專利名稱：含有益生菌的紅曲制造方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于藥品或者是健康食品的制造領(lǐng)域，特別是涉及一種含有Monacolin K 等活性物質(zhì)亦含有益生菌的紅曲制造方法。
背景技術(shù)：
紅曲菌(Monascus spp.)是我國重要的微生物資源，在我國已有上千年的使用歷 史，被廣泛用于食品發(fā)酵劑、食品著色劑和中藥配伍的生產(chǎn)。紅曲菌在發(fā)酵過程中能產(chǎn)生多 種具有生理活性的代謝產(chǎn)物如紅曲色素、Monacolin類物質(zhì)、Y -氨基丁酸以及多種酶類。 自1979年，日本學(xué)者在紅曲的發(fā)酵液中發(fā)現(xiàn)具有降血脂效果的Monacolin K以來。紅曲這 一中華民族先民智慧結(jié)晶的產(chǎn)物，便開始成為國際生物領(lǐng)域?qū)W術(shù)研究的熱點(diǎn)。這從另一個(gè) 方面又促進(jìn)了紅曲的產(chǎn)業(yè)化發(fā)展與普及。而今，我們國家生產(chǎn)的功能性紅曲已經(jīng)遠(yuǎn)銷歐洲， 美洲，非洲等等多個(gè)國家和地區(qū)，其卓越的效果和極低的副作用，正受到越來越多國家消費(fèi) 者的喜愛。對功能性紅曲的研究是從降血脂開始的，關(guān)于功能性紅曲降血脂效果，已為中國、 美國、德國、挪威等等許多國家的動(dòng)物試驗(yàn)和臨床試驗(yàn)所證實(shí)。但近年來的研究結(jié)果表明， 功能性紅曲的效果不僅局限于降低血脂，在防治心腦血管疾病方面，功能性紅曲在抗癌、抗 氧化、抗疲勞、降血壓、抗炎癥、防治骨質(zhì)疏松等方面也有相當(dāng)不錯(cuò)的表現(xiàn)。益生菌作為人體腸道內(nèi)的有益菌，隨著研究的不斷深入日益為人民所熟知， 它在癌癥、冠心病、孤僻癥、老年癡呆、乳糖不耐受癥，糖尿病、腸道易激綜合癥、唐氏綜合癥 等方面均有良好的效果。(《益生菌是最好的藥》，美，馬克·Α 布魯奈克著，王麗譯，2008年 1月出版)。如今益生菌已經(jīng)發(fā)展成世界菌類的第一大產(chǎn)業(yè)。帶有益生菌的各種產(chǎn)品更是層 出不窮益生菌酸奶、益生菌豆奶，益生菌奶片等等。益生菌通常都是以液態(tài)發(fā)酵，濃縮，加入抗凍劑，再進(jìn)行冷凍干燥后獲得的， 所獲得的都是單純的益生菌，如公開號為CN101559082A，CN101028289A, CN101028290A和 CN101045903A等的中國發(fā)明。雖然也有固態(tài)發(fā)酵獲得益生菌的報(bào)道，但均是以單一獲得益 生菌為目的的單一發(fā)酵，如王天云等對嗜酸乳桿菌固態(tài)發(fā)酵進(jìn)行了研究(王天云等，生命科 學(xué)研究，2002年6月第6卷第2期)，周劍忠等對嗜熱鏈球菌固態(tài)培養(yǎng)的研究(周劍忠等，中 國釀造2004年第4期)，季偉等利用乳酸鏈球菌固態(tài)發(fā)酵豆粕的研究(季偉等，利用乳酸鏈 球菌固態(tài)發(fā)酵豆粕的研究，糧食與飲料工業(yè)，2006年第五期)，鄭裴等對植物乳桿菌固態(tài)發(fā) 酵豆粕的研究(鄭裴等，植物乳桿菌發(fā)酵豆粕及其抗?fàn)I養(yǎng)因子的研究，安徽農(nóng)學(xué)通報(bào)，2009， 15(10))。此外，還有公開號為CN101671637A的中國發(fā)明公開“一種腸道益生菌固態(tài)營養(yǎng) 載體培養(yǎng)方法”等。公開號為CN1974782A的中國發(fā)明提供了“一種固態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)富含益生 菌多肽制品的方法”，其雖然以同時(shí)獲得多肽和益生菌為目的，但是多肽是作為益生菌的產(chǎn) 物而獲得的。就目前來說，在獲得紅曲有效成分的同時(shí)，獲得一定數(shù)量益生菌的方法未見報(bào) 道。

發(fā)明內(nèi)容
紅曲以其對中老年人“三高”，以及骨質(zhì)疏松等老年性慢性疾病的良好的功效，已 經(jīng)為人們所認(rèn)同。而體內(nèi)益生菌的減少作為引起中老年相關(guān)疾病的原因之一，也已經(jīng)為眾 多試驗(yàn)所證實(shí)。如何將二者有機(jī)的結(jié)合起來，在獲得紅曲療效的同時(shí)，低成本的補(bǔ)充體內(nèi)的 益生菌，達(dá)到更好的健康效果是本發(fā)明要解決的問題。本發(fā)明提供一種含有益生菌的紅曲制造方法，通過二次發(fā)酵技術(shù)，在先接種紅曲 菌進(jìn)行發(fā)酵的情況下，進(jìn)行滅活后，再接入益生菌進(jìn)行二次發(fā)酵，最后進(jìn)行干燥，獲得含有 益生菌的紅曲，利用本發(fā)明的方法在以紅曲中活性物質(zhì)Monacolin K為評價(jià)指標(biāo)的情況，接 種益生菌后，對Monacolin K含量沒有影響，且獲得的紅曲中，益生菌的數(shù)量均在IXlO8個(gè)
/克(干重)以上。本發(fā)明采用的技術(shù)方案是
一種含有益生菌的紅曲制造方法，包括
固態(tài)培養(yǎng)基經(jīng)滅菌處理后，接種紅曲菌進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵結(jié)束后作滅活處理，然后接種 益生菌進(jìn)行二次發(fā)酵，二次發(fā)酵結(jié)束后再經(jīng)干燥處理得到含有益生菌的紅曲，其中，所述接 種紅曲菌發(fā)酵為接種量2-25 % (v/w，即體積重量比)，30-35°C下培養(yǎng)3-5天，然后轉(zhuǎn)入 20-24°C下培養(yǎng)5-30天；接種益生菌進(jìn)行二次發(fā)酵為接種量2-10 %(v/w，即體積重量比)， 28-37 °C下培養(yǎng)2-5天。作為優(yōu)選方案，根據(jù)本發(fā)明所述的含有益生菌的紅曲制造方法，其中，所述的紅 曲菌選自紫色紅曲菌(Monascus purpureus)、紅曲紅曲菌(Monascus anka)、叢毛紅曲菌 (Monascus pilosus)或紅色紅曲菌(Monasucs ruber)。作為優(yōu)選方案，根據(jù)本發(fā)明所述的含有益生菌的紅曲制造方法，其中，所述 的益生菌選自植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)、嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus)、釀酒酵母(Sccharomyces cerevisiae)、嗜熱鏈球菌(Streptococcus thermophilus)、乳酸鏈球菌(Streptococcus lactis)、產(chǎn)朊假絲酵母(Cadida atilis)、乳 酸克魯維酵母(Kluyveromyces lactis)或干酪乳桿菌(Lactobacillus Casei)中的一種或 它們之間的任意組合物。作為優(yōu)選方案，根據(jù)本發(fā)明所述的含有益生菌的紅曲制造方法，其中，所述的固態(tài) 培養(yǎng)基主要是以大米、麩皮、大豆、米糠中的一種或者是它們之間的任意組合物作為固態(tài)基 質(zhì)，加入營養(yǎng)液調(diào)整含水量為30-50%，營養(yǎng)液中的大豆蛋白胨含量為2-5% (g/mL)、蔗糖含 量為2-5% (g/mL)。大米、大豆一般需要粉碎處理后過20目篩再使用。作為優(yōu)選方案，根據(jù)本發(fā)明所述的含有益生菌的紅曲制造方法，其中，所述的紅曲 菌菌種是經(jīng)過液態(tài)菌種擴(kuò)培后獲得紅曲液態(tài)菌種。這樣既可以獲得足夠的紅曲菌種，有利 于縮短發(fā)酵時(shí)間，又可以給固態(tài)培養(yǎng)基補(bǔ)充水分。所述的液態(tài)培養(yǎng)基中包括紅曲菌生長的 各種碳源、氮源、微生素以及微量元素。本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)不需要付出創(chuàng)造性勞 動(dòng)，選用通用的液態(tài)培養(yǎng)基都可實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的。作為優(yōu)選方案，根據(jù)本發(fā)明所述的含有益生菌的紅曲制造方法，其中，所述的益生 菌菌種是經(jīng)過液態(tài)菌種擴(kuò)培后獲得益生菌液態(tài)菌種。這樣既可以獲得足夠的益生菌菌種， 有利于縮短發(fā)酵時(shí)間，又可以給固態(tài)培養(yǎng)基補(bǔ)充水分。所述的液態(tài)培養(yǎng)基中包括益生菌生 長的各種碳源、氮源、微生素以及微量元素。本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)不需要付出創(chuàng)造性勞動(dòng)，選用通用的液態(tài)培養(yǎng)基都可實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的。作為優(yōu)選方案，根據(jù)本發(fā)明所述的含有益生菌的紅曲制造方法，其中，所述的二次 發(fā)酵結(jié)束后干燥處理的溫度在45°C以下，優(yōu)選冷凍真空干燥，這樣可以保證益生菌的存活。 所述的冷凍真空干燥采用本領(lǐng)域通用的冷凍干燥機(jī)即可，溫度控制在-50 -10°C之間，真 空度控制在1.3 13帕之間。作為優(yōu)選方案，根據(jù)本發(fā)明所述的含有益生菌的紅曲制造方法，其中，所述的含有 益生菌的紅曲中益生菌數(shù)量大于IXlO8個(gè)/g (干重)，同時(shí)紅曲產(chǎn)品中亦含有Monacolin K等活性物質(zhì)，因此本發(fā)明所得的含有益生菌的紅曲干粉，可以用作具有調(diào)節(jié)腸道和降低血 脂的藥物或者是健康食品原料。本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)
本發(fā)明以紅曲中活性物質(zhì)Monacolin K作為評價(jià)指標(biāo)的情況，接種益生菌后，對 Monacolin K含量沒有影響，且獲得的紅曲中，益生菌的數(shù)量均在1 X IO8個(gè)/克(干重)以 上。本發(fā)明的另一優(yōu)勢在于不添加任何設(shè)施設(shè)備的情況下，僅利用一條紅曲生產(chǎn)線， 就能完成紅曲和益生菌兩條生產(chǎn)線的作用，極大的節(jié)約了生產(chǎn)成本。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例，更具體地說明本發(fā)明的內(nèi)容。應(yīng)當(dāng)理解，本發(fā)明的實(shí)施并不局 限于下面的實(shí)施例，對本發(fā)明所做的任何形式上的變通和/或改變都將落入本發(fā)明保護(hù)范圍。在本發(fā)明中，若非特指，所有的份、百分比均為重量單位，所有的設(shè)備和原料等均 可從市場購得或是本行業(yè)常用的。下述實(shí)施例中的方法，如無特別說明，均為本領(lǐng)域的常規(guī) 方法。設(shè)備說明
LZG冷凍真空干燥機(jī)，常州市科龍干燥機(jī)械設(shè)備有限公司。實(shí)施例1
植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)的液態(tài)培養(yǎng)
液態(tài)培養(yǎng)基的組成(均為重量百分比)葡萄糖4%、乳糖1%、大豆蛋白胨2%、酵母膏1%， 乳清粉1%，碳酸鈣1%、MgSO4 0. 2%、KH2PO4 0. 2%、ZnSO4 0. 1%，余量為蒸餾水，pH值自然。 500mL三角瓶裝量300mL，然后將液態(tài)培養(yǎng)基于121°C下滅菌處理20分鐘，待冷卻到40°C下 后，用接種環(huán)接種植物乳桿菌3環(huán)，然后置于37°C下靜止培養(yǎng)48小時(shí)后，作為二次發(fā)酵用的 益生菌液態(tài)種。紫色紅曲菌(Monasucs purpureus)的液態(tài)培養(yǎng)
液態(tài)培養(yǎng)基的組成(均為重量體積比)葡萄糖2%、蔗糖2%、大米粉1%、黃豆粉1%、 MgSO4 0. 1%,ZnSO4 0. 1%,KH2PO4 0. 2%，余量為蒸餾水，pH 值自然。500mL 三角瓶裝量 250mL， 然后將液態(tài)培養(yǎng)基于121°C下滅菌處理20分鐘，待冷卻到40°C下后，接種從斜面上洗脫下 來的紫色紅曲菌孢子大于IO8個(gè)/mL的紅曲孢子懸液10mL，然后于溫度為32°C和180r/min 下培養(yǎng)72h后作為紅曲液態(tài)種。取經(jīng)粉碎過20目篩的大米lkg，黃豆粉100克，米糠100克，混合均勻后，加入營
5養(yǎng)液(含蔗糖40g/L，大豆蛋白胨40g/L，酵母膏20g/L)273 mL，使含水量為30%，得到固態(tài) 培養(yǎng)基。將固態(tài)培養(yǎng)基質(zhì)裝到塑料瓶中，121°C滅菌45分鐘后，冷卻到30°C以下，接種入上 述紫色紅曲菌(Monasucs purpureus)液態(tài)種，接種量為20% (mL/g)。接種后轉(zhuǎn)入32°C下 培養(yǎng)3天，扣瓶轉(zhuǎn)入23°C下培養(yǎng)14天后，放入滅菌鍋內(nèi)121°C滅菌10分鐘，待冷卻到40°C 后接種入植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)液態(tài)種，接種量為5% (mL/g)，37°C發(fā)酵 72個(gè)小時(shí)。最后將發(fā)酵產(chǎn)物置于冷凍真空干燥機(jī)干燥后，低溫粉碎(40°C以下)得到粉狀紅 曲產(chǎn)品，測定粉狀紅曲產(chǎn)品中的植物乳桿菌數(shù)量為3 X IO8個(gè)/g (干重)，測定Monacolin K 含量為6. 01mg/g。而未接種植物乳桿菌的紅曲Monacolin K含量為6. 12mg/g。實(shí)施例2
酉良酒酵母(Sccharomyces cerevisiae)液態(tài)培養(yǎng)
液態(tài)培養(yǎng)基組成(重量體積百分比)葡萄糖2%，蔗糖2%，大豆蛋白胨2%，MgSO4 0. 2%， KH2PO4 0. 2%, ZnSO4 0. 1%，余量為蒸餾水，pH值自然。500mL三角瓶裝量250mL，然后將液態(tài) 培養(yǎng)基于121°C下滅菌20分鐘，待冷卻到40°C后，用接種環(huán)接種釀酒酵母3環(huán)，然后于28°C 和160r/min下培養(yǎng)48個(gè)小時(shí)后，作為二次發(fā)酵用的益生菌液態(tài)種。紅曲紅曲菌(Monasucs anka)的液態(tài)培養(yǎng)
液態(tài)培養(yǎng)基組成(重量體積百分比)葡萄糖2%，蔗糖2%，大米粉1%，黃豆粉1%，MgSO4 0. 1%，ZnSO4 0. 1%，KH2PO4 0. 2%，余量為蒸餾水，pH值自然。500mL裝量250mL，然后將液態(tài) 培養(yǎng)基于121°C下滅菌20分鐘，待冷卻到40°C下后，接種從斜面上洗脫下來的紅曲紅曲菌 孢子大于IO8個(gè)/mL的紅曲孢子懸液15mL，然后于32°C和180r/min下培養(yǎng)72h后作為紅 曲液態(tài)種。取經(jīng)粉碎過20目篩的大米lkg，黃豆粉50克，米糠100克，麩皮200混合均勻后， 加入營養(yǎng)液(含蔗糖40g/L，大豆蛋白胨40g/L，酵母膏20g/L)，使含水量為50%，得到固 態(tài)培養(yǎng)基。將固態(tài)培養(yǎng)基裝到塑料瓶中，121°C滅菌45分鐘后，冷卻到30°C以下，接種上述 紅曲液態(tài)菌種，接種量為25%(mL/g)，接種后轉(zhuǎn)入30°C下培養(yǎng)5天，再扣瓶轉(zhuǎn)入24°C下培養(yǎng) 5天后，放入滅菌鍋內(nèi)121°C滅菌10分鐘，待冷卻到40°C后接種入釀酒酵母(Sccharomyces cerevisiae)，接種量為5% (mL/g)，28°C下發(fā)酵48個(gè)小時(shí)，最后將發(fā)酵產(chǎn)物在40°C進(jìn)行 干燥，經(jīng)低溫粉碎(40°C以下)得到粉狀紅曲產(chǎn)品。測定粉狀紅曲產(chǎn)品中酵母菌體數(shù)量為 5X IO9個(gè)/克(干重)，Monacolin K為2. 53mg/g，而未接種釀酒的酵母的紅曲Monacolin K 經(jīng)測定含量為2. 56mg/g。實(shí)施例3
乳酸鏈球菌(Sti^ptococcus lactis)液態(tài)培養(yǎng)
液態(tài)培養(yǎng)基組成(重量體積百分比):葡萄糖2%，麥芽糖2%，大豆蛋白胨2%，酵母膏1%， 碳酸鈣1%，MgSO4 0. 2%，KH2PO4 0. 2%，ZnSO4 0. 1%，余量為蒸餾水，pH值自然。500mL三角瓶 裝量300mL，然后將液態(tài)培養(yǎng)基于121°C下滅菌20分鐘，待冷卻到40°C后，用接種環(huán)接種乳 酸鏈球菌3環(huán)，置于37°C下靜止培養(yǎng)48小時(shí)后，作為二次發(fā)酵用的益生菌液態(tài)種。紫色紅曲菌(Monasucs purpureus)的液態(tài)培養(yǎng)
液態(tài)培養(yǎng)基組成(重量體積百分比)葡萄糖2%，大米粉1%，黃豆粉1%，MgSO4O. 1%, ZnSO4 0. 1%, KH2PO4 0. 2%，余量為蒸餾水，pH值自然。500mL裝量250mL，然后將液態(tài)培養(yǎng)基 于121°C下滅菌20分鐘，待冷卻到40°C下后，接種從斜面上洗脫下來的紫色紅曲菌孢子大于IO8個(gè)/mL的紅曲孢子懸液10mL，于32°C和180r/min下培養(yǎng)72h后作為紅曲液態(tài)種。取經(jīng)粉碎過20目篩的大米1kg，黃豆粉100克，米糠100克，麩皮100混合均勻 后，加入營養(yǎng)液(含蔗糖40g/L，大豆蛋白胨40g/L，酵母膏20g/L)，使含水量為40%，得到 固態(tài)培養(yǎng)基。將固態(tài)培養(yǎng)基裝到塑料瓶中，121°C滅菌45分鐘后，冷卻到30°C以下，接種紫 色紅曲菌(Monasucs purpureus)液態(tài)種，接種量為5%(mL/g)，接種后轉(zhuǎn)入35°C下培養(yǎng)3天， 再扣瓶轉(zhuǎn)入20°C下培養(yǎng)30天后，放入滅菌鍋內(nèi)121°C滅菌10分鐘，待冷卻到40°C后接種入 上述已培養(yǎng)好的液態(tài)乳酸鏈球菌(Str印tococcus lactis)，接種量為2%(mL/g)，于37°C下 發(fā)酵120個(gè)小時(shí)。最后將發(fā)酵產(chǎn)物進(jìn)行真空冷凍干燥(冷凍溫度為-30°C，真空度5Pa)，經(jīng) 低溫粉碎(40°C以下)得到粉狀紅曲產(chǎn)品。測定粉狀紅曲產(chǎn)品中鏈球菌菌體數(shù)量為3X IO8 個(gè)/g (干重)，Monacolin K為5. 78mg/g。而未接種乳酸鏈球菌的紅曲的Monacolin K含量 為 5. 56mg/g.
實(shí)施例4
干酪乳桿菌(Lactobacillus Casei)液態(tài)培養(yǎng)
液態(tài)培養(yǎng)基組成(重量體積百分比)葡萄糖2%，麥芽糖1%，大豆蛋白胨1%，酵母膏1%， 碳酸鈣1%，MgSO4 0. 2%，KH2PO4 0. 2%，ZnSO4 0. 1%，余量為蒸餾水，pH值自然。500mL三角瓶 裝量300mL，然后將液態(tài)培養(yǎng)基于121°C下滅菌20分鐘，待冷卻到40°C后，用接種環(huán)接種干 酪乳桿菌3環(huán)，置于35°C下靜止培養(yǎng)48小時(shí)后，作為二次發(fā)酵用的益生菌液態(tài)種。紫色紅曲菌(Monasucs purpureus)的液態(tài)培養(yǎng)
液態(tài)培養(yǎng)基組成(重量體積百分比):葡萄糖2%，蔗糖2%，大米粉1%，黃豆粉1%，大豆蛋 白胨 2%, MgSO4, ZnSO4 0. 1%, KH2PO4 0. 2%，余量為蒸餾水，pH 值自然。500mL 裝量 250mL，然 后將液態(tài)培養(yǎng)基于121°C下滅菌20分鐘，冷卻到40°C下后，接種從斜面上洗脫下來的紫色 紅曲菌孢子大于IO8個(gè)/mL的紅曲孢子懸液20mL，于32°C和180r/min下培養(yǎng)72h后作為 紅曲液態(tài)種。取經(jīng)粉碎過20目篩的大米1kg，黃豆粉50克，米糠100克，麩皮100混合均勻后， 加入營養(yǎng)液(含蔗糖40g/L，大豆蛋白胨40g/L，酵母膏20g/L)，使含水量為45%，得到固 態(tài)培養(yǎng)基。于121°C滅菌45分鐘后，冷卻到30°C以下，接種上述紅曲液態(tài)菌種，接種量為 20% (mL/g)，接種后轉(zhuǎn)入32°C下培養(yǎng)3天，再扣瓶轉(zhuǎn)入22°C下培養(yǎng)20天后，放入滅菌鍋內(nèi) 121°C滅菌10分鐘，待冷卻到40°C后接種入上述已培養(yǎng)好的干酪乳桿菌(Lactobacillus Casei)液態(tài)種，接種量為6% (mL/g)，于37°C下發(fā)酵60個(gè)小時(shí)。最后將發(fā)酵物進(jìn)行冷凍干 燥，低溫粉碎(40°C以下)，得到粉狀紅曲產(chǎn)品。測定粉狀紅曲產(chǎn)品中乳桿菌數(shù)量4X IO9個(gè)/ g (干重)，M0naC0lin K為10. 24mg/g。同樣的條件下，未接種干酪乳桿菌的紅曲，經(jīng)干燥測 定 Monacolin K 含量為 10. 53mg/g.
實(shí)施例5
嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus)液態(tài)培養(yǎng)
液態(tài)培養(yǎng)基組成(重量體積百分比)葡萄糖2%，蔗糖1%，麥芽糖1%，大豆蛋白胨2%，酵 母膏 1%，碳酸鈣 1%,MgSO4 0. 2%,KH2PO4 0. 2%, ZnSO4 0. 1%，余量為蒸餾水，pH 值自然。500mL 三角瓶裝量300mL，然后將液態(tài)培養(yǎng)基于121°C下滅菌20分鐘，待冷卻到40°C后，用接種環(huán) 接種嗜酸乳桿菌3環(huán)，置于35°C下靜止培養(yǎng)48小時(shí)后，作為二次發(fā)酵用的益生菌液態(tài)種。紫色紅曲菌(Monasucs purpureus)的液態(tài)培養(yǎng)基葡萄糖2%，蔗糖2%，大米粉1%，牛肉浸膏1%，黃豆粉1%，MgSO4O. 1%，ZnSO4 0. 1%，KH2PO4 0. 2%，余量為蒸餾水，pH值自 然。500mL裝量250mL，然后將液態(tài)培養(yǎng)基于121°C下滅菌20分鐘，待冷卻到40°C下后，接 種從斜面上洗脫下來的紫色紅曲菌孢子大于IO8個(gè)/mL的紅曲孢子懸液20mL，于32°C和 180r/min下培養(yǎng)72h后作為紅曲液態(tài)種。取經(jīng)粉碎過20目篩的大米1kg，黃豆粉50克，米糠200克，混合均勻后，加入營養(yǎng) 液(含蔗糖40g/L，大豆蛋白胨40g/L，酵母膏20g/L)，使含水量為40% (wt)，得到固態(tài)培 養(yǎng)基。將固態(tài)培養(yǎng)基裝到塑料瓶中，121°C滅菌45分鐘后，就熱打散后，冷卻到30°C以下，接 種紫色紅曲菌(Monasucs purpureus)液態(tài)種，接種量為20% (mL/g)，接種后轉(zhuǎn)入32°C下培 養(yǎng)3天，再扣瓶轉(zhuǎn)入23°C下培養(yǎng)12天后，放入滅菌鍋內(nèi)121°C滅菌10分鐘，待冷卻到40°C 后接種入已發(fā)酵好的上述液態(tài)嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus)菌種，接種量為 5%(mL/g)，于37°C下發(fā)酵60個(gè)小時(shí)。最后將發(fā)酵產(chǎn)物真空冷凍干燥，低溫粉碎(40°C以下) 得到粉狀紅曲產(chǎn)品。測定粉狀紅曲產(chǎn)品中菌體數(shù)量為5X IOltl個(gè)/g(干重)，Monacolin K 為4. 98mg/g。同樣條件下，未接種嗜酸乳桿菌的紅曲中Monacolin K含量為4. 87mg/g。實(shí)施例6
產(chǎn)朊假絲酵母(Cadida atilis)液態(tài)培養(yǎng)
液態(tài)培養(yǎng)基組成(重量體積百分比)葡萄糖2%，蔗糖2%，大豆蛋白胨2%，酵母膏1%， MgSO4 0. 2% KH2PO4 0.2%，ZnSO4 0. 1%，余量為蒸餾水，pH 值自然。500mL 三角瓶裝量 250mL， 然后將液態(tài)培養(yǎng)基于121°C下滅菌20分鐘，待冷卻到40°C后，用接種環(huán)接種產(chǎn)朊假絲酵母 3環(huán)，置于28°C和160r/min下培養(yǎng)48個(gè)小時(shí)后，作為二次發(fā)酵用的益生菌液態(tài)種。紅曲紅曲菌(Monasucs anka)的液態(tài)培養(yǎng)
液態(tài)培養(yǎng)基組成(重量體積百分比):葡萄糖1%，蔗糖4%，大米粉1%，黃豆粉1%，酵母膏 2%, MgSO4O. 1%，ZnSO4 0. 1%，KH2PO4 0. 2%，余量為蒸餾水，pH 值自然。500mL 裝量 250mL，然 后將液態(tài)培養(yǎng)基于121°C下滅菌20分鐘，冷卻到40°C下后，接種從斜面上洗脫下來的紅曲 紅曲菌孢子大于IO8個(gè)/mL的紅曲孢子懸液20mL，于32°C和180r/min下培養(yǎng)72h后作為 紅曲液態(tài)種。取經(jīng)粉碎過20目篩的大米lkg，黃豆粉100克，米糠100克，混合均勻后，加入營 養(yǎng)液(含蔗糖40g/L，大豆蛋白胨40g/L，酵母膏20g/L) 273 mL，使含水量為30%，得到固 態(tài)培養(yǎng)基。將固態(tài)培養(yǎng)基裝到塑料瓶中，121°C滅菌45分鐘后，就熱打散后，冷卻到30°C以 下，接種上述紅曲液態(tài)菌種，接種量為20% (mL/g)，接種后轉(zhuǎn)入32°C下培養(yǎng)3天，再扣瓶轉(zhuǎn) 入23°C下培養(yǎng)12天后，放入滅菌鍋內(nèi)121°C滅菌10分鐘，待冷卻到40°C后接種入產(chǎn)朊假絲 酵母(Cadida atilis)液態(tài)種，接種量為5% (mL/g)，于28°C下發(fā)酵48個(gè)小時(shí)。最后將發(fā) 酵產(chǎn)物于40°C下干燥處理，粉碎得到粉狀紅曲產(chǎn)品。測定粉狀紅曲產(chǎn)品中菌體數(shù)量7X IO9 個(gè)/g (干重)，Monacolin K為5. 34mg/g。而未接種產(chǎn)朊假絲酵母的紅曲中Monacolin K含 量為 5. 42mg/g。實(shí)施例7
乳酸克魯維酵母(Kluyveromyces lactis)液態(tài)培養(yǎng)
液態(tài)培養(yǎng)基組成(重量百分比)葡萄糖4%，蔗糖2%，大豆蛋白胨2%，MgSO4 0. 2%，KH2PO4 0. 2%，ZnSO4 0. 1%，余量為蒸餾水，pH值自然。500mL三角瓶裝量250mL，然后將液態(tài)培養(yǎng)基 于121°C下滅菌20分鐘，待冷卻到40°C后，用接種環(huán)接種乳酸克魯維酵母3環(huán)，置于28°C和
8160r/min下培養(yǎng)48個(gè)小時(shí)后，作為二次發(fā)酵用的益生菌液態(tài)種。紅色紅曲菌(Monasucs ruber)的液態(tài)培養(yǎng)
液態(tài)培養(yǎng)基組成(重量體積百分比)葡萄糖2%，蔗糖2%，大米粉1%，黃豆粉1%， MgSO4O. 1%，ZnSO4 0. 1%，KH2PO4 0. 2%，余量為蒸餾水，pH 值自然。500mL 裝量 250mL，然后將 液態(tài)培養(yǎng)基于121°C下滅菌20分鐘，冷卻到40°C下后，接種從斜面上洗脫下來的紅色紅曲 菌孢子大于IO8個(gè)/mL的紅曲孢子懸液15mL，于32°C和180r/min下培養(yǎng)72h后作為紅曲 液態(tài)種。取經(jīng)粉碎過20目篩的大米1kg，黃豆粉100克，米糠100克，麩皮50克混合均勻 后，加入營養(yǎng)液(含蔗糖40g/L，大豆蛋白胨40g/L，酵母膏20g/L)，使含水量為35%，得到 固態(tài)培養(yǎng)基。將固態(tài)培養(yǎng)基裝到塑料瓶中，121°C滅菌45分鐘后，就熱打散后，冷卻到30°C 以下，接種上述紅曲液態(tài)菌種，接種量為20% (mL/g)，接種后轉(zhuǎn)入32°C下培養(yǎng)3天，再扣瓶 轉(zhuǎn)入23°C下培養(yǎng)12天后，放入滅菌鍋內(nèi)121°C滅菌10分鐘，待冷卻到40°C后接種入乳酸 克魯維酵母(Kluyveromyces lactis)液態(tài)種，接種量為5% (mL/g)，于28°C下發(fā)酵60個(gè)小 時(shí)。最后將發(fā)酵產(chǎn)物于37°C下干燥處理，粉碎得到粉狀紅曲產(chǎn)品。測定粉狀紅曲產(chǎn)品中菌 體數(shù)量為5X IOki個(gè)/g (干重)，Monacolin K為4. 76mg/g。未接種乳酸克魯維酵母的紅曲 Monacolin K 含量為 4. 64mg/g。實(shí)施例8
嗜熱鏈球菌(Sti^ptococcus thermophilus)液態(tài)培養(yǎng)
液態(tài)培養(yǎng)基組成(重量體積百分比)乳糖2%，葡萄糖2%，脫脂乳粉1%，大豆蛋白胨2%， 碳酸鈣1%，MgSO4 0. 2%，KH2PO4 0. 2%，ZnSO4 0. 1%，余量為蒸餾水，pH值自然。500mL三角瓶 裝量300mL，然后將液態(tài)培養(yǎng)基于121°C下滅菌20分鐘，待冷卻到40°C后，用接種環(huán)接種嗜 熱鏈球菌3環(huán)，置于37°C下靜止培養(yǎng)48小時(shí)后，作為二次發(fā)酵用的益生菌液態(tài)種。叢毛紅曲菌(Monascus pilosus)的液態(tài)培養(yǎng)
液態(tài)培養(yǎng)基組成(重量體積分比)葡萄糖2%，蔗糖2%，大米粉1%，黃豆粉1%，MgSO4 0. 1%，ZnSO4 0. 1%，KH2PO4 0. 2%，余量為蒸餾水，pH值自然。500mL裝量250mL，然后將液態(tài) 培養(yǎng)基于121°C下滅菌20分鐘，冷卻到40°C下后，接種從斜面上洗脫下來的叢毛紅曲菌孢 子大于IO8個(gè)/mL的紅曲孢子懸液10mL，于32°C和180r/min下培養(yǎng)72h后作為紅曲液態(tài) 種。取經(jīng)粉碎過20目篩的大米lkg，黃豆粉100克，米糠100克，麩皮100克，混合均勻 后，加入營養(yǎng)液(含蔗糖40g/L，大豆蛋白胨40g/L，酵母膏20g/L)，使含水量為35%，得到 固態(tài)培養(yǎng)基。將固態(tài)培養(yǎng)基裝到塑料瓶中，121°C滅菌45分鐘后，就熱打散后，冷卻到30°C 以下，接種上述紅曲液態(tài)菌種，接種量為15%(mL/g)，接種后轉(zhuǎn)入32°C下培養(yǎng)3天，再扣瓶轉(zhuǎn) 入23°C下培養(yǎng)16天后，放入滅菌鍋內(nèi)121°C滅菌10分鐘，待冷卻到40°C后接種入嗜熱鏈球 菌(Streptococcus thermophilus)液態(tài)菌種，接種量為8%(mL/g)，于37°C下發(fā)酵60個(gè)小 時(shí)。最后將發(fā)酵產(chǎn)物于40°C下干燥處理，低溫粉碎得到粉狀紅曲產(chǎn)品。測定粉狀紅曲產(chǎn)品 中菌體數(shù)量為6X IO8個(gè)/g(干重)，Monacolin K為8. 32mg/g。未接種嗜熱鏈球菌的紅曲 經(jīng)測定，其Monacolin K含量為8. 21mg/g。工業(yè)實(shí)用性
本發(fā)明以紅曲中活性物質(zhì)Monacolin K作為評價(jià)指標(biāo)的情況，接種益生菌后，對Monacolin K含量沒有影響，且獲得的紅曲中，益生菌的數(shù)量均在1 X IO8個(gè)/克以上，因此 本發(fā)明所得的含有益生菌的紅曲干粉，可以用作具有調(diào)節(jié)腸道和降低血脂的藥物或者是健 康食品原料。本發(fā)明的在不添加任何設(shè)施設(shè)備的情況下，僅利用一條紅曲生產(chǎn)線，就能完成 紅曲和益生菌兩條生產(chǎn)線的作用，可極大的節(jié)約生產(chǎn)成本。 盡管發(fā)明人已經(jīng)對本發(fā)明的技術(shù)方案做了較為詳細(xì)的闡述和列舉，應(yīng)當(dāng)理解，對 于本領(lǐng)域一個(gè)熟練的技術(shù)人員來說，對上述實(shí)施例作出修改或變通或者采用等同的替代方 案是顯然的，都不能脫離本發(fā)明精神的實(shí)質(zhì)，本發(fā)明中出現(xiàn)的術(shù)語用于對本發(fā)明技術(shù)方案 的闡述和理解，并不能構(gòu)成對本發(fā)明的限制。
權(quán)利要求
一種含有益生菌的紅曲制造方法，包括固態(tài)培養(yǎng)基經(jīng)滅菌處理后，接種紅曲菌進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵結(jié)束后作滅活處理，然后接種益生菌進(jìn)行二次發(fā)酵，二次發(fā)酵結(jié)束后再經(jīng)干燥處理得到含有益生菌的紅曲，其中，所述接種紅曲菌發(fā)酵為接種量2 25%(v/w)，30 35℃下培養(yǎng)3 5天，然后轉(zhuǎn)入20 24℃下培養(yǎng)5 30天；接種益生菌進(jìn)行二次發(fā)酵為接種量2 10%(v/w)，28 37℃下培養(yǎng)2 5天。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的含有益生菌的紅曲制造方法，其特征在于，所述的紅曲菌選 自紫色紅曲菌、紅曲紅曲菌、叢毛紅曲菌或紅色紅曲菌。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的含有益生菌的紅曲制造方法，其特征在于，所述的益生菌選 自植物乳桿菌、嗜酸乳桿菌、釀酒酵母、嗜熱鏈球菌、乳酸鏈球菌、產(chǎn)朊假絲酵母、乳酸克魯 維酵母或干酪乳桿菌中的一種或它們之間的任意組合物。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的含有益生菌的紅曲制造方法，其特征在于，所述的固態(tài)培養(yǎng) 基主要是以大米、麩皮、大豆、米糠中的一種或者是它們之間的任意組合物作為固態(tài)基質(zhì)， 加入營養(yǎng)液調(diào)整含水量為30-50%，營養(yǎng)液中的大豆蛋白胨含量為2-5%(g/mL)、蔗糖含量為 2-5% (g/mL)。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的含有益生菌的紅曲制造方法，其特征在于，所述的紅曲菌菌 種是經(jīng)過液態(tài)菌種擴(kuò)培后獲得紅曲液態(tài)菌種。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的含有益生菌的紅曲制造方法，其特征在于，所述的益生菌菌 種是經(jīng)過液態(tài)菌種擴(kuò)培后獲得益生菌液態(tài)菌種。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的含有益生菌的紅曲制造方法，其特征在于，所述的二次發(fā)酵 結(jié)束后干燥處理的溫度在45°C以下。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的含有益生菌的紅曲制造方法，其特征在于，所述的干燥處理 采用冷凍真空干燥。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的含有益生菌的紅曲制造方法，其特征在于，所述的含有益生 菌的紅曲中益生菌數(shù)量以干重計(jì)大于1 X IO8個(gè)/g。
全文摘要
本發(fā)明屬于藥品或者是健康食品的制造領(lǐng)域，特別是涉及一種含有益生菌的紅曲制造方法，包括固態(tài)培養(yǎng)基經(jīng)滅菌處理后，接種紅曲菌進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵結(jié)束后作滅活處理，然后接種益生菌進(jìn)行二次發(fā)酵，二次發(fā)酵結(jié)束后再經(jīng)干燥處理得到含有益生菌的紅曲，其中，所述接種紅曲菌發(fā)酵為接種量2-25%(v/w)，30-35℃下培養(yǎng)3-5天，然后轉(zhuǎn)入20-24℃下培養(yǎng)5-30天；接種益生菌進(jìn)行二次發(fā)酵為接種量2-10%(v/w)，28-37℃下培養(yǎng)2-5天。本發(fā)明的紅曲產(chǎn)品中益生菌的數(shù)量均在1×108個(gè)/克(干重)以上，使紅曲和益生菌二者有機(jī)結(jié)合，在獲得紅曲療效的同時(shí)，低成本的補(bǔ)充體內(nèi)的益生菌，可達(dá)到更好的健康效果。
文檔編號A61K36/064GK101912423SQ201010213999
公開日2010年12月15日 申請日期2010年7月1日 優(yōu)先權(quán)日2010年7月1日
發(fā)明者馮永剛, 方俊, 邵群慧, 陳小林, 陳平華 申請人:杭州千島湖星遙實(shí)業(yè)有限公司