專利名稱：幽門螺旋桿菌的除菌劑和除菌方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及幽門螺旋桿菌(Helicobacter pylori)的除菌劑以及使用該除菌劑的除菌方法。
背景技術(shù)：
幽門螺旋桿菌為慢性胃炎、胃和十二指腸潰瘍的慢性化因素或再發(fā)生因素，據(jù)認(rèn)為，世界人口的50%被感染。已知該幽門螺旋桿菌在自然環(huán)境中，僅在動(dòng)物的胃內(nèi)能夠增殖，并且感染人、猴、貓、豬、狗。據(jù)認(rèn)為，幽門螺旋桿菌具有尿素酶活性，由尿素生成氨，由此中和胃酸，而棲息在胃內(nèi)的強(qiáng)酸性環(huán)境中。目前，為了去除幽門螺旋桿菌，進(jìn)行將抗生物質(zhì)(阿莫西林、克拉霉素)和質(zhì)子泵 抑制劑組合的三聯(lián)療法，但是由于抗生物質(zhì)耐性菌的出現(xiàn)，用該方法越來越難以完全除菌(非專利文獻(xiàn)I)。因此，還嘗試了使用新型抗生物質(zhì)(甲硝唑、左氧氟沙星)的2次、3次除菌法。但是，這些除菌方法也影響到對(duì)人體有用的腸內(nèi)細(xì)菌的功能，因此具有伴隨腹瀉等這樣的問題。因此，近年來，作為副作用少的除菌方法，除了三聯(lián)療法之外，還提出了將糖和蛋白質(zhì)的美拉德反應(yīng)產(chǎn)物制劑并用的方法(專利文獻(xiàn)I)、施用阻礙幽門螺旋桿菌定居在胃壁的褐藻糖膠的方法(專利文獻(xiàn)2)、施用抑制幽門螺旋桿菌增殖的具有β 1-4鍵的糖類的方法(專利文獻(xiàn)3)等。此外，還報(bào)道了與益生菌(乳酸菌等)的并用治療(非專利文獻(xiàn)2)。但難以說它們的作用機(jī)理一定明確，而且，作為除菌方法也沒有得到確立。現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)專利文獻(xiàn)I :日本特開2008-024662號(hào)公報(bào)專利文獻(xiàn)2 :日本特開平07-138166號(hào)公報(bào)專利文獻(xiàn)3 日本特開2008-120789號(hào)公報(bào)非專利文獻(xiàn)非專利文獻(xiàn)I :“Helicobacter pylori感染O診斷i治療O力' 1 K 7 > ”日本Helicobacter 學(xué)會(huì)發(fā)行)非專利文獻(xiàn)2 “醫(yī)學(xué) O )吵vol. 228，No. 3，2009，pp. 213-21
發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明所要解決的課題因此，本發(fā)明的目的在于提供副作用少的新型幽門螺旋桿菌的除菌劑以及使用該除菌劑的除菌方法。用于解決課題的手段本發(fā)明人著眼于幽門螺旋桿菌在胃內(nèi)的強(qiáng)酸性環(huán)境中能夠棲息的原因是它由尿素生成氨而中和胃酸的這樣的方面進(jìn)行了深入研究。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，通過將氨或銨離子的吸附劑導(dǎo)入胃內(nèi)，造成幽門螺旋桿菌難以棲息的環(huán)境，可以去除幽門螺旋桿菌，從而完成了本發(fā)明。具體地說，本發(fā)明如下。(I) 一種幽門螺旋桿菌的除菌劑，其包含氨或銨離子的吸附材料。(2)根據(jù)上述⑴所述的除菌劑，其中，所述氨或銨離子的吸附材料為選自由活性炭、硅膠、氧化鋁、沸石和陽離子交換材料組成的組中的至少一種。(3) 一種幽門螺旋桿菌的除菌方法，該方法中，向幽門螺旋桿菌感染的胃內(nèi)導(dǎo)入上述⑴或⑵所述的除菌劑。發(fā)明效果
根據(jù)本發(fā)明，可以提供副作用少的新型幽門螺旋桿菌的除菌劑以及使用該除菌劑的除菌方法。附圖
簡單說明圖I是示出將幽門螺旋桿菌用PBS來混合稀釋后接種于瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)3天時(shí)的菌落形成的狀態(tài)的圖。圖2A是示出將幽門螺旋桿菌用PBS來混合稀釋后接種于瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)I天，然后散布O. IM鹽酸，并進(jìn)一步培養(yǎng)3天時(shí)的菌落形成的狀態(tài)的圖。圖2B是示出將幽門螺旋桿菌用PBS來混合稀釋后接種于瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)I天，然后散布分散有活性炭粉末A(1000°C燒制)的O. IM鹽酸，并進(jìn)一步培養(yǎng)3天時(shí)的菌落形成的狀態(tài)的圖。圖2C是示出將幽門螺旋桿菌用PBS來混合稀釋后接種于瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)I天，然后散布分散有活性炭粉末B (500°C燒制)的O. IM鹽酸，并進(jìn)一步培養(yǎng)3天時(shí)的菌落形成的狀態(tài)的圖。圖3是示出圖2A 圖2C中的菌落面積(mm2)的圖。圖4是示出將幽門螺旋桿菌用PBS來混合稀釋后接種于瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)I天，然后在4個(gè)角設(shè)置孔，向其中填滿分散有活性炭粉末A的O. IM鹽酸(同圖(I) (3))、或O. IM鹽酸(同圖(4))，進(jìn)一步培養(yǎng)3天時(shí)的菌落形成的狀態(tài)的圖。圖5是示出圖4的(I) (3)中的增殖抑制區(qū)域的寬度(mm)、和(I) (3)中所用的活性炭粉末的氨吸附能力(ppm)的圖。圖6A是示出將幽門螺旋桿菌用PBS來混合稀釋后接種于瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)I天，然后散布分散有纖維素的O. IM鹽酸，并進(jìn)一步培養(yǎng)3天時(shí)的菌落形成的狀態(tài)的圖。圖6B是示出將幽門螺旋桿菌用PBS來混合稀釋后接種于瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)I天，然后散布分散有硅膠的O. IM鹽酸，并進(jìn)一步培養(yǎng)3天時(shí)的菌落形成的狀態(tài)的圖。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明涉及的幽門螺旋桿菌的除菌劑包含氨或銨離子的吸附材料。此外，本發(fā)明涉及的幽門螺旋桿菌的除菌方法是，向幽門螺旋桿菌感染的胃內(nèi)導(dǎo)入本發(fā)明涉及的除菌劑的方法。如上所述，幽門螺旋桿菌在胃內(nèi)的強(qiáng)酸性環(huán)境中能夠棲息的原因是，它由尿素生成氨，而中和胃酸。于是，在本發(fā)明涉及的幽門螺旋桿菌的除菌方法中，將包含氨或銨離子的吸附材料的除菌劑導(dǎo)入胃內(nèi)，吸附氨或銨離子，由此造成幽門螺旋桿菌難以棲息的環(huán)境，去除幽門螺旋桿菌。換言之，本發(fā)明涉及的除菌方法是通過阻礙胃酸的中和來去除幽門螺旋桿菌。相對(duì)于利用抗生物質(zhì)的直接除菌方法，該方法可稱為間接除菌方法。特別是，幽門螺旋桿菌僅在胃粘膜表面棲息，在胃粘膜深部未發(fā)現(xiàn)。該理由認(rèn)為，存在于胃粘膜深部的特異的糖蛋白質(zhì)糖鏈末端部分的順式-N-乙?；?D-葡糖胺抑制幽門螺旋桿菌的增殖(Science, vol. 305,2004, pp. 1003-1006)。如此，幽門螺旋桿菌棲息在胃粘膜表面，由此可以想到，只要導(dǎo)入到胃內(nèi)，除菌劑就會(huì)達(dá)到幽門螺旋桿菌的周圍。作為上述氨或銨離子的吸附材料，只要具有對(duì)氨或銨離子的吸附能力就沒有特別的限定。例如可以使用選自由活性炭、硅膠、氧化鋁、沸石和陽離子交換材料組成的組中的至少I種。從提高胃粘膜上的粘附性和對(duì)氨或銨離子的吸附能力的觀點(diǎn)考慮，這些吸附材料優(yōu)選為粉末狀或微粒狀。作為將成為上述活性炭的原料的碳原料，可以使用鋸屑、木材、椰子皮、油碳、酚醛樹脂、纖維素、丙烯腈、煤浙青、石油浙青等公知的原料。
這些當(dāng)中，優(yōu)選為純度90%以上的高純度纖維素，更優(yōu)選為純度95%以上的高純度纖維素。作為高純度纖維素的材料，可以使用銅氨人造絲、粘膠人造絲、棉、紙漿、棉短絨、粘膠纖維、萊賽爾纖維(Lyocell)(天絲(Tencel))等公知的材料。在制造活性炭時(shí)，利用電爐等對(duì)上述碳原料進(jìn)行燒制。作為燒制溫度，優(yōu)選為300 1500°C，更優(yōu)選為500 1000°C。另外，有這樣的傾向燒制溫度越低，氨的吸附能力越聞。需要說明的是，該活性炭可以為經(jīng)活化處理的活性炭，也可以為未經(jīng)活化處理的活性炭。作為上述硅膠、氧化鋁、沸石沒有特別的限定，可以使用一直以來用作氨或銨離子的吸附材料。作為陽離子交換材料，可以使用強(qiáng)酸性陽離子交換樹脂(作為官能團(tuán)，具有-SO3H)、弱酸性陽離子交換樹脂(作為官能團(tuán)，具有-C00H)等。這些吸附材料可以由纖維素、硝基纖維素、明膠、聚丙烯酰胺、聚甲基丙烯酰胺等親水性多孔聚合物來包覆。通過這樣包覆，可以防止胃粘膜細(xì)胞的損傷。作為將本發(fā)明涉及的除菌劑導(dǎo)入到胃內(nèi)的方法，可以舉出經(jīng)口給藥或者一邊用內(nèi)視鏡觀察一邊直接給藥的方法等。特別是在經(jīng)口給藥的情況下，可根據(jù)需要加工成散剤、顆粒劑、片劑、糖衣片、膠囊齊U、液劑等。此外，還可以混入到食品(口香糖、糖、果凍、酸奶等)或飲料中，與通常的飲食品同樣地?cái)z取。本發(fā)明涉及的除菌劑不會(huì)在胃中被消化或者吸收，并且不會(huì)導(dǎo)致胃粘膜損傷。因此，通過連續(xù)地、一定期間、且適量導(dǎo)入胃內(nèi)，可以逐步減少幽門螺旋桿菌，而不用擔(dān)憂副作用。特別是，如果使用于食品或醫(yī)療用途中所用的材料，則可以提供安全且廉價(jià)的除菌劑。進(jìn)而，根據(jù)本發(fā)明涉及的除菌劑的機(jī)理，也可以對(duì)抗生物質(zhì)耐性(非感受性)菌期待除囷效果。需要說明的是，本發(fā)明涉及的除菌方法可以單獨(dú)實(shí)施，但也可以與以往公知的除菌方法并用。例如，通過用本發(fā)明涉及的除菌方法來除菌后進(jìn)行利用三聯(lián)療法的除菌，可以期待減少抗生物質(zhì)的用量的效果(Helicobacter Research, vol. 8, No. I, 24, pp. 86-87)。實(shí)施例
下面對(duì)本發(fā)明的實(shí)施例進(jìn)行說明。需要說明的是，本發(fā)明不應(yīng)該限于下述的實(shí)施例來解釋，在權(quán)利要求書中所記載的范圍內(nèi)可以進(jìn)行各種變更。[實(shí)施例I]為了評(píng)價(jià)幽門螺旋桿菌的除菌效果，進(jìn)行下面的實(shí)驗(yàn)。本實(shí)驗(yàn)中所用的幽門螺旋桿菌為由理化學(xué)研究所BioResource Center提供的菌株(Campylobacter pylori subsp.pylori> JCM No. 12093)。作為培養(yǎng)皿，使用了以下(a)、(b)2種。(a)胰酪胨大豆 II 5%羊血瓊脂培養(yǎng)基(Becton Dickinson 制，cat251239)(b)幽門螺旋桿菌瓊脂培養(yǎng)基(極東制藥制，編號(hào)05561) 在用于保存幽門螺旋桿菌株的增殖時(shí)，使用上述(a)的培養(yǎng)皿。此外，對(duì)在上述(a)的培養(yǎng)皿中增殖的幽門螺旋桿菌，進(jìn)行下面所述的各種處理后，為了觀察菌體(菌落形成)的狀態(tài)，使用了上述(b)的培養(yǎng)皿。該幽門螺旋桿菌瓊脂培養(yǎng)基具有這樣的特征由于添加到培養(yǎng)基中的選擇劑，除幽門螺旋桿菌以外的發(fā)育被抑制，并且，由于四氮唑紫的添加，幽門螺旋桿菌的菌落被染成紫色，因此易于確認(rèn)。首先，將幽門螺旋桿菌用O. 7mL的PBS來混合稀釋，接種于幽門螺旋桿菌瓊脂培養(yǎng)基后，使用AnaeroPack微好氧袋用裝(微好氧培養(yǎng)，氧濃度6 12%, 二氧化碳濃度5 8% ;三菱瓦斯化學(xué)制，MGC A-18)，在37°C培養(yǎng)3天。培養(yǎng)后的菌落形成的狀態(tài)示于圖I。然后，將幽門螺旋桿菌用O. 7mL的PBS來混合稀釋，分別接種于3個(gè)幽門螺旋桿菌瓊脂培養(yǎng)基后，使用上述的AnaeroPack微好氧袋用裝,在37°C培養(yǎng)I天。然后,在I個(gè)幽門螺旋桿菌瓊脂培養(yǎng)基內(nèi)，散布O. IM鹽酸O. 5mL,在剩余2個(gè)幽門螺旋桿菌瓊脂培養(yǎng)基內(nèi)，散布分散有未經(jīng)活化處理的活性炭粉末A或活性炭粉末B (均為IOmg)的O. IM鹽酸O. 5mL,進(jìn)一步培養(yǎng)3天。需要說明的是，活性炭粉末A是在1000°C進(jìn)行燒制的，其氨吸附能力低，活性炭粉末B是在500°C進(jìn)行燒制的，其氨吸附能力高。培養(yǎng)后的菌落形成的狀態(tài)示于圖2A 圖2C。圖2A為未分散有活性炭粉末的狀態(tài)，圖2B為分散有活性炭粉末A的狀態(tài)、圖2C為分散有活性炭粉末B的狀態(tài)。在圖2B、圖2C中，圈出菌落。此外，各菌落的菌落面積(mm2)的總和示于圖3。由圖I 圖3可知，在散布了 PBS和O. IM鹽酸的情況下，幽門螺旋桿菌增殖，但在散布了分散有活性炭粉末A、B的O. IM鹽酸的情況下，菌落的數(shù)量和面積減少。此外，該減少比例與氨吸附能力呈正相關(guān)。該結(jié)果暗示以下的內(nèi)容。即，幽門螺旋桿菌為了在鹽酸中進(jìn)行繁殖，需要用尿素酶分解尿素產(chǎn)生氨，來中和鹽酸，但在活性炭的存在下氨被吸附，因此不能中和鹽酸，通過持續(xù)暴露于鹽酸，從而繁殖被抑制。接著，為了使培養(yǎng)條件同一，僅使用I個(gè)幽門螺旋桿菌瓊脂培養(yǎng)基，進(jìn)行了同樣的實(shí)驗(yàn)。將幽門螺旋桿菌用O. 7mL的PBS來混合稀釋，接種于I個(gè)幽門螺旋桿菌瓊脂培養(yǎng)基后，使用上述的AnaeroPack微好氧袋用裝,在37°C培養(yǎng)I天。然后，在幽門螺旋桿菌瓊脂培養(yǎng)基的4個(gè)角設(shè)置直徑7_的孔，向其中填滿分散有市售產(chǎn)品或試制品的活性炭粉末5mg的O. IM鹽酸O. 2mL、或者O. IM鹽酸O. 2mL，進(jìn)一步培養(yǎng)3天。培養(yǎng)后的增殖抑制區(qū)域的狀態(tài)示于圖4。圖4的(I)為分散有將高純度纖維素在500°C燒制的活性炭粉末(試制品)的狀態(tài)，(2)為分散有將高純度纖維素在1000°C燒制的活性炭粉末(試制品)的狀態(tài)，(3)為分散有吳羽化學(xué)工業(yè)制的“克美凈(Kremezin) ”的狀態(tài)，⑷為未分散有活性炭粉末的狀態(tài)。此外，圖4的⑴ (3)中的增殖抑制區(qū)域的寬度(_)、和⑴ (3)中所用的活性炭粉末的氨吸附能力(ppm)示于圖5。由圖4、圖5可知，在孔的周邊，觀察到菌落的增殖抑制區(qū)域，其寬度與氨吸附能力呈正相關(guān)。需要說明的是，在圖4的(4)中，也能觀察到大的增殖抑制區(qū)域，但這是因?yàn)椋}酸量多了相當(dāng)于活性炭粉末5mg的容積的部分，導(dǎo)致持續(xù)暴露在過剩的鹽酸中。接著，使用硅膠作為除活性炭以外的吸附材料進(jìn)行同樣的實(shí)驗(yàn)。使用纖維素作為對(duì)照。
將幽門螺旋桿菌用O. 7mL的PBS來混合稀釋，分別接種于3個(gè)幽門螺旋桿菌瓊脂培養(yǎng)基后，使用上述的AnaeroPack微好氧袋用裝,在37°C培養(yǎng)I天。然后，在各幽門螺旋桿菌瓊脂培養(yǎng)基內(nèi)，散布分散有纖維素(旭化成制，CEOLUS 101)10mg、或者硅膠(Chemco制，LC-SORBSPff-B-Si) IOmg 的 O. IM 鹽酸 O. 5mL,進(jìn)一步培養(yǎng) 3 天。培養(yǎng)后的菌落形成的狀態(tài)不于圖6A、圖6B。圖6A為分散有纖維素的狀態(tài)、圖6B為分散有硅膠的狀態(tài)。由圖6A、圖6B可知，在散布了不具有氨或銨離子的吸附能力的纖維素時(shí)，未確認(rèn)到抑制增殖效果，但在散布了硅膠時(shí)，確認(rèn)到抑制增殖效果。該原因可認(rèn)為，雖然硅膠氨吸附能力低，但可以通過靜電相互作用吸附氨與鹽酸反應(yīng)所生成的銨離子。因此，在陽離子交換材料中，也可以期待同樣的效果。[實(shí)施例2]為了探討利用活性炭的除菌效果，經(jīng)過2名幽門螺旋桿菌感染患者的同意，進(jìn)行尿素呼氣試驗(yàn)(UBT)。首先，對(duì)2名試驗(yàn)合作者進(jìn)行尿素呼氣試驗(yàn)，根據(jù)呼氣中的含有13C的二氧化碳濃度的比例，算出胃中的幽門螺旋桿菌量(UBT值Λ 13C (%。))。其后，讓患者一日3次飯后口服2片將高純度纖維素在1000°C燒制的活性炭粉末(試制品)的膠囊(每I片含有ISOmg的活性炭粉末)，根據(jù)服用3周后的呼氣中的含有13C的二氧化碳濃度的比例，算出胃中的幽門螺旋桿菌量(UBT值A(chǔ)13C(%。))。作為呼氣試驗(yàn)裝置，使用二氧化碳同位素比分析裝置(日本大塚電子制，POC one)。呼氣的采樣和操作按照制造商的操作說明書進(jìn)行。結(jié)果示于下表I。表I
試驗(yàn)合作者(性別，年齡)~服用前的A13C (%。)~j服用3周后的A13C (%。)
A(男性，48 歲) Γδ2Γ0
Β(男性，57 歲)52 7ΤΓ0由表I可知，通過服用活性炭3周，UBT值減少至服用前的54 27%。由此可知，活性炭具有顯著的除菌效果。
權(quán)利要求
1.一種幽門螺旋桿菌的除菌劑，其包含氨或銨離子的吸附材料。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的除菌劑，其中，所述氨或銨離子的吸附材料為選自由活性炭、硅膠、氧化鋁、沸石和陽離子交換材料組成的組中的至少ー種。
3.—種幽門螺旋桿菌的除菌方法，該方法中，向幽門螺旋桿菌感染的胃內(nèi)導(dǎo)入權(quán)利要求I或2所述的除菌劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及的幽門螺旋桿菌的除菌劑包含氨或銨離子的吸附材料，本發(fā)明涉及的幽門螺旋桿菌的除菌方法是，向幽門螺旋桿菌感染的胃內(nèi)導(dǎo)入本發(fā)明涉及的除菌劑的方法。幽門螺旋桿菌在胃內(nèi)的強(qiáng)酸性環(huán)境下能夠棲息的原因是，它由尿素生成氨，而中和胃酸。于是，在本發(fā)明中，將包含氨或銨離子的吸附材料(活性炭、硅膠、氧化鋁、沸石、陽離子交換材料等)的除菌劑導(dǎo)入胃內(nèi)，吸附氨或銨離子，由此造成幽門螺旋桿菌難以棲息的環(huán)境，去除幽門螺旋桿菌。
文檔編號(hào)A61P31/04GK102695516SQ201080041068
公開日2012年9月26日 申請日期2010年9月14日 優(yōu)先權(quán)日2009年9月16日
發(fā)明者出口喜三郎, 長澤淳史 申請人:醫(yī)療保健蛋白質(zhì)組學(xué)生物技術(shù)株式會(huì)社