專利名稱：片仔癀外用制劑的檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種藥物組合物的檢測方法，特別涉及中藥片仔癀外用制劑的檢測方法。
背景技術(shù)：
片仔癀外用制劑為全國獨家生產(chǎn)及中保品種1998年收載于《衛(wèi)生部藥品標準中藥成方制劑第十八冊》(標準編號WS3-B-3441-98)，目前尚需要具備更好穩(wěn)定性、重現(xiàn)性和專屬性的質(zhì)量檢測方法對該品種的質(zhì)量進行有效的控制。發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的在于提供中藥片仔癀外用制劑的檢測方法。
本發(fā)明目的是通過如下技術(shù)方案實現(xiàn)的
片仔癀外用制劑檢測方法包括如下鑒別和含量測定中的一種或幾種
鑒別取片仔癀外用制劑3_8g，置具塞錐形瓶中，加無水乙醇5_15ml，振搖使溶散，超聲處理25-35分鐘后，置冰浴中冷卻，取出，迅速過濾，取濾液3-6ml，水浴濃縮至 Ι-aiil，作為供試品溶液；另取膽酸、去氧膽酸對照品，加無水乙醇制成每Iml各含Img的混合溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VI B)試驗，吸取上述兩種溶液各2 μ 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯-醋酸-甲醇 (18-22 22-27 1-3 2-4)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇，在105°C加熱至斑點顯色清晰，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。
含量測定人參皂苷Rgl、人參皂苷Rbl照高效液相色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VI D)測定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈為流動相 A，以0. 2%磷酸溶液為流動相B，進行梯度洗脫(見下表)，從0到75分鐘乙腈-0. 2%磷酸 (15 85) — (35 65)，從 75 到 95 分鐘乙腈-0.2%磷酸(35 65) — (70 30)；柱溫 200C ；檢測波長為203nm。理論板數(shù)按人參皂苷Rgl峰計算應(yīng)不低于6000。時間(分鐘)流動相A(%)流動相B(%)
0 7515—3585-6575 9535-7065—30
對照品溶液的制備，取人參皂苷對照品和人參皂苷Rb1對照品適量，精密稱定，用甲醇制成每Iml含人參皂苷Rgl 0. lmg、人參皂苷Rbl 0. Img的混合溶液，即得；供試品溶液的制備，取片仔癀外用制劑4-8g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加甲醇20-40ml，超聲處理20-40分鐘，振搖使分散均勻，加熱回流0. 5-1小時，取出，置冰浴中冷卻，迅速過濾于50ml量瓶中，用甲醇洗滌數(shù)次，放置至室溫，用甲醇至刻度，搖勻，即得；測定法，分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得；片仔癀外用制劑每克含人參皂苷Rgl (C42H72014)和人參皂苷Rbl (C21ffi8N202 -2HC1)的總量計，不得少于 0. 70mgo
本發(fā)明質(zhì)量檢測方法優(yōu)選如下鑒別和/或含量測定的一種或幾種
鑒別取片仔癀外用制劑5g，置具塞錐形瓶中，加無水乙醇10ml，振搖使溶散，超聲處理30分鐘后，置冰浴中冷卻30分鐘，取出，迅速過濾，取濾液細1，水浴濃縮至anl， 作為供試品溶液；另取膽酸、去氧膽酸對照品，加無水乙醇制成每Irnl各含Img的混合溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VI B)試驗，吸取上述兩種溶液各2 μ 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯-醋酸-甲醇 (20 25 2 3)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇，在105°C加熱至斑點顯色清晰，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，分別顯相同顏色的熒光斑點。
含量測定人參皂苷Rgl、人參皂苷Rbl照高效液相色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VI D)測定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈為流動相A，以0. 2 %磷酸溶液為流動相B，進行梯度洗脫，從0到75分鐘乙腈-0. 2 %磷酸 (15 85) — (35 65)，從 75 到 95 分鐘乙腈-0.2%磷酸(35 65) — (70 30)；；柱溫20°C ；檢測波長為203nm。理論板數(shù)按人參皂苷Rgl峰計算應(yīng)不低于6000。
對照品溶液的制備，取人參皂苷Rgl對照品和人參皂苷Rbl對照品適量，精密稱定，用甲醇制成每Iml含人參皂苷RglO. lmg、人參皂苷RblO. Img的混合溶液，即得；供試品溶液的制備，取片仔癀外用制劑約6g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加甲醇30ml，超聲處理 (功率250W，頻率33kHz) 30分鐘，振搖使分散均勻，加熱回流1小時，取出，置冰浴中冷卻20 分鐘，迅速過濾于50ml量瓶中，用甲醇洗滌數(shù)次，放置至室溫，用甲醇至刻度，搖勻，即得； 測定法，分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得 ’片仔癀外用制劑每克含人參皂苷Rgl(C42H72014)和人參皂苷Rbl (C21ffi8N202 · 2HC1)的總量計，不得少于0. 70mg。
本發(fā)明片仔癀外用制劑是由如下重量份的原料藥組成
片仔癀粉220 450重量份、蛇藥片200 500重量份。
本發(fā)明中藥組合物原料藥優(yōu)選如下重量份
片仔癀粉250重量份、蛇藥片450重量份；或
片仔癀粉330重量份、蛇藥片350重量份；或
片仔癀粉400重量份、蛇藥片250重量份。
所述片仔癀粉和蛇藥片均可從市場購得。所述蛇藥片是指季德勝蛇藥片， 收載于中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準中藥成方制劑第十五冊107頁，標準編號 WS3-B-2914-98。
取上述本發(fā)明中藥組合物原料藥，按常規(guī)工藝，加入或不加入常規(guī)輔料制備成臨床可接受的任何一種外用劑型，如膏劑、擦劑、膜劑或酊劑等。
本發(fā)明片仔癀外用制劑軟膏劑的制備方法為
按重量比例稱取片仔癀粉，蛇藥片；片仔癀粉，溶解，備用；蛇藥片提取1-3小時， 取上清液備用；稱取甘油750 1100重量份、三乙醇胺60 100重量份，投入水相配料罐， 加入蛇藥提取的上清液，加熱至沸騰，邊攪拌邊加入上述片仔癀粉液，再次加熱至沸騰，混勻成水相，備用；稱取白凡士林850 1200重量份、硬脂酸200 420重量份、輕質(zhì)液狀石蠟500 750重量份，投入油相配料罐，加熱至全部熔化，攪勻，備用；油相和水相乳化均勻后冷卻，出料；灌裝，即得膏劑。


圖1 復方片仔癀外用制劑中膽酸、去氧膽酸的薄層色譜圖2 三七皂苷R1對照品、復方片仔癀外用制劑樣品色譜圖3 人參皂苷和Rb1對照品、復方片仔癀外用制劑樣品色譜圖
圖4 人參皂苷標準曲線圖
下述實驗和實施例用于進一步說明但不限于本發(fā)明。
實驗例1鑒別
實驗考察用樣品的規(guī)格為IOg/支；
薄層板(10X 20cm)實驗室自制板，500 μ m，105°C活化 30min。
供試品色譜中，在與膽酸、去氧膽酸對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點，陰性無干擾，方法可行。結(jié)果見圖1。
1、樣品(批號081009)
2、樣品(批號081110)
3、樣品(批號081111)
4、缺膽酸、去氧膽酸和蛇藥片陰性樣品(來源廠家提供)
5、膽酸對照品(批號100078-200414來源中國藥品生物制品檢定所)
6、去氧膽酸對照品(批號110724-200207來源中國藥品生物制品檢定所)
7、膽酸、去氧膽酸混合對照品
實驗例2含量測定
1儀器與試藥
Waters高效液相色譜儀e26951998。超聲波清洗器(型號KQ_300型，昆山市儀器有限公司)。色譜柱Waters SunFire C18 5ym 4. 6X250mm。人參皂苷！^對照品和人參皂苷Rb1對照品由中國藥品生物制品檢定所提供。方法學驗證采用復方片仔癀外用制劑樣品批號為081009。
2含量測定指標
根據(jù)高效液相實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)樣品中三七皂苷R1的含量比較低，同一樣品濃度下其峰面積與人參皂苷Rg1和Rb1的峰面積相差較大(保留時間=R1 = 31.466minRgl = 35. 083min Rb1 = 65. 430min ；峰面積=R1 = 38495 Rg1 = 221890 Rb1 = 162336，見圖 2)，而且分離度也不是很好，尚未達到基線分離，認為樣品的三七含量以人參皂苷Rg1和人參皂苷 Rb1的總量計是合理的。
3對照品溶液的制備
由于對照品的峰面積是樣品峰面積的兩倍多，故將“加甲醇制成每Iml含 0. 15mgRgl和0. ISmgRb1的混合溶液……”改為“加甲醇制成每Iml含0. ImgRg1和0. ImgRb1 的混合溶液……”
4.重復性、穩(wěn)定性和回收率等方法學考察驗證。
4. 1專屬性實驗
供試品色譜中，在與人參皂苷和Rb1對照品色譜保留時間相應(yīng)處，呈相同的色譜峰，結(jié)果見圖3。該方法可行。
4. 2 線性
分別精密稱取人參皂苷對照品和人參皂苷Rb1對照品適量，加甲醇溶解，制成每Iml含人參皂苷Rg1O. 2152mg和人參皂苷Rb1O. 1944mg混合對照品溶液(I)。精密吸取對照品溶液(I) Iml置IOml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度線，搖勻即得混合對照品溶液(II)。 精密吸取對照品溶液(II)Iml置IOml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度線，搖勻即得混合對照品溶液(III)。分別精密吸取對照品溶液⑴50μ 1、10μ 1、5μ 1，對照品溶液(ΙΙ)10μ1和對照品溶液(ΙΙΙ)20μ 1，同本發(fā)明方法色譜條件進行測定，結(jié)果見表1。以對照品進樣量 X(Ug)為橫坐標，峰面積積分值(mAU)為縱坐標，繪制標準曲線，結(jié)果見圖4，人參皂苷Rg1 回歸方程Y = 293364X+1806. 2，相關(guān)系數(shù)r = 0. 9999，表明人參皂苷在0. 04304 μ g 4. 304 μ g范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。人參皂苷Rb1回歸方程Y = 240654X+1798.8，相關(guān)系數(shù)r = 1，表明人參皂苷在0. 03888 μ g ~ 3. 888 μ g范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。
表1人參皂苷Rg1, Rb1線性關(guān)系考察表人參皂苷Rg1對照品人參皂苷Rg,峰面積平人參皂苷Rb1對照品人參皂苷1 ,峰面積
權(quán)利要求
1.一種片仔癀外用制劑的質(zhì)量檢測方法，其特征在于該方法包括如下鑒別和含量測定中的一種或幾種鑒別取片仔癀外用制劑3-8g，置具塞錐形瓶中，加無水乙醇5-15ml，振搖使溶散，超聲處理25-35分鐘后，置冰浴中冷卻，取出，迅速過濾，取濾液3-6ml，水浴濃縮至Uml，作為供試品溶液；另取膽酸、去氧膽酸對照品，加無水乙醇制成每Iml各含Img的混合溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各2 μ 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以18-22 22-27 1-3 2_4的正己烷-乙酸乙酯-醋酸-甲醇為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇，在105°C加熱至斑點顯色清晰，365nm置紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；含量測定人參皂苷Rgl、人參皂苷Rbl照高效液相色譜法測定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈為流動相A，以0. 2%磷酸溶液為流動相 B，進行梯度洗脫，從0到75分鐘乙腈-0.2%磷酸15 85 — 35 65，從75到95分鐘乙腈-0.2%磷酸35 65 — 70 30 ；柱溫20°C ；檢測波長為203nm ；理論板數(shù)按人參皂苷Rgl 峰計算應(yīng)不低于6000 ；對照品溶液的制備，取人參皂苷Rgl對照品和人參皂苷Rbl對照品適量，精密稱定，用甲醇制成每Iml含人參皂苷Rgl 0. lmg、人參皂苷Rbl 0. Img的混合溶液，即得；供試品溶液的制備，取片仔癀外用制劑4-8g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加甲醇20-40ml，超聲處理 20-40分鐘，振搖使分散均勻，加熱回流0. 5-1小時，取出，置冰浴中冷卻，迅速過濾于50ml 量瓶中，用甲醇洗滌數(shù)次，放置至室溫，用甲醇至刻度，搖勻，即得；測定法，分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得；片仔癀外用制劑每克含人參皂苷Rgl (C42H72014)和人參皂苷Rbl (C21H28N202 · 2HC1)的總量計，不得少于0. 70mg ； 片仔癀外用制劑是由如下重量份的原料藥組成 片仔癀粉220 450重量份、蛇藥片200 500重量份；取上述本原料藥，按常規(guī)工藝，加入或不加入常規(guī)輔料制備成軟膏劑、擦劑、膜劑或酊劑。
2.如權(quán)利要求1所述的片仔癀外用制劑的質(zhì)量檢測方法，其特征在于該方法包括如下鑒別和含量測定中的一種或幾種鑒別取片仔癀外用制劑5g，置具塞錐形瓶中，加無水乙醇10ml，振搖使溶散，超聲處理30分鐘后，置冰浴中冷卻30分鐘，取出，迅速過濾，取濾液細1，水浴濃縮至anl，作為供試品溶液；另取膽酸、去氧膽酸對照品，加無水乙醇制成每Iml各含Img的混合溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各2 μ 1，分別點于同一硅膠G薄層板上， 以20 25 2 3的正己烷-乙酸乙酯-醋酸-甲醇為展開劑，展開，取出，晾干，噴以 10%硫酸乙醇，在105°C加熱至斑點顯色清晰，365nm置紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；含量測定人參皂苷Rgl、人參皂苷 Rbl照高效液相色譜法測定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈為流動相A，以0.2%磷酸溶液為流動相B，進行梯度洗脫，從0到75分鐘乙腈-0.2%磷酸 15 85 ^ 35 65，從 75 到 95 分鐘乙腈-0. 2%磷酸；35 65 — 70 30;；柱溫 20°C ； 檢測波長為203nm ；理論板數(shù)按人參皂苷Rgl峰計算應(yīng)不低于6000 ；對照品溶液的制備，取人參皂苷Rgl對照品和人參皂苷Rbl對照品適量，精密稱定，用甲醇制成每Iml含人參皂苷RglO. lmg、人參皂苷RblO. Img的混合溶液，即得；供試品溶液的制備，取片仔癀外用制劑約6g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加甲醇30ml，超聲處理(功率250W，頻率33kHz) 30分鐘，振搖使分散均勻，加熱回流1小時，取出，置冰浴中冷卻20分鐘，迅速過濾于50ml量瓶中，用甲醇洗滌數(shù)次，放置至室溫，用甲醇至刻度，搖勻，即得；測定法，分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得；片仔癀外用制劑每克含人參皂苷Rgl(C42H72014)和人參皂苷Rbl (C21ffi8N202 · 2HC1)的總量計，不得少于0. 70mg。
3.如權(quán)利要求1或2所述的片仔癀外用制劑的質(zhì)量檢測方法，其特征在于該方法中原料藥組成為片仔癀粉250重量份、蛇藥片450重量份。
4.如權(quán)利要求1或2所述的片仔癀外用制劑的質(zhì)量檢測方法，其特征在于該方法中原料藥組成為片仔癀粉330重量份、蛇藥片350重量份。
5.如權(quán)利要求1或2所述的片仔癀外用制劑的質(zhì)量檢測方法，其特征在于該方法中原料藥組成為片仔癀粉400重量份、蛇藥片250重量份。
6.如權(quán)利要求1或2所述的片仔癀外用制劑的質(zhì)量檢測方法，其特征在于該方法中片仔癀軟膏劑由如下方法制成按重量比例稱取片仔癀粉，蛇藥片；片仔癀粉，溶解，備用；蛇藥片提取1-3小時，取上清液備用；稱取甘油750 1100重量份、三乙醇胺60 100重量份，投入水相配料罐，加入蛇藥提取的上清液，加熱至沸騰，邊攪拌邊加入上述片仔癀粉液，再次加熱至沸騰，混勻成水相，備用；稱取白凡士林850 1200重量份、硬脂酸200 420重量份、輕質(zhì)液狀石蠟 500 750重量份，投入油相配料罐，加熱至全部熔化，攪勻，備用；油相和水相乳化均勻后冷卻，出料；灌裝，即得膏劑。
7.如權(quán)利要求3所述的片仔癀外用制劑的質(zhì)量檢測方法，其特征在于該方法中片仔癀軟膏劑由如下方法制成按重量比例稱取片仔癀粉，蛇藥片；片仔癀粉，溶解，備用；蛇藥片提取1-3小時，取上清液備用；稱取甘油750 1100重量份、三乙醇胺60 100重量份，投入水相配料罐，加入蛇藥提取的上清液，加熱至沸騰，邊攪拌邊加入上述片仔癀粉液，再次加熱至沸騰，混勻成水相，備用；稱取白凡士林850 1200重量份、硬脂酸200 420重量份、輕質(zhì)液狀石蠟 500 750重量份，投入油相配料罐，加熱至全部熔化，攪勻，備用；油相和水相乳化均勻后冷卻，出料；灌裝，即得膏劑。
8.如權(quán)利要求4所述的片仔癀外用制劑的質(zhì)量檢測方法，其特征在于該方法中片仔癀軟膏劑由如下方法制成按重量比例稱取片仔癀粉，蛇藥片；片仔癀粉，溶解，備用；蛇藥片提取1-3小時，取上清液備用；稱取甘油750 1100重量份、三乙醇胺60 100重量份，投入水相配料罐，加入蛇藥提取的上清液，加熱至沸騰，邊攪拌邊加入上述片仔癀粉液，再次加熱至沸騰，混勻成水相，備用；稱取白凡士林850 1200重量份、硬脂酸200 420重量份、輕質(zhì)液狀石蠟500 750重量份，投入油相配料罐，加熱至全部熔化，攪勻，備用；油相和水相乳化均勻后冷卻，出料；灌裝，即得膏劑。
9.如權(quán)利要求5所述的片仔癀外用制劑的質(zhì)量檢測方法，其特征在于該方法中片仔癀軟膏劑由如下方法制成按重量比例稱取片仔癀粉，蛇藥片；片仔癀粉，溶解，備用；蛇藥片提取1-3小時，取上清液備用；稱取甘油750 1100重量份、三乙醇胺60 100重量份，投入水相配料罐，加入蛇藥提取的上清液，加熱至沸騰，邊攪拌邊加入上述片仔癀粉液，再次加熱至沸騰，混勻成水相，備用；稱取白凡士林850 1200重量份、硬脂酸200 420重量份、輕質(zhì)液狀石蠟 500 750重量份，投入油相配料罐，加熱至全部熔化，攪勻，備用；油相和水相乳化均勻后冷卻，出料；灌裝，即得膏劑。
全文摘要
本發(fā)明公開一種片仔癀的質(zhì)量檢測方法，其特征在于該方法包括如下鑒別和含量測定，鑒別片仔癀細粉制成作為供試品溶液；再取人參皂苷Rb1、人參皂苷Rg1、三七皂苷R1或膽酸、去氧膽酸制成對照品溶液；照薄層色譜法(中國藥典2005年一部附錄VI B)試驗，供試品色譜中，分別在與對照藥材及對照品色譜的相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點；含量測定照高效液相色譜法測定，片仔癀外用制劑每克含人參皂苷Rg1(C42H72O14)和人參皂苷Rb1(C21H28N2O2·2HCl)的總量計，不得少于0.70mg。
文檔編號A61P17/02GK102475727SQ20091009239
公開日2012年5月30日 申請日期2009年9月11日 優(yōu)先權(quán)日2009年9月11日
發(fā)明者于娟, 夏松, 洪緋, 王少婷, 陳啟蘭, 陳紀鵬 申請人:漳州片仔癀藥業(yè)股份有限公司