專利名稱：一種高純度紫杉醇及其衍生物的提取方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于天然化學(xué)物質(zhì)提取技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及紫杉醇及其衍生物的提取方 法，特別是從曼地亞紅豆杉枝葉中提取高純度紫杉醇及其衍生物的方法。
背景技術(shù)：
紫杉醇、紫杉醇注射液已收載于現(xiàn)行美國藥典和中國國家藥品標(biāo)準(zhǔn)中，用于治療 轉(zhuǎn)移性卵巢癌和乳腺癌、肺癌、食管癌。紫杉醇，英文名稱Paclitaxel，分子式C47H51NO14，分 子量853. 92，白色結(jié)晶性粉末，無臭、無味，美國藥典和中國國家藥品標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定其純度要求 是，按干燥品計算，含C47H51NO14應(yīng)為98. 0%~ 102.0%。紫杉醇是繼阿霉素后最熱點的抗癌新藥之一。目前，生產(chǎn)紫杉醇的原料主要來源 于紅豆杉樹皮，由于樹皮為不可再生資源，供應(yīng)有限，而葉片中紫杉醇含量又很低，導(dǎo)致提 取紫杉醇的原料十分匱乏。紫杉醇的提取非常困難，特別是工業(yè)化提取更難，例如，200610047378. 2公開 的“一種高效分離純化紫杉醇的方法”中，僅獲得了 紫杉醇含量的提取物，出膏率約為 1.36%。造成紫杉醇提取困難的主要原因為1)紫杉醇在植物中的含量極低，目前，紫杉醇 含量最高的曼地亞紅豆杉中也只達(dá)到0.017 0.046%。2)紫杉醇作為一種生物大分子物 質(zhì)，受溫度、有機溶劑、酸、堿等環(huán)境條件的影響，易降解或異構(gòu)生成其他紫杉烷類物質(zhì)，如 紫杉醇在強酸性或弱堿性條件下會降解為巴卡亭III或發(fā)生表位異構(gòu)生成7-表紫杉醇；溫 度較高時也會發(fā)生降解反應(yīng)，生成相應(yīng)的小分子物質(zhì)。3)紫杉醇除了以游離態(tài)存在于植物 體外，還常常以結(jié)合態(tài)存在，即形成紫杉醇鍵合物如7-木糖紫杉醇、7-木糖基-10-去乙酰 紫杉醇等。由于糖基是水溶性的，導(dǎo)致這些紫杉醇鍵合物也具有水溶性，不溶于脂，而紫杉 醇在水中的溶解度很低，屬于脂溶性物質(zhì)，所以結(jié)合態(tài)的紫杉醇在提取過程中一般會有損 失。分布于北美加拿大的曼地亞紅豆杉是東北紅豆杉T. cuspidate和歐洲紅豆杉 T. baccata的天然雜交種，不僅在樹皮中含有紫杉醇，且4 5年生植物的葉子中的紫杉醇 含量與生長70 80年的天然紅豆杉樹皮中的紫杉醇含量相當(dāng)。曼地亞紅豆杉為灌木植物， 枝葉萌發(fā)力強，生物量大，已在我國引種成功，是用紅豆杉屬植物提取紫杉醇的最佳替代原 料。存在于紅豆杉枝葉中的紫杉烷萜類化合物不僅自身具有抗癌活性，還可以作為合 成紫杉醇或其類似物的前體，例如10-去乙酰基巴卡亭III本身不具有抑制腫瘤的作用，但 利用它可以合成比紫杉醇具有更高抗癌活性的多西紫杉醇，因此，提取紫杉醇衍生物同樣
具有重要意義。然而，從曼地亞紅豆杉枝葉中提取分離紫杉醇也有著特有的困難枝葉中的色素、 蠟質(zhì)、鞣質(zhì)酸等含量比樹皮中要高，雜質(zhì)處理更加困難；人們推測紫杉醇鍵合物可能是紫杉 醇在植物體內(nèi)運輸?shù)囊环N特殊形式，一般認(rèn)為紫杉醇的合成部位是嫩芽、枝葉或根、莖等， 而儲存部位是樹皮，所以以一般的方法從曼地亞紅豆杉整株中提取紫杉醇將會損失更多的結(jié)合態(tài)紫杉醇。因此，目前從曼地亞紅豆杉枝葉中提取紫杉醇及其衍生物的主要方法存在著提取 效率低、成分損失大、成本過高、工業(yè)化水平低等缺點，特別是紫杉醇提取物干膏中的紫杉 醇含量很低，紫杉醇衍生物含量更低，雜質(zhì)高，為后續(xù)純化分離成藥品紫杉醇、純紫杉醇衍 生物造成了很大的困難。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種高純度紫杉醇及其衍生物的提取方法，該方法從曼地亞 紅豆杉枝葉中提取紫杉醇及其衍生物，提取過程中紫杉醇及其衍生物損失少，提取物干膏 中紫杉醇及其衍生物含量高、雜質(zhì)少。本發(fā)明一種高純度紫杉醇及其衍生物的提取方法包括以下步驟1)將曼地亞紅豆杉枝葉干燥至水分10%以下，粉碎成80 120目的曼地亞紅豆 杉枝葉粉末；2)向曼地亞紅豆杉枝葉粉末中加入占其重量10倍體積的甲醇，室溫下浸提12小 時以上，再于35 45 °C浸提3 4小時，冷卻，過濾，得濾渣1，濾液減壓回收甲醇，得濃縮 液1 ；3)取濾渣1，加入體積為紅豆杉枝葉粉末重量8倍的甲醇，于35 45°C浸提3 4小時，放置12小時以上，過濾，得濾渣2，濾液減壓回收甲醇，得濃縮液2 ；4)取濾渣2，以體積為曼地亞紅豆杉枝葉粉末重量8倍的甲醇滲漉提取，滲漉液減 壓回收甲醇，得濃縮液3;5)將濃縮液1、濃縮液2、濃縮液3合并，得紫杉醇及其衍生物提取液，加入與提取 液等體積的石油醚脫脂，再加入與提取液等體積的正己烷脫脂，得紫杉醇及其衍生物稠膏。6)將紫杉醇及其衍生物稠膏低溫干燥成干膏，得到高純度紫杉醇及其衍生物。本發(fā)明中，所述曼地亞紅豆杉枝葉的干燥溫度不超過45°C ；曼地亞紅豆杉枝葉粉 末的粒度優(yōu)選100目。在曼地亞紅豆杉枝葉粉末的提取全過程中，要避免接觸酸堿，同時要避免高溫，一 般的甲醇浸提溫度不宜超過35 45°C，優(yōu)選40°C。在使用石油醚對紫杉醇及其衍生物的提取液進行脫脂時，最好是選擇沸程為 60 90°C的石油醚。剛開始干燥紫杉醇及其衍生物稠膏時，溫度不宜超過40°C ；干燥到水分小于30% 以后，溫度可適當(dāng)提高，但不宜超過45°C ；干燥到水分小于20%以后，可提高到不超過50°C 的溫度干燥。本發(fā)明選擇曼地亞紅豆杉枝葉作為紫杉醇及其衍生物的提取原材料，主要是考慮 到曼地亞紅豆杉在我國已經(jīng)引種成功，其枝葉屬于可再生資源，解決了紫杉醇及其衍生物 的原材料來源問題。本發(fā)明選擇甲醇作為提取溶劑，一方面是考慮到甲醇的沸點較低，沸程僅為64 65°C，減壓回收甲醇的過程，同時也是紫杉醇及其衍生物提取液的濃縮過程，由于提取過程 條件溫和，特別是溫度控制得當(dāng)，在此過程中紫杉醇及其衍生物不會發(fā)生高溫降解。另一方 面，甲醇的極性較高，能夠以氫鍵的形式與結(jié)合態(tài)紫杉醇結(jié)合，將曼地亞紅豆杉枝葉中的結(jié)合態(tài)紫杉醇最大限度地提取出來，紫杉醇及其衍生物提取完全，成分損失很少。盡管本發(fā)明 中甲醇的用量比較大，但是絕大部分可以回收精制再使用，使用成本低。因此，盡 管曼地亞紅豆杉枝葉中的雜質(zhì)處理困難，但按照本發(fā)明提供的提取方 法，生產(chǎn)出的紫杉醇及其衍生物提取物干膏的紫杉醇含量能達(dá)到約4%，出膏率約0. 6 0.7%，不僅提取完全、純度高、雜質(zhì)少，而且為后續(xù)工業(yè)化或非工業(yè)化純化分離藥品紫杉 醇、純紫杉醇衍生物創(chuàng)造了更加有利的條件。
具體實施例方式實施例1取適量曼地亞紅豆杉枝葉，40°C真空干燥，以干燥失重法測得含水分為8. 5%。將 干燥后的曼地亞紅豆杉枝葉粉碎成100目的粉末，稱取200g，裝于布袋內(nèi)，加入2000mL甲 醇，放置過夜(約15小時)，加熱至40°C回流提取3. 5小時，自然冷卻后，過濾，得濾渣1， 濾液減壓回收甲醇后，得濃縮液1。在濾渣1內(nèi)加甲醇1600mL，4(TC回流提取3小時，放置 過夜(約15小時)，過濾，得濾渣2，濾液減壓回收甲醇后，得濃縮液2。將濾渣2用1600mL 甲醇進行滲漉提取，滲漉液減壓回收甲醇后，得濃縮液3。合并濃縮液1、濃縮液2和濃縮液 3，先以等體積的石油醚(60°C 90°C )脫脂，再用等體積的正己烷脫脂，除盡甲醇，40°C常 壓干燥成半流體，再于45°C減壓干燥成半干的固體，最后在50°C減壓干燥成固體干膏，得 到的干膏重1. 31g，紫杉醇含量51mg。實施例2取適量曼地亞紅豆杉枝葉，陰干，以干燥失重法測得含水分為9. 2%。將干燥后的 曼地亞紅豆杉枝葉粉碎成100目的粉末，稱取5kg，裝于布袋內(nèi)，加入50L甲醇，放置過夜 (約15小時)，加熱至401回流提取3.5小時，自然冷卻后，過濾，得濾渣1，濾液減壓回收甲 醇后，得濃縮液1。在濾渣1內(nèi)加入40L甲醇，40°C回流提取3. 5小時，放置過夜(約15小 時)，過濾，得濾渣2，濾液減壓回收甲醇后，得濃縮液2。將濾渣2用40L甲醇滲漉提取，滲 漉液減壓回收甲醇后，得濃縮液3。合并濃縮液1、濃縮液2和濃縮液3，先以等體積的石油 醚(60°C 90°C)脫脂，再用等體積的正己烷脫脂，除盡甲醇，于40°C常壓干燥成半流體，再 于45°C減壓干燥成半干的固體，最后在50°C減壓干燥成固體干膏，得到的干膏重31. 52g， 紫杉醇含量1. 25g。實施例3將適量曼地亞紅豆杉枝葉于40°C烘干，干燥失重法測得含水分為9. 1 %。將干燥 后的曼地亞紅豆杉枝葉粉碎成100目的粉末，稱取200kg，裝于布袋內(nèi)，加入2000L甲醇，放 置過夜(約15小時)，加熱至40°C回流提取3小時，自然冷卻后，過濾，得濾渣1，濾液減壓 回收甲醇后，得濃縮液1。在濾渣1內(nèi)加入1600L甲醇，40°C回流提取4小時，放置過夜(約 15小時)，過濾，得濾渣2，濾液減壓回收甲醇后，得濃縮液2。將濾渣2用1600L甲醇滲漉 提取，滲漉液減壓回收甲醇后，得濃縮液3。合并濃縮液1、濃縮液2和濃縮液3，先以等體積 的石油醚(60°C 90°C)脫脂，再用等體積的正己烷脫脂，除盡甲醇，于40°C常壓干燥成半 流體，再于45°C減壓干燥成半干的固體，最后在50°C減壓干燥成固體干膏，得到的干膏重 1.26kg，紫杉醇含量50. 85g。
權(quán)利要求
一種高純度紫杉醇及其衍生物的提取方法，包括以下步驟1)將曼地亞紅豆杉枝葉干燥至水分10％以下，粉碎成80～120目的曼地亞紅豆杉枝葉粉末；2)向曼地亞紅豆杉枝葉粉末中加入占其重量10倍體積的甲醇，室溫下浸提12小時以上，再于35～45℃浸提3～4小時，冷卻，過濾，得濾渣1，濾液減壓回收甲醇，得濃縮液1；3)取濾渣1，加入體積為紅豆杉枝葉粉末重量8倍的甲醇，于35～45℃浸提3～4小時，放置12小時以上，過濾，得濾渣2，濾液減壓回收甲醇，得濃縮液2；4)取濾渣2，以體積為曼地亞紅豆杉枝葉粉末重量8倍的甲醇滲漉提取，滲漉液減壓回收甲醇，得濃縮液3；5)將濃縮液1、濃縮液2、濃縮液3合并，得紫杉醇及其衍生物提取液，加入與提取液等體積的石油醚脫脂，再加入與提取液等體積的正己烷脫脂，得紫杉醇及其衍生物稠膏。6)將紫杉醇及其衍生物稠膏低溫干燥成干膏，得到高純度紫杉醇及其衍生物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高純度紫杉醇及其衍生物的提取方法，其特征是所述曼地亞 紅豆杉枝葉的干燥溫度不超過45°C。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高純度紫杉醇及其衍生物的提取方法，其特征是所述曼地亞 紅豆杉枝葉粉末的粒度優(yōu)選100目。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高純度紫杉醇及其衍生物的提取方法，其特征是所述曼地亞 紅豆杉枝葉粉末的甲醇浸提溫度優(yōu)選40°C。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高純度紫杉醇及其衍生物的提取方法，其特征是所述的石油 醚是沸程為60 90°C的石油醚。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高純度紫杉醇及其衍生物的提取方法，其特征是將紫杉醇及 其衍生物稠膏低溫干燥成干膏的溫度不超過50°C。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種高純度紫杉醇及其衍生物的提取方法，特別是一種從曼地亞紅豆杉枝葉中提取高純度紫杉醇及其衍生物的方法，是將曼地亞紅豆杉枝葉干燥粉碎，以甲醇浸提三次，將三次提取液分別減壓回收甲醇后合并，分別以等體積的石油醚(60℃～90℃)和正己烷脫脂，在不超過50℃條件下干燥成干膏。本發(fā)明提供的提取方法紫杉醇及其衍生物提取完全，純度高、雜質(zhì)少，為后續(xù)工業(yè)化或非工業(yè)化純化分離藥品紫杉醇、純紫杉醇衍生物創(chuàng)造了更加有利的條件。
文檔編號A61P35/00GK101869586SQ20091007422
公開日2010年10月27日 申請日期2009年4月22日 優(yōu)先權(quán)日2009年4月22日
發(fā)明者張鵬 申請人:張鵬