癌發(fā)病抑制劑、抗體產生能力增強劑及肝炎治療劑的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明的課題在于提供癌發(fā)病抑制劑、抗體產生能力增強劑及肝炎治療劑；本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)：通過給藥NK細胞，抑制健康人的癌的發(fā)病，并通過將NK細胞和疫苗給藥給患者，使抗體產生能力增強，由此完成了本發(fā)明。
【專利說明】癌發(fā)病抑制劑、抗體產生能力增強劑及肝炎治療劑
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及含有自然殺傷(以下稱為NK)細胞作為有效成分的癌發(fā)病抑制劑、含有NK細胞作為有效成分的抗體產生能力增強劑、組合作為有效成分的NK細胞和作為有效成分的肝炎疫苗而得到的肝炎治療劑、包括給藥NK細胞的工序的癌發(fā)病抑制方法、包括給藥NK細胞及疫苗的工序的抗體產生能力增強方法、以及包括給藥NK細胞及肝炎疫苗的工序的肝炎治療方法。
【背景技術】
[0002](關于癌癥預防)
[0003]目前，癌癥已經成為主要的死亡原因，因此，不僅用于治療癌癥的藥品的開發(fā)，而且使癌癥的危險因子和抑制因子明朗化、并通過排除或吸取這些因子而應用于癌癥預防的活動也越發(fā)活躍起來。作為代表·性的致癌的危險因子，已知有吸煙等生活習慣、肝炎病毒(肝癌)、細小病毒(子宮頸癌)、幽門螺桿菌(胃癌)等的持續(xù)感染。作為通過排除該危險因子而最終應用于癌癥預防的例子，有用于阻止B型肝炎病毒和細小病毒感染的預防疫苗療法。
[0004]另一方面，關于抑制因子，對食品進行了大規(guī)模的流行病學調查。另外，研究報告發(fā)現(xiàn)，在藥品中，非留體性抗炎藥能減少患大腸癌的風險，選擇性雌激素受體調節(jié)劑(SERM:Selective Estrogen Modulator)能減少患乳癌的風險。
[0005]作為這些食品或藥品的預防癌癥的機理，推定為癌細胞的增殖抑制、凋亡誘導、對激素受體的修飾、或者癌細胞的免疫感受性的提高等。
[0006]這些預防癌癥的見解是基于如何抑制從正常細胞向癌細胞的變異、癌細胞的增殖和轉移之類的癌細胞方面的因子的視點來考慮的。另一方面，理論上也可以從與致癌相抗衡的生物體方面的因子、即腫瘤免疫學的見解出發(fā)，按照以下方式通過強化免疫監(jiān)視能力來抑制癌發(fā)病。
[0007](關于免疫系統(tǒng))
[0008]在20世紀中期，Burnet通過使用小鼠進行的實驗，提倡存在免疫監(jiān)視機構，該免疫監(jiān)視機構為:免疫系統(tǒng)發(fā)現(xiàn)癌前細胞(precanceixnis)并將其排除，由此阻止向癌癥的惡化，從而維持個體穩(wěn)態(tài)。之后，通過開發(fā)轉基因小鼠模型，證明了免疫監(jiān)視機構確實存在，根據(jù)Dunn等的免疫編輯(Immunoediting)學說,整理出直至致癌與免疫系統(tǒng)的復雜的關聯(lián)和過程(非專利文獻 I:Nat.1mmunl.2002 ；3:991)。
[0009]根據(jù)免疫編輯學說，將直至致癌的過程分為“清除”(elimination)— “平衡”(equilibrium)— “逃逸”(escape)三個階段，尤其是最初的“清除”與免疫監(jiān)視學說大致同義，是在初期的癌細胞尚未形成大的集團之前將其排除的過程。在該過程的前半段，作為自然免疫細胞的NK細胞、NKT細胞、Y δ T細胞、巨噬細胞、樹突細胞分別協(xié)力發(fā)揮作用，排除腫瘤細胞。在后半段，樹突細胞發(fā)揮如下作用，即，使T細胞識別癌抗原，產生癌抗原特異輔助性T細胞、細胞毒性T細胞的克隆，獲得性免疫能夠排除僅靠自然免疫無法排除的癌細胞。
[0010]在接下來的“平衡”階段，即使是保持正常免疫功能的生物體也會進行免疫原性低的癌細胞的選擇，最終使癌細胞獲得免疫抵抗性，癌細胞逐漸增殖。
[0011]第3階段的“逃逸”是免疫系統(tǒng)已經無法識別癌細胞而導致癌組織急速增大、臨床上所見為癌癥的階段。
[0012]由于從“平衡”起越向后發(fā)展越難抑制癌癥的發(fā)展，因此，為了抑制癌癥而在最初的“清除”階段可靠地去除癌細胞是很重要的。但是，由于年齡增長、精神壓力等，自然免疫細胞、獲得性免疫細胞的功能降低，無法充分發(fā)揮癌細胞的排除能力。例如，隨著年齡的增力口，NK細胞的細胞毒活性或干擾素Y產生能力也會減弱，而據(jù)研究報告發(fā)現(xiàn)，觀察100歲以上的超長壽命者的免疫能力時，自然免疫系統(tǒng)的NK細胞和NKT細胞的功能維持在較高水平(非專利文獻 2 J.Clin.1mmunol.2009 ；29:416)。
[0013](癌發(fā)病抑制手段)
[0014]目前研究報告所顯示的癌發(fā)病抑制手段均局限在直接作用于癌細胞而抑制其發(fā)展的食品、營養(yǎng)補品(硒、維生素等)、抗炎藥、SERM(選擇性雌激素調節(jié)劑)，其抑制效果未必高。另外，對因年齡增長等而導致的疫苗效果減弱的對策也停留在增加疫苗佐劑或疫苗的I次給藥量、給藥次數(shù)上。
[0015](關于肝炎)
[0016]感染B型肝炎病毒的慢性肝炎患者在全世界有3億6千萬人，作為肝硬化、肝癌的預備人群已成為很大的問題。雖然嘗試了將用于預防的B型肝炎疫苗作為B型慢性肝炎的“治療”疫苗與病毒增殖抑制劑組合使用，但并未觀察到令人滿意的臨床改善效果(非專利文獻 3:Vaccine2007 ；25:8585、非專利文獻 4:Hepat.Res.Treat.2010 ；2010:817580)。
[0017]進而，如新的DNA疫苗(非專利文獻5:Gene Ther.2006 ; 13:1110)或免疫復合體疫苗(非專利文獻6 =PLoS 0ne2008 ；3:e2565)的臨床試驗那樣，也正在探尋開發(fā)“治療”疫苗療法。
[0018]但是，成問題的是:存在即使給藥通常的HB疫苗其抗體效價也不升高或極難升高的集團(例如60歲以上的男性)。
[0019]并且，在肝炎的治療中一般使用干擾素。但是，治療效果因患者不同而有差異，需要確立新的治療方法。
[0020](關于抗體產生增強劑)
[0021]關于抗體產生增強劑公開有如下的研究報告。
[0022]專利文獻1，其公開了 “以茶多糖類為有效成分的抗體產生誘導劑”。
[0023]專利文獻2，其公開了 “以含有蛋白為特征的疫苗的抗體產生能力增強劑”。
[0024]但是，在上述文獻中并沒有公開或啟示關于“包含NK細胞的抗體產生增強劑”的內容。并且，很多研究報告顯示，NK細胞會抑制抗體產生能力(非專利文獻7:Cell.1mmunol.1995 ；161:42)。即，在以往的見解中，一般認為NK細胞會抑制抗體產生能力。
[0025]現(xiàn)有技術文獻
[0026]專利文獻
[0027]專利文獻1:日本特開2006-340698號
[0028]專利文獻2:日本特開平5-124972號[0029]非專利文獻
[0030]非專利文獻I:Nat.1mmunl.2002 ；3:991
[0031]非專利文獻2 J.Clin.1mmunol.2009 ；29:416
[0032]非專利文獻3:Vaccine2007 ；25:8585
[0033]非專利文獻4:Hepat.Res.Treat.2010 ；2010:817580
[0034]非專利文獻5:Gene Ther.2006 ; 13:1110
[0035]非專利文獻6:PLoS 0ne2008 ；3:e2565
[0036]非專利文獻7:Cell.1mmunol.1995 ；161:42
【發(fā)明內容】
[0037]在癌細胞的“清除”過程中，NK細胞、NKT細胞、Y δ T細胞、巨噬細胞、樹突細胞、T細胞這些各種各樣的免疫細胞參與該過程，但是并不清楚哪個免疫細胞在癌細胞的排除中起主要作用。
[0038]因此，本發(fā)明人等認為“如果能判明該主要的免疫擔當細胞，通過人為地提高其功能，從而免疫監(jiān)視能力提高，能夠使“清除”過程再強化，進而通過實施該再強化，與未強化的情況相比，最終能夠期待癌發(fā)病的降低”。
[0039]進而，本發(fā)明人等基于“在先前所述的疫苗療法中，也與癌發(fā)病同樣，隨著年齡的增加，NK細胞、樹突細胞的功能降低和幼稚T細胞、B細胞的減少會降低針對外來抗原的免疫反應能力，事實上，在B型肝炎 疫苗中，一部分健康人、HIV陽性患者、透析患者、酒精中毒患者無法誘導抗體，被指出無反應性或低反應性”這一見解，認為這種無反應性或低反應性最終會增加慢性肝炎、肝癌的風險。
[0040]進而，本發(fā)明人認為“通過再次提高成為無反應性或低反應性的原因的降低的免疫反應能力，從而誘導疫苗效果，最終能夠預防癌癥、尤其是肝癌”。
[0041]因此，基于上述見解，本發(fā)明人所做的課題為:提供一種癌發(fā)病抑制劑、抗體產生能力增強劑及肝炎治療劑。
[0042]本發(fā)明人為了解決上述課題進行了深入研究后發(fā)現(xiàn)，通過給藥NK細胞，抑制癌的發(fā)病，并通過將NK細胞和疫苗給藥給患者，使抗體產生能力增強，由此完成了本發(fā)明。
[0043]即，本發(fā)明如下。
[0044]1.一種健康人用癌發(fā)病抑制劑，其包含作為有效成分的NK細胞。
[0045]2.根據(jù)上述I所述的健康人用癌發(fā)病抑制劑，其中，上述NK細胞為活化NK細胞。
[0046]3.一種健康人的癌發(fā)病抑制方法，其特征在于，將活化NK細胞給藥給健康人。
[0047]4.根據(jù)上述3所述的癌發(fā)病抑制方法，其中，上述活化NK細胞為源自上述健康人的NK細胞。
[0048]5.一種疫苗的抗體產生能力增強劑，其包含作為有效成分的NK細胞。
[0049]6.根據(jù)上述5所述的抗體產生能力增強劑，其中，上述疫苗為肝炎疫苗。
[0050]7.根據(jù)上述6所述的抗體產生能力增強劑，其中，上述肝炎疫苗為B型肝炎疫苗。
[0051]8.根據(jù)上述5?7中任一項所述的抗體產生能力增強劑，其中，上述NK細胞為活化NK細胞。
[0052]9.一種肝炎治療劑，其特征在于，其組合有作為有效成分的NK細胞和作為有效成分的肝炎疫苗。
[0053]10.根據(jù)上述9所述的肝炎治療劑，其中，上述肝炎疫苗為B型肝炎疫苗。
[0054]11.一種肝炎治療用試劑盒，其包含疫苗的抗體產生能力增強劑和肝炎疫苗，所述疫苗的抗體產生能力增強劑含有作為有效成分的NK細胞。
[0055]12.根據(jù)上述11所述的肝炎治療用試劑盒，其中，上述肝炎疫苗為B型肝炎疫苗。
[0056]13.一種患者的疫苗的抗體產生能力增強方法，其包括以下的工序(I) (2)或⑴，⑵'。
[0057](I)將活化NK細胞給藥給患者的工序
[0058](2)將疫苗給 藥給該患者的工序
[0059](I)'將疫苗給藥給患者的工序
[0060](2V將活化NK細胞給藥給該患者的工序
[0061]14.根據(jù)上述13所述的抗體產生能力增強方法，其中，上述活化NK細胞為源自上述患者的NK細胞。
[0062]15.根據(jù)上述13或14所述的抗體產生能力增強方法，其中，上述疫苗為肝炎疫苗。
[0063]16.根據(jù)上述15所述的抗體產生能力增強方法，其中，上述肝炎疫苗為B型肝炎疫苗。
[0064]17.一種肝炎治療方法，其包括以下的工序⑴(2)或⑴，(2)'。
[0065](I)將活化NK細胞給藥給患者的工序
[0066](2)將疫苗給藥給該患者的工序
[0067](I)'將疫苗給藥給患者的工序
[0068](2V將活化NK細胞給藥給該患者的工序
[0069]18.根據(jù)上述17所述的肝炎治療方法，其中，上述活化NK細胞為源自上述患者的NK細胞。
[0070]19.根據(jù)上述17或18所述的肝炎治療方法，其中，上述肝炎為B型肝炎。
[0071](發(fā)明效果)
[0072]根據(jù)本發(fā)明的癌發(fā)病抑制劑及癌發(fā)病抑制方法，抑制了健康人的癌的發(fā)病。進而，根據(jù)本發(fā)明的抗體產生能力增強劑及抗體產生能力增強法方法，即使對于僅利用疫苗難以提升抗體效價的病例，也能夠使抗體效價升高。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0073]圖1是給藥的NK細胞數(shù)的測量結果(實施例二)。
[0074]圖2是給藥淋巴細胞亞群的解析結果(實施例二 )。
[0075]圖3是NK細胞給藥組和非給藥組的年齡的分布(實施例二)。
[0076]圖4是NK細胞給藥組和非給藥組的NK細胞凍結保存期間(實施例2)。
[0077]圖5是NK細胞給藥組的各健康人的分布(實施例二 )。
[0078]圖6是NK細胞非給藥組的各健康人的分布(實施例二)。
[0079]圖7是NK細胞給藥組和非給藥組的癌發(fā)病率的結果(實施例二)。
[0080]圖8是各種癌發(fā)病抑制率的結果(實施例二)。
[0081]圖9是NK細胞給藥組和T淋巴細胞給藥組中給藥的NK細胞數(shù)的比較(實施例三)。
[0082]圖10是通過給藥活化NK細胞而帶來的HBs疫苗效果增強結果(實施例三)。
[0083]圖11是通過給藥活化T細胞而帶來的HBs疫苗效果增強結果(實施例三)。
【具體實施方式】
[0084](NK 細胞)
[0085]本發(fā)明中使用的NK(natural killer、自然殺傷)細胞也可以利用通過自身公知的方法獲得的任意NK細胞。但是，優(yōu)選使用活化NK細胞。
[0086]另外，NK細胞的提供者(供體)和NK細胞的被提供者(受體)優(yōu)選為同物種。例如，供體為人時，受體為人。
[0087]另外，NK細胞的提供者和NK細胞的被提供者更優(yōu)選為同一個體。例如，供體為提供者X時，受體為提供者X。
[0088](NK細胞的獲得方法)
[0089]本發(fā)明中使用的NK細胞可以通過自身公知的方法來獲得(參照:表I)。NK細胞從由外周血、淋巴結、胸腺、骨髄、腫瘤、胸水、腹水或臍帶血采集的單核細胞、更優(yōu)選從外周血單核細胞誘導而獲得。
[0090]例如，可以利用比重離心法從外周血回收包含NK細胞的單核細胞。另外，例如，可以使用針對在NK細胞上特異性表達的細胞表面標志的抗體，通過細胞分選儀、篩選(panning)、抗體磁珠法等分離NK細胞。
[0091][表 I]
[0092]NK細胞的培養(yǎng)和增殖方法
[0093]
【權利要求】
1.一種健康人用癌發(fā)病抑制劑，其特征在于，包含作為有效成分的NK細胞。
2.根據(jù)權利要求1所述的健康人用癌發(fā)病抑制劑，其特征在于，所述NK細胞為活化NK細胞。
3.一種健康人的癌發(fā)病抑制方法，其特征在于，將活化NK細胞給藥給健康人。
4.根據(jù)權利要求3所述的癌發(fā)病抑制方法，其特征在于，所述活化NK細胞為源自所述健康人的NK細胞。
5.一種疫苗的抗體產生能力增強劑，其特征在于，包含作為有效成分的NK細胞。
6.根據(jù)權利要求5所述的抗體產生能力增強劑，其特征在于，所述疫苗為肝炎疫苗。
7.根據(jù)權利要求6所述的抗體產生能力增強劑，其特征在于，所述肝炎疫苗為B型肝炎疫苗。
8.根據(jù)權利要求5?7中任一項所述的抗體產生能力增強劑，其特征在于，所述NK細胞為活化NK細胞。
9.一種肝炎治療劑，其特征在于，其組合有作為有效成分的NK細胞和作為有效成分的肝炎疫苗。
10.根據(jù)權利要求9所述的肝炎治療劑，其特征在于，所述肝炎疫苗為B型肝炎疫苗。
11.一種肝炎治療用試劑盒，其特征在于，其包含疫苗的抗體產生能力增強劑和肝炎疫苗，所述疫苗的抗體產生能力增強劑含有作為有效成分的NK細胞。
12.根據(jù)權利要求 11所述的肝炎治療用試劑盒，其特征在于，所述肝炎疫苗為B型肝炎疫苗。
13.—種患者的疫苗的抗體產生能力增強方法，其特征在于，其包括以下的工序(I)(2)或(I)，(2V，即 (1)將活化NK細胞給藥給患者的工序 (2)將疫苗給藥給該患者的工序 (IV將疫苗給藥給患者的工序 (2),將活化NK細胞給藥給該患者的工序。
14.根據(jù)權利要求13所述的抗體產生能力增強方法，其特征在于，所述活化NK細胞為源自所述患者的NK細胞。
15.根據(jù)權利要求13或14所述的抗體產生能力增強方法，其特征在于，所述疫苗為肝炎疫苗。
16.根據(jù)權利要求15所述的抗體產生能力增強方法，其特征在于，所述肝炎疫苗為B型肝炎疫苗。
17.一種肝炎治療方法，其特征在于，其包括以下的工序(I) (2)或(I)，(2)，，即 (1)將活化NK細胞給藥給患者的工序 (2)將疫苗給藥給該患者的工序 (IV將疫苗給藥給患者的工序 (2),將活化NK細胞給藥給該患者的工序。
18.根據(jù)權利要求17所述的肝炎治療方法，其特征在于，所述活化NK細胞為源自所述患者的NK細胞。
19.根據(jù)權利要求17或18所述的肝炎治療方法，其特征在于，所述肝炎為B型肝炎。
【文檔編號】A61K35/12GK103429248SQ201180068795
【公開日】2013年12月4日 申請日期:2011年3月2日 優(yōu)先權日:2011年3月2日
【發(fā)明者】益山純一, 藤田實彥 申請人:株式會社賽萊克斯, 益山純一, 藤田實彥