專利名稱：用于治療和預(yù)防獲得性免疫缺陷綜合癥(aids)和其變體的含有節(jié)莎草的水溶性抗病毒產(chǎn)品的制作方法
用于治療和預(yù)防獲得性免疫缺陷綜合癥(AIDS)和其變體 的含有節(jié)莎草的水溶性抗病毒產(chǎn)品本發(fā)明涉及一種基于節(jié)莎草(Cyperus Articulatus)植物的葉片的抗病毒產(chǎn)品， 其可溶于水，具有溶解病毒和抑制病毒的能力。其打算用于治療和預(yù)防獲得性免疫缺陷綜 合癥(AIDQ和其變體。AIDS是一種影響了全球、尤其是非洲國家的傳染性疾病。人們已 經(jīng)注意到，AIDS經(jīng)常伴隨有淋巴結(jié)病綜合癥，而在這種疾病的末期，患者的免疫防御陷入崩 潰。1983年，來自巴斯德研究所(Institut Pasteur)的呂克蒙塔尼(Luc Montagnier)教 授分離出了造成這一大范圍傳染病的病原體。根據(jù)本發(fā)明人所了解的現(xiàn)有技術(shù)，能夠確認以下文獻OAPI專利第09043號，1991年3月31日授予約瑟夫克魯茲(Jos印hCruz)，涉及基 于含羞草(Mimosa Pudica Linn)葉片提取物的新穎抗病毒組合物。OAPI專利第11602號， 授予埃瑞克-格布杜索博士(Dr. ErickGbodossou)，涉及含五種植物(膠苦瓜(Momordica Balsamina)、天堂椒(Aframomum Melegueta)、節(jié)莎草、埃特榕木(Ficus Iteophylla)和酸 豆(Tamarindus Indica))的提取物的組合物。在博士的治療過程中，所吸收的產(chǎn)品去除 糞便和尿液中的AIDS病毒。其它文獻包括1994年9月授予美國制藥康公司(Wiarmakon USA, Inc)的專利 WO 94/18993 ； 1992 年 4 月 16 日授予紐約大學(xué)(New York University) 的專利US 5484889 ；2000年6月22日授予帕雅生物技術(shù)公司(Paya Biotechnic Inc.)的 專利WO 0035466 ；和1999年3月23日授予克帕爾S.達利沃(Kirpal S. Dhaliwal)的專 利US5886029。當前針對AIDS病毒進行的所有研究在疫苗，或是殺死體內(nèi)的病毒方面都未 能發(fā)展。當前的抗逆轉(zhuǎn)錄病毒藥物使病原體突變成致病力更強的病毒。在這種大范圍傳染 病存在的二十多年里，為了找到疫苗，抗病毒劑，研究所、政府和非政府組織、聯(lián)合國機構(gòu)， 簡單地說，所有的科技、政治、文化和民間社會團體，都經(jīng)常與世界衛(wèi)生組織(World Health Organization)或者其它合作者和資金供應(yīng)者展開合作，投入了這場針對HIV/AIDS的戰(zhàn) 斗。使用如疊氮胸苷(AZT)、DDC、3TC、AZT/3C和茚地那韋(indinavir)等抗病毒物質(zhì) 治療HIV的常規(guī)方法使得血漿病毒載量降低到最低水平，并保持盡可能長的時間。得到的 結(jié)果即使為陽性的，也仍很有限。平均起來，有50%的患者在治療大約12個月后觀察到血 漿病毒載量降到50個拷貝/毫升。然而，在當前的研究狀態(tài)中，通過使用抗逆轉(zhuǎn)錄病毒藥 物仍未解決的問題持續(xù)存在，尤其是不可能完全根除病原體。即使當CD4淋巴細胞含量已經(jīng)實質(zhì)上增加，但由于抗逆轉(zhuǎn)錄病毒藥物的持續(xù)毒性 尚未解決，致使免疫修復(fù)意義不大。其它問題通過使用抗逆轉(zhuǎn)錄病毒藥物也未得到解決，例如早期發(fā)展抗逆轉(zhuǎn)錄病毒 藥物抗性的風險，以及關(guān)于治療功效持續(xù)時間的不確定性。與使用當前的抗逆轉(zhuǎn)錄病毒藥 物相關(guān)的約束也應(yīng)引起注意，因為患者每天需要攝取約20種產(chǎn)品，而這對于最廣泛地暴露 于HIV/AIDS感染的非洲人群的購買力來說，成本太高。而且，就當前技術(shù)進展而言，還沒有 具有水溶性的可注射的抗逆轉(zhuǎn)錄病毒產(chǎn)品。目前還不知道此類的產(chǎn)品。推薦的一種預(yù)防措 施是使用避孕套；我們知道，避孕套的使用不僅限制了生育，而且知道，它并非完全有效。國際社會越來越清楚地意識到需要使醫(yī)務(wù)人員進行HIV的預(yù)防和號召使用傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)。本發(fā)明 的產(chǎn)品是基于節(jié)莎草植物的葉片，其可溶于水，具有溶解病毒和抑制病毒的能力。塞內(nèi)加爾 (Senegal)的科研部門(ScientificResearch Department)已經(jīng)從植物學(xué)、藥理學(xué)和化學(xué) 方面對這種植物進行了研究，而且莫爾豪斯醫(yī)學(xué)院(Morehouse School of Medicine)(美 國喬治亞州亞特蘭大(Atlanta，GA, USA))基于本發(fā)明人開發(fā)的參照系統(tǒng)對這種植物的提 取物進行了分析。I-棺物學(xué)、藥理學(xué)和化學(xué)研究棺物名稱節(jié)莎草棺物學(xué)方面多年生種子的草本植物，根莖型，具有直立的圓柱形莖干，高度可達1.75米，直徑 達8毫米。在莖干上生長的葉片逐漸變小，成為種子?；ǔ蕚阈?，具有不規(guī)則花梗。化學(xué)方面化學(xué)分析得到倍半萜烯和倍半萜烯醇，具有輕微的氣味。檢測到呈二硝基_2，4苯 腙形式的香附烯酮(Cyperenone)，命名為4-異廣藿香烯(isopatchoulene-4)。它能夠通 過促進HIV病毒經(jīng)尿液和糞便排出，來去除各種受感染組織中的病毒。藥理學(xué)方面其葉片具有醫(yī)療作用。節(jié)莎草葉片的芳香特性會使全身產(chǎn)生熱擴散感，而且此植 物可在消化不良病癥中充當鎮(zhèn)靜劑。II-節(jié)莎草的體外研究將干燥并磨成粉的葉片提供給莫爾豪斯醫(yī)學(xué)院(美國喬治亞州亞特蘭大)的病毒 學(xué)小組，以便基于本發(fā)明人的參照系統(tǒng)驗證其對所述病毒和其變體的體外活性。A-目的本研究涉及確定節(jié)莎草提取物是否能阻斷AIDS病毒的復(fù)制，以及干燥的節(jié)莎草 粉末是否能溶于水。本研究也旨在研究所述產(chǎn)品對感染獲得性免疫缺陷綜合癥(AIDS)病 毒和其變體的細胞的直接作用。B-實施測試將葉片提取物的可溶部分混入Img所述病毒(NL4-3KFS)的pM等效物中。最初 測試的病毒與提取物為IOmg病毒相對于1微克提取物。必須針對當前的應(yīng)用測試提取物， 并說明其對病毒的直接作用。所述作用可包括阻斷病毒gpl20的包膜蛋白，或溶解病毒包 膜中所含的脂質(zhì)?；蛘撸钚猿煞挚赡苷喜《玖Ｗ?，并影響病毒殼體或催化蛋白質(zhì)，如逆轉(zhuǎn)錄、蛋 白酶或整合酶。在與提取物一起預(yù)先培育15分鐘后，需要將提取物/病毒混合物添加到提供支持 的組織培養(yǎng)物中。病毒必須在37°C溫度下吸收提取物30分鐘。隨后，用PBS洗滌培養(yǎng)物 3次，最后保存在冷培養(yǎng)基中。在初始研究中，需要使用具有MAGI指示劑的細胞，這些細胞 是設(shè)計成將被HIV-I感染的HeLa細胞。感染后，這些細胞產(chǎn)生半乳糖苷酶，其可在感 染發(fā)展時檢測呈藍色。經(jīng)處理的藍色細胞與未經(jīng)處理的細胞的數(shù)量的比較，將相對地指示 抑制作用。初始研究中使用的病毒不應(yīng)具有任何抑制作用，并因此僅限于細胞感染的單一 步驟。此單一細胞感染步驟遠不能成為確定與感染相關(guān)的作用的最具指示性的方法。在這些測試中，重要的是確立適宜的劑量，即，對細胞無毒，而且仍含有最大濃度的可溶物質(zhì)。如 果在初始測試中發(fā)現(xiàn)了抗逆轉(zhuǎn)錄病毒活性，那么必須確定影響的是病毒生命周期的哪一部 分?？梢允褂锰囟ǖ牟《痉蛛x株和“指示劑”細胞來確定病毒進入的相對性能。如果病毒 進入是完整的，那么有可能使用PCR測試，通過檢測前病毒DNA形成的各個步驟，來確定逆 轉(zhuǎn)錄受影響的程度。產(chǎn)生完整病毒粒子的能力可使用標準P24ELISA測試直接測定，而病毒 成熟則可由病毒粒子中存在的多數(shù)病毒蛋白來測定。也需要至少能夠初步確定可溶物質(zhì)的 性質(zhì)。蛋白酶提取物處理能夠確定該提取物中存在的蛋白質(zhì)是否是產(chǎn)生所述活性的原因?；谶@些目的和指導(dǎo)，進行了實驗。III-針對產(chǎn)品特征鑒定的實驗A-節(jié)莎草提取物的溶解件將1克干燥的節(jié)莎草粉末在經(jīng)100%甲醇滅菌的蒸餾水中浸軟，并在室溫下靜置1 小時。隨后，使得到的溶液通過裝有0. 45微米過濾器的滅菌設(shè)備，以便截留殘余的不可溶 物質(zhì)。可溶部分中不含細菌。開始時存在于干物質(zhì)中的物質(zhì)完全被溶解。得到的溶液的 最大濃度為每毫升約IOOmg干粉。B-產(chǎn)品對警感染細胞的作用-為了確定可溶性提取物是否具有任何抗病毒活性，使用典型的MAGI細胞來測試 其對受感染細胞的作用。-利用HeLa細胞對MAGI細胞進行遺傳修飾，所述HeLa細胞含有包括病毒LTR的 報告基因盒，其位于大腸桿菌β-gal的編碼基因的上游。-所述基因的表達取決于HIV蛋白Tat的活化，而這需要感染HIV。-受感染的細胞變藍，并且可以在顯微鏡下進行計數(shù)。-用IngHIV KFS病毒接種兩塊板。-同時，將200μ 1提取物添加到細胞中，并培育2小時。-洗滌細胞2次，并將提取物放回冷培養(yǎng)基中。在產(chǎn)品提取物存在下，感染48小時 的細胞消失了。根據(jù)此觀察結(jié)果，可以確定，該提取物直接對病毒作用，而且主要影響受感染的靶 細胞。為此，進行以下測試。再建立兩塊含有未受感染的活細胞的板。一塊板作為對照。將基于節(jié)莎草的抗病 毒產(chǎn)品引入第二塊板中。30分鐘后，將AIDS病毒注入含有MAGI測試細胞的該第二塊板中， 隨后恢復(fù)至培育溫度。這些活細胞沒有變藍，即，它們未受感染。這一實驗使我們得出以下結(jié)論-該產(chǎn)品具有抗病毒活性。-該產(chǎn)品使病毒滅活。-該產(chǎn)品破壞感染獲得性免疫缺陷綜合癥(AIDQ病毒和其變體的細胞。C-混合產(chǎn)品的SELDI質(zhì)譜分析研究該產(chǎn)品后發(fā)現(xiàn)，活性成分并不復(fù)雜，其中分子的大小為小于10，OOODa，并顯示 出對蛋白酶處理的抗性。IV-結(jié)果
這些不同的實驗證實，所述產(chǎn)品-具有抗病毒活性，-對感染AIDS病毒的細胞有毒并具有破壞性作用，-使病毒失活，并且呈現(xiàn)抑制病毒的能力，-可溶于水，-不復(fù)雜，分子大小為小于10，OOODa，并顯示出對蛋白酶處理的抗性。本發(fā)明的用于治療和預(yù)防獲得性免疫缺陷綜合癥(AIDS)和其變體的基于節(jié)莎草 的抗病毒產(chǎn)品制備如下。收集節(jié)莎草的葉片，然后自然干燥，并磨成細粉；將干粉在經(jīng)100%甲醇滅菌的水 中浸軟；接著，使溶液通過直徑為45微米的過濾器，產(chǎn)生可抗病毒、溶解病毒、抑制病毒且 可溶于水的產(chǎn)品。所述產(chǎn)品可用作陰道殺微生物劑，而且也可以任何其它形式使用。體外測試表明，所得溶液阻斷獲得性免疫缺陷綜合癥(AIDQ病毒和其變體的發(fā) 展，并且間接刺激和增加網(wǎng)狀內(nèi)皮組織系統(tǒng)，由此增強患者的免疫防御能力。
權(quán)利要求
1.一種用于治療用途的基于節(jié)莎草(Cyperus Articulatus)的抗病毒產(chǎn)品和其制備 方法，所述治療用途是用于治療和預(yù)防獲得性免疫缺陷綜合癥(AIDQ和其變體。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的產(chǎn)品，其特征在于，所述制備方法含三個步驟a)第一步，收集干燥的節(jié)莎草葉片磨成細粉，b)第二步，將所述節(jié)莎草葉片的粉末在經(jīng)100%甲醇滅菌的水中浸軟，c)第三步，使所述溶液通過0.45微米的過濾器。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的產(chǎn)品，其特征在于，其可溶于水。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的產(chǎn)品，其特征在于，其具有抗病毒活性。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的產(chǎn)品，其特征在于，其對感染獲得性免疫缺陷綜合癥(AIDS) 和其變體的細胞有毒并具有破壞性作用。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的產(chǎn)品，其特征在于，其使所述病毒滅活，并具有抑制病毒的能力。
7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的產(chǎn)品，其特征在于，其不復(fù)雜，分子大小為小于10，000Da，并 顯示出對蛋白酶處理的抗性。
8.根據(jù)權(quán)利要求1至7任意一項所述的產(chǎn)品，其特征在于，其刺激網(wǎng)狀內(nèi)皮組織系統(tǒng)。
9.根據(jù)權(quán)利要求1至8任意一項所述的產(chǎn)品，其特征在于，其可用作陰道殺微生物劑并 且可以任何其它形式使用。
10.根據(jù)任意一項前述權(quán)利要求所述的產(chǎn)品，其特征在于，所述節(jié)莎草葉片提取物的濃 縮和純化是根據(jù)化學(xué)和生物化學(xué)中所用的常規(guī)方法進行。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種基于節(jié)莎草的抗病毒產(chǎn)品，其可溶解病毒、抑制病毒，可溶于水，適用于治療和預(yù)防獲得性免疫缺陷綜合癥(AIDS)和其變體。所述抗病毒產(chǎn)品制備如下收集節(jié)莎草的葉片，自然干燥，并磨成細粉；將干粉在經(jīng)100％甲醇滅菌的水中浸軟；接著，使溶液通過直徑為0.45微米的過濾器，產(chǎn)生可抗病毒、溶解病毒、抑制病毒且可溶于水的滅菌的產(chǎn)品。不同的實驗證實，所述產(chǎn)品具有抗病毒活性，對感染AIDS病毒的細胞有毒并具有破壞性作用，使所述病毒失活，并且呈現(xiàn)具有抑制病毒的能力，可溶于水，不復(fù)雜，分子大小為小于10,000Da，并顯示出對蛋白酶處理的抗性。
文檔編號A61P31/18GK102131512SQ200980133500
公開日2011年7月20日 申請日期2009年3月31日 優(yōu)先權(quán)日2009年3月31日
發(fā)明者埃里克·維德金·阿格尼·格博多蘇 申請人:埃里克·維德金·阿格尼·格博多蘇