專利名稱：一種車前子提取物及其應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種車前子提取物及其應用，屬于中藥技術領域。
背景技術：
當前，糖尿病已成為嚴重危害現(xiàn)代人類健康的三大慢性疾病之一。糖尿病主要表現(xiàn)為飯量大，飲水多，排尿多，體重減少的“三多一少”的癥狀，同時隨著得病時間的延長，可導致多種組織、器官的并發(fā)癥。目前用于治療糖尿病的藥物主要有磺脲類、格列奈類、雙胍類、噻唑烷二酮類化合物及α-糖苷酶抑制劑等。這些藥物對糖尿病具有一定的治療作用， 但同時也伴隨著許多副作用，如消化道的不良反應及一定的肝腎毒性等。同時由于糖尿病是體內幾個系統(tǒng)代謝發(fā)生紊亂的結果，是多原因的慢性終身性疾病，在長期治療的過程中患者和政府付出了經濟和精神上的巨大代價，因此在中藥中尋找治療糖尿病的新方法具有較大的社會效益。車前子為常用中藥，《中國藥典》QOlO版)以車前科車前屬植物車前Plantago asiatica L.或平車前Plantago depressa Willd.的干燥成熟種子作為車前子的基源， 具有清熱利尿，滲濕通淋，明目祛痰等功效，傳統(tǒng)上用于治療急性腎小球腎炎、咳喘和黃疸性肝炎等。車前子也可配伍其他中藥使用，例如復方龍膽瀉肝湯中配伍車前子起到清熱利濕的作用。近年來發(fā)現(xiàn)車前科植物平車前的變種毛平車前(P. cbpressa var. montata Kitag.)的醇提取物對四氧嘧啶所致糖尿病小鼠具有一定降血糖調血脂的作用，對其化學成分進行研究后發(fā)現(xiàn)，主要為熊果酸、齊墩果酸、芹菜素、木犀草素、梓醇、martynoside、高車前苷、高車前素等。另有研究者發(fā)現(xiàn)，車前(P. asiatica L.)的甲醇提取物對糖基化終末產物的形成也有抑制作用，顯示出其潛在的糖尿病治療作用，并提出該提取物中主要的糖基化抑制物是大車前苷(plantamajoside)。同時，歐車前(P. ovata)的籽殼具有通便、降低膽固醇、改善糖尿病患者的血糖水平，并已被開發(fā)成營養(yǎng)品。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的是提供一種車前子提取物及其應用。所述的車前子提取物，是由車前子經過2 6倍體積的體積分數(shù)為60 90%的乙醇水溶液回流提取2 6次得到，含有麥角留苷、異麥角留苷、京尼平苷酸、阿魏酸、車前素 A和車前素B。進一步，所述的車前子提取物，是由車前子經過3 5倍體積的體積分數(shù)為70 80%的乙醇水溶液回流提取3 5次得到。更進一步，所述的車前子提取物，是由車前子經過4倍體積的體積分數(shù)為75%的乙醇水溶液回流提取4次得到。所述的車前子推薦為車前科植物車前(Plantago asiatica L.)和/或平車前 (Plantago depressa ffilld.)的干燥成熟種子。所述的車前子推薦粉碎成直徑小于或等于6mm的顆粒。
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所述的車前子提取物在制備治療糖尿病藥物制劑中的應用。所述的車前子提取物與藥學上可接受的藥物載體組成的組合物在制備治療糖尿病藥物制劑中的應用。所述的糖尿病為I型和/或II型糖尿病。所述的藥物制劑形式可以是任何可藥用的劑型，這些劑型包括片劑、糖衣片劑、 薄膜衣片劑、腸溶衣片劑、膠囊劑、硬膠囊劑、軟膠囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注射劑、栓劑、軟膏劑、硬膏劑、霜劑、噴霧劑、滴劑、貼劑；優(yōu)選口服劑型，如膠囊劑、片劑、口服液、顆粒劑、丸劑、散劑、丹劑、膏劑等。所述的口服劑型可含有常用的賦形劑，諸如粘合劑、填充劑、稀釋劑、壓片劑、潤滑劑、崩解劑、著色齊U、調味劑和濕潤劑，必要時可對片劑進行包衣。適宜的填充劑包括纖維素、甘露糖醇、乳糖和其它類似的填充劑；適宜的崩解劑包括淀粉、聚乙烯吡咯烷酮和淀粉衍生物，例如羥基乙酸淀粉鈉；適宜的潤滑劑包括，例如硬脂酸鎂。適宜的藥物可接受的濕潤劑包括十二烷基硫酸鈉。本發(fā)明利用HepG2細胞進行體外葡萄糖消耗試驗，同時利用四氧嘧啶導致的I型糖尿病小鼠，鏈脲佐菌素導致的I型糖尿病小鼠，鏈脲佐菌素加高脂飼料導致的II型糖尿病大鼠進行體內藥效實驗，結果表明本發(fā)明提供的車前子提取物在體內試驗中可促進葡萄糖的消耗，且對細胞的毒性低，同時在體外試驗中可明顯提高血清胰島素水平，降低空腹血糖水平，顯示出良好的治療糖尿病(I型和II型)的藥用價值。


圖1為實施例1得到的車前子提取物在正離子模式下得到的指紋圖譜。圖2為實施例1得到的車前子提取物在負離子模式下得到的指紋圖譜。圖3為實施例1得到的車前子提取物在正離子模式下得到的質譜圖。圖4為實施例1得到的車前子提取物在負離子模式下得到的質譜圖。
具體實施例方式下面結合實施例對本發(fā)明做進一步詳細、完整的說明。實施例1去除沙石及雜質，將車前子粉碎為4mm的小顆粒，過篩，用4倍體積的75%乙醇回流提取4次，提取液過濾后回收溶劑至干，使用前用生理鹽水混懸。稱取車前子提取物樣品適量，用0.1% (V V)甲酸的水溶液與甲醇按體積比為 90 10混合的溶液溶解在容量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，制成每ImL溶液含Ig樣品，并利用超高效液相色譜-質譜聯(lián)用儀(UPLC-MQ進行分析，分析條件如下色譜條件=Waters, Acquity UPLC BEH C18 (50 X 2. 1讓)色譜柱；流動相A相為含 0. 1 % (V V)甲酸的水溶液，流動相B相為甲醇；流速為0. 3min ；柱溫為40°C ；進樣量為 2μ L ；檢測模式為正負離子全掃描監(jiān)測。質譜條件采用電噴霧離子源，正離子全掃描檢測模式進行數(shù)據(jù)采集時，離子源溫度為120°C ；去溶劑溫度為300°C ；氮氣為去溶劑和錐孔氣，流速分別為500L/h和50L/h ；毛細管電壓為2. 2千伏；錐孔電壓為23伏。負離子全掃描檢測模式進行數(shù)據(jù)采集時，離子源溫度為120°C ；去溶劑溫度為300°C ；氮氣為去溶劑和錐孔氣，流速分別為500L/h和50L/h ； 毛細管電壓為2. 5千伏；錐孔電壓為32伏。圖1為得到的車前子提取物在正離子模式下得到的指紋圖譜，其中主要色譜峰鑒定為阿魏酸、車前素B、車前素A和麥角留苷，圖2為得到的車前子提取物在負離子模式下得到的指紋圖譜，其中主要色譜峰鑒定為京尼平苷酸、車前素A、麥角留苷和異麥角留苷；圖3 為得到的車前子提取物在正離子模式下得到的質譜圖，圖4為得到的車前子提取物在負離子模式下得到的質譜圖；結合圖1至圖4可見得到的車前子提取物中含有麥角留苷、異麥角甾苷、京尼平苷酸、阿魏酸、車前素A和車前素B。實施例2將!fepG2細胞接種于96孔板，待細胞長至60%融合，換上含0. 2%牛血清白蛋白 (BSA)的不同濃度車前子提取物的培養(yǎng)液，溫育24h后，檢測培液中的葡萄糖殘量，按下式計算24h各孔細胞的葡萄糖消耗率。葡萄糖消耗率=(實驗孔Oh實測值-實驗孔24h實測值)/ (對照孔Oh實測值-對照孔24h實測值)X 100%。表1車前子提取物對HepG2細胞糖代謝的促進作用
權利要求
1.一種車前子提取物，其特征在于是由車前子經過2 6倍體積的體積分數(shù)為60 90%的乙醇水溶液回流提取2 6次得到，含有麥角留苷、異麥角留苷、京尼平苷酸、阿魏酸、車前素A和車前素B。
2.根據(jù)權利要求1所述的車前子提取物，其特征在于是由車前子經過3 5倍體積的體積分數(shù)為70 80%的乙醇水溶液回流提取3 5次得到。
3.根據(jù)權利要求2所述的車前子提取物，其特征在于是由車前子經過4倍體積的體積分數(shù)為75%的乙醇水溶液回流提取4次得到。
4.根據(jù)權利要求1所述的車前子提取物，其特征在于所述的車前子為車前科植物車前和/或平車前的干燥成熟種子。
5.根據(jù)權利要求1所述的車前子提取物，其特征在于所述的車前子粉碎成直徑小于或等于6mm的顆粒。
6.權利要求1所述的車前子提取物在制備治療糖尿病藥物制劑中的應用。
7.權利要求1所述的車前子提取物與藥學上可接受的藥物載體組成的組合物在制備治療糖尿病藥物制劑中的應用。
8.根據(jù)權利要求6或7所述的應用，其特征在于所述的糖尿病為I型和/或II型糖尿病。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種車前子提取物及其應用。所述的車前子提取物，是由車前子經過2～6倍體積的體積分數(shù)為60～90％的乙醇水溶液回流提取2～6次得到，含有麥角甾苷、異麥角甾苷、京尼平苷酸、阿魏酸、車前素A和車前素B。本發(fā)明提供的車前子提取物在體內試驗中可促進葡萄糖的消耗，且對細胞的毒性低，同時在體外試驗中可明顯提高血清胰島素水平，降低空腹血糖水平，顯示出良好的治療糖尿病的藥用價值，可單一或與藥學上可接受的藥物載體組成的組合物應用于制備治療糖尿病藥物制劑中。
文檔編號A61K36/68GK102228517SQ20111017251
公開日2011年11月2日 申請日期2011年6月23日 優(yōu)先權日2011年6月23日
發(fā)明者季光, 廖立平, 楊莉, 王崢濤, 祁萌, 耿放 申請人:上海中醫(yī)藥大學