專(zhuān)利名稱(chēng)：燈盞花素在制藥中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬中藥領(lǐng)域，涉及燈盞花素的用途，尤其涉及燈盞花素在制藥中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
肝硬化系內(nèi)科常見(jiàn)疾病，門(mén)脈高壓是肝硬化腹水形成、上消化道出血、肝腎綜合征等并發(fā)癥的病理基礎(chǔ)。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，門(mén)靜脈高壓的發(fā)生，除了與肝竇毛細(xì)血管化有關(guān)夕卜，與肝星狀細(xì)胞(HSCs)的收縮密切相關(guān)。肝纖維化和肝硬化時(shí)，HSCs活化向肌成纖維細(xì)胞樣表型轉(zhuǎn)變，表達(dá)α-平滑肌肌動(dòng)蛋白和結(jié)蛋白，產(chǎn)生收縮效應(yīng)，使肝竇直徑縮小，肝內(nèi)血管阻力增加，此外亦可引起肝組織瘢痕攣縮，進(jìn)一步增加肝內(nèi)血管阻力。許多血管活性物質(zhì)都能引發(fā)HSCs收縮效應(yīng)，其中以?xún)?nèi)皮素-1 (ET-1)作用最強(qiáng)。目前，國(guó)外對(duì)肝硬化門(mén)脈高壓的機(jī)制研究較為深入，但是尚無(wú)安全有效的治療肝纖維化和肝硬化藥物，而我國(guó)在該領(lǐng)域研究活血化瘀中藥的療效取得了一定的成績(jī)。燈盞花是菊科植物短葶飛蓬的干燥全草，性寒、微苦、甘溫辛，具有活血化瘀、通經(jīng)活絡(luò)、消炎止痛等功效。燈盞花素是燈盞花的提取物，主要成分為燈盞乙素，結(jié)構(gòu)式是4，5，6-三羥基黃酮-7-葡聚糖酸甙。其有改善心、腦血管血流量、抗血小板凝聚、抗氧自由基等作用。已在臨床上廣泛用于治療腦供血不足、腦血栓、冠心病等疾病。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)燈盞花素還有保護(hù)肝細(xì)胞及抗肝纖維化的作用。張轉(zhuǎn)等觀(guān)察了燈盞花素對(duì)小鼠腸缺血再灌注肝損傷病理及生化指標(biāo)的影響，發(fā)現(xiàn)不同劑量燈盞花素對(duì)缺血再灌注肝損傷小鼠有明顯的保護(hù)作用。趙永娜等采用四氯化碳損傷離體大鼠灌流肝為模型，觀(guān)察燈盞花素、三七總甙、紅花對(duì)肝臟灌流量、ALT (谷氨酸丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶，簡(jiǎn)稱(chēng)谷丙轉(zhuǎn)氨酶)及病理形態(tài)學(xué)的影響。結(jié)果3種活血化瘀藥均使肝臟灌流量增加，ALT同時(shí)下降，形態(tài)學(xué)檢查明顯優(yōu)于對(duì) 照組。陳詠萍等觀(guān)察靜脈滴注燈盞花素注射液對(duì)38例肝炎后肝硬化微循環(huán)和纖維化指標(biāo)的影響，發(fā)現(xiàn)燈盞花素治療后甲襞微循環(huán)加權(quán)積分較對(duì)照組低，血清透明質(zhì)酸、III型前膠原、層粘蛋白較對(duì)照組低，且差異顯著。說(shuō)明燈盞花素能改善肝炎后肝硬化患者微循環(huán)和纖維化指標(biāo)。目前，對(duì)燈盞花素在抑制肝星狀細(xì)胞收縮中的作用、降低肝硬化門(mén)脈壓力中的作用、減輕肝臟炎癥及膠原沉積中的作用及改善肝功能AST、Alb、TBiL中的作用尚未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題在于提供燈盞花素的新用途，即在制藥中的新應(yīng)用。為解決上述技術(shù)問(wèn)題，在本發(fā)明的一方面，提供燈盞花素在制備抑制肝星狀細(xì)胞收縮的藥物中的應(yīng)用。所述燈盞花素抑制ET-1誘導(dǎo)的肝星狀細(xì)胞收縮的有效濃度為104mol/L 10 5mol/L。在本發(fā)明的另一方面，提供燈盞花素在制備降低肝硬化門(mén)脈壓力的藥物中的應(yīng)用。所述燈盞花素降低肝硬化門(mén)脈壓力的有效劑量為10mg/kg或20mg/kg。
在本發(fā)明的另一方面，提供燈盞花素在制備減輕肝臟炎癥及膠原沉積的藥物中的應(yīng)用。在本發(fā)明的另一方面，提供燈盞花素在制備改善肝功能的藥物中的應(yīng)用。所述改善肝功能包括改善肝功能ALT、AST、Alb、TBiL。本發(fā)明以ET-1為刺激因子，在體外用凝膠收縮方法觀(guān)察不同濃度梯度的燈盞花素對(duì)ET-1刺激下大鼠肝星狀細(xì)胞(rHSCs)收縮的作用，并在體內(nèi)觀(guān)察其對(duì)二甲基亞硝胺(DMN)肝硬化模型大鼠門(mén)脈壓力及肝功能的影響。本發(fā)明設(shè)計(jì)了以ET-1誘導(dǎo)的大鼠肝星狀細(xì)胞收縮的篩選平臺(tái)，觀(guān)察各濃度梯度的燈盞花素對(duì)rHSC收縮的抑制作用及有效工作濃度。結(jié)果顯示:濃度為ΙθΛιοΙ/L l(T5mol/L的燈蓋花素可抑制ET-1誘導(dǎo)的rHSCs收縮，兩個(gè)濃度作用效果之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。此外，本發(fā)明設(shè)計(jì)了燈盞花素對(duì)大鼠肝硬化門(mén)脈高壓作用的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)，觀(guān)察燈蓋花素低劑量(5mg/kg)、中劑量(10mg/kg)及高劑量(20mg/kg)對(duì)DMN肝硬化模型大鼠門(mén)脈壓力及肝功能的影響，結(jié)果中劑量(10mg/kg)及高劑量(20mg/kg)的燈盞花素均能降低DMN肝硬化模型大鼠的門(mén)脈壓力，改善肝功能。從而本發(fā)明從體內(nèi)體外實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了燈盞花素能抑制肝星狀細(xì)胞收縮，降低肝硬化大鼠門(mén)脈壓力，即本發(fā)明驗(yàn)證了燈盞花素可用于制備降低肝硬化門(mén)脈壓力的藥物。


圖1是本發(fā)明試驗(yàn)例中大鼠原代肝星狀細(xì)胞分離培養(yǎng)觀(guān)察圖像(傳代大鼠肝星狀細(xì)胞形態(tài)及a-SMA表達(dá)，X 100)。圖2是本發(fā)明試驗(yàn)例中l(wèi)(T4mol/L l(T5mol/L濃度的燈盞花素對(duì)ET-1誘導(dǎo)的大鼠肝星狀細(xì)胞收縮的影響的凝膠圖像 與統(tǒng)計(jì)圖；其中，與對(duì)照組相比，## =P < 0.01 ;與ET-1組相比，**:P < 0.01。圖3是本發(fā)明試驗(yàn)例中不同劑量(低劑量5mg/kg、中劑量10mg/kg及高劑量20mg/kg)燈盞花素對(duì)DMN模型大鼠肝組織炎癥變化的影響的病理圖像(HE染色，X200);其中，A:正常組；B:模型組；C:燈盞花素高劑量組；D:燈盞花素中劑量組；E:燈盞花素低劑量組。圖4.是本發(fā)明試驗(yàn)例中不同劑量(低劑量5mg/kg、中劑量10mg/kg及高劑量20mg/kg)燈盞花素對(duì)DMN模型大鼠肝組織膠原纖維沉積的影響的病理圖像圖(天狼猩紅染色，X 100);其中，A:正常組；B:模型組；C:燈盞花素高劑量組；D:燈盞花素中劑量組；E:燈盞花素低劑量組。圖5是本發(fā)明試驗(yàn)例中低劑量(5mg/kg)、中劑量(10mg/kg)及高劑量(20mg/kg)燈盞花素對(duì)DMN肝硬化模型大鼠門(mén)脈壓力的影響的統(tǒng)計(jì)圖；其中，與正常組比較，## =P
<0.01 ;與模型組比較，*:P < 0.05。圖6是本發(fā)明試驗(yàn)例中低劑量(5mg/kg)、中劑量(10mg/kg)及高劑量(20mg/kg)燈盞花素對(duì)DMN肝硬化模型大鼠肝羥脯氨酸(Hyp)的影響的統(tǒng)計(jì)圖；其中，與正常組比較，##:P < 0.01 ;與模型組比較，*:P < 0.05。圖7是本發(fā)明試驗(yàn)例中低劑量(5mg/kg)、中劑量(10mg/kg)及高劑量(20mg/kg)燈盞花素對(duì)DMN肝硬化模型大鼠肝功能ALT的影響的統(tǒng)計(jì)圖；其中，與正常組比較，## =P
<0.01 ;與模型組比較，*:P < 0.05。圖8是本發(fā)明試驗(yàn)例中低劑量(5mg/kg)、中劑量(10mg/kg)及高劑量(20mg/kg)燈盞花素對(duì)DMN肝硬化模型大鼠肝功能AST的影響的統(tǒng)計(jì)圖；其中，與正常組比較，## =P
<0.0l ;與模型組比較，*:P < 0.05。圖9是本發(fā)明試驗(yàn)例中低劑量(5mg/kg)、中劑量(10mg/kg)及高劑量(20mg/kg)燈盞花素對(duì)DMN肝硬化模型大鼠肝功能Alb的影響的統(tǒng)計(jì)圖；其中，與正常組比較，## =P
<0.01 ;與模型組比較，** =P < 0.0l0圖10是本發(fā)明試驗(yàn)例中低劑量(5mg/kg)、中劑量(10mg/kg)及高劑量(20mg/kg)燈盞花素對(duì)DMN肝硬化模型大鼠肝功能TBiL的影響的統(tǒng)計(jì)圖；其中，與正常組比較，## =P
<0.01 ;與模型組比較，*:P < 0.05，**:P < 0.01。
具體實(shí)施例方式以下通過(guò)試驗(yàn)例對(duì)本發(fā)明燈盞花素的藥理活性試驗(yàn)及結(jié)果作進(jìn)一步的闡述:試驗(yàn)例一、材料與方法

(一 )材料ET-1:endothelin-l, Cat.N0.E7764,分子式(C109H159N25O32S5)，分子量 2491.90，純97% (by HPLC)，購(gòu)自 SIGMA-ALDRICH。燈盞花素:Breviscapi，分子式(C41H68O51)，分子量785，純度彡 95% (by HPLC)，購(gòu)自南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司。注射用燈盞花素:湖南恒生制藥有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字:Z20063405。Nycodenz (C19H26I3N3O9)，Cat.N0.1002424，挪威 Axis-Shield 公司產(chǎn)品；鏈酶蛋白酶(pronase, Cat.N0.11459643001)、I 型 DNA 酶(DNase I, Cat.N0.11284932001)為德國(guó)Roche 公司產(chǎn)品；IV 型膠原酶(collagenase type IV，Cat.N0.17454)為德國(guó) SERVA 公司產(chǎn)品；DMEM 培養(yǎng)基干粉(Dulbecco’ s modified eagle，s medium, Cat.N0.D5648)、無(wú)隹丐MEM培養(yǎng)基干粉(Minimum essential medium Eagle w/o Ca2+, Cat.N0.M0518)、二甲基亞諷(DMS0, Cat.N0.D2650)為 SIGMA-ALDRICH 公司產(chǎn)品；無(wú)水乙醇、Na2HPO4.12H20、KC1、NaOH、NaCl、HERES、乙酸等均為分析純，購(gòu)自中國(guó)國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。二甲基亞硝胺(dimethylnitrosamine, DMN),購(gòu)自東京化成工業(yè)株式會(huì)社。血清肝功能試劑盒，包括谷丙轉(zhuǎn)氨酶(alanine aminotransamine, ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(aspartate aminotransferase, AST)、白蛋白(albumin, Alb)、總膽紅素(totalbilirubin，TBiL)，均購(gòu)自南京建成生物工程研究所。( 二 )方法1.大鼠肝星狀細(xì)胞分離1.1液體配置前灌流液:NaCl8g, KCl 0.4g, NaH2PO4.2H20 0.078g, Na2HPO4.12H20 0.151g,HERES(C8H18N2O4S,4-羥乙基哌嗪乙磺酸；N_(2_羥乙基)哌嗪-N' -2-乙烷磺酸)2.38g，Phenol red (酹紅)0.006g, EGTA (C14H24N2Oltl,乙二醇-雙-(2-氨基乙醚)四乙酸)0.19g,NaHCO3 0.35g, Glucose (葡萄糖)0.9g, ddH20 配制；EB (酶配制液):NaCl 8g, KCl 0.4g，CaCl2 0.56g, NaH2PO4.2H20 0.078g,Na2HPO4.12H20 0.151g, HERES 2.38g, Phenol red 0.006g, NaHCO3 0.35g, ddH20 配制；
MEM 培養(yǎng)液:MEM 培養(yǎng)基干粉 11.0g, HERES 2.38g, NaHCO3 3.7g, Penicillin (青霉素)0.0625g, Streptomycin (鏈霉素)0.lg, ddH20 配制；DMEM 培養(yǎng)液:DMEM 培養(yǎng)基干粉 13.4g, HERES 2.38g, NaHCO3 3.7g, Penicillin
0.0625g, Streptomycin 0.lg, ddH20 配制；GBSS (格氏平衡鹽溶液):KC1 0.37g，CaCl2 0.17g，KH2PO4 0.03g，MgCl2.6H20
0.21g, MgSO4 0.07g, NaHCO3 0.227g, NaH2PO4 *7H20 0.226g, Glucose 1.0g，ddH20 配制；(以上均為IL用量，所有液體pH均調(diào)至7.4，0.22 μ m濾膜過(guò)濾。)鏈酶蛋白酶灌注液:Pronase E (鏈霉蛋白酶E) 30mg/100g rat wt.,先溶于50mlEB, 37°C水浴助溶，0.45 μ m濾膜過(guò)濾，補(bǔ)充EB至總體積IOOml。IV型膠原酶灌注液:IV型膠原酶15mg，先溶于50ml EB，37°C水浴助溶，0.45 μ m濾膜過(guò)濾，補(bǔ)充EB至總體積200ml。后分散液:Pronase E IOmg,先溶于50ml EB, 37°C水浴助溶,0.45 μ m濾膜過(guò)濾,補(bǔ)充EB至總體積100ml。DNA酶液=DNAse (脫氧核糖核酸酶)7mg,溶于35ml EB, 0.45 μ m濾膜過(guò)濾，4°C放置。Nycodenz忙存液:Nycodenz粉末(1hexol的商品名，是一種白色、高親水性的粉劑，可以配成全能型非離子梯度分離液)28.7g，GBSS 100ml, 0.45 μ m濾膜過(guò)濾，配成28.7%的貯存液。1.2分離方法按照如下改良的肝臟原位灌流酶消化、Nycodenz密度梯度離心的方法進(jìn)行分離:500g左右SD大鼠麻醉開(kāi)腹后用18G留置針進(jìn)行門(mén)靜脈穿刺、固定，開(kāi)啟恒流泵，以不含Ca2+、Mg2+的前灌流液沖洗肝臟，待肝臟內(nèi)血液沖凈時(shí)，更換為鏈酶蛋白酶灌注液消化肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞，后以IV型膠原酶灌注液灌流，約15min后，肝臟軟化，停止灌流，快速摘下肝臟，移入超凈臺(tái)，剪碎后加入鏈酶蛋白酶分散液及DNA酶放入恒溫水浴振蕩器中，160rpm、37°C振蕩15min。將分散后的細(xì)胞懸液過(guò)金屬篩網(wǎng)(200目)過(guò)濾，濾液經(jīng)450g，4°C，7min。離心洗滌3-4次。最后一次離心后棄上清，加入Nycodenz分離液和3ml DNA酶溶液、MEM,設(shè)定密度為1.060 1.062g/ml (終濃度約為11.9% )，充分混勻后上面小心鋪加IOml GBSS,20°C、1400g、離心22min。吸取GBSS與細(xì)胞懸液之間白色的細(xì)胞層，以含20% NBS的DMEM培養(yǎng)液培養(yǎng)，24h后更換為10% NBS的DMEM，此后2_3天換液，7天左右胰酶消化傳代。圖1是大鼠原代肝星狀細(xì)胞分離培養(yǎng)觀(guān)察圖像。2.藥物配制:燈盞花素以DMSO (二甲基亞砜)溶解，配成10_2mOl/L儲(chǔ)存液；ET-1 以 ddH20 溶解，貯存濃度為 10-5moI/L。3.凝膠收縮實(shí)驗(yàn)
3.1鼠尾膠原溶液的制備收集大鼠尾巴，刷洗干凈后再以75%酒精徐拭并浸泡30min，無(wú)菌條件下將鼠尾剪開(kāi)，用有齒鑷抽出尾鍵置培皿中剪碎，移至0.1 %乙酸溶液的三角燒瓶中，4°C磁力攪拌48h ;2000g，3h，4°C離心；取上清，以6: 1的比例與0.1M NaOH混合以沉淀膠原；2000g，30min,4°C離心，生理鹽水清洗沉淀物數(shù)遍后,0.1%醋酸溶液重溶，Lowry法測(cè)定膠原蛋白濃度，以0.1 %乙酸溶液稀釋至3.5mg/ml，貯存于4°C冰箱內(nèi)。3.2凝膠的制備及加藥方法將鼠尾膠原溶液與5XDMEM(含0.22M NaHCO3,0.05M HEPES)以4: I混勻，24孔培養(yǎng)板每孔均加入0.35ml，37°C培養(yǎng)箱中放置Ih至膠原凝固。將rHSCs以含10% NBS的DMEM懸浮，接種在凝膠上，至細(xì)胞80%融合，換成無(wú)血清DMEM，培養(yǎng)16h后分別加入10_4mol/L 10_5mol/L濃度的燈盞花素，每個(gè)濃度4個(gè)孔，藥物作用30min，再加入ET-1 (10_8mol/L)刺激，立即以20 μ I消毒槍頭沿凝膠邊緣刮擦，使凝膠脫壁。分別在24h、48h、72h數(shù)碼拍照，觀(guān)察凝膠直徑及面積的變化，用圖像分析系統(tǒng)計(jì)算凝膠面積，收縮程度以“ ％原始面積”表
/Jn ο4.腫N模型制備63只160±10g SD 大鼠適應(yīng)環(huán)境3d(天)后，用隨機(jī)數(shù)字表法分為正常組(10只)和造模組(53只)。造模組用0.5% DMN按2ml/kg體重腹腔注射，首次注射全劑量的2/3，每天I次，連續(xù)注射3d后休息4d，共3w (周)。第4w的第Id和第3d注射1/2量，中間停I次，3d后再注射全量I次。正常組大鼠予相同的時(shí)間和部位腹腔注射等量的氯化鈉注射液。5.給藥造模第4w結(jié)束后，用抽簽的方法隨機(jī)取2只大鼠處死觀(guān)察肝臟病變情況，證實(shí)有肝纖維化改變后將剩余的51只大鼠用隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為3個(gè)治療組(燈盞花素高、中、低劑量治療組)，每組12只；模型組15只。由于燈盞花素為脂溶性，胃腸吸收利用率極低，實(shí)驗(yàn)采用皮下注射給 藥方式，治療組每組分別給予20mg/kg、10mg/kg、5mg/kg的燈蓋花素注射液按lml/kg體重皮下注射，每天I次共3w。6.門(mén)脈壓力測(cè)定沿大鼠腹壁正中線(xiàn)剪開(kāi)約2cm的“一”字形小口，打開(kāi)腹腔暴露門(mén)靜脈主干，分離出腸系膜上靜脈，結(jié)扎遠(yuǎn)離門(mén)靜脈的一端，血管夾夾住近端。用膜狀內(nèi)翳剪于腸系膜上靜脈上小心剪開(kāi)“V”形開(kāi)口，插入充滿(mǎn)肝素的PE-90管至門(mén)靜脈正中，固定后接上壓力換能器，另一通道測(cè)定門(mén)靜脈壓力。7.肝組織羥脯氨酸含量測(cè)定采用Jamall氏法，稱(chēng)取約IOOmg肝組織放入安培瓶中，加2.5ml生理鹽水和2.5mlHCl封瓶，將封好的安培瓶置于105°C烘箱中水解20h，過(guò)濾，取水解液100 μ I，置40°C烘箱，干燥后取出待測(cè)。加50 %異丙醇1.2ml，加氯氨-T溶液0.2ml，室溫放置lOmin，加入ER工作液，即歐氏液[ehrlich，s reagent solution,為25% (w/v)對(duì)二甲基氛基苯甲醒、27.3%(v/v)高氯酸的異丙醇溶液]1ml,振蕩混勻，50°C溫浴90min,于波長(zhǎng)558nm處,蒸懼水調(diào)零，測(cè)定OD值。依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算出Hyp (肝羥脯氨酸)含量，并除以稱(chēng)取的精確肝組織濕重進(jìn)行校正。8.肝組織學(xué)觀(guān)察甲醛固定肝組織，24h后逐級(jí)酒精脫水，二甲苯透明，56°C石蠟包埋，4 μ m厚切片，分別進(jìn)行HE (蘇木精-伊紅染色)、天狼猩紅染色。9.肝功能測(cè)定ALT (丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶)、AST (谷草轉(zhuǎn)氨酶)、Alb (白蛋白)、TBiL (總膽紅素)根據(jù)相應(yīng)試劑盒說(shuō)明書(shū)操作。二、結(jié)果1.燈盞花素能抑制大鼠肝星狀細(xì)胞的收縮ET-1引起大鼠肝星狀細(xì)胞收縮，該組的凝膠面積(49.96% ±4.46% )明顯小于對(duì)照組的凝膠面積(80.58% ±3.26%,P< 0.01) ;10_4mol/L及10_5mol/L燈盞花素用藥組的凝膠面積分別為74.33% ±5.5%和67.39% ±3.47%，明顯大于ET-1組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P < 0.01)(見(jiàn)圖2)。說(shuō)明lO-W/L 10_5mol/L燈盞花素能抑制大鼠肝星狀細(xì)胞的收縮。2.燈盞花素能降低DMN肝硬化模型大鼠門(mén)脈壓力正常組大鼠門(mén)脈壓力為9.33±0.91mmHg，DMN模型組大鼠門(mén)脈壓力明顯升高，為17.6±3.26mmHg，兩組相比P < 0.01。燈盞花素高劑量(20mg/kg)及中劑量(10mg/kg)組門(mén)脈壓力分別為13.4±1.23mmHg和13.7±3.08mmHg,明顯低于模型組(P < 0.05)(見(jiàn)表
1、圖 5)。表1.各組大鼠門(mén)脈壓力比較(X土S)
_組另1J_η_O:脈壓力(mmHg)_
正常組39.33±0.91
模型組317.60士2.66##
高劑量組313.40±1.23*
燈盞花素中劑量組313.70±3.08*
低劑量組317.63±2.93與正常組比較，##:P < 0.0l ;與模型組比較，*:P < 0.053.燈盞花素能減輕DMN肝硬化模型大鼠肝臟炎癥及膠原沉積肝組織HE染色觀(guān)察:正常肝小葉結(jié)構(gòu)清晰，肝細(xì)胞索由中央靜脈向四周呈放射狀排列；模型組大鼠肝臟內(nèi)有大量淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞等炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，肝竇狹窄，匯管區(qū)擴(kuò)大，廣泛增生的纖維組織將肝小葉包繞成大小不等的假小葉，部分大鼠有出血現(xiàn)象；與模型組相比，燈盞花素治療組大鼠的肝細(xì)胞變性、壞死、出血、纖維增生等病理變化都有不同程度的改善(見(jiàn)圖3)。肝組織天狼猩紅染色觀(guān)察:正常組僅在匯管區(qū)和中央靜脈壁見(jiàn)少量膠原纖維；模型組大鼠肝臟膠原增生明顯，大量的纖維間隔，向肝小葉伸展，分割包繞肝組織，形成假小葉；燈盞花素治療組肝臟的纖維化較模型組均有不同程度的改善(見(jiàn)圖4)。模型組Hyp含量明顯升高(737.82± 154.88)，燈盞花素高劑量組Hyp明顯降低610.08±119.85 (P < 0.05)(見(jiàn)表 2、圖 6)。表2.各組大鼠肝臟羥脯氨酸含量比較(X土S)
權(quán)利要求
1.燈盞花素在制備抑制肝星狀細(xì)胞收縮的藥物中的應(yīng)用。
2.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述燈盞花素抑制ET-1誘導(dǎo)的肝星狀細(xì)胞收縮的有效濃度為10_4mOl/L 10_5mOl/L。
3.燈盞花素在制備降低肝硬化門(mén)脈壓力的藥物中的應(yīng)用。
4.如權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，所述燈盞花素降低肝硬化門(mén)脈壓力的有效劑量為 10mg/kg 或 20mg/kg。
5.燈盞花素在制備減輕肝臟炎癥及膠原沉積的藥物中的應(yīng)用。
6.燈盞花素在制備改善肝功能的藥物中的應(yīng)用。
7.如權(quán)利要求6所述的應(yīng)用 ，其特征在于，所述改善肝功能包括改善肝功能ALT、AST、Alb,TRiL0
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了燈盞花素在制藥中的應(yīng)用。涉及燈盞花素在制備抑制肝星狀細(xì)胞收縮的藥物中的應(yīng)用、在制備降低肝硬化門(mén)脈壓力的藥物中的應(yīng)用、在制備減輕肝臟炎癥及膠原沉積的藥物中的應(yīng)用，以及燈盞花素在制備改善肝功能的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明設(shè)計(jì)了以ET-1誘導(dǎo)的大鼠肝星狀細(xì)胞(rHSCs)收縮的篩選平臺(tái)，發(fā)現(xiàn)10-4mol/L～10-5mol/L的燈盞花素可抑制ET-1誘導(dǎo)的rHSCs收縮。本發(fā)明還設(shè)計(jì)了燈盞花素對(duì)大鼠肝硬化門(mén)脈高壓作用的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)燈盞花素中劑量(10mg/kg)及高劑量(20mg/kg)均能降低DMN肝硬化模型大鼠的門(mén)脈壓力，改善肝功能。
文檔編號(hào)A61P1/16GK103156899SQ20111042209
公開(kāi)日2013年6月19日 申請(qǐng)日期2011年12月16日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月16日
發(fā)明者徐列明, 盧超, 周揚(yáng), 徐虹, 平鍵 申請(qǐng)人:上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬曙光醫(yī)院