專利名稱：用于治療傷口、瘢痕、外科手術(shù)后粘連形成的含有透明質(zhì)酸的組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及增強(qiáng)生物學(xué)活性肽，尤其是來源于人乳鐵蛋白的肽的療效的藥物組合物。所述組合物有效用于治療和/或預(yù)防傷口、瘢痕和外科手術(shù)后粘連。背景腹膜粘連是外科創(chuàng)傷或其它類型的損傷后腹部結(jié)構(gòu)之間的纖維組織連接。普通腹部外科手術(shù)、血管外科手術(shù)、婦科外科手術(shù)、泌尿外科手術(shù)和矯形外科手術(shù)可導(dǎo)致至多達(dá) 95% 患者中的粘連形成(Ellis 等，1999. Adhesion-related hospital readmissions after abdominal and pelvic surgery -.a retrospective cohort study (腹部禾口盆月空夕卜科手術(shù)后粘連相關(guān)的再次入院回顧件隊(duì)列研究).LanceU柳葉刀)353,1476-1480)。外科手術(shù)后粘連被認(rèn)為是小腸梗阻的主要原因(Menzies等，2001. Small bowel obstruction due to postoperative adhesions treatment patterns and associated costs in IlOhospital admissions (手術(shù)后粘連導(dǎo)致的小腸梗阻110例醫(yī)院入院者的治療模式和相關(guān)費(fèi)用)· Ann R Coll Surg Engl (英格蘭皇家外科醫(yī)師學(xué)院年報(bào))83,40-46.)，小腸梗阻是女性中繼發(fā)不孕的熟知的病因(Marana等，1995. Correlation between the American Fertility Society classifications of adnexal adhesions and distal tubal occlusion, salpingoscopy, and reproductive outcome in tubal surgery (附件豐占連禾口遠(yuǎn)側(cè)輸卵管閉塞的美國生育學(xué)會分類，輸卵管鏡檢查和輸卵管外科手術(shù)中的生殖結(jié)果之間的相關(guān)件).Fertil Steril (牛育和不育)64,924-929),以及是術(shù)后痛的可能原因(I^ajanen
2005. Laparoscopy in chronic abdominal pain -.a prospective nonrandomized long-term follow-up study (慢性腹部疼痛的腹腔鏡檢查前瞻性非隨機(jī)化的長期隨訪研究)·丄Clin Gastroenterol (臨床胃腸病學(xué)雜志)39,110-114)。超過30%的經(jīng)歷下腹外科手術(shù)的個(gè)體在他們生命的一些時(shí)期由于與粘連形成直接或間接相關(guān)的病癥再次入院 (Lower 2000.The impact of adhesions on hospital readmissions over ten years after 8849 open gynaecological operations :an assessment from the Surgical and Clinical Adhesions Research Study (8849例開放式婦科手術(shù)后10年間粘連對醫(yī)院再次入院的影響來自于外科和臨床粘連調(diào)杳研究的評估).Biog(英國產(chǎn)科學(xué)和婦科學(xué)雜志)107,855-862.)。數(shù)十年中，已經(jīng)嘗試通過減少外科創(chuàng)傷(避免干燥、輕柔組織處理、仔細(xì)止血) 和異物對腹腔的污染(使用無淀粉手套、無絨紗布和可吸收縫線)來減少外科手術(shù)后粘連(Holmdahl 等，1997. Adhesions !pathogenesis and prevention-panel discussion and summary (粘連發(fā)病機(jī)理和預(yù)防-小組討論和總結(jié)).Eur T Surg SuddI (歐洲外科學(xué)雜志增刊)，56-62.)。重要的是，腹腔鏡技術(shù)不足以克服手術(shù)后粘連形成的問題(Duron 等，2000. Prevalence and mechanisms of small intestinal obstruction following laparoscopic abdominal surgery :a retrospective multicenter study (月復(fù) I空鏡月復(fù)部外科手術(shù)后小腸梗阻的患病率和機(jī)制回顧性多中心研究).French Association forSurgical Research (法國外科學(xué)研究學(xué)會).Arch Surg (外科學(xué)檔案)135, 208-212)。因此，腹膜內(nèi)粘連仍然是重要臨床問題，現(xiàn)在認(rèn)為通過優(yōu)秀外科技術(shù)僅可能少量影響未來的改善。相反，焦點(diǎn)是開發(fā)預(yù)防粘連形成的專用產(chǎn)品，其與外科介入聯(lián)合施用。
在粘連的預(yù)防中測試的大部分治療策略是醫(yī)療裝置產(chǎn)品。已經(jīng)評價(jià)了不同類型的物理屏障，其中在介入過程中應(yīng)用的生物可降解膜在腹膜愈合的關(guān)鍵期期間用于使受損傷的腹部表面分開。兩種最廣泛使用的減少粘連的屏障是化切1^擾(1 (Johnson & Johnson Medical Inc.(強(qiáng)生醫(yī)療公司)，Arlington (阿靈頓)，TX)和 S印rafilm (Genzyme (健贊)，Cambridge(劍橋)，MA，美國)。由透明質(zhì)酸鈉和羧甲基纖維素(CMC)構(gòu)成的 Seprafi lm 在放置后大約對_4他形成粘的凝膠，其在1周內(nèi)被緩慢吸收(Diamond， 1996. Reduction of adhesions after uterine myomectomy by Seprafilm membrane (HAL-F) :a blinded，prospective, randomized, multicenter clinical study (子宮肌瘤切除術(shù)后通a^prafilm膜(HAL-F)減少粘連盲法、前瞻性、隨機(jī)化、多中心臨床研究).kprafilm Adhesion Study Group (Seprafilm 粘連研究組)· Fertil Steril (牛育禾口不育)66,904-910 ;Beck, 1997. The role of Seprafilm bioresorbable membrane in adhesion prevention (S印rafilm生物可再吸收膜在粘連預(yù)防中的作用).Eur T Surg Suppl (歐洲外科學(xué)雜志增刊)，49-55)。已經(jīng)顯示kprafilm 減少臨床表現(xiàn)中的外科手術(shù)后粘連(Vri jland等，2002. Fewer intraperitoneal adhesions with use of hyaluronic acid-carboxymethyIcellulose membrane -.a randomized clinical trial ( il! M 3 明質(zhì)酸-羧甲基纖維素膜具有更少的腹膜內(nèi)粘連隨機(jī)化臨床試驗(yàn)).Ann Surg(外科學(xué)年報(bào))235，193-199. ；Beck 等，2003·A prospective, randomized, multicenter，controlled study of the safety of Seprafilm adhesion barrier in abdominopelvic surgery of the intestine (小腸腹盆腔外科手術(shù)中Seprafilm粘連屏障安全性的前瞻性、隨機(jī)化、 多中心、對照研究.Dis Colon Rectum(結(jié)腸和直腸疾病)46,1310-1319 ；Tang等，2003. Bioresorbable adhesion barrier facilitates early closure of the defunctioning ileostomy after rectal excision :aprospective，randomized trial (生物可再吸收粘連屏障促進(jìn)肓腸切除術(shù)后輔助性回腸造口術(shù)的早期閉合).Dis Colon ReCtum(結(jié)腸和盲腸疾病)46,1200-1207),然而，該裝置難以應(yīng)用，因?yàn)槠湔掣绞痔缀推鞴俨⒛?是易碎的 (DeCherney 禾口 diZerega，1997· Clinical problem of intraperitoneal postsurgical adhesion formation following general surgery and the use of adhesion prevention barriers (普通外科手術(shù)后腹膜內(nèi)外科手術(shù)后粘連形成的臨床問題和粘連預(yù)防屏障的使用).Sun Clin North Am(北美外科學(xué)臨床)77，671-688)。另夕卜，kprafilm 增加了吻合口瘺相關(guān)的后遺癥并且不適合于腹腔鏡操作(肚^^叩￡1等，2002^ randomized, controlled pilot study of the safety and efficacy of 4% icodextrin solution in the reduction of adhesions following laparoscopic gynaecological surgery(4% 艾考糊精溶液在減少腹腔鏡婦科外科手術(shù)后粘連中的安全性和功效的隨機(jī)化、對照先導(dǎo)研究).Hum Reprod (人類生殖)17，1031-1038)。由氧化再生纖維素構(gòu)成的Interceed轉(zhuǎn)化為覆蓋受損腹膜的凝膠物質(zhì)并且已經(jīng)在數(shù)個(gè)臨床研究中顯示預(yù)防粘連的功效(Mais等， 1995.Prevention of de-novo adhesion formation after laparoscopic myomectomy a randomized trial to evaluate the effectiveness of an oxidized regeneratedcellulose absorbable barrier (預(yù)防腹腔鏡子宮肌瘤切除術(shù)后粘連的從頭形成評價(jià)氧化再牛纖維素可吸收屏障的效力的隨機(jī)化試驗(yàn))Hum Reprod (人類牛殖).10,3133-3135 ； Mais等，1995 Reduction of adhesion reformation after laparoscopic endometriosis surgery :a randomized trial with an oxidized regenerated cellulose absorbable barrier(減少腹腔鏡子宮內(nèi)膜異位外科手術(shù)后粘連再形成使用氧化再生纖維素可吸收屏障的隨機(jī)化試驗(yàn))Obstet Gynecol (婦產(chǎn)科學(xué)).86,512-515 ；Wallwiener 等，1998. Adhesion formation of the parietal and visceral peritoneum :an explanation for the controversy on the use of autologous and alloplastic barriers ？(壁層禾口臟層腹膜的粘連形成對使用自體和異體屏障的爭議的解釋？ )Fertil Steril (牛育和不育)69,132-137)。然而，Interceed的應(yīng)用需要完全止血，因?yàn)榧词股倭扛鼓?nèi)出血消除這種屏障的任何有益效果(DeCherney和dikrega，1997.見上文)。使用物理屏障的一般限制是產(chǎn)品的部位特異性，需要外科醫(yī)師預(yù)測將在哪里發(fā)生粘連和它們將最可能在哪里導(dǎo)致臨床問題。作為對屏障的替代品，在外科手術(shù)后已經(jīng)以足以允許腹部結(jié)構(gòu)漂浮的量施用用于腹內(nèi)灌注的不同液體諸如艾考糊精(Ad印t，Baxter Healthcare Corporation(百特醫(yī)療用品公司)，IL，美國)或乳酸鹽林格溶液，從而預(yù)防受損的表面相互觸及(Yaacobi等， 1991.Effect of Ringer' s lactate irrigation on the formation of postoperative abdominal adhesions (林格乳酸鹽灌冼對手術(shù)后腹部粘連形成的效應(yīng)).T Invest Surg(研究外科學(xué)雜志)4,31-36 :Cavallari 等，2000. Inability of University of Wisconsin solution to reduce postoperative peritoneal adhesions in rats (威斯康星大學(xué)溶液不能減少大鼠中的手術(shù)后腹膜粘連).Eur T Surg(歐洲外科學(xué)雜志)166, 650-653. ；dikrega等，見上文)。然而，重力通過阻止所述液體在腹中的均勻分布而導(dǎo)致問題。另外，所述溶液從腹腔中被吸收的速度比腹膜愈合所需的時(shí)間更快。已經(jīng)測試了有限數(shù)目的藥理學(xué)活性化合物來預(yù)防外科手術(shù)后粘連。作為一些實(shí)例，傷口愈合級聯(lián)的炎癥成分和成纖維細(xì)胞增殖已經(jīng)是分別使用類固醇藥物和細(xì)胞毒性藥物的藥物療法的靶標(biāo)。然而，這些藥劑已經(jīng)顯示不確定的功效和潛在的嚴(yán)重副作用 (LeGrand 等，1995. Comparative efficacy of nonsteroidal anti-inflammatory drugs and anti-thromboxane agents in a rabbit adhesion-prevention model (
抗炎藥和抗-血栓烷劑在兔粘連預(yù)防模型中的功效比較).T Invest Surg (研究外科學(xué)雜志)8,187-194 ；Li 等，2004. Synthesis and biological evaluation of a cross-linked hyaluronan-mitomycin C hydrogel (交聯(lián)的透明質(zhì)烷-絲裂霉素C水凝膠的合成和生物學(xué)評價(jià))· Biomacromolecules (生物大分子)5，895-902)。由于所測試療法的有限功效和難以處理，當(dāng)今腹腔中實(shí)施的大多數(shù)外科介入沒有應(yīng)用任何產(chǎn)品預(yù)防粘連形成，術(shù)后粘連繼續(xù)導(dǎo)致患者的痛苦且?guī)Ыo社會大量費(fèi)用(Ray 等，1998.Abdominal adhesiolysis :inpatient care and expenditures in the United States in 1994 (腹部粘連松解術(shù)美國1994年住院病人護(hù)理和開支).J Am Coll Sun (美國外科醫(yī)師學(xué)會雜志)186，1-9. ；2005) 0本發(fā)明的目的是提供一種方式，其具有預(yù)防術(shù)后粘連形成的能力，而不具有當(dāng)前可得的藥物組合物、裝置和操作的不需要的副作用。發(fā)明的描述
本發(fā)明人描述了使用來源于人乳鐵蛋白的生物學(xué)活性肽預(yù)防腹內(nèi)粘連形成的新方法，所述肽配制于增強(qiáng)所述肽的療效的藥物組合物中。所述生物學(xué)活性肽對瘢痕形成的最重要的標(biāo)志顯示抑制效應(yīng)減少感染風(fēng)險(xiǎn)，抑制炎癥和促進(jìn)纖維蛋白溶解作用。所述肽與天然存在的親水聚合物透明質(zhì)酸一起配制，透明質(zhì)酸提供藥物的緩釋特性并通過物理屏障效應(yīng)促進(jìn)最終結(jié)果。使用大鼠中的側(cè)壁缺陷盲腸擦傷模型(Sidewall defect-cecum abrasion model)，其被普遍公認(rèn)為抗粘連藥物臨床功效的適宜的非-臨床預(yù)測器，顯示配制于透明質(zhì)酸中的來源于人乳鐵蛋白的生物學(xué)活性肽顯著減少外科手術(shù)后腹內(nèi)粘連。當(dāng)配制于透明質(zhì)酸中時(shí)，所述肽改善的效應(yīng)是出人意料的，并且與單獨(dú)給予所述肽的效應(yīng)和單獨(dú)給予透明質(zhì)酸的效應(yīng)相比是顯著協(xié)同的。因此，本發(fā)明涉及增強(qiáng)生物學(xué)活性肽，尤其是來源于人乳鐵蛋白的肽的療效的藥物組合物。本發(fā)明一方面提供用于治療和/或預(yù)防傷口、瘢痕和外科手術(shù)后粘連的藥物組合物，所述藥物組合物包含i) 一種或多種來源于人乳鐵蛋白的生物學(xué)活性肽，和ii)高分子量透明質(zhì)酸。本發(fā)明另一方面提供i) 一種或多種來源于人乳鐵蛋白的生物學(xué)活性肽，和ii)高分子量透明質(zhì)酸在制備用于治療和/或預(yù)防傷口、瘢痕和外科手術(shù)后粘連的藥物組合物中的用途。本發(fā)明還一方面提供用于治療、防止和/或預(yù)防傷口、瘢痕和外科手術(shù)后粘連的方法，包括向需要所述治療的受試者施用藥物組合物，所述藥物組合物包含i) 一種或多種來源于人乳鐵蛋白的生物學(xué)活性肽，和ii)高分子量透明質(zhì)酸。所述"來源于人乳鐵蛋白的生物學(xué)活性肽"意思是這樣的生物學(xué)活性肽包含部分或完整地來源于人乳鐵蛋白序列的至少一個(gè)序列基序，其中這種序列基序可包含一種或多種氨基酸置換。所述"生物學(xué)活性"肽意思是具有一種或多種活性的肽，所述活性諸如抗炎活性，免疫調(diào)節(jié)活性，溶解纖維蛋白活性，抗-血管生成活性和抗-微生物活性，諸如抗菌活性、抗病毒活性或抗真菌活性。適合根據(jù)本發(fā)明使用的生物學(xué)活性肽描述于例如PCT/EP2008/064062，PCT/ EP2008/065186, WO 00/01730，相應(yīng)的 EP 1095061 和 US 7253143，其通過引用并入本文。所述生物學(xué)活性肽可選自包含氨基酸序列Phe-Xl-X2-X3-X4-X5-X6-X7-Lys-Val-Arg(SEQ ID NO 1)的肽，其中氨基酸Xl是Gln或Ala，氨基酸X2是Trp或Leu，氨基酸X3是Gln，Ala，Orn, Nle或Lys，氨基酸X4是Arg，Ala或Lys，氨基酸)(5是Asn，Ala, Orn或We，氨基酸)(6是 Met, Ala 或 Leu,氨基酸 X7 是 Arg, Ala 或 Lys0優(yōu)選的所述生物學(xué)活性肽可選自根據(jù)式(I)的肽和根據(jù)式(II)的肽Rl-Cys-Phe-Xl-X2-X3-X4-X5-X6-X7-Lys-Val-Arg-R2 式(I)其中Rl是無氨基酸，Lys或肽序列，所述肽序列選自Gly-Arg-Arg-Arg-Argler-Val-Gln-Trp-Cys-Ala-Val-Ser-Gln-Pro-Glu-Ala-Thr-Lys. . . (SEQ ID NO 2)及其 N 端截短的片段，包括Arg-Arg-Arg-Arg-Ser-Val-Gln-Trp-Cys-Ala-Val-Ser-Gln-Pro-Glu-Ala-Thr-Lys,
Arg-Arg-Arg-Ser-Val-Gln-Trp-Cys-Ala-Val-Ser-Gln-Pro-Glu-Ala-Thr-Lys,Arg-Arg-Ser-Val-Gln-Trp-Cys-Ala-Val-Ser-Gln-Pro-Glu-Ala-Thr-Lys,Arg-Ser-Val-Gln-Trp-Cys-Ala-Val-Ser-Gln-Pro-Glu-Ala-Thr-Lys,Ser-Val-Gln-Trp-Cys-Ala-Val-Ser-Gln-Pro-Glu-Ala-Thr-Lys,Val-Gln-Trp-Cys-Ala-Val-Ser-Gln-Pro-Glu-Ala-Thr-Lys,Gln-Trp-Cys-Ala-Val-Ser-Gln-Pro-Glu-Ala-Thr-Lys,Trp-Cys-Ala-Val-Ser-Gln-Pro-Glu-Ala-Thr-Lys,Cys-Ala-Val-Ser-Gln-Pro-Glu-Ala-Thr-Lys,Ala-Val-Ser-Gln-Pro-Glu-Ala-Thr-Lys,Val-Ser-Gln-Pro-Glu-Ala-Thr-Lys,
Ser-Gln-Pro-Glu-Ala-Thr-Lys,
Gln-Pro-Glu-Ala-Thr-Lys,
Pro-Glu-Ala-Thr-Lys,
Glu-Ala-Thr-Lys,
Ala-Thr-Lys,
Thr-Lys-；并且其中R2是無氨基酸，Gly或肽序列，所述肽序列選自Gly-Pr0-Pr0-Val-Ser-Cys-Ile-Lys-Arg (SEQ ID NO 3)及其C端截短的片段，包括Gly-Pro-Pro-Val-Ser-Cys-Ile-Lys,Gly-Pro-Pro-Val-Ser-Cys-Ile,Gly-Pro-Pro-Val-Ser-Cys,Gly-Pro-Pro-Val-Ser,Gly-Pro-Pro-Val,Gly-Pro-ProJPGly-Pro。
權(quán)利要求
1.一種藥物組合物，包含i)一種或多種生物學(xué)活性肽，所述生物學(xué)活性肽包含氨基酸序列Phe-Xl-X2-X3-X4-X 5-X6-X7-Lys-Val-Arg(SEQ ID NO :1)，其中氨基酸Xl是Gln或Ala，氨基酸X2是Trp或Leu，氨基酸X3是Gln，Ala，Orn，Nle 或Lys，氨基酸X4是Arg，Ala或Lys，氨基酸)(5是Asn，Ala, Orn或We，氨基酸)(6是Met， Ala或Leu,氨基酸X7是Arg, Ala或Lys，和ii)高分子量透明質(zhì)酸或高分子量透明質(zhì)酸的藥用鹽。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的藥物組合物，其中所述生物學(xué)活性肽是包含氨基酸序列SEQID NO 4的肽。
3.根據(jù)權(quán)利要求2的藥物組合物，其中所述生物學(xué)活性肽是包含氨基酸序列SEQID NO 56的環(huán)肽，其中兩個(gè)半胱氨酸形成半胱氨酸橋。
4.根據(jù)權(quán)利要求1的藥物組合物，其中所述生物學(xué)活性肽是包含氨基酸序列SEQID NO 50的肽。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任意一項(xiàng)的藥物組合物，其中所述高分子量透明質(zhì)酸具有高于 300，OOODa，最優(yōu)選高于800，OOODa的平均分子量。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任意一項(xiàng)的藥物組合物，其中所述肽以0.lmg/ml和100mg/ml 之間，最優(yōu)選0. 5mg/ml和25mg/ml之間的濃度存在。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-6中任意一項(xiàng)的藥物組合物，其中所述透明質(zhì)酸以0.1和10% (w/ w)之間，最優(yōu)選0. 5和2. 5% (w/w)之間的濃度存在。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-7中任意一項(xiàng)的藥物組合物，其用于治療和/或預(yù)防傷口、瘢痕和外科手術(shù)后粘連。
9.i)來源于乳鐵蛋白的生物學(xué)活性肽，其包含氨基酸序列Wie-Xl-X2-X3-X4-X5-X6-X 7-Lys-Val-Arg(SEQ ID N0:l)jPii)高分子量透明質(zhì)酸在制備用于治療和/或預(yù)防傷口、 瘢痕和外科手術(shù)后粘連的藥物中的用途。
10.一種用于治療、預(yù)防和/或防止傷口、瘢痕和外科手術(shù)后粘連的方法，包括向需要所述治療的受試者施用根據(jù)權(quán)利要求1-7中任意一項(xiàng)的藥物組合物。
11.一種用于減少外科手術(shù)后粘連形成的方法，包括施用根據(jù)權(quán)利要求1-7中任意一項(xiàng)的藥物組合物，并且其中所述施用導(dǎo)致外科手術(shù)后粘連形成的減少。
12.—種減少瘢痕形成的方法，包括施用根據(jù)權(quán)利要求1-7中任意一項(xiàng)的藥物組合物， 并且其中所述施用導(dǎo)致瘢痕形成的減少。
全文摘要
本發(fā)明涉及增強(qiáng)生物學(xué)活性肽，尤其是來源于人乳鐵蛋白的肽的療效的藥物組合物。所述組合物有效用于治療和/或預(yù)防傷口、瘢痕和外科手術(shù)后粘連。
文檔編號A61K9/06GK102271658SQ201080004064
公開日2011年12月7日 申請日期2010年1月12日 優(yōu)先權(quán)日2009年1月13日
發(fā)明者韋羅妮卡·舍斯特蘭德, 馬爾吉特·馬拉普, 馬蒂亞斯·明尼希 申請人:瑞典外科制藥公司