專利名稱：海蘆筍阿魏酸酯化合物及其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于海洋生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及海蘆筍阿魏酸酯化合物及其制備方法和用途。
背景技術(shù)：
鹽生海蘆笑俗稱海蓬子或海豆,學(xué)名鹽角草(Salicornia bigelovii),是一種鮮美多汁、口感咸脆的綠色海水蔬菜。研究證實海蘆筍降低血壓、血脂，促進脂肪向肌肉細胞轉(zhuǎn)化，促進肝臟的新陳代謝，提高人體免疫力及預(yù)防帕金森病。體外活性研究表明，海蘆筍提取物具有顯著的抗氧化活性和抗腫瘤活性。阿魏酸是植物界普遍存在的一種酚酸，在植物中主要與細胞壁多糖和木質(zhì)素交聯(lián)構(gòu)成細胞壁的一部分，是當(dāng)歸、川芎等中藥的有效成分之一。由于其具有抗氧化活性和抑菌作用、且毒性較低，因而在醫(yī)藥、保健品、化妝品原料和食品添加劑等方面有著廣泛的用途。有文獻報道稱，阿魏酸及其衍生物具有抗血拴、降血脂、消炎、防癌等生物活性。研究表明，阿魏酸鈉和阿魏酸酯是阿魏酸的主要衍生物，這兩種衍生物基本上保持了阿魏酸的生物學(xué)特性，而且，經(jīng)過分子改造得到的阿魏酸衍生物比阿魏酸有著更強的生理活性和較低的毒性，這是由于阿魏酸分子中烷烴較短而且含有雙鍵，親水性強難以深入生物膜脂質(zhì)雙分子層結(jié)構(gòu)中發(fā)揮抗氧化活性。目前，某些人工合成的抗氧化劑如二叔丁基對甲酚、叔丁基對苯二酚等會產(chǎn)生毒性物質(zhì)，具有致癌性。所以，為了保護人體免受自由基的損傷并且延緩慢性疾病的發(fā)生，從植物中尋找高效無副作用的天然自由基清除劑具有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明旨在提供一種結(jié)構(gòu)獨特的具有強抗氧化活性的新天然產(chǎn)物。本發(fā)明的目的還在于提供一類新天然產(chǎn)物的制備方法及其新化合物在制備天然自由基清除劑中的用途。海蘆筍阿魏酸酯化合物，即阿魏酸十五烷酯，結(jié)構(gòu)式如式(I )所示
O
4 ^ —
HO
5式(I)分子中含有長鏈烷烴結(jié)構(gòu)，由一分子阿魏酸與一分子十五烷醇縮合形成，是阿魏酸的衍生物之一。本發(fā)明所述的阿魏酸十五烷酯的制備方法，將新鮮采摘的海蘆筍搗碎，以體積比為15飛:2的丙酮與水萃取2 3次，取丙酮層，抽濾，真空濃縮得到丙酮提取物；然后，將丙酮提取物用乙酸乙酯萃取2 3次，取乙酸乙酯層，真空濃縮得到乙酸乙酯提取物；乙酸乙酯提取物經(jīng)300 400目常壓硅膠柱，用石油醚-丙酮-甲醇梯度洗脫分離，洗脫組分真空濃縮后經(jīng)薄層色譜法檢測后，將Rf值相同，遇5%的硫酸溶液顯色劑顯色相同的合并，得到4個組分Fr. I、Fr. 2、Fr. 3、Fr. 4，其中Fr. 3顯黑色；取組分Fr. 3經(jīng)常壓硅膠柱，體積比為10(Γ80:1的環(huán)己烷-乙酸乙酯洗脫，經(jīng)薄層色譜法檢測得到遇5 %的硫酸溶液顯色劑顯黑色的組分Fr. 3-1, Fr. 3-1用Sephadex LH_20純化,體積比I 2:1的氯仿-甲醇洗脫，經(jīng)薄層色譜法檢測得到遇5%的硫酸溶液顯色劑顯黑色的組分Fr. 3-1-1，組分Fr. 3-1-1再經(jīng)常壓硅膠柱分離，體積比50:1的環(huán)己烷-乙酸乙酯洗脫，薄層色譜法檢測，得到Rf = O. 4的組分即為式(I)化合物。本發(fā)明所述的阿魏酸十五烷酯的制備方法，優(yōu)選將新鮮采摘的海蘆筍搗碎，以體積比為8:2的丙酮與水萃取三次，取丙酮層，抽濾，真空濃縮得到丙酮提取物；然后，將丙酮提取物用乙酸乙酯萃取三次，取乙酸乙酯層，真空濃縮得到乙酸乙酯提取物；乙酸乙酯提取物經(jīng)300 400目常壓硅膠柱，用石油醚-丙酮-甲醇梯度洗脫分離，洗脫組分真空濃縮后經(jīng)薄層色譜法檢測后，將Rf值相同，遇5%的硫酸溶液顯色劑顯色相同的合并，得到4個組分Fr. I、Fr. 2、Fr. 3、Fr. 4，其中Fr. 3顯黑色；取組分Fr. 3經(jīng)常壓硅膠柱，體積比為100:1的環(huán)己烷-乙酸乙酯洗脫，經(jīng)薄層色譜法檢測得到遇5%的硫酸溶液顯色劑顯黑色的組分Fr. 3-1, Fr. 3-1用Sephadex LH-20純化,體積比I: I的氯仿_甲醇洗脫，經(jīng)薄層色譜法檢測得到遇5%的硫酸溶液顯色劑顯黑色的組分Fr. 3-1-1，組分Fr. 3-1-1再經(jīng)常壓硅膠柱分離，體積比50:1的環(huán)己烷-乙酸乙酯洗脫，薄層色譜法檢測，得到Rf = O. 4的組分即為式(I)化合物。其中，所述的石油醚-丙酮-甲醇梯度洗脫的梯度為開始純石油醚洗脫，逐漸增加丙酮比例，減少石油醚比例，直到純丙酮洗脫，再逐漸增加甲醇比例，減少丙酮比例，直到純甲醇洗脫。所述的薄層色譜法為(I)顯色劑5%的硫酸溶液(乙醇配置)；(2)展開劑環(huán)己烷乙酸乙酯=10 :1，式(I )化合物所在斑點顯黑色，可根據(jù)TLC斑點顯色對式(I )化合物進彳了追蹤。所述的常壓硅膠柱的硅膠目數(shù)為300 400目。本發(fā)明所述的阿魏酸十五烷酯在制備抗氧化劑和/或天然自由基清除劑中的應(yīng)用。有益效果本發(fā)明從海蘆筍中分離出的阿魏酸十五烷酯為首次從天然資源中得到的化合物，具有強氧化活性及很強的清除自由基活性，可作為海蘆筍中的標(biāo)志性抗氧化活性成分和天然自由基清除劑。


圖I不同濃度下阿魏酸十五烷酯的總抗氧化活性圖2不同濃度下阿魏酸十五烷酯的DPPH自由基清除活性圖3不同濃度下阿魏酸十五烷酯的超氧陰離子清除活性
具體實施例方式實施例I化合物的制備新鮮采摘的海蘆筍26. 4kg，用勻漿攪拌機搗碎，置于20L的容量瓶中，加8:2的丙酮與水進行萃取，放置24h，萃取三次。用布氏漏斗抽濾，得到的溶液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀在30°C真空濃縮得丙酮提取物。然后，丙酮提取物用乙酸乙酯萃取三次，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀在30°C真空濃縮得乙酸乙酯層提取物。乙酸乙酯層(71g)用50g硅膠干法拌樣后上裝有200g硅膠(300-400目)的常壓柱，用石油醚-丙酮-甲醇梯度洗脫分離，即開始純石油醚洗脫，逐漸增加丙酮比例，減少石油醚比例，直到純丙酮洗脫，再逐漸增加甲醇比例，減少丙酮比例，直到純甲醇洗脫。洗脫的組分真空濃縮后進行TLC檢測，TLC條件為(I)顯色劑為5%的硫酸溶液，溶劑為乙醇；(2)展開劑環(huán)己烷乙酸乙酯=10 1 ;將Rf值相同，遇硫酸顯色劑顯色相同的進行合并，得到4個組分，分別用Fr. I、Fr. 2、Fr. 3和Fr. 4表示，其中，F(xiàn)r. 3顯黑色。
組分Fr. 3 (2. 2g)，進一步上常壓硅膠柱，環(huán)己烷-乙酸乙酯(體積比100:1)洗脫，TLC檢測，條件同上，將Rf值相同，遇硫酸顯色劑顯色相同的進行合并，得到組分Fr. 3-1和Fr. 3-2，其中，組分Fr. 3-1遇硫酸顯黑色；組分Fr. 3-1用S印hadex LH-20純化，氯仿-甲醇(體積比1:1)洗脫，TLC檢測，條件同上，得到遇硫酸顯黑色的組分Fr. 3-1-1，組分Fr. 3-1-1繼續(xù)用常壓硅膠柱(300-400目)分離，環(huán)己烷-乙酸乙酯(體積比50:1)洗脫，得純化合物，TLC檢測，條件同上，得到Rf = O. 4，遇硫酸顯黑色的斑點，即為式(I )化合物阿魏酸十五烷酯(30. 5mg)。阿魏酸十五烷酯黃色固體；陽離子低分辨ESI-MS m/z 405[M+H]+ ；UVAmax(CH3OH)nm(log ε )214,236,320 ；IR_KBr, cnT1) :3416,3204,2042,1700，1678，1585，1510，1431，1300，1263，1168，1123，1033,730,632 及 13C NMR 數(shù)據(jù)見表 I。表I化合物的核磁數(shù)據(jù)
權(quán)利要求
1.阿魏酸十五烷酯，其特征在于結(jié)構(gòu)式如式(I)所示
2.權(quán)利要求I所述的阿魏酸十五烷酯的制備方法，其特征在于將新鮮采摘的海蘆筍搗碎，以體積比為15飛:2的丙酮與水萃取2 3次，取丙酮層，抽濾，真空濃縮得到丙酮提取物；然后，將丙酮提取物用こ酸こ酯萃取2 3次，取こ酸こ酯層，真空濃縮得到こ酸こ酯提取物；こ酸こ酯提取物經(jīng)300 400目常壓硅膠柱，用石油醚-丙酮-甲醇梯度洗脫分離，洗脫組分真空濃縮后經(jīng)薄層色譜法檢測后，將Rf值相同，遇5 %的硫酸溶液顯色劑顯色相同的合并，得到4個組分Frl、Fr. 2、Fr. 3、Fr. 4，其中Fr. 3顯黑色；取組分Fr. 3經(jīng)常壓硅膠柱，體積比為10(Γ80:1的環(huán)己烷-こ酸こ酯洗脫，經(jīng)薄層色譜法檢測得到遇5%的硫酸溶液顯色劑顯黑色的組分Fr. 3-1, Fr. 3_1用Sephadex LH-20純化,體積比1 2:1的氯仿-甲醇洗脫，經(jīng)薄層色譜法檢測得到遇5%的硫酸溶液顯色劑顯黑色的組分Fr. 3-1-1，組分Fr. 3-1-1再經(jīng)常壓硅膠柱分離，體積比50:1的環(huán)己烷-こ酸こ酯洗脫，薄層色譜法檢測，得到Rf = O. 4的組分即為式(I)化合物。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的阿魏酸十五烷酯的制備方法，其特征在于將新鮮采摘的海蘆筍搗碎，以體積比為8:2的丙酮與水萃取三次，取丙酮層，抽濾，真空濃縮得到丙酮提取物；然后，將丙酮提取物用こ酸こ酯萃取三次，取こ酸こ酯層，真空濃縮得到こ酸こ酯提取物；こ酸こ酯提取物經(jīng)300 400目常壓硅膠柱，用石油醚-丙酮-甲醇梯度洗脫分離，洗脫組分真空濃縮后經(jīng)薄層色譜法檢測后，將Rf值相同，遇5 %的硫酸溶液顯色劑顯色相同的合并，得到4個組分Frl、Fr. 2、Fr. 3、Fr. 4，其中Fr. 3顯黑色；取組分Fr. 3經(jīng)常壓硅膠柱，體積比為100:1的環(huán)己烷-こ酸こ酯洗脫，經(jīng)薄層色譜法檢測得到遇5%的硫酸溶液顯色劑顯黑色的組分Fr. 3-1, Fr. 3-1用Sephadex LH-20純化,體積比I: I的氯仿_甲醇洗脫，經(jīng)薄層色譜法檢測得到遇5%的硫酸溶液顯色劑顯黑色的組分Fr. 3-1-1，組分Fr. 3-1-1再經(jīng)常壓硅膠柱分離，體積比50:1的環(huán)己烷-こ酸こ酯洗脫，薄層色譜法檢測，得到Rf = O. 4的組分即為式(I)化合物。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的阿魏酸十五烷酯的制備方法，其特征在于所述的石油醚-丙酮-甲醇梯度洗脫是開始純石油醚洗脫，逐漸增加丙酮比例，減少石油醚比例，直到純丙酮洗脫，再逐漸增加甲醇比例，減少丙酮比例，直到純甲醇洗脫。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的阿魏酸十五烷酯的制備方法，其特征在于所述的薄層色譜法條件為(I)顯色劑為5%的硫酸溶液，溶劑為こ醇；(2)展開劑環(huán)己烷こ酸こ酷=10 :1。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的阿魏酸十五烷酯的制備方法，其特征在于所述的常壓硅膠柱的娃膠目數(shù)為300 400目。
7.權(quán)利要求I所述的阿魏酸十五烷酯在制備抗氧化劑和/或天然自由基清除劑中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明屬于海洋生物技術(shù)領(lǐng)域，公開了海蘆筍阿魏酸酯化合物及其制備方法和用途。海蘆筍阿魏酸酯化合物，即阿魏酸十五烷酯，結(jié)構(gòu)式如式(Ⅰ)所示式(Ⅰ)。本發(fā)明從海蘆筍中分離出的阿魏酸十五烷酯為首次從天然資源中得到的化合物，具有強氧化活性及很強的清除自由基活性，可作為海蘆筍中的標(biāo)志性抗氧化活性成分和天然自由基清除劑。
文檔編號A61K31/216GK102850220SQ201210384769
公開日2013年1月2日 申請日期2012年10月11日 優(yōu)先權(quán)日2012年10月11日
發(fā)明者辛志宏, 王惠, 張敏, 趙育卉, 王曉敏 申請人:南京農(nóng)業(yè)大學(xué)