專利名稱：一種苦參藥材及其制劑中苦參堿和氧化苦參堿同時(shí)定量新方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種苦參藥材及其制劑中苦參堿和氧化苦參堿同時(shí)定量新方法。
背景技術(shù)：
苦參為豆科植物Sophora flavescens Ait.的干燥根。是一種常用中藥，具清熱 燥濕，殺蟲，利尿之功效。用于熱痢，便血，黃疸尿閉，赤白帶下，陰腫陰癢，濕疹，濕瘡，皮膚 瘙癢，疥癬麻風(fēng)等癥。制劑系指復(fù)方鹿仙草片，為彝族用藥，其處方由鹿仙草1250g、九香蟲 (炒)500g、黃藥子325g、苦參125g、天花粉250g、土茯苓250g組成，制備方法是處方中的 六味藥材，鹿仙草、黃藥子、天花粉、土茯苓粉碎成粗粉，加水煎煮三次，每次1. 5小時(shí)，合并 煎液，靜置12小時(shí)，濾過(guò)，濾液減壓濃縮至相對(duì)密度為1. 20(55°C )的清膏，噴霧干燥；苦參 粉碎成粗粉，加60%乙醇回流提取三次，每次1. 5小時(shí)，合并提取液，濾過(guò)，濾液減壓濃縮至 相對(duì)密度為1. 10(55°C )的清膏，噴霧干燥；九香蟲加60%乙醇回流提取三次，每次1. 5小 時(shí)，合并提取液，濾過(guò)，濾液減壓濃縮至相對(duì)密度為0.95 1.00 (55°C)的清膏，備用。取上 述兩種噴霧干燥粉，加入適量淀粉、微晶纖維素，混勻，再加入九香蟲清膏，制粒，干燥，壓制 成1000片，包薄膜衣，即得。該藥的功能主治舒肝解郁，活血解毒。用于肝郁氣滯，毒瘀互 阻所致的原發(fā)性肝癌?？鄥⒌闹骱鄥A和氧化苦參堿，為喹諾里西啶類生物堿，具抗炎、抗腫瘤、鎮(zhèn)痛、 抗心率失常，鎮(zhèn)咳，殺菌等廣泛的生物活性。目前苦參藥材及其組成的成方制劑，其含量測(cè) 定都是控制苦參堿和氧化苦參堿總量，因?yàn)槎叽嬖谥プ儺悩?gòu)現(xiàn)象。對(duì)苦參堿和氧化苦 參堿的含量測(cè)定，有薄層掃描法，毛細(xì)管電泳法，高效液相法等多種方法，最常用的多是高 效液相法。其特點(diǎn)第一，不論藥材還是制劑，前處理方法都比較繁瑣、復(fù)雜，需用三氯甲烷 等毒害溶劑純化處理，費(fèi)時(shí)長(zhǎng)，成本高、效率低、污染環(huán)境，危害健康，并直接影響測(cè)定結(jié)果 的準(zhǔn)確性。第二，反相色譜中所用的流動(dòng)相都是緩沖鹽中添加十二烷基硫酸鈉或十二烷基 磺酸鈉等，流動(dòng)相中溶質(zhì)增多，比重增大，壓力增高，稍不注意就會(huì)損傷儀器和色譜柱。第 三，如采用正相色譜，必須是特定的氨基柱，其流動(dòng)相中的有機(jī)相要達(dá)90%以上，測(cè)定成本 升高。將目前有關(guān)苦參堿和氧化苦參堿的質(zhì)量控制方法歸納、分析如下方法1取苦參藥材粉末約0. 3g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加濃氨試液0. 5ml，精 密加入三氯甲烷20ml，密塞，稱定重量，超聲處理(功率250W，頻率33kHz) 30分鐘，放冷，再 稱定重量，用三氯甲烷補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液5ml，加在中性氧化鋁 柱(100 200目，5g，內(nèi)徑Icm)上，依次用三氯甲烷、三氯甲烷-甲醇(7 3)混合溶液各 20ml洗脫，合并收集洗脫液，回收溶劑至干，殘?jiān)訜o(wú)水乙醇適量使溶解，轉(zhuǎn)移至IOml量瓶 中，加無(wú)水乙醇至刻度，搖勻，即得。色譜柱氨基柱；流動(dòng)相乙腈_無(wú)水乙醇磷酸溶 液(80 10 10)；測(cè)定成分苦參堿和氧化苦參堿(該方法為中國(guó)藥典2010年版一部苦 參藥材測(cè)定)。方法1分析本測(cè)定方法的樣品前處理需花費(fèi)三氯甲烷等毒性溶劑70ml、時(shí)間約2. 5 4小時(shí)，并且要特定的氨基柱，有機(jī)相的比例為90%，其中磷酸的濃度達(dá)0. 3%。曾 測(cè)定過(guò)0. 的磷酸溶液的pH值為2. 3左右，依次類推0.3%的pH值應(yīng)在2.0以下，酸度 太高，易損壞色譜柱。90%的有機(jī)相中較昂貴的乙腈比例占80%，可以說(shuō)其測(cè)定成本最高。 在內(nèi)徑Icm的色譜柱上，填加5g氧化鋁，其高度約4 5cm，氧化鋁粒度又是100 200目， 范圍太寬，各自比例又無(wú)規(guī)定，會(huì)因100目和200目的比例不同，影響色譜柱的被洗脫的效 果，進(jìn)而影響測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性和重現(xiàn)性。方法2取復(fù)方鹿仙草膠囊內(nèi)容物，研細(xì)，取約0. 5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中， 加濃氨試液0. Iml及三氯甲烷25ml，回流提取30分鐘，冷卻，傾出提取液，加少量三氯甲烷 洗滌容器兩次，合并，濾過(guò)，濾液在60°C水浴蒸干，殘?jiān)觩Hl. 0硫酸水溶液25ml，分次溶 解，一并轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，加濃氨水調(diào)節(jié)pH至9. 0 10. 0，加入乙醚25ml，萃取三次，乙 醚液棄去，所得水液水浴揮至無(wú)乙醚味，轉(zhuǎn)移至25ml量瓶中，加pHl. 0硫酸水溶液至刻度， 搖勻，用微孔濾膜(0. 45 μ m)濾過(guò)，即得。色譜柱alltima C18 (5 μ m，4. 6mmX 250mm)；流動(dòng) 相乙腈-0.02mol/L硫酸銨-十二烷基硫酸鈉(36 64 0. 62)(用20 %硫酸溶液調(diào)節(jié) PH值至3.0)；測(cè)定成分氧化苦參堿(朱良輝等“HPLC法測(cè)定復(fù)方鹿仙草膠囊中氧化苦參 堿的含量”江西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)2006年18卷6期)。方法2分析本測(cè)定方法的樣品前處理也比較麻煩，需花費(fèi)有機(jī)溶劑115ml，時(shí)間 約3 4小時(shí)，雖然無(wú)色譜柱除雜，三氯甲烷提取液的水浴蒸干，但硫酸水溶液的溶解轉(zhuǎn)移 以及濃氨水調(diào)節(jié)pH至9. 0 10. 0后，乙醚液的三次萃取除雜，步驟繁瑣，易造成結(jié)果的重 現(xiàn)性欠佳。最為關(guān)鍵的是將溶液調(diào)堿性后，生物堿游離，易溶于親脂性溶劑，再用乙醚除 雜，或多或少都會(huì)損失掉一些待測(cè)成分，給測(cè)定結(jié)果帶來(lái)偏差，影響測(cè)定數(shù)值的準(zhǔn)確性。本 方法的流動(dòng)相為緩沖鹽體系，柱壓高，如若后處理不到位，易損傷色譜柱和儀器。本流動(dòng)相 只能測(cè)定氧化苦參堿。方法3取復(fù)方鹿仙草片，研細(xì)，取約0. 8g，精密稱定，加水30ml使溶解，用濃氨試 液調(diào)節(jié)pH至9 10，用三氯甲烷振搖提取3次(30ml、20ml、20ml)，合并三氯甲烷液，通過(guò)中 性氧化鋁柱(100 200目，7g)上，流速每秒1 2滴，收集三氯甲烷液，再用三氯甲烷-甲 醇(7 3)混合溶液20ml洗脫，合并洗脫液與三氯甲烷液，置60°C水浴上蒸干，殘?jiān)恿鲃?dòng) 相使溶解，定量轉(zhuǎn)移至IOml量瓶中，加流動(dòng)相至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0. 45 μ m)濾過(guò)，取 續(xù)濾液，即得。色譜柱十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動(dòng)相甲醇-含0. 17%庚烷磺 酸鈉及0.08%冰醋酸的水溶液-四氫呋喃(23 77 0.5)；測(cè)定成分氧化苦參堿(復(fù)方 鹿仙草片的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)YBZ06102009)。方法3分析本測(cè)定方法為復(fù)方鹿仙草片國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，僅樣品前處理需花費(fèi)三氯甲 烷毒性溶劑90ml，時(shí)間7 8小時(shí)，經(jīng)試驗(yàn)得知，藥粉加水后，并不能溶解而成為混懸液，經(jīng) 用濃氨調(diào)節(jié)PH至堿性后，黏度增加，再用三氯甲烷萃取時(shí)，乳化嚴(yán)重，長(zhǎng)時(shí)間很難分層，影 響了結(jié)果的準(zhǔn)確性。70ml的萃取液與20ml洗脫液，流經(jīng)100 200目的氧化鋁柱7g之上， 花費(fèi)時(shí)間約2小時(shí)，再在60°C水浴上蒸干，又要花費(fèi)2小時(shí)，程序越長(zhǎng)，成分損失越多，方法 的準(zhǔn)確性和重現(xiàn)性越差。與方法2相同流動(dòng)相為緩沖鹽體系，只能測(cè)定氧化苦參堿。方法4取復(fù)方鹿仙草顆粒，研細(xì)，取約2. Og,精密稱定，置具塞錐形瓶中，加濃氨 試液0. 5ml，精密加入三氯甲烷20ml，密塞，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量， 用三氯甲烷補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)。精密量取續(xù)濾液5ml，通過(guò)中性氧化鋁柱(100 200目，5g，內(nèi)徑Icm)上，依次用三氯甲烷、三氯甲烷-甲醇(7 3)混合溶液各25ml洗脫， 收集洗脫液，回收溶劑至干，殘?jiān)訜o(wú)水乙醇適量使溶解，轉(zhuǎn)移至IOml量瓶中，加無(wú)水乙醇 至刻度，搖勻，即得。色譜柱氨基柱(5 μ m，4. 6mmX 250mm)；流動(dòng)相乙腈-無(wú)水乙醇-3% 磷酸溶液(80 10 10)；測(cè)定成分苦參堿和氧化苦參堿(耿家玲等“復(fù)方鹿仙草顆粒含 量測(cè)定方法研究”云南中醫(yī)中藥雜志2009年30卷7期)。方法4分析與方法1完全相同，方法的弊端也完全一樣，在此不再贅述。綜上所述，目前有關(guān)苦參藥材及其制劑的定量測(cè)定方法可歸納為樣品的前處理 繁瑣、費(fèi)時(shí)、提取溶劑均為毒性較大的三氯甲烷，污染環(huán)境，危害健康，影響測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確 性。流動(dòng)相系統(tǒng)，不是易損傷儀器和色譜柱的緩沖鹽體系，就是需特定色譜柱、測(cè)定成本高 的有機(jī)相體系。而且緩沖鹽體系只測(cè)定氧化苦參堿。還未查閱到簡(jiǎn)便、快捷、低污染、色譜 柱耐用性廣的苦參藥材及其制劑中苦參堿和氧化苦參堿同時(shí)定量的反相色譜法。

發(fā)明內(nèi)容
通過(guò)研究，樣品以含水甲醇提取，吸取一定量，氧化鋁柱除雜，含水甲醇洗脫，濾 過(guò)，續(xù)濾液進(jìn)樣的程序，取代了原方法的氨試液堿化，氯仿提取、中性氧化鋁柱除雜，氯仿與 氯仿-甲醇(7 3)洗脫，洗脫液蒸干，定容，濾過(guò)，濾液進(jìn)樣的程序。并首次以普通的反 相色譜柱，非緩沖鹽體系，乙腈_甲醇_乙醇-0. 磷酸(2. 5 3 2. 5 3. 5 0. 3 0.8 92. 7 94. 7)為流動(dòng)相，進(jìn)行了苦參藥材及其制劑中苦參堿和氧化苦參堿的同時(shí)定 量測(cè)定，生物堿波峰分離良好，色譜柱耐用性廣。通過(guò)方法學(xué)考察，苦參堿進(jìn)樣量在0. 0435 1. 0875 μ g，與峰面積呈良好的 線性關(guān)系(見圖1)，回歸方程為Y = 1652490X+3517，γ = 0. 99997 ；氧化苦參堿進(jìn) 樣量在0.0515 1.946 μ g，與峰面積呈良好的線性關(guān)系(見圖2)，回歸方程為Y = 1445790Χ-1324, γ = 0.999999。采用加樣回收實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明苦參堿的平均回收率為 101. 20% (η = 9)，RSD為1.99% (見表1)；氧化苦參堿的平均回收率為100.00% (η = 9), RSD為1. 29% (見表2)。精密度(見表3)、穩(wěn)定性(見表4)、重復(fù)性(見表5)、專屬性 (見圖3. 4. 5)與柱耐用性(見表6、圖7. 8. 9.)實(shí)驗(yàn)均符合方法學(xué)要求。適用苦參藥材及 其制劑中苦參堿和氧化苦參堿同時(shí)定量測(cè)定。本發(fā)明解決其技術(shù)問(wèn)題所采用的技術(shù)方案為1.色譜條件色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動(dòng)相乙腈-甲 醇 _ 乙醇-0. 1 %磷酸(2. 5 3 2. 5 3. 5 0. 3 0. 8 92. 7 94. 7)；柱溫30 500C ；檢測(cè)波長(zhǎng)210nm ；流速1. Oml/min ；理論板數(shù)按氧化苦參堿峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。2.對(duì)照品溶液制備分別精密稱取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥24小時(shí)的苦參堿和氧 化苦參堿對(duì)照品適量，加甲醇制成每Iml含苦參堿20 25 μ g、氧化苦參堿25 30 μ g的 溶液，即得。3.供試品溶液制備取苦參藥材細(xì)粉約0. 1 0. 3g，精密稱定；或苦參制劑約 0. 7 0. 9g，精密稱定，分別置具塞錐形瓶中，精密加入80%甲醇25ml，密塞，稱定重量，超 聲處理(功率250W，頻率33kHz) 15分鐘(苦參藥材30分鐘)，放冷，再稱定重量，用80%甲 醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液1 3ml，置中性氧化鋁柱(Φ 1cm，100-120 目中性氧化鋁1. 5 2. 5g)上，用80%甲醇洗脫至IOml的量瓶中至約8 9ml，加1滴磷酸，用80%的甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μπι)濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶 液。即得。4.測(cè)定方法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10 15μ1，注入液相色 譜儀，測(cè)定苦參堿和氧化苦參堿的含量。本發(fā)明的原理如下苦參堿和氧化苦參堿在自然界多以各種鹽的形式存在，即陽(yáng)離子體狀態(tài)存在，可 溶于甲醇與含適量水的甲醇中。加堿堿化后，變?yōu)榉肿芋w狀態(tài)，溶解性能發(fā)生變化，易溶于 三氯甲烷、苯等有機(jī)溶劑。所以直接以含水甲醇提取藥材或制劑中呈陽(yáng)離子體狀態(tài)的二者， 再吸取一定量，通過(guò)氧化鋁柱進(jìn)行純化，即可得到近似無(wú)色的供試品溶液。簡(jiǎn)便、快捷、避開 了毒性大的有機(jī)溶劑提取、洗脫與蒸干等污染環(huán)境的操作步驟。再依據(jù)苦參堿和氧化苦參 堿的進(jìn)樣量在一定范圍內(nèi)，與其峰面積呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，而用于定量測(cè)定。本發(fā)明的創(chuàng)新點(diǎn)及有益效果如下(1)利用苦參堿和氧化苦參堿在離子體狀態(tài)下，可溶于甲醇與含適量水的甲醇中 的特性，以含水甲醇提取，吸取一定量，氧化鋁柱除雜，含水甲醇洗脫，濾過(guò)，取濾液進(jìn)樣的 程序，取代了原方法的氨試液堿化，三氯甲烷提取、中性氧化鋁柱除雜，三氯甲烷與三氯甲 烷-甲醇(7 3)洗脫，洗脫液蒸干，定容，濾過(guò)，濾液進(jìn)樣的程序。大大簡(jiǎn)化了樣品前處理 程序，做到無(wú)濃縮、蒸干、萃取等步驟，簡(jiǎn)便、快捷、省時(shí)、省能源、有效提高了工作效率與方 法的重現(xiàn)性和準(zhǔn)確性，排除了三氯甲烷對(duì)操作人員的健康毒害以及嚴(yán)重的環(huán)境污染。(2)首次以普通的反相色譜柱，非緩沖鹽的流動(dòng)相體系，乙腈_甲醇-乙醇-0. 1 % 磷酸(2. 5 3 2. 5 3. 5 0. 3 0. 8 92. 7 94. 7)為流動(dòng)相，進(jìn)行苦參藥材及其 制劑中苦參堿和氧化苦參堿的同時(shí)定量測(cè)定，生物堿波峰分離良好。與緩沖鹽流動(dòng)相體系 相比，有效降低了儀器的損害程度，延長(zhǎng)了色譜柱壽命，解決了在緩沖鹽流動(dòng)相體系，苦參 堿和氧化苦參堿難以同時(shí)定量的難題；與特定的氨基柱系列相比，使流動(dòng)相中的有機(jī)相由 90%降到了 5. 3 7. 3%，大大降低了檢測(cè)成本。(3)本測(cè)定方法完成一批藥材或復(fù)方鹿仙草片的定量測(cè)定，按平行2份樣品計(jì)算， 只需藥材0. 2 0.6g(或制劑1.4 1.88)，前處理時(shí)間1.5小時(shí)，溶劑70ml。與原國(guó)家標(biāo) 準(zhǔn)YBZ06102009相比，節(jié)約有機(jī)溶劑130ml、時(shí)間6小時(shí)，簡(jiǎn)便、快捷，操作步驟的減少，有效 提高了方法的重現(xiàn)性和準(zhǔn)確性，降低成本、排除污染。(4)色譜柱的耐用性試驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明，在多種色譜柱上，本方法都獲得良好的分離效 果及相同的含量數(shù)據(jù)(見表6及圖4.圖7-B.圖8-B.圖9-B)，有效拓寬了苦參堿和氧化苦 參堿的檢測(cè)途徑，結(jié)束了只有特定的氨基柱才能同時(shí)測(cè)定該二種生物堿的歷史，具廣泛的 應(yīng)用前景。(5)本發(fā)明方法的問(wèn)世，不但解決了苦參藥材及其制劑中苦參堿和氧化苦參堿的 同時(shí)快速測(cè)定難題，還為含苦參堿和氧化苦參堿的其他中藥材，如山豆根及其復(fù)方制劑提 供了定量測(cè)定新途徑，具表帥與示范作用。


圖1苦參堿的線性關(guān)系2氧化苦參堿的線性關(guān)系圖
圖3為苦參堿和氧化苦參堿對(duì)照品HPLC色譜4為復(fù)方鹿仙草片的HPLC色譜5為復(fù)方鹿仙草空白樣品的HPLC色譜6為苦參藥材的HPLC色譜7耐用性試驗(yàn)-日本島津VP-ODS色譜柱(5 μ m，4. 6 X 250mm)圖8耐用性試驗(yàn)-迪馬dimonsil色譜柱(5 μ m，4. 6 X 150mm)圖 9 耐用性試驗(yàn)-Grace Smart 色譜柱(5 μ m，4. 6 X 250mm)圖1、圖2中，縱坐標(biāo)為峰面積；橫坐標(biāo)為進(jìn)樣量(μ g)圖3 圖9中，1為苦參堿色譜峰，2為氧化苦參堿色譜峰。圖7 圖9中，A為對(duì)照品圖B為樣品圖本發(fā)明具體實(shí)施方式
如下1.色譜條件色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動(dòng)相乙腈-甲 醇 _ 乙醇-0. 磷酸(2. 5 3 2. 5 3. 5 0. 3 0. 8 92. 7 94. 7)；柱溫30 500C ；檢測(cè)波長(zhǎng)210nm ；流速1. Oml/min ；理論板數(shù)按氧化苦參堿峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。2.對(duì)照品溶液制備分別精密稱取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥24小時(shí)的苦參堿和氧 化苦參堿對(duì)照品適量，加甲醇制成每Iml含苦參堿20 25 μ g、氧化苦參堿25 30 μ g的 溶液，即得。3.供試品溶液制備取苦參藥材細(xì)粉約0. 1 0. 3g，精密稱定；或苦參制劑約 0. 7 0. 9g，精密稱定，分別置具塞錐形瓶中，精密加入80%甲醇25ml，密塞，稱定重量，超 聲處理(功率250W，頻率33kHz) 15分鐘(苦參藥材30分鐘)，放冷，再稱定重量，用80%甲 醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液1 3ml，置中性氧化鋁柱(Φ 1cm，100-120 目中性氧化鋁1. 5 2. 5g)上，用80%甲醇洗脫至IOml的量瓶中至約8 9ml，加1滴磷 酸，用80%的甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μπι)濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶 液。即得。4.測(cè)定方法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10 15μ1，注入液相色 譜儀，測(cè)定苦參堿和氧化苦參堿的含量。本品每片含苦參以苦參堿(C15H24N2O)和氧化苦參堿(C15H24N2O2)的總量計(jì)，不得低 于0. 9mg?？鄥⑺幉暮蛷?fù)方鹿仙草片的含量測(cè)定結(jié)果(見表7)。表1樣品中苦參堿的回收率試驗(yàn)結(jié)果
權(quán)利要求
1.一種苦參藥材及其制劑中苦參堿和氧化苦參堿同時(shí)定量新方法，其特征在于(1)色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以乙腈-甲醇-乙醇-0.磷酸(2 3 2. 5 3.5 0. 3 0. 8 93 95)為流動(dòng)相；柱溫30 50°C ；檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm。理論板數(shù) 按氧化苦參堿峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。(2)對(duì)照品溶液的制備取苦參堿和氧化苦參堿對(duì)照品適量，精密稱定，置棕色量瓶 中，加甲醇制成每Iml含苦參堿和氧化苦參堿各為20 30 μ g的溶液，即得。(3)供試品溶液的制備取苦參藥材細(xì)粉約0.1 0. 3g，精密稱定；或苦參制劑約 0. 7 0. 9g，精密稱定，分別置具塞錐形瓶中，精密加入80 %甲醇25ml，密塞，稱定重量，超 聲處理(功率250W，頻率33kHz) 15分鐘(苦參藥材30分鐘)，放冷，再稱定重量，用80%甲 醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液1 3ml，置中性氧化鋁柱(Φ 1cm，100-120 目中性氧化鋁1. 5 2. 5g)上，用80%甲醇洗脫至IOml的量瓶中至約8 9ml，加1滴磷 酸，用80%的甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μπι)濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶 液。即得。(4)測(cè)定法分別精密吸取上述對(duì)照品溶液與供試品溶液各10 15μ1，注入液相色 譜儀，測(cè)定苦參堿和氧化苦參堿的含量。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種苦參藥材及其制劑中苦參堿和氧化苦參堿同時(shí)定量方 法，其特征在于所述的制劑是復(fù)方鹿仙草片。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種苦參藥材及其制劑中苦參堿和氧化苦參堿同時(shí)定量新方法。其特征以含水甲醇提取，氧化鋁柱除雜，含水甲醇洗脫，濾過(guò)，以濾液進(jìn)樣的程序，取代了原方法的氨試液堿化、氯仿提取、氧化鋁柱除雜，氯仿與氯仿-甲醇(7∶3)洗脫，洗脫液蒸干，定容，濾過(guò)，濾液進(jìn)樣的程序。首次以普通的反相色譜柱，非緩沖鹽體系，乙腈-甲醇-乙醇-0.1％磷酸(2.5～3∶2.5～3.5∶0.3～0.8∶92.7～94.7)為流動(dòng)相，進(jìn)行了苦參藥材及其制劑中苦參堿和氧化苦參堿的同時(shí)定量測(cè)定，生物堿波峰分離良好。簡(jiǎn)便的前處理方法與非緩沖鹽流動(dòng)相體系，構(gòu)成了苦參堿和氧化苦參堿同時(shí)定量新方法。簡(jiǎn)便、快捷、準(zhǔn)確，經(jīng)濟(jì)、實(shí)用，流動(dòng)相耐用性好、不損傷儀器及色譜柱。
文檔編號(hào)A61K36/489GK102000140SQ20101053393
公開日2011年4月6日 申請(qǐng)日期2010年11月8日 優(yōu)先權(quán)日2010年11月8日
發(fā)明者安麗娜, 張文臣, 王新光, 申玉龍, 韓桂茹 申請(qǐng)人:承德燕峰藥業(yè)有限責(zé)任公司