專利名稱：一種治療豬圓環(huán)病的卵黃抗體及其復(fù)合物的生產(chǎn)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種治療豬圓環(huán)病的卵黃抗體及其復(fù)合物的生產(chǎn)方法屬于動保行業(yè)獸醫(yī)獸藥領(lǐng)域，所提供卵黃抗體及其復(fù)合物可用于豬圓環(huán)病的臨時預(yù)防和免疫失敗后的緊急治療。
背景技術(shù)：
圓環(huán)病毒最早發(fā)現(xiàn)于1974年德國學(xué)者Tischer等的科研工作；后來的試驗證實(shí)，來源于豬腎組織的該種病毒基因組由單股環(huán)狀的DNA組成，由此得名為豬圓環(huán)病毒 (porcine circovirus, PCV) 0按照國際病毒分類委員會第六次學(xué)術(shù)報告新增病毒科的結(jié)論，PCV在分類上屬于圓環(huán)病毒科、圓環(huán)病毒屬,是已知的最小的動物病毒之一。該科病毒科內(nèi)尚無具體的分屬標(biāo)準(zhǔn)，共同特征為病毒粒子無囊膜，基因組由一條單股、環(huán)狀的DNA鏈組成。被列入該科的動物病毒有豬圓環(huán)病毒、雞傳染性貧血病病毒，鸚鵡喙羽病病毒、鴿圓環(huán)病毒、金絲雀圓環(huán)病毒和人的TT病毒(一種肝炎病毒)等。目前的研究認(rèn)為豬圓環(huán)病毒粒子直徑14 17nm，呈20面體對稱結(jié)構(gòu)，無囊膜，含有共價閉合的單股環(huán)狀負(fù)鏈DNA，基因組大小約為I. 76kb。PCV對外界理化因子的抵抗力相當(dāng)強(qiáng)，即便在PH3的酸性環(huán)境及72°C的高溫環(huán)境中也能存活一段時間，氯仿作用不失活，無血凝活性?，F(xiàn)已知PCV有兩個血清型，即PCVl和PCV2。PCVl基本上無致病性；PCV2被認(rèn)為是引起斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征(PMWS)的主要病原，此外還有皮炎/腎病綜合征、繁殖障礙、呼吸道病復(fù)合癥、先天性震顫及中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病等多種臨床疾病類型。不同年齡的豬對PCV2均具有較強(qiáng)的易感性，感染豬可自鼻液、糞便等廢物中排出病毒，傳染途徑為口腔和呼吸道。目前的研究表明，PCV2主要在機(jī)體的單核/巨噬細(xì)胞中復(fù)制，少數(shù)可在腎小球、支氣管上皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、肝細(xì)胞和淋巴細(xì)胞中增殖。一方面，PCV2與其它病毒，如豬繁殖與呼吸道綜合征病毒和PPV同時接種試驗豬時，這些病毒可以刺激和活化免疫系統(tǒng)，從而促進(jìn)感染豬體內(nèi)PCV2的增殖。因此，免疫系統(tǒng)的激活可能是PMWS的觸發(fā)因素。另一方面， PCV2感染也使機(jī)體產(chǎn)生嚴(yán)重的淋巴組織病變，包括淋巴細(xì)胞的缺失及淋巴組織免疫細(xì)胞亞群的變化，這就使機(jī)體的免疫力下降，從而對其它病原不能產(chǎn)生有效的免疫應(yīng)答，也是該病發(fā)生的重要機(jī)理。因此，豬感染PCV后免疫刺激與免疫抑制同時存在，這給疾病防御帶來很大困難。在獸醫(yī)臨床上，具有抗病毒作用的化學(xué)藥物已被禁用；傳統(tǒng)中藥制劑主要通過提高機(jī)體自身免疫水平來實(shí)現(xiàn)降低發(fā)病率，雖有一定作用但存在效果不穩(wěn)定的問題；而疫苗免疫甚至不足10%，形成PCV感染普遍存在的局面，造成的經(jīng)濟(jì)損失幾乎是毀滅性的。因此，急需一種可用于豬圓環(huán)病的臨時預(yù)防和免疫失敗后緊急治療的藥物
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了一種用于豬圓環(huán)病的臨時預(yù)防和免疫失敗后緊急治療的藥物— 抗豬圓環(huán)病卵黃抗體及其復(fù)合物，能與圓環(huán)病毒發(fā)生免疫學(xué)反應(yīng)，同時提高機(jī)體自身免疫水平，用于豬圓環(huán)病的臨時預(yù)防和緊急治療。一種治療豬圓環(huán)病的卵黃抗體及其復(fù)合物的生產(chǎn)方法，其生產(chǎn)過程如下
(1)、購買豬圓環(huán)病毒2型滅活疫苗(LG株)、豬圓環(huán)病毒2型(SH株)存儲于4 8°C備
用；
(2)、購買道地藥材板藍(lán)根、黃芪、白術(shù)、甘草，按一定比例配伍后加水煎煮，取其濃縮液干燥粉碎后作為中藥提取物密封備用；
(3)、購買經(jīng)檢疫合格的SPF蛋雞雛作隔離飼養(yǎng)；
(4)、于70日齡給全雞群做豬圓環(huán)病毒2型滅活疫苗(LG株)、豬圓環(huán)病毒2型(SH株) 胸部雙側(cè)皮下注射各2頭份；
(5)、于77日齡給全雞群做豬圓環(huán)病毒2型滅活疫苗(LG株)、豬圓環(huán)病毒2型(SH株) 胸部雙側(cè)皮下注射各5頭份；
(6)、于90日齡給全雞群做豬圓環(huán)病毒2型滅活疫苗(LG株)、豬圓環(huán)病毒2型(SH株) 胸部雙側(cè)皮下注射各10頭份；
(7)、于210日齡給全雞群做豬圓環(huán)病毒2型滅活疫苗(LG株)、豬圓環(huán)病毒2型(SH株) 胸部雙側(cè)皮下注射各15頭份；
(8)、收集150 360日齡的雞蛋保存在4°C環(huán)境備用；
(9)、在超凈臺上收集蛋黃，按3倍比例加入滅菌蒸餾水?dāng)嚢?0分鐘以上，配成均一的蛋黃液，轉(zhuǎn)移至4°C環(huán)境冷藏、靜置12小時，用過濾氣泵回收上清液；
(10)、將含卵黃抗體的蛋黃上清液依次通過O.45微米和O. 22微米的濾膜進(jìn)行超濾濃縮，收集介于兩種濾膜之間的物質(zhì)即為卵黃抗體的濃縮液；
(11)、將卵黃抗體濃縮液做50 56°C減壓干燥，制成卵黃抗體干粉；
(12)、將卵黃抗體干粉和中藥提取物按照1:5 50的比例混合均勻得到黃抗體復(fù)合物。本發(fā)明所提供的卵黃抗體及其復(fù)合物，可經(jīng)過添加適當(dāng)輔料和適當(dāng)工藝制成粉劑、顆粒劑、片劑、溶液劑、注射液、注射用凍干粉等臨床適用劑型。本發(fā)明所述卵黃抗體及其復(fù)合物使用方法及使用量是按全價飼料重量的O. 5
I.0%混合以后使用，或者按照I :10 1000的比例兌水飲用，或者按照每公斤體重100 500mg的劑量進(jìn)行肌肉或皮下注射。本方法利用蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)特性，通過沉降法將卵黃抗體與雜蛋白有效分離，且在純化濃縮過程中不破壞卵黃抗體的空間結(jié)構(gòu)，充分保護(hù)了卵黃抗體的生物活性，所生產(chǎn)的卵黃抗體純度高、活性強(qiáng)；再配伍中藥提取物制成復(fù)合物，兼具有綜合提高機(jī)體基礎(chǔ)免疫水平的作用，便于對豬圓環(huán)病的治療與控制。卵黃抗體作為緊急治療性藥物的來源之一，來源廣泛、價格低廉、技術(shù)成熟度好的特點(diǎn)，適合作深度開發(fā)。
具體實(shí)施例方式舉例說明本發(fā)明的生產(chǎn)過程如下
(I)、購買豬圓環(huán)病毒2型滅活疫苗(LG株)、豬圓環(huán)病毒2型(SH株)存儲于4 8°C備用；
(2)、購買道地藥材板藍(lán)根、黃芪、白術(shù)、甘草，按一定比例配伍后加水煎煮，取其濃縮液干燥粉碎后作為中藥提取物密封備用；
(3)、購買經(jīng)檢疫合格的SPF蛋雞雛作隔離飼養(yǎng)；
(4)、于70日齡給全雞群做豬圓環(huán)病毒2型滅活疫苗(LG株)、豬圓環(huán)病毒2型(SH株) 胸部雙側(cè)皮下注射各2頭份；
(5)、于77日齡給全雞群做豬圓環(huán)病毒2型滅活疫苗(LG株)、豬圓環(huán)病毒2型(SH株) 胸部雙側(cè)皮下注射各5頭份；
(6)、于90日齡給全雞群做豬圓環(huán)病毒2型滅活疫苗(LG株)、豬圓環(huán)病毒2型(SH株) 胸部雙側(cè)皮下注射各10頭份；
(7)、于210日齡給全雞群做豬圓環(huán)病毒2型滅活疫苗(LG株)、豬圓環(huán)病毒2型(SH株) 胸部雙側(cè)皮下注射各15頭份；
(8)、收集150 360日齡的雞蛋保存在4°C環(huán)境備用；
(9)、在超凈臺上收集蛋黃，按3倍比例加入滅菌蒸餾水?dāng)嚢?0分鐘以上，配成均一的蛋黃液，轉(zhuǎn)移至4°C環(huán)境冷藏、靜置12小時，用過濾氣泵回收上清液；
(10)、將含卵黃抗體的蛋黃上清液依次通過O.45微米和O. 22微米的濾膜進(jìn)行超濾濃縮，收集介于兩種濾膜之間的物質(zhì)即為卵黃抗體的濃縮液；
(11)、將卵黃抗體濃縮液做50 56°C減壓干燥，制成卵黃抗體干粉；
(12)、將卵黃抗體干粉和中藥提取物按照1:5 50的比例混合均勻得到黃抗體復(fù)合物。本發(fā)明的的應(yīng)用例；
1:將卵黃抗體與中藥(板藍(lán)根黃芪白術(shù)甘草=3:3:2:1)提取物按照I: 10的比例混合成卵黃抗體復(fù)合物備用；
2:將卵黃抗體復(fù)合物與水按1:200的比例配成無菌溶液備用；
3:將卵黃抗體與PEG-200、PVP-K30、水配成O. 2%的注射液備用；
4:將卵黃抗體與可溶性淀粉、明膠、乳糖混合后凍干，制成IOOmg/支的注射用凍干粉針劑備用；
以上實(shí)施例僅為了對本發(fā)明作進(jìn)一步的說明，而本發(fā)明的范圍不受所舉實(shí)施例的局限。部分試驗結(jié)果報告
豬圓環(huán)病卵黃抗體用途的試驗報告
選用某已確診感染豬圓環(huán)病的豬場里的小豬116頭，隨機(jī)分為A、B兩組。全價料，定時飼養(yǎng)，自由飲水，統(tǒng)一管理，保持干凈，及時通風(fēng)，做好記錄。A組添加本卵黃抗體(由廣東紫金正天藥業(yè)有限公司、廣東省中獸藥工程技術(shù)研究開發(fā)中心聯(lián)合制作)，按1:100的比例兌水飲用；B組為黃芪多糖注射液(抗病毒I號注射液) (由河源市獸藥工程技術(shù)研究開發(fā)中心提供)，按每公斤體重O. Iml注射，一天兩次。表I A、B組治療對比試驗結(jié)果
權(quán)利要求
1.一種治療豬圓環(huán)病的卵黃抗體及其復(fù)合物的生產(chǎn)方法，其生產(chǎn)過程如下(1)、購買豬圓環(huán)病毒2型滅活疫苗(LG株)、豬圓環(huán)病毒2型(SH株)存儲于4 8°C備用；(2)、購買道地藥材板藍(lán)根、黃芪、白術(shù)、甘草，按一定比例配伍后加水煎煮，取其濃縮液干燥粉碎后作為中藥提取物密封備用；(3)、購買經(jīng)檢疫合格的SPF蛋雞雛作隔離飼養(yǎng)；(4)、于70日齡給全雞群做豬圓環(huán)病毒2型滅活疫苗(LG株)、豬圓環(huán)病毒2型(SH株) 胸部雙側(cè)皮下注射各2頭份；(5)、于77日齡給全雞群做豬圓環(huán)病毒2型滅活疫苗(LG株)、豬圓環(huán)病毒2型(SH株) 胸部雙側(cè)皮下注射各5頭份；(6)、于90日齡給全雞群做豬圓環(huán)病毒2型滅活疫苗(LG株)、豬圓環(huán)病毒2型(SH株) 胸部雙側(cè)皮下注射各10頭份；(7)、于210日齡給全雞群做豬圓環(huán)病毒2型滅活疫苗(LG株)、豬圓環(huán)病毒2型(SH株) 胸部雙側(cè)皮下注射各15頭份；(8)、收集150 360日齡的雞蛋保存在4°C環(huán)境備用；(9)、在超凈臺上收集蛋黃，按3倍比例加入滅菌蒸餾水?dāng)嚢?0分鐘以上，配成均一的蛋黃液，轉(zhuǎn)移至4°C環(huán)境冷藏、靜置12小時，用過濾氣泵回收上清液；(10)、將含卵黃抗體的蛋黃上清液依次通過O.45微米和O. 22微米的濾膜進(jìn)行超濾濃縮，收集介于兩種濾膜之間的物質(zhì)即為卵黃抗體的濃縮液；(11)、將卵黃抗體濃縮液做50 56°C減壓干燥，制成卵黃抗體干粉；(12)、將卵黃抗體干粉和中藥提取物按照1:5 50的比例混合均勻得到黃抗體復(fù)合物。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種治療豬圓環(huán)病的卵黃抗體及其復(fù)合物，其特征在于可制成粉劑、顆粒劑、片劑、溶液劑、注射液、注射用凍干粉的臨床適用劑型。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種治療豬圓環(huán)病的卵黃抗體及其復(fù)合物的使用方法是 按全價飼料重量的O. 5 I. O %混合以后使用，或者按照I :10 1000的比例兌水飲用，或者按照每公斤體重100 500mg的劑量進(jìn)行肌肉或皮下注射。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種治療豬圓環(huán)病的卵黃抗體及其復(fù)合物的生產(chǎn)方法，屬于動保行業(yè)獸醫(yī)獸藥領(lǐng)域，本發(fā)明提供了一種用于豬圓環(huán)病的臨時預(yù)防和免疫失敗后緊急治療的藥物同時提高機(jī)體自身免疫水平，用于豬圓環(huán)病的臨時預(yù)防和緊急治療。本方法利用蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)特性，通過沉降法將卵黃抗體與雜蛋白有效分離，且在純化濃縮過程中不破壞卵黃抗體的空間結(jié)構(gòu)，充分保護(hù)了卵黃抗體的生物活性，所生產(chǎn)的卵黃抗體純度高、活性強(qiáng)；再配伍中藥提取物制成復(fù)合物，兼具有綜合提高機(jī)體基礎(chǔ)免疫水平的作用，便于對豬圓環(huán)病的治療與控制。
文檔編號A61K39/395GK102580088SQ201210080839
公開日2012年7月18日 申請日期2012年3月26日 優(yōu)先權(quán)日2012年3月26日
發(fā)明者劉易通, 李振天, 王慶福 申請人:廣東紫金正天藥業(yè)有限公司