專利名稱：：微波促進(jìn)固相合成苦瓜mc-jj0103多肽類似物及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及MC-JJ0103多肽類似物及其微波促進(jìn)固相合成方法。
背景技術(shù)：
：糖尿病是當(dāng)今危害人類健康的重要疾病，目前全世界約有5%-7%的人受糖尿病困擾，被認(rèn)為是繼心腦血管疾病、惡性腫瘤之后，導(dǎo)致人類傷殘、死亡的第三大殺手。糖尿病分為I型和II型，I型糖尿病是一種自身免疫疾病，患者的存活需要注射胰島素。II型糖尿病占眾多糖尿病患者總數(shù)的95%左右。II型糖尿病的原因是胰島細(xì)胞代謝發(fā)生障礙，胰島素分泌不足，或者產(chǎn)生胰島素抵抗，是以胰島素抵抗為主伴胰島素分泌相對不足，或者以胰島素分泌相對不足為主伴胰島素抵抗導(dǎo)致的代謝性疾病。胰島素分泌不足，或者產(chǎn)生胰島素抵抗都可造成血液中葡萄糖過量，當(dāng)血糖含量超過腎閾時，葡萄糖就轉(zhuǎn)移到尿中排出，從而產(chǎn)生葡萄糖尿。目前臨床應(yīng)用的幾種藥物均不能夠治愈糖尿病，主要是通過不同的作用機(jī)制，降低患者的血糖水平。糖尿病患者必須終生服藥，藥物本身對人體的毒副作用同樣威脅著糖尿病人的健康。在中國，目前使用藥物能夠控制血糖達(dá)到正常標(biāo)準(zhǔn)的，還不到糖尿病患者總數(shù)的20%(鄒大進(jìn)，2型糖尿病的禍?zhǔn)滓灰葝u素抵抗，大眾醫(yī)學(xué)，2002，(6):17)，直接導(dǎo)致了許多糖尿病患者的并發(fā)癥發(fā)生早，進(jìn)展快。顯然，除了篩選更加安全有效的新型藥物之夕卜，尋找其它的輔助治療手段有效控制血糖水平，對于提高糖尿病人的健康水平同樣是十分重要的?？喙?Momordicacharantia)是一種人類有長期安全食用歷史的蔬菜。近二十年來，人們在苦瓜的果實(shí)中發(fā)現(xiàn)了許多具有降血糖活性的成分，其中的多肽成分逐漸得到人們的認(rèn)識并得到一些運(yùn)用，但是由于苦瓜多肽的提取分離過于復(fù)雜，成本較高又難于得到純的多肽，現(xiàn)在我們運(yùn)用現(xiàn)代多肽合成技術(shù)能夠解決這一問題。多肽可以通過基因工程的方法或者化學(xué)合成的方法得到?；蚬こ痰姆椒ㄔ讷@取長肽(氨基酸殘基長度大于50)或蛋白質(zhì)上比化學(xué)方法有優(yōu)勢，但是多肽的化學(xué)合成方法尤其是在固相合成策略出現(xiàn)后，在制備氨基酸殘基長度小于40的多肽或小肽上有基因工程方法難以比擬的靈活性、多樣性和高效性等。1963年Merrifield創(chuàng)立并開發(fā)了固相合成多肽的方法。固相多肽合成一般有兩種策略即Boc/Bzl正交保護(hù)固相合成策略和Fmoc/tBu正交保護(hù)固相合成策略，Merrifield創(chuàng)立的固相合成法即為Boc/Bzl正交保護(hù)固相合成策略。但是，Boc/Bzl正交保護(hù)固相合成策略中存在一些缺點(diǎn)，如副反應(yīng)多、條件苛刻以及在延長肽鏈的過程中多肽鏈會從固相上丟失等。而隨后出現(xiàn)的Fmoc/tBu正交保護(hù)固相合成策略則反應(yīng)條件溫和的多。當(dāng)近年來微波技術(shù)運(yùn)用于多肽的固相合成中后，使多肽的合成技術(shù)產(chǎn)生了一個飛躍。微波促進(jìn)化學(xué)反應(yīng)是由于其使極性分子在微波場中快速旋轉(zhuǎn)，使得一些反應(yīng)速率較常規(guī)加熱方法快10到1000倍，而且產(chǎn)率大大提高。1986年Gedye等人首次報道了將微波應(yīng)用于有機(jī)合成中，微波可以促進(jìn)許多化學(xué)反應(yīng)，如Diels-Alder反應(yīng)，皂化反應(yīng)等，可以顯著地加快反應(yīng)速率并提高收率。在1992年，Hui-mingYu等首先報道了將微波應(yīng)用于多肽固相合成領(lǐng)域中，他們完成了?；d體蛋白片斷十肽(acylcarrierprotein,ACP6574)的合成。如何高效的合成長肽，在世界上仍然是一個挑戰(zhàn)，因?yàn)槎嚯碾S著肽鏈的增加，其合成難度成倍增加。用傳統(tǒng)的固相方法合成長肽，其收率往往很低雜質(zhì)較多純化困難，從而從實(shí)用的角度上說失去了合成的意義。其次合成周期長，在中間不出現(xiàn)困難肽序的情況下10肽一般需要近一個星期時間才能完成合成周期，如果出現(xiàn)困難肽序，往往就無法合成得到目標(biāo)多肽。而使用微波促進(jìn)固相合成多肽，可以克服困難肽序，合成傳統(tǒng)固相方法無法得到的多肽，而且合成時間大大縮短，且顯著提高多肽粗品純度及收率，使得產(chǎn)品的純化大大方便，只要經(jīng)過一次制備型HPLC就能得到純度較高的產(chǎn)品；此外還可以非常方便的用D型氨基酸及非天然氨基酸等對多肽進(jìn)行定點(diǎn)修飾，去尋找活性更高、生物半衰期更長的多肽，這更是基因工程技術(shù)無法做到的。因此，我們在苦瓜降血糖(MC-JJ0103)多肽類似物的合成中采用此種方法快速高效的合成得到MC-JJ0103系列類似物。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明有兩個目的第一個目的是從具降血糖活性的藥食同源植物苦瓜中得到多肽進(jìn)行修飾得到降血糖活性更高的MC-JJ0103多肽類似物。本發(fā)明的第二個目的是提供了MC-JJ0103衍生物的固相制備方法，本發(fā)明采用微波促進(jìn)Fmoc/tBu正交保護(hù)固相合成策略高效快速地合成得到系列MC-JJ0103類似物。其特征在于采用微波促進(jìn)Fmoc/tBu正交保護(hù)固相合成策略，于固相載體上先合成得到載有第一個Fmoc保護(hù)氨基酸的樹脂，茚三酮法檢測為陰性后脫去Fmoc保護(hù)基得到載有第一個氨基酸殘基的樹脂；再進(jìn)入下一個偶聯(lián)循環(huán)，按照相應(yīng)的肽序用不同的保護(hù)氨基酸重復(fù)偶聯(lián)和脫保護(hù)的步驟，依次延長所需的氨基酸序列，合成得到載有相應(yīng)多肽的樹脂，最后用裂解劑將多肽從樹脂上切割下來得到多肽粗品。粗品經(jīng)制備級高效液相色譜純化，凍干得多肽純品。載有第一個Fmoc保護(hù)氨基酸的樹脂的制備方法，其特征是通過在微波照射條件下Fmoc保護(hù)氨基酸先經(jīng)活化劑活化后再與固相載體偶合得到，反應(yīng)中加入1-羥基_苯并三氮唑(H0BT)或其衍生物抑制消旋，并使用有機(jī)堿中和反應(yīng)的酸性。載有第一個Fmoc保護(hù)氨基酸的樹脂所使用的固相載體是Rink樹脂、Wang樹脂或2-氯三苯甲基氯樹脂?；罨瘎┦嵌h(huán)己基碳二亞胺(DCC)、N，N’-二異丙基碳二亞胺(DIC)、N,N"-羰基二咪唑(⑶I)、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(EDC.HCl)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N，N，N’，N’-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU)、苯并三氮唑-N，N，N’，N’-四甲基脲六氟磷酸酯(HBTU)或使用的1-羥基-苯并三氮唑(H0BT)衍生物為N-羥基琥珀酰亞胺(H0SU)、1_羥基-7-偶氮苯并三氮唑(H0AT)或3-羥基-1，2，3-苯并三嗪_4(3H)-酮(H00BT)。有機(jī)堿為三乙胺(TEA)、N-甲基嗎啉(NMM)或二異丙基乙胺(DIEA)；微波促進(jìn)條件是微波頻率2450MHz，反應(yīng)溫度20100°C，反應(yīng)時間為515min。Fmoc保護(hù)基的脫除是通過使用含有0.lmol.L—1的1_羥基-苯并三氮唑(H0BT)的六氫吡啶溶液在微波促進(jìn)下反應(yīng)，選用二甲基甲酰胺(DMF)、二甲亞砜(DMS0)、或N-甲基吡咯烷酮(NMP)為反應(yīng)溶劑。微波促進(jìn)條件是微波頻率2450MHz，反應(yīng)溫度20100°C，反應(yīng)時間為1lOmin。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于1.提出的一種MC-JJ0103類似物可以在保留降糖活性的基礎(chǔ)上，提高M(jìn)C-JJ0103的穩(wěn)定性，延長作用時間。2.微波促進(jìn)固相合成MC-JJ0103類似物大大的提高了偶合反應(yīng)速率，常規(guī)固相合成方法充分偶合一個氨基酸到樹脂上去，往往需要2小時到20小時不等，甚至更長。而微波促進(jìn)則平均只需要10分鐘左右；常規(guī)固相合成方法脫Fmoc保護(hù)基，往往需要30分鐘到1小時不等，而微波促進(jìn)則平均只需要5分鐘左右，這極大的提高了多肽合成的效率，縮短了合成周期。3.微波促進(jìn)固相合成MC-JJ0103類似物合成得到的粗品的純度大于85%，較常規(guī)固相合成方法大大提高，這方便了后續(xù)的純化工作，只需要經(jīng)過一次制備液相純化，凍干即可得到目標(biāo)純品。4.微波促進(jìn)固相方法合成MC-JJ0103類似物，其成本低，由于偶合效率較高，所需要保護(hù)氨基酸平均只需要2倍過量，較常規(guī)固相合成方法需要4到5倍過量大為降低。5.微波促進(jìn)固相合成MC-JJ0103類似物方法易于實(shí)現(xiàn)自動化、大規(guī)?；?，這使其更適合工業(yè)化生產(chǎn)。因此用本發(fā)明提供的微波促進(jìn)固相合成技術(shù)制備的MC-JJ0103多肽類似物，收率高、合成周期短、粗品純化容易，生產(chǎn)成本低、易于工業(yè)自動化生產(chǎn)。制備得到的MC-JJ0103多肽類似物，適合作為治療糖尿病藥物的活性成分。具體實(shí)施例方式在本說明書全文中采用以下縮寫Et3N三乙胺；NMM=N-甲基嗎啉；DIEA:N，N，-二異丙基乙胺；DMF二甲基甲酰胺；DMSO二甲亞砜；DCM二氯甲烷；Fmoc:N_9芴甲氧羰基；DIC=N,N’-二異丙基碳二亞胺；CDI:N，N，-羰基二咪唑；DMAP:4_二甲氨基吡啶；HOSU:N_羥基琥珀酰亞胺；EDC.HCl1-乙基_(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽；HATU2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N，N，，N，-四甲基脲六氟磷酸酯；HBTU苯并三氮唑-N，N，N，，N，-四甲基脲六氟磷酸酯；HCTU:6_氯苯并三氮唑-1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸酯；HOAT羥基-7-偶氮苯并三氮唑；HOBT羥基-苯并三氮唑；PyBOP六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷；HPLC高效液相色譜；ESI-MS電噴霧質(zhì)譜；Gly甘氨酸；Ser絲氨酸；Ala丙氨酸；Thr蘇氨酸；Val纈氨酸；Ile異亮氨酸；Leu亮氨酸；Tyr酪氨酸；Phe苯丙氨酸；His組氨酸；Pro脯氨酸；Asp天門冬氨酸；Met蛋氨酸；Glu谷氨酸；Trp色氨酸；Lys賴氨酸；Arg精氨酸。Asn天冬酰胺；Gln谷氨酰胺。本發(fā)明是通過下列實(shí)施列來進(jìn)行說明的，但這些實(shí)施例不做任何限制本發(fā)明的解釋。實(shí)施例1Gly-Pro-Ala-Ala-Tyr-Ser-Ile-Ala-Ala-Ser(SEQ.IDNO2)的微波促進(jìn)固相合成(1)樹脂的溶脹稱取Fmoc-rinkamide-MBHAResin50mg(取代量0.4mmol/g)，經(jīng)7mLDCM溶脹30min，抽濾去DCM，再用10mLNMP溶脹30min，最后分別用NMP，DCM，NMP7mL沖洗干凈。(2)微波促進(jìn)Fmoc保護(hù)基的脫除將溶脹好的樹脂放入反應(yīng)器中，加入7mL含0.1MH0BT的25%哌啶/NMP(V/V)溶液，在微波反應(yīng)器中反應(yīng)lmin，微波功率為15W，反應(yīng)溫度控制在50°C以內(nèi)，使用空氣壓縮機(jī)壓縮空氣冷卻，反應(yīng)結(jié)束后濾去溶液；再加入7mL含0.1MH0BT的25%哌啶/NMP(V/V)溶液在微波反應(yīng)器中再反應(yīng)4min，微波功率為25W，反應(yīng)溫度控制在50°C，使用空氣壓縮機(jī)壓縮空氣冷卻。反應(yīng)結(jié)束后濾去溶液，用NMP洗滌干凈。得到脫去初始連接的Fmoc保護(hù)基的樹脂。(3)微波促進(jìn)Fmoc-Ser-rinkamide-MBHAResin的合成將Fmoc-Ser-0H(0.04mmol)，HBTU(0.04mmol)，H0BT(0.04mmol)禾口DIPEA(0.08mmol)溶于lOmLNMP中，再將此溶液加入上面的樹脂中，在微波反應(yīng)器中反應(yīng)7min，微波功率為25W，反應(yīng)溫度控制在50°C，使用空氣壓縮機(jī)壓縮空氣冷卻。反應(yīng)結(jié)束后濾除反應(yīng)液，用DCM和NMP各7mL洗滌樹脂3次。(4)偶合效率的檢測用茚三酮法或者溴酚蘭法定性檢測樹脂的偶合效率，顯色反應(yīng)為陰性即可進(jìn)入下一個偶合循環(huán)。茚三酮法取少量樹脂顆粒用乙醇洗滌，放入透明小瓶中加入5%茚三酮乙醇、KCN吡啶溶液(2ml0.001MKCN稀釋于98ml吡啶中)、80%苯酚乙醇溶液各2滴，于100°C加熱5分鐘，如果樹脂顯藍(lán)色即為陽性。溴酚蘭法取少量樹脂顆粒用二甲酰乙酰胺洗滌，放入透明小瓶中加入3滴的溴酚藍(lán)二甲基乙酰胺溶液，常溫下振搖3分鐘，如果樹脂顯藍(lán)色即為陽性。(5)肽鏈的延長按照Ala2-MC-JJ0103-(110)_NH2的序列，重復(fù)上述脫保護(hù)和偶合的步驟依次連接上相應(yīng)的氨基酸，偶合微波促進(jìn)反應(yīng)時間520min不等。得到連有Ala2-MC-JJ0103-(l10)-NH2的樹脂。(6)樹脂上多肽的裂解將上述得到的連有Ala2-MC-JJ0103-(l10)_NH2的樹脂放入反應(yīng)瓶中，各加入裂解劑ReagentK(TFA/苯甲硫醚/水/苯酚/EDT，82.55552.5，V/V)10mL，先在0°C下振搖30min，再在常溫下反應(yīng)3h。反應(yīng)結(jié)束后抽濾，加少量TFA和DCM洗滌三次，合并濾液。將濾液加入大量的冰乙醚中析出白色絮狀沉淀，冷凍離心得到目標(biāo)多肽的粗品。最終得到Ala2-MC-JJ0103-(l10)_NH2粗品63.2mg，收率為94.3%0(7)Ala2-MC-JJ0103-(l10)_NH2粗品的純化將上面得到的Ala2-MC-JJ0103-(l10)_NH2粗品，溶于少量的水中，用島津制備型反相HPLC純化粗品。純化中采用C18反相制備柱(340mmX28mm，5iim)；流動相A:0.1%TFA/水(V/V)，流動相B0.1%TFA/乙腈(V/V)；流動相梯度流動相B13%15%,30min；流速為6mL/min；檢測波長為214nm。收集的溶液凍干得純品，最終得到純品29.7mg。理論相對分子質(zhì)量907.0ESI-MSm/zfound[M+3H]3+303.2，[M+4H]4+227.5，[M+5H]5+182.2；calu[M+3H]3+303.3，[M+4H]4+227.7，[M+5H]5+182.4根據(jù)實(shí)施例1所述的方法，根據(jù)相應(yīng)的序列合成得到實(shí)施例239的多肽，通過電噴霧質(zhì)譜(ESI-MS)確證各自的分子量。實(shí)施例2Gly-Pro-(D-Ala)-Ala-Tyr-Ser-Ile-Ala-Ala-Ser(SEQ.IDNO3)；理論相對分子質(zhì)量907.OESI-MSm/zfound[M+3H]3+303.3,[M+4H]4+227.6,[M+5H]5+182.5；calu[M+3H]3+303.3，[M+4H]4+227.7，[M+5H]5+182.4實(shí)施例3Gly-Pro-Ala-(D-Ala)-Tyr-Ser-Ile-Ala-Ala-Ser(SEQ.IDNO4)；理論相對分子質(zhì)量907.OESI-MSm/zfound[M+3H]3+303.1,[M+4H]4+227.7,[M+5H]5+182.4；calu[M+3H]3+303.3，[M+4H]4+227.7，[M+5H]5+182.4實(shí)施例4Gly-Pro-Ala-Ala-Tyr-Ser-Ile-(D-Ala)-Ala-Ser(SEQ.IDNO5)；理論相對分子質(zhì)量907.OESI-MSm/zfound[M+3H]3+303.3,[M+4H]4+227.6,[M+5H]5+182.4；calu[M+3H]3+303.3，[M+4H]4+227.7，[M+5H]5+182.4實(shí)施例5Gly-Pro-Ala-Ala-Tyr-Ser-Ile-Ala-(D-Ala)-Ser(SEQ.IDNO6)；理論相對分子質(zhì)量907.OESI-MSm/zfound[M+3H]3+303.5,[M+4H]4+227.6,[M+5H]5+182.3；calu[M+3H]3+303.3，[M+4H]4+227.7，[M+5H]5+182.4實(shí)施例6Gly-Pro-Ala-Ala-Tyr-Ser-Ile-Ala-Gly-Ser(SEQ.IDNO7)；理論相對分子質(zhì)量893.OESI-MSm/zfound[M+3H]3+298.6,[Μ+4Η]4+224.3,[Μ+5Η]5+179.4；calu[M+3H]3+298.7，[Μ+4Η]4+224.2，[Μ+5Η]5+179.6實(shí)施例7Gly-Pro-Ala-Ala-Tyr-Ser-Ile-Ala-Cys-Ser(SEQ.IDNO8)；理論相對分子質(zhì)量939.OESI-MSm/zfound[M+3H]3+314.1,[M+4H]4+253·9，[M+5H]5+188.8；calu[M+3H]3+314.0，[M+4H]4+235.8，[M+5H]5+188.8實(shí)施例8Gly-Pro-Ala-Ala-Tyr-Ser-Ile-Ala-Arg-Ser(SEQ.IDNO9)；理論相對分子質(zhì)量992.1ESI-MSm/zfound[M+3H]3+331.7,[M+4H]4+248.9,[M+5H]5+199.4；calu[M+3H]3+331.7，[Μ+4Η]4+249·0，[Μ+5Η]5+199.4實(shí)施例9Gly-Pro-Ala-Ala-Tyr-Ser-Ile-Ala-Met-Ser(SEQ.IDNO10)；理論相對分子質(zhì)量967.1ESI-MSm/zfound[M+3H]3+323.3,[M+4H]4+242.9,[M+5H]5+194.4；calu[M+3H]3+323.4，[M+4H]4+242.8，[M+5H]5+194.4實(shí)施例10Gly-Pro-Ala-Ala-Tyr-Ser-Ile-Ala-Ser-Ser(SEQ.IDNO11)；理論相對分子質(zhì)量923.OESI-MSm/zfound[M+3H]3+308.6,[Μ+4Η]4+231·9，[Μ+5Η]5+185·4；calu[M+3H]3+308.7，[M+4H]4+231.7，[M+5H]5+185.6實(shí)施例11Gly-Pro-Ala-Ala-Tyr-Ser-Ile-Ala-Lys-Ser(SEQ.IDNO12)；理論相對分子質(zhì)量964.1ESI-MSm/zfound[M+3H]3+322.4,[M+4H]4+241.9,[M+5H]5+193.9；calu[M+3H]3+322.4，[M+4H]4+242.0，[M+5H]5+193.8實(shí)施例12Gly-Pro-Ala-Ala-Tyr-Ser-Ile-Lys-Lys-Ser(SEQ.IDNO13)；理論相對分子質(zhì)量1021.2ESI-MSm/z:found[M+3H]3+341.4，[M+4H]4+256.2,[M+5H]5+205.3；calu[M+3H]3+341.4，[M+4H]4+256.3，[M+5H]5+205.2實(shí)施例13Gly-Pro-(D-Ala)-Ala-Tyr-Ser-Ile-Lys-Lys-Ser(SEQ.IDNO14)；理論相對分子質(zhì)量1021.2ESI-MSm/zfound[M+3H]3+341.5,[M+4H]4+256.2,[M+5H]5+205.1；calu[M+3H]3+341.4，[M+4H]4+256.3，[M+5H]5+205.2實(shí)施例14Gly-Pro-Ala-(D-Ala)-Tyr-Ser-Ile-Lys-Lys-Ser(SEQ.IDNO15)；理論相對分子質(zhì)量1021.2ESI-MSm/zfound[M+3H]3+341.4,[Μ+4Η]4+256.4,[Μ+5Η]5+205.1；calu[M+3H]3+341.4，[M+4H]4+256.3，[M+5H]5+205.2實(shí)施例15Gly-Pro-Ala-Ala-Tyr-Ser-Ile-Gly-Lys-Ser(SEQ.IDNO16)；理論相對分子質(zhì)量950.OESI-MSm/zfound[M+3H]3+317.8,[Μ+4Η]4+238.4,[Μ+5Η]5+191.1；calu[M+3H]3+317.7，[Μ+4Η]4+238·5，[Μ+5Η]5+191.O實(shí)施例I6Gly-Pro-Ala-Ala-Tyr-Ser-Ile-Tyr-Lys-Ser(SEQ.IDNO17)；理論相對分子質(zhì)量1056.2ESI-MSm/zfound[M+3H]3+353.1,[M+4H]4+265.2,[M+5H]5+212.1；calu[M+3H]3+353·1，[Μ+4Η]4+265·0，[Μ+5Η]5+212.2實(shí)施例17Gly-Pro-Gly-Ala-Tyr-Ser-Ile-Lys-Lys-Ser(SEQ.IDNO18)；理論相對分子質(zhì)量1007.1ESI-MSm/zfound[M+3H]3+336.8,[M+4H]4+252.9,[M+5H]5+202.4；calu[M+3H]3+336.7，[M+4H]4+252.8，[M+5H]5+202.4實(shí)施例18Gly-Pro-Ser-Ala-Tyr-Ser-Ile-Lys-Lys-Ser(SEQ.IDNO19)；理論相對分子質(zhì)量1037.2ESI-MSm/zfound[M+3H]3+346.8,[M+4H]4+260.3,[M+5H]5+208.4；calu[M+3H]3+346.7，[M+4H]4+260.3，[M+5H]5+208.4實(shí)施例19Gly-Pro-Ala-Arg-Tyr-Ser-Ile-Lys-Lys-Ser(SEQ.IDNO20)；理論相對分子質(zhì)量1106.3ESI-MSm/zfound[M+3H]3+369.8,[M+4H]4+277.7,[M+5H]5+222.4；calu[M+3H]3+369.8，[M+4H]4+277.6，[M+5H]5+222.3實(shí)施例20Gly-Pro-Ala-Cys-Tyr-Ser-Ile-Lys-Lys-Ser(SEQ.IDNO21)；理論相對分子質(zhì)量1053.2ESI-MSm/zfound[M+3H]3+352.2,[M+4H]4+264.4,[M+5H]5+2114；calu[M+3H]3+352.1，[M+4H]4+264.3，[M+5H]5+211.6實(shí)施例21Gly-Pro-Ala-Gly-Tyr-Ser-Ile-Lys-Lys-Ser(SEQ.IDNO22)；理論相對分子質(zhì)量1087.2ESI-MSm/zfound[M+3H]3+363.2,[M+4H]4+272.7,[M+5H]5+218.4；calu[M+3H]3+363.4，[M+4H]4+272.8，[M+5H]5+218.4實(shí)施例22Gly-Pro-Ala-His-Tyr-Ser-Ile-Lys-Lys-Ser(SEQ.IDNO:23)；理論相對分子質(zhì)量1087.2ESI-MSm/zfound[M+3H]3+363.5,[M+4H]4+272.8,[M+5H]5+218.4；calu[M+3H]3+363.4，[M+4H]4+272.8，[M+5H]5+218.4實(shí)施例23Gly-Pro-Ala-Tyr-Tyr-Ser-Ile-Lys-Lys-Ser(SEQ.IDNO24)；理論相對分子質(zhì)量1113.3ESI-MSm/zfound[M+3H]3+372.1,[M+4H]4+279.4,[M+5H]5+218.4；calu[M+3H]3+363.4，[M+4H]4+272.8，[M+5H]5+218.4實(shí)施例24Gly-Pro-Ala-Ser-Tyr-Ser-Ile-Lys-Lys-Ser(SEQ.IDNO25)；理論相對分子質(zhì)量1037.2ESI-MSm/zfound[M+3H]3+346.8,[M+4H]4+260.4,[M+5H]5+208.4；calu[M+3H]3+346.7，[M+4H]4+260.3，[M+5H]5+208.4實(shí)施例25Gly-Pro-Ala-Tyr-Tyr-Ser-Ile-Ala-Gly-Ser(SEQ.IDNO26)；理論相對分子質(zhì)量985.0ESI-MSm/zfound[M+3H]3+329.3,[M+4H]4+247.4,[M+5H]5+198.0；calu[M+3H]3+329.3，[M+4H]4+247.3，[M+5H]5+198.0實(shí)施例26Gly-Pro-Ala-Tyr-Tyr-Ser-Ile-Ala-Cys-Ser(SEQ.IDNO27)；理論相對分子質(zhì)量1031.1ESI-MSm/zfound[M+3H]3+344.7,[M+4H]4+258.6,[M+5H]5+207.1；calu[M+3H]3+344.7，[M+4H]4+258.8，[M+5H]5+207.2實(shí)施例27Gly-Pro-Ala-Tyr-Tyr-Ser-Ile-Ala-Arg-Ser(SEQ.IDNO28)；理論相對分子質(zhì)量1084.2ESI-MSm/zfound[M+3H]3+362.3,[M+4H]4+272.0,[M+5H]5+217.9；calu[M+3H]3+362.3，[M+4H]4+272.0，[M+5H]5+217.8實(shí)施例28Gly-Pro-Ala-Tyr-Tyr-Ser-Ile-Ala-Met-Ser(SEQ.IDNO29)；理論相對分子質(zhì)量1059.2ESI-MSm/zfound[M+3H]3+354.2,[M+4H]4+265.7,[M+5H]5+212.9；calu[M+3H]3+362.3，[M+4H]4+272.0，[M+5H]5+217.8實(shí)施例29Gly-Pro-Ala-Tyr-Tyr-Ser-Ile-Ala-Ser-Ser(SEQ.IDNO30)；理論相對分子質(zhì)量1015.1ESI-MSm/zfound[M+3H]3+339.2,[M+4H]4+254.7,[M+5H]5+204.0；calu[M+3H]3+339.4，[M+4H]4+254.8，[M+5H]5+204.0實(shí)施例30Gly-Pro-Ala-Tyr-Tyr-Ser-Ile-Ala-Lys-Ser(SEQ.IDNO31)；理論相對分子質(zhì)量1056.2ESI-MSm/zfound[M+3H]3+353.1,[M+4H]4+265.0,[M+5H]5+212.3；calu[M+3H]3+353.1，[M+4H]4+265.0，[M+5H]5+212.2實(shí)施例31Gly-Pro-Ala-Tyr-Tyr-Ser-Ile-Lys-Lys-Ser(SEQ.IDNO32)；理論相對分子質(zhì)量1113.3ESI-MSm/zfound[M+3H]3+372.1,[M+4H]4+279.4,[M+5H]5+223.6；calu[M+3H]3+372.1，[M+4H]4+279.3，[M+5H]5+223.7實(shí)施例32Gly-Pro-Gly-(D-Ala)-Tyr-Ser-Ile-Lys-Lys-Ser(SEQ.IDNO33)；理論相對分子質(zhì)量1007.1ESI-MSm/zfound[M+3H]3+336.7,[M+4H]4+252.8,[M+5H]5+202.6；calu[M+3H]3+336.7，[M+4H]4+252.8，[M+5H]5+202.4實(shí)施例33Gly-Pro-Ser-(D-Ala)-Tyr-Ser-Ile-Lys-Lys-Ser(SEQ.IDNO34)；理論相對分子質(zhì)量1037.2ESI-MSm/zfound[M+3H]3+346.7,[M+4H]4+260.3,[M+5H]5+208.4；calu[M+3H]3+346.7，[M+4H]4+260.3，[M+5H]5+208.4實(shí)施例34Gly-Pro-(D-Ala)-Arg-Tyr-Ser-Ile-Lys-Lys-Ser(SEQ.IDNO35)；理論相對分子質(zhì)量1106.3ESI-MSm/zfound[M+3H]3+369.7,[M+4H]4+277.6,[M+5H]5+222.4；calu[M+3H]3+369.8，[M+4H]4+277.6，[M+5H]5+222.3實(shí)施例35Gly-Pro-(D-Ala)-Cys-Tyr-Ser-Ile-Lys-Lys-Ser(SEQ.IDNO36)；理論相對分子質(zhì)量1053.2ESI-MSm/zfound[M+3H]3+352.1,[M+4H]4+264.3,[M+5H]5+211·6;calu[M+3H]3+352·1，[M+4H]4+264.3，[M+5H]5+211.6實(shí)施例36Gly-Pro-(D-Ala)-Gly-Tyr-Ser-Ile-Lys-Lys-Ser(SEQ.IDNO37)；理論相對分子質(zhì)量1007.1ESI-MSm/zfound[M+3H]3+336.8,[Μ+4Η]4+252.7,[Μ+5Η]5+202.6；calu[Μ+3Η]3+336.7，[Μ+4Η]4+252.8，[Μ+5Η]5+202.4實(shí)施例37Gly-Pro-(D-Ala)-His-Tyr-Ser-Ile-Lys-Lys-Ser(SEQ.IDNO38)；理論相對分子質(zhì)量1087.2ESI-MSm/zfound[M+3H]3+363.4,[M+4H]4+272.7,[M+5H]5+218.6；calu[M+3H]3+363.4，[Μ+4Η]4+272·8，[Μ+5Η]5+218.4實(shí)施例38Gly-Pro-(D-Ala)-Tyr-Tyr-Ser-Ile-Lys-Lys-Ser(SEQ.IDNO39)；理論相對分子質(zhì)量1113.3ESI-MSm/zfound[M+3H]3+372.2,[M+4H]4+279.4,[M+5H]5+223.6；calu[M+3H]3+372.1，[M+4H]4+279.3，[M+5H]5+223.7實(shí)施例39Gly-Pro-(D-Ala)-Ser-Tyr-Ser-Ile-Lys-Lys-Ser(SEQ.IDNO40)；理論相對分子質(zhì)量1037.2ESI-MSm/zfound[M+3H]3+346.7,[M+4H]4+260.4,[M+5H]5+208.6；calu[M+3H]3+346.7，[M+4H]4+260.3，[M+5H]5+208.4實(shí)施例40MC-JJO103及其類似物體內(nèi)降糖活性實(shí)驗(yàn)取10周齡雄性昆明小鼠(體重1822g)，隨機(jī)分組，每組6只。尾靜脈注射四氧嘧啶給藥建模，給藥劑量為60mg/kg，72小時后，小鼠禁食56小時測血糖挑選血糖值范圍在1323的小鼠隨機(jī)分組，每組6只。成模后的小鼠給藥劑量為lmg/kg連續(xù)10d腹腔注射MC-JJ0103多肽及其類似物。在0，30，60，90，120用血糖儀測定血糖值。如表1所示，MC-JJ0103多肽及其類似物的降血糖活性強(qiáng)于二甲雙胍。表1MC-JJ0103及其類似物降血糖的效應(yīng)<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>n=6，又土s.*P<0.01，**P<0.001，***P<0.0001vssaline權(quán)利要求一種具有降血糖活性的含有式I(SEQ.IDNO1)結(jié)構(gòu)的苦瓜MC-JJ0103多肽類似物，得到的苦瓜MC-JJ0103多肽類似物；其特征在于其結(jié)構(gòu)具有以下形式Gly-Pro-Xaa1-Xaa2-Tyr-Ser-Ile-Xaa3-Xaa4-Ser(SEQ.IDNO1)Xaa1Ala，D-Ala，Gly或SerXaa2Ala，D-Ala，Arg，Cys，Gly，His，Lys，Met，Tyr或SerXaa3Ala，D-Ala，Gly，Lys，Tyr或SerXaa4Ala，D-Ala，Gly，Cys，Arg，Lys，Met或Ser2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的多肽，具有如下序列Gly-Pro-Ala-Ala-Tyr-Ser-Ile-Ala-Ala-Ser(SEQ.IDNO2)Gly-Pro-(D-Ala)-Ala-Tyr-Ser-Ile-Ala-Ala-Ser(SEQ.IDNO3)Gly-Pro-Ala-(D-Ala)-Tyr-Ser-Ile-Ala-Ala-Ser(SEQ.IDNO4)Gly-Pro-Ala-Ala-Tyr-Ser-Ile-(D-Ala)-Ala-Ser(SEQ.IDNO5)Gly-Pro-Ala-Ala-Tyr-Ser-Ile-Ala-(D-Ala)-Ser(SEQ.IDNO6)Gly-Pro-Ala-Ala-Tyr-Ser-Ile-Ala-Gly-Ser(SEQ.IDNO7)Gly-Pro-Ala-Ala-Tyr-Ser-Ile-Ala-Cys-Ser(SEQ.IDNO8)Gly-Pro-Ala-Ala-Tyr-Ser-Ile-Ala-Arg-Ser(SEQ.IDNO9)Gly-Pro-Ala-Ala-Tyr-Ser-Ile-Ala-Met-Ser(SEQ.IDNO10)Gly-Pro-Ala-Ala-Tyr-Ser-Ile-Ala-Ser-Ser(SEQ.IDNO11)Gly-Pro-Ala-Ala-Tyr-Ser-Ile-Ala-Lys-Ser(SEQ.IDNO12)Gly-Pro-Ala-Ala-Tyr-Ser-Ile-Lys-Lys-Ser(SEQ.IDNO13)Gly-Pro-(D-Ala)-Ala-Tyr-Ser-Ile-Lys-Lys-Ser(SEQ.IDNO14)Gly-Pro-Ala-(D-Ala)-Tyr-Ser-Ile-Lys-Lys-Ser(SEQ.IDNO15)Gly-Pro-Ala-Ala-Tyr-Ser-Ile-Gly-Lys-Ser(SEQ.IDNO16)Gly-Pro-Ala-Ala-Tyr-Ser-Ile-Tyr-Lys-Ser(SEQ.IDNO17)Gly-Pro-Gly-Ala-Tyr-Ser-Ile-Lys-Lys-Ser(SEQ.IDNO18)Gly-Pro-Ser-Ala-Tyr-Ser-Ile-Lys-Lys-Ser(SEQ.IDNO19)Gly-Pro-Ala-Arg-Tyr-Ser-Ile-Lys-Lys-Ser(SEQ.IDNO20)Gly-Pro-Ala-Cys-Tyr-Ser-Ile-Lys-Lys-Ser(SEQ.IDNO21)Gly-Pro-Ala-Gly-Tyr-Ser-Ile-Lys-Lys-Ser(SEQ.IDNO22)Gly-Pro-Ala-His-Tyr-Ser-Ile-Lys-Lys-Ser(SEQ.IDNO23)Gly-Pro-Ala-Tyr-Tyr-Ser-Ile-Lys-Lys-Ser(SEQ.IDNO24)Gly-Pro-Ala-Ser-Tyr-Ser-Ile-Lys-Lys-Ser(SEQ.IDNO25)Gly-Pro-Ala-Tyr-Tyr-Ser-Ile-Ala-Gly-Ser(SEQ.IDNO26)Gly-Pro-Ala-Tyr-Tyr-Ser-Ile-Ala-Cys-Ser(SEQ.IDNO27)Gly-Pro-Ala-Tyr-Tyr-Ser-Ile-Ala-Arg-Ser(SEQ.IDNO28)Gly-Pro-Ala-Tyr-Tyr-Ser-Ile-Ala-Met-Ser(SEQ.IDNO29)Gly-Pro-Ala-Tyr-Tyr-Ser-Ile-Ala-Ser-Ser(SEQ.IDNO30)Gly-Pro-Ala-Tyr-Tyr-Ser-Ile-Ala-Lys-Ser(SEQ.IDNO31)Gly-Pro-Ala-Tyr-Tyr-Ser-Ile--Lys--Lys--Ser(SEQ.IDNO32)Gly-Pro-Gly-(D_Ala)-Tyr-Ser--Ile--Lys--Lys--Ser(SEQ.IDNO33)Gly-Pro-Ser-(D-Ala)-Tyr-Ser--Ile--Lys--Lys--Ser(SEQ.IDNO34)Gly-Pro-(D-Ala)-Arg-Tyr-Ser--Ile--Lys--Lys--Ser(SEQ.IDNO35)Gly-Pro-(D-Ala)-Cys-Tyr-Ser--Ile--Lys--Lys--Ser(SEQ.IDNO36)Gly-Pro-(D-Ala)-Gly-Tyr-Ser--Ile--Lys--Lys--Ser(SEQ.IDNO37)Gly-Pro-(D-Ala)-His-Tyr-Ser--Ile--Lys--Lys--Ser(SEQ.IDNO38)Gly-Pro-(D-Ala)-Tyr-Tyr-Ser--Ile--Lys--Lys--Ser(SEQ.IDNO39)Gly-Pro-(D-Ala)-Ser—Tyr—Ser--Ile--Lys--Lys--Ser(SEQ.IDNO40)3.—種藥物組合物，包括治療有效量的權(quán)利要求1中所述的MC-JJ0103多肽類似物或者其藥學(xué)上可接受的鹽和藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑。4.權(quán)利要求1中所述的MC-JJ0103多肽類似物或者其藥學(xué)上可接受的鹽和藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑在制備用于治療糖尿病的藥物中的運(yùn)用。5.權(quán)利要求1中所述的MC-JJ0103多肽類似物的制備方法，其特征在于采用微波促進(jìn)Fmoc/tBu正交保護(hù)固相合成策略，于固相載體上先合成得到載有第一個Fmoc保護(hù)氨基酸的樹脂，茚三酮法檢測為陰性后脫去Fmoc保護(hù)基得到載有第一個氨基酸殘基的樹脂；再進(jìn)入下一個偶聯(lián)循環(huán)，按照相應(yīng)的肽序用不同的保護(hù)氨基酸重復(fù)偶聯(lián)和脫保護(hù)的步驟，依次延長所需的氨基酸序列，合成得到載有相應(yīng)多肽的樹脂，最后用裂解劑將多肽從樹脂上切割下來得到多肽粗品。粗品經(jīng)制備級高效液相色譜純化，凍干得多肽純品。6.根據(jù)權(quán)利要求5中所述微波促進(jìn)固相合成MC-JJ0103多肽類似物方法，其特征是載有第一個Fmoc保護(hù)氨基酸的樹脂的制備方法，是通過在微波照射條件下Fmoc保護(hù)氨基酸先經(jīng)活化劑活化后再與固相載體偶合得到，反應(yīng)中加入1-羥基-苯并三氮唑(H0BT)或其衍生物抑制消旋，并使用有機(jī)堿中和反應(yīng)的酸性。7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的載有第一個Fmoc保護(hù)氨基酸的樹脂的制備方法，其特征在于使用的固相載體是Rink樹脂、Wang樹脂或2-氯三苯甲基氯樹脂；使用的活化劑是二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)、N，N'-二異丙基碳二亞胺(DIC)、N，N"-羰基二咪唑(⑶I)、1_乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(EDC.HCl)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N，N，N'，N'-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU)、苯并三氮唑-N，N，N'，N'-四甲基脲六氟磷酸酯(HBTU)或6-氯苯并三氮唑_1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸酯(HCTU)；使用的1_羥基-苯并三氮唑(H0BT)衍生物為N-羥基琥珀酰亞胺(H0SU)、1-羥基-7-偶氮苯并三氮唑(H0AT)或3-羥基-1，2，3-苯并三嗪-4(3H)_酮(H00BT)；使用的有機(jī)堿為三乙胺(TEA)、N-甲基嗎啉(NMM)或二異丙基乙胺(DIEA)；微波促進(jìn)條件是微波頻率2450MHz，反應(yīng)溫度20100°C，反應(yīng)時間為515min。8.根據(jù)權(quán)利要求5中所述微波促進(jìn)固相合成MC-JJ0103多肽類似物合成方法，其特征是Fmoc保護(hù)基的脫除是通過使用含有0.lmol.L—1的1-羥基-苯并三氮唑(H0BT)的六氫吡啶溶液在微波促進(jìn)下反應(yīng)，選用二甲基甲酰胺(DMF)、二甲亞砜(DMS0)、或N-甲基吡咯烷酮(NMP)為反應(yīng)溶劑；微波促進(jìn)條件是微波頻率2450MHz，反應(yīng)溫度20100°C，反應(yīng)時間為1lOmin。全文摘要本發(fā)明涉及新型高效降血糖苦瓜MC-JJ0103多肽類似物及其微波促進(jìn)固相合成方法。通過對天然苦瓜多肽的3，4，8或9位點(diǎn)進(jìn)行改造得到具有更長藥理作用時間的MC-JJ0103多肽類似物；其化學(xué)合成是通過微波促進(jìn)固相合成方法而得以高效快速實(shí)現(xiàn)，粗品經(jīng)制備級高效液相純化，最后凍干得到MC-JJ0103多肽類似物。文檔編號A61P3/10GK101824073SQ201010177938公開日2010年9月8日申請日期2010年5月20日優(yōu)先權(quán)日2010年5月20日發(fā)明者華杰,張惠斌,杜闊,王敬杰,趙鑫鑫,金晶,錢海,陳巍,黃文龍申請人:中國藥科大學(xué)