專利名稱：用于治療肝腎陰虛型無排卵型功血的藥物及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體來講涉及一種用于治療肝腎陰虛型無排卵型功血 的藥物及其制備方法。
二、背景技術(shù) 功能失調(diào)型子宮出血(dysfunctional uterine bleeding，DUB)簡稱功血，是指 因調(diào)節(jié)生殖的神經(jīng)內(nèi)分泌機(jī)制失常引起的異常子宮出血。功血可分為兩大類無排卵型 和有排卵型。功血是婦科的常見病，其發(fā)病率占門診婦科疾病的10%左右。以無排卵型 最為多見，約占80 90%，主要發(fā)生在青春期和絕經(jīng)前期，少數(shù)發(fā)生在育齡期；排卵型功 血為數(shù)相對不多。凡因不同年齡、不同原因而發(fā)生的無排卵子宮出血均屬于無排卵型功血 (anovulatory dysfunctionaluterine bleeding)0功血是一種婦科常見病多發(fā)病，每一個婦女一生中或多或少都可患有功血病，功 血出血量多，或淋漓日久不凈，嚴(yán)重者可導(dǎo)致失血性休克，甚至?xí)?dǎo)致子宮內(nèi)膜癌，對婦女 身體健康危害極大，屬于婦科急癥中的一種。機(jī)體內(nèi)部和外界的許多因素諸如精神緊張、情 緒變化、營養(yǎng)不良、代謝紊亂及環(huán)境、氣候驟變等，可通過大腦皮層和中樞神經(jīng)系統(tǒng)影響下 丘腦-垂體-卵巢軸(HPOA)的相互調(diào)節(jié)，使促性腺激素或卵巢激素在釋出或平衡方面的暫 時變化而發(fā)生功血。功血的出血機(jī)制包括雌激素撤退性出血，雌激素突破性出血，孕激素突 破性出血，子宮內(nèi)膜局部血管異常，凝血與纖溶異常等等。其病理生理改變可以是中樞神經(jīng) 下丘腦一垂體一卵巢軸的神經(jīng)內(nèi)分泌調(diào)控異常，或卵巢局部調(diào)控機(jī)制異常，或子宮內(nèi)膜或 肌層局部調(diào)控功能的異常。此外，子宮異常出血也與子宮局部調(diào)控失調(diào)有關(guān)。子宮內(nèi)膜局 部的改變，主要包括子宮內(nèi)膜細(xì)胞凋亡的變化，局部內(nèi)分泌因子的改變，以及局部血管、血 液成分的改變等。目前，對于功血的治療方法較多。西醫(yī)治療此癥主藥采用器械刮宮法，性激素或止 血劑止血法等方法。這些方法雖然能夠快速止血但是不能賴以止血，而且不能調(diào)整月經(jīng)周 期預(yù)防再次初學(xué)?？梢?，西醫(yī)治療無排卵型功血容易復(fù)發(fā)且有較多副作用。

發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明目的本發(fā)明的目的在于提供了一種治療無排卵型功血的中藥制劑和在制藥 中的應(yīng)用，它具有滋陰清熱，調(diào)經(jīng)止血的作用；本發(fā)明的另一個目的在于提供該中藥制劑的 制備方法。技術(shù)方案一種用于治療肝腎陰虛型無排卵型功血的藥物，包括下列重量份配比 的原料藥所制成的藥劑白芍190-290份；地黃270-370份；墨旱蓮190_290份；女貞 子190-290 份；續(xù)斷190-290 份；阿膠30_130 份；三七190-290 份；黃芪430_530 份； 地骨皮190-290份；海螵蛸270-370份。制備用于治療肝腎陰虛型無排卵型功血藥物的方法，制備步驟如下a.按照上述重量份數(shù)，取白芍、墨旱蓮、女貞子、續(xù)斷、三七和黃芪加乙醇回流提取，濾過，將醇提液減壓 回收乙醇后濃縮至無醇味，得醇提濃縮液和藥渣備用；b.將上述藥渣和熟地黃、地骨皮和 海螵蛸合并后用水煎煮，煎液過濾，濾液減壓濃縮后加乙醇，攪勻、放置后濾過，濾液回收乙 醇，得水提醇沉濃縮液，與步驟a的醇提濃縮液合并，加入烊化后的阿膠，濃縮，真空干燥成 干浸膏粉即為藥物活性成分。步驟a中所加的乙醇量是飲片總重量的12-18倍，乙醇體積濃度為60_80%，分三 次回流提取，三次用量分別為總用量的40%、30%和30%，每次提取1-2小時。步驟b中所加水的量是飲片總重量的15-25倍，分二次煎煮，二次用量分別為總用 量的60%和40%，每次1-2小時，煎液過濾后濾液減壓濃縮至相對密度為1. 05 1. 08，在 50 V 60 V時測定，濃縮液中加乙醇至醇含量不超過60 % vt，攪勻，放置48小時，濾過，濾 液回收乙醇與步驟a醇提濃縮液合并，加入烊化后的阿膠，濃縮至相對密度1. 10 1. 15，在 50°C 60°C時測定，在0. 080 0. 085Mpa、65 70°C真空干燥成干浸膏粉。上述中藥在制備治療肝腎陰虛型無排卵型功血藥物中的應(yīng)用。有益效果本發(fā)明的中藥制劑經(jīng)藥理實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明該制劑能夠縮短出血時間及凝 血時間，抗炎，鎮(zhèn)痛，調(diào)節(jié)激素水平等作用，從而對功血有良好的治療作用。
四

圖1功血飲對小鼠斷尾出血時間的影響；圖2功血飲對小鼠凝血時間的影響；圖3功血飲對二甲苯致小鼠耳腫脹的影響；圖4功血飲對醋酸刺激致小鼠疼痛的影響；圖5功血飲對HAC致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增高的影響；圖6功血飲對藥物不完全流產(chǎn)大鼠體重的影響；圖7功血飲對藥物不完全流產(chǎn)大鼠陰道出血量的影響；圖8功血飲對藥物不完全流產(chǎn)大鼠血清雌二醇含量的影響；圖9功血飲對藥物不完全流產(chǎn)大鼠血清孕酮含量的影響；圖10電泳條帶圖A為β -actin電泳條帶、B為ERmRNA電泳條帶、C為PRmRNA電 泳條帶，1.未孕空白組、2.空白對照組、3.模型組、4.宮血寧組、5.功血飲低劑量、6.功血 飲中劑量、7.功血飲高劑量；圖11功血飲對功血模型大鼠子宮ER和I3R表達(dá)的影響；圖12子宮組織學(xué)檢查A未孕空白、B空白、C模型、D宮血寧、E功血飲低劑量、F功 血飲中劑量、G功血飲高劑量。
五具體實(shí)施例方式本專利所用白芍(Radix Paeoniae Alba)為毛茛科植物芍藥Paeonia Iactiflora Pall.的干燥根,熟地黃(Radix Rehmanniae Pra印arata)為玄參科植物地黃Rehmannia glutinosa Libosch.的干燥塊根的炮制加工品，墨旱蓮(Herba Ecliptae)為菊科植物 鱧腸Eclipta prostrata L.的干燥地上部分，女貞子(Fructus Ligustri Lucidi)為木 樨科植物女貞Ligustrum lucidum Ait.的干燥成熟果實(shí)，續(xù)斷(Radix Dipsaci)為川續(xù)斷科植物川續(xù)斷Dipsacus asperoides C.Y.Cheng et Τ· Μ· Ai的干燥根，阿膠(Colla Corii Asini)為馬科動物驢(Equus asinus L.)的皮經(jīng)煎熬、濃縮而成的固體膠，三七 (Radix et Rhizoma Notoginseng)為五力口 禾斗植物三七 Panax notoginseng (Burk.) F. H. Chen的干燥根及根莖，黃芪(Radix Astragali)為為豆科植物蒙古黃芪Astragalus membranaceus(Fisch. )Bge. Var. mongholicus(Bge. )Hsiao 或膜英黃苗 Astragalus membranaceus (Fisch. ) Bge.的干燥根。地骨皮(Cortex Lycii)為爺禾斗植物枸杞Lycium chinense Mill, I2 H +5 Lycium barbarum L.白勺〒 卞艮&， ·蟲票蟲肖(Endoconcha Sepiae)為烏賊科動物無針烏賊S印iella maindroni de Rochebrune或金烏賊S印ia esculenta Hoyle的干燥內(nèi)殼。 以下結(jié)合實(shí)例對本發(fā)明作進(jìn)一步的描述，實(shí)施例僅用于對本發(fā)明進(jìn)行說明，并不 構(gòu)成對權(quán)利要求范圍的限制，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以想到的其他替代手段，均在本發(fā)明權(quán)利 要求范圍內(nèi)。實(shí)施例1治療肝腎陰虛型無排卵型功血的中藥，由下列重量份配比的原料藥所制成白芍190份(熟)地黃270份墨旱蓮190份女貞子190份續(xù)斷 190份阿膠30份三七 190份黃芪 430份地骨皮190份海螵蛸270份實(shí)施例2治療肝腎陰虛型無排卵型功血的中藥，由下列重量份配比的原料藥所制成白芍290份 (熟)地黃370份墨旱蓮290份女貞子290份 續(xù)斷 290份阿膠 130份三七290份 黃芪 530份地骨皮290份海螵蛸370份實(shí)施例3治療肝腎陰虛型無排卵型功血的中藥，由下列重量份配比的原料藥所制成白芍238.lg (熟)地黃3IL5g 墨旱蓮 238· Ig女貞子238. Ig 續(xù)斷 238. Ig 阿膠 79. 4g三七238. Ig 黃芪 476. 2g 地骨皮 238. Ig海螵蛸317. 5g依據(jù)實(shí)施例1 3所列舉的配方量，取白芍、墨旱蓮、女貞子、續(xù)斷、三七、黃芪六 味，加飲片總重量18倍量的70%乙醇分三次回流提取(三次用量分別為總量的40%、 30%、30% )，每次2小時，合并提取液，濾過，濾液減壓回收乙醇，濃縮至無醇味。上述 藥渣與熟地黃、地骨皮等合并，加飲片總量25倍量的水分二次煎煮(二次用量分別為 總量的60%、40% )，每次1.5小時，合并水煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.05 1. 08 (50°C 60°C )，冷卻，加乙醇至含醇量達(dá)50 %，攪勻，放置48小時，濾過，濾液回收 乙醇，與上述醇提濃縮液合并，加入烊化后的阿膠，濃縮至相對密度1. 10 1. 15(50°C 600C )，在0. 080 0. 085Mpa、65 70°C真空干燥成干浸膏粉。取浸膏粉，加適量糖粉、糊 精、微晶纖維素混勻進(jìn)行濕法制粒，干燥，即得顆粒1000g。
實(shí)施例4藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)1功血飲對小鼠出血時間的影響1. 1組別與劑量取健康雄性ICR小鼠60只，體重19 22g，隨機(jī)均分為5組(1)空白對照組 NS10mL/kg ； (2)宮血寧組0. 26g/kg ； (3)功血飲 I 組:llg/kg ； (4)功血飲 II 組:22g/kg ； (5)功血飲III組44g/kg。各組小鼠 每日灌胃給藥1次，連續(xù)給藥5日。給藥容積均為20mL/
kg ο1. 2 方法末次給藥15min后，將小鼠固定，以毫米尺測量鼠尾長度并標(biāo)記，然后分別以利剪 在小鼠尾尖3mm處橫斷，待血液自行溢出，開始計(jì)時，每隔30s用濾紙吸去血滴1次，直至血 液自然停止(濾紙吸時無血)為止，即為出血時間。1. 3 結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示功血飲ll、22、44g/kg三個劑量組出血時間明顯性縮短，與空白對 照組比較有差異具有顯著性意義(P < 0.01)，宮血寧膠囊組與空白對照組比較也有顯著性 差異(P < 0.01)。見表2和圖1。表1功血飲對小鼠斷尾后出血時間的影響(XiS ) η = 12 *P < 0. 05，**P < 0. 01與空白對照組比較2功血飲對小鼠凝血時間的影響2. 1組別與劑量取健康雄性ICR小鼠60只，體重19 22g，隨機(jī)均分為5組(1)空白對照組 NS10mL/kg ； (2)宮血寧組0. 26g/kg ； (3)功血飲 I 組:llg/kg ； (4)功血飲 II 組:22g/kg ； (5)功血飲III組44g/kg。各組小鼠每日灌胃給藥1次，連續(xù)給藥5日。給藥容積均為20mL/
kg ο2.2 方法末次給藥30min后，用內(nèi)徑10mm，長IOcm毛細(xì)玻管自眼內(nèi)眥插入，用毛細(xì)管法和玻 片法測定凝血時間(S)。2. 3 結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示功血飲ll、22、44g/kg三個劑量組小鼠凝血時間縮短，與空白對照 組比較有差異具有顯著性意義(P < 0. 05，P <0. 01)。見表2和圖2。表2功血飲對小鼠凝血時間的影響(XiS ) (η = 12)
*Ρ < 0. 05，**Ρ < 0. 01與空白對照組組比較3功血飲對小鼠耳腫脹的影響3. 1組別與劑量取健康雄性ICR小鼠60只，雄性，體重20 24g，隨機(jī)均分為6組(1)空白對照 組=NS 20mL/kg ； (2)模型組 NS 20mL/kg ； (3)宮血寧組0. 26g/kg ； (4)功血飲 I 組=Ilg/ kg ； (5)功血飲II組:22g/kg ； (6)功血飲III組44g/kg。各組小鼠每日灌胃給藥1次，連續(xù) 給藥7日。給藥容積均為20mL/kg。3. 2 方法末次給藥40min后，用二甲苯0. 05mL涂于小鼠右耳兩側(cè)；在致炎Ih后處死小鼠， 剪下左右兩耳，用打孔器(直徑8mm)分別在同一部位取下圓耳片，電子天平稱重，計(jì)算耳殼 重量，并比較各組小鼠耳殼腫脹度(右耳殼重_左耳殼重)。腫脹百分率(％ )=[腫脹度/右耳殼量]X 100%腫脹抑制百分率(％ )=[給藥組小鼠耳殼腫脹度/模型對照組小鼠耳殼腫脹 度]X100%3. 3 結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示功血飲ll、22、44g/kg三個劑量能明顯減輕小鼠耳殼腫脹度及腫 脹率，與空白對照組比較差異顯著(P < 0. 05、0. 01)，表明功血飲可對抗二甲苯所致的炎癥 反應(yīng)，具有抗炎作用。見表3和圖3。表3功血飲對二甲苯致小鼠耳腫脹的影響(XiS ) η = 10 ΔΔΡ < 0. 01與空白對照組比較*Ρ < 0. 05，**Ρ < 0. 01 與模型組比較
4功血飲對HAC致小鼠醋酸扭體和腹腔毛細(xì)血管通透性的影響4. 1組別與劑量取健康雄性ICR小鼠50只，雌雄各半，體重20 24g，隨機(jī)均分為5組(1)空白對照組=NS 20mL/kg ； (2)宮血寧組0. 26g/kg ； (3)功血飲I組:llg/kg ； (4)功血飲II組 22g/kg ； (5)功血飲III組44g/kg。各組小鼠每日灌胃給藥1次，連續(xù)給藥7日。給藥容積 均為 20mL/kg。4. 2 方法末次給藥40min后，腹腔注射0. 6%冰醋酸0. 2mL/只，觀察注射冰醋酸后20min內(nèi) 各組小鼠出現(xiàn)的扭體反應(yīng)動物數(shù)和扭體反應(yīng)次數(shù)。于注入HAC后30min尾靜脈注射0. 5% 伊文思藍(lán)0. lmL/10g,再20min后脫頸椎處死小鼠，開腹用5mL生理鹽水分次沖洗腹腔，用 注射器抽出腹腔洗液約4. 5mL。3000rpm離心5min，取上清于590nm處測定紫外吸收度值 (A)04. 3 結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示4. 3. 1功血飲ll、22、44g/kg三個劑量可明顯減少乙酸所致小鼠的扭體反應(yīng)次數(shù)， 與空白對照組比較差異顯著(P < 0. 05,0. 01)。表明功血飲能對抗乙酸所致小鼠的疼痛性 反應(yīng)，具有鎮(zhèn)痛作用。見表4和圖4。表4功血飲對醋酸刺激致小鼠疼痛的影響(扭體法)(f ±S)

*P < 0. 05，**P < 0. 01與空白對照組比較4. 3. 2功血飲ll、22、44g/kg三個劑量組對乙酸致小鼠毛細(xì)血管通透性增加有抑 制作用，與空白對照組比較具有顯著性差異(P < 0. 05,0. 01)，表明功血飲具有較明顯的抗 炎作用。見表5和圖5。表5功血飲對HAC致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增高的影響(叉士S) *P < 0. 05，**P < 0. 01與空白對照組比較注陽性藥和大劑量各有一只小鼠未能打進(jìn)依文思藍(lán)，故棄去；另空白對照組、小、中、大劑量各有一只小鼠開腹沖洗有出血，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，故棄去。5功血飲對藥物不完全流產(chǎn)大鼠子宮出血的影響5. 1藥物不完全流產(chǎn)大鼠模型的復(fù)制取健康實(shí)驗(yàn)大鼠，將大鼠按雌雄2 1的比例合籠，次日晨檢查雌鼠陰道栓和陰道 涂片，發(fā)現(xiàn)陰栓或精子為懷孕第1天，共篩選出58只妊娠大鼠。取50只妊娠大鼠于懷孕第 7天上午8時灌胃米非司酮溶液lmL/100g，下午8時灌胃米索前列醇溶液lmL/100g，造成早 孕大鼠不完全流產(chǎn)模型。
5. 2 分組取妊娠大鼠58只，未造成流產(chǎn)的8只為正常對照組，給予等體積的生理鹽水，其余 50只隨進(jìn)分為5組，每組10只，分別為⑴模型組=NS 10mL/kg ； (2)宮血寧組0. 13g/kg ； (3)功血飲I組5. 5g/kg ； (4)功血飲II組:llg/kg ； (5)功血飲III組22g/kg。另取10只 未孕大鼠，設(shè)立未孕空白對照組。各組大鼠每日灌胃給藥2次，連續(xù)給藥7日。給藥容積均 為 10mL/kg。5. 3檢測指標(biāo)及方法5. 3.1 體重大鼠分組后，每天稱取1次體重。5. 3. 2大鼠陰道出血量妊娠大鼠給予米索前列醇(18:00)后，于陰道內(nèi)置入定量消毒棉球1個(棉球重 70 80mg)。次日分別于8:00和18:00將棉球取出，放入塑料袋中密閉冷藏保存；同時置 換一個新棉球于陰道內(nèi)，連續(xù)至第14天。取大鼠靜脈血0. 02mL，加入濃度為50g/L的NaOH溶液4mL中，混勻待用。將收集 的每鼠子宮出血棉球置于燒杯內(nèi)，根據(jù)出血量的情況加適量50g/L NaOH浸泡擠壓搓洗棉球 血漬，浸洗后的溶液倒入另一燒杯內(nèi)保存。再加適量50g/L NaOH浸泡棉球，擠壓搓洗血漬， 倒入保存容器。根據(jù)棉球血漬洗脫情況，決定是否再浸洗1 2次。將先后所有浸提液混 勻，記錄所用50g/L NaOH總量，取5mL浸提液過濾，分別將①已過濾的浸提液、②大鼠靜脈 血的NaOH溶液各4mL，③以50g/L NaOH為空白對照，以546nm的波長記錄吸光度(OD)值。陰道出血量(mL)=(尾靜脈血量0. 02mL) X (子宮浸提液OD值XV2)/(尾靜脈 血OD值XVI)其中Vl =稀釋尾靜脈血所用的NaOH溶液的量(4mL)V2 =浸提子宮血所用NaOH溶液量5. 3. 3血清性激素水平末次給藥后，大鼠進(jìn)行眼眶取血2mL，分離血清，采用放免法測定雌二醇(E2)、孕 激素(P)。未孕空白組作大鼠陰道細(xì)胞涂片檢查，選取處于動情間期的大鼠進(jìn)行眼眶取血。5. 3. 4 采用 RT-PCR 法測定子宮 ERmRNA、PRmRNA 含量5. 3. 4. 1提取RNA 動物取血后，迅速取出子宮。采用異硫氰酸胍-酚_氯仿抽提 方法提取組織的RNA，使用紫外可見分光儀測定樣品中260nm、280nm吸收峰的OD值，鑒定 RNA的純度和含量。將提取的RNA加入20 μ L DEPC水稀釋，放_70°C冰箱。5. 3. 4. 2逆轉(zhuǎn)錄將0. 5mL DEPC水處理過的無菌離心管中依次加入5Xbuffer， Enzyme mix,oligo dT, Random Primer，RNA，H20 構(gòu)成整個 20 μ L 反應(yīng)體系，混勻稍離心 5S，37°C水浴15min變性，以解開總RNA的二級結(jié)構(gòu)，88°C 2min滅活逆轉(zhuǎn)錄酶，中止反應(yīng)，迅速 冰種冷卻2min，以防cDNA結(jié)合成雙鏈，反轉(zhuǎn)錄后的cDNA于_20°C下保存?zhèn)溆谩?. 3. 4. 3PCR 待檢測基因ERmRNA引物由南京大學(xué)生科院協(xié)助設(shè)計(jì)，英駿生物技術(shù) 有限公司提供產(chǎn)品。ERa上游引物序列為5' > TCA TGC AGT CTG CCA AGG AG < 3'， 下游引物序列為5' > TGC CAG GTT GGT CAA TAA GC < 3'，長度為527bp，變性溫度為 94°C，退火溫度61 °C，30個循環(huán)。PRa上游引物序列為5' > CAT GTC AGT GGA CAG ATG CT < 3'，下游引物序列為5' > ACT TCA GAC ATC ATT TCC GG < 3'，長度為 428bp，變 性溫度為94°C，退火溫度59°C，30個循環(huán)。選擇在大多數(shù)細(xì)胞內(nèi)均為高表達(dá)的β-actin作 為內(nèi)對照，其上游引物為5' >CCT AAG GCC AAC CGT GAA AAG < 3'，下游引物為5' > TCT TCA TGC TGCTAG GAG CCA < 3‘。
5.3.4. 4PCR產(chǎn)物檢測采用瓊脂糖凝膠電泳方法，取mRNA RT-PCR反應(yīng)產(chǎn)物 17 μ 1，以10 X TAE為電泳緩沖液，在瓊脂糖凝膠上電泳約15min(電壓120V)，電泳時每 條帶代表RT-PCR產(chǎn)物的結(jié)果，3條帶為1組，每個樣本重復(fù)電泳3次。放入BIO-RAD公司產(chǎn) 的GelDoclOOO型凝膠圖像系統(tǒng)分析儀，紫外燈下顯影，數(shù)碼相機(jī)拍照，使用BandScan分析 軟件測得電泳圖譜上每條基因條帶的光密度值，分別計(jì)算每只大鼠ERmRNA或者PRmRNA與 β -actin mRNA產(chǎn)物的光密度比值，再比較各組間ERmRNA/ β -actin值和PRmRNA/ β -actin 值的大小，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。5. 3. 5臟器系數(shù)于末次給藥后次日斷頭處死大鼠，迅速摘取子宮、卵巢、腎上腺、脾臟及胸腺并稱 重，計(jì)算其臟器系數(shù)(mg/g)。臟器系數(shù)=臟器重量(mg)/大鼠體重(g)5. 3. 6子宮的組織學(xué)檢查于末次給藥后次日斷頭處死大鼠，迅速摘取子宮、卵巢，稱重后用福爾馬林固定、 石蠟包埋，切片，HE染色。光學(xué)顯微鏡觀察下列指標(biāo)子宮上皮層、固有層、肌層的病理變化。病理觀察指標(biāo)為①子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞形 狀、有無變性壞死；②固有層腺體數(shù)目有無減少，纖維組織有無增生；③肌層有無炎癥，血 管有無增生等病變。根據(jù)病變由輕到重的程度分別記為0-4分，積分標(biāo)準(zhǔn)為無病變記為0 分；極輕度記為1分，輕度記2分；中度病變記3分；重度病變記4分。肌層血管增生的程 度也由輕到重記為0-4分。累加所有分?jǐn)?shù)，計(jì)算每組動物的均分值。5. 4 結(jié)果5. 4. 1功血飲對藥物不完全流產(chǎn)大鼠體重的影響由表6和圖6可知各組大鼠體重呈上升趨勢，懷孕空白大鼠體重增加較快，與未 孕空白比較有顯著性差異(P < 0.05)。其他各給藥組與模型組比較無顯著性差異(P > 0. 05)。表6功血飲對藥物不完全流產(chǎn)大鼠體重的影響(X士s)
士15*p < 0. 05與未孕空白比較5. 4. 2功血飲對藥物不完全流產(chǎn)大鼠陰道出血量的影響由表7和圖7可知模型組較空白對照組大鼠陰道出血量明顯增多，與空白對照組 比較有顯著性差異(P < 0.01)，說明模型復(fù)制成功；功血飲各劑量組均能顯著性減少模型 大鼠子宮的出血量，與模型組比較有非常顯著性差異(P<0.01)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明功血飲 能有效抑制不完全流產(chǎn)模型大鼠的陰道出血。表7功血飲對功血模型大鼠陰道出血量的影響(X±s) AAP < 0. 01與空白對照組比較，**P < 0. 01與模型組比較5. 4. 3功血飲對功血模型大鼠血清性激素的影響結(jié)果顯示模型組較空白對照組大鼠雌激素和孕激素含量下降，表明模型組大鼠 血清中雌激素和孕激素降低；功血顆粒各劑量組均能升高模型大鼠血清中雌二醇的含量， 且功血顆粒高劑量與模型組比較有非常顯著性差異(P<0.01)；功血顆粒各劑量組對孕激 素的變化是隨著劑量的增加而下降，但沒有顯著性差異。表8 功血飲對功血模型大鼠血清性激素的影響(叉士S )
11 5. 4. 4功血飲對功血模型大鼠子宮ER和冊表達(dá)的影響結(jié)果顯示模型組大鼠子宮ER mRNA和冊mRNA的表達(dá)下降，與空白對照組比較有 顯著性的差異(P<0.01)；功血顆粒各劑量組均能降低ER mRNA和ra mRNA的表達(dá)，功血 顆粒ll、22g/kg劑量組與模型組比較有顯著性的差異(P < 0. 01)。表9 功血飲對功血模型大鼠子宮ER和冊表達(dá)的影響(X±s) < 0. 01與未孕空白對照組比較，AAP < 0. 01與空白對照組比較，< 0. 01 與模型組比較5. 4. 5功血飲對功血模型大鼠臟器系數(shù)的影響
由表10可知空白對照組大鼠較未孕空白組子宮重量明顯上升，與未孕空白比較 有顯著性差異(P<0.01)；模型組和空白對照組比較，子宮臟器系數(shù)下降，說明模型組流 產(chǎn)成功，模型復(fù)制成功，與空白對照組比較有顯著性差異(P<0.01)；各給藥組與模型組比 較，臟器系數(shù)由上升的趨勢，但無顯著性差異(P > 0. 05)。表10功血飲對功血模型大鼠臟器系數(shù)的影響(X士S ) AAP < 0. 01與空白對照組比較，**P < 0. 01與模型組比較5. 4. 6子宮的組織學(xué)檢查未孕組子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞多數(shù)為單層立方，固有層腺體上皮無變性、壞死，亦無 過度增生，間質(zhì)無明顯血管擴(kuò)張充血、纖維結(jié)締組織增生和炎細(xì)胞浸潤，肌層、漿膜無病變?？瞻捉M子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞多數(shù)為單層低柱狀，固有層腺體上皮無變性、壞死，但 可見數(shù)量較未孕組增多，間質(zhì)無明顯血管擴(kuò)張充血、纖維結(jié)締組織增生和炎細(xì)胞浸潤，肌 層、漿膜無病變。模型組子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞多數(shù)為單層低柱狀、個別內(nèi)膜上皮細(xì)胞輕度變性，固有 層腺體上皮無變性、壞死，但可見數(shù)量較未孕組增多、與空白組無明顯差異，間質(zhì)血管擴(kuò)張 充血，纖維結(jié)締組織增生明顯，并可見大量炎細(xì)胞浸潤(中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞為主)，有 的已浸潤至腺體上皮細(xì)胞，肌層、漿膜無病變。功血顆粒低劑量組子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞多數(shù)為單層低柱狀，固有層腺體上皮無變 性、壞死，但可見數(shù)量較未孕組增多、與空白組相比有所增多，間質(zhì)血管擴(kuò)張充血，纖維結(jié)締 組織增生和炎細(xì)胞浸潤程度的均輕于模型組，肌層、漿膜無病變。功血顆粒中劑量組組織學(xué)改變基本同低劑量組。功血顆粒高劑量組組織學(xué)改變基本同低劑量組。陽性藥(宮血寧)組組織學(xué)改變基本同低劑量組，但間質(zhì)纖維結(jié)締組織增生和炎 細(xì)胞浸潤程度略重于用藥組。本法復(fù)制的子宮病變主要表現(xiàn)為子宮內(nèi)膜固有層腺體數(shù)目增多、間質(zhì)血管擴(kuò)張充
13血、大量炎細(xì)胞浸潤(中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞為主)、纖維結(jié)締組織增生。功血顆粒應(yīng)用后 固有層腺體數(shù)目有所增多，間質(zhì)纖維結(jié)締組織增生和炎細(xì)胞浸潤程度有所改善，但各劑量 之間無明顯差異，用藥組較宮血寧組略有改善，而以上各組與模型組相比差異顯著。
權(quán)利要求
一種用于治療肝腎陰虛型無排卵型功血的藥物，其特征在于包括下列重量份配比的原料藥所制成的藥劑白芍190-290份；地黃270-370份；墨旱蓮190-290份；女貞子190-290份；續(xù)斷190-290份；阿膠30-130份；三七190-290份；黃芪430-530份；地骨皮190-290份；海螵蛸270-370份。
2.一種制備權(quán)利要求1所述的用于治療肝腎陰虛型無排卵型功血藥物的方法，其特征 在于制備步驟如下a.按照上述重量份數(shù)，取白芍、墨旱蓮、女貞子、續(xù)斷、三七和黃芪加乙醇回流提取，濾 過，將醇提液減壓回收乙醇后濃縮至無醇味，得醇提濃縮液和藥渣備用；b.將上述藥渣和熟地黃、地骨皮和海螵蛸合并后用水煎煮，煎液過濾，濾液減壓濃縮 后加乙醇，攪勻、放置后濾過，濾液回收乙醇，得水提醇沉濃縮液，與步驟a的醇提濃縮液合 并，加入烊化后的阿膠，濃縮，真空干燥成干浸膏粉即為藥物活性成分。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用于治療肝腎陰虛型無排卵型功血藥物的方法，其特征在于 步驟a中所加的乙醇量是飲片總重量的12-18倍，乙醇體積濃度為60-80%，分三次回流提 取，三次用量分別為總用量的40 %、30 %和30 %，每次提取1-2小時。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用于治療肝腎陰虛型無排卵型功血藥物的方法，其特征在于 步驟b中所加水的量是飲片總重量的15-25倍，分二次煎煮，二次用量分別為總用量的60% 和40%，每次1-2小時，煎液過濾后濾液減壓濃縮至相對密度為1.05 1.08，在501 60°C時測定，濃縮液中加乙醇至醇含量不超過60% vt，攪勻，放置48小時，濾過，濾液回 收乙醇與步驟a醇提濃縮液合并，加入烊化后的阿膠，濃縮至相對密度1. 10 1. 15，在 50°C 60°C時測定，在0. 080 0. 085Mpa、65 70°C真空干燥成干浸膏粉。
5.權(quán)利要求1所述的中藥在制備治療肝腎陰虛型無排卵型功血藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
用于治療肝腎陰虛型無排卵型功血的藥物及其制備方法和應(yīng)用，包括下列重量份配比的原料藥所制成的藥劑白芍190-290份；地黃270-370份；墨旱蓮190-290份；女貞子190-290份；續(xù)斷190-290份；阿膠30-130份；三七190-290份；黃芪430-530份；地骨皮190-290份；海螵蛸270-370份。按照上述重量份數(shù)，取白芍、墨旱蓮、女貞子、續(xù)斷、三七和黃芪加乙醇回流提取，濾過，將醇提液減壓回收乙醇后濃縮至無醇味，得醇提濃縮液和藥渣備用；將上述藥渣和熟地黃、地骨皮和海螵蛸合并后用水煎煮，煎液過濾，濾液減壓濃縮后加乙醇，攪勻、放置后濾過，濾液回收乙醇，得水提醇沉濃縮液，與醇提濃縮液合并，加入烊化后的阿膠，濃縮，真空干燥成干浸膏粉。
文檔編號A61K35/56GK101856431SQ20101019024
公開日2010年10月13日 申請日期2010年6月2日 優(yōu)先權(quán)日2010年6月2日
發(fā)明者李爭艷, 李林, 李莉, 毛春芹, 許惠琴, 談瑄忠, 陸兔林, 陳霞 申請人:南京中醫(yī)藥大學(xué);南京市中醫(yī)院