專利名稱：一種銀黃注射液的制備及質(zhì)量檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種銀黃注射液，以及銀黃注射液的制備及質(zhì)量檢測(cè)方法。
背景技術(shù)：
金銀花和黃芩均是中獸醫(yī)常用的良好的清邪熱藥物，經(jīng)常用于各種熱性疾病。金銀花為忍冬科忍冬屬 Caprifoliaceae 植物忍冬 Lonicera L. japonicaThunb. 同屬多種植物的干燥花蕾，為中醫(yī)常用藥，具有清熱解毒、涼風(fēng)散熱的功能。是獸醫(yī)臨床中最常用的一種清熱解毒中藥。主要用于溫病發(fā)熱，風(fēng)熱感冒、癰腫癤毒、喉痹、丹毒、熱毒血痢、痔漏、便血等癥。臨床上多用于治療溫病發(fā)熱、風(fēng)熱感冒、咽喉腫痛、肺炎、丹毒、敗血癥、 腸炎及腸道傳染病等多種疾病，有“中藥之中的青霉素”之稱。在非典預(yù)防的中藥處方中， 金銀花出現(xiàn)頻率最多。具有廣譜抗菌、抗病毒、抗腫瘤、增強(qiáng)免疫及解熱抗炎、利膽、保肝、降脂、抗生育、止血、抗?jié)兊榷喾N藥理作用，對(duì)大腸桿菌、肺炎球菌、巴氏桿菌、鏈球菌等引起的多種疾病均有良好的治療和預(yù)防作用，其療效確切、未見有毒副作用和耐藥性，也能與多種常用抗菌素協(xié)同使用。臨床中常與黃芩、黃連、連翹等藥物配合應(yīng)用。金銀花的化學(xué)成分研究表明，其花中主要含揮發(fā)油、黃酮類、有機(jī)酸、三萜類及無機(jī)元素。據(jù)《中藥現(xiàn)代化研究與應(yīng)用》第3卷收載，金銀花具有抗病原微生物、抗炎、解熱、 免疫調(diào)節(jié)等作用。此外金銀花還有利膽保肝、抗氧化、降血脂、中樞興奮等作用。黃芩為唇形科植物黃.kutellaria baicalensis Georgi的干燥根，是中獸醫(yī)學(xué)中應(yīng)用較廣的傳統(tǒng)中藥，按中獸醫(yī)學(xué)理論，黃芩具有清熱燥濕、瀉火解毒、止血、安胎等功效。也是獸醫(yī)臨床中最常用的一種中藥。主要用于抗菌消炎和抗感染，主治高熱煩渴、肺熱咳嗽、濕熱瀉痢、黃疸、熱淋、目赤腫痛、癰腫疔瘡等。黃芩具有抗菌、抗病毒，抑制炎癥反應(yīng)， 保肝利膽、利尿，清除自由基及抗氧化，抗凝血和抗血栓形成等作用。對(duì)大腸桿菌、肺炎球菌、巴氏桿菌、金黃色葡萄球菌等引起的多種疾病均有良好的防治作用。黃芩含有主要的五種黃酮成分黃芩甙(C21H18O11)為黃芩-T-葡萄糖醛酸甙，漢黃芩甙(C22H2tlO11)為漢黃芩素-7-葡萄糖醛酸甙，漢黃芩素(C16H12O8),根中還含有黃芩酶能促進(jìn)黃芩甙和漢黃芩甙水解，生成黃芩黃素和漢黃芩黃素，此外尚含有谷留醇、苯甲酸、 黃芩細(xì)淀粉。黃芩具有抗炎、免疫調(diào)節(jié)和抗氧化的作用。此外黃芩還有抗腫瘤作用、對(duì)心血管系統(tǒng)有保護(hù)作用，對(duì)腫瘤壞死因子和放線菌素所誘導(dǎo)的肝細(xì)胞凋亡有抑制作用。銀黃合用可明顯增強(qiáng)療效。臨床上，金銀花、黃芩常配伍合用。為進(jìn)一步提高其療效、擴(kuò)大用藥范圍和方便用藥，現(xiàn)代中藥臨床和中獸醫(yī)臨床已開始提取其有效成分，按一定比例和中醫(yī)藥的使用法度，形成“銀黃制劑”應(yīng)用。大量藥理學(xué)研究已經(jīng)證實(shí)，銀黃聯(lián)合制劑應(yīng)用較之單味藥物使用，具有更為強(qiáng)大清熱解毒、抗菌消炎、抗病毒等功效，產(chǎn)生明顯的協(xié)同作用，對(duì)于上呼吸道和呼吸道感染、急性扁桃體炎、咽炎、流行性腮腺炎、腸道疾病等均有較好的療效，并與青霉素、林可霉素等有良好的協(xié)同作用；還能抗病毒，表現(xiàn)出不容忽視的雙重抗感染的作用。最早劑型僅銀黃湯一種，隨著劑型研究的不斷發(fā)展，人醫(yī)現(xiàn)已研制出口服液、片劑
3(包括含片)、注射劑、沖劑、丸劑、散劑、灌腸劑、漱口液、噴霧劑、氣霧劑等十幾種劑型，并根據(jù)不同劑型的特點(diǎn)而廣泛應(yīng)用于臨床。但在獸醫(yī)領(lǐng)域，可用的銀黃制劑尚少，進(jìn)一步研制開發(fā)更多的良效方便的相關(guān)制劑，包括銀黃酸注射液，將明顯改善其相關(guān)疾病的防治現(xiàn)狀， 促進(jìn)畜牧業(yè)發(fā)展。同時(shí)，減少抗生素應(yīng)用，保障人類健康。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種銀黃注射液的制備及質(zhì)量檢測(cè)方法。目的之一，提供一種銀黃注射液的制備方法，包括如下步驟1、將黃芩提取物加水適量使其溶解；2、用2-20%氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至6-10，濾過；3、濾液與金銀花提取物合并，用2-20%氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至6. 0-7. 5 ；4、將溶液煮沸1小時(shí)，濾過，加亞硫酸鈉I-IOg ；5、加水至近全量，攪勻，用2-20%氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至6. 0-7. 5 ；6、加水至 1000ml，濾過；7、灌封，滅菌，即得銀黃注射液。中藥注射劑屬于中獸藥的新劑型，本專利經(jīng)過充分提取生藥中的有效成分，制成注射劑注射給藥，大大提高了藥物的生物利用度，增強(qiáng)了療效；用藥方便，運(yùn)輸、保存簡(jiǎn)單，易為廣大養(yǎng)殖戶和經(jīng)銷商所接受；同時(shí)，由于中藥本身毒副作用小，大力推廣銀黃酸注射液后，可明顯減少抗生素和化學(xué)藥物的應(yīng)用，提高肉品質(zhì)量，保障人類健康，社會(huì)效益顯著；因此，銀黃酸注射液具有很好的市場(chǎng)前景。目的之二，提供一種銀黃注射液質(zhì)量檢測(cè)方法，尤其是一種含量測(cè)定方法，包括如下步驟含量測(cè)定采用高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定銀黃注射液中綠原酸和黃芩苷的含量。(1)色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-0.5%磷酸二氫鉀為流動(dòng)相，0分鐘時(shí)甲醇-0.5%磷酸二氫鉀QO 80)，11分鐘時(shí)甲醇-0.5%磷酸二氫鉀(80 20)，11. 01分鐘時(shí)甲醇-0.5%磷酸二氫鉀QO 80)，20分鐘時(shí)停止；檢測(cè)波長(zhǎng)為316nm ；(2)對(duì)照品溶液的制備，精密稱取黃芩苷對(duì)照準(zhǔn)品定量，置于容量瓶中，加甲醇至刻度，超聲溶解15分鐘，制成濃度為100μ g/ml的溶液，過濾備用；取綠原酸對(duì)照品適量，精密稱定，置棕色瓶中，加甲醇制成20 μ g/ml的溶液，過濾備用；(3)供試品溶液的制備，精密吸取銀黃注射液定量，置于容量瓶中，加甲醇至刻度， 超聲溶解15分鐘，涼至室溫，過濾，精密量取續(xù)濾液定量，置于容量瓶中，加甲醇至刻度，混勻，備用；(4)測(cè)定法，分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各定量，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。本品每Iml含金銀花以綠原酸(C16H18O9)計(jì)，不得少于0. 6mg，含黃芩以黃芩苷 (C21H18O11)計(jì)，不得少于 6.0mg。
具體實(shí)施例方式下面通過實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步闡述本發(fā)明銀黃注射液的制備工藝實(shí)施例1 將黃芩提取物28. 4g加水適量使其溶解，用2%氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至8，濾過， 濾液與金銀花提取物80g合并，用10%氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至7. 2，煮沸1小時(shí)，濾過，加亞硫酸鈉lg，加水至近全量，攪勻，用2%氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至7. 2，加水至1000ml，濾過， 灌封，滅菌，即得銀黃注射液1000ml。實(shí)施例2 將黃芩提取物40g加水適量使其溶解，用8%氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至10，濾過，濾液與金銀花提取物78. 6g合并，用20%氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至6. 0，煮沸1小時(shí)，濾過，加亞硫酸鈉2g，加水至近全量，攪勻，用5%氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至6.0，加水至1000ml，濾過， 灌封，滅菌，即得銀黃注射液1000ml。實(shí)施例3 將黃芩提取物32. Ig加水適量使其溶解，用20%氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至6，濾過， 濾液與金銀花提取物86g合并，用2%氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至7. 5，煮沸1小時(shí)，濾過，加亞硫酸鈉10g，加水至近全量，攪勻，用20%氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至7. 5，加水至1000ml，濾過，灌封，滅菌，即得銀黃注射液1000ml。實(shí)施例4 關(guān)于銀黃注射液的制備及質(zhì)量檢測(cè)方法的相關(guān)研究和實(shí)驗(yàn)銀黃注射液生產(chǎn)工藝的研究本發(fā)明銀黃注射液是由金銀花和黃芩經(jīng)提取加工后配置的復(fù)方制劑。具有廣譜抗菌和抗病毒作用，能阻止毒素吸收，增強(qiáng)免疫功能，減輕或消除應(yīng)激反應(yīng)，提高毛細(xì)血管抵抗力，保護(hù)黏膜上皮和肝細(xì)胞功能。是我國(guó)歷史悠久的傳統(tǒng)藥物之一。中藥注射劑是近幾年中藥制劑研究開發(fā)的重點(diǎn)和難點(diǎn)。本試驗(yàn)是在金銀花和黃芩提取工藝研究基礎(chǔ)之上對(duì)銀黃注射液的生產(chǎn)工藝做了詳細(xì)的研究。1試驗(yàn)儀器和試藥1. 1儀器SHIMADZU L VP C-10AT高效液相色譜儀；SPD-10A VP紫外可見檢測(cè)器； 色譜柱SHIMADZU 0DSC18 柱(150 X 4. 6mm，5 μ m)；雷磁 PHS-25 型數(shù)顯 pH 計(jì)。1. 2試藥黃芩苷標(biāo)準(zhǔn)品，綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品，中國(guó)藥品生物制品檢定所提供；乙醇、磷酸(分析醇)磷酸二氫鉀(分析醇)、甲醇(色譜醇)，購(gòu)于北京市化學(xué)試劑公司。2試驗(yàn)方法2. 1滅菌前后藥液pH值和含量的變化2. 1. 1藥液的配置按照配置500ml的藥液投藥。500ml注射用水中加入金銀花提取物(相當(dāng)于0. 4g 綠原酸)和黃芩提取物(相當(dāng)于4g黃芩苷)，加入Ig亞硫酸鈉，混合均勻，用氫氧化鈉調(diào)節(jié)PH值至6. 0，使其完全溶解，過濾，平均分成10份，除一份作為空白對(duì)照外其余9份以0. lmol/ml的NaOH 0. 5ml的量遞加，測(cè)定各組藥液的pH值和有效成分的含量，然后按 IOml/支的量灌封，100°C滅菌30min，放涼后在分別測(cè)定各組藥液的pH值和含量。2·1·2ρΗ 值的測(cè)定
按照PHS-25型數(shù)顯pH計(jì)的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程直接測(cè)定。2. 1. 3含量的測(cè)定2. 1. 3. 1 色譜條件色譜柱0DSC18柱(150X4. 6mm，5ym)；流動(dòng)相甲醇-0. 5%磷酸二氫鉀，0. 5% 磷酸二氫鉀溶液用磷酸調(diào)節(jié)PH值為2. 6，檢測(cè)波長(zhǎng)316nm ；柱溫40°C ；流速lml/min。2. 1. 3. 2標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備精密稱取黃芩苷標(biāo)準(zhǔn)品2. 5mg，置于25ml的容量瓶中；加甲醇至刻度，超聲溶解15 分鐘，制成濃度為100μ g/ml的溶液。精密稱取綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品2. 5mg，置于50ml的容量瓶中，加甲醇至刻度，超聲溶解15 分鐘，制成濃度為50 μ g/ml的溶液。將兩種標(biāo)準(zhǔn)品溶液按1 1的比例混合后備用。2. 1.3. 3樣品溶液的制備精密吸取1ml，置于25ml的容量瓶中，加甲醇至刻度，超聲溶解15分鐘，過濾，取慮液Iml，置于IOml容量瓶中，加甲醇至刻度，混勻，備用。2. 1.2. 4樣品的測(cè)定分別精密吸取混合后的標(biāo)準(zhǔn)品溶液和樣品溶液各10 μ 1注入色譜儀，測(cè)定即得。2. 2最佳的滅菌時(shí)間和滅菌溫度2. 2. 1藥液的配置按照配置500ml的藥液投藥。IOOml注射用水中加入金銀花提取物(相當(dāng)于0. 08g 綠原酸)和黃芩提取物(相當(dāng)于0. 8g黃芩苷)，混合均勻后加入Ig亞硫酸鈉，用氫氧化鈉調(diào)節(jié)PH值至7. 0，使其完全溶解，過濾，按IOml/支的量灌封，80900C、100°C，110°C條件下，滅菌10min、20min、30min、40min，放涼后進(jìn)行無菌檢驗(yàn)。2. 2. 2無菌檢驗(yàn)2. 2. 2. 1對(duì)照菌的配置取金黃色葡萄球菌[CMCC(B)沈003]的營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面新鮮培養(yǎng)物1白金耳，接種至營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基內(nèi)，在30 35°C培養(yǎng)16 18小時(shí)后，用0. 9%無菌氯化鈉溶液稀釋到每 Iml中含10 100個(gè)菌，備用。2. 2. 2. 2真菌、霉菌的培養(yǎng)采用薄膜過濾法將裝有硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基的試管放到30 35°C的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2天，將裝有真菌培養(yǎng)基的試管放到霉菌培養(yǎng)箱與20 25°C培養(yǎng)3天。2. 2. 2. 3 結(jié)果判斷當(dāng)陽性對(duì)照管顯混濁并確有菌生長(zhǎng)，陰性對(duì)照管呈陰性時(shí)，根據(jù)觀察所得的結(jié)果判定如硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基和真菌培養(yǎng)基管內(nèi)均為澄清或顯渾濁但經(jīng)證明并非有菌生長(zhǎng)，判斷供試品合格；如果兩種培養(yǎng)基管中任何一管顯渾濁并確證有菌生長(zhǎng)，則重新取兩倍量供試品，重新檢查，除陽性對(duì)照管外，其他各管均沒有細(xì)菌生長(zhǎng)，判斷供試品合格。3試驗(yàn)結(jié)果3. 1滅菌前后藥液pH值和含量的變化。(見表1)
表1滅菌前后藥液pH值和含量(mg/ml)表
權(quán)利要求
1.一種銀黃注射液的制備及質(zhì)量檢測(cè)方法，包括如下步驟將黃芩提取物加水適量使其溶解；用2-20%氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)PH至6-10，濾過；濾液與金銀花提取物合并，用 2-20%氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至6. 0-7. 5 ；將溶液煮沸1小時(shí)，濾過，加亞硫酸鈉l_10g ；加水至近全量，攪勻，用2-20%氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至6. 0-7.5 ；加水至1000ml，濾過；灌封，滅菌，即得銀黃注射液。其特征在于采用高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定銀黃注射液中綠原酸和黃芩苷的含量。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種銀黃注射液的制備及質(zhì)量檢測(cè)方法，其特征在于每 IOml注射液相當(dāng)于原生藥2-12g。
全文摘要
本發(fā)明公開一種銀黃注射液的制備及質(zhì)量檢測(cè)方法，包括如下步驟1、將黃芩提取物加水適量使其溶解；2、用2-20％氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至6-10，濾過；3、濾液與金銀花提取物合并，用2-20％氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至6.0-7.5；4、將溶液煮沸1小時(shí)，濾過，加亞硫酸鈉1-10g；5、加水至近全量，攪勻，用2-20％氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至6.0-7.5；6、加水至1000ml，濾過；7、灌封，滅菌，即得銀黃注射液。本專利具有療效好、用藥方便、運(yùn)輸保存簡(jiǎn)單、易為廣大養(yǎng)殖戶和經(jīng)銷商所接受、毒副作用小、肉品質(zhì)量高、有利于人類健康、社會(huì)效益顯著等優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號(hào)A61P11/00GK102397333SQ20101028445
公開日2012年4月4日 申請(qǐng)日期2010年9月17日 優(yōu)先權(quán)日2010年9月17日
發(fā)明者侯曉礁, 李學(xué)良, 江厚生, 王秀敏 申請(qǐng)人:北京生泰爾生物科技有限公司