專利名稱：一種白芍制劑的質量控制方法
技術領域：
本發(fā)明屬于藥 物質量控制技術領域，特別涉及一種白芍制劑的質量控制方法，質 量控制方法包括含量測定方法、指紋圖譜測定方法。
背景技術：
中藥指紋圖譜是近年來中藥質量控制的熱點話題，與以往的中藥質量檢測方法相 比，中藥指紋圖譜更具專屬性，它不僅包括了對幾個已知成分的分析，還包括了對已知成分 與各未知成分之間的相對含量分析。因此中藥指紋圖譜體現(xiàn)了對中藥內在質量的綜合評 價，尤其適用于有效成分不完全明確或不需要完全明確的情況下，對中藥材及中藥成品的 質量控制。中藥指紋圖譜必須以系統(tǒng)的化學成分和藥理作用研究為基礎，指紋圖譜所反映的 化學成分應包含中藥有效部位所含大部分成分的種類。中藥指紋圖譜獲得和評價方法主要 通過以下途徑實現(xiàn)的，在中醫(yī)理論的指導下，選擇能反映中藥材藥效的藥理實驗，獲取藥理 數(shù)據(jù)；在此基礎上用現(xiàn)代分析技術對樣品進行分析，獲取化學數(shù)據(jù)；采用化學計量學的數(shù) 據(jù)處理方法，最終可以對上述選定的中藥材質量作出客觀評價，得出產地固定、品種明確的 (必要時固定采收季節(jié)和炮制方法等)的優(yōu)質中藥材。在藥效學知道下進行指紋圖譜研究， 能夠保證指紋圖譜反映的化學成分是中藥材中有效部位所含絕大部分，或者有效成分的全 部。提取中藥的特征性指紋信息嚴謹而科學的做法是以有效成分為指紋信息特征，從 復雜體系中尋找與特定藥效具有正相關的有效分子群。但是，由于中藥的多成分性和復雜 性，在不同處方中的作用各不相同，或者不同成分發(fā)揮著不同的藥理作用，因此，我們必須 建立與之相對應，能夠反映有效成分的指紋圖譜。白芍為毛茛科植物芍藥Paeonia Lacttiflora Pall.的干燥根。其味苦、酸，微 寒，歸肝、脾經。具有平肝止痛，養(yǎng)血調經，斂陰止汗功效，用于頭痛眩暈，肋痛腹痛，四肢攣 痛，血虛萎黃，月經不調，自汗，盜汗等病癥。白芍根中主要含有芍藥苷、芍藥內酯苷、羥基 芍藥苷、苯甲酰芍藥苷等苷類成分。鄒華彬等采用系統(tǒng)溶劑氯仿、無水乙醇、水依次分別提 取白芍不同極性區(qū)間的成分，測定了它們的紫外指紋圖譜，根據(jù)其共有峰率和變異峰率雙 指標序列分析法對它們進行了分析，對不同產地、不同采集年份的白芍樣品進行了定量評 價，實驗結果也表明相近產地的白芍具有最相近的關系，不同產地的白芍之間存在著較明 顯的差異，同一地區(qū)不同年份的白芍之間有較明顯的差異。李越峰等、楊柳等、王巧等采用 HPLD-DAD分別對多批白芍樣品進行了指紋圖譜研究，分別確定了共有峰14，11，8個，不同 程度的說明白芍的指紋圖譜特征性及專屬性，對于全面控制白芍的質量提供了重要依據(jù)。 李雅等采用HPLC十八烷基硅烷鍵合硅膠柱，乙腈-磷酸水溶液梯度洗脫，對10批白芍超微 飲片進行研究，發(fā)現(xiàn)色譜峰20個，共有峰10個，建立了其高效液相指紋圖譜，并用于白芍超 微飲片的鑒別與評價。李冰嵐等以外地產白芍為對照，對10批浙江磐安產杭白芍進行了系 統(tǒng)的色譜指紋圖譜與芍藥苷含量分析，且對粉紅花品種標定了 19個共有指紋峰，建立了杭白芍的指紋圖譜，并且發(fā)現(xiàn)杭白芍粉紅花品種出現(xiàn)了明顯的品種分化。關于白芍藥材的指紋圖譜有一些報道，但很少用于生產中中藥材的質量控制。 同時近年來進一步的藥理基礎研究和臨床研究表明，從其根中提取精制得到的白芍總苷 (TGP)，有抗炎、抗?jié)兗懊庖哒{節(jié)等多種藥理作用。因此我們有必要建立體現(xiàn)白芍總苷成 分的指紋圖譜。近年來，經過臨床應用研究表明，以其為主要成分的白芍總苷膠囊用于治療 類風濕關節(jié)炎具有確切療效。因此，為了保證其質量，我們對白芍總苷制劑建立指紋圖譜， 同時我們以有效成分群為指紋特征，采用同一液相色譜條件，建立與大生產中與之相對應 的白芍總苷(中間體)、白芍藥材的指紋圖譜。通過對大量樣品的測定，建立白芍藥材、白芍 總苷及制劑標準指紋圖譜，并對三者指紋圖譜相關性進行研究，確定三者指紋圖譜相關聯(lián) 的特征指紋峰，以及特征指紋峰比值范圍，建立特征指紋峰評價標準。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的就是針對上述白芍制劑的質量控制現(xiàn)狀，提供一種基于高效液相色 譜法的白芍制劑質量控制方法。本方法具體包括三種方法(1)芍藥苷和芍藥內酯苷的含 量測定方法；(2)建立白芍制劑標準指紋圖譜；(3)建立白芍藥材、白芍總苷(中間體)標準 指紋圖譜；(4)建立三者指紋圖譜相關聯(lián)的特征指紋峰評價標準體系；可以通過以上方法 一種或幾種對白芍制劑進行質量控制。本發(fā)明解決其技術問題所采用的技術方案是(1)芍藥苷和芍藥內酯苷含量同步測定①液相色譜條件液相色譜條件色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑G.6mmX250mm， 5 μ m)；流動相乙腈(A)-O. 磷酸水溶液(B)，比例為(12 88)；流速1. OmL/min ；檢測 波長:230nm;柱溫:25°C。②對照品溶液的制備對照品溶液的制備取芍藥苷約23mg，精密稱定，置25ml量瓶中，用甲醇定容至刻 度，搖勻；取芍藥內酯苷約7. 5mg，精密稱定，置25ml容量瓶中，用甲醇定容至刻度，搖勻；分 別精密吸取芍藥苷和芍藥內酯苷各anl，置25ml量瓶中，用甲醇定容至刻度，搖勻即得。③供試品溶液的制備白芍藥材供試品溶液的制備取本品中粉約0. lg，精密稱定，置50ml量瓶中，加稀 乙醇約35ml，超聲處理30min，取出，放冷，加稀乙醇至刻度，搖勻，經0. 45um的微孔濾膜濾 過，即得。白芍總苷(制劑)供試品溶液的制備取白芍總苷(制劑)粉末約0. lg，精密稱 定，置50ml量瓶中，加稀乙醇約35ml，超聲處理15min，取出，放冷，加稀乙醇至刻度，搖勻。 精密吸取5ml，置50ml量瓶中，加稀乙醇至刻度，搖勻，經0. 45 μ m的微孔濾膜濾過，即得。④測定法測定法精密吸取對照品和供試品溶液各10μ 1，注入高效液相色譜儀，測定。⑤測定結果測定結果白芍藥材按干燥品計算，含芍藥苷不少于2.0%，芍藥內酯苷不少于 0. 5% ；
白芍總苷每克含芍藥苷不少于410mg，芍藥內酯苷不少于IlOmg ； 白芍制劑每粒含芍藥苷不少于104mg，芍藥內酯苷不少于30mg。(2) 一種白芍制劑指紋圖譜測定①液相色譜條件液相色譜條件色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑(4.6mmX250mm， 5ym)；流動相乙腈(A)-O. 磷酸水溶液(B)，梯度洗脫，洗脫程序見表1 ；流速1.0mL/ min ；檢測波長:230nm ；柱溫25°C。表1液相系統(tǒng)洗脫程序
時間(min)乙腈(A) (%) 0.005%憐酸二氫鉀水溶液(B) (%)
0793
51288
301288
401882
551882
754060
804060②供試品溶液的制備白芍藥材供試品溶液的制備取本品中粉約0. lg，精密稱定，置50ml量瓶中，加稀 乙醇約35ml，超聲處理30min，取出，放冷，加稀乙醇至刻度，搖勻，經0. 45um的微孔濾膜濾 過，即得。白芍總苷(制劑)供試品溶液的制備取白芍總苷(制劑)粉末約0. lg，精密稱 定，置50ml量瓶中，加稀乙醇約35ml，超聲處理30min，取出，放冷，加稀乙醇至刻度，搖勻。 精密吸取5ml，置50ml量瓶中，加稀乙醇至刻度，搖勻，經0. 45 μ m的微孔濾膜濾過，即得。③以芍藥苷為參照峰的標準指紋圖譜的制定測定法精密吸取上述對照品和供試品溶液各20 μ 1，分別注入高效液相色譜儀， 照上述色譜條件測定，記錄色譜圖；依據(jù)所得的10批樣品的指紋圖譜，制定標準指紋圖譜。④指紋圖譜的質量控制測定結果將白芍待測樣品指紋圖譜與制定的標準指紋圖譜進行比較，計算相似 度，識別兩者所具有的共同吸收峰的數(shù)量，以確定樣品是否合格。其中待測品指紋圖譜與標 準指紋圖譜比對，其相似度應為0. 99 1. 00。將白芍總苷(制劑)待測產品指紋圖譜與制定的標準指紋圖譜進行比較，計算相 似度，識別兩者所具有的共同吸收峰的數(shù)量，以確定產品是否合格。其中待測品指紋圖譜與 標準指紋圖譜比對，其相似度應為0. 90 1. 00。本發(fā)明所述的含量測定方法采用同一液相色譜條件對白芍藥材、白芍總苷(中 間體)、白芍制劑中芍藥苷和芍藥內酯苷含量同步測定，建立從藥材到制劑的整體的質量 控制體系，進一步保證制劑的質量和療效。該測定方法另一特別之處是將藥材中芍藥內酯苷與旁小峰分離，并達到分離度要求，能夠準確測定藥材中芍藥內酯苷的含量。通過測定， 制定含量要求標準白芍藥材按干燥品計算，含芍藥苷不少于2.0%，芍藥內酯苷不少于 0.5% ；白芍總苷每克含芍藥苷不少于410mg，芍藥內酯苷不少于IlOmg;白芍制劑每粒含芍 藥苷不少于l(Mmg，芍藥內酯苷不少于30mg。本發(fā)明所述的指紋圖譜研究通過建立白芍藥材、白芍總苷(中間體)、白芍制劑 標準指紋圖譜，將待測樣品指紋圖譜與制定的標準指紋圖譜進行比較，計算相似度，通過共 有峰的數(shù)量和相似度確定產品是否合格，全面的控制白芍藥材、白芍總苷(中間體)、白芍 制劑的質量，建立從藥材到制劑的整體的質量控制體系，進一步保證制劑的質量和療效。該 指紋圖譜測定方法另一特別之處是在對白芍藥材、白芍總苷(中間體)、白芍制劑指紋圖譜 相關性研究的基礎上，發(fā)現(xiàn)白芍藥材發(fā)揮藥效作用成分集中指紋圖譜25分鐘以后部分，因 此在對白芍藥材制定了標準指紋圖譜；可以運用國家藥典委員會制定《中藥指紋圖譜相似 度計算軟件》(2004)，通過譜圖處理中的數(shù)據(jù)剪切，保留20 80分鐘之間的峰，建立白芍 藥材標準指紋圖譜(見圖7)，科學的嚴格的控制藥材質量，同時也可以白芍藥材優(yōu)選進一 步提供依據(jù)。該指紋圖譜測定方法第三要點是在對白芍藥材、白芍總苷(中間體)、白芍制 劑指紋圖譜相關性研究的基礎上，對三者進行指紋圖譜研究，并通過軟件分析，確定白芍藥 材、白芍總苷及制劑指紋譜相關聯(lián)的特征指紋峰，以及特征峰指紋峰比值范圍，建立特征指 紋峰評價標準(見表2)。表2特征指紋峰評價體系表
0039
權利要求
1. 一種白芍制劑的質量控制方法，其特征在于步驟和條件如下(1)芍藥苷和芍藥內酯苷含量同步測定①液相色譜條件液相色譜條件色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動相乙腈(A)-O. 磷 酸水溶液(B)，比例為12 88 ；流速1. OmL/min ；檢測波長:230nm ；柱溫:25°C ；②對照品溶液的制備對照品溶液的制備取芍藥苷約2;3mg，精密稱定，置25ml量瓶中，用甲醇定容至刻度， 搖勻；取芍藥內酯苷約7. 5mg，精密稱定，置25ml容量瓶中，用甲醇定容至刻度，搖勻；分別 精密吸取芍藥苷和芍藥內酯苷各anl，置25ml量瓶中，用甲醇定容至刻度，搖勻即得；③供試品溶液的制備白芍藥材供試品溶液的制備取本品中粉約0. lg，精密稱定，置50ml量瓶中，加稀乙醇 約35ml，超聲處理30min，取出，放冷，加稀乙醇至刻度，搖勻，經0. 45um的微孔濾膜濾過，即 得；白芍總苷供試品溶液的制備取白芍總苷粉末約0. lg，精密稱定，置50ml量瓶中，加稀 乙醇約35ml，超聲處理15min，取出，放冷，加稀乙醇至刻度，搖勻，精密吸取5ml，置50ml量 瓶中，加稀乙醇至刻度，搖勻，經0. 45 μ m的微孔濾膜濾過，即得；④測定法測定法精密吸取對照品和供試品溶液各10μ 1，注入高效液相色譜儀，測定；⑤測定結果測定結果白芍藥材按干燥品計算，含芍藥苷不少于2. 0%，芍藥內酯苷不少于0. 5% ； 白芍總苷每克含芍藥苷不少于410mg，芍藥內酯苷不少于IlOmg ； 白芍制劑每粒含芍藥苷不少于l(Mmg，芍藥內酯苷不少于30mg ；(2)一種白芍制劑指紋圖譜測定①液相色譜條件液相色譜條件色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動相乙腈(A)-O. 磷 酸水溶液(B)，梯度洗脫，洗脫程序見表1 ；流速1. OmL/min ；檢測波長230nm ；柱溫25°C ；②供試品溶液的制備白芍藥材供試品溶液的制備取本品中粉約0. lg，精密稱定，置50ml量瓶中，加稀乙醇 約35ml，超聲處理30min，取出，放冷，加稀乙醇至刻度，搖勻，經0. 45um的微孔濾膜濾過，即 得；白芍總苷供試品溶液的制備取白芍總苷粉末約0. lg，精密稱定，置50ml量瓶中，加稀 乙醇約35ml，超聲處理30min，取出，放冷，加稀乙醇至刻度，搖勻；精密吸取5ml，置50ml量 瓶中，加稀乙醇至刻度，搖勻，經0. 45 μ m的微孔濾膜濾過，即得；③以芍藥苷為參照峰的標準指紋圖譜的制定測定法精密吸取上述對照品和供試品溶液各20 μ 1，分別注入高效液相色譜儀，照上 述色譜條件測定，記錄色譜圖；依據(jù)所得的10批樣品的指紋圖譜，制定標準指紋圖譜；④指紋圖譜的質量控制測定結果將白芍待測樣品指紋圖譜與制定的標準指紋圖譜進行比較，計算相似度，識 別兩者所具有的共同吸收峰的數(shù)量，以確定樣品是否合格，其中待測品指紋圖譜與標準指紋圖譜比對，其相似度應為0. 99 1. 00 ；將白芍總苷待測產品指紋圖譜與制定的標準指紋圖譜進行比較，計算相似度，識別兩 者所具有的共同吸收峰的數(shù)量，以確定產品是否合格，其中待測品指紋圖譜與標準指紋圖 譜比對，其相似度應為0. 90 1. 00。
2.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于(1)芍藥苷和芍藥內酯苷含量同步測定①液相色譜條件液相色譜條件色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動相乙腈(A)-O. 磷 酸水溶液(B)，比例為12 88 ；流速1. OmL/min ；檢測波長:230nm ；柱溫:25°C ；②對照品溶液的制備對照品溶液的制備取芍藥苷約23mg，精密稱定，置25ml量瓶中，用甲醇定容至刻度， 搖勻；取芍藥內酯苷約7. 5mg，精密稱定，置25ml容量瓶中，用甲醇定容至刻度，搖勻；分別 精密吸取芍藥苷和芍藥內酯苷各2ml，置25ml量瓶中，用甲醇定容至刻度，搖勻即得；③供試品溶液的制備白芍藥材供試品溶液的制備取本品中粉約0. lg，精密稱定，置50ml量瓶中，加稀乙醇 約35ml，超聲處理30min，取出，放冷，加稀乙醇至刻度，搖勻，經0. 45 μ m的微孔濾膜濾過， 即得；白芍總苷供試品溶液的制備取白芍總苷粉末約0. lg，精密稱定，置50ml量瓶中，加稀 乙醇約35ml，超聲處理15min，取出，放冷，加稀乙醇至刻度，搖勻。精密吸取5ml，置50ml量 瓶中，加稀乙醇至刻度，搖勻，經0. 45 μ m的微孔濾膜濾過，即得；④測定法測定法精密吸取對照品和供試品溶液各ΙΟμ 1，注入高效液相色譜儀，測定；⑤測定結果測定結果白芍藥材按干燥品計算，含芍藥苷不少于2. 0%，芍藥內酯苷不少于0. 5% ； 白芍總苷每克含芍藥苷不少于410mg，芍藥內酯苷不少于IlOmg; 白芍制劑每粒含芍藥苷不少于104mg，芍藥內酯苷不少于30mg。
3.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于①液相色譜條件液相色譜條件色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動相乙腈(A)-O. 磷 酸水溶液(B)，梯度洗脫，流速1. OmL/min ；檢測波長:230nm ；柱溫:25°C ；②供試品溶液的制備白芍藥材供試品溶液的制備取本品中粉約0. lg，精密稱定，置50ml量瓶中，加稀乙醇 約35ml，超聲處理30min，取出，放冷，加稀乙醇至刻度，搖勻，經0. 45um的微孔濾膜濾過，即 得；白芍總苷供試品溶液的制備取白芍總苷(制劑)粉末約O.lg，精密稱定，置50ml量 瓶中，加稀乙醇約35ml，超聲處理30min，取出，放冷，加稀乙醇至刻度，搖勻，精密吸取5ml， 置50ml量瓶中，加稀乙醇至刻度，搖勻，經0. 45 μ m的微孔濾膜濾過，即得；③以芍藥苷為參照峰的標準指紋圖譜的制定測定法精密吸取上述對照品和供試品溶液各20 μ 1，分別注入高效液相色譜儀，照上述色譜條件測定，記錄色譜圖；依據(jù)所得的10批樣品的指紋圖譜，制定標準指紋圖譜；④指紋圖譜的質量控制測定結果將白芍待測樣品指紋圖譜與制定的標準指紋圖譜進行比較，計算相似度，識 別兩者所具有的共同吸收峰的數(shù)量，以確定樣品是否合格，其中待測品指紋圖譜與標準指 紋圖譜比對，其相似度應為0. 99 1. 00 ；將白芍總苷待測產品指紋圖譜與制定的標準指紋圖譜進行比較，計算相似度，識別兩 者所具有的共同吸收峰的數(shù)量，以確定產品是否合格，其中待測品指紋圖譜與標準指紋圖 譜比對，其相似度應為0. 90 1. 00。
4.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于所述的含量同步測定方法中，白芍藥材中 芍藥內酯苷與旁小峰的分離度應大于1. 5。
5.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于所述的白芍藥材標準指紋圖譜的制定，是 運用國家藥典委員會制定《中藥指紋圖譜相似度計算軟件》，通過譜圖處理中的數(shù)據(jù)剪切， 保留20 80分鐘之間的峰，建立白芍藥材標準指紋圖譜。
6.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于在對白芍藥材、白芍總苷、白芍制劑指紋 圖譜相關性研究的基礎上，對三者進行指紋圖譜研究，并通過軟件分析，確定白芍藥材、白 芍總苷及制劑指紋譜相關聯(lián)的特征指紋峰，以及特征峰指紋峰比值范圍，建立特征指紋峰 評價標準。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種白芍總苷單方制劑的質量控制方法，該方法包括采用同一液相色譜條件建立了白芍藥材、白芍總苷、白芍制劑中芍藥苷和芍藥內酯苷的含量同步測定方法；能準確測定芍藥苷和芍藥內酯苷的含量，控制白芍制劑的質量。該方法對樣品的前處理方法簡單，特征性成分保留完整，供試品溶液穩(wěn)定；且精密度較高，重現(xiàn)性良好，具有一定的專屬性；所得指紋圖譜中各特征峰分離效果良好，白芍藥材、白芍總苷、制劑的指紋圖譜有良好的相關性；利用指紋圖譜相關性研究從新角度建立白芍藥材標準指紋圖譜，可用于鑒別白芍藥材的偽劣，提高白芍制劑在生產過程的可控性，有利于保證白芍制劑的質量穩(wěn)定和臨床療效。
文檔編號A61K36/71GK102138985SQ201110072539
公開日2011年8月3日 申請日期2011年3月22日 優(yōu)先權日2011年3月22日
發(fā)明者俞偉, 周海濱, 夏川川, 張新明, 楊海玲, 江海龍, 饒毅 申請人:寧波立華制藥有限公司