專利名稱：蛇床子催眠活性組分的制備工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及中藥提取技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種蛇床子催眠活性組分的制備工藝。
背景技術(shù)：
蛇床子(Fructus cnidii )是傘形科植物蛇床OWi腫fflo/wieri (L.) Cuss.的干燥成熟果實(shí)。傳統(tǒng)中藥學(xué)認(rèn)為蛇床子辛、苦，性溫，有小毒，歸腎經(jīng)，有溫腎壯陽(yáng)，燥濕，祛風(fēng)， 殺蟲(chóng)。用于陽(yáng)痿，宮冷，寒濕帶下，濕痹腰痛；外治外陰濕疫，婦人陰癢，滴蟲(chóng)性陰道炎。《醫(yī)藥衛(wèi)生》2010年2月，《蛇床子鎮(zhèn)靜催眠有效成分提取方法篩選》一文中公開(kāi)了將蛇床子超聲波作用下，利用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、乙醇、水等提取，通過(guò)不同的提取介質(zhì)可以得到催眠效果不同的提取物。研究表明，蛇床子中提取分離的香豆素成分蛇床子素(osthol) 對(duì)中樞神經(jīng)有一定抑制作用，50% 95%乙醇加熱回流提取物有鎮(zhèn)靜催眠作用，但對(duì)其適用于工業(yè)化大生產(chǎn)的制備工藝、藥效的安全性以及與藥效可能密切相關(guān)的指紋圖譜目前尚未深入研究。目前常用的西藥類鎮(zhèn)靜催眠化藥長(zhǎng)期使用易產(chǎn)生耐受，治療指數(shù)低，依賴性和戒斷癥狀嚴(yán)重以及白日宿醉、反跳性失眠、記憶障礙、對(duì)認(rèn)知和精神運(yùn)動(dòng)功能的損害等。常用的安神中藥有酸棗仁、合歡皮、首烏藤、遠(yuǎn)志、柏子仁等，這些品種屈指可數(shù)，而且由于資源的限制、用量的增加，導(dǎo)致療效確切的安神中藥價(jià)格連年走高。蛇床子分布廣泛，我國(guó)大部分地區(qū)均適宜種植，具有耐寒耐旱，對(duì)土壤要求不嚴(yán)， 生長(zhǎng)快、產(chǎn)量高的特點(diǎn)，價(jià)格低廉，利用蛇床子資源豐富、價(jià)格低廉的優(yōu)勢(shì)，所以為了增加蛇床子催眠功效，提高其藥用價(jià)值，擴(kuò)大臨床失眠癥用藥的選擇，因此，采用能適應(yīng)于大生產(chǎn)簡(jiǎn)便易行的制備工藝，從蛇床子中提取具有催眠作用安全有效的活性組分，有助于開(kāi)發(fā)與利用蛇床子藥材資源，為制備催眠天然藥物奠定基礎(chǔ)，促進(jìn)中藥材產(chǎn)業(yè)化，對(duì)于發(fā)展中藥經(jīng)濟(jì)具有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明為了解決目前從蛇床子提取催眠類活性成分效率低，產(chǎn)量少等問(wèn)題，提供一種從蛇床子中提取具有催眠活性的有效組分的制備方法。本發(fā)明是由以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的，一種蛇床子催眠活性組分的制備工藝，是利用溶劑從蛇床子粗粉中通過(guò)加熱回流法提取粗提物，濃縮得到浸膏，對(duì)浸膏進(jìn)行進(jìn)一步大孔吸附樹(shù)脂柱層析分離，得到有效提取組分。具體步驟如下
步驟一取蛇床子粗粉，加95%的乙醇，加熱回流提取1-5次，每次l-2h，合并濾液，減壓回收乙醇，濃縮得浸膏，
步驟二 取大孔吸附樹(shù)脂，浸泡過(guò)夜，濕法裝柱，用蒸餾水沖洗色譜柱至無(wú)醇味，將上述浸膏用95%乙醇液溶解后上樣，
步驟三用40%-95%乙醇進(jìn)行洗脫，優(yōu)選50-60%，每次洗脫4 8倍柱體積不等，洗脫液減壓濃縮，回收溶劑至小體積，合并餾分，再濃縮，低溫干燥得蛇床子鎮(zhèn)靜催眠活性組分。將以上提取得到的組分進(jìn)行催眠實(shí)驗(yàn)，證明蛇床子40% 95%乙醇柱層析部位有一定催眠作用，對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)有一定抑制作用。應(yīng)用Bliss法計(jì)算得LD5tl為10. 32 g/kg， 95%可信區(qū)間為8. 33 12. 79 g/kg。其催眠有效劑量為0. 0625g/kg，說(shuō)明安全性較大。本發(fā)明的特點(diǎn)是
① 本發(fā)明首次報(bào)道了蛇床子催眠作用乙醇柱層析制備工藝，為開(kāi)發(fā)利用蛇床子藥材資源開(kāi)拓新領(lǐng)域。② 公開(kāi)了一種蛇床子催眠活性組分的制備工藝，藥效明確且毒性小，工藝簡(jiǎn)單易行，適合規(guī)?；I(yè)生產(chǎn)，可提高經(jīng)濟(jì)效益。本發(fā)明對(duì)設(shè)備條件要求低，易于實(shí)施，步驟簡(jiǎn)潔，生產(chǎn)成本低。


圖1為蛇床子提取物的標(biāo)準(zhǔn)圖譜HPLC 圖2為利用水洗脫得到的蛇床子提取物圖譜
圖3為利用30%乙醇洗脫得到的蛇床子提取物圖譜圖4為利用40%乙醇洗脫得到的蛇床子提取物圖譜圖5為利用50%乙醇洗脫得到的蛇床子提取物圖譜圖6為利用60%乙醇洗脫得到的蛇床子提取物圖譜圖7為利用70%乙醇洗脫得到的蛇床子提取物圖譜圖8為利用80%乙醇洗脫得到的蛇床子提取物圖譜圖9為利用95%乙醇洗脫得到的蛇床子提取物圖譜。圖10為對(duì)照物圖譜。
具體實(shí)施例方式1儀器與試藥
Aglientl200高效液相色譜儀，真空脫氣機(jī)，(G1322A)四元泵(G1311A)，自動(dòng)進(jìn)樣器 (G1329A)，柱溫箱(G1316A)，二極管陣列檢測(cè)器(G131OT)，HP Chemstation色譜工作站； 美國(guó)安捷倫有限公司；
Sartorious十萬(wàn)分之一分析天平德國(guó)賽多利斯公司； DlOl大孔吸附樹(shù)脂天津市海光化工有限公司批號(hào)030510 (1-3)； 蛇床子藥材購(gòu)于山西省中醫(yī)院，經(jīng)山西省藥品檢驗(yàn)所標(biāo)本室高天愛(ài)主任藥師鑒定； 蛇床子素(批號(hào)0822-9802)、歐前胡素(批號(hào)11826-200308)均購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所。2實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果
2. 1蛇床子柱層析不同提取物的制備
取蛇床子粗粉300g，加4倍量95%的乙醇，加熱回流提取3次，每次1.5h，合并濾液， 減壓回收乙醇，濃縮，低溫干燥，得膏重22.752g。
稱取500gD101大孔吸附樹(shù)脂，95%乙醇浸泡過(guò)夜，濕法裝柱，用蒸餾水沖洗色譜柱至無(wú)醇味，將上述22. 752g浸膏用95%乙醇液溶解后上樣，加濾紙、玻璃珠蓋樣，依次用水、 30%、40%、50%、60%、70%、80%、95%乙醇進(jìn)行洗脫，每次洗脫4 8倍柱體積不等，根據(jù)洗脫液顏色深淺，判斷是否更換洗脫溶劑組成，洗脫液減壓回收溶劑至小體積，合并流份，共得8 個(gè)組分，將各流分溶劑減壓回收，濃縮，低溫干燥得蛇床子鎮(zhèn)靜催眠各活性組分。2.2建立蛇床子柱層析不同組分指紋圖譜 2. 2. 1色譜條件及系統(tǒng)適用性
用 Elite SinoChrom ODS-BP 5 μ m, (4. 6mmX 250mm)色譜柱，以乙腈-0. 1% 醋酸水溶液梯度洗脫，洗脫程序?yàn)?(Tl5min，乙腈由23%增加到45%，15 30min乙腈由45%增加到 100%，30 40min，乙腈為 100% ；檢測(cè)波長(zhǎng)245nm (0 26 min)，322nm (26^30 min)，245nm (30 40 min)；柱溫40°C。2.2.2對(duì)照品溶液的制備
精密稱取蛇床子素及歐前胡素適量，加甲醇制成每Iml分別含50μ g和45μ g的混合溶液，作為對(duì)照品溶液。2.2.3供試品溶液的制備
取蛇床子各提取物適量(相當(dāng)于Ig生藥)，置IOml量瓶中，加70%乙醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，作為供試品溶液。2. 2. 4對(duì)照藥材溶液的制備
取蛇床子對(duì)照藥材適量，置25ml量瓶中，加乙醇15ml，超聲提取30分鐘，放冷加乙醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，作為對(duì)照藥材溶液溶液。2. 2. 5 測(cè)定法
吸取蛇床子對(duì)照藥材溶液20 μ L，注入高效液相色譜儀。在上述條件下測(cè)定3批蛇床子藥材樣品，結(jié)果見(jiàn)圖1。色譜指紋圖譜中8個(gè)峰是各供試品所共有的，因此確定這8個(gè)峰為共有峰。用二極管陣列檢測(cè)器做峰純度檢查，該8個(gè)峰均為純的色譜峰，其中6#峰為歐前胡素，7#峰為蛇床子素。最后采用高效液相色譜儀建立了柱層析八個(gè)組分高效液相色譜指紋圖譜，見(jiàn)圖 2-9。2. 2. 6方法學(xué)考察
①精密度試驗(yàn)取對(duì)照藥材溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，測(cè)得供試品各共有峰相對(duì)保留時(shí)間 (以蛇床子素為對(duì)照)的RSD均小于3%，表明進(jìn)樣與儀器的精密度良好，見(jiàn)表1。表1精密度試驗(yàn)結(jié)果
權(quán)利要求
1.一種蛇床子催眠活性組分的制備工藝，其特征是利用溶劑從蛇床子粗粉中通過(guò)加熱回流法提取粗提物，濃縮得到浸膏，對(duì)浸膏進(jìn)行進(jìn)一步大孔吸附樹(shù)脂柱層析分離，使用 40%-95%乙醇進(jìn)行洗脫，得到有效提取組分。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蛇床子催眠活性組分的制備工藝，其特征是步驟如下 步驟一，取蛇床子粗粉，加95%的乙醇，加熱回流提取1-5次，每次l-2h，合并濾液，減壓回收乙醇，濃縮得浸膏，步驟二，取大孔吸附樹(shù)脂，浸泡過(guò)夜，濕法裝柱，用蒸餾水沖洗色譜柱至無(wú)醇味，將上述浸膏用95%乙醇液溶解后上樣，步驟三，用40%-95%乙醇進(jìn)行洗脫，每次洗脫4 8倍柱體積不等，洗脫液減壓濃縮，回收溶劑至小體積，合并餾分，再濃縮，低溫干燥得蛇床子鎮(zhèn)靜催眠活性組分。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蛇床子催眠活性組分的制備工藝，其特征是洗脫使用的乙醇濃度為50-60%。
全文摘要
本發(fā)明涉及中藥提取技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種蛇床子催眠活性組分的制備工藝。解決目前從蛇床子提取催眠類活性成分效率低，產(chǎn)量少等問(wèn)題，一種蛇床子催眠活性組分的制備工藝，是利用溶劑從蛇床子粗粉中通過(guò)加熱回流法提取粗提物，濃縮得到浸膏，對(duì)浸膏進(jìn)行進(jìn)一步大孔吸附樹(shù)脂柱層析分離，得到有效提取組分。藥效明確且毒性小，工藝簡(jiǎn)單易行，適合規(guī)?；I(yè)生產(chǎn)，可提高經(jīng)濟(jì)效益。本發(fā)明對(duì)設(shè)備條件要求低，易于實(shí)施，步驟簡(jiǎn)潔，生產(chǎn)成本低。
文檔編號(hào)A61P25/20GK102397308SQ201110381418
公開(kāi)日2012年4月4日 申請(qǐng)日期2011年11月27日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月27日
發(fā)明者仝立國(guó), 馮瑪莉, 劉霞, 宋美卿, 武玉鵬, 牛艷艷, 白崇智, 白靈, 賀娟, 賈力莉, 郭建麗 申請(qǐng)人:山西省中醫(yī)藥研究院