(shù)人員常規(guī)理解相同的意思；并且，如果沒(méi)有特別地指出，其中所 采用的物質(zhì)及其含量或比例、裝置、儀器、制備條件等都是本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的或者其 根據(jù)本發(fā)明的描述可得知的。
[0047] 本發(fā)明提供的紫杉醇亞微乳劑特別地具有如下的優(yōu)點(diǎn)：
[0048] 1)制備成本低、類膽固攝入量少；本發(fā)明的紫杉醇亞微乳使用了脂質(zhì)材料低的類 固醇復(fù)合物為中間載體，因復(fù)合物中的類固醇用量?jī)H為紫杉醇重量的0. 09?1. 94倍(優(yōu)選 0. 11?0. 97倍)，與200810168212. 5公開(kāi)的"W脂質(zhì)復(fù)合物為中間載體的紫杉醇亞微乳劑" 的技術(shù)相比，本專利申請(qǐng)大大減少了脂質(zhì)材料用量，降低了制備成本，減小了因大量攝入類 固醇物質(zhì)而可能引發(fā)的安全隱患。
[0049] 2)包封率高、穩(wěn)定性好；臨床上紫杉醇的單藥劑量為135?175mg/m2,即每人每次 約240?300mg。另根據(jù)人體每次可接受的亞微乳體積，紫杉醇亞微乳劑單劑量的體積應(yīng) 控制在IOO-SOOml。由此計(jì)算，亞微乳劑中紫杉醇的濃度應(yīng)控制在0. 48mg/m；L-3. Omg/ml。 200810168212. 5公開(kāi)的"W脂質(zhì)復(fù)合物為中間載體的紫杉醇亞微乳劑"，其中W磯脂復(fù)合物 為中間載體制備的亞微乳劑，載藥量最大僅可達(dá)到0. 5mg/ml，且放置后不穩(wěn)定；而W膽固 醇復(fù)合物為中間載體制備亞微乳劑，雖載藥量能夠提高，但膽固醇用量高達(dá)紫杉醇1?19 倍，導(dǎo)致紫杉醇亞微乳劑中包裹的復(fù)合物總量高達(dá)1. 2mg/na--60mg/ml。而本專利申請(qǐng)W類 固醇復(fù)合物為中間載體制備的亞微乳劑中，因類固醇用量?jī)H為紫杉醇重量的0. 09?1. 94 倍(優(yōu)選0. 11?0. 97倍)，則乳劑中包裹的復(fù)合物總量?jī)H為1. 14mg/ml -3. 60mg/ml (優(yōu)選 的為1. 39mg/ml -1. 80mg/ml)，由此可見(jiàn)，本發(fā)明的制劑穩(wěn)定性更好且對(duì)人體相當(dāng)安全。
[0050] 對(duì)于水包油亞微乳劑，脂溶性藥物是分布在油相和/或油水界面的，而內(nèi)油相的 油滴體積和油水界面的容量是有限的，投入的復(fù)合物總量越多，乳劑的包封率就越低，游離 到外水相的藥物就越多，亞微乳劑長(zhǎng)期膽存的穩(wěn)定性也就越差。與200810168212. 5的公開(kāi) 技術(shù)相比，本專利因使用了脂質(zhì)材料用量低的類固醇復(fù)合物作為中間載體，油相中包裹的 復(fù)合物總量大大減少，有利于提高亞微乳劑的包封率、降低水相中游離藥物、提高制劑穩(wěn)定 性。
[0051] 對(duì)比研究結(jié)果表明，200810168212. 5公開(kāi)的亞微乳劑包封率在65%-85%，冰箱膽 存（4C，W下同）至12個(gè)月出現(xiàn)分層，含量下降，雜質(zhì)由初始時(shí)的1% W下升高至3. 5%至 7. 6% ;而本專利申請(qǐng)的亞微乳制劑包封率在90 % W上，冰箱膽存12個(gè)月未見(jiàn)分層，外觀為 均勻乳白色，粒徑及含量均無(wú)明顯變化，雜質(zhì)總含量低于1. 7%，在優(yōu)選的載藥量范圍內(nèi)，包 封率在95% W上，雜質(zhì)總量低于1. 0%，質(zhì)量穩(wěn)定。
[0052] 3)安全性好、耐受劑量大：與市售普通注射液相比，本發(fā)明提供的亞微乳劑，不含 己醇和化emopher EL，降低了紫杉醇制劑的血管刺激性，避免了由化emo地er化引發(fā)的過(guò) 敏反應(yīng)和毒副作用，安全性提高，耐受劑量增加，為提高用藥劑量、改善治療效果奠定了良 好基礎(chǔ)。裸鼠隔3日靜脈注射一次、共給藥3次，市售普通注射液的最大耐受劑量(不出現(xiàn) 動(dòng)物死亡)為20mg/kg，而本專利申請(qǐng)的亞微乳劑為45mg/kg，耐受劑量增加至2. 25倍，與文 獻(xiàn)報(bào)道的注射用白蛋白結(jié)合型紫杉醇納米粒耐受劑量相似(增加至普通注射液的2. 23倍)。 在耐受劑量下比較抗腫瘤活性，結(jié)果顯示，與20mg/kg的普通注射液和45mg/kg注射用白蛋 白結(jié)合型紫杉醇納米粒相比較，本專利申請(qǐng)的亞微乳劑45mg/kg給藥，對(duì)乳腺癌、卵巢癌及 肺癌的腫瘤抑制率最高，腫瘤增長(zhǎng)的速度顯著低于普通注射液和注射用白蛋白結(jié)合型紫杉 醇納米粒。
[0053] 下面將參照【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】和實(shí)施例進(jìn)一步詳細(xì)闡述本發(fā)明，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng) 理解，但本發(fā)明并不限于該些實(shí)施例W及使用的制備方法。而且，本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)本發(fā) 明的描述可W對(duì)本發(fā)明進(jìn)行對(duì)其進(jìn)行等同替換、組合、改良或修飾，但該些都將包括在本發(fā) 明的范圍內(nèi)。

【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0054] 附圖1 ;試驗(yàn)例2亞微乳的穩(wěn)定性HPLC考察圖譜（圖A為紫杉醇對(duì)照；圖B為空白 乳劑；圖C為亞微乳14初始；圖D為亞微乳14于4C膽存12個(gè)月；圖E為亞微乳31于4C 膽存12個(gè)月。其中1號(hào)峰為紫杉醇，2?3號(hào)峰為雜質(zhì))。
[005引 附圖2 ;試驗(yàn)例6不同制劑對(duì)MDA-MB-231腫瘤抑制作用
[0056] 附圖3 ;試驗(yàn)例6不同制劑給藥后MDA-MB-231模型鼠荷瘤變化
[0057] 附圖4 ;試驗(yàn)例6不同制劑對(duì)MDA-MB-231腫瘤裸鼠體重影響

【具體實(shí)施方式】
[0058] 實(shí)施例1紫杉醇類固醇復(fù)合物
[0059] 實(shí)驗(yàn)復(fù)合物1?實(shí)驗(yàn)復(fù)合物6 ;按本發(fā)明專利的技術(shù)要求，選用膽固醇、7-氨化膽 固醇和麥角固醇為脂質(zhì)材料，制備2組紫杉醇/膽固醇復(fù)合物(摩爾比為1:1和1 ;2)，2組紫 杉醇/7-氨化膽固醇復(fù)合物(摩爾比為1:1和1 ;4)，2組紫杉醇/麥角固醇復(fù)合物(摩爾比 為1:1和1 ;4)。具體制備方法；將紫杉醇和類固醇一同置于H角瓶中，加入丙麗2000ml將 其溶解，在4(TC溫度條件下攬拌1小時(shí)，移至旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)法去除溶劑，經(jīng)4(TC 減壓真空干燥24小時(shí)即得。，
[0060] 參比復(fù)合物1?參比復(fù)合物4 ;按200810168212. 5專利中的復(fù)合物技術(shù)要求，選 用磯脂和膽固醇為脂質(zhì)材料，制備2組紫杉醇/磯脂復(fù)合物(摩爾比為1:6和1 ; 10)，2組紫 杉醇/膽固醇復(fù)合物(摩爾比為1:10和1 ;20)。具體制備方法同實(shí)驗(yàn)復(fù)合物1?實(shí)驗(yàn)復(fù)合 物6。
[0061] 6組實(shí)驗(yàn)復(fù)合物和4組參比復(fù)合物的組成及制備結(jié)果見(jiàn)下表。
[0062] 表1 ;紫杉醇/類固醇復(fù)合物的組成

【權(quán)利要求】
1. 一種紫杉醇亞微乳劑，其特征在于，其包含紫杉醇/膽固醇復(fù)合物、注射用油、注射 用水、乳化劑、助乳化劑和等滲劑，在所述紫杉醇/膽固醇復(fù)合物中紫杉醇與膽固醇的重量 比例范圍為1:0. 90至1:0. 97,其中紫杉醇與膽固醇的重量比例不為1:0. 90。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的亞微乳劑，其特征在于，所述亞微乳劑的乳滴平均粒徑在 400nm以下，所述油相的用量比例為所述亞微乳劑總量的5%?35% (ml/ml)，以紫杉醇計(jì)， 載藥量為0? 25mg/ml?5mg/ml ;優(yōu)選的亞微乳劑的乳滴平均粒徑在300nm以下，所述油相 的用量比例為10%?30% (ml/ml)，以紫杉醇計(jì)，載藥量為0. 5mg/ml?2mg/ml。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的亞微乳劑，其特征在于，所述的注射用油選自長(zhǎng)鏈油和 中鏈油中的一種或其混合物；所述的長(zhǎng)鏈油選自長(zhǎng)鏈脂肪酸、長(zhǎng)鏈脂肪酸酯和長(zhǎng)鏈脂肪醇； 所述的中鏈油選自中鏈脂肪酸、中鏈脂肪酸酯和中鏈脂肪醇。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的亞微乳劑，其特征在于，所述的注射用油為長(zhǎng)鏈脂肪酸酯，所 述的中鏈油為中鏈脂肪酸甘油酯。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的亞微乳劑，其特征在于，所述的乳化劑為非離子表面活性 劑或天然表面活性劑；所述的非離子表面活性劑選自脂肪酸甘油酯、聚氧乙烯脂肪醇醚類、 聚氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酯、山梨醇及失水山梨醇脂肪酸酯、聚氧乙烯脂肪酸酯類、維生 素 E衍生物類和聚氧烯烴共聚物中的至少一種；所述的天然表面活性劑選自蛋黃卵磷脂、 豆磷脂、膽留醇和膽酸類、海藻酸鈉和殼聚糖中的至少一種，優(yōu)選蛋黃卵磷脂和大豆磷脂。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的亞微乳劑，其特征在于，所述的乳化劑的含量為所述亞微乳 劑總量的 〇? 5%_5% (g/ml)，優(yōu)選 I. 0%-4. 0% (g/ml)，更優(yōu)選 1. 0%-2. 0% (g/ml)。 7?根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的亞微乳劑，其特征在于，所述的助乳化劑選自聚乙二醇 (PEG)類和泊洛沙姆188中的至少一種，優(yōu)選泊洛沙姆188。
8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的亞微乳劑，其特征在于，所述的助乳化劑的含量為所述亞微 乳劑總量的 〇%-5% (g/ml)，優(yōu)選 0. 5%-3% (g/ml)，更優(yōu)選 1.0%-2. 0% (g/ml)。
9. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的亞微乳劑，其特征在于，所述的等滲劑為甘油、木糖醇、山 梨醇(糖）醇和甘露醇中的一種或多種，優(yōu)選甘油。
10. 根據(jù)權(quán)利要求1?9中任一項(xiàng)所述的亞微乳劑，其特征在于，其還可包含穩(wěn)定劑， 選自油酸、油酸鈉和PEG中的一種，優(yōu)選油酸。
11. 根據(jù)權(quán)利要求1?10中任一項(xiàng)所述的亞微乳劑，其特征在于，其還可包含抗氧劑， 選自維生素 E或維生素 E酯衍生物，優(yōu)選維生素 E。
12. 權(quán)利要求1?11中任一項(xiàng)所述的亞微乳劑的制備方法，其特征在于，包括如下步 驟： ?取注射用水，加入乳化劑、助乳化劑和等滲劑，置組織搗碎機(jī)或剪切機(jī)中分散制成均 勻水相，加熱至40-80°C，保溫； ?另將紫杉醇與膽固醇，按所述比例混合，加入適量有機(jī)溶劑溶解，在合適的溫度條件 下攪拌，去除有機(jī)溶劑，真空干燥制得復(fù)合物；取紫杉醇/膽固醇復(fù)合物，任選地和穩(wěn)定劑 一起溶于預(yù)熱至40-80°C的注射用油中，置組織搗碎機(jī)或剪切機(jī)中分散制成均勻油相； ?在攪拌條件下，將水相緩緩加入至油相中，以10000-20000轉(zhuǎn)/分剪切5-10min，使形 成均勻初乳，迅速轉(zhuǎn)移至高壓均質(zhì)機(jī)中乳化，粒徑控制在400nm以下，優(yōu)選300nm以下，收集 全部乳液，用鹽酸調(diào)節(jié)PH至3. 5-6. 0,優(yōu)選的pH值為4. 0-5. 0,并加水適量，即得。 , ----------- 火 取13.權(quán)利要求I?11中任-項(xiàng)所_亞艦編織施，雛征好，可棚 驟： ★取注射用水，加入助乳化劑和等滲劑，攬拌制成水相，加熱至4q-8〇-c，保溫. ^另將紫杉醇與膽固醇，按所述比例混合，加入適量有機(jī)溶劑溶解，在合適的溫度條 下攪拌，去除有機(jī)溶劑，真空干燥制得復(fù)合物；取紫杉醇/膽固醇復(fù)合物和乳化劑，溶^預(yù) 熱至40_8〇°C的注射用油中，置組織搗碎機(jī)或剪切機(jī)中分散制成均勻油相； 、 一>在攪拌條件下，將水相緩緩加入至油相中，高速攪拌剪切使形成均勻初乳，迅速轉(zhuǎn)移 至高壓均質(zhì)機(jī)中乳化，粒徑控制在400nm以下，優(yōu)選i〇〇-300nm，收集全部乳液，用鹽酸調(diào)節(jié) pH至3_ 5-6_ 0,優(yōu)選的pH值為4. 0-5. 0,并加水至適量，即得。 14?一種制劑，其包含權(quán)利要求1?11中任一項(xiàng)所述的紫杉醇亞微乳劑，該制劑為輸液 劑或千乳劑的形式。 I5?根據(jù)權(quán)利要求14所述的制劑的制備方法，其特征在于，其中的輸液劑是通過(guò)如下 方法制備的：將權(quán)利要求1?11中任一項(xiàng)所述的紫杉醇亞微乳劑經(jīng)通蒸汽滅菌或熱壓滅菌 無(wú)菌工藝處理，灌裝，即得；其中的干乳劑是通過(guò)如下方法制備的：向權(quán)利要求1?11中任 一項(xiàng)的紫杉醇亞微乳劑中加入適量支撐劑，經(jīng)無(wú)菌過(guò)濾處理后，采用冷凍干燥工藝制成干 乳劑。 16?權(quán)利要求1?11中任一項(xiàng)所述的紫杉醇亞微乳劑或權(quán)利要求14所述的制劑在用 于制備治療卵巢癌、乳腺癌、非小細(xì)胞肺癌、頭癌癥、頸癌、肝癌或胃癌的藥物中的應(yīng)用。 I7?權(quán)利要求14所述的制劑在用于制備治療卵巢癌、乳腺癌、非小細(xì)胞肺癌、頭癌癥、 頸癌、肝癌或胃癌的藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】A61K31/337GK104224711SQ201410053531
【公開(kāi)日】2014年12月24日 申請(qǐng)日期:2010年10月28日 優(yōu)先權(quán)日:2009年10月29日
【發(fā)明者】劉玉玲, 夏學(xué)軍, 郭瑞芳, 張鵬霄, 韓銳, 付招娣, 周翠萍, 汪仁蕓, 金篤嘉 申請(qǐng)人:中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所