退行性關(guān)節(jié)病的治療的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種治療退行性關(guān)節(jié)病的方法。所述方法包括給藥有效量的包含具有天冬氨酸和丙氨酸氨基酸側(cè)鏈的二酮哌嗪(DA-DKP)的藥物組合物。本發(fā)明還涉及包含DA-DKP的藥物產(chǎn)品及試劑盒。
【專利說明】退行性關(guān)節(jié)病的治療
[0001]相關(guān)申請(qǐng)的交叉參考
[0002]根據(jù)美國35U.S.C.§ 119(e)，本申請(qǐng)要求于2011年10月10日提交的美國專利臨時(shí)申請(qǐng)N0.61/545，474和于2011年11月17日提交的美國臨時(shí)專利申請(qǐng)N0.61/561，221的優(yōu)先權(quán)。美國臨時(shí)專利申請(qǐng)N0.61/545，474和N0.61/561，221的全文內(nèi)容在此引入作為參考。
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0003]本發(fā)明涉及一種治療退行性關(guān)節(jié)病的方法。所述方法包括給藥有效量的藥物組合物，該藥物組合物包含具有天冬氨酸和丙氨酸氨基酸側(cè)鏈的二酮哌嗪(DA-DKP)。本發(fā)明還提供包含DA-DKP的藥物產(chǎn)品。
【背景技術(shù)】
[0004]骨關(guān)節(jié)炎是關(guān)節(jié)炎最常見的形式，其在美國影響25-35萬人。骨關(guān)節(jié)炎的慢性疼痛和殘疾最初是由隨時(shí)間推移逐漸惡化的關(guān)節(jié)軟骨和骨的炎癥反應(yīng)引起的。膝的癥狀性骨關(guān)節(jié)炎發(fā)病于10-13%的60歲及以上的老年人。僅膝骨關(guān)節(jié)炎就增加了喪失活動(dòng)能力的風(fēng)險(xiǎn)，如走路或爬樓梯需要協(xié)助，該風(fēng)險(xiǎn)高于在65歲及以上老年人中的任何其他醫(yī)學(xué)癥狀。
[0005]目前治療膝骨關(guān)節(jié)炎的藥物僅限于鎮(zhèn)痛藥、非甾體類抗炎藥(NSAIDs)和關(guān)節(jié)內(nèi)類固醇注射，以上這些均由于不良反應(yīng)受到顯著限制。盡管有這些藥物治療，慢性膝骨關(guān)節(jié)炎通常會(huì)引起需要全關(guān)節(jié)置換的進(jìn)行性殘疾。老齡和肥胖人口的膝骨關(guān)節(jié)炎增加的患病率表明了對(duì)安全且有效的局部膝部治療的越來越多的臨床需要，該治療將延緩并潛在地消除進(jìn)行更廣泛的手術(shù)治療的需要。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案涉及一種通過向有需要的動(dòng)物給藥有效量的包含DA-DKP的藥物組合物以治療退行性關(guān)節(jié)病的方法。在一個(gè)方面，所述退行性關(guān)節(jié)病是骨關(guān)節(jié)炎。
[0007]在另一方面，給藥所述組合物的頻率不超過每6個(gè)月一次、每5個(gè)月一次、每4個(gè)月一次、每3個(gè)月一次或每2個(gè)月一次。
[0008]在另一方面，可以通過各種給藥途徑給藥所述組合物。例如，給藥途徑可以是局部給藥(local administration)、表面給藥(topical administration)或注射給藥。在一個(gè)方面，注射給藥是關(guān)節(jié)內(nèi)注射。還在另一個(gè)方面，關(guān)節(jié)內(nèi)注射給藥的組合物是具有約50μΜ至約350 μ M DA-DKP濃度的組合物。
[0009]在另一方面，所述組合物還包含N-乙酰基色氨酸(NAT)、辛酸、辛酸鹽或其組合。在另一方面，該組合物中NAT、辛酸、辛酸鹽及其組合的濃度可以是約4mM至約20mM。
[0010]在所述方法的其它方面，DA-DKP在通過從人血清白蛋白組合物溶液去除白蛋白制備的組合物中。例如，去除的步驟可以是通過分離的方法處理人血清白蛋白組合物。該分離方法可以包括超濾(ultrafiltration)、鹿糖梯度離心(sucrose gradientcentrifugation)、色譜、鹽析和超聲處理。此外，去除的步驟可以是將人血清白蛋白組合物通過具有保留所述白蛋白的分子量截留的超濾膜，并且得到的濾液包含DA-DKP。在一個(gè)方面，所述超濾膜具有小于50kDa的分子量截留。在另一方面，該超濾膜具有小于40kDa、小于30kDa、小于20kDa、小于lOkDa、小于5kDa或小于3kDa的分子量截留。在另一方面，所述組合物還包含NAT、辛酸、辛酸鹽或其組合。在另一方面，所述組合物中NAT、辛酸、辛酸鹽及其組合的濃度可以是約4mM至約20mM。
[0011]在另一方面，本發(fā)明的方法可進(jìn)一步包括給藥第二藥物。例如，所述第二藥物可以是止痛劑、抗炎藥或其組合。
[0012]本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案是一種配制用于注射給藥的包含含DA-DKP的組合物的藥物產(chǎn)品。在一個(gè)方面，所述產(chǎn)品被配制用于關(guān)節(jié)內(nèi)注射給藥。在另一方面，所述DA-DKP是通過從人血清白蛋白組合物溶液去除白蛋白制備的。在一個(gè)方面，去除白蛋白的步驟可以是通過分離的方法處理 人血清白蛋白組合物。例如，所述分離的方法可以是超濾、蔗糖梯度離心、色譜、鹽析或超聲處理。此外，去除的步驟可以是將人血清白蛋白組合物通過具有保留所述白蛋白的分子量截留的超濾膜，并且得到的濾液包含DA-DKP。在一個(gè)方面，所述超濾膜具有小于50kDa的分子量截留。在另一方面，所述超濾膜具有小于40kDa、小于30kDa、小于20kDa、小于lOkDa、小于5kDa或小于3kDa的分子量截留。
[0013]在另一方面，關(guān)節(jié)內(nèi)注射給藥的藥物產(chǎn)品的DA-DKP是具有約50 μ M至約350 μ MDA-DKP濃度的組合物。
[0014]在另一方面，所述產(chǎn)品包含所述DA-DKP組合物，其進(jìn)一步包含NAT、辛酸、辛酸鹽或其組合。在另一方面，該產(chǎn)品中NAT、辛酸、辛酸鹽或其組合的濃度可以是約4mM至約20mM。
[0015]在另一方面，所述藥物產(chǎn)品還包含藥學(xué)上可接受的載體。
[0016]本發(fā)明的另一實(shí)施方案涉及一種試劑盒，其包含藥物產(chǎn)品。在一個(gè)方面，所述產(chǎn)品包含配制用于注射給藥的含有DA-DKP的組合物。在另一方面，該試劑盒中的DA-DKP是通過從人血清白蛋白組合物溶液中去除白蛋白制備的。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0017]圖1顯示了在一個(gè)膝蓋以單次IOml注射AmpionTM(〈500(MW級(jí)分)聯(lián)合類固醇(倍他米松(betamethasone))/利多卡因(Iidocaine)混懸液或注射生理鹽水安慰劑聯(lián)合類固醇(倍他米松)/利多卡因混懸液治療的受試者的疼痛數(shù)字評(píng)價(jià)量表(NRS)中的平均變化。得分在第I天給藥6小時(shí)后、第2天給藥24小時(shí)后和第4天給藥72小時(shí)后完成。
[0018]圖2顯示了如圖1中所描述的疼痛NRS的平均變化并包括重復(fù)測(cè)量方差分析(ANOVA)。
[0019]圖3A顯不了圖1中所描述的治療第24小時(shí)在WOMAC (Western Ontario McMasterUniversity骨關(guān)節(jié)炎指數(shù)3.1)疼痛子分?jǐn)?shù)中的絕對(duì)差。
[0020]圖3B顯示了圖1中所描述的治療第72小時(shí)在WOMAC疼痛子分?jǐn)?shù)中的絕對(duì)差。
[0021]圖4A顯示了圖1中所描述的治療第24小時(shí)在WOMAC僵硬子分?jǐn)?shù)中的絕對(duì)差。
[0022]圖4B顯示了圖1中所描述的治療第72小時(shí)在WOMAC僵硬子分?jǐn)?shù)中的絕對(duì)差。
[0023]圖5A顯示了圖1中所描述的治療第24小時(shí)在WOMAC功能子分?jǐn)?shù)中的絕對(duì)差。[0024]圖5B顯示了圖1中所描述的治療第72小時(shí)在WOMAC功能子分?jǐn)?shù)中的絕對(duì)差。
[0025]圖6顯示了一種潛在的類固醇時(shí)間進(jìn)程。
[0026]圖7顯示了隨訪圖1中所描述治療的所有受試者自基線的平均變化。(“LS”表示最小二乘法)
[0027]發(fā)明詳述
[0028]本發(fā)明提供了一種治療退行性關(guān)節(jié)病的方法。所述治療包括向有需要的個(gè)體給藥有效量的包含天冬氨?；?丙氨?；哙?DA-DKP)的藥物組合物。
[0029]DA-DKP具有多種抗炎和免疫調(diào)節(jié)作用，其包括在轉(zhuǎn)錄水平對(duì)多種促炎性細(xì)胞因子、趨化因子和信號(hào)分子的抑制，對(duì)T細(xì)胞和單核細(xì)胞遷移和粘附的抑制，在G-偶聯(lián)蛋白受體水平的活性，對(duì)肌動(dòng)蛋白依賴的細(xì)胞骨架事件的活性，血管通透性的降低，對(duì)血小板活化因子引起的炎癥的抑制。如下面更詳細(xì)的描述，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)與使用類固醇相比，DA-DKP對(duì)退行性關(guān)節(jié)病的影響意外地會(huì)持久并且在一些研究中發(fā)現(xiàn)會(huì)隨時(shí)間而增加。
[0030]本發(fā)明還提供包含DA-DKP組合物的藥物產(chǎn)品。該產(chǎn)品的DA-DKP可以通過從人血清白蛋白溶液去除白蛋白而制備。
[0031]本發(fā)明還提供了包含配制用于注射給藥的DA-DKP組合物的試劑盒。
[0032]退行性關(guān)節(jié)病是覆蓋關(guān)節(jié)的關(guān)節(jié)軟骨的逐漸退化。退行性關(guān)節(jié)病(骨關(guān)節(jié)炎)是負(fù)重關(guān)節(jié)非感染性的進(jìn)行性疾病。正常的關(guān)節(jié)軟骨是光滑、白色和半透明的。它是由包埋在海綿樣基質(zhì)中的軟骨細(xì)胞(軟骨細(xì)胞(chondrocytes))組成，該海綿樣基質(zhì)是由膠原、蛋白多糖和水構(gòu)成。早期原發(fā)性關(guān)節(jié)炎中，軟骨在表面軟化和粗糙的局部區(qū)域變成黃色和不透明。由于退化的進(jìn)展，軟區(qū)變得破裂和磨損，暴露出軟骨下的骨。然后該骨開始重塑且密度增加而任何剩余的軟骨開始磨損。最終，在關(guān)節(jié)的邊緣形成由軟骨所覆蓋的骨贅(新骨刺)。由于機(jī)械磨損增加，所述軟骨需要修復(fù)。軟骨細(xì)胞不能產(chǎn)生足夠的海綿樣基質(zhì)，因此受損的軟骨不能自我修復(fù)。所述軟骨沒有血液供應(yīng)以提高愈合。多數(shù)退行性關(guān)節(jié)病是關(guān)節(jié)內(nèi)機(jī)械不穩(wěn)定性或衰老變化的結(jié)果。這包括老年退行性關(guān)節(jié)炎，并且在較年輕的個(gè)體中，可以是例如損傷、淤傷、異常關(guān)節(jié)結(jié)構(gòu)(即髖關(guān)節(jié)發(fā)育不良)、或者由前十字韌帶斷裂、髕骨異位或剝脫性骨軟骨炎所致的機(jī)械磨損所引起的。退行性關(guān)節(jié)病可發(fā)生在身體的任何關(guān)節(jié)，包括但不限于，膝、髖、肩、手和脊柱。
[0033]退行性關(guān)節(jié)病的常規(guī)藥物治療包括對(duì)乙酰氨基酚、非留體抗炎藥(NSAIDS)、麻醉劑和皮質(zhì)類固醇。
[0034]本文中使用的“治療”是指減少(全部或部分)疾病的癥狀、持續(xù)時(shí)間或嚴(yán)重程度。
[0035]將本發(fā)明包含DA-DKP的藥物組合物給藥至有治療需要的動(dòng)物。優(yōu)選地，所述動(dòng)物是哺乳動(dòng)物，例如兔、山羊、狗、貓、馬或人。有效劑量可以根據(jù)醫(yī)學(xué)和獸醫(yī)領(lǐng)域公知的疾病或病癥的嚴(yán)重程度、給藥途徑、治療的持續(xù)時(shí)間、給藥至動(dòng)物的任何其他藥物的鑒別、動(dòng)物的年齡、大小和物種、以及類似的因素而變化。
[0036]因?yàn)楸景l(fā)明的治療對(duì)退行性關(guān)節(jié)病的癥狀提供持久的效果，本發(fā)明的一個(gè)方面是可將包含DA-DKP的組合物以比常規(guī)治療預(yù)期的更長(zhǎng)的時(shí)間間隔給藥至動(dòng)物。例如，給藥本組合物的頻率可以不超過每6個(gè)月一次、每5個(gè)月一次、每4個(gè)月一次、每3個(gè)月一次、每2個(gè)月一次、給月一次、每4周一次、每3周一次、每2周一次或每周一次。
[0037]本發(fā)明包含DA-DKP的組合物可通過任何合適的給藥途徑給藥至進(jìn)行治療的動(dòng)物患者，所述給藥途徑包括局部、胃腸外(例如，注射、關(guān)節(jié)內(nèi)注射、靜脈內(nèi)、脊柱內(nèi)、腹膜內(nèi)、皮下或肌內(nèi))、經(jīng)皮和表皮給藥。優(yōu)選的給藥途徑是關(guān)節(jié)內(nèi)注射。
[0038]本發(fā)明的組合物可以是具有約ΙΟμΜ、約20μΜ、約30μΜ、約40μΜ、約50μΜ、約60 μ Μ、約 70 μ Μ、約 80 μ Μ、約 90 μ Μ、約 100 μ Μ、約 110 μ Μ、約 120 μ Μ、約 130 μ Μ、約 140 μ Μ、約 150 μ Μ、約 160 μ Μ、約 170 μ Μ、約 180 μ Μ、約 190 μ Μ、約 200 μ Μ、約 210 μ Μ、約 220 μ Μ、約 230 μ Μ、約 240 μ Μ、約 240、約 250 μ Μ、約 260 μ Μ、約 270 μ Μ、約 280 μ Μ、約 290 μ Μ、約300 μ Μ、約 310 μ Μ、約 320 μ Μ、約 330 μ Μ、約 340 μ Μ、約 350 μ Μ、約 360 μ Μ、約 370 μ Μ、約380 μ Μ、約390 μ M或約400 μ M的下端點(diǎn)的DA-DKP濃度范圍的藥物溶液。本發(fā)明的組合物可以是具有約 600 μ M、約 580 μ Μ、約 570 μ Μ、約 560 μ Μ、約 550 μ Μ、約 540 μ Μ、約 530 μ Μ、約 520 μ Μ、約 510 μ Μ、約 500 μ Μ、約 490 μ Μ、約 480 μ Μ、約 470 μ Μ、約 460 μ Μ、約 450 μ Μ、約 440 μ Μ、約 430 μ Μ、約 420 μ Μ、約 410 μ Μ、約 400 μ Μ、約 390 μ Μ、約 380 μ Μ、約 370 μ Μ、約 360 μ Μ、約 350 μ Μ、約 340 μ Μ、約 330 μ Μ、約 320 μ Μ、約 310 μ Μ、約 300 μ Μ、約 290 μ Μ、約280 μ Μ、約 270 μ Μ、約 260 μ Μ、約 250 μ Μ、約 240 μ Μ、約 230 μ Μ、約 220 μ Μ、約 210 μ M 或約200 μ M的上端點(diǎn)的DA-DKP濃度范圍的藥物溶液。
[0039]用于治療退行性關(guān)節(jié)病或病癥的本發(fā)明的組合物中DA-DKP的有效量可以是具有約 10 μ g、約 15 μ g、約 20 μ g、約 25 μ g、約 30 μ g、約 35 μ g、約 40 μ g、約 45 μ g、約 50 μ g、約 55 μ g、約 60 μ g、約 65 μ g、約 70 μ g、約 75 μ g、約 80 μ g、約 85 μ g、約 90 μ g、約 95 μ g、約 100 μ g、約 110 μ g、約 120 μ g、約 130 μ g、約 140 μ g、約 150 μ g、約 160 μ g、約 170 μ g、約 180 μ g、約 190 μ g、200 μ g、約 210 μ g、約 220 μ g、約 230 μ g、約 240 μ g、約 250 μ g、約260 μ g、約 270 μ g、約 280 μ g、約 290 μ g、約 300 μ g、約 310 μ g、約 320 μ g、約 330 μ g、約340 μ g、約 350 μ g、約 360 μ g、約 370 μ g、約 380 μ g、約 390 μ g、約 400 μ g、約 425 μ g、約450 μ g、約475 μ g或500 μ g的下端點(diǎn)的范圍。此外，用于治療退行性關(guān)節(jié)病或病癥的本發(fā)明的組合物中DA-DKP的有效量可以是具有約500 μ g、約490 μ g、約480 μ g、約470 μ g、約 460 μ g、約 450 μ g、約 440 μ g、約 430 μ g、約 420 μ g、約 410 μ g、約 400 μ g、約 390 μ g、約 380 μ g、約 370 μ g、約 360 μ g、約 350 μ g、約 340 μ g、約 330 μ g、約 320 μ g、約 310 μ g、約 300 μ g、約 290 μ g、約 280 μ g、約 270 μ g、約 260 μ g、約 250 μ g、約 240 μ g、約 230 μ g、約 220 μ g、約 210 μ g、約 200 μ g、約 190 μ g、約 180 μ g、約 170 μ g、約 160 μ g、約 150 μ g、約140 μ g、約 130 μ g、約 120 μ g、約 110 μ g、約 100 μ g、約 90 μ g、約 80 μ g、約 70 μ g、約 60 μ g、約50 μ g、約40 μ g、約30 μ g、約20 μ g的上端點(diǎn)的范圍。
[0040]表皮或經(jīng)皮給藥的本發(fā)明化合物的劑型包括散劑、噴霧劑、軟膏劑、糊劑、乳劑、洗劑、凝膠劑、溶液劑、貼劑和滴劑?；钚猿煞挚梢耘c藥學(xué)上可接受的載體和任何緩沖劑或可能需要的揮發(fā)劑在無菌條件下混合。
[0041]除活性成分外，軟膏劑、糊劑、乳劑和凝膠劑可以包含賦形劑，如動(dòng)物和植物脂肪、油類、蠟類、石蠟、淀粉、黃蓍膠、纖維素衍生物、聚乙二醇、硅酮、膨潤(rùn)土、硅酸、滑石和氧化鋅或其混合物。
[0042]除活性成分外，散劑和噴霧劑可以含有賦形劑如乳糖、滑石、硅酸、氫氧化鋁、硅酸鈣和聚酰胺粉末或其混合物。噴霧劑還可以包含常規(guī)的揮發(fā)劑，例如氯氟烴和揮發(fā)性的未取代的烴類，如丁烷和丙烷。
[0043]透皮貼劑具有向身體提供本發(fā)明的化合物的可控遞送的額外優(yōu)勢(shì)。該劑型可以通過在適當(dāng)?shù)慕橘|(zhì)，如彈性基質(zhì)材料中溶解、分散或以其他方式摻入本發(fā)明的一種或多種化合物制成。吸收促進(jìn)劑也可以用于增加所述化合物通過皮膚的通量。這種通量速率可通過提供速率控制膜或者在聚合物基質(zhì)或凝膠中分散該化合物進(jìn)行控制。
[0044]適于胃腸外給藥的本發(fā)明的藥物組合物包含一種或多種本發(fā)明的化合物以及一種或多種藥學(xué)上可接受的無菌等滲水或非水溶液、分散液、混懸液或乳狀液或可在使用前配制成無菌可注射的溶液或分散液的無菌粉末，其可以包含抗氧化劑、緩沖劑、使制劑與預(yù)期接受者血液等滲的溶質(zhì)或懸浮劑或增稠劑。
[0045]可在本發(fā)明的藥物組合物中使用的合適的水性和非水性載體的實(shí)例包括水、乙醇、多元醇(如甘油、丙二醇、聚乙二醇等)、及其合適的混合物、植物油，如橄欖油、和可注射的有機(jī)酯，如油酸乙酯。例如，可通過使用包衣材料，如卵磷脂，可通過在分散液中維持所要求的粒徑，以及可通過使用表面活性劑來保持適當(dāng)?shù)牧鲃?dòng)性。
[0046]這些組合物還可以含有佐劑，例如潤(rùn)濕劑、乳化劑和分散劑。也可能需要在組合物中包含等滲劑，例如糖、氯化鈉等。此外，可以通過包含延遲吸收的物質(zhì)，例如單硬脂酸鋁和明膠來實(shí)現(xiàn)可注射的藥物形式的延長(zhǎng)吸收。
[0047]在一些情況下，為了延長(zhǎng)藥效，期望延緩藥物從皮下或肌內(nèi)注射的吸收。這可以通過使用水溶性差的結(jié)晶或無定形物質(zhì)的液體混懸液來實(shí)現(xiàn)。該藥物的吸收率取決于其溶解率，反過來這又可能取決于晶體大小和晶型?；蛘?，胃腸外給藥藥物的延遲吸收可通過將所述藥物在油載體中溶解或混懸來實(shí)現(xiàn)。
[0048]可注射的儲(chǔ)存形式是通過在生物可降解的聚合物，如聚丙交酯-聚乙交酯中形成藥物的微囊基質(zhì)制成的。依賴于藥物與聚合物的比例，以及使用的特定聚合物的性質(zhì)，藥物釋放的速率是可以 控制的。其它生物可降解聚合物的實(shí)例包括聚(原酸酯)和聚(酸酐)。儲(chǔ)存可注射制劑也可以通過在與身體組織相容的脂質(zhì)體或微乳中包封該藥物制備?？勺⑸涞牟牧峡蛇M(jìn)行滅菌，例如通過細(xì)菌截留濾器過濾。
[0049]所述制劑可以存在于單一劑量或多劑量的密封容器中，例如安瓿和小瓶，并且可以存儲(chǔ)于凍干條件下，僅需要加入無菌液體載體，例如注射用水，便可立即使用。臨時(shí)注射溶液和混懸液可以由上述類型的無菌粉末、顆粒和片劑制備。
[0050]也提供包含本發(fā)明的醫(yī)藥產(chǎn)品的試劑盒。所述試劑盒可包含配制用于注射給藥的DA-DKP組合物?？梢匀绫疚乃鲋苽銬A-DKP，例如通過從人白蛋白組合物的溶液中去除白蛋白。所述試劑盒可以包含單一劑量或多劑量的密封容器，例如安瓿和小瓶，并且可以存儲(chǔ)于凍干條件下，僅需要加入無菌液體載體，例如注射用水，便可立即使用。所述試劑盒也可以存儲(chǔ)于其中的內(nèi)容物已準(zhǔn)備好用于直接使用或注射的條件。
[0051]雖然有可能單獨(dú)給藥本發(fā)明的化合物，優(yōu)選的是給藥作為藥物制劑(組合物)的所述化合物。本發(fā)明的藥物組合物包含作為活性成分的本發(fā)明的化合物與一種或多種藥學(xué)上可接受的載體和，任選地，一種或多種其他化合物、藥物或其它材料混合。每種載體必須是“可接受的”，即與制劑中的其它成分相容且不會(huì)有害于動(dòng)物。藥學(xué)上可接受的載體是本領(lǐng)域熟知的。無論選擇何種給藥途徑，本發(fā)明的化合物可通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的常規(guī)方法配制成藥學(xué)上可接受的劑型。參見例如，Remington’ s Pharmaceutical Sciences。
[0052]本發(fā)明的組合物可進(jìn)一步包含N-乙?；彼?NAT)、辛酸、辛酸鹽或其組合。優(yōu)選地，所述組合物可包含NAT。本發(fā)明具有NAT、辛酸、辛酸鹽或其組合的組合物可為具有約ImM、約 2mM、約 3mM、約 4mM、約 5mM、約 6mM、約 7mM、約 8mM、約 9mM、約 10mM、約 llmM、約 12mM、約13mM、約14mM、約15mM、約16mM、約17mM、約18mM、約19mM或20mM的下端點(diǎn)的濃度范圍的NAT、辛酸、辛酸鹽或其組合的藥物組合物。此外，本發(fā)明具有NAT、辛酸、辛酸鹽或其組合的組合物可為具有約40mM、約39mM、約38mM、約37mM、約36mM、約35mM、約34mM、約33mM、約32mM、約 3 ImM、約 30mM、約 29mM、約 28mM、約 27mM、約 26mM、約 25mM、約 24mM、約 23mM、約 22mM或約21mM的上端點(diǎn)的濃度范圍的NAT、辛酸、辛酸鹽或其組合的藥物組合物。優(yōu)選地，所述濃度范圍是約4mM至約20mM。
[0053]此外，本發(fā)明的組合物還可以包含第二種藥物，例如鎮(zhèn)痛劑(如利多卡因(Iidocaine)或撲熱息痛(paracetoamol)、抗炎藥(如倍他米松、非甾體抗炎藥(NSAIDs)、對(duì)乙酰氨基酹、布洛芬(ibuprofen)、萘普生(naproxen))和/或其他合適的藥物。
[0054]制備二酮哌嗪，如DA-DKP的方法是本領(lǐng)域熟知的，并且這些方法可用于合成本發(fā)明的二酮哌嗪類。參見，例如，美國專利N0.4, 694, 081,5,817, 751,5,990, 112、5，932，579 和 6，555，543，美國專利申請(qǐng)公開 N0.2004/0024180，PCT 申請(qǐng) N0.W096/00391 和W097/48685,以及 Smith 等人，Bioorg.Med.Chem.Letters, 8，2369-2374(1998)，其公開內(nèi)容全部引入本文作為參考。
[0055]例如，二酮哌嗪類，如DA-DKP，可以首先通過合成二肽制備。所述二肽可以通過本領(lǐng)域熟知的方法使用的L-氨基酸、D-氨基酸或D-和L-氨基酸的組合合成。優(yōu)選的是固相肽合成方法。當(dāng)然，二肽也可購自多種來源，包括DMI Synthesis Ltd., Cardiff, UK (customsynthesis), Sigma-Aldrich, St.Louis, MO(primarily custom synthesis), Phoenix Pharmaceuticals, Inc., Belmont,CA (custom synthesis), Fisher Scientific (customsynthesis)and Advanced ChemTech, Louisville, KY0
[0056]一旦合成或 購買了二肽，將其環(huán)化形成二酮哌嗪。這可以通過各種技術(shù)實(shí)現(xiàn)。例如，美國專利申請(qǐng)公開N0.2004/0024180描述了環(huán)化二肽的方法。簡(jiǎn)而言之，在有機(jī)溶劑中加熱所述二肽同時(shí)通過蒸餾去除水。優(yōu)選地，所述有機(jī)溶劑是低沸點(diǎn)與水共沸物，如乙腈、烯丙醇、苯、苯甲醇、正丁醇、2-丁醇、叔丁醇、乙酸丁酯、四氯化碳、氯苯氯仿、環(huán)己烷、1，2- 二氯乙烷、二乙基縮醛、二甲基乙縮醛、乙酸乙酯、庚烷、甲基異丁基酮、3-戊醇、甲苯和二甲苯。溫度取決于環(huán)化反應(yīng)發(fā)生的反應(yīng)速度和所使用的共沸劑的類型。該反應(yīng)優(yōu)選在50-2000C，更優(yōu)選在80-150°C進(jìn)行。環(huán)化反應(yīng)發(fā)生的pH值范圍可以由本領(lǐng)域技術(shù)人員很容易地確定。2-9將是有利的，優(yōu)選3-7。
[0057]當(dāng)二肽的一種或兩種氨基酸在其側(cè)鏈上具有，或者是衍生具有，羧基(例如天冬氨酸或谷氨酸)時(shí)，則優(yōu)選如美國專利N0.6，555，543中所描述環(huán)化該二肽。簡(jiǎn)而言之，將側(cè)鏈羧基仍受保護(hù)的二肽在中性條件加熱。通常，將二肽在約80°C至約180°C加熱，優(yōu)選在約120°C。所述溶劑是中性溶劑。例如，所述溶劑可包括醇(如丁醇、甲醇、乙醇和高級(jí)醇，但不苯酚)和共沸共溶劑(如甲苯、苯或二甲苯等)。優(yōu)選地，所述醇是丁-2-醇，和所述共沸共溶劑是甲苯。持續(xù)加熱直至反應(yīng)完全，這樣的時(shí)間可以根據(jù)經(jīng)驗(yàn)確定。通常，將該二肽通過回流約8-24小時(shí)，優(yōu)選約18小時(shí)進(jìn)行環(huán)化。最后，從所述二酮哌嗪去除保護(hù)基團(tuán)。在這樣做時(shí)，為了保持最終化合物的手性，應(yīng)避免使用強(qiáng)酸(無機(jī)酸，如硫酸或鹽酸)、強(qiáng)堿(堿，如氫氧化鉀或氫氧化鈉)和強(qiáng)還原劑(例如，氫化鋁鋰)。
[0058]固相樹脂上制備的二肽可以經(jīng)一個(gè)步驟環(huán)化并從該樹脂釋放。參見，例如，美國專利N0.5，817，751。例如，在乙酸(例如1%)或三乙胺(例如4%)存在下，將具有N-烷基化二肽連接的樹脂懸浮于甲苯或甲苯/乙醇。通常，基本的環(huán)化條件是優(yōu)選環(huán)化時(shí)間更快的。
[0059]環(huán)化二肽和制備二酮哌嗪的其他方法是本領(lǐng)域已知的，并且可以用在本發(fā)明的實(shí)踐中制備有用的二酮哌嗪。參見，例如，上面所列的那些參考。此外，適用于本發(fā)明的許多二酮哌嗪可如下面描述的由蛋白質(zhì)和肽制成。此外，用于本發(fā)明的實(shí)踐的二酮哌嗪可由市售購得，例如，DMI Synthesis Ltd.，Cardiff, UK(委托合成)。
[0060]本發(fā)明的DA-DKP組合物和/或產(chǎn)品可以通過熟知的方法從含有DA-DKP的溶液，包括從市售的含白蛋白(例如人血清白蛋白)的藥物組合物制備，所述方法例如超濾、色譜(分子排阻色譜(例如，Centricon過濾)、親合色譜(例如使用在珠粒上附有針對(duì)期望的二酮哌嗪類的一種或多種抗體或針對(duì)截短的蛋白或肽的一種或多種抗體的柱子)、陰離子交換或陽離子交換、蔗糖梯度離心、色譜法、鹽析或超聲處理，這將去除溶液中一些或全部的白蛋白。所得的含DA-DKP的組合物和/或產(chǎn)物可以被使用或用于如上所述的藥物組合物中。
[0061]使用超濾分離法，可以將人血清白蛋白組合物通過具有保留白蛋白的分子量截留的超濾膜，同時(shí)DA-DKP進(jìn)入到得到的濾液或級(jí)分。該濾液可包含具有分子量小于約50kDa、小于約40kDa、小于30kDa、小于約20kDa、小于約lOkDa、小于約5kDa、小于約3kDa的組分。優(yōu)選地，該濾液包含具有分子量小于約OTa (也稱為“<500(MW”)的組分。這個(gè)〈5000MW的級(jí)分或?yàn)V液包含DA-DKP，其是在二肽天冬氨酸-丙氨酸從白蛋白裂解并隨后環(huán)化成二酮哌嚷后形成的。
[0062]本發(fā)明的DA-DKP的生理上可接受的鹽也可用于本發(fā)明的實(shí)踐中。生理上可接受的鹽包括常規(guī)的非毒性鹽，例如從無機(jī)酸(如鹽酸、氫溴酸、硫酸、磷酸、硝酸等)、有機(jī)酸(如乙酸、丙酸、琥珀酸、乙醇酸、硬脂酸、乳酸、蘋果酸、酒石酸、檸檬酸、谷氨酸、天冬氨酸、苯甲酸、水楊酸、草酸、抗壞血酸等)或堿(如氫氧化物，藥學(xué)上可接受的金屬陽離子或衍生自N，N-二芐基乙二胺、D-葡糖胺或乙二胺的有機(jī)陽離子的碳酸鹽或碳酸氫鹽)衍生的鹽。這些鹽以常規(guī)的方法制備，例如，通過用酸中和化合物的游離堿形式。
[0063]在本文中使用的“一”或“一個(gè)”表示一個(gè)或多個(gè)。
[0064]在本文中使用的“包括”和“包含”包括了其范圍內(nèi)的所有限定的術(shù)語，例如“基本
上由......組成”和“由......組成”，作為在本文中通過“包括”或“包含”表征的本發(fā)明
替代實(shí)施方案。關(guān)于“基本上由......組成”的使用，該短語將權(quán)利要求的范圍限定到指
定的步驟和材料，以及對(duì)本文所公開的本發(fā)明的基本的和新穎性特征不會(huì)產(chǎn)生實(shí)質(zhì)影響的那些步驟和材料。
[0065]通過考慮下述非限制性實(shí)施例，本發(fā)明其它主題、優(yōu)點(diǎn)和新穎性特征對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是顯然的。提供下面的實(shí)驗(yàn)結(jié)果是用于說明的目的而非旨在限制本發(fā)明的范圍。
實(shí)施例
[0066]實(shí)施例1
[0067]為了研究關(guān)節(jié)內(nèi)膝蓋注射〈5000麗級(jí)分的人血清白蛋白(本文中也稱作“Ampion?”)以改善關(guān)節(jié)功能并降低膝骨關(guān)節(jié)炎疼痛的效果，進(jìn)行了臨床試驗(yàn)。選擇60名可評(píng)估的受試者進(jìn)行隨機(jī)、安慰劑對(duì)照、雙盲平行研究作為合適的設(shè)計(jì)來評(píng)估當(dāng)被注入到所研究的膝蓋中時(shí)，〈5000MW級(jí)分的治療效果和安全性。
[0068]主要目的:
[0069]是為了研究與〈5000MW級(jí)分聯(lián)合倍他米松混懸液相比，或與生理鹽水安慰劑聯(lián)合利多卡因/倍他米松混懸液相比，單次IOml關(guān)節(jié)內(nèi)注射含〈5000MW級(jí)分聯(lián)合利多卡因/倍他米松混懸液的對(duì)膝骨關(guān)節(jié)炎受試者疼痛的減輕。
[0070]次要目的:
[0071]研究膝骨關(guān)節(jié)炎受試者的關(guān)節(jié)功能和疼痛，通過Western Ontario McMasterUniversity Osteoarthritis (WOMAC)指數(shù)(Bellamy 等人，“Validation study of WOMAC: ahealth status instrument for measuring clinically important patient relevantoutcomes to antirheumatic drug therapy in patients with osteoarthritis of thehip or knee.” J Rheumatology 1988; 15:1833 - 1840)評(píng)估與〈5000MW 級(jí)分聯(lián)合倍他米松混懸液相比，或與生理鹽水 安慰劑聯(lián)合利多卡因/倍他米松混懸液相比，單次關(guān)節(jié)內(nèi)注射〈5000MW級(jí)分聯(lián)合利多卡因/倍他米松混懸液。
[0072]研究與〈5000MW級(jí)分聯(lián)合倍他米松混懸液相比，或與生理鹽水安慰劑聯(lián)合利多卡因/倍他米松混懸液相比，單次IOml關(guān)節(jié)內(nèi)注射〈5000MW級(jí)分聯(lián)合利多卡因/倍他米松混懸液后，膝骨關(guān)節(jié)炎受試者中對(duì)急救藥物的需要。
[0073]研究與〈5000MW級(jí)分聯(lián)合倍他米松混懸液相比，或與生理鹽水安慰劑聯(lián)合利多卡因/倍他米松混懸液相比，單次IOml關(guān)節(jié)內(nèi)注射〈5000MW級(jí)分聯(lián)合利多卡因/倍他米松混懸液后，對(duì)膝骨關(guān)節(jié)炎受試者運(yùn)動(dòng)范圍的影響以及對(duì)所研究的疼痛和炎癥膝關(guān)節(jié)中所限制的運(yùn)動(dòng)范圍的影響。
[0074]如在研究的人群中報(bào)道的不良反應(yīng)所評(píng)估的，來比較治療之間的安全性和耐受性。
[0075]方案描述
[0076]本研究是一項(xiàng)隨機(jī)、安慰劑對(duì)照、雙盲、平行研究，旨在評(píng)估關(guān)節(jié)內(nèi)膝注射〈5000MW級(jí)分對(duì)經(jīng)6個(gè)月持續(xù)篩查具有癥狀性原發(fā)膝骨關(guān)節(jié)炎的> 40歲的男性或女性受試者的效果。本研究由3周的篩查期和4天研究參與期組成。每名受試者被隨機(jī)分組接受以下一種的單次IOmL膝蓋注射:
[0077]〈5000MW級(jí)分聯(lián)合利多卡因/倍他米松混懸液
[0078]<5000MW級(jí)分聯(lián)合倍他米松混懸液
[0079]生理鹽水安慰劑聯(lián)合利多卡因/倍他米松混懸液
[0080]研究者對(duì)給藥后檢查滿意之后允許受試者離開診所。在注射后6小時(shí)、24小時(shí)(2天)和72小時(shí)(4天)進(jìn)行后續(xù)評(píng)估。是在診所或以外(如家訪)進(jìn)行這些評(píng)估，由研究
者慎重決定。
[0081]參與研究的持續(xù)時(shí)間:
[0082]篩選:第21天與第I天之間。
[0083]治療期:在所研究的膝蓋單次注射及臨床隨訪超過72小時(shí)，包括第I天給藥，和第2天和第4天的隨訪。
[0084]每名受試者參與研究的總時(shí)間大約為72小時(shí)，以及長(zhǎng)達(dá)21天的篩查間隔。[0085]治療研究
[0086]每名受試者的一個(gè)膝蓋接受下述一種治療方法的單次IOmL注射:
[0087]〈5000MW級(jí)分聯(lián)合利多卡因/倍他米松混懸液
[0088]〈5000MW級(jí)分聯(lián)合倍他米松混懸液
[0089]生理鹽水安慰劑聯(lián)合利多卡因/倍他米松混懸液
[0090]研究人群
[0091]研究人群為60名患者、男性或女性、40-85歲、完全臥床、篩選前具有癥狀性原發(fā)膝骨關(guān)節(jié)炎超過6個(gè)月、具有Kellgren Lawrence II級(jí)或III級(jí)。
[0092]研究廣品描述
[0093]在橡膠塞儲(chǔ)藏小瓶中的無菌2mL〈5000MV級(jí)分由Sypharma Pty Ltd., Dandenong, Victoria, Australia制備。在注射前以雙盲的方式將〈5000MW級(jí)分與利多卡因/倍他米松混懸液或者倍他米松混懸液聯(lián)合。生理鹽水安慰劑聯(lián)合利多卡因/倍他米松混懸液作為第三治療組給藥。參見表1
[0094]表1:研究產(chǎn)品組分
[0095]
【權(quán)利要求】
1.一種治療退行性關(guān)節(jié)病的方法，所述方法包括向有需要的動(dòng)物給藥有效量的包含DA-DKP的藥物組合物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述退行性關(guān)節(jié)病是骨關(guān)節(jié)炎。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中給藥所述組合物的頻率不超過每6個(gè)月一次、每5個(gè)月一次、每4個(gè)月一次、每3個(gè)月一次或每2個(gè)月一次。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述組合物通過以下給藥途徑給藥:局部給藥、表面給藥或注射。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其中所述注射給藥是關(guān)節(jié)內(nèi)注射。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中通過關(guān)節(jié)內(nèi)注射給藥的組合物是具有約50μ M至約350 μ M的DA-DKP濃度的組合物。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述組合物還包含N-乙酰基色氨酸(NAT)、辛酸、辛酸鹽或其組合。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中所述組合物是具有約4mM至約20mM的NAT、辛酸、辛酸鹽及其組合濃度的組合物。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述DA-DKP在通過從人血清白蛋白組合物溶液去除白蛋白制備的組合物中。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其中去除白蛋白的步驟包括通過選自以下分離方法處理人血清白蛋白組合物:超濾、蔗糖梯度離心、色譜、鹽析和超聲處理。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其中去除的步驟包括將人血清白蛋白組合物通過具有分子量截留的超濾膜，所述分子量截留使得所述白蛋白被保留，其中得到的濾液包含DA-DKP。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法，其中超濾膜具有小于50kDa、小于40kDa、小于30kDa、小于20kDa、小于lOkDa、小于5kDa或小于3kDa的分子量截留。
13.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其中所述組合物還包含NAT、辛酸、辛酸鹽或其組合。
14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的方法，其中所述組合物是具有約4mM至約20mMNAT、辛酸、辛酸鹽及其組合濃度的組合物。
15.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述藥物組合物還包括選自以下的第二藥物:止痛劑、抗炎藥或其組合。
16.藥物產(chǎn)品，其包含配制用于注射給藥的含DA-DKP的組合物。
17.根據(jù)權(quán)利要求16所述的藥物產(chǎn)品，其中所述產(chǎn)品被配制用于關(guān)節(jié)內(nèi)注射給藥。
18.根據(jù)權(quán)利要求16所述的藥物產(chǎn)品，其中DA-DKP通過從人血清白蛋白組合物溶液去除白蛋白而制備。
19.根據(jù)權(quán)利要求18所述的藥物產(chǎn)品，其中去除白蛋白的步驟包括通過選自以下分離方法處理人血清白蛋白組合物:超濾、蔗糖梯度離心、色譜、鹽析和超聲處理。
20.根據(jù)權(quán)利要求19所述的藥物產(chǎn)品，其中去除的步驟包括將人血清白蛋白組合物通過具有分子量截留的超濾膜，所述分子量截留使得所述白蛋白被保留，得到的濾液包含DA-DKP。
21.根據(jù)權(quán)利要求20所述的藥物產(chǎn)品，其中所述超濾膜具有小于50kDa、小于40kDa、小于30kDa、小于20kDa、小于lOkDa、小于5kDa或小于3kDa的分子量截留。
22.根據(jù)權(quán)利要求17所述的藥物產(chǎn)品，其中通過關(guān)節(jié)內(nèi)注射給藥的DA-DKP是具有約50 μ M至約350 μ M DA-DKP濃度的組合物。
23.根據(jù)權(quán)利要求16所述的藥物產(chǎn)品，其中所述DA-DKP組合物還包含NAT、辛酸、辛酸鹽或其組合。
24.根據(jù)權(quán)利要求23所述的藥物產(chǎn)品，其中所述組合物是具有約4mM至約20mMNAT、辛酸、辛酸鹽及其組合濃度的組合物。
25.根據(jù)權(quán)利要求16所述的藥物產(chǎn)品，其還包含藥學(xué)上可接受的載體。
26.試劑盒，其包含藥物產(chǎn)品，所述產(chǎn)品包含配制用于注射給藥的含有DA-DKP的組合物。
27.根據(jù)權(quán)利要求26所述的試劑盒，其中所述DA-DKP通過從人血清白蛋白組合物溶液中去除白蛋白而制備。
【文檔編號(hào)】A61P19/02GK103841987SQ201280047779
【公開日】2014年6月4日 申請(qǐng)日期:2012年10月10日 優(yōu)先權(quán)日:2011年10月10日
【發(fā)明者】D.巴-奧, J.V.溫克勒 申請(qǐng)人:安皮奧制藥股份有限公司