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一種提取大蒜鱗莖中總黃酮的方法

文檔序號:916950閱讀:445來源:國知局
專利名稱:一種提取大蒜鱗莖中總黃酮的方法
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及一種提取大蒜鱗莖中總黃酮的方法。
背景技術(shù)
大蒜屬百科科蔥屬蔬菜植物,其營養(yǎng)豐富,是很重要的食用和藥用植物,因此在我國被廣泛栽培種植。大蒜中含有豐富的黃酮類物質(zhì),Biljana Bozin (2008)等的研究認為大蒜鱗莖中的總黃酮含量在4. 16±0. 03到6. 99±0. 01 μ g QE/g之間。大蒜的抗氧化活性與黃酮類物質(zhì)的含量有顯著相關(guān)的關(guān)系。酚類物質(zhì),特別是黃酮,基于它們的抗氧化性能,通常與人類健康聯(lián)系在一起討論(Hertog and Katan 1997)。陳玉霞等(2007)認為,蔬菜的抗氧化活性總黃酮含量顯著相關(guān),相關(guān)系數(shù)達到O. 7967 (P=O. 001)。蔬菜的抗氧化活性與總黃酮含量顯著相關(guān),而與維生素C含量則沒有顯著相關(guān)性,這也印證了 Cao G等(1996)的研究。Naoaki Morihara (2011)等的研究指出,老化大蒜提取物中含有豐富的水溶性高 分子半胱氨酰成分,其組成部分能夠利用次黃嘌呤-黃嘌呤氧化酶和人類中性粒細胞清除超氧陰離子,具有很強的抗氧化能力,另外老化大蒜提取物中水溶性化合物的含量相對較高,油溶性化合物含量低,同時此老化大蒜也含有豐富的S-烯丙基半胱氨酸以及溶于水的含硫化合物;H0rie等(1992)的研究表明,老化大蒜的組成部分能夠保護細胞膜不受脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的損害;而Brenya Griff in和Michael Selassie(2000)的文章則指出,老化大蒜的抗氧化活性已得到證明,具有延緩衰老的性能;Stephanie A. Dillon等(2003)的研究表明,老化大蒜能清除超氧陰離子和減少脂質(zhì)過氧化物的形成,是一種有效的抗氧化劑,同時,老化大蒜提取液也具有銅離子螯合的能力,因此,大蒜在預(yù)防動脈粥樣硬化疾病的發(fā)展和產(chǎn)生中發(fā)揮著一定的作用。Borek Carmia (2001)指出,將新鮮大蒜提取物經(jīng)過延長提取處理后,得到的老化大蒜含有抗氧化性的生物化學(xué)物質(zhì),可以阻止氧化性損傷的產(chǎn)生。老化大蒜通過清除活性氧(ROS)發(fā)揮抗氧化活性,增強細胞抗氧化酶、超氧化物歧化酶、過氧化氫酶和谷胱甘肽過氧酶的活性,增加細胞中谷胱甘肽的含量。老化大蒜可以抑制脂質(zhì)過氧化反應(yīng),在延緩腦衰老,增強記憶,延長壽命方面發(fā)揮著重要的作用。老化大蒜可以阻止由阿霉素引起的心臟中毒和肝臟的碳中毒,能夠治療由氧化性損傷引起的疾病。但是,由于黃酮類物為酚類物質(zhì)的二級結(jié)構(gòu),分子量很低(Boca Raton et al.1990),利用有機溶劑很難有效提取出新鮮大蒜鱗莖中的黃酮類物質(zhì),因此,目前急需尋找出有效提取出大蒜鱗莖中黃酮類物質(zhì)的方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明是為了解決上述技術(shù)背景的不足,提供一種提取大蒜鱗莖中總黃酮的方法,其通過對大蒜鱗莖進行老化處理,可大大提高大蒜鱗莖中總黃酮的提取效率,有效提取出大蒜鱗莖中的黃酮類物質(zhì)。為實現(xiàn)上述目的,本發(fā)明采用的技術(shù)方案為一種提取大蒜鱗莖中總黃酮的方法,其特征在于,包括以下步驟(1)以大蒜鱗莖為材料,以蒸餾水為提取劑,選取液料比,老化時間和老化溫度三個因素為自變量,分別設(shè)計不同的水平,以總黃酮含量為因變量,根據(jù)Box-Benhnken模型,得到響應(yīng)面試驗設(shè)計;
(2)根據(jù)響應(yīng)面試驗設(shè)計組合,進行總黃酮含量測定,利用響應(yīng)面分析軟件,進行數(shù)據(jù)分析;
(3)根據(jù)響應(yīng)面分析結(jié)果,得到大蒜鱗莖中總黃酮提取的液料比、老化時間和老化溫度組合。所述步驟(I)稱取的去皮后的大蒜鱗莖,切成薄片,置于試管中,再分別加入蒸餾水,密封,放入相應(yīng)溫度的恒溫水浴鍋中老化處理,處理4000 r/min離心10 min,轉(zhuǎn)移上清至離心管中,一 20°C貯存?zhèn)溆?,其中液料?mL/g)的為1:1、2:1、3:1 ;老化時間的為3d、12d、21d ;老化溫度的為 68°C、70°C、72°C。
所述步驟(2)鱗莖中總黃酮含量的測定方法為吸取待測提取液I mL,加入O. 5mol/L 的 NaNO2 溶液 200 μ L,靜置 5 min,再加入 O. 3 mol/L 的 Al (NO3) 3 溶液 200 μ L,同樣靜置5 min,最后加入I mol/L的NaOH溶液I mL,室溫避光反應(yīng)10 min后,在510 nm波長處測吸光度,根據(jù)蘆丁標準曲線方程求出提取液中總黃酮的質(zhì)量濃度(mg rutin Dff/g,(rutin equivalent)表示蘆丁效物)。所述步驟(3)根據(jù)響應(yīng)面軟件分析結(jié)果,得到大蒜鱗莖中總黃酮含量的回歸方程方差分析,進而得到大蒜鱗莖中總黃酮含量的預(yù)測模型,并得到液料比、老化時間和老化溫度三個因素兩兩因素交互作用對總黃酮含量的影響,根據(jù)預(yù)測模型及因素間交互作用的影響,最后得到大蒜鱗莖中總黃酮提取的液料比、老化時間和老化溫度的組合。與現(xiàn)有技術(shù)相比,本發(fā)明具有的優(yōu)點和效果如下
(1)操作簡便,易于掌握;
(2)適應(yīng)范圍廣,本發(fā)明可用于多個大蒜品種,如在本課題組的43個大蒜品種的鱗莖中均可有效提取出黃酮類物質(zhì);
(3)可用于其它大蒜產(chǎn)品,結(jié)果可信,如在本課題組中利用該方法可有效提取出32個大蒜品種的蒜臺和3個品種蒜苗的黃酮類物質(zhì)。


圖I為液料比和老化時間兩兩因素交互作用對總黃酮提取量影響的等高線 圖2為液料比和老化時間兩兩因素交互作用對總黃酮提取量影響的響應(yīng)面 圖3為液料比和老化溫度兩兩因素交互作用對總黃酮提取量影響的等高線 圖4為液料比和老化溫度兩兩因素交互作用對總黃酮提取量影響的響應(yīng)面 圖5為老化時間和老化溫度兩兩因素交互作用對總黃酮提取量影響的等高線 圖6為老化時間和老化溫度兩兩因素交互作用對總黃酮提取量影響的響應(yīng)面圖。
具體實施例方式一種提取大蒜鱗莖中總黃酮的方法,包括以下步驟
(I)以蘇聯(lián)大蒜鱗莖為材料,以蒸餾水為提取劑,選取液料比,老化時間和老化溫度三個因素為自變量,分別設(shè)計不同的水平,以總黃酮含量為因變量,根據(jù)Box-Benhnken模型,得到響應(yīng)面試驗設(shè)計;(2)根據(jù)響應(yīng)面試驗設(shè)計組合,進行總黃酮含量測定,利用響應(yīng)面分析軟件,進行數(shù)據(jù)分析;
(3)根據(jù)響應(yīng)面分析結(jié)果,得到大蒜鱗莖中總黃酮提取的液料比、老化時間和老化溫度組合。具體包括以下步驟
I、準確稱取一定量去皮后大蒜鱗莖(去皮后大蒜鱗莖為蒜瓣),切成薄片,置于試管中,再分別加入相應(yīng)量的蒸餾水,密封,放入相應(yīng)溫度的恒溫水浴鍋中老化處理,處理一定時間后,4000 r/min離心10 min,轉(zhuǎn)移上清至離心管中,一 20°C貯存?zhèn)溆?。其中,液料?mL/g)的為(水平有)1:1、2:1、3:1 ;老化時間的為(水平有)3(1、12(1、21(1 ;老化溫度的為(水平有)68。。、70。。、72。。。2、吸取待測提取液I mL,加入O. 5 mol/L的NaNO2溶液200 yL,靜置5 min,再加入O. 3 mol/L的Al (NO3) 3溶液200 μ L,同樣靜置5 min,最后加入I mol/L的NaOH溶液ImL,室溫避光反應(yīng)10 min后,在510 nm波長處測吸光度。根據(jù)蘆丁標準曲線方程求出提取液中總黃酮的質(zhì)量濃度(mg rutin Dff/g, (rutin equivalent)表示蘆丁等效物)。3、根據(jù)響應(yīng)面軟件分析結(jié)果,得到大蒜鱗莖中總黃酮含量的回歸方程方差分析,進而得到大蒜鱗莖中總黃酮含量的預(yù)測模型,并得到液料比、老化時間和老化溫度三個因素兩兩因素交互作用對總黃酮含量的影響,根據(jù)預(yù)測模型及因素間交互作用的影響,最后得到大蒜鱗莖中總黃酮提取的最佳液料比、老化時間和老化溫度的組合。其中三個因素液料比、老化時間和老化溫度的因素編碼及水平表I, Box-Behnken試驗設(shè)計及結(jié)果見表2 ;利用Design Expert 7. O軟件,對表2的試驗數(shù)據(jù)進行處理,得到回歸方程方差分析表,見表3 ;同時利用該軟件進行非線性回歸分析,得到預(yù)測模型如下Y=O. 71+0. 14A+0. 057B — O. 034C — O. 033AB — O. IOAC — O. 011BC+0. 017A2 — O. 26B2 —
O.18C2 ①
權(quán)利要求
1.一種提取大蒜鱗莖中總黃酮的方法,其特征在于包括以下步驟 (1)以大蒜鱗莖為材料,以蒸餾水為提取劑,選取液料比,老化時間和老化溫度三個因素為自變量,分別設(shè)計不同的水平,以總黃酮含量為因變量,根據(jù)Box-Benhnken模型,得到響應(yīng)面試驗設(shè)計; (2)根據(jù)響應(yīng)面試驗設(shè)計組合,進行總黃酮含量測定,利用響應(yīng)面分析軟件,進行數(shù)據(jù)分析; (3)根據(jù)響應(yīng)面分析結(jié)果,得到大蒜鱗莖中總黃酮提取的液料比、老化時間和老化溫度組合。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種提取大蒜鱗莖中總黃酮的方法,其特征在于所述步驟(I)稱取的去皮后的大蒜鱗莖,切成薄片,置于試管中,再分別加入蒸餾水,密封,放入相應(yīng)溫度的恒溫水浴鍋中老化處理,處理4000 r/min離心10 min,轉(zhuǎn)移上清至離心管中,一20°C貯存?zhèn)溆茫渲幸毫媳?mL/g)的為1:1、2:1、3:1 ;老化時間的為3d、12d、21d ;老化溫度的為 68°C、70°C、72°C。
3.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述的一種提取大蒜鱗莖中總黃酮的方法,其特征在于所述步驟(2)鱗莖中總黃酮含量的測定方法為吸取待測提取液I mL,加入0. 5 mol/L的NaNO2溶液200 iiL,靜置5 min,再加入0.3 mol/L的Al (NO3) 3溶液200 U L,同樣靜置5 min,最后加入I mol/L的NaOH溶液I mL,室溫避光反應(yīng)10 min后,在510 nm波長處測吸光度,根據(jù)蘆丁標準曲線方程求出提取液中總黃酮的質(zhì)量濃度(mg rutin Dff/g, (rutin equivalent)表示蘆丁效物)。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種提取大蒜鱗莖中總黃酮的方法,其特征在于所述步驟(3)根據(jù)響應(yīng)面軟件分析結(jié)果,得到大蒜鱗莖中總黃酮含量的回歸方程方差分析,進而得到大蒜鱗莖中總黃酮含量的預(yù)測模型,并得到液料比、老化時間和老化溫度三個因素兩兩因素交互作用對總黃酮含量的影響,根據(jù)預(yù)測模型及因素間交互作用的影響,最后得到大蒜鱗莖中總黃酮提取的液料比、老化時間和老化溫度的組合。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種提取大蒜鱗莖中總黃酮的方法。該方法步驟為(1)以蘇聯(lián)蒜鱗莖為材料,以蒸餾水為提取劑,選取液料比,老化時間和老化溫度三個因素為自變量,分別設(shè)計不同的水平,以總黃酮含量為因變量,根據(jù)Box-Benhnken模型,得到響應(yīng)面試驗設(shè)計;(2)根據(jù)響應(yīng)面試驗設(shè)計組合,進行總黃酮含量測定,利用響應(yīng)面分析軟件,進行數(shù)據(jù)分析;(3)根據(jù)響應(yīng)面分析結(jié)果,得到大蒜鱗莖中總黃酮提取的最佳液料比、老化時間和老化溫度組合。本發(fā)明通過對大蒜鱗莖進行老化處理,可大大提高大蒜鱗莖中總黃酮的提取效率,有效提取出大蒜鱗莖中的黃酮類物質(zhì)。
文檔編號A61P39/06GK102805798SQ20121030222
公開日2012年12月5日 申請日期2012年8月23日 優(yōu)先權(quán)日2012年8月23日
發(fā)明者陳書霞, 房玉林, 程智慧, 杜俊娜, 孟煥文 申請人:西北農(nóng)林科技大學(xué)
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