一種轉(zhuǎn)移因子的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及醫(yī)藥【技術(shù)領(lǐng)域】，特別公開了一種轉(zhuǎn)移因子的制備方法。該轉(zhuǎn)移因子的制備方法，取健康雞的新鮮脾臟，處理后提取得到轉(zhuǎn)移因子。本發(fā)明采用健康雞的新鮮脾臟制的轉(zhuǎn)移因子，該轉(zhuǎn)移因子能夠有效的抑制病毒，能夠保護正常機體細胞免受病毒的感染，從根本上預(yù)防病毒病的發(fā)生，提供抗病力，增強機體免疫力。另外，本發(fā)明的制備方法簡單易行，生產(chǎn)時間短，成本低，具有很好的應(yīng)用前景。
【專利說明】—種轉(zhuǎn)移因子的制備方法
[0001](一)【技術(shù)領(lǐng)域】
本發(fā)明涉及醫(yī)藥【技術(shù)領(lǐng)域】，特別涉及一種轉(zhuǎn)移因子的制備方法。
[0002](二)【背景技術(shù)】
轉(zhuǎn)移因子發(fā)現(xiàn)于20世紀40年代，并于20世紀70年代應(yīng)用于臨床，是一種能傳遞遲發(fā)性超敏反應(yīng)、分子量小于10000的具有生物活性的多肽及核苷酸的混合物，其具有活性不被胰蛋白酶、核糖核酸酶所破壞，耐熱、無種屬界限的特點。
[0003]轉(zhuǎn)移因子的主要成分為健康豬或牛脾臟中提取的多肽、氨基酸和多核苷酸等。臨床可用于輔助治療某些抗生素難以控制病毒性或霉菌性細胞內(nèi)感染(如帶關(guān)皰疹、流行性乙型腦炎、白色念球菌感染、病毒性心肌炎等)，對惡性腫瘤可作為輔助治療劑，對免疫缺陷病，如濕疹、血小板減少、多次感染綜合征及慢性皮膚黏膜真菌病等，有一定的療效。
[0004](三)
【發(fā)明內(nèi)容】

本發(fā)明為了彌補現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供了一種制備時間短、生產(chǎn)成本低的轉(zhuǎn)移因子的制備方法。
[0005]本發(fā)明是通過如下技術(shù)方案實現(xiàn)的:
一種轉(zhuǎn)移因子的制備方法，以45日齡以上的健康雞的新鮮脾臟及淋巴結(jié)組織為原料，包括如下步驟:
(1)將原料用冷三蒸水洗凈，去除其表面的筋膜、脂肪組織，再用滅菌生理鹽水反復(fù)沖
洗；
(2)將清洗后的原料剪碎，加入2倍體積的冷生理鹽水后，采用多頻超聲正交破壁技術(shù)研磨制得勻漿液；
(3)將勻漿液置于_30°C下快速冷凍后，水浴30-37°C中融化，交替凍融6次，每次融化后均以組織勻漿機高速勻漿粉碎；
(4)凍融后的勻漿液加入3倍體積的冷生理鹽水，置于低溫高速大通量管式連續(xù)流離心機中，于4°C下以19000-21000r/min離心30分鐘，回收濾液并用0.45 U m濾膜加壓抽濾；
(5)將抽濾后的濾液采用高通量聚醚砜中空纖維透析器透析，4°C連續(xù)循環(huán)4次，收集到的濾液經(jīng)中空纖維超濾膜包加壓超濾；
(6)在無菌條件下，將超濾得到的濾液用空間為0.05 y m的濾膜抽濾除菌，然后采用納米膜純化，最終得到轉(zhuǎn)移因子溶液；
(7)在轉(zhuǎn)移因子溶液中添加絞股藍提取物、澤蘭提取物、三棱提取物、山藥提取物和水飛薊提取物，得到產(chǎn)品。
[0006]本發(fā)明的更優(yōu)方案為:
步驟(2)中,研磨過程中，以3000r/min搗碎3次,每次3min,制得勻衆(zhòng)液。
[0007]步驟(4)中，凍融后的勻漿液加入0.2%體積的甲醛于37°C下滅活24小時，之后再加入冷生理鹽水。
[0008]步驟(5)中，高通量聚醚砜中空纖維透析器的孔徑為0.22 Pm，中空纖維超濾膜包的孔徑為0.1 ii m。[0009]步驟(7)中，每100ml轉(zhuǎn)移因子溶液中添加有l(wèi)_3g絞股藍提取物、l_5g澤蘭提取物、l-5g三棱提取物、l-5g山藥提取物和l_3g水飛薊提取物。
[0010]其中，絞股藍清熱，補虛，解毒；澤蘭活血化瘀，利水消腫，解毒消癰，有利于改善血液微循環(huán)；三棱破血行氣，消積止痛，可直接破壞腫瘤細胞，對人肺癌細胞的凋亡有誘導(dǎo)作用；山藥補脾，養(yǎng)肺，固腎，益精；水飛薊清熱解毒，保肝，利膽，保腦，抗X射線，可使肝臟病患者自覺癥狀和某些生化指數(shù)如血清膽紅素、白朊及球朊系數(shù)、凝血酶原、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶等迅速改善；上述各提取物的添加有效增強轉(zhuǎn)移因子溶液的功能和應(yīng)用效果。
[0011]步驟(7)中，所述產(chǎn)品用無菌瓶分裝后在2_8°C或-20°c下冷藏保存。
[0012]本發(fā)明簡單易行，生產(chǎn)時間短，成本低，采用健康雞的新鮮脾臟制得的轉(zhuǎn)移因子，能夠有效地抑制病毒，保護正常機體細胞免受病毒的感染，從根本上預(yù)防病毒病的發(fā)生，提供抗病力，增強機體免疫力，具有很好的應(yīng)用前景。
[0013](四)【具體實施方式】 實施例1:轉(zhuǎn)移因子的制備
(I)原材料選材:要求雞群嚴格按特別定制的免疫程序免疫、45日齡以上健康畜禽，從源頭上確保能生產(chǎn)出高含量、高活性的新一代多肽制劑。(免疫程序要求:1、全部采用進口疫苗；2、必須最少免疫:馬立克免I次，新城疫免3次，法氏囊免2次，新流免2次)。
[0014](2)原材料的制備及預(yù)處理:取健康雞的新鮮脾臟及淋巴結(jié)組織，用冷三蒸水洗凈雞脾，去其表面的筋膜、脂肪等組織，再用滅菌生理鹽水反復(fù)沖洗。
[0015](3)組織破碎:采用多頻超聲波正交破壁技術(shù)。
[0016]提取收得率高低主要取決于有效成分脫離胞膜、胞漿的吸附，合理有效的細胞膜破碎技術(shù)是利用機械物理方法。將洗干凈的雞脾臟剪碎，加入2倍體積的冷生理鹽水，采用國際先進超聲技術(shù)研磨，以3000r/m``in搗碎3次,每次3min,制得勻衆(zhòng)液；通過空化效應(yīng)破壁(與常規(guī)破壁法比)時間短(時間縮至原來的3/8)、操作簡單、破壁率提高30%以上，核糖提高25.3-54.4%，大分子雜質(zhì)全部清除。
[0017](4)反復(fù)凍融:將勻漿液置于一 30°C快速冷凍，水浴30_37°C中融化，交替凍融6次，每次融化后均以組織勻漿機高速勻漿粉碎；
【權(quán)利要求】
1.一種轉(zhuǎn)移因子的制備方法，以45日齡以上的健康雞的新鮮脾臟及淋巴結(jié)組織為原料，其特征為，包括如下步驟:(I)將原料用冷三蒸水洗凈，去除其表面的筋膜、脂肪組織，再用滅菌生理鹽水反復(fù)沖洗；(2)將清洗后的原料剪碎，加入2倍體積的冷生理鹽水后，采用多頻超聲正交破壁技術(shù)研磨制得勻漿液；(3)將勻漿液置于-30°C下快速冷凍后，水浴30-37°C中融化，交替凍融6次，每次融化后均以組織勻漿機高速勻漿粉碎；(4)凍融后的勻漿液加入3倍體積的冷生理鹽水，置于低溫高速大通量管式連續(xù)流離心機中，于4°C下以19000-21000r/min離心30分鐘，回收濾液并用0.45 y m濾膜加壓抽濾；(5)將抽濾后的濾液采用高通量聚醚砜中空纖維透析器透析，4°C連續(xù)循環(huán)4次，收集到的濾液經(jīng)中空纖維超濾膜包加壓超濾；(6)在無菌條件下，將超濾得到的濾液用空間為0.05 的濾膜抽濾除菌，然后采用納米膜純化，最終得到轉(zhuǎn)移因子溶液；(7)在轉(zhuǎn)移因子溶液中添加絞股藍提取物、澤蘭提取物、三棱提取物、山藥提取物和水飛薊提取物，得到產(chǎn)品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的轉(zhuǎn)移因子的制備方法，其特征在于:步驟(2)中，研磨過程中，以3000r/min搗碎3次,每次3min,制得勻衆(zhòng)液。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的轉(zhuǎn)移因子的制備方法，其特征在于:步驟(4)中，凍融后的勻漿液加入0.2%體積的甲醛于37°C下滅活24小時，之后再加入冷生理鹽水。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的轉(zhuǎn)移因子的制備方法，其特征在于:步驟(5)中，高通量聚醚砜中空纖維透析器的孔徑為0.22 u m,中空纖維超濾膜包的孔徑為0.1 y m。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的轉(zhuǎn)移因子的制備方法，其特征在于:步驟(7)中，每100ml轉(zhuǎn)移因子溶液中添加有l(wèi)_3g絞股藍提取物、l_5g澤蘭提取物、l_5g三棱提取物、l_5g山藥提取物和l_3g水飛薊提取物。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的轉(zhuǎn)移因子的制備方法，其特征在于:步驟(7)中，所述產(chǎn)品用無菌瓶分裝后在2-8°C或-20°C下冷藏保存。
【文檔編號】A61P37/04GK103611023SQ201310640313
【公開日】2014年3月5日 申請日期:2013年12月4日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月4日
【發(fā)明者】馬秀娥, 牛宗菲, 王雪艷, 王耀彬 申請人:山東魯冠獸藥有限責(zé)任公司