網(wǎng)眼瓦韋提取物在制備抗癌藥物中的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種網(wǎng)眼瓦韋提取物的新用途，該新用途是網(wǎng)眼瓦韋提取物在制備抗癌藥物中的應(yīng)用。所述網(wǎng)眼瓦韋提取物是按如下方法制備的：以網(wǎng)眼瓦韋為原料，用30%-90%乙醇提取，通過兩次大孔吸附樹脂純化得到。本發(fā)明所提供的網(wǎng)眼瓦韋提取物對制備抗癌藥物，尤其是抗肝癌、肺癌、胃癌藥物具有重要意義。
【專利說明】網(wǎng)眼瓦韋提取物在制備抗癌藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及一種中藥材提取物在制備抗癌藥物中的應(yīng)用，具體是涉及網(wǎng)眼瓦韋提取物在制備抗癌藥物中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]據(jù)2010年2月衛(wèi)生部統(tǒng)計(jì)資料，每年全球癌癥死亡人數(shù)達(dá)1000萬。目前全球四分之一人口死亡的原因是癌癥所致，并預(yù)測按目前的趨勢發(fā)展下去，到2050年將有二分之一的死亡者是由于患了癌癥。我國惡性癌發(fā)病率以每年2.5-5%速度增長，已成為嚴(yán)重危害人類生命的兀兇。在各種類型的癌癥當(dāng)中以肺癌、胃癌、肝癌等發(fā)病率較聞。
[0003]血管為正常組織器官的形成發(fā)生于功能維護(hù)所必需，它與人體發(fā)育失調(diào)和多種病因?qū)е碌姆N種疾病密切相關(guān)。腫瘤新血管形成在腫瘤發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)起舉足輕重作用。一系列研究表明只要有效抑制腫瘤新血管形成，就能抑制腫瘤生成、轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)。此外，糖尿病和風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等疾病都有血管增生，其血管異常與腫瘤血管非常相似。因此，血管增生抑制劑也可用于治療糖尿病和風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等血管增生性疾病。近年來，人們對腫瘤血管生成機(jī)制的研究不斷深入，許多抗腫瘤血管生成的藥物如Avastin、Angiostatin等相繼被開發(fā)出來，已在臨床上推廣應(yīng)用。這類藥物不但可以用于大多數(shù)實(shí)體瘤的治療，還可以用于腫瘤的預(yù)防和血液系統(tǒng)惡性腫瘤的治療，同時(shí)對其他與血管生成有關(guān)的疾病如糖尿病視網(wǎng)膜病變、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、銀屑病、血管瘤、動脈粥樣硬化等的預(yù)防與治療，都具有一定的理論和現(xiàn)實(shí)意義。
[0004]腫瘤中的腫瘤細(xì)胞可分為兩類。一類為普通的腫瘤細(xì)胞,一類為腫瘤干細(xì)胞。普通的腫瘤細(xì)胞具有快速分裂，對抗腫瘤藥敏感，沒有自身更新能力等特點(diǎn)。因此普通的腫瘤細(xì)胞在分裂一定代數(shù)后會死亡。腫瘤干細(xì)胞則具有如下特點(diǎn):通常情況下處于靜止?fàn)顟B(tài)，及不分裂狀態(tài)，對抗腫瘤藥不敏感，具有自身更新能力，即具有無限繁殖的能力。在腫瘤化療中，大量的腫瘤細(xì)胞被殺死(因?yàn)閷熕幟舾?，然而腫瘤干細(xì)胞會生存下來(因?yàn)閷熕幉幻舾?。腫瘤的復(fù)發(fā)是由于腫瘤化療藥對腫瘤干細(xì)胞無效。找能有效治療腫瘤干細(xì)胞的藥物是當(dāng)前的一個方向。能否根除腫瘤的關(guān)鍵不在于能否殺滅普通的腫瘤細(xì)胞，而在于根除腫瘤干細(xì)胞。
[0005]中醫(yī)藥治療癌癥的歷史源遠(yuǎn)流長，迄今已有紫杉、喜樹、砒霜、綠茶、靈芝、人參、長春花、天門冬、半枝蓮、天葵子等用于臨床治療癌癥，取得了一些較好的效果。長期以來，人們應(yīng)用傳統(tǒng)思維、理念和方法研發(fā)抗癌中草藥，雖然已取得了進(jìn)步，但收效甚微。迄今中草藥尚未在國內(nèi)外成為首選抗癌藥物，現(xiàn)有臨床中草藥的抗癌療效丞需進(jìn)一步提高。因此，研發(fā)中草藥抗癌藥物是目前治療惡性癌的當(dāng)務(wù)之急，而闡明內(nèi)源性低分子抑瘤物的化學(xué)本質(zhì)是這一領(lǐng)域研究的核心問題。
[0006]網(wǎng)眼瓦韋為水龍骨科植物網(wǎng)眼瓦韋(Lepisorus clathratus (Clarke) Ching)的干燥葉。收載于《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)藏藥(第一冊)》，標(biāo)準(zhǔn)編號:WS3-BC-0036-95。其性涼，味苦，具有愈瘡，干膿，澀精，固骨髓，清熱解毒，接補(bǔ)頭骨之功效。用于胸腹腔疾病，燒傷，濕熱腰痛。為我國藏蒙等少數(shù)民族地區(qū)的常用藥物。但有關(guān)網(wǎng)眼瓦韋的基礎(chǔ)研究尚十分有限，使該藥材的后續(xù)推廣和應(yīng)用受到限制?，F(xiàn)代研究表明，網(wǎng)眼瓦韋含有綠原酸和蛻皮留酮以及槲皮素、山奈酚等黃酮類化合物，其他化學(xué)成分不詳；藥理作用未見報(bào)道。
[0007]國內(nèi)專利檢索結(jié)果，未見網(wǎng)眼瓦韋相關(guān)專利。
[0008]上述文獻(xiàn)及專利等，尚未見網(wǎng)眼瓦韋或網(wǎng)眼瓦韋提取物用于制備抗癌藥物的報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0009]本發(fā)明的目的在于提供網(wǎng)眼瓦韋提取物的在制備抗癌藥物中的應(yīng)用。
[0010]本發(fā)明是通過如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的: 本發(fā)明所用網(wǎng)眼瓦韋為龍骨科植物網(wǎng)眼瓦韋(Lepisorus clathratus (Clarke)Ching)的干燥葉。
[0011]網(wǎng)眼瓦韋提取物在制備抗癌藥物中的應(yīng)用，所述網(wǎng)眼瓦韋提取物的制備方法為:
(1)網(wǎng)眼瓦韋，用濃度30%-90%乙醇作為溶劑，加熱回流提取，提取次數(shù)為1-4次，每次提取時(shí)間為1-4小時(shí)，每次溶劑用量為網(wǎng)眼瓦韋重量的8-15倍，濾過，提取液回收乙醇，濃縮至相對密度d=l.10-1.15，濾過，得藥液A ;
(2)將步驟(1)得到的藥液A，通過非極性大孔吸附樹脂柱，先用濃度5%乙醇洗脫，5%乙醇洗脫液直接通過極性大孔樹脂柱，再用濃度50%-70%的乙醇溶液洗脫非極性大孔吸附樹脂柱，收集不同濃度乙醇洗脫液，回收乙醇，濃縮干燥，即得網(wǎng)眼瓦韋提取物A ;再用濃度60%-95%的乙醇溶液洗脫極性大孔吸附樹脂柱，收集不同濃度乙醇洗脫液，回收乙醇，濃縮干燥，即得網(wǎng)眼瓦韋提取物B;
(3)將上述網(wǎng)眼瓦韋提取物A和網(wǎng)眼瓦韋提取物B按一定比例混勻，即得本發(fā)明的網(wǎng)眼瓦韋提取物。
[0012]網(wǎng)眼瓦韋提取物的制備方法為:
(1)網(wǎng)眼瓦韋，用濃度30%-90%乙醇作為溶劑，加熱回流提取，提取次數(shù)為1-4次，每次提取時(shí)間為1-4小時(shí)，每次溶劑用量為網(wǎng)眼瓦韋重量的8-15倍，濾過，提取液回收乙醇，濃縮至相對密度d=l.10-1.15，濾過，得藥液A ;
(2)將步驟(1)得到的藥液A，通過非極性大孔吸附樹脂柱，先用濃度5%乙醇洗脫，5%乙醇洗脫液直接通過極性大孔樹脂柱，再用濃度50%-70%的乙醇溶液洗脫非極性大孔吸附樹脂柱，收集不同濃度乙醇洗脫液，回收乙醇，濃縮干燥，即得網(wǎng)眼瓦韋提取物A ;再用濃度60%-95%的乙醇溶液洗脫極性大孔吸附樹脂柱，收集不同濃度乙醇洗脫液，回收乙醇，濃縮干燥，即得網(wǎng)眼瓦韋提取物B;
(3)將上述網(wǎng)眼瓦韋提取物A和網(wǎng)眼瓦韋提取物B混勻，即得本發(fā)明的網(wǎng)眼瓦韋提取物。
[0013]網(wǎng)眼瓦韋提取物的制備方法為:
(I)網(wǎng)眼瓦韋，用濃度50%乙醇作為溶劑，加熱回流提取，提取次數(shù)為3次，每次提取時(shí)間為2小時(shí)，每次溶劑用量為網(wǎng)眼瓦韋重量的12倍，濾過，提取液回收乙醇，濃縮至相對密度d=l.12，濾過，得藥液A;(2)將步驟(1)得到的藥液A，通過DlOl非極性大孔吸附樹脂柱，先用濃度5%乙醇洗脫，5%乙醇洗脫液直接通過X-5極性大孔樹脂柱，再用濃度60%的乙醇溶液洗脫DlOl非極性大孔吸附樹脂柱，收集60%濃度乙醇洗脫液，回收乙醇，濃縮干燥，即得網(wǎng)眼瓦韋提取物A ;再用濃度70%的乙醇溶液洗脫X-5極性大孔吸附樹脂柱，收集70%濃度乙醇洗脫液，回收乙醇，濃縮干燥，即得網(wǎng)眼瓦韋提取物B ;
(3)將上述網(wǎng)眼瓦韋提取物A和網(wǎng)眼瓦韋提取物B混勻，即得本發(fā)明的網(wǎng)眼瓦韋提取物。
[0014]本發(fā)明的網(wǎng)眼瓦韋提取物的制備方法，其特征在于:所采用的非極性大孔吸附樹脂為DlOl大孔吸附樹脂、H107大孔吸附樹脂；所采用的極性大孔吸附樹脂X-5大孔吸附樹月旨、DM130大孔吸附樹脂。
[0015]本發(fā)明的網(wǎng)眼瓦韋提取物主要含有:蛻皮甾酮、20-羥基蛻皮甾酮、葒草素、葒草苷、異葒草素、牡荊素、異牡荊素。
[0016]本發(fā)明的網(wǎng)眼瓦韋提取物，通過加入藥劑學(xué)允許的各種輔料，制成藥劑學(xué)上的片劑、顆粒劑、膠囊等口服劑型。
[0017]本發(fā)明的網(wǎng)眼瓦韋提取物以及網(wǎng)眼瓦韋提取物A、網(wǎng)眼瓦韋提取物B在制備抗癌藥物中的應(yīng)用，尤其是在制備抗肺癌藥物、抗肝癌藥物、抗胃癌藥物中的應(yīng)用。
[0018]本發(fā)明的網(wǎng)眼瓦韋提取物與化學(xué)藥或中藥或天然藥物組成的抗癌藥物。
[0019]本發(fā)明的網(wǎng)眼瓦韋提取物A、網(wǎng)眼瓦韋提取物B與化學(xué)藥或中藥或天然藥物組成的抗癌藥物。
[0020]本發(fā)明首次對網(wǎng)眼瓦韋采用兩次大孔吸附樹脂純化技術(shù)，制備具有抗癌作用的提取物，制備工藝操作簡便，生產(chǎn)成本低，適于工業(yè)化大生產(chǎn)。
[0021]本發(fā)明首次探索研究以水龍骨科植物網(wǎng)眼瓦韋(Lepisorus clathratus(Clarke) Ching)的干燥葉為原料提取制備抗癌提取物。本實(shí)驗(yàn)研究表明，網(wǎng)眼瓦韋提取物對小鼠S180肉瘤的抑瘤率為51.34%，可見具有較強(qiáng)抗癌的作用，在此基礎(chǔ)上我們進(jìn)一步研究其對血管生成的影響。評價(jià)癌血管生成程度的最客觀標(biāo)準(zhǔn)時(shí)癌組織內(nèi)的微血管數(shù)目，本實(shí)驗(yàn)通過小鼠移植性癌模型體內(nèi)實(shí)驗(yàn)，瘤體微血管標(biāo)記染色，微血管密度計(jì)數(shù)顯示，網(wǎng)眼瓦韋提取物均可抑制癌血管的生成，和對照組比較，具有顯著性差異。本發(fā)明測定網(wǎng)眼瓦韋提取物殺傷癌細(xì)胞0fepG2、GLC、MFC)的作用結(jié)果顯示，其主要表現(xiàn)為濃度依賴型的細(xì)胞毒作用特點(diǎn)，即隨著藥物劑量增加，抑制作用逐漸增強(qiáng)。
【具體實(shí)施方式】
[0022]下面通過具體實(shí)驗(yàn)例和實(shí)施例對網(wǎng)眼瓦韋提取物在制備抗癌藥物中的應(yīng)用做進(jìn)一步說明，但不限于本發(fā)明。
[0023]實(shí)施例1:網(wǎng)眼瓦韋提取物及單體化合物制備
(1)網(wǎng)眼瓦韋10kg，用濃度50%乙醇作為溶劑，加熱回流提取，提取次數(shù)為3次，每次提取時(shí)間為2小時(shí)，每次溶劑用量為藥材重量的12倍，濾過，提取液回收乙醇，濃縮至相對密度d=l.12，濾過，得藥液A;
(2)將步驟(1)得到的藥液A，通過DlOl非極性大孔吸附樹脂柱，先用5%乙醇洗脫，5%乙醇洗脫液直接通過X-5極性大孔樹脂柱,再用濃度60%的乙醇溶液洗脫DlOl非極性大孔吸附樹脂柱，收集60%濃度乙醇洗脫液，回收乙醇，濃縮干燥，即得網(wǎng)眼瓦韋提取物A ;再用濃度70%的乙醇溶液洗脫X-5極性大孔吸附樹脂柱，收集70%濃度乙醇洗脫液，回收乙醇，濃縮干燥，即得網(wǎng)眼瓦韋提取物B ；
(3)將上述網(wǎng)眼瓦韋提取物A和網(wǎng)眼瓦韋提取物B混勻，即得本發(fā)明的網(wǎng)眼瓦韋提取物。
[0024]網(wǎng)眼瓦韋提取物再經(jīng)200-300目硅膠柱層析，以三氯甲烷-甲醇梯度洗脫(100:0-2.5:1)，薄層跟蹤檢測，合并相同流份，靜置析晶，抽濾，甲醇重結(jié)晶，分別得到蛻皮甾酮、20-羥基蛻皮留酮、葒草素、葒草苷、異葒草素、牡荊素、異牡荊素。以上各化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)均經(jīng)質(zhì)譜和核磁共振等波譜手段確證，純度經(jīng)高效液相色譜檢測均大于98%。
[0025]實(shí)施例2:網(wǎng)眼瓦韋提取物及單體化合物制備
(1)網(wǎng)眼瓦韋20kg，用濃度30%乙醇作為溶劑，加熱回流提取，提取次數(shù)為I次，每次提取時(shí)間為4小時(shí)，每次溶劑用量為藥材重量的15倍，濾過，提取液回收乙醇，濃縮至相對密度d=l.15，濾過，得藥液A;
(2)將步驟(1)得到的藥液A，通過H107非極性大孔吸附樹脂柱，先用濃度5%乙醇洗脫，5%乙醇洗脫液直接通過DM130極性大孔樹脂柱，再用濃度50%的乙醇溶液洗脫H107非極性大孔吸附樹脂柱，收集50%濃度乙醇洗脫液，回收乙醇，濃縮干燥，即得網(wǎng)眼瓦韋提取物A ;再用濃度60%的乙醇溶液洗脫DM130極性大孔吸附樹脂柱，收集60%濃度乙醇洗脫液，回收乙醇，濃縮干燥，即得網(wǎng)眼瓦韋提取物B ；
(3)將上述網(wǎng)眼瓦韋提取物A和網(wǎng)眼瓦韋提取物B混勻，即得本發(fā)明的網(wǎng)眼瓦韋提取物。
[0026]網(wǎng)眼瓦韋提取物再經(jīng)200-300目硅膠柱層析，以三氯甲烷-甲醇梯度洗脫(100:0-2.5:1)，薄層跟蹤檢測，合并相同流份，靜置析晶，抽濾，甲醇重結(jié)晶，分別得到蛻皮甾酮、20-羥基蛻皮留酮、葒草素、葒草苷、異葒草素、牡荊素、異牡荊素。以上各化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)均經(jīng)質(zhì)譜和核磁共振等波譜手段確證，純度經(jīng)高效液相色譜檢測均大于98%。
[0027]實(shí)施例3:網(wǎng)眼瓦韋提取物及單體化合物制備
(1)網(wǎng)眼瓦韋10kg，用濃度90%乙醇作為溶劑，加熱回流提取，提取次數(shù)1-4次，每次提取時(shí)間為I小時(shí)，每次溶劑用量為藥材重量的8倍，濾過，提取液回收乙醇，濃縮至相對密度d=l.10，濾過，得藥液A ;
(2)將步驟(1)得到的藥液A，通過DlOl非極性大孔吸附樹脂柱，先用濃度5%乙醇洗脫，5%乙醇洗脫液直接通過X-5極性大孔樹脂柱，再用濃度70%的乙醇溶液洗脫DlOl非極性大孔吸附樹脂柱，收集70%濃度乙醇洗脫液，回收乙醇，濃縮干燥，即得網(wǎng)眼瓦韋提取物A ;再用濃度95%的乙醇溶液洗脫X-5極性大孔吸附樹脂柱，收集95%濃度乙醇洗脫液，回收乙醇，濃縮干燥，即得網(wǎng)眼瓦韋提取物B ;
(3)將上述網(wǎng)眼瓦韋提取物A和網(wǎng)眼瓦韋提取物B混勻，即得本發(fā)明的網(wǎng)眼瓦韋提取物。
[0028]網(wǎng)眼瓦韋提取物再經(jīng)200-300目硅膠柱層析，以三氯甲烷-甲醇梯度洗脫(100:0-2.5:1)，薄層跟蹤檢測，合并相同流份，靜置析晶，抽濾，甲醇重結(jié)晶，分別得到蛻皮甾酮、20-羥基蛻皮留酮、葒草素、葒草苷、異葒草素、牡荊素、異牡荊素。以上各化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)均經(jīng)質(zhì)譜和核磁共振等波譜手段確證，純度經(jīng)高效液相色譜檢測均大于98%。[0029]實(shí)施例4:網(wǎng)眼瓦韋提取物片劑的制備
取實(shí)施例1網(wǎng)眼瓦韋提取物365g，加入淀粉80g，混勻，制粒，干燥，過篩，加微晶纖維素30g，硬脂酸鎂4g，混勻，壓制成1000片，即得網(wǎng)眼瓦韋提取物片劑。
[0030]實(shí)施例5:網(wǎng)眼瓦韋提取物顆粒的制備
取實(shí)施例2網(wǎng)眼瓦韋提取物370g，加入糊精300g，制粒，干燥，整粒，即得網(wǎng)眼瓦韋提取物顆粒。
[0031]實(shí)施例6:網(wǎng)眼瓦韋提取物膠囊的制備
取實(shí)施例3網(wǎng)眼瓦韋提取物345g，加入淀粉35g，半乳糖35g，混勻，制粒，干燥，過篩，裝膠囊1000粒，即得網(wǎng)眼瓦韋提取物膠囊。 [0032]實(shí)驗(yàn)例1:網(wǎng)眼瓦韋提取物對小鼠移植性S18tl肉瘤血管形成抑制作用
方法:小鼠肉瘤S18tl瘤株，腹腔傳代接種。待腹水生長旺盛時(shí)，抽出腹水，細(xì)胞計(jì)數(shù)，調(diào)整細(xì)胞濃度為2*107個細(xì)胞/毫升，在小鼠腋下sc S180肉瘤細(xì)胞，每只接種0.2ml。
[0033]實(shí)驗(yàn)動物及瘤株:昆明小鼠，雌雄各半，6-8周齡，體重(20±2)g，由華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心提供。小鼠肉瘤S18tl由武漢大學(xué)中國典型培養(yǎng)物保藏中心提供。
[0034]藥品:網(wǎng)眼瓦韋提取物、網(wǎng)眼瓦韋提取物A、網(wǎng)眼瓦韋提取物B為按實(shí)施例1方法制備所得，批號分別為20110812、20110813、20110814，分別配置成0.lg/ml生理鹽水溶液。
[0035]治療及分組:120只小鼠于接種當(dāng)天隨機(jī)分為4組:空白對照組、網(wǎng)眼瓦韋提取物組、網(wǎng)眼瓦韋提取物A組、網(wǎng)眼瓦韋提取物B組。網(wǎng)眼瓦韋提取物組、網(wǎng)眼瓦韋提取物A組、網(wǎng)眼瓦韋提取物B組，分別予以25ml/kg。對照組予以生理鹽水0.2ml/只。治療IOd后處死小鼠，剝離瘤體稱重，按公式計(jì)算抑瘤率:抑瘤率=(對照組平均瘤重-實(shí)驗(yàn)組平均瘤重)/對照組平均瘤重*100%。
[0036]微血管染色:免疫組化SABC法染色血管，即用微型血管染色試劑盒(一抗為人相關(guān)第八因子)為武漢博士德生物公司產(chǎn)品。網(wǎng)眼瓦韋提取物各組和對照組瘤體剝離后，切取標(biāo)本，固定，包埋，切片。經(jīng)染色后的切片，內(nèi)皮細(xì)胞褐染，血管呈黃褐色，易于辨認(rèn)。MVD的測定按Bosari等報(bào)道的方法進(jìn)行，先在低倍視野下選取癌微血管最豐富的區(qū)域，即“熱點(diǎn)”，再在400倍視野范圍計(jì)數(shù)被染成棕色的微血管數(shù)目，取3個數(shù)值的平均值作為MVD值。任何棕染的內(nèi)皮細(xì)胞或內(nèi)皮細(xì)胞簇，只要與臨近的微血管、癌細(xì)胞或其他結(jié)締組織分開，就視為一個血管，盡管血管腔常可看到，但并不作為判斷血管的標(biāo)準(zhǔn)。為了避免較大血管對計(jì)數(shù)的干擾，對管壁有較厚平滑肌包繞或管腔>8個紅細(xì)胞面積的血管不予計(jì)數(shù)。
[0037]VEGF、bFGF免疫組化:VEGF、bFGF免疫組化檢測試劑盒(即用型)購自武漢博士德生物公司。陽性細(xì)胞呈棕黃色，免疫組化染色評分按Rahman等的方法進(jìn)行，即VEGF、bFGF的評分標(biāo)準(zhǔn)是:根據(jù)著色細(xì)胞的比例(染色范圍)及染色強(qiáng)度，染色范圍(陽性細(xì)胞比率)分為0-4級，陰性為O分；陽性細(xì)胞1%_25%為I分；陽性細(xì)胞26%-50%為2分；陽性細(xì)胞51%-75%為3分；陽性細(xì)胞76%-100%為I分。染色強(qiáng)度劃分為0_3級；陰性為O分；弱陽性為I分；中等強(qiáng)度為2分；強(qiáng)陽性為3分，得分相加為最后評分。
[0038]統(tǒng)計(jì)方法:運(yùn)用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件，采用t檢驗(yàn)。
[0039]結(jié)果:
(I)荷瘤鼠對治療措施的反應(yīng)以及抑瘤率
接種后第6天，各組荷瘤鼠腋下移植瘤已有黃豆大小，小鼠活潑，飲食正常。對照組小鼠第8天后瘤體生長加快，部分小鼠不活潑，進(jìn)食差；治療各組小鼠活潑，飲食正常，毛發(fā)光澤正常，瘤體生長緩慢。各網(wǎng)眼瓦韋提取物組對小鼠S18tl肉瘤均有抑制作用。見表1表1網(wǎng)眼瓦韋提取物對小鼠S18tl肉瘤的抑制作用(X土
【權(quán)利要求】
1.網(wǎng)眼瓦韋提取物在制備抗癌藥物中的應(yīng)用，所述網(wǎng)眼瓦韋提取物的制備方法為: (1)網(wǎng)眼瓦韋，用濃度30%-90%乙醇作為溶劑，加熱回流提取，提取次數(shù)為1-4次，每次提取時(shí)間為1-4小時(shí)，每次溶劑用量為網(wǎng)眼瓦韋重量的8-15倍，濾過，提取液回收乙醇，濃縮至相對密度d=l.10-1.15，濾過，得藥液A ; (2)將步驟(1)得到的藥液A，通過非極性大孔吸附樹脂柱，先用濃度5%乙醇洗脫，5%乙醇洗脫液直接通過極性大孔樹脂柱，再用濃度50%-70%的乙醇溶液洗脫非極性大孔吸附樹脂柱，收集不同濃度乙醇洗脫液，回收乙醇，濃縮干燥，即得網(wǎng)眼瓦韋提取物A ;再用濃度60%-95%的乙醇溶液洗脫極性大孔吸附樹脂柱，收集不同濃度乙醇洗脫液，回收乙醇，濃縮干燥，即得網(wǎng)眼瓦韋提取物B; (3)將上述網(wǎng)眼瓦韋提取物A和網(wǎng)眼瓦韋提取物B按一定比例混勻，即得本發(fā)明的網(wǎng)眼瓦韋提取物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述網(wǎng)眼瓦韋提取物的制備方法為: (1)網(wǎng)眼瓦韋，用濃度30%-90%乙醇作為溶劑，加熱回流提取，提取次數(shù)為1-4次，每次提取時(shí)間為1-4小時(shí)，每次溶劑用量為網(wǎng)眼瓦韋重量的8-15倍，濾過，提取液回收乙醇，濃縮至相對密度d=l.10-1.15，濾過，得藥液A ; (2)將步驟(1)得到的藥液A，通過非極性大孔吸附樹脂柱，先用濃度5%乙醇洗脫，5%乙醇洗脫液直接通過極性大孔樹脂柱，再用濃度50%-70%的乙醇溶液洗脫非極性大孔吸附樹脂柱，收集不同濃度乙醇洗脫液，回收乙醇，濃縮干燥，即得網(wǎng)眼瓦韋提取物A ;再用濃度60%-95%的乙醇溶液洗脫極性大孔吸附樹脂柱，收集不同濃度乙醇洗脫液，回收乙醇，濃縮干燥，即得網(wǎng)眼瓦韋提取物B; (3)將上述網(wǎng)眼瓦韋提取物A和網(wǎng)眼瓦韋提取物B混勻，即得本發(fā)明的網(wǎng)眼瓦韋提取物。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述網(wǎng)眼瓦韋提取物的制備方法為: (1)網(wǎng)眼瓦韋，用濃度50%乙醇作為溶劑，加熱回流提取，提取次數(shù)為3次，每次提取時(shí)間為2小時(shí)，每次溶劑用量為網(wǎng)眼瓦韋重量的12倍，濾過，提取液回收乙醇，濃縮至相對密度d=l.12，濾過，得藥液A; (2)將步驟(1)得到的藥液A，通過DlOl非極性大孔吸附樹脂柱，先用濃度5%乙醇洗脫，5%乙醇洗脫液直接通過X-5極性大孔樹脂柱，再用濃度60%的乙醇溶液洗脫DlOl非極性大孔吸附樹脂柱，收集60%濃度乙醇洗脫液，回收乙醇，濃縮干燥，即得網(wǎng)眼瓦韋提取物A ;再用濃度70%的乙醇溶液洗脫X-5極性大孔吸附樹脂柱，收集70%濃度乙醇洗脫液，回收乙醇，濃縮干燥，即得網(wǎng)眼瓦韋提取物B ; (3)將上述網(wǎng)眼瓦韋提取物A和網(wǎng)眼瓦韋提取物B混勻，即得本發(fā)明的網(wǎng)眼瓦韋提取物。
4.根據(jù)權(quán)利要求1、權(quán)利要求2、權(quán)利要求3所述的網(wǎng)眼瓦韋提取物的制備方法，其特征在于:所采用的非極性大孔吸附樹脂為DlOl大孔吸附樹脂、H107大孔吸附樹脂；所采用的極性大孔吸附樹脂X-5大孔吸附樹脂、DM130大孔吸附樹脂。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的網(wǎng)眼瓦韋提取物與化學(xué)藥或中藥或天然藥物組成的抗癌藥物。
6.根據(jù)權(quán)利 要求1、權(quán)利要求2、權(quán)利要求3所述的網(wǎng)眼瓦韋提取物A、網(wǎng)眼瓦韋提取物B，在制備抗癌藥物中的應(yīng)用。
7.根據(jù)權(quán)利要求1、權(quán)利要求5、權(quán)利要求6所述癌為肺癌、肝癌、胃癌。
8.根據(jù)權(quán)利要求1、權(quán)利要求2、權(quán)利要求3所述的網(wǎng)眼瓦韋提取物，其特征在于主要含有:蛻皮留酮、20-羥基蛻皮留酮、葒草素、葒草苷、異葒草素、牡荊素、異牡荊素。
9.根據(jù)權(quán)利要求1、權(quán)利要求2、權(quán)利要求3所述的網(wǎng)眼瓦韋提取物，通過加入藥劑學(xué)允許的各種輔料，制成藥劑學(xué)上的片劑、顆粒劑、膠囊等口服劑型。
10.根據(jù)權(quán)利要求1、權(quán)利要求2、權(quán)利要求3所述的網(wǎng)眼瓦韋提取物A、網(wǎng)眼瓦韋提取物B與化學(xué)藥或中藥或天然藥物組成的抗癌藥物。
【文檔編號】A61P35/00GK103585195SQ201310525996
【公開日】2014年2月19日 申請日期:2013年10月31日 優(yōu)先權(quán)日:2013年10月31日
【發(fā)明者】孔倩倩 申請人:濟(jì)南星懿醫(yī)藥技術(shù)有限公司