專利名稱：Cfms抑制劑用于治療或預(yù)防骨癌以及與骨癌相關(guān)的骨丟失和骨痛的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及治療或預(yù)防骨癌和來(lái)自其他原發(fā)部位的骨轉(zhuǎn)移，以及預(yù)防和治療與癌 轉(zhuǎn)移相關(guān)的骨丟失和骨疼的方法。
背景技術(shù)：
骨癌是相對(duì)罕見(jiàn)的疾病，在該疾病中癌細(xì)胞在骨組織中生長(zhǎng)。癌可在骨中形成或 可從體內(nèi)的其他部位擴(kuò)散至骨中。當(dāng)癌在骨組織中開(kāi)始時(shí)，其稱為原發(fā)性骨癌。當(dāng)癌細(xì)胞 從別的地方轉(zhuǎn)移至骨中時(shí)，其稱為繼發(fā)性骨癌或轉(zhuǎn)移性骨癌。骨癌的類型包括骨肉瘤，其 為骨的癌性腫瘤，通常是手臂、腿或骨盆的癌性腫瘤(最常見(jiàn)的原發(fā)性癌)；軟骨肉瘤，即軟 骨的癌(第二最常見(jiàn)的原發(fā)性癌)；尤因氏肉瘤，其為通常在腿骨和上肢骨的骨腔中發(fā)展的 腫瘤；纖維肉瘤和惡性纖維組織細(xì)胞瘤，其在諸如腱、韌帶、脂肪、肌肉之類的軟組織中發(fā)展 并轉(zhuǎn)移至腿骨、上肢骨和頌骨的癌；巨細(xì)胞瘤，其為一種僅在約10%的時(shí)間里惡性并且最 常見(jiàn)于上肢骨或腿骨中的原發(fā)性骨腫瘤；以及脊索瘤，其為一種通常出現(xiàn)在顱骨和脊柱中 的原發(fā)性骨腫瘤。骨轉(zhuǎn)移在患有實(shí)體瘤惡性腫瘤(包括末期乳腺癌、前列腺癌和肺癌)的患者中發(fā) 生頻率高(Mundy G. R.，Nat Rev Cancer 2002 ；2 :584_93)。骨骼中的轉(zhuǎn)移性腫瘤可導(dǎo)致嚴(yán) 重的病態(tài)，包括骨折、高血鈣癥和疼痛。該疼痛通常會(huì)產(chǎn)生對(duì)阿片療法的抗性，并且產(chǎn)生自 兩個(gè)主要來(lái)源生長(zhǎng)中的腫瘤對(duì)受神經(jīng)支配的骨膜的侵害和骨骼不穩(wěn)定(Sabino MA等人， JSupport Oncol 2005;3:15-24)。后者是破骨細(xì)胞介導(dǎo)的骨質(zhì)侵蝕的副作用。在這種背景下，慣用的兩者治療方法包括放射療法以使腫瘤體萎縮，以及高劑量 二膦酸鹽(即帕米膦酸和唑來(lái)膦酸)以耗竭破骨細(xì)胞和減少骨質(zhì)溶解(Saarto T等人，Eur J Pain 2002 ；6 323330 ；和 MystakidouK 等人，Cancer Treat Rev 2005 ；31 303 311)。放射療法不能解決通常伴隨著骨轉(zhuǎn)移的軟組織轉(zhuǎn)移。另外，在大多數(shù)患者中雙膦 酸鹽可延緩( 35%)但不能防止骨骼事件，并且伴隨著顯著的骨毒性(骨壞死)。而且， 多數(shù)現(xiàn)有的化學(xué)療法直接靶向腫瘤細(xì)胞，但在許多癌中的功效不同，并通常伴隨出現(xiàn)使人 虛弱的副作用，不能長(zhǎng)期施用。此外，晚期癌由于它們固有的遺傳不穩(wěn)定性而傾向于產(chǎn)生對(duì) 化學(xué)療法的抗性。由于這些原因，人們對(duì)于了解和探索腫瘤對(duì)宿主微環(huán)境的依賴性的興趣 日益濃厚(Joyce J.，Cancer Cell 2005 ；7 :513_520)。一個(gè)重要的新興觀點(diǎn)是，腫瘤相關(guān)的巨噬細(xì)胞可促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移(參見(jiàn)例 如，Pollard Jff.，Nature Reviews Cancer 2004 ；4 -Jl-IS ；禾口 BingleL 等人，J Pathol 2002 ； 196 254-265)。在大多數(shù)腫瘤中巨噬細(xì)胞占細(xì)胞的5%至50%，并且長(zhǎng)期以來(lái)被認(rèn)為是腫瘤免疫
23的組分(Wood GW 等人，J Natl Cancer Inst 1977 ;59 1081-7 ；和 Kelly PMA 等人，BrJ Cancer 1988;57:174-177)。然而，許多最近的證明巨噬細(xì)胞數(shù)目、血管生成和腫瘤發(fā)展之 間有直接關(guān)系的研究(參見(jiàn)Bingle L等人，J Pathol 2002 ； 196 :254_265和Valkovic T 等人，VirchowsArch 2002 ；440 583 588)已迫使要重新考慮巨噬細(xì)胞在腫瘤微環(huán)境中的
潛在作用?，F(xiàn)在越來(lái)越多的證據(jù)表明，腫瘤相關(guān)的巨噬細(xì)胞(TAM)可促進(jìn)腫瘤血管生成和 生長(zhǎng)。TAM會(huì)響應(yīng)腫瘤的微環(huán)境而被“選擇性激活”，以產(chǎn)生能支持腫瘤生長(zhǎng)的生長(zhǎng)因子和 細(xì)胞因子，包括VEGF、血小板衍生生長(zhǎng)因子(PDGF)、堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bFGF)和 TGF-β 1、基質(zhì)金屬蛋白酶-9(ΜΜΡ-9)和尿激酶型纖溶酶原激活物(uPA) (Mantovani A.等 人，Trends in Immunology 2002;23:549-555)。值得注意的是，在某些腫瘤中TAM已被鑒 定為表皮生長(zhǎng)因子(EGF)的主要來(lái)源。實(shí)際上，若干研究已表明，在臨床前模型中化學(xué)法或遺傳法耗減TAM可導(dǎo)致腫瘤 生長(zhǎng)抑制(參見(jiàn)例如，van Rooijen N等人，Methods Enzymol 2003 ；373 3-16 ；De Palma M 等人，Cancer Cell 2005 ；8 211~226 ；Nowickki A等人，Int J Cancer 1996 ；65 :112_119 ； Aharinejad S 等 人’ Cancer Res 2002；62 :5317_5324 ；Aharinejad S 等 人’ Cancer Res2004 ；64 :5378_5384 ；禾口 Paulus P 等人，Cancer Res 2006 ；66 :4349_56)。巨噬細(xì)胞譜系部分地依賴于集落刺激因子-I(CSF-I)(參見(jiàn)例如，Pollard, J. W.等人，Adv in Devel Biochem 1995;4:153-193)。FMS 是 III 類受體酪氨酸激酶，其 負(fù)責(zé)巨噬細(xì)胞譜系生長(zhǎng)因子、集落刺激因子-I(CSF-I)進(jìn)行的所有細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。由于 CSF-I在腫瘤誘導(dǎo)的破骨細(xì)胞形成中起關(guān)鍵作用，所以抑制FMS預(yù)期可提供防止轉(zhuǎn)移性骨 疾病中骨質(zhì)溶解的機(jī)制。另外，小鼠遺傳學(xué)分析更具體地將CSF-I與腫瘤生長(zhǎng)和發(fā)展?fàn)可?起來(lái)。Lewis肺癌在CSF-I缺陷型小鼠中生長(zhǎng)不良(Nowicki A等人，Int J Cancer 1996 ； 65 =112119)。此外，已證實(shí)系統(tǒng)性地遞送CSF-I反義核酸和中和性抗CSF-I抗體可降低幾 種人腫瘤異種移植物的生長(zhǎng)速率(Paulus P等人，Cancer Res 2006 ；66 =43494356) 生長(zhǎng) 抑制與TAM減少和微血管密度較低相關(guān)。50%至85%的患有晚期乳腺癌和前列腺癌的患者將會(huì)被診斷有骨轉(zhuǎn)移(Roodman GD.，NEJM 2004 ；350 1655-64)。在晚期肺癌患者中骨轉(zhuǎn)移率稍低(大約30% )，這僅是因 為該疾病發(fā)展和致死較快。盡管進(jìn)行雙膦酸鹽療法，但大多數(shù)骨轉(zhuǎn)移患者將經(jīng)歷骨骼事件 (如劇烈骨痛、骨折或高鈣血癥)。取決于是破骨活動(dòng)占優(yōu)勢(shì)還是成骨活動(dòng)占優(yōu)勢(shì)，轉(zhuǎn)移性骨病變?cè)诒举|(zhì)上可以是 溶解性或硬化性的；如果這兩種過(guò)程活躍性相當(dāng)，則將它們稱為混合病變。乳腺癌患者中 的骨轉(zhuǎn)移通常涉及溶骨性疾病，在該疾病中正常的骨穩(wěn)態(tài)被破壞而偏向過(guò)度的骨再吸收 (Coleman RE, CancerTreat Rev. 27(3)，165-76(2001))。腫瘤相關(guān)的骨質(zhì)侵蝕因有利于破骨細(xì)胞形成和破骨細(xì)胞激活的微環(huán)境而加劇 (Roodman GD.，Biology of osteoclast activation in cancer. JClin Oncol 2001 ；19 3562-3571)。CSF-I由腫瘤表達(dá)并且是破骨細(xì)胞的關(guān)鍵分化因子，CSF-I缺陷型幼小鼠中 幾乎完全沒(méi)有破骨細(xì)胞即為例證(Pollard，J. W.等人，Adv in Devel Biochem 1995 ；4 153-193)。CSF-I不僅驅(qū)動(dòng)破骨細(xì)胞前體(即巨噬細(xì)胞)的增殖和分化，而且其為破骨細(xì)胞前
24體分化成破骨細(xì)胞所需要的，該分化在部分上是RANK的增強(qiáng)表達(dá)所致(Kitaura H等人，J Clin Invest ；2005 ；115 :3418_27)。盡管激活性FMS突變?cè)谌祟惏┌Y中罕見(jiàn)，但FMS的異位表達(dá)可能在某些腫瘤中驅(qū) 動(dòng)增殖。對(duì)原發(fā)性腫瘤的組織學(xué)檢查表明，在許多乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌、子宮癌、子宮 內(nèi)膜癌、肝細(xì)胞癌和鱗狀細(xì)胞癌中FMS表達(dá)較高(Kascinski B. , Cancer Treat Res 2002 ； 107 :285292)。表達(dá)FMS的肺癌和乳腺癌腫瘤系更具侵潤(rùn)性，并且已認(rèn)為乳腺癌中的FMS表 達(dá)與預(yù)后差相關(guān)聯(lián)(Kluger HM 等人，Clin Cancer Res 2004 ;10 :173177)?；加泄寝D(zhuǎn)移的患者會(huì)經(jīng)歷相當(dāng)多的病態(tài)，包括骨痛、病理性骨折、高鈣血癥、運(yùn)動(dòng) 性降低和脊髓或神經(jīng)根壓迫。盡管這些臨床問(wèn)題很重要，但對(duì)于與癌轉(zhuǎn)移相關(guān)的骨損失幾 乎沒(méi)有可用的治療方法。因而，在本領(lǐng)域中仍有需要去鑒定新的藥劑和方法以供預(yù)防或治 療癌轉(zhuǎn)移，包括骨轉(zhuǎn)移以及相關(guān)的骨損失和骨痛(參見(jiàn)例如，WO 2007/081879)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明涉及治療或預(yù)防骨癌和來(lái)自其他原發(fā)部位的骨轉(zhuǎn)移，以及預(yù)防和治療與癌 轉(zhuǎn)移相關(guān)的骨損失和骨痛的方法，此類方法利用W02006/047277(于2005年10月20日作為 PCT/US2005/037868提交)中所述的某些化合物，特別是在WO 2006/047277中描述為實(shí)例 38a和本文中描述為JNJ-141的4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸{2-環(huán)己-1-烯基_4-[1_(2-二 甲氨基_乙酰基)_哌啶-4-基]-苯基}_酰胺或其溶劑化合物、水合物、互變異構(gòu)體或可 藥用鹽，藉此將WO 2006/047277的公開(kāi)內(nèi)容以引用的方式全文并入本文。


圖1JNJ-141的結(jié)構(gòu)和細(xì)胞活性A JNJ-141的結(jié)構(gòu)。B 將具有重組CSF-IR表達(dá)的 穩(wěn)定的HEK細(xì)胞系用梯度濃度的JNJ-141預(yù)處理30分鐘，然后用25ng/ml CSF-I處理10分 鐘。將細(xì)胞裂解，并如本文實(shí)驗(yàn)部分所描述通過(guò)免疫印跡分析對(duì)裂解物進(jìn)行磷酸化CSF-IR 和總CSF-IR評(píng)估。圖2JNJ-141抑制體內(nèi)CSF-1R。將B6C3R1小鼠用JNJ-141 口服給藥八小時(shí)，然后 尾靜脈注射0.8毫克(yg)重組CSF-1。十五分鐘后，處死小鼠并如本文實(shí)驗(yàn)部分所述測(cè)量 脾臟裂解物中的c-fos mRNA。在小鼠中JNJ-141劑量依賴性地抑制了 CSF-I誘導(dǎo)的c-fos mRNA誘導(dǎo)作用。圖3JNJ-141減緩了 H460人肺腫瘤異種移植物在裸鼠中的生長(zhǎng)。在對(duì)裸鼠用 IXlO6個(gè)H460細(xì)胞皮下接種三天后，開(kāi)始每日兩次(周末每日一次)用溶媒或JNJ-141以 25、50或100mg/kg進(jìn)行口服給藥。A 用卡鉗測(cè)量法測(cè)定腫瘤體積。B:在第28天，處死小 鼠，切取腫瘤并稱重。C:在指定的日期測(cè)定小鼠體重。所有數(shù)值均示出了平均值和標(biāo)準(zhǔn)誤 差。*相對(duì)溶媒對(duì)照ρ < 0. 05。**相對(duì)溶媒對(duì)照ρ < 0. 01。圖4JNJ-141減少了腫瘤相關(guān)的巨噬細(xì)胞和微血管形成。第28天，從用溶媒處理 的小鼠(A和C)和用100mg/kg JNJ-141處理的小鼠(B和D)采集腫瘤。將腫瘤在福爾馬 林中固定并檢測(cè)石蠟包埋的切片的F4/80+巨噬細(xì)胞(A和B)，或?qū)⒛[瘤冷凍并檢測(cè)冷凍切 片的CD31+微脈管系統(tǒng)(C和D)，如本文實(shí)驗(yàn)部分所述。圖5JNJ-141防止了具有MRMT-I腫瘤的脛骨的骨質(zhì)侵蝕。將鹽水㈧或3X IO4個(gè)大鼠同系MRMT乳腺癌細(xì)胞(B-D)接種進(jìn)大鼠的左脛骨中。在第3天開(kāi)始，將大鼠用溶媒 (B)或用20mg/kg JNJ-141 (C)每日兩次給藥，或用30 μ g/kg唑來(lái)膦酸鹽(D)每隔一日皮下 給藥。在第17天，處死大鼠并通過(guò)顯微計(jì)算機(jī)輔助斷層攝影技術(shù)進(jìn)行評(píng)估脛骨。圖6JNJ-141防止了具有MRMT-I腫瘤的脛骨中的骨質(zhì)侵蝕并清除了破骨細(xì)胞。將 鹽水㈧或3X IO4個(gè)大鼠同系MRMT乳腺癌細(xì)胞(B-G)接種進(jìn)大鼠的左脛骨中。在第3天 開(kāi)始，將大鼠用溶媒(B和E)或20mg/kgJNJ-141 (C和F)每日兩次給藥，或用30 μ g/kg唑 來(lái)膦酸鹽(D和G)每隔一日皮下給藥。在第17天，處死大鼠并切取左后肢，固定并脫鈣，將 石蠟包埋的切片在H&E中對(duì)TRAP+細(xì)胞進(jìn)行染色和輕度復(fù)染色。在暗視野下拍攝代表性的 骺骨小梁顯微照片(40x原物)(A-D)，以便使生長(zhǎng)板下的骨小梁能最佳顯影。提供了代表性 的骨膜腫瘤的顯微照片(200x原物)(E-G)。注意到用溶媒處理的荷瘤大鼠中骨小梁幾乎完 全丟失，而JNJ-141和唑來(lái)膦酸鹽提供了保護(hù)作用(A-D)。雖然這兩種藥劑都耗減了骨小梁 中的破骨細(xì)胞，但注意到多核的、腫瘤相關(guān)的破骨細(xì)胞仍然存在于唑來(lái)膦酸鹽處理過(guò)的大 鼠中(G)，而不存在于用JNJ-141處理過(guò)的大鼠中(F)。圖7JNJ-141防止了轉(zhuǎn)移性骨痛的發(fā)生。與用介質(zhì)接種的動(dòng)物相比，將MRMT-I細(xì) 胞接種進(jìn)脛骨近端，在最終時(shí)間點(diǎn)時(shí)顯著增加了用MRMT-I細(xì)胞接種的動(dòng)物中的機(jī)械性異 常性疼痛；P < 0. 01。用嗎啡處理患病動(dòng)物自第二個(gè)時(shí)間點(diǎn)起逆轉(zhuǎn)了異常性疼痛，而與用腫 瘤接種的動(dòng)物相比較而言用20mpk或60mpk JNJ-141處理在最終時(shí)間點(diǎn)減少了異常性疼痛 (P分別小于0. 05和0. 01)。與用腫瘤接種的動(dòng)物相比較，唑來(lái)膦酸鹽處理也減少了異常性 疼痛，但這一作用未達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性。圖中的數(shù)值表示組平均值士SEM。通過(guò)本發(fā)明的如下具體實(shí)施方式
和權(quán)利要求書，本發(fā)明的其他特征和優(yōu)點(diǎn)將顯而 易見(jiàn)。
具體實(shí)施方式
術(shù)語(yǔ)“包含”、“包括”和“含有”在本文中是以它們開(kāi)放的、非限制件的意義使用。
縮寫
本文所用的下列縮寫旨在具有如下含義(另外的縮寫在本說(shuō)明書中需要的地方提供)
ATP三磷酸腺苷
Boc 或 BOC叔丁氧羰基
DCM二氯甲烷
DMF二甲基甲酰胺
DMSO二甲亞砜
DIEA二異丙基乙胺
EDCI1- (3- 二甲基氨丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽
EDTA乙二胺四乙酸
EtOAc乙酸乙酯
FP熒光偏振
HOBT 或 HOBt1-羥基苯并三唑水合物
LC/MS(ESI)液相色譜/質(zhì)譜(電噴射電離)
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甲醇
核磁共振
三氟乙酸 四氫呋喃 薄層色譜法^Ji除非另外指明，否則術(shù)語(yǔ)“烷基”指具有最多12個(gè)碳原子，優(yōu)選最多6個(gè)碳原子的 直鏈的和支鏈的基團(tuán)，包括(但不限于)甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、仲丁基、叔 丁基、戊基、異戊基、己基、異己基、庚基、辛基、2，2，4_三甲基戊基、壬基、癸基、i^一烷基和
十·~ 焼基。術(shù)語(yǔ)“羥烷基”指具有最多6個(gè)碳原子的直鏈的和支鏈的基團(tuán)，其中一個(gè)氫原子已 被OH基取代。術(shù)語(yǔ)“羥烷基氨基”指其中碳鏈上的一個(gè)氫原子已被氨基取代的羥烷基，其中氮是 與分子的其他部分的連接點(diǎn)。術(shù)語(yǔ)“環(huán)烷基”指由3至8個(gè)碳原子構(gòu)成的飽和的或部分飽和的環(huán)。在該環(huán)上任 選可存在最多四個(gè)烷基取代基。例子包括環(huán)丙基、1，1-二甲基環(huán)丁基、1，2，3_三甲基環(huán)戊 基、環(huán)己基、環(huán)戊烯基、環(huán)己烯基和4，4- 二甲基環(huán)己烯基。術(shù)語(yǔ)“二氫砜代吡喃基(dihydrosulfonopyranyl) ”指如下基團(tuán)術(shù)語(yǔ)“羥烷基”指至少一個(gè)羥基鍵合至烷基鏈上的任何碳原子。術(shù)語(yǔ)“氨基烷基”指至少一個(gè)伯氨基或仲氨基鍵合至烷基鏈上的任何碳原子，其中 烷基為與分子的其他部分的連接點(diǎn)。術(shù)語(yǔ)“烷基氨基”指具有一個(gè)烷基取代基的氨基，其中所述氨基為與分子的其他部 分的連接點(diǎn)。術(shù)語(yǔ)“二烷基氨基”指具有兩個(gè)烷基取代基的氨基，其中所述氨基為與分子的其他 部分的連接點(diǎn)。術(shù)語(yǔ)“雜芳族”或“雜芳基”指5至7元單環(huán)或8至10元雙環(huán)芳環(huán)體系，其任何環(huán) 可由一個(gè)至四個(gè)選自N、0或S的雜原子組成，其中氮原子和硫原子可以任何允許的氧化態(tài) 存在。例子包括苯并咪唑基、苯并噻唑基、苯并噻吩基、苯并噁唑基、呋喃基、咪唑基、異噻唑 基、異噁唑基、噁唑基、吡嗪基、批唑基、吡啶基、嘧啶基、吡咯基、喹啉基、噻唑基和噻吩基。術(shù)語(yǔ)“雜原子”指氮原子、氧原子或硫原子，其中所述氮原子和硫原子可以任何允 許的氧化態(tài)存在。除非另外指明，否則術(shù)語(yǔ)“烷氧基”指鍵合至氧原子的具有最多12個(gè)碳原子的直 鏈或支鏈基團(tuán)。例子包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基和丁氧基。術(shù)語(yǔ)“芳基”指環(huán)中含有6至12個(gè)碳的單環(huán)或雙環(huán)芳環(huán)體系。烷基取代基可任選 存在于該環(huán)上。例子包括苯、聯(lián)苯和萘。
27
術(shù)語(yǔ)“芳烷基”指含有芳基取代基的CV6烷基。例子包括芐基、苯乙基或2-萘基甲基。術(shù)語(yǔ)“磺?；敝?S(O)2Ra基團(tuán)，其中Ra為氫、烷基、環(huán)烷基、鹵代烷基、芳基、芳烷 基、雜芳基和雜芳烷基。“磺?；瘎笨蓪?S(O)2Ra基團(tuán)加至分子。 本發(fā)明包括使用式I化合物(在本文中稱為“本發(fā)明化合物”) 或其溶劑化物、水合物、互變異構(gòu)體或可藥用鹽的方法，其中A 為苯基或吡啶基，其任一者可由氯、氟、甲基、-N3> -NH2, -NH(烷基)、-N(烷 基)2、-S (烷基)、-0 (烷基)或4-氨基苯基中的一者取代；W 為吡咯基(包括IH-吡咯-2-基)、咪唑基(包括IH-咪唑-2-基)、異噁唑基、噁 唑基、1，2，4-三唑基或呋喃基(包括呋喃-2-基)，其任一者可通過(guò)任何碳原子連接，其中 吡咯基、咪唑基、異噁唑基、噁唑基、1，2，4_三唑基或呋喃基可含有一個(gè)連接至任何其他碳 的-Cl、-CN、-NO2, -OMe 或-CF3 取代基；R2 為環(huán)烷基(包括環(huán)己烯基、環(huán)戊烯基)、噻吩基、二氫砜代吡喃基、苯基、呋喃基、四 氫吡啶基或二氫吡喃基，其任一者可獨(dú)立地由每個(gè)如下基團(tuán)中的一者或兩者取代氯、氟和 C(1_3)烷基(包括4，4-二甲基環(huán)己烯基、4-甲基環(huán)己烯基、2-甲基噻吩基、3-甲基噻吩基)， 前提條件是，四氫吡啶基通過(guò)碳_碳鍵連接至環(huán)A ；X 為
Ra D·
^2S-
I
或 RbZ 為CH 或 N ；
D1 禾口 D2各自為氫或合在一起形成連接氧的雙鍵；D3 和 D4各自為氫或合在一起形成連接氧的雙鍵；D5 為氫或-CH3，其中所述-CH3可相對(duì)地取向?yàn)轫樖交蚍词?；Ra和Rb獨(dú)立地為氫、環(huán)烷基、鹵代烷基、芳基、芳烷基、雜芳基或雜芳烷基；E 為N、S、0、SO或SO2,前提條件是，如果同時(shí)滿足以下三個(gè)條件則E不可以為N =Qa不 存在；Qb不存在；且R3為其中與E的連接點(diǎn)為N的氨基或環(huán)氨基；Qa 為不存在、-CH2-、-CH2CH2-或C(O)；Qb 為不存在、-NH-、-CH2-、-CH2CH2-或C (0)，前提條件是，如果Qa為C (0)則Qb不可以 為C(O)，另外的前提條件是，如果E為N且Qa不存在則Qb不可以為-NH-，進(jìn)一步的前提條 件是，如果R3為其中與Qb的連接點(diǎn)為N的氨基或環(huán)氨基則Qb不可以為-NH-；R3 是氫、苯基、羥烷基氨基(包括2-羥基乙氨基)、(羥烷基)2氨基、羥烷基(烷基)氨 基(包括1-羥乙-2-基(甲基)氨基)、烷基氨基(包括甲氨基)、氨基烷基(包括2-氨基異 丙基)、二羥基烷基(包括1，3- 二羥基異丙基、1，2- 二羥基乙基)、烷氧基(包括甲氧基)、 二烷基氨基(包括二甲氨基)、羥烷基(包括I-羥基乙-2-基)、-C00H、_C0NH2、-CN、-S02-g 基-R4 (包括-SO2CH3) ,-NH2,或含有至少一個(gè)雜原子N并且可任選含有選自S、S02、N和0的 額外雜部分(heteromoiety)的5或6元環(huán)，并且該5或6元環(huán)可以是飽和的、部分不飽和 的或芳族的(包括哌啶基、嗎啉基、咪唑基和吡啶基)，其中該5或6元環(huán)中的芳族氮可以作 為N-氧化物(包括吡啶基N-氧化物)存在，并且該5或6元環(huán)可任選由甲基、鹵素、烷基 氨基或烷氧基(包括1-甲基咪唑基)取代；R3也可以不存在，前提條件是E為氮時(shí)R3不能 不存在；R4 是氫、-0H、烷氧基、羧基、甲酰胺基或氨甲?；?shí)施例本發(fā)明的實(shí)施例包括式I化合物，其中a)A 為苯基或吡啶基，其任一者可由氯、氟、甲基、-N3> -NH2, -NH(烷基)、-N(烷 基)2、-S (烷基)、-0 (烷基)或4-氨基苯基中的一者取代；b)A 為苯基；c) W 為吡咯基(包括IH-吡咯-2-基)、咪唑基(包括IH-咪唑-2-基)、異噁唑基、噁
29唑基、1，2，4-三唑基或呋喃基(包括呋喃-2-基)，其任一者可通過(guò)任何碳原子連接，其中 吡咯基、咪唑基、異噁唑基、噁唑基、1，2，4-三唑基或呋喃基可含有一個(gè)連接至任何其他碳 的-Cl、-CN、-NO2, -OMe 或-CF3 取代基；d)W 為呋喃-2-基、IH-吡咯-2-基或IH-咪唑_2_基，其任一者可在第4或5位碳原子 處被-CN取代；e)W 為3H-2-咪唑基-4-甲腈或5-氰基-IH-吡咯_2_基；f)W 為3H-2-咪唑基-4-甲腈；g)R2 為環(huán)烷基(包括環(huán)己烯基、環(huán)戊烯基)、噻吩基、二氫砜代吡喃基、苯基、呋喃基、四 氫吡啶基或二氫吡喃基，其任一者可獨(dú)立地由每個(gè)如下基團(tuán)中的一者或兩者取代氯、氟和 C(1_3)烷基(包括4，4-二甲基環(huán)己烯基、4-甲基環(huán)己烯基、2-甲基噻吩基、3-甲基噻吩基)， 前提條件是，四氫吡啶基通過(guò)碳_碳鍵連接至環(huán)A ；h)R2 為環(huán)烷基(包括環(huán)己烯基、環(huán)戊烯基)，其可由一個(gè)或兩個(gè)C(1_3)烷基(包括4，4_ 二 甲基環(huán)己烯基、4-甲基環(huán)己烯基)取代；i)R2 為環(huán)己烯基，其可由一個(gè)或兩個(gè)C(1_3)烷基取代；j)R2 為環(huán)己烯基、4，4- 二甲基環(huán)己烯基或4-甲基環(huán)己烯基；k)R2 為環(huán)己烯基；1)X 為 m)X 為 ο) Z 為CH或 N;p)Z 為CH;q) D1 和 D2各自為氫或合在一起形成連接氧的雙鍵；r) D1 和 D2各自為氫；s) D3 和 D4各自為氫或合在一起形成連接氧的雙鍵；t) D3 和 D4各自為氫；U) D5 為氫或-CH3，其中所述-CH3可相對(duì)地取向?yàn)轫樖交蚍词剑沪? Ra和Rb獨(dú)立地為氫、環(huán)烷基、鹵代烷基、芳基、芳烷基、雜芳基或雜芳烷基；w) E 為N、S、0、SO或SO2,前提條件是，如果同時(shí)滿足以下三個(gè)條件則E不可以為N =Qa不 存在；Qb不存在；且R3為其中與E的連接點(diǎn)為N的氨基或環(huán)氨基；x)E 為N，前提條件是，如果同時(shí)滿足以下三個(gè)條件則E不可以為N :Qa不存在；Qb不存在； 且R3為其中與E的連接點(diǎn)為N的氨基或環(huán)氨基； cc) Qb 為不存在、-NH-、-CH2-、-CH2CH2-或C(O)，前提條件是，如果Qa為C(O)則Qb不可以 為C(O)，另外的前提條件是，如果E為N且Qa不存在則Qb不可以為-NH-，進(jìn)一步的前提條 件是，如果R3為其中與Qb的連接點(diǎn)為N的氨基或環(huán)氨基則Qb不可以為-NH-；dd)Qb 為不存在、-CH2CH2-或C(O)，前提條件是，如果QaSC(O)則Qb不可以為C(O)；ee)Qb 為不存在或C(O)，前提條件是，如果QaSC(O)則Qb不可以為C(O)；ff)R3 為氫、苯基、羥烷基氨基(包括2-羥基乙氨基)、(羥烷基)2氨基、羥烷基(烷基)氨 基(包括1-羥乙-2-基(甲基)氨基)、烷基氨基(包括甲氨基)、氨基烷基(包括2-氨基異 丙基)、二羥基烷基(包括1，3- 二羥基異丙基、1，2- 二羥基乙基)、烷氧基(包括甲氧基)、 二烷基氨基(包括二甲氨基)、羥烷基(包括I-羥基乙-2-基)、-C00H、_C0NH2、-CN、-S02-g 基-R4 (包括-SO2CH3) ,-NH2,或含有至少一個(gè)雜原子N并且可任選含有選自S、S02、N和0的 額外雜部分的5或6元環(huán)，并且該5或6元環(huán)可以是飽和的、部分飽和的或芳族的(包括哌 啶基、嗎啉基、咪唑基和吡啶基)，其中該5或6元環(huán)中的芳族氮可以作為N-氧化物(包括 吡啶基N-氧化物)存在，并且該5或6元環(huán)可任選由甲基、鹵素、烷基氨基或烷氧基(包括 1-甲基咪唑基)取代；R3也可以不存在，前提條件是E為氮時(shí)R3不能不存在；gg)R3 為氫、苯基、2-羥基乙氨基、1-羥乙-2-基(甲基)氨基、甲氨基、2-氨基異丙基、1， 3_二羥基異丙基、1，2_二羥基乙基、甲氧基、二甲氨基、1-羥基乙-2-基、-C00H、-C0NH2、-CN、 -S02-、-SO2CH3)、-NH2、哌啶基、嗎啉基、咪唑基、吡啶基、吡啶基N-氧化物或1-甲基咪唑基；hh)R3 為烷基氨基(包括甲氨基)、二烷基氨基(包括二甲氨基)或-SO2-烷基-R4(包 括-SO2CH3)；ii)R3 為甲氨基、二甲氨基或一SO2CH3 ；jj)R3 為二甲氨基；kk)R4 為氫、-0H、烷氧基、羧基、甲酰胺基或氨甲酰基；并且11)R4 為氫；以及上述的a)至11)(包括a)和11))的所有組合。式I的其他優(yōu)選實(shí)施例是其中為如下情況的那些實(shí)施例A 為苯基或吡啶基，其任一者可由氯、氟、甲基、-N3> -NH2, -NH(烷基)、-N(烷 基)2、-S (烷基)、-0 (烷基)或4-氨基苯基中的一者取代；W 為
吡咯基、咪唑基、異噁唑基、噁唑基、1，2，4-三唑基或呋喃基，其任一者可通過(guò)任何 碳原子連接，其中吡咯基、咪唑基、異噁唑基、噁唑基、1，2，4-三唑基或呋喃基可含有一個(gè)連 接至任何其他碳的-Cl、-CN、-NO2、-OMe或-CF3取代基；R2 為:環(huán)烷基、噻吩基、二氫砜代吡喃基、苯基、呋喃基、四氫吡啶基或二氫吡喃基，其任 一者可獨(dú)立地由每個(gè)如下基團(tuán)中的一者或兩者取代氯、氟和C(1_3)烷基，前提條件是，四氫 吡啶基通過(guò)碳_碳鍵連接至環(huán)A ；X 為 并且相對(duì)于-NHCO-W為對(duì)位取向；Z 為CH或 N;D1 禾口 D2各自為氫或合在一起形成連接氧的雙鍵；D3 禾口 D4各自為氫或合在一起形成連接氧的雙鍵；D5 為氫或-CH3，其中所述-CH3可相對(duì)地取向?yàn)轫樖交蚍词剑籖a和Rb獨(dú)立地為氫、環(huán)烷基、鹵代烷基、芳基、芳烷基、雜芳基或雜芳烷基；E 為N、S、0、SO或SO2，前提條件是，如果同時(shí)滿足以下三個(gè)條件則E不可以為N =Qa不 存在；Qb不存在；且R3為其中與E的連接點(diǎn)為N的氨基或環(huán)氨基；Qa 為不存在、-CH2-、-CH2CH2-或C(O)；Qb 為不存在、-NH-、-CH2-、-CH2CH2-或C (0)，前提條件是，如果Qa為C (0)則Qb不可以 為C(O)，另外的前提條件是，如果E為N且Qa不存在則Qb不可以為-NH-，進(jìn)一步的前提條 件是，如果R3為其中與Qb的連接點(diǎn)為N的氨基或環(huán)氨基則Qb不可以為-NH-；R3 為
氫、羥烷基氨基、(羥烷基)2氨基、烷基氨基、氨基烷基、二羥基烷基、烷氧基、二烷 基氨基、羥烷基、-C00H、-CONH2, -CN、-SO2-烷基-R4、-NH2,或含有至少一個(gè)雜原子N并且可 任選含有選自S、SO2、N和0的額外雜部分的5或6元環(huán)，并且該5或6元環(huán)可以是飽和的、 部分不飽和的或芳族的，其中該5或6元環(huán)中的芳族氮可以作為N-氧化物存在，并且該5 或6元環(huán)可任選由甲基、商素、烷基氨基或烷氧基取代；R3也可以不存在，前提條件是E為氮 時(shí)R3不能不存在；R4 為氫、-0H、烷氧基、羧基、甲酰胺基或氨甲?；?。式I的其他優(yōu)選實(shí)施例是其中為如下情況的那些實(shí)施例A 為苯基或吡啶基；W 為吡咯基、咪唑基、異噁唑基、噁唑基、1，2，4-三唑基或呋喃基，其任一者可通過(guò)任何 碳原子連接，其中吡咯基、咪唑基、異噁唑基、噁唑基、1，2，4-三唑基或呋喃基可含有一個(gè)連 接至任何其他碳的-Cl、-CN、-NO2、-OMe或-CF3取代基；R2 為:環(huán)烷基、噻吩基、二氫砜代吡喃基、苯基、呋喃基、四氫吡啶基或二氫吡喃基，其任 一者可獨(dú)立地由每個(gè)如下基團(tuán)中的一者或兩者取代氯、氟和C(1_3)烷基，前提條件是，四氫 吡啶基通過(guò)碳_碳鍵連接至環(huán)A ；X 為 并且相對(duì)于-NHCO-W為對(duì)位取向；Z 為CH或 N;D1 和 D2各自為氫或合在一起形成連接氧的雙鍵；D3 和 D4各自為氫或合在一起形成連接氧的雙鍵；D5 為氫或-CH3，其中所述-CH3可相對(duì)地取向?yàn)轫樖交蚍词剑?br> Ra和Rb獨(dú)立地為氫、環(huán)烷基、鹵代烷基、芳基、芳烷基、雜芳基或雜芳烷基；E 為N、S、0、SO或SO2,前提條件是，如果同時(shí)滿足以下三個(gè)條件則E不可以為N =Qa不 存在；Qb不存在；且R3為其中與E的連接點(diǎn)為N的氨基或環(huán)氨基；Qa 為不存在、-CH2-、-CH2CH2-或C(O)；Qb 為不存在、-NH-、-CH2-、-CH2CH2-或C (0)，前提條件是，如果Qa為C (0)則Qb不可以 為C(O)，另外的前提條件是，如果E為N且Qa不存在則Qb不可以為-NH-，進(jìn)一步的前提條 件是，如果R3為其中與Qb的連接點(diǎn)為N的氨基或環(huán)氨基則Qb不可以為-NH-；R3 為氫、羥烷基氨基、(羥烷基)2氨基、烷基氨基、氨基烷基、二羥基烷基、烷氧基、二烷 基氨基、羥烷基、-C00H、-CONH2, -CN、-SO2-烷基-R4、-NH2,或含有至少一個(gè)雜原子N并且可 任選含有選自S、SO2、N和0的額外雜部分的5或6元環(huán)，并且該5或6元環(huán)可以是飽和的、 部分不飽和的或芳族的，其中該5或6元環(huán)中的芳族氮可以作為N-氧化物存在，并且該5 或6元環(huán)可任選由甲基、商素、烷基氨基或烷氧基取代；R3也可以不存在，前提條件是E為氮 時(shí)R3不能不存在；R4 為氫、-0H、烷氧基、羧基、甲酰胺基或氨甲?；?。式I的其他優(yōu)選實(shí)施例是其中為如下情況的那些實(shí)施例A 為苯基或吡啶基；W 為3H-2-咪唑基-4-甲腈；R2 為環(huán)烷基、噻吩基、二氫砜代吡喃基、苯基、呋喃基、四氫吡啶基或二氫吡喃基，其任 一者可獨(dú)立地由每個(gè)如下基團(tuán)中的一者或兩者取代氯、氟和C(1_3)烷基，前提條件是，四氫 吡啶基通過(guò)碳_碳鍵連接至環(huán)A ；X 為
35 并且相對(duì)于-NHCO-W為對(duì)位取向；Z 為CH 或 N ；D1 和 D2各自為氫或合在一起形成連接氧的雙鍵；D3 和 D4各自為氫或合在一起形成連接氧的雙鍵；D5 為氫或-CH3，其中所述-CH3可相對(duì)地取向?yàn)轫樖交蚍词剑籖a和Rb獨(dú)立地為氫、環(huán)烷基、鹵代烷基、芳基、芳烷基、雜芳基或雜芳烷基；E 為N、S、0、SO或SO2,前提條件是，如果同時(shí)滿足以下三個(gè)條件則E不可以為N =Qa不 存在；Qb不存在；且R3為其中與E的連接點(diǎn)為N的氨基或環(huán)氨基；Qa 為不存在、-CH2-、-CH2CH2-或C(O)；Qb 為不存在、-NH-、-CH2-、-CH2CH2-或C (0)，前提條件是，如果Qa為C (0)則Qb不可以 為C(O)，另外的前提條件是，如果E為N且Qa不存在則Qb不可以為-NH-，進(jìn)一步的前提條 件是，如果R3為其中與Qb的連接點(diǎn)為N的氨基或環(huán)氨基則Qb不可以為-NH-；R3 為氫、羥烷基氨基、(羥烷基)2氨基、烷基氨基、氨基烷基、二羥基烷基、烷氧基、二烷 基氨基、羥烷基、-C00H、-CONH2, -CN、-SO2-烷基-R4、-NH2,或含有至少一個(gè)雜原子N并且可 任選含有選自S、SO2、N和0的額外雜部分的5或6元環(huán)，并且該5或6元環(huán)可以是飽和的、 部分不飽和的或芳族的，其中該5或6元環(huán)中的芳族氮可以作為N-氧化物存在，并且該5 或6元環(huán)可任選由甲基、商素、烷基氨基或烷氧基取代；R3也可以不存在，前提條件是E為氮 時(shí)R3不能不存在；R4 為氫、-0H、烷氧基、羧基、甲酰胺基或氨甲酰基。式I的其他優(yōu)選實(shí)施例是其中為如下情況的那些實(shí)施例 A 為苯基或吡啶基；W 為3H-2-咪唑基-4-甲腈；R2 為可由一個(gè)或兩個(gè)甲基取代的環(huán)己烯基；X 為并且相對(duì)于-NHCO-W為對(duì)位取向；Z 為CH 或 N ；D1 禾口 D2各自為氫或合在一起形成連接氧的雙鍵；D3 和 D4各自為氫或合在一起形成連接氧的雙鍵；D5 為氫或-CH3，其中所述-CH3可相對(duì)地取向?yàn)轫樖交蚍词?；Ra和Rb獨(dú)立地為氫、環(huán)烷基、鹵代烷基、芳基、芳烷基、雜芳基或雜芳烷基；E 為N、S、0、SO或SO2,前提條件是，如果同時(shí)滿足以下三個(gè)條件則E不可以為N =Qa不 存在；Qb不存在；且R3為其中與E的連接點(diǎn)為N的氨基或環(huán)氨基；Qa 為不存在、-CH2-、-CH2CH2-或C(O)；Qb 為不存在、-NH-、-CH2-、-CH2CH2-或C (0)，前提條件是，如果Qa為C (0)則Qb不可以 為C(O)，另外的前提條件是，如果E為N且Qa不存在則Qb不可以為-NH-，進(jìn)一步的前提條 件是，如果R3為其中與Qb的連接點(diǎn)為N的氨基或環(huán)氨基則Qb不可以為-NH-；R3 為氫、羥烷基氨基、(羥烷基)2氨基、烷基氨基、氨基烷基、二羥基烷基、烷氧基、二烷基氨基、羥烷基、-C00H、-CONH2, -CN、-SO2-烷基-R4、-NH2,或含有至少一個(gè)雜原子N并且可 任選含有選自S、SO2、N和0的額外雜部分的5或6元環(huán)，并且該5或6元環(huán)可以是飽和的、 部分不飽和的或芳族的，其中該5或6元環(huán)中的芳族氮可以作為N-氧化物存在，并且該5 或6元環(huán)可任選由甲基、商素、烷基氨基或烷氧基取代；R3也可以不存在，前提條件是E為氮 時(shí)R3不能不存在；R4 為氫、-0H、烷氧基、羧基、甲酰胺基或氨甲酰基。式I的其他優(yōu)選實(shí)施例是其中為如下情況的那些實(shí)施例A 為苯基或吡啶基；W 為3H-2-咪唑基-4-甲腈；R2 為可由一個(gè)或兩個(gè)甲基取代的環(huán)己烯基；X 為 并且相對(duì)于-NHCO-W為對(duì)位取向；Z 為CH;D1 和 D2各自為氫；D3 和 D4各自為氫；D5 為-CH3，其中所述-CH3可相對(duì)地取向?yàn)轫樖交蚍词?；E 為N ；Qa 為不存在、-CH2-、-CH2CH2-或C(O)；Qb 為不存在、-CH2_、-CH2CH2-或C(O)，前提條件是，如果QaSC(O)則Qb不可以為C(O)， 另外的前提條件是，如果R3為其中與Qb的連接點(diǎn)為N的氨基或環(huán)氨基則Qb不可以為-NH-；R3 為氫、羥烷基氨基、(羥烷基)2氨基、烷基氨基、氨基烷基、二羥基烷基、烷氧基、二烷 基氨基、羥烷基、-C00H、-CONH2, -CN、_S02_CH3、_NH2、吡啶基、吡啶基-N-氧化物或嗎啉基。
或 H3C
38
式I的其他優(yōu)選實(shí)施例是其中為如下情況的那些實(shí)施例A 為苯基或吡啶基；W 為3H-2-咪唑基-4-甲腈；R2 為可由一個(gè)或兩個(gè)甲基取代的環(huán)己烯基；X 為 并且相對(duì)于-NHCO-W為對(duì)位取向。式I化合物的例子包括5-氰基-呋喃-2-甲酸[4- (4-甲基-哌嗪-1-基)_2_ (3_甲基-噻吩_2_基)-苯 基]-酰胺，和5-氰基-呋喃-2-甲酸[4- (4-甲基-哌嗪基)_2_ (2_甲基-噻吩_3_基)-苯 基]-酰胺，以及它們的溶劑化物、水合物、互變異構(gòu)體和可藥用鹽。式I化合物的另外的例子包括4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸[4-(1-乙?；?哌啶-4-基)-2-(1，2，5，6-四氫-吡 啶-3-基)_苯基]_酰胺，4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸[2-環(huán)己-1-烯基-4-(l，l-二氧代-六氫-1λ6-噻 喃-4-基)-苯基]-酰胺，5-氰基-呋喃-2-甲酸[2-環(huán)己-1-烯基_4_ (4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-酰 胺，5-氰基-呋喃-2-甲酸[2- (3，6- 二氫_2Η_吡喃_4_基)_4_ (4-甲基-哌 嗪-1-基)_苯基]_酰胺，4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸[2_(1，1_ 二氧代 _1，2，3，6_ 四氫-1 λ 6-噻 喃-4-基)-4-哌啶-4-基-苯基]-酰胺，4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸[4_(1_乙?；?哌啶_4_基)_2_ (1，1_ 二氧代-1，2， 3,6-四氫-1 λ6-噻喃-4-基)-苯基]-酰胺，5-氰基-呋喃-2-甲酸[2‘-甲基-5-(4_甲基-哌嗪-1-基)_聯(lián)苯-2-基]-酰胺，和5-氰基-呋喃-2-甲酸[2‘-氟-5-(4_甲基-哌嗪-1-基)_聯(lián)苯-2-基]-酰 胺，以及它們的溶劑化物、水合物、互變異構(gòu)體和可藥用鹽。式I化合物的另外的例子是(4-{4-[(4-氰基-IH-咪唑_2_羰基)_氨基]_3_環(huán)己烯基-苯基}-哌 啶-1-基)_乙酸，4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸[4-(1_氨甲酰甲基-哌啶-4-基)-2_環(huán)己-1-烯 基-苯基]-酰胺，4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸[2_(4_甲基-環(huán)己烯基)_4_哌啶_4_基-苯 基]-酰胺，4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸{2-環(huán)己烯基_4-[1_(2-羥基-乙基)_哌 啶-4-基]-苯基}_酰胺，4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸[2_(4_甲基-環(huán)己烯基)_4_(1_吡啶_2_基甲 基-哌啶-4-基)-苯基]-酰胺，4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸{2_環(huán)己烯基_4-[1-(2_羥基羥甲基-乙 基)-哌啶-4-基]-苯基}-酰胺，4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸{4_[1_ (2_氰基-乙基)-哌啶_4_基]_2_環(huán)己烯
基-苯基}-酰胺，4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸{2_環(huán)己烯基_4-[1_ (2_嗎啉_4_基-乙基)-哌 啶-4-基]-苯基}_酰胺，4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸(2_環(huán)己烯基_4_哌啶_4_基-苯基)-酰胺，4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸{2-環(huán)己烯基_4-[1_(2-甲磺?；?乙基)_哌 啶-4-基]-苯基}_酰胺，4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸[2-環(huán)己烯基_4_ (1_吡啶_2_基甲基-哌 啶-4-基)_苯基]-酰胺，4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸{2-環(huán)戊-1-烯基-4-[l-(l-甲基-IH-咪唑_2_基甲 基)-哌啶-4-基]-苯基}-酰胺，4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸(2_環(huán)戊烯基_4_哌啶_4_基-苯基)-酰胺，4-氰基-IH-吡咯-2-甲酸(2_環(huán)己烯基_4_哌啶_4_基-苯基)-酰胺，4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸[2-環(huán)己-1-烯基-4_(3，4，5，6-四氫-2H-[1，2'] 聯(lián)吡啶-4-基)-苯基]-酰胺，和4-氰基-IH-吡咯-2-甲酸[4_(1_乙?；?哌啶_4_基)_2_環(huán)己烯基-苯 基]-酰胺，以及它們的溶劑化物、水合物、互變異構(gòu)體和可藥用鹽。式I化合物的其他例子是4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸{2_環(huán)己烯基_4_ [1_ (1_氧基-吡啶_3_羰基)-哌 啶-4-基]-苯基}_酰胺，4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸{2_環(huán)己烯基_4_ [1_ (1_氧基-吡啶_4_羰基)-哌啶-4-基]-苯基}_酰胺， 4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸{2-環(huán)己-1-烯基-4-[l-(3-嗎啉-4-基-丙?；?_哌 啶-4-基]-苯基}_酰胺， 4- {4- [ (4-氰基-IH-咪唑_2_羰基)_氨基]_3_環(huán)己烯基-苯基}-哌啶甲 酸酰胺，4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸{2-環(huán)己烯基_4-[1_(吡啶_3_羰基)-哌 啶-4-基]-苯基}_酰胺，4- {4- [ (4-氰基-IH-咪唑_2_羰基)_氨基]_3_環(huán)己烯基-苯基}-哌啶甲 酸(2-羥基-乙基)-酰胺，4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸{2_環(huán)己烯基_4-[1-(2_3Η-咪唑_4_基-乙酰 基)-哌啶-4-基]-苯基}-酰胺，4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸{2_環(huán)己烯基_4_ [1_ (2-吡啶_4_基-乙酰基)-哌 啶-4-基]-苯基}_酰胺，4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸(2_環(huán)己烯基-4-{1-[2-(1_甲基-IH-咪 唑-4-基)-乙?；鵠-哌啶-4-基}-苯基)-酰胺，4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸{2_環(huán)己烯基_4_ [1_ (2-吡啶_3_基-乙?；?-哌 啶-4-基]-苯基}_酰胺，4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸{2_環(huán)己烯基_4-[1_ (2-甲磺?；?乙酰基)-哌 啶-4-基]-苯基}_酰胺，4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸{2_環(huán)己烯基_4_ [1_ (2-吡啶_2_基-乙?；?-哌 啶-4-基]-苯基}_酰胺，和4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸[4-(1-乙酰基-哌啶_4_基)_2_環(huán)己烯基-苯 基]-酰胺，以及它們的溶劑化物、水合物、互變異構(gòu)體和可藥用鹽。式I的另外的示例化合物是4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸[2-環(huán)己烯基_4_ (1_ {2_[ (2-羥基-乙基)-甲 基-氨基]-乙酰基}_哌啶-4-基)-苯基]-酰胺，以及它們的溶劑化物、水合物、互變異構(gòu)體和可藥用鹽。式I的另外的示例化合物是4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸{2_環(huán)己烯基_4-[1_ (2_ 二甲氨基-乙酰基)-哌 啶-4-基]-苯基}_酰胺，以及它們的溶劑化物、水合物、互變異構(gòu)體和可藥用鹽。式I的另外的示例化合物是4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸{2_環(huán)己烯基_4-[1_ (2_嗎啉_4_基-乙?；?-哌 啶-4-基]-苯基}_酰胺，以及它們的溶劑化物、水合物、互變異構(gòu)體和可藥用鹽。式I的其他示例化合物是4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸{4- [ 1- (3-氨基_3_甲基-丁?；?-哌啶_4_基]_2_環(huán) 己-1-烯基-苯基}-酰胺三氟乙酸鹽，
4H-[1，2，4]_三唑-3-甲酸(2_環(huán)己烯基_4_哌啶_4_基-苯基)-酰胺雙三 氟乙酸鹽，5-氯_4!1-[1，2，4]-三唑-3-甲酸(2_環(huán)己烯基_4_哌啶_4_基-苯基)-酰
胺三氟乙酸鹽，5-氰基-IH-咪唑-2-甲酸[2_環(huán)己烯基_4_(順式_2，6_ 二甲基-哌 啶-4-基)-苯基]-酰胺雙三氟乙酸鹽，5-氰基-IH-咪唑-2-甲酸[2_環(huán)己烯基_4_ (反式_2，6- 二甲基-哌 啶-4-基)-苯基]-酰胺雙三氟乙酸鹽，5-氰基-IH-咪唑-2-甲酸{2_ 環(huán)己 烯基-4_[1_ (R) - (+) - (2，3_ 二羥基-丙 ?；?_哌啶-4-基]-苯基}-酰胺，5-氰基-IH-咪唑-2-甲酸[2_環(huán)己烯基_4_(1_甲氧基-哌啶_4_基)-苯 基]-酰胺三氟乙酸鹽，4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸[6-(4，4-二甲基-環(huán)己-1-烯基)_1' ,2' ,3' ,4'， 5'，6'-六氫-[2，4']聯(lián)吡啶-5-基]-酰胺三氟乙酸鹽，5-氰基-IH-咪唑-2-甲酸{4- [ 1- (2-氨基_2_甲基-丙?；?-哌啶_4_基]_2_環(huán) 己-1-烯基-苯基}-酰胺三氟乙酸鹽，和5-氰基-IH-咪唑-2-甲酸[6-環(huán)己-1-烯基-1' -(2-甲磺?；?乙基)_1 ‘， 2'，3'，4'，5'，6'-六氫-[2，4']聯(lián)吡啶 _5_ 基]-酰胺，以及它們的溶劑化物、水合物、互變異構(gòu)體和可藥用鹽。式I的另外的示例化合物是4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸{2-環(huán)己-1-烯基-4-[l-(2-甲氨基-乙?；?_哌 啶-4-基]-苯基}_酰胺，4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸[1' _(2_ 二甲氨基-乙?；?_6_ (4，4_ 二甲基-環(huán) 己-1-烯基)_1'，2'，3'，4'，5'，6'-六氫-[2，4']聯(lián)吡啶_5_基]-酰胺三氟乙酸 鹽，和4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸[6-(4，4_ 二甲基-環(huán)己-1-烯基)-Γ _(2_甲磺酰 基-乙基)-1'，2'，3'，4'，5'，6'-六氫-[2，4']聯(lián)吡啶_5_基]-酰胺三氟乙酸鹽，以及它們的溶劑化物、水合物、互變異構(gòu)體和可藥用鹽。本文所用的術(shù)語(yǔ)“本發(fā)明化合物”應(yīng)該也包括它們的溶劑化物、水合物、互變異構(gòu) 體或可藥用鹽?？伤幱名}如所說(shuō)明的，本發(fā)明化合物也可以可藥用鹽的形式存在。對(duì)于醫(yī)學(xué)中的使用，本發(fā)明化合物的鹽指無(wú)毒的“可藥用鹽”。FDA核準(zhǔn)的可藥用 鹽形式(Ref. International J. Pharm. 1986，33，201-217 ;J. Pharm. Sci.，1977，Jan，66 (1)， pl)包括可藥用酸式/陰離子鹽或堿式/陽(yáng)離子鹽。可藥用酸式/陰離子鹽包括(但不限于)乙酸鹽、苯磺酸鹽、苯甲酸鹽、碳酸氫鹽、 酒石酸氫鹽、溴化物、依地酸鈣、樟腦磺酸鹽、碳酸鹽、氯化物、檸檬酸鹽、二鹽酸鹽、依地酸 鹽、乙二磺酸鹽、依托酸鹽、乙磺酸酯、延胡索酸鹽、葡庚糖酸鹽、葡糖酸鹽、谷氨酸鹽、對(duì)羥 乙酰氨基苯胂酸鹽、己基間苯二酚鹽、海巴明、氫溴酸鹽、鹽酸鹽、羥萘酸鹽、碘化物、羥乙基
42磺酸鹽、乳酸鹽、乳糖酸鹽、蘋果酸鹽、馬來(lái)酸鹽、扁桃酸鹽、甲磺酸鹽、甲基溴化物、甲基硝 酸鹽、甲基硫酸鹽、粘液酸鹽、萘磺酸鹽、硝酸鹽、雙羥萘酸鹽、泛酸鹽、磷酸鹽/ 二磷酸鹽、 聚半乳糖醛酸鹽、水楊酸鹽、硬脂酸鹽、次乙酸鹽、琥珀酸鹽、硫酸鹽、鞣酸鹽、酒石酸鹽、茶 氯酸鹽、甲苯磺酸鹽以及三乙碘化物。有機(jī)酸或無(wú)機(jī)酸還包括但不限于氫碘酸、過(guò)氯酸、硫 酸、磷酸、丙酸、乙醇酸、甲磺酸、羥基乙磺酸、草酸、2_萘磺酸、對(duì)甲苯磺酸、環(huán)己烷氨基磺 酸、糖精酸或三氟乙酸?？伤幱脡A式/陽(yáng)離子鹽包括(不限于)鋁鹽、2-氨基-2-羥甲基-丙-1，3- 二醇 (也稱為三(羥甲基)氨基甲烷、tromethane或“TRIS”)、氨鹽、芐星、叔丁胺、鈣鹽、葡萄糖 酸鈣、氫氧化鈣、氯普魯卡因、膽堿、膽堿碳酸氫鹽、氯化膽堿、環(huán)己胺、二乙醇胺、乙二胺、鋰 鹽、LiOMe、L-賴氨酸、鎂鹽、葡甲胺、NH3> NH4OH, N-甲基-D-葡萄糖胺、哌啶、鉀鹽、叔丁醇 鉀、氫氧化鉀(水溶液)、普魯卡因、奎寧、鈉鹽、碳酸鈉、2-乙基己酸鈉(SEH)、氫氧化鈉或鋅
Τττ . οMM本發(fā)明在其范圍之內(nèi)還包括本發(fā)明化合物的前藥。一般而言，此類前藥將是所述 化合物的官能衍生物，這些衍生物在體內(nèi)容易轉(zhuǎn)化為活性化合物。因此，在本發(fā)明的治療方 法中，術(shù)語(yǔ)“MM”應(yīng)涵蓋采用本發(fā)明化合物或其前藥治療、緩解或預(yù)防本文所描述的綜合 征、障礙或疾病的手段，所述前藥雖然沒(méi)有被具體公開(kāi)任何給定化合物，但明顯包括在本發(fā) 明的范圍之內(nèi)。選擇和制備合適的前藥衍生物的常規(guī)方法在(例如)以下文獻(xiàn)中有所描述 “Design of Prodrugs” (前藥設(shè)計(jì))，H. Bundgaard(編輯)，Elsevier, 1985。立體異構(gòu)體本領(lǐng)域技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到，本發(fā)明的某些化合物在其結(jié)構(gòu)中具有一個(gè)或多個(gè)不對(duì) 稱碳原子。意圖本發(fā)明將本發(fā)明化合物的單一對(duì)映體形式、外消旋混合物以及其中存在對(duì) 映體過(guò)量的對(duì)映體混合物包括在其范圍內(nèi)。本文所用的術(shù)語(yǔ)述”定義了本發(fā)明化合物和它們的N-氧化物、加成鹽、 季胺以及生理功能性衍生物可具有的所有可能的純手性形式。立體化學(xué)上純的異構(gòu)形式可通過(guò)應(yīng)用本領(lǐng)域已知的原理來(lái)獲得。非對(duì)映異構(gòu)體可 通過(guò)物理分離方法例如分步結(jié)晶和色譜技術(shù)進(jìn)行分離，而對(duì)映體可通過(guò)使與光學(xué)活性酸或 堿所成的非對(duì)映體鹽進(jìn)行選擇性結(jié)晶或通過(guò)手性色譜來(lái)彼此分離。純的立體異構(gòu)體也可用 合適的立體化學(xué)上純的原料合成法制備，或者可通過(guò)使用立體選擇性反應(yīng)合成法制備。術(shù)語(yǔ)“異構(gòu)體”指具有相同的組成和分子量，但物理和/或化學(xué)性質(zhì)不同的化合 物。此類物質(zhì)具有相同數(shù)目和種類的原子，但結(jié)構(gòu)不同。結(jié)構(gòu)差異可在于構(gòu)造(幾何異構(gòu) 體)或在于使偏振光的平面旋轉(zhuǎn)的能力(對(duì)映體)。術(shù)語(yǔ)“立體異構(gòu)體”指構(gòu)造相同伯.在其原子空間排列上不同的異構(gòu)體。對(duì)映體和 非對(duì)映體是立體異構(gòu)體的例子。術(shù)語(yǔ)“手件的”指分子的結(jié)構(gòu)特征，該特征使得不可能將其重》在其鏡像上。術(shù)語(yǔ)“對(duì)映體”指互為鏡像并且不可重疊的一對(duì)分子物質(zhì)之一。術(shù)語(yǔ)“非對(duì)映體”指不互為鏡像的立體異構(gòu)體。符號(hào)“R”和“S”代表手性碳原子周圍的取代基的構(gòu)型。術(shù)語(yǔ)“外消旋物”或“外消旋混合物”指由等摩爾量的兩種對(duì)映體物質(zhì)組成的組合物，其中該組合物沒(méi)有光學(xué)活性。術(shù)語(yǔ)“純手件”指對(duì)映體純的狀態(tài)。術(shù)語(yǔ)“光學(xué)活件”指純手性分子或手性分子的非外消旋混合物使偏振光的平面旋 轉(zhuǎn)的度數(shù)。應(yīng)當(dāng)理解，用于制備本發(fā)明化合物的各種取代(substituent)立體異構(gòu)體、幾何 異構(gòu)體及其混合物可商購(gòu)獲得，可用可商購(gòu)的原料合成法制備，或者可制備為異構(gòu)體混合 物然后用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的技術(shù)作為拆分的異構(gòu)體獲得。本文所述的有關(guān)異構(gòu)的描述詞“R”和“S”是用于指示相對(duì)于核心分子的原子構(gòu) 型，并旨在如文獻(xiàn)(IUPAC Recommendations for Fundamental Stereochemistry (Section Ε)，Pure App 1. Chem.，1976，45 13-30)中所定義進(jìn)行使用?？赏ㄟ^(guò)異構(gòu)體特異性合成或從異構(gòu)體混合物拆分，將本發(fā)明化合物制備成單獨(dú)的 異構(gòu)體。常規(guī)的拆分技術(shù)包括用異構(gòu)體對(duì)的每一異構(gòu)體的游離堿形成光學(xué)活性鹽(然后進(jìn) 行分步結(jié)晶和游離堿的再生)；形成異構(gòu)體對(duì)的每一異構(gòu)體的酯或酰胺(然后進(jìn)行色譜分 離并去除手性助劑)；或用制備型TLC (薄層色譜法)或手性HPLC柱拆分原料或終產(chǎn)物的 異構(gòu)體混合物。多晶型物和溶劑化物此外，本發(fā)明的化合物可具有一種或多種多晶型或無(wú)定形結(jié)晶形式，這些多晶型 或無(wú)定形結(jié)晶形式旨在包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。另外，化合物可例如與水形成溶劑化物 (即水合物)或與普通有機(jī)溶劑形成溶劑化物。本文所用的術(shù)語(yǔ)“MM ”意指本發(fā)明化 合物與一個(gè)或多個(gè)溶劑分子的物理締合。該物理締合涉及不同程度的離子鍵鍵合和共價(jià)鍵 鍵合，包括氫鍵鍵合。在某些情況下，溶劑化物將能夠在(例如)一個(gè)或多個(gè)溶劑分子摻入 在結(jié)晶固體的晶格中時(shí)分離出來(lái)。術(shù)語(yǔ)“溶劑化物”旨在既涵蓋溶液相溶劑化物又涵蓋可 分離溶劑化物。合適的溶劑化物的非限制性例子包括乙醇化物、甲醇化物等。本發(fā)明旨在將本發(fā)明化合物的溶劑化物包括在其范圍內(nèi)。因此，在本發(fā)明的治療 方法中，術(shù)語(yǔ)“■”應(yīng)涵蓋用本發(fā)明的化合物或其溶劑化物治療、緩解或預(yù)防本文所述的 綜合征、障礙或疾病的方法，所述溶劑化物雖然沒(méi)有具體公開(kāi)，但明顯包括在本發(fā)明的范圍 之內(nèi)。N-氧化物可根據(jù)本領(lǐng)域已知的用于將三價(jià)氮轉(zhuǎn)化成其N-氧化物形式的方法，將本發(fā)明的 化合物轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的N-氧化物形式。所述N-氧化反應(yīng)通常可通過(guò)使原料與合適的有機(jī)或 無(wú)機(jī)過(guò)氧化物反應(yīng)來(lái)進(jìn)行。合適的無(wú)機(jī)過(guò)氧化物包括(例如)過(guò)氧化氫、堿金屬或堿土金屬 過(guò)氧化物如過(guò)氧化鈉、過(guò)氧化鉀；合適的有機(jī)過(guò)氧化物可包括過(guò)氧酸例如過(guò)氧化苯甲酸或 鹵素取代的過(guò)氧化苯甲酸如3-氯過(guò)氧化苯甲酸、過(guò)氧化鏈烷酸如過(guò)氧化乙酸、烷基過(guò)氧化 氫如叔丁基過(guò)氧化氫。合適的溶劑是(例如)水、低級(jí)醇如乙醇等、烴類如甲苯、酮如2-丁 酮、鹵化烴如二氯甲烷，以及這些溶劑的混合物?；プ儺悩?gòu)形式本發(fā)明的化合物也可以它們的互變異構(gòu)形式存在。此類形式雖然未在本專利申請(qǐng) 中明確指出，但也旨在包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。本發(fā)明化合物的制備
在制備本發(fā)明化合物的任何方法過(guò)程中，可能有必要和/或需要保護(hù)任何有 關(guān)分子上的敏感基團(tuán)或反應(yīng)性基團(tuán)。這可通過(guò)常規(guī)保護(hù)基團(tuán)來(lái)實(shí)現(xiàn)，如在Protecting Groups, P. Kocienski，Thieme Medical Publishers，2000 ；禾口 Τ· W. Greene & P. G. Μ. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis,第 3 片反，Wiley Interscience，1999 中描述的 那些保護(hù)基團(tuán)。保護(hù)基團(tuán)可在方便的后續(xù)階段用本領(lǐng)域已知的方法除去。制備方法方案1 方案1示出了用于制備式I化合物的一般方法。式1-2化合物可通過(guò)這樣獲得 使式1-1的氨基化合物進(jìn)行鄰位鹵化(優(yōu)選溴化)，然后用硼酸或硼酸酯進(jìn)行金屬催化的偶 聯(lián)反應(yīng)(Suzuki反應(yīng)，其中R2M為R2B (OH)2或硼酸酯)或用錫試劑進(jìn)行金屬催化的偶聯(lián)反應(yīng) (Stille 反應(yīng)，其中 R2M為 R2Sn (烷基)3)(關(guān)于綜述參見(jiàn)N. Miyaura，A. Suzuki，Chem. Rev.， 95 2457 (1995)，J. K. Stille, Angew. Chem, Int. Ed. Engl.，25 508024 (1986)和 A. Suzuki in Metal-Catalyzed Coupling Reactions, F. Deiderich, P. Stang(編輯)，ffiley-VCH, Weinheim(1988))。式1_1化合物可商購(gòu)獲得，或者可用上述的鈀介導(dǎo)的交叉偶聯(lián)反應(yīng)從原 料1-0產(chǎn)生式1-1化合物。將式1-1化合物溴化的優(yōu)選條件是在合適的溶劑例如N，N_ 二甲基甲酰胺(DMF)、 二氯甲烷(DCM)或乙腈中使用N-溴琥珀酰亞胺(NBS)。金屬催化的偶聯(lián)反應(yīng)(優(yōu)選Suzuki 反應(yīng))可根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行，優(yōu)選在存在鈀催化劑例如四(三苯基膦)鈀(0) (Pd(PPh3)4)、 堿的水溶液如Na2CO3水溶液和合適溶劑例如甲苯、乙醇、二甲氧基乙烷(DME)或DMF的情況 下進(jìn)行。式I化合物可根據(jù)酰胺鍵形成的標(biāo)準(zhǔn)方法，使式1-2化合物與羧酸WC00H反應(yīng)而 制備(關(guān)于綜述參見(jiàn)M. Bodansky 禾P A. Bodansky，The Practice of Peptide Synthesis, Springer-Verlag, NY (1984))，或者可通過(guò)與酰氯WCOCl或活化酯WCO2Rq (其中Rq為離去 基團(tuán)，例如五氟苯基或N-琥珀酰亞胺)反應(yīng)而制備。與WC00H偶聯(lián)的優(yōu)選反應(yīng)條件是當(dāng)W 為呋喃時(shí)，用草酰氯的DCM溶液與催化劑DMF(DMF as a catalyst)形成酰氯WC0C1，然后在 存在三烷基胺例如DIEA的情況下進(jìn)行偶聯(lián)；當(dāng)W為吡咯時(shí)，用1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙 基碳二亞胺鹽酸鹽(EDCI)和1-羥基苯并三唑-6-亞磺酰氨基甲基鹽酸鹽(HOBt)；當(dāng)W為 咪唑時(shí)，優(yōu)選的條件是用三吡咯烷基溴化鱗六氟磷酸鹽(PyBrOP)和二異丙基乙胺(DIEA)。應(yīng)當(dāng)理解，式I的環(huán)A上存在的任選取代基可存在于原料1-1或1-3中，并且在這種情況下，該取代基將能渡過(guò)方案1中示出的合成。或者，式I化合物上的各種取代基可以 下述多種方式引入，以提供對(duì)式I所列出的任選取代基。存在于式1-0或1-3的環(huán)A上的 離去基團(tuán)"L1 ”可在執(zhí)行方案1之前進(jìn)行取代，或者在執(zhí)行方案1過(guò)程中的任一步進(jìn)行取代。 當(dāng)這類離去基團(tuán)(優(yōu)選氟或氯)由式1-3的硝基活化以進(jìn)行親核攻擊時(shí)，它們可在存在合 適的堿例如K2C03、N，N-二異丙基乙胺(DIEA)或NEt3W情況下，經(jīng)歷由氨和疊氮陰離子或 由胺、醇、硫醇和其他親核試劑進(jìn)行的直接親核芳族取代。當(dāng)離去基團(tuán)適合于金屬催化的偶 聯(lián)(優(yōu)選溴或三氟甲磺酰氧基)時(shí)，可以進(jìn)行多種交叉偶聯(lián)反應(yīng)(例如上文所討論的用于 引入R2的Suzuki或Stille反應(yīng))。其他可采用的金屬催化偶聯(lián)反應(yīng)包括芳族和雜芳族 胺化和酰胺化(有關(guān)綜述參見(jiàn)S. L. Buchwald 等人，Top. Curr. Chem.，219 131-209 (2001) 禾口 J. F. Hartwig 的"Organopalladium Chemistry for Organic Synthesis, " Wiley Interscience, NY(2002))。如果L1為通過(guò)硝基活化的溴、碘或氯，則可采用另外的與2,4, 6-三甲基-環(huán)三硼氧烷的金屬催化交叉偶聯(lián)反應(yīng)以產(chǎn)生任選的甲基取代(參見(jiàn)M. Gray等 人，Tetrahedron Lett. ,41 :6237_40 (2000))。在一些情況下，可如下文所述將初始取代基進(jìn)一步衍生，以提供式I的最終取代。用于將含氮雜環(huán)取代基引入到環(huán)A上的另選方法是從環(huán)A上的氨基形成雜環(huán)。氨 基可以受保護(hù)的或未受保護(hù)的形式原先存在于原料中，或者可通過(guò)使硝基還原而產(chǎn)生，該 硝基也最初存在于原料中或通過(guò)硝化反應(yīng)連接上。另外，氨基可通過(guò)使疊氮基還原而形成， 該疊氮基可存在于原料中或者可如上所述用疊氮陰離子對(duì)活化的鹵素離子進(jìn)行親核芳族 取代而產(chǎn)生。氨基也可通過(guò)氨或通過(guò)受保護(hù)的氨等同物的陰離子(例如氨基甲酸叔丁酯) 對(duì)活化的鹵素離子(在例如硝基鹵化合物中)進(jìn)行親核芳族取代而產(chǎn)生。如果是以受保護(hù) 形式引入，則可根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)的文獻(xiàn)方法對(duì)胺進(jìn)行去保護(hù)。(有關(guān)胺保護(hù)基團(tuán)和去保護(hù)方法的例 子參見(jiàn)Theodora W. Greene 和 Peter G. Μ. Wuts, John Wiley and Sons，Inc.，NY (1991))。 成環(huán)反應(yīng)涉及用合適的任選取代的雙親電子試劑(優(yōu)選二鹵化物或二羰基化合物)處理苯 胺氨基，這在該氨基上產(chǎn)生兩個(gè)取代基，從而形成任選取代的雜環(huán)。就二商化物而言，可加 入多種合適的堿中的任何一種作為酸清除劑，例如碳酸鉀、氫氧化鈉或三烷基胺(例如三 乙胺)。因此，用雙(2-鹵乙基)胺如雙(2-氯乙基)胺或雙(2-溴乙基)胺處理將會(huì)得到 哌嗪環(huán)(參見(jiàn)例如，J.Med· Chem. ,29 :640_4(1986)和 J.Med· Chem. ,46 :2837 (2003))。該 試劑的胺氮上的任選取代基將會(huì)在哌嗪的末端胺上摻入任選的取代基。例如，用N，N-雙 (2-氯乙基)苯胺處理將產(chǎn)生N-苯基哌嗪基團(tuán)。用雙(2-鹵乙基)醚或雙(2-鹵乙基)硫 醚處理將分別得到嗎啉環(huán)或硫嗎啉環(huán)。直接取代以在環(huán)A上引入雜環(huán)取代基的另一種另選方法是從醛(即從環(huán)A上的甲 ?；?形成雜環(huán)。甲?；梢允鼙Ｗo(hù)的或未受保護(hù)的形式原先存在于原料中，或可由文獻(xiàn) 中已知的多種甲酰化反應(yīng)(包括Vilsmeier-Haack反應(yīng))中的任一種得到(有關(guān)甲?；?應(yīng)化學(xué)的綜述參見(jiàn)G. A. Olah等人，Chem Rev. ,87 (1987))或通過(guò)硝基芳香化合物的對(duì)甲 ?；玫?參見(jiàn):A. Katritsky 和 L. Xie, Tetrahedron Lett. ,37 :347_50 (1996))。最后，可以理解，可對(duì)式I化合物進(jìn)一步進(jìn)行衍生化?？筛鶕?jù)標(biāo)準(zhǔn)的合成方法除去 式 I 化合物上的保護(hù)基(Theodora W. Greene 和 Peter G. Μ. Wuts, John Wiley and Sons, Inc.，NY(1991))，然后可對(duì)其進(jìn)行進(jìn)一步衍生化。式I化合物進(jìn)一步衍生化的例子包括但 不限于當(dāng)式I化合物含有伯胺或仲胺時(shí)，可將該胺在存在諸如三乙酰氧基硼氫化鈉的還
46原劑的情況下與醛或酮反應(yīng)(參見(jiàn)Abdel-Magid J. Org. Chem. 61，第3849-3862頁(yè)，(1996)) 以進(jìn)行還原性烷基化；與酰氯或羧酸和如上所述的形成酰胺鍵的試劑反應(yīng)以形成酰胺；與 磺酰氯反應(yīng)以形成磺酰胺；與異氰酸酯反應(yīng)以形成脲；在存在如上所述的鈀催化劑的情況 下與芳基鹵化物或雜芳基氯化物反應(yīng)(參見(jiàn)上述Buchwald和Hartwig的參考文獻(xiàn))以形 成芳胺和雜芳胺。此外，當(dāng)式I化合物含有芳基鹵化物或雜芳基鹵化物時(shí)，可使這些化合物 與硼酸進(jìn)行金屬催化的反應(yīng)(例如，如上所述的Suzuki或Stille偶聯(lián))或與胺或醇進(jìn)行 金屬催化的反應(yīng)(Buchwald型或Hartwig型偶聯(lián)，參見(jiàn)上述的Buchwald和Hartwig的參考 文獻(xiàn))。當(dāng)式I化合物含有氰基時(shí)，可將該基團(tuán)在酸性或堿性條件下水解為酰胺或酸。堿 性胺可氧化為N-氧化物，相反N-氧化物可還原為堿性胺。當(dāng)式I化合物含有硫化物(非 環(huán)狀硫化物或環(huán)狀硫化物)時(shí)，可將該硫化物進(jìn)一步氧化為相應(yīng)的亞砜或砜。亞砜可通過(guò) 用合適的氧化劑(例如一當(dāng)量的(間_氯過(guò)苯甲酸)MCPBA)進(jìn)行氧化或通過(guò)用NaIO4進(jìn)行 處理而獲得(參見(jiàn)例如J. Regan，等人，J. Med. Chem.，46 =4676-86 (2003))，砜可通過(guò)用二當(dāng) 量的MCPBA或通過(guò)用4-甲基嗎啉N-氧化物和催化性四氧化鋨進(jìn)行處理而獲得(參見(jiàn)例如 PCT 專利申請(qǐng) WO 01/47919)。方案2a 方案2a示出了得到式I化合物的途徑。F代表_NQaQbR3-、_0_、S、SO或S02，AA代 表-NH2或-N02。D1和D2僅為說(shuō)明目的而示出；本領(lǐng)域技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到，D5D6D7D8也可以 存在。可通過(guò)用非親核性堿(例如LDA)處理，然后用三氟甲磺酰化試劑(例如三氟甲磺酸 酐或優(yōu)選N-苯基三氟甲磺酰亞胺)捕獲所得的烯醇式鹽，將式2-1酮轉(zhuǎn)化為式2-2的三氟 甲磺酸乙烯酯。式2-3的硼酸或硼酸酯與式2-2的三氟甲磺酸乙烯酯的Suzuki偶聯(lián)可得 到其中Z為C的式2-4化合物(Synthesis, 993 (1991))。對(duì)于式2-4化合物，用Pd/C處理可使烯烴(和硝基，在AA為NO2時(shí))二者還原， 得到Z為CH，AA為NH2。其中F代表-SO2的式2_4化合物通過(guò)用MCPBA使其中AA是-NO2 且F是硫化物(F為-S-)的式2-4化合物氧化而制備，或用方案1中所述的其他方法制備。然后可用Pd/C還原硝基，以將硝基和烯烴兩者還原。然后如方案1所述，將式2-4化合物(AA為NH2)轉(zhuǎn)化為式2_5化合物(如果不要 進(jìn)一步修飾的話，則其也代表式I化合物)。可進(jìn)一步修飾式2-5化合物，得到另外的式I化合物。例如，在其中F為_(kāi)NQaQbR3-、 QaQb為直接鍵且R3代表BOC保護(hù)基團(tuán)(C02tBu)的情況中，可根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)的方法，例如在 DCM中使用三氟乙酸(TFA) (Greene和Wuts，同上)，將BOC基團(tuán)去除以得到仲胺，然后可 將該仲胺進(jìn)一步衍生化而得到式I化合物。進(jìn)一步衍生化包括但不限于在存在還原劑 例如三乙酰氧基硼氫化鈉的情況下與醛或酮反應(yīng)，得到其中F為-NCH2R3的式II化合物 (A.F.Abdel-Magid，同上)；與酰氯或與羧酸和形成酰胺鍵的試劑(如方案1所述)反應(yīng)，得 到其中F為-NCOR3的式II化合物；與磺酰氯反應(yīng)(如方案1所述)，得到其中F為-NSO2Ra 式I化合物；與異氰酸酯反應(yīng)(如方案1所述)，得到其中F為-NCONRaRb的式II化合物； 或如方案1所述進(jìn)行金屬催化的取代反應(yīng)，得到其中F為-NR3的式I化合物(S. L. Buchwald 等人，同上J. H. Hartwig,同上)。對(duì)于上述例子，Ra和Rb獨(dú)立地為氫、烷基、環(huán)烷基、鹵代 烷基、芳基、芳烷基、雜芳基和雜芳烷基。方案2b 方案2b示出了方案2a的修改方案，用來(lái)合成部分不飽和的式I化合物。E代 表-NQaQbR3-^-O- (D1 和 D2 為 H)、-S- (D1 和 D2 為 H) ,-(D1 和 D2 為 H)或-SO2- (D1 和 D2 為 H)， 并且Rm代表-NH2或-NO2。式2-4化合物如方案2所示制備。如果Raa為-NO2,則必須通過(guò) 不會(huì)還原烯烴的方法來(lái)還原硝基，例如鐵和氯化銨。如果式2-4的Raa為氨基，則不需要進(jìn) 行什么步驟，式2-4化合物也是式2-7化合物。為了制備其中E為-SO2-或-SO-的式2_7 化合物，必須如上所述在其中Raa為-NO2的化合物2-4上進(jìn)行硫化物的氧化，然后進(jìn)行硝基 還原。方案3 方案3示出了用于合成式I化合物的中間體的制備，其中環(huán)A是吡啶基，R5為環(huán)A 上的任選取代基，或如式I中所定義的雜環(huán)取代基之一。K為NH2或可通過(guò)已知的文獻(xiàn)方法 最終轉(zhuǎn)化為氨基的其他官能團(tuán)，例如N02、COOH或C00R，所述方法例如NO2的還原(如方案 1 所論述的)或 COOH 的 Curtius 重排(有關(guān)綜述參見(jiàn) Organic Reactions, 3 =337(1947)) L3和L4是鹵素。(K為COOH也可由K為COOR通過(guò)簡(jiǎn)單的堿催化或酸催化水解形成)。一般 而言，引入R2和R5的選擇性和順序可通過(guò)化合物(3-1)中所選擇的鹵素L3和L4的相對(duì)反 應(yīng)性、雜環(huán)的內(nèi)在選擇性和/或所采用的反應(yīng)條件來(lái)實(shí)現(xiàn)。在選擇性引入R2和R5時(shí)使用鹵 素L3和L4的相對(duì)選擇性的例子包括這樣的情況在L3為氟代基且L4為溴代基的式3-1化 合物中，可實(shí)現(xiàn)親核試劑對(duì)氟代基的選擇性置換，然后通過(guò)金屬催化的取代化學(xué)反應(yīng)(例 如Suzuki或Stille交叉偶聯(lián)反應(yīng)，如下面進(jìn)一步示出的)取代剩下的溴代基。類似地，在 其中L3和L4之一為碘代基且另一者為溴代基或氯代基的式3-1化合物中，可在碘代基上 實(shí)現(xiàn)選擇性金屬催化的取代化學(xué)反應(yīng)(例如Suzuki或Stille交叉偶聯(lián)反應(yīng)或Buchwald/ Hartwig胺化反應(yīng)，如下面進(jìn)一步論述的)，然后通過(guò)另一金屬催化的取代反應(yīng)置換剩下的 溴代基或氯代基。如方案3所示，可先取代式3-1中的離去基團(tuán)L3以獲得式3_3化合物，或可先取 代離去基團(tuán)L4以獲得式3-2化合物。然后使化合物3-2或3-3反應(yīng)以置換L3或L4，從而得 到式3-4化合物。因而，可將式3-1化合物與仲胺、氨或受保護(hù)的胺(例如氨基甲酸叔丁基酯)的直 接親核置換或金屬催化胺化(有關(guān)綜述參見(jiàn)Modern Amination Methods =Ricci, Α.編輯； Wiley-VCH =Weinheim, 2000)用于在其中R5為伯胺或仲胺、氨基(NH2)和胺等價(jià)基團(tuán)或受保 護(hù)的氨基的式3-2或3-3中引入R5。如方案1所述，化合物3-1與硼酸或硼酸酯進(jìn)行金屬 催化偶聯(lián)反應(yīng)(Suzuki反應(yīng)，M為硼酸基團(tuán)或硼酸酯基團(tuán))或與有機(jī)錫化合物進(jìn)行金屬催 化偶聯(lián)反應(yīng)(Stille反應(yīng)，M為SnR3，其中R為烷基，其他取代基是如上面所定義的)，可得 到式3-2或3-3化合物。還可通過(guò)如上所述的金屬催化的Suzuki或Stille偶聯(lián)反應(yīng)將化合物3-2進(jìn)一步 轉(zhuǎn)化為化合物3-4。隨后，同樣還可通過(guò)直接親核取代或用親核試劑進(jìn)行的金屬催化反應(yīng)， 或通過(guò)與上文所述相同的金屬催化交叉偶聯(lián)反應(yīng)，將化合物3-3中的L4用R5取代，以獲得 式3-4化合物。當(dāng)式(3-2、3-3或3-4)中的R5是受保護(hù)的胺且K不是氨基時(shí)，可將其去保護(hù) 以顯露該氨基官能團(tuán)。然后可如方案1所述將該氨基官能團(tuán)進(jìn)一步衍生化。當(dāng)式3-4中的K 基團(tuán)不是氨基(例如上述官能團(tuán))時(shí)，可根據(jù)已知的的文獻(xiàn)方法(參見(jiàn)例如，ComprehensiveOrganic Transformations :Larock，R. S. ；Wiley and Sons Inc.，USA，1999)將其轉(zhuǎn)化為 氨基，所得的胺3-5可用于如方案(1)所述的酰胺鍵形成反應(yīng)，以獲得式I化合物。當(dāng)式 3-4中的K為氨基時(shí)，可將其直接用于如上所述的酰胺偶聯(lián)反應(yīng)。方案4a 方案4a和4b示出了待根據(jù)方案3進(jìn)一步進(jìn)行修飾的中間體的制備，該制備是從 式4-1和4-5的單鹵素取代化合物開(kāi)始，通過(guò)在完成對(duì)第一個(gè)離去基團(tuán)的取代后引入第二 個(gè)離去基團(tuán)來(lái)進(jìn)行。這些中間體還可以用于合成式I化合物，其中環(huán)A是吡啶，R5為環(huán)A上 的任選取代基或雜環(huán)取代基之一。如方案3所示，可如式I中所描述的將吡啶環(huán)上其余的位 置進(jìn)行取代。K為NH2或可通過(guò)已知的文獻(xiàn)方法(例如，如方案3中所述的還原或Curtius 重排)最終轉(zhuǎn)換為氨基的其他官能團(tuán)，例如N02、COOH或C00R。L3或L4是鹵素。在這些化 合物中，T是H或是可通過(guò)已知的文獻(xiàn)方法(參見(jiàn)例如，Nicolai，E.等人，J. Heterocyclic Chemistry, 31, (73)，(1994))轉(zhuǎn)化為離去基團(tuán)L3或L4(例如鹵素、三氟甲磺酸酯或甲磺酸 酯)的官能團(tuán)例如0H。通過(guò)方案3所述的方法置換式4-1化合物中的L3或式4-5中的L4， 可得到式4-2和4-6化合物。此時(shí)，可通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)方法將化合物4-2或4-6的取代基T轉(zhuǎn)化 為離去基團(tuán)L4或L3 (優(yōu)選鹵素)，以得到式4-3和4-5化合物。例如，當(dāng)T為OH時(shí)，實(shí)現(xiàn)該 轉(zhuǎn)化的優(yōu)選試劑是亞硫酰氯、PCl5, POCl3或PBr3 (參見(jiàn)例如，Kolder，den Hertog.，Reel. Trav. Chim. Pays-Bas ；285, (1953)，以及 Iddon, B 等人，J. Chem. Soc. Perkin Trans. 1.， 1370，(1980))。當(dāng)T為H時(shí)，可將其直接鹵化(優(yōu)選溴化)以得到式4_3或4_7化合物(參 見(jiàn)例如，Canibano，V.等人，Synthesis，14，2175，(2001))。溴化的優(yōu)選條件是在合適的溶 劑例如DCM或乙腈中使用NBS?？赏ㄟ^(guò)上述方法分別弓I入其余的基團(tuán)R2或R5，將式4-3或4_7化合物轉(zhuǎn)化為式4_4 或4-8化合物，然后通過(guò)方案3所述的將式3-4和3-5轉(zhuǎn)化為式I化合物的方法，將其轉(zhuǎn)化 為式I化合物。本發(fā)明的代表性化合物以及它們的合成在下面的圖表中以及其后的實(shí)例中給出。 以下內(nèi)容僅用于示例性目的，絕不旨在限制本發(fā)明。本發(fā)明的優(yōu)選化合物為實(shí)例14、17、34、 35、38a、38b、40、51a、51b、55 和 56 ；最優(yōu)選的是化合物 38a。
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實(shí)例15~氰基-呋喃-2-甲酸 在氬氣下向配有攪拌棒和維格勒(Vigreaux)柱的燒瓶加入2_甲?；鵢5_呋喃甲 酸(2. 8g,20mmol)、鹽酸羥胺(2. 7g,40mmol)和干吡啶(50mL)。將該混合物加熱至85°C，加 入乙酸酐(40mL)并將混合物攪拌3小時(shí)。冷卻至60°C后，加入水(250mL)并將所得混合物 在室溫下攪拌70小時(shí)。將混合物用濃鹽酸酸化至pH為2，并用3 1的二氯甲烷-異丙 醇(SXlOOmL)進(jìn)行萃取。將合并的有機(jī)層用水(IOOmL)、鹽水(IOOmL)洗滌，用無(wú)水硫酸 鈉干燥，真空濃縮得到標(biāo)題化合物，為棕褐色固體(1.26g，46%)。1H-NMR(CD3OD ；400MHz) δ 14. 05 (br s，1H)，7. 74 (d, 1H, J = 3. 8Hz)，7. 42 (d, 1H, J = 3. 8Hz)。實(shí)例24-氰基-IH-吡咯-2-甲酸 本標(biāo)題化合物可通過(guò)文獻(xiàn)方法制備(Loader和Anderson，CanadianJ. Chem. 59 2673(1981))。1H-Wr(CdcI3AOOMHz) δ 12. 70 (br s，1H)，7. 78 (s，1H)，7. 13 (s，1H)。實(shí)例34-氰基-1_(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-1Η-咪唑-2-甲酸鉀鹽 a) 1-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-IH-咪唑-4-甲腈 將裝有咪唑-4-甲腈(0.5g，5. 2mmol) (Synthesis，677，2003)、2-(三甲基甲硅 烷基)乙氧甲基氯(SEMCl) (0. 95mL, 5. 3mmol), K2CO3(1. 40g, 10. 4mmol)和丙酮(5mL)的 燒瓶在室溫下攪動(dòng)10小時(shí)。將所得混合物用EtOAc (20mL)稀釋，用水(20mL)和鹽水 (20mL)洗滌，并將有機(jī)層用MgSO4干燥。將粗產(chǎn)物用30% EtOAc/己烷經(jīng)20_g固相萃取 柱(SPEcartridge) ( 二氧化硅)洗脫得到0. 80g(70% )呈無(wú)色油狀的標(biāo)題化合物。質(zhì)譜 (Cl (CH4)，m/z) C10H17N3OSi 的計(jì)算值224. 1 (M+H)，實(shí)測(cè)值224. 1。b) 2-溴-1-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-IH-咪唑-4-甲腈 向1-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-IH-咪唑-4-甲腈(0. 70g，3. lmmol)(在 前面步驟中制備)于CCl4 (IOmL)中的溶液中加入NBS(0.61g，3.4mmol)和AIBN (催化)，并 將所得混合物在60°C加熱4小時(shí)。將反應(yīng)混合物用EtOAc (30mL)稀釋，用NaHCO3 (2 X 30mL) 和鹽水(30mL)洗滌，并將有機(jī)層用Na2SO4干燥然后濃縮。用30% EtOAc/己烷將標(biāo)題化 合物從20-g固相萃取柱(二氧化硅)洗脫下來(lái)，得到0. 73g(77% )黃色固體物質(zhì)。質(zhì)譜 (Cl (CH4)，m/z) C10H16BrN3OSi 的計(jì)算值302· 0/304. 0 (M+H)，實(shí)測(cè)值302· 1/304. 1。c)4_氰基-l-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-1Η-咪唑-2-甲酸乙酯 向-40°C下的2-溴-l-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-1Η-咪唑-4-甲腈 (0. 55g，1. 8mmol)(在前面的步驟中制備)于THF(6mL)中的溶液中滴加2M i-PrMgCl于 THF(ImL)中的溶液。讓反應(yīng)物在-40°C下攪拌10分鐘，然后冷卻至-78°C，加入氰基甲酸 乙酯(0. 3g，3. Ommol)。使讓反應(yīng)物達(dá)到室溫并攪拌1小時(shí)。將反應(yīng)混合物用飽和NH4Cl 水溶液猝滅，用EtOAc (20mL)稀釋，用鹽水(2X20mL)洗滌，將有機(jī)層用Na2SO4干燥，然后 濃縮。用30% EtOAc/己烷將標(biāo)題化合物從20-g固相萃取柱(二氧化硅)洗脫下來(lái)，得 到0. 4g(74% )無(wú)色油狀物。質(zhì)譜(ESI，m/z) =C13H21N3O3Si的計(jì)算值296. 1 (M+H)，實(shí)測(cè)值 296.1。
向4-氰基-1-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-IH-咪唑-2-甲酸乙酯(0. 4g， 1.3mm0l)(在前面的步驟中制備)于乙醇(3mL)中的溶液中加入6MK0H溶液(0. 2mL)，將攪 拌反應(yīng)10分鐘，然后濃縮得到ο. 40g(i00% )呈黃色固體的標(biāo)題化合物。1H-NmrgoomHz, CD3OD) δ 7. 98 (s, 1H), 5. 92 (s, 2H), 3. 62 (m, 2H), 0. 94 (m, 2H), 0. 00 (s, 9H) 質(zhì)譜(ESI-neg， m/z) C11H17N3O3Si 的計(jì)算值266· 1 (M-H)，實(shí)測(cè)值266· 0。實(shí)例45-氰基-呋喃-2-甲酸「4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-(3-甲基-噻吩基)-苯 基1-酰胺 a) 1-(3-溴硝基-苯基)~4~甲基-哌嗪將2-溴-4-氟硝基苯(949mg，4. 31mmol)分兩份加入至0°C的純N-甲基哌 嗪(SmL)中，并讓其升溫至室溫。將反應(yīng)加熱至60°C維持1小時(shí)，然后將反應(yīng)混合物用 50mL EtOAc稀釋并傾注入H2O(50mL)中。分離各層，將有機(jī)層用飽和NaHCO3水溶液洗滌， 干燥(Na2SO4),真空濃縮得到580mg(45% )呈黃色固體的標(biāo)題化合物質(zhì)譜(ESI，m/z) C11H14BrN3O2 的計(jì)算值300. 0 (M+H)，實(shí)測(cè)值300. 1。b) 4，4，5，5-四甲基-2-(3-甲基-噻吩-2-基)-「1，3，21 二氧雜硼燒 向-40°C下攪拌的2-溴-3-甲基噻吩(337mg，1. 9mmol)于8mL THF中的溶液中加 入正丁基鋰(0.8mL，2.5M/己烷)，并讓反應(yīng)物攪拌30分鐘。此時(shí)加入2-異丙氧基-4，4， 5，5-四甲基-[1，3，2] 二氧雜硼烷(775 μ L，3. 8mmol)，并讓反應(yīng)物升溫至環(huán)境溫度，繼續(xù)攪 拌1小時(shí)。然后將反應(yīng)混合物冷卻至0°C，用飽和NaHCO3水溶液(IOmL)猝滅。將該混合物 傾注入EtOAc (IOOmL)中，用H2O (2 X 50mL)洗滌，干燥(Na2SO4)并真空濃縮。通過(guò)硅膠制備 型薄層色譜法(20% EtOAc-己烷)純化殘余物，得到224mg(53% )呈油狀的標(biāo)題化合物。
1H-NMR(CDCl3 ；400MHz) δ 1. 36 (s, 12H)，2. 5 (s，3H)，6. 99 (d, 1H, J = 4. 8Hz)，7. 50 (d, 1H, J =4. 8Hz)。c) 1-甲基-4-「3-(3-甲基-噻吩基)_4_硝基-苯基哌嗪 向裝有1-(3-溴-4-硝基-苯基)-4-甲基-哌嗪(68mg，0. 2mmol，如在實(shí)例4的步 驟(a)中制備)、4，4，5，5_四甲基-2-(3-甲基-噻吩-2-基)-[1，3，2] 二氧雜硼烷(61mg， 0. 27mmol，如前面的步驟中制備)和Pd(PPh3)4(14mg，6mol%)的燒瓶中加入甲苯(3mL)、乙 醇(3mL)和2M Na2CO3 (4mL)。將所得混合物在80°C下加熱2小時(shí)，然后傾注入EtOAc (25mL) 中。分離有機(jī)層、干燥(Na2SO4)并真空濃縮。通過(guò)硅膠制備型薄層色譜法(EtOAc)純化， 得到40mg(63% )呈淺黃色固體的標(biāo)題化合物。質(zhì)譜(ESI, m/z) =C16H19N3O2S的計(jì)算值 318. 1(M+H)，實(shí)測(cè)值318. 2。d)5-氰基-呋喃-2-甲酸「4_(4_甲基-哌嗪基)-2_(3_甲基-噻 吩-2-基)-苯基1-酰胺 將1-甲基-4-[3-(3-甲基-噻吩-2-基)-4-硝基-苯基]-哌嗪(60mg，0. 1 Snmol， 如前面的步驟中制備)在H2 (1個(gè)大氣壓)下與40mg 5% Pd-C于MeOH(5mL)中的溶液一起 攪拌2小時(shí)。將反應(yīng)混合物通過(guò)Celite過(guò)濾并進(jìn)行真空濃縮，得到40mg (72% )呈褐色固體 的4- (4-甲基-哌嗪-1-基)-2- (3-甲基-噻吩-2-基)-苯胺，其無(wú)需進(jìn)一步純化就可直 接使用。使用類似于實(shí)例9步驟(c)的方法，讓4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-(3-甲基-噻 吩-2-基)_苯胺(40mg，0. 13mmol)與5-氰基-呋喃-2-碳酰氯(30mg，0. 19mmol，如實(shí)例9 的步驟(c)中制備)在存在DIEA(61 μ L，0. 34mmol)的情況下反應(yīng)，得到18. 9mg(36%)呈黃 色固體的標(biāo)題化合物。1H-NMR(CDCl3 ；400MHz) δ 2. 13(s，3H)，2. 38(s，3H)，2. 59-2. 62 (m, 4H)，3. 24-3. 27 (m, 4H)，6. 92 (d, 1H, J = 2. 8Hz)，7. 06 (d, 1H, J = 5. 1Hz)，7. 15 (d, 1H, J = 3. 7Hz)，7. 19 (d, 1H, J = 3. 7Hz)，7. 02 (dd, 1H, J = 2. 8,9. OHz)，7. 42 (d, 1H, J = 5. IHz)， 8. 11 (s，1H)，8· 34 (d，1H，J = 9. OHz)；質(zhì)譜(ESI，m/z) =C22H22N4O2S 的計(jì)算值407. 1 (M+H)， 實(shí)測(cè)值=407. 1。實(shí)例55-氰基-呋喃-2-甲酸「4-(4-甲基-哌嗪基)(4_甲基-噻吩-3-基)-苯 基1-酰胺
a)4,4,5,5-四甲基-2-(2_甲基-噻吩-3-基)-「1, 3, 21 二氧雜硼燒 使用類似于實(shí)例4的步驟(b)的方法，將3-溴-4-甲基噻吩(571mg，3. 2mmol) 用正丁基鋰(1.41mL，2. 5M/己烷)處理，然后讓其與2-異丙氧基-4，4，5，5-四甲基-[1， 3,2] 二氧雜硼烷(775μ ，3.8πιπι01)反應(yīng)，得到189mg(26% )呈無(wú)色油狀的標(biāo)題化合物。 1H-NMR (CDCl3 ；400MHz) δ 1. 32 (s，12H)，2· 42(s，3H)，6· 90-6. 91 (m, 1H)，7· 84 (d, 1Η, J = 2. 9Hz)。b) 1-甲基-4-「3-(4-甲基-噻吩-3-基)_4_硝基-苯基]-哌嗪使用類似于實(shí)例4的步驟(c)的方法，讓1-(3-溴-4-硝基-苯基)-4-甲基-哌 嗪(162mg，0. 54mmol)、4，4，5，5-四甲基-2_(2_ 甲基-噻吩-3-基)-[1，3，2] 二氧雜硼 烷(145mg,0. 64mmol)和 Pd(PPh3)4(37mg，6mol % )反應(yīng)，得到 108mg(71 % )呈黃色固體 的標(biāo)題化合物。1H-NMR(CDCl3 ；400MHz) δ 2. 02(s，3H)，2· 37(s，3H)，2· 55-2. 57(m，4H)， 3. 42-3. 45 (m, 4H)，6. 66 (d, 1H, J = 2. 8Hz)，6. 87 (s, 1H)，6. 99-7. 00 (m, 1H)，7. 09 (d, 1H, J = 3. 2Hz) ,8. 13 (d, 1H, J = 9. 2Hz)。c) 4- (4-甲基-哌嗪-1-基)-2- (4~甲基-噻吩基)-苯胺使用類似于實(shí)例4的步驟(d)的方法，將1-甲基-4-[3_(4-甲基-噻 吩-3-基)-4_硝基-苯基]-哌嗪(100mg，0. 32mmol)與80mg 5% Pd-C 一起在H2下攪拌， 得到82mg(89%)呈深色油狀的標(biāo)題化合物，其無(wú)需進(jìn)一步純化就可直接使用。質(zhì)譜(ESI， m/z) =C16H21N3S 的計(jì)算值288. 15(M+H)，實(shí)測(cè)值288. 1。d)5-氰基-呋喃-2-甲酸「4_(4_甲基-哌嗪基)-2_(4_甲基-噻 吩-3-基)-苯基1-酰胺
67
使用類似于實(shí)例9的步驟(c)的方法，讓5-氰基-呋喃-2-碳酰氯(64mg， 0.41mmol，如實(shí)例9的步驟(c)中制備)與4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2_(4_甲基-噻 吩-3-基)_苯胺(80mg，0. 27mmol，如前面的步驟中制備)在存在DIEA(0. IOmL,0. 59mmol) 的情況下反應(yīng)，得到25.8mg(24% )呈黃色固體的標(biāo)題化合物。1H-Nmr(CdCI3JOOMHz) δ 2. 09 (s，3Η)，2. 37 (s, 3H)，2. 59-2. 60 (m, 4H)，3. 24-3. 26 (m, 4H)，6. 83 (d, 1H, J = 2. 9Hz)， 6. 98-7. 06 (m，2H)，7. 14—7. 21 (m，3H)，7. 96 (s，1H)，8. 32 (d，1H，J = 9.0Hz)。質(zhì)譜(ESI, m/ ζ) =C22H22N4O2S 的計(jì)算值407. 1 (Μ+Η)，實(shí)測(cè)值407. 1。實(shí)例64-氰基-IH-咪唑-2-甲酸{2-環(huán)己-1-烯基-4-「1-(2-羥基-1-羥甲基-乙 ；S ) - _定-4-胃 1 -絲 1 -酉a) 4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸{2_ 環(huán)己 烯基-4-「l_(2, 2_ 二甲基-「1, 31 二氧 雜環(huán)己烷-5-某)-哌啶-4-某1 -苯某丨-酰胺向4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸(2_環(huán)己烯基_4_哌啶_4_基-苯基)-酰胺 三氟乙酸鹽(81mg，0. 16mmol，如實(shí)例14的步驟(b)中制備)于CH2Cl2(3mL)中的漿液中加 ANEts(33yL,0. 24mmol)。然后將溶液用2，2-二甲基-[1，3] 二氧雜環(huán)己烷_(kāi)5_酮(31mg， 0. 24mmol)處理，并讓反應(yīng)物攪拌3小時(shí)。此時(shí)將NaBH(OAc)3(5Img,0. 24mmol) 一次性加 入，并讓反應(yīng)物再攪拌4小時(shí)。將反應(yīng)混合物用H2O(IOmL)稀釋并用EtOAc (2 X 25mL)萃取。 將有機(jī)萃取物干燥(Na2SO4)并真空濃縮。通過(guò)硅膠制備型薄層色譜法(IO^MeOH-CHCl3) 純化，得到22mg(28% )呈灰白色半固體的標(biāo)題化合物。質(zhì)譜(ESI，m/z) =C28H35N5O3的計(jì)算 值490. 2 (M+H)，實(shí)測(cè)值490. 6。b)4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸{2_環(huán)己烯基_4-「1-(2_羥基羥甲基-乙 某)-哌啶酉H安三氟,乙_向 4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸{2_ 環(huán)己 烯基 _4-[1_ (2，2-二甲基-[1，3] 二 氧雜環(huán)己烷-5-基)-哌啶-4-基]-苯基}-酰胺(22mg，0. 04mmol,如前面的步驟中制
備)于THF-H20(lmL，4 lv/v)中的溶液中加入TFA (0. 4mL)，并讓反應(yīng)物攪拌1小時(shí)。在 真空下去除溶劑得到14mg(60% )呈琥珀色泡沫的標(biāo)題化合物。1H-NMR(OT3ODdOOMHz) δ 1. 78-1. 90 (m, 4H)，2. 03-2. 16 (m, 3H)，2. 29 (br s，4H)，2. 88-2. 96 (m, 1H)，3. 37-3. 40 (m, 1H)，3. 46-3. 53 (m, 2H)，3. 74-3. 78 (m, 3H)，5. 83 (s, 1H)，7. 13 (d, 1H, J = 2. OHz)，7. 22 (dd, 1H, J = 2. 0，8. 4Hz)，8. 03(s，lH)，8. 17(d，lH，J = 8. 4Hz)；質(zhì)譜(ESI，m/z) =C25H31N5O3 的計(jì) 算值450. 2 (M+H)，實(shí)測(cè)值450. 2。實(shí)例74-氰基-IH-咪唑-2-甲酸{2_環(huán)己烯基「1_ (2~嗎啉_4_基-乙酰基)-哌 啶-4-基1-苯基丨-酰胺 通過(guò)注射器向嗎啉-4-基-乙酸乙酯(117mg，0.67mmOl)于乙醇(4mL)中的溶液 中加入6N K0H(110yL，0. 67mmol)，并繼續(xù)攪拌3小時(shí)。真空濃縮得到122mg(100% )嗎 啉-4-基-乙酸鉀鹽。向嗎啉-4-基-乙酸鉀鹽(29mg，0. 15mmol)、4_氰基-IH-咪唑-2-甲 酸(2-環(huán)己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯基)-酰胺三氟乙酸鹽(65. Img,0. 13mmol，如 實(shí)例14的步驟(b)中制備)和PyBroP(93mg，0. 19mmol)于CH2Cl2(4mL)中的混合物中加 入DIEA(51yL，0. 29mmol)，并讓反應(yīng)物攪拌過(guò)夜。將反應(yīng)混合物用CH2Cl2 (50mL)稀釋， 用吐0(2\25!^)洗滌，干燥(Na2SO4)并真空濃縮。通過(guò)硅膠制備型TLC純化粗產(chǎn)物，得 到 8. lmg(12% )呈白色固體的標(biāo)題化合物。iH-NMlUCDCls ；400MHz) δ 1. 68-2. 04 (m, 5H)， 2. 20-2. 29 (m, 4H)，2. 53-2. 78 (m, 5H)，3. 09-3. 23 (m, 6H)，3. 35-3. 40 (m, 1H)，3. 72 (br s, 4H)，4. 16-4. 22 (m, 1H)，4. 73-4. 77 (m, 1H)，5. 82 (s, 1H)，7. 00 (s, 1H)，7. 12 (dd, 1H，J = 0. 6， 8. OHz) ,7. 73 (s，1H) ,8. 27 (d, 1H, J = 8. IHz) ,9. 48 (s, 1H)；質(zhì)譜(ESI，m/z) C28H34N6O3 的計(jì) 算值503. 27(M+H)，實(shí)測(cè)值503. 1。實(shí)例84-氰基-IH-咪唑-2-甲酸{2-環(huán)己烯基「1_ (3~嗎啉_4_基-丙?；?-哌 啶-4-基1-苯基丨-酰胺 向裝有3-嗎啉-4-基-丙酸鉀鹽(94mg，0. 47mmol,完全如實(shí)例7中所述由 3-嗎啉-4-基-丙酸乙酯制備)、4_氰基-IH-咪唑-2-甲酸(2-環(huán)己-1-烯基-4-哌 啶-4-基-苯基)_酰胺三氟乙酸鹽(179mg，0.36mmOl，如實(shí)例14的步驟(b)中制備)、 EDCI(83mg,0. 43mmol)和 HOBT(68mg，0. 5mmol)的燒瓶加入 DMF(4mL)。向該攪拌下的漿液 中加入DIEA(157y L，0. 9mmol)，并讓反應(yīng)物攪拌過(guò)夜。將反應(yīng)混合物用H2O(IOmL)稀釋并 用EtOAc (2 X 25mL)萃取。將合并的有機(jī)萃取物干燥(Na2SO4)，真空濃縮，并將粗產(chǎn)物通過(guò)硅 膠制備型TLC純化，得到10.4mg(6% )呈白色固體的標(biāo)題化合物。1H-NMR(⑶Cl3 ；400MHz) δ 1. 49-1. 93 (m, 5H)，2. 22-2. 31 (m, 3H)，2. 52 (br s，4H)，2. 58-2. 63 (m, 3H)，2. 74-2. 76 (m, 4H)，3. 10-3. 17 (m, 2H)，3. 72 (br s，4H)，3. 97-4. 02 (m, 2H)，4. 76-4. 81 (m, 2H)， 5. 81-5. 82 (m, 1H)，6. 81-6. 82 (m, 1H)，6. 99-7. 00 (m, 1H)，7. 09-7. 13 (m, 1H)，7. 70 (s, 1H)， 8. 26(d，lH，J = 8. 2Hz)，9. 51(s，lH)；質(zhì)譜(ESI，m/z) =C29H36N6O3 的計(jì)算值517. 28M+H)，實(shí) 測(cè)值517. 3。實(shí)例95-氰基-呋喃-2-甲酸「2'-甲基-5-(4-甲基-哌嗪基)_聯(lián)苯基1 -酰 胺 向 1. OOg(4. 55mmol)2-溴-4-氟硝基苯(Oakwood)于 12mL EtOH中的的冷卻(0°C) 溶液中加入1. 52mL(13. 7mmol)哌啶。將所得溶液在0°C攪拌0. 5小時(shí)，然后在60°C攪拌4 小時(shí)。將混合物真空濃縮，溶解于EtOAc (60mL)中，用水(3 X IOOmL)和鹽水(IOOmL)洗滌，
并進(jìn)行干燥(Na2SO4)。將其真空濃縮并用1-3% MeOH- 二氯甲烷在50_g 二氧化硅固相萃 取柱上進(jìn)行色譜純化，得到1.06g(77% )呈棕黃色固體的標(biāo)題化合物。質(zhì)譜(ESI，m/z) C11H14BrN3O2 的計(jì)算值300. 0(M+H，79Br)，實(shí)測(cè)值300. 1。b) 1-甲基-4- (2 ‘ ~甲基-6-硝基-聯(lián)苯-3-基)-哌嗪 向200mg(0. 666mmol) 1_(3_溴-4-硝基-苯基)_4_甲基-哌嗪(如前面的步驟 中制備)、136mg(0.999mmol)和77. Omg (0. 0666mmol)四(三苯基膦)鈀(0)的混合物在氬 氣下加入4. OmL脫氣的二甲氧基乙烷(DME)和400 μ L(0. 799mmol) 2. OM Na2CO3水溶液。將 混合物在氬氣下于80°C攪拌加熱14小時(shí)。將冷卻(RT)的混合物濃縮并用1-5% MeOH于 二氯甲烷-己烷(1 1)中的溶液在10-g 二氧化硅固相萃取柱上進(jìn)行色譜純化。將產(chǎn)物 級(jí)分用80mg脫色炭處理，過(guò)濾，濃縮，然后用1-3% EtOH-二氯甲烷在相似的柱上再次進(jìn)行 色譜純化，得到265mg呈黃色樹(shù)脂狀的標(biāo)題化合物(通過(guò)1H-NMR測(cè)得純度為75%，為與三 苯膦的混合物)，其無(wú)需進(jìn)一步純化就用于下面的反應(yīng)。質(zhì)譜(ESI，m/z) =C11H21N3O3的計(jì)算 值312. 2(M+H)，實(shí)測(cè)值312. 2。c) 5-氰基-呋喃-2-甲酸「2'-甲基_5-(4_甲基-哌嗪基)_聯(lián)苯基酰 胺將140mg(基于75%純度為0. 337mmol)l-甲基-4-(2'-甲基_6_硝基-聯(lián) 苯-3-基)-哌嗪(如前面的步驟中制備)和70mg 10%披鈀碳(DegussaElOl-NE/W型， Aldrich, 50重量％的水)于5mL THF中的混合物在在氫氣氛下劇烈攪拌1小時(shí)。將混合物 過(guò)濾(Celite)，用二氯甲烷(2X2mL)洗滌，將所得苯胺溶液置于氬氣下并立即用于下面的 反應(yīng)。在進(jìn)行上述還原的同時(shí)，將處于CaSO4干燥管下的55. 4mg(0. 404mmol) 5_氰基呋 喃-2-甲酸(如實(shí)例1中制備)于2. 5mL無(wú)水二氯甲烷中的溶液用52. 9 μ L(0. 606mmol) 草酰氯處理，接著用10 μ L無(wú)水DMF處理。將溶液攪拌25分鐘并在快速在20-25°C下真 空濃縮。將所得5-氰基-呋喃-2-碳酰氯在高真空下放置2-3分鐘，然后立即置于氬氣 下，在冰浴中冷卻至0°C，并用上面產(chǎn)生的苯胺溶液處理，接著用141 μ L(0. 808mmol)N, N-二異丙基乙胺(DIEA)處理。在室溫下攪拌30分鐘后，將混合物真空濃縮，將所得殘余物用2-10% EtOH-二氯甲烷在20-g 二氧化硅固相萃取柱上進(jìn)行色譜純化，得到黃色樹(shù) 脂，將其從EtOAc-己烷中結(jié)晶出來(lái)，得到17. 2mg(13% )呈黃色固體的純標(biāo)題化合物以及 70. 3mg不純的標(biāo)題化合物。將不純的級(jí)分溶解于50mL EtOAc中，用飽和NaHCO3水溶液-IM K2CO3(1 l,2X20mL)和鹽水(20mL)洗滌，干燥(Na2SO4)并濃縮，得到 43. 4mg(32% )呈 晶狀黃色固體的額外的標(biāo)題化合物(總產(chǎn)率為45% )。1H-NMR(⑶Cl3 ；400MHz) δ 8. 32 (d， 1H, J = 9. 0Hz)，7. 73 (br s，1H)，7. 34-7. 54 (m, 3H)，7. 25 (d, 1H, J = 7. 7Hz) ,7. 12, 7. 14 (AB q，2H，J = 3. 7Hz)，7. 01(dd，lH，J = 9. 0，2. 8Hz)，3. 25-3. 27 (m，4H)，2. 59-2. 62 (m，4H)， 2. 38(s，3H)，和 2. 15(s，3H)。質(zhì)譜(ESI, m/z) =C21H24N4O3 的計(jì)算值401. 2 (M+H)，實(shí)測(cè)值 401. 1。實(shí)例10 5-氰基-呋喃-2-甲酸「2'-氟-5-(4-甲基-哌嗪基)_聯(lián)苯基1 -酰 胺按照實(shí)例9的步驟(b)中的方法，使用75. Omg (0. 250mmol) 1_ (3_溴~4~硝基-苯 基)-4_甲基-哌嗪(如實(shí)例9的步驟(a)中制備)、136mg(0.999mmol)2-氟苯硼酸、 26. 8mg(0. 0232mmol)四(三苯基膦)鈀(0)和 400 μ L (0. 799mmol) 2. OM Na2CO3 水溶液于 DME中的溶液，不同的是將混合物加熱22小時(shí)。用1-5% MeOH于二氯甲烷-己燒(1 1) 中的溶液在5-g 二氧化硅固相萃取柱上進(jìn)行色譜純化，得到95. Omg呈黃色樹(shù)脂狀的標(biāo)題化 合物(通過(guò)1H-NMR測(cè)得純度為76%，為與三苯膦的混合物)，其無(wú)需進(jìn)一步純化即用于下 面的反應(yīng)。質(zhì)譜(ESI，m/z) =C17H18FN3O3 的計(jì)算值316. 1 (M+H)，實(shí)測(cè)值316. 2。b) 5-氰基-呋喃-2-甲酸「2'-氟-5-(4-甲基-哌嗪基)_聯(lián)苯基1 -酰 胺 a) 1~(2'-氟硝基-聯(lián)苯基)~4~甲基-哌嗪 按照實(shí)例9的步驟(c)中的方法，使用93. 2mg(基于76 %純度為 0. 225mmol)l-(2 ‘-氟-6-硝基-聯(lián)苯-3-基)-4-甲基-哌嗪(如前面的步驟中制 備)、46mg 10%披鈀碳、37.0mg(0. 270mmol)5-氰基呋喃-2-甲酸(如實(shí)例1中制備)、 35. 3μ L(0. 405mmol)草酰氯、5. 0 μ L 無(wú)水 DMF 禾口 94. 1 μ L(0. 540mmol)DIEA。用 1-4 % MeOH- 二氯甲烷在5-g 二氧化硅固相萃取柱上進(jìn)行色譜純化，得到69. Smg (77 % )呈黃色樹(shù) 脂狀的標(biāo)題化合物。1H-NMR (CDCl3 ；400MHz) δ 8. 04 (d, 1H, J = 9. OHz) , 7. 93 (br s，lH)， 7. 434-7. 48 (m, 1H)，7. 37 (td, 1H，J = 7. 5，1. 8Hz)，7. 22-7. 31 (m, 2H) ,7. 13, 7. 18 (AB q, 2H, J = 3. 7Hz)，7. 02(dd，lH，J = 9. 0,2. 9Hz) ,6. 88 (d, 1H, J = 2. 9Hz)，3. 24-3. 27 (m，4H)， 2. 57-2. 60 (m, 4H)和 2. 36 (s, 3H)。質(zhì)譜(ESI，m/z) =C23H21FN4O2 的計(jì)算值:405· 2 (Μ+Η)，實(shí)測(cè) 值:405. 2。實(shí)例115-氰基-呋喃-2-甲酸「2-環(huán)己-1-烯基-4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-酰 胺 將102mg(0. 340mmol) 1_(3_溴~4~硝基-苯基)_4_甲基-哌嗪(如實(shí)例9的步 驟(a)中制備)、59.7mg(0.474mmol)環(huán)己烯-1-基硼酸、43. 8mg(0. 0379mmol)四(三苯基 膦)鈀(0)的混合物在氬氣下用206 μ L(0. 412mmol) 2. OM脫氣Na2CO3水溶液、0. 6mL脫氣 無(wú)水甲苯和0. 2mL脫氣無(wú)水EtOH處理，并將混合物在100°C加熱21小時(shí)。冷卻至室溫后， 將混合物傾注入EtOAc (IOmL)中，用鹽水(IOmL)洗滌，干燥(Na2SO4)并真空濃縮。用 a) l-(3-環(huán)己烯基_4_硝基-苯基)_4_甲基-哌嗪
EtOH于二氯甲烷中的溶液在5-g 二氧化硅固相萃取柱上進(jìn)行色譜純化，得到126mg呈黃色 油狀的標(biāo)題化合物(通過(guò)RP-HPLC(C18柱)測(cè)得純度為74%，為與三苯膦的混合物)，其無(wú) 需進(jìn)一步純化即用于下面的反應(yīng)。質(zhì)譜(ESI，m/z) =C17H23N3O3的計(jì)算值302. 2 (M+H)，實(shí)測(cè) 值302. 2。 b) 5-氰基-呋喃-2-甲酸「2-環(huán)己-1-烯基-4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯 基1-酰胺向122mg(基于74 %純度為0. 299mmol) 1_(3_環(huán)己-1-烯基-4-硝基-苯 基)-4-甲基-哌嗪(如前面的步驟中制備)于5. OmL EtOH-水(2 1)中的溶液中加入 83. 8mg(l. 50mmol)鐵粉和160mg(2. 99mmol)NH4Cl,將該混合物在氬氣下回流12小時(shí)。另外 加入83. 8mg(l. 50mmol)鐵粉，并將混合物回流1小時(shí)。將混合物傾注入EtOAc (12mL)中， 過(guò)濾(Celite)，用EtOAc (2 X 4mL)洗滌，真空濃縮并溶解于無(wú)水THF (4. OmL)中。將所得苯 胺溶液置于氬氣下并直接用于下面的反應(yīng)。將處于CaSO4干燥管下的61. 6mg(0. 449mmol) 5_氰基呋喃_2_甲酸(如實(shí)例1中 制備)于2. 5mL無(wú)水二氯甲烷中的溶液用60. 0 μ L (0. 688mmol)草酰氯處理，接著用IOyL 無(wú)水DMF處理。將溶液攪拌25分鐘并快速在20-25°C下真空濃縮。將殘余物在高真空下 放置2-3分鐘，然后立即置于氬氣下，在冰浴中冷卻至0°C，并用上面產(chǎn)生的苯胺溶液處理， 接著用104yL(0.598mmol)DIEA處理。在室溫下攪拌30分鐘后，將混合物真空濃縮，溶 解于EtOAc (20mL)中，用IM K2CO3 (2X IOmL)和鹽水(IOmL)洗滌，干燥(Na2SO4)并真空濃 縮。將所得殘余物用1-4% MeOH-二氯甲烷在10-g 二氧化硅固相萃取柱上進(jìn)行色譜純化， 得到黃色樹(shù)脂，然后可將該樹(shù)脂從Et2O-己烷中結(jié)晶出來(lái)，得到84. 7mg(72% )呈晶狀黃色 固體的標(biāo)題化合物。iH-NMlUCDCls ；400MHz) δ 8. 57 (br s, 1H) ,8. 26 (d, 1H, J = 9. OHz)， 7. 20，7. 23 (AB q, 2H, J = 3. 7Hz)，6. 86 (dd, 1H, J = 9. 0，2. 9Hz)，6. 74 (d, 1H, J = 2. 9Hz)， 5. 84-5. 85 (m, 1H)，3. 20-3. 22 (m, 4H)，2. 57-2. 59 (m, 4H)，2. 36 (s, 3H)，2. 23-2. 30 (m, 4H) and 1. 79-1. 84(m，4H)。質(zhì)譜(ESI, m/z) =C23H26N4O2 的計(jì)算值:391. 2 (M+H)，實(shí)測(cè)值391. 2。實(shí)例125-氰基-呋喃-2-甲酸「2-(3,6- 二氫_2H_吡喃_4_基)_4_(4_甲基-哌 嗪-1-基)-苯基-酰胺
將l-[3-(3，6- 二氫_2H_吡喃_4_基)_4_硝基-苯基]_4_甲基-哌嗪(如前面 的步驟中制備)(80mg，0. 26mmol)采用類似于實(shí)例4步驟(d)的方法轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的胺，并將 其與如實(shí)例9的步驟(c)中制備的5-氰基-呋喃-2-碳酰氯(從137mg、l.OOmmol的實(shí)例 1所制備的5-氰基-呋喃-2-甲酸獲得)在CH2Cl2(2mL)中于0°C下進(jìn)行偶聯(lián)。通過(guò)在二氧 化硅(50% EtOAc/己烷-10% MeOH/EtOAc)上進(jìn)行快速色譜來(lái)分離產(chǎn)物，得到標(biāo)題化合物 (62. 2mg,60% )。1H-NMR(CDCl3 ；400MHz) δ 8. 35 (br s, 1H)，8· 12 (d, IHeach, J = 8. 76Hz)， 7. 24 (d, 1H, J = 5. 08Hz)，7. 19 (d, 1H, J = 5. 08Hz)，6. 88 (dd, 1H, J = 8. 76,2. 7Hz)，6. 73 (d, 1H, J = 2. 7Hz)，5. 88 (br s，1H)，4. 34 (m, 2H)，3. 94 (t, 2H, J = 5. 3Hz)，3. 23 (m, 4H)，2. 59 (m, 4H)，2. 38 (br s，5H)。LC-MS (ESI, m/z) C22H24N4O3 的計(jì)算值393. 1 (M+H)，實(shí)測(cè)值393. 2。 a) 1-「3-(3,6~ 二氫_2H_吡喃土基)土硝基二苯基1 甲基-哌嗪 將1-(3_溴-4-硝基-苯基)-4_甲基-哌嗪(如實(shí)例9的步驟(a)中制備) (225. Img, 0. 79mmol), K2CO3 (310. 9mg, 2. 25mmol)和 4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2] 二氧 雜硼烷-2-基)-3，6_ 二氫-2H-吡喃(Murata, M.等人，Synthesis, 778, (2000)) (157mg， 0. 75mmol)于二氧雜環(huán)己烷(5mL)中的溶液在80°C于氬氣下加熱過(guò)夜。讓反應(yīng)混合物冷卻 至室溫，濃縮，并將所得殘余物在二氧化硅上進(jìn)行色譜純化(10% EtOAc/己烷-20% MeOH/ EtOAc)，得到標(biāo)題化合物(82mg, 36% )。1H-NMR(CDCl3 ；400MHz) δ 8. 04 (d, 1H, J = 9. 4Hz)， 6. 78 (dd, 1H, J = 9. 4，2. 6Hz)，6. 58 (m, 1H, J = 2. 6Hz)，5. 58 (m, 1H)，4. 34 (m, 2H)，3. 95 (t, 2H, J = 5. 3Hz)，3. 46 (m, 4H)，2. 57 (m, 4H)，2. 38 (s, 3H)，2. 30 (m, 2H)。b) 5-氰基-呋喃-2-甲酸「2- (3,6- 二氫_2H_吡喃基)~4~ (4_甲基-哌 嗪-1-基)-苯基-酰胺 實(shí)例134-氰基-IH-吡咯-2-甲酸(2_環(huán)己烯基_4_哌啶基-苯基)-酰胺三氟 乙酸鹽 a) 4-(4~氨基-苯基)-3,6_ 二氫_2H_吡啶土甲酸叔丁酯 本標(biāo)題化合物可根據(jù)實(shí)例35的步驟(b)中的方法，通過(guò)使4-(4，4，5，5_四甲 基-[1，3，2] 二氧雜硼烷-2-基)-苯胺與4-三氟甲磺酰氧基_3，6- 二氫-2H-吡啶-1-甲 酸叔丁酯(Synthesis，993，(1991))進(jìn)行 Suzuki 偶聯(lián)來(lái)制備。質(zhì)譜(ESI, m/z) =C16H22N2O2 的計(jì)算值275. 2(M+H)，實(shí)測(cè)值275. 1。b) 4- (4-氨基-苯基)_哌啶-1-甲酸叔丁酯 將4-(4-氨基-苯基)-3，6-二氫-2!1-吡啶-1-甲酸叔丁酯(0. 35g，1. 2mmol)(如 前面的步驟中制備)于甲醇中的溶液在20psi下于10%Pd/C上氫化1小時(shí)。將溶液過(guò)濾 并濃縮，得到0. 35g(100% )呈黃色固體的標(biāo)題化合物質(zhì)譜(ESI, m/z) =C16H24N2O2的計(jì)算 值277. 2(M+H)，實(shí)測(cè)值277. 1。c) 4- (4- t[某-3-、遼-苯某)-哌啶-1-甲酸叔丁酯 向4-(4-氨基-苯基)-哌啶-1-甲酸叔丁酯(0. 20g，0. 71mmol)(如前面的步驟 中制備)于DCM(3mL)中的溶液中加入N-溴琥珀酰亞胺(NBS) (0. 13g，0. 71mmol)，并將反 應(yīng)物在室溫下攪拌10小時(shí)。將反應(yīng)混合物用EtOAc(IOmL)稀釋，用NaHCO3 (2X IOmL)和鹽 水(IOmL)洗滌。濃縮有機(jī)層得到0. 26g(100% )呈黃色泡沫的標(biāo)題化合物。質(zhì)譜(ESI，m/ ζ) =C16H23BrN2O2 的計(jì)算值355. 1 (Μ+Η)，實(shí)測(cè)值355. 1。d)4-(4~氨基-3-環(huán)己-1-烯基-苯基)-哌啶-1-甲酸叔丁酯 向燒瓶裝入4-(4-氨基-3-溴-苯基)-哌啶-1-甲酸叔丁酯(0. 13g，0. 36mmol) (如前面的步驟中制備)、環(huán)己-1-烯基硼酸(0. 060g, 0. 48mmol)、Pd (PPh3) 4 (0. 04g, IOmol %)、2M Na2CO3水溶液(1.5mL)、乙醇(1. 5mL)和甲苯(3mL)，并在80°C下加熱3小時(shí)。 將反應(yīng)混合物用EtOAc(IOmL)稀釋，用NaHCO3 (2 X IOmL)和鹽水(IOmL)洗滌，并將有機(jī)層用 Na2SO4干燥然后濃縮。用30% EtOAc/己烷將標(biāo)題化合物從20_g固相萃取柱(二氧化硅) 洗脫下來(lái)，得到0. 10g(85% )呈黃色油狀的標(biāo)題化合物。質(zhì)譜(ESI，m/z) =C22H32N2O2的計(jì)算 值357. 2(M+H)，實(shí)測(cè)值357. 1。e) 4-氰基-IH-吡咯_2_甲酸(2_環(huán)己烯基_4_哌啶_4_基-苯基)-酰胺三 氟乙酸鹽向燒瓶裝入4-(4-氨基-3-環(huán)己-1-烯基-苯基)_哌啶-1-甲酸叔丁酯(0. 050g， 0. 14mmol)(如前面的步驟中制備)、4_氰基-IH-吡咯-2-甲酸(0. 019g，0. 14mmol)(如實(shí)例 2 中制備)、EDCI (0. 040g，0. 21mmol)、HOBt (0. 019g，0. 14mmol)、DIEA (0. 073mL，0. 42mmol) 和DCM(0. 5mL)，并在25°C下攪拌10小時(shí)。將反應(yīng)混合物直接上樣至10_g固相萃取(SPE) 柱(二氧化硅)，并將所得中間體用30% EtOAc/己烷洗脫。將該化合物在室溫下于50% TFA/DCM(2mL)中攪拌1小時(shí)，然后濃縮并通過(guò)RP-HPLC(C18)純化(用30-50% CH3CN于 0. 1% TFA/H20中的溶液洗脫12分鐘)，得到標(biāo)題化合物(0. 052g,77% )。1H-WrGOOMHz, CD3OD) δ 7. 59 (s, 1H)，7. 50 (d, 1H)，7. 22 (d, 1H)，7. 16 (m, 2H)，5. 74 (m, 1H)，3. 54. (m, 2H)， 3. 16 (m, 2H), 2. 94 (m, 1H)，2. 29 (m，2H)，2. 15(m，4H)，1. 92 (m, 2H)，1. 72(m，4H)。質(zhì)譜(ESI，

m/z) =C23H26N4O 的計(jì)算值375. 2 (M+H)，實(shí)測(cè)值375. 1。實(shí)例144-氰基-IH-咪唑-2-甲酸(2-環(huán)己烯基_4_哌啶基-苯基)-酰胺三氟 乙酸鹽
某1-3-環(huán)己-1-烯某-苯某)-哌啶-1-甲酸叔丁酯
向4-氰基-1-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-IH-咪唑-2-甲酸鉀鹽(3. 34g， 10. 9mmol)(如實(shí)例3的步驟(d)中制備)于20mL DCM中的溶液中加入DIEA (3. 8mL， 21. 8mmol)和 PyBroP(5. 6g，12. Ommol)，將反應(yīng)物在 25°C下攪拌 15 分鐘。加入 4_(4_ 氨 基-3-環(huán)己-1-烯基-苯基)-哌啶-1-甲酸叔丁酯(3. 9g，10. 9mmol)(如實(shí)例13的步驟 (d)中制備)于IOmL DCM中的溶液，并將反應(yīng)物在25°C下攪拌8小時(shí)。將反應(yīng)混合物用 EtOAc (60mL)稀釋，用NaHCO3 (2 X 60mL)和鹽水(IOOmL)洗滌，并將有機(jī)層用Na2SO4干燥然 后濃縮。通過(guò)快速色譜法(硅膠，2% EtOAc/DCM)純化標(biāo)題化合物，得到5. 5g(85% )呈黃 色油狀的標(biāo)題化合物。質(zhì)譜(ESI，m/z) =C33H47N5O4Si的計(jì)算值606· 2 (M+H)，實(shí)測(cè)值606· 2。b) 4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸(2-環(huán)己烯基_4_哌啶_4_基-苯基)-酰胺三 氟乙酸鹽向4- (4- {[4-氰基-1- (2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-IH-咪唑_2_羰基]-氨 基}-3_環(huán)己-1-烯基-苯基)-哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.5g，2. 5mmol)(如前面的步驟中 制備)于IOmL DCM和0. 3mL EtOH中的溶液中加入3mL TFA,并將溶液在25°C下攪拌3小 時(shí)。將反應(yīng)混合物用5mL EtOH稀釋，然后濃縮。使殘余物從甲醇和乙醚中結(jié)晶出來(lái)，得到 0. 85g(70% )呈白色固體的標(biāo)題化合物。1H-WrGOOMHz, CD3OD) δ 8. 18 (d, 1H) ,8. 04 (s, 1H)，7. 22 (dd, 1H)，7. 12 (d, 1H)，5. 76 (m, 1H)，3. 54. (m, 2H)，3. 16 (m, 2H)，2. 92 (m, 1H)，2. 30(m，4H)，2. 10(m，2H)，1. 75(m，6H)。質(zhì)譜(ESI, m/z) =C22H25N5O 的計(jì)算值376· 2 (M+H)， 實(shí)測(cè)值376. 2。實(shí)例154-氰基-IH-吡咯-2-甲酸「4_(1_乙?；?哌啶_4_基)_2_環(huán)己烯基-苯 基1-酰胺 本標(biāo)題化合物是根據(jù)實(shí)例37的方法，從4-氰基-IH-吡咯-2-甲酸(2_環(huán) 己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯基)-酰胺三氟乙酸鹽(如實(shí)例13的步驟(e)中制備) 制備而得。1H-WrGOOMHz, CDCl3) δ 10. 82 (s, 1H) ,8. 28 (d, 1H) ,8. 18 (s，1H)，7. 48 (d, 1H)， 7. 16 (dd, 1H)，7. 02 (s, 1H)，6. 72 (s, 1H)，5. 88 (m, 1H)，4. 82 (m, 1H)，3. 98. (m, 1H)，3. 20 (m, 1H)，2. 70 (m, 2H)，2. 29 (m, 4H)，2. 18 (s, 3H)，1. 80 (m, 8H)。質(zhì)譜(ESI，m/z) C25H28N4O2 的計(jì)算 值417. 2(M+H)，實(shí)測(cè)值417. 1。實(shí)例164-氰基-IH-咪唑-2-甲酸「4_(1_乙?；?哌啶_4_基)_2_環(huán)己烯基-苯 基1-酰胺 本標(biāo)題化合物是根據(jù)實(shí)例37的方法，從4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸(2_環(huán)己烯 基-4-哌啶-4-基-苯基)-酰胺三氟乙酸鹽(如實(shí)例13的步驟(b)中制備)制備而得 1H-WrGOOMHz, CDCl3) δ 13. 12 (br s，lH)，9. 58(s，lH)，8. 34(d，lH)，7. 76(s，lH)，7. 21 (dd, 1H)，7. 05 (d, 1H)，5. 86 (s, 1H)，4. 84 (m, 2H)，4. 00 (m, 1H)，3. 22 (m, 1H)，2. 72 (m, 2H)，2. 30 (m, 4H)，2. 21 (s，3H)，1. 80 (m，8H)。質(zhì)譜(ESI，m/z) =C24H27N5O2 的計(jì)算值418. 2 (M+H)，實(shí)測(cè)值 418.1。實(shí)例17
4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸「2- (4-甲基-環(huán)己烯基)_4_哌啶基-苯 基1-酰胺三氟乙酸鹽 本標(biāo)題化合物是根據(jù)實(shí)例14的方法，從4-氰基-1-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲 基)-IH-咪唑-2-甲酸鉀鹽(如實(shí)例3的步驟(d)中制備)和4-[4-氨基-3-(4-甲基-環(huán) 己-1-烯基)_苯基]-哌啶-1-甲酸叔丁酯(根據(jù)實(shí)例13的步驟(d)中的方法，用4-甲 基-ι-環(huán)己-ι-烯基硼酸替換環(huán)己-ι-烯基硼酸來(lái)進(jìn)行制備)制備而得=1H-NmrgoomHz, CD3OD) δ 8. 18 (d, 1H)，8. 04 (s, 1H)，7. 22 (dd, 1H)，7. 12 (d, 1H)，5. 80 (m, 1H)，3. 54. (m, 2H)， 3. 18 (m, 2H)，2. 94 (m, 1H)，2. 30 (m, 3H)，2. 12 (m, 2H)，1. 92 (m, 5H)，1. 54 (m, 1H)，1. 12 (d, 3H)。 質(zhì)譜(ESI，m/z) =C23H27N5O 的計(jì)算值390. 2 (M+H)，實(shí)測(cè)值390. 2。實(shí)例184-氰基-IH-咪唑-2-甲酸(2_環(huán)戊烯基_4_哌啶基-苯基)-酰胺三氟 乙酸鹽
本標(biāo)題化合物是根據(jù)實(shí)例14的方法，從4-氰基-1-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲 基)-IH-咪唑-2-甲酸鉀鹽(如實(shí)例3的步驟(d)中制備)和4-(4-氨基-3-環(huán)戊-1-烯 基-苯基)-哌啶-1-甲酸叔丁酯(根據(jù)實(shí)例13的步驟(d)中的方法，用環(huán)戊烯-1-基硼酸 替換環(huán)己-1-烯基硼酸進(jìn)行制備)制備而得。1H-WRGOOMHziDMSO-Cl6) δ 14. 25 (br s，1H)， 10. 00 (S，1H)，8. 36 (s, 1H)，7. 72 (d, 1H)，7. 18 (m, 2H)，6. 06 (s, 1H)，4. 12 (m, 1H)，3. 42 (m, 2H)，3. 18 (m, 2H)，3. 00 (m, 3H)，2. 80 (m, 2H)，1. 92 (m, 5H)。質(zhì)譜(ESI，m/z) =C21H23N5O 的計(jì)算 值362. 2 (M+H)，實(shí)測(cè)值362. 2。實(shí)例19下面描述了用于合成實(shí)例1中所述中間體的替代方法。5~氰基-呋喃-2-甲酸
將配有機(jī)械攪拌器、加熱套和冷凝器的250mL三頸圓底燒瓶中裝入5-甲酰 基-2-呋喃甲酸(9. 18g,65. 6mmol)和吡啶(60mL)。加入鹽酸羥胺(5. Olg，72. 2mmol)，將 混合物加熱至85°C。加入乙酸酐(40mL)，將反應(yīng)物在85°C下攪拌3小時(shí)，之后在40°C減 壓蒸發(fā)溶劑。將殘余物溶解于水中，用2. ON NaOH溶液堿化至pH為9，用4 1 二氯甲烷 /2-丙醇進(jìn)行萃取，直到完全除去吡啶(5X200mL)。然后將水溶液用2. ON HCl溶液酸化至 PH 2，用固體NaCl使其飽和，并用4 1 二氯甲烷/2-丙醇(5X200mL)萃取。將合并的有 機(jī)萃取液用Na2SO4干燥，真空濃縮至干燥。將殘余物從二氯甲烷中結(jié)晶出來(lái)，得到6. 80g呈 白色固體的標(biāo)題化合物(76% )。質(zhì)譜(ESI-neg，m/z) C6H3NO3的計(jì)算值136. 0 (M-H)，實(shí)測(cè) 值136. 1. 1H核磁共振譜與確定的結(jié)構(gòu)一致。實(shí)例204-氰基-IH-咪唑-2-甲酸丨2_環(huán)己烯基_4-「1-(2_甲磺?；?乙酰基)_哌 啶-4-基1-苯基丨-酰胺向燒瓶裝入甲磺?；?乙酸(14mg，0.IOmmol)、EDCI (30mg，0. 15mmol)、 H0Bt(14mg，0. IOmmol)、DIEA(36 μ L，0. 20mmol)和 0. 5mLDCM,并在 25 °C 下攪拌。10 分鐘 后，加入4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸(2-環(huán)己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯基)-酰胺TFA 鹽(40mg，0. 08mmol)(如實(shí)例 20 的步驟(b)中制備)和 NEt3(14y L,0. 09mmol)于 0. 5mL DCM中的溶液，并讓反應(yīng)在25°C下進(jìn)行10小時(shí)。將反應(yīng)混合物上樣至5-g固相萃取柱(二 氧化硅)上，用10% EtOH/EtOAc將標(biāo)題化合物洗脫下來(lái)，得到10mg(25% )的白色固體 物質(zhì)。1H-匪R(400MHz，CDCl3) δ 11. 60 (br s，1H)，9. 52 (s，1H)，8. 30 (d，1H)，7. 74 (s，1H)， 7. 60 (dd, 1H)，7. 03 (d, 1H)，5. 86 (m, 1H)，4. 84 (m, 1H)，4. 18 (s,2H)，4. 12 (m, 1H)，3. 32 (m, 1H)，3. 20 (s，3H)，2. 82 (m, 2H)，2. 30 (m, 4H)，1. 98 (m, 2H)，1. 84 (m, 5H)，1. 72 (m, 1H)。質(zhì)譜 (ESI，m/z) =C25H29N5O4S 的計(jì)算值496. 2 (M+H)，實(shí)測(cè)值496. 2。實(shí)例214-氰基-IH-咪唑-2-甲酸「2_環(huán)己烯基(1_吡啶_2_基甲基-哌 啶-4-基)-苯基1 -酰胺三氟乙酸鹽 向燒瓶裝入4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸(2_環(huán)己烯基_4_哌啶_4_基-苯 基)_酰胺TFA鹽(88mg，0. 18mmol)(如實(shí)例14的步驟(b)中制備)、吡啶_2_甲醛(17 μ L， 0. 21mmol)、NEt3(30y L，0. 21mmol)、三乙酰氧基硼氫化鈉(56mg，0. 25mmol)禾Π 0. 8mL 1， 2-二氯乙烷，并在25°C下攪拌10小時(shí)。蒸發(fā)溶劑，將標(biāo)題化合物通過(guò)RP-HPLC(CIS)純化 (用30-50 % CH3CN TO. 1% TFA/H20中的溶液洗脫20分鐘)，得到8 Img (78 % )白色固體物 質(zhì)。1H-WR(400MHz，DMS0-d6) δ 14. 25(brs, 1H)，9· 90 (br s, 1Η)，9· 79 (s, 1Η)，8· 72 (s, 1Η)， 8. 36 (s，1Η)，7. 98 (m, 1Η)，7. 88 (dd, 1Η)，7. 58 (d, 1H)，7. 52 (m, 1H)，7. 20 (m, 1H)，7. 12 (d, 1H)，5. 76 (m, 1H)，4. 56 (s, 2H)，3. 40 (m, 2H)，3. 18 (m, 2H)，2. 88 (m, 1H)，2. 20 (m, 4H)，2. 00 (m, 4H)，1. 72 (m，4H)。質(zhì)譜(ESI，m/z) =C28H30N6O 的計(jì)算值467. 2 (M+H)，實(shí)測(cè)值467. 2。實(shí)例224-氰基-IH-咪嗶-2-甲酸「2_(4_甲基-環(huán)己烯基)(1_吡啶_2_基甲 基_哌啶-4-基)-苯基1 -酰胺三氟乙酸鹽 此化合物是根據(jù)實(shí)例21的方法，從4-氰基-IH-咪唑_2_甲酸[2_(4_甲基-環(huán) 己-1-烯基)-4_哌啶-4-基-苯基]-酰胺(如實(shí)例17中制備)和吡啶-2-甲醛制備而 得。1H-WR(400MHz，DMS0-d6) δ 14. 25 (br s, 1H)，9· 90(brs, 1H)，9· 79 (s, 1H)，8· 72 (s, 1Η)， 8. 36 (s，1Η)，7. 98 (m, 1H)，7. 86 (dd, 1H)，7. 54 (d, 1H)，7. 52 (m, 1H)，7. 20 (m, 1H)，7. 12 (d, 1H)，5. 74 (m, 1H)，4. 56 (s,2H)，3. 40 (m, 2H)，3. 18 (m, 2H)，2. 88 (m, 1H)，2. 48-2. 22 (m, 3H)， 2. 18-2. 06(m，4H)，1. 98-1. 82(m，3H)，1. 52(m，1H)，1. 02(s，3H)。質(zhì)譜(ESI，m/z) =C28H32N6O 的計(jì)算值481. 2(M+H)，實(shí)測(cè)值481. 2。實(shí)例23
4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸{2_環(huán)戊烯基_4-「1-(1_甲基-IH-咪唑_2_基甲 ；S )-霧-4-胃1 -絲1 -酉 此化合物是根據(jù)實(shí)例21中的方法，從4-氰基-IH-咪唑_2_甲酸(2-環(huán)戊烯 基-4-哌啶-4-基-苯基)-酰胺TFA鹽(如實(shí)例18中制備)和1-甲基-IH-咪唑-2-甲 醛制備而得。1H-WR(400MHz,CD3OD) δ 8. 03 (m，2Η)，7. 50 (d, 1H)，7. 42 (s, 1H)，7. 20 (m, 2H)， 6. 02 (m, 1H) ,4. 22(s，2H)，3. 96(s，3H)，3. 30(m，2H)，2· 82-2. 40 (m，7H)，2· 13-1. 84(m，6H)。 質(zhì)譜(ESI，m/z) =C26H29N7O 的計(jì)算值456. 2 (M+H)，實(shí)測(cè)值456. 2。實(shí)例244- {4-「(4-氰基-IH-咪唑_2_羰基)-氨基1 環(huán)己烯基-苯基丨-哌啶甲 酸酰胺 向燒瓶裝入4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸(2-環(huán)己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯 基)_酰胺TFA鹽(51mg，0. IOmmol)(如實(shí)例 14 的步驟(b)中制備)、NEt3 (22 μ L，0. 15mmol)、 三甲基甲硅烷基異氰酸酯(16μ ，0. llmmol)和l.OmL DCM，并在25°C下攪拌10小時(shí)。蒸 發(fā)溶劑，將標(biāo)題化合物通過(guò)RP-HPLC (C18)純化(用35-60 % CH3CN于0. 1 % TFA/H20中的溶 液洗脫 11 分鐘)，得至IJ 30mg(70% )白色固體物質(zhì)。1H-WRGOOMHziDMSO-Cl6) δ 14. 28 (br s, 1H)，9· 76 (s，1Η)，8· 34 (s，1H)，7· 84 (d, 1H)，7· 18 (dd, 1H)，7· 08 (d, 1Η)，6· 00 (br s，2H)， 5. 72 (m, 1Η)，4. 18 (m, 2H)，2. 80-2. 60 (m, 3H)，2. 24-2. 10 (m, 4H)，1. 80-1. 60 (m, 6H)，1. 50 (m, 2H)。質(zhì)譜(ESI，m/z) =C23H26N6O 的計(jì)算值419. 2 (M+H)，實(shí)測(cè)值419. 0。實(shí)例254-氰基-IH-咪唑-2-甲酸「2_ 環(huán)己 烯基 (3,4, 5,6_ 四氫-2H_「1,2' 1
83聯(lián)吡啶-4-基)_苯基1 _酰胺三氟乙酸鹽
向燒瓶裝入4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸(2_環(huán)己烯基_4_哌啶_4_基-苯 基)_酰胺 TFA 鹽(75mg，0. 15mmol)(如實(shí)例 14 的步驟(b)中制備)、K2C03 (84mg，0. 60mmol)、 2_氟吡啶(27yL，0. 30mmol)和0. 3mL N, N-二甲基乙酰胺，并在120°C下攪拌8小時(shí)。將 反應(yīng)混合物用3mL H2O稀釋，將標(biāo)題化合物通過(guò)RP-HPLC (C18)純化(用30-50% CH3CN于 0. 1 % TFA/H20 中的溶液洗脫 9 分鐘)，得至Ij 50mg(75% )白色固體。1H-WRGOOMHziCD3OD) δ 8. 18 (d, 1H)，8. 06 (m, 1H)，8. 02 (s, 1H)，7. 94 (dd, 1H)，7. 48 (d, 2H)，7. 22 (dd, 1H)，7. 12 (d, 1H), 6. 98 (t, 1H), 5. 82 (m, 1H) ,4. 32 (m, 2H), 3. 46 (m，2H)，3. 00 (m, 1H) ,2. 30 (m, 4H), 2. 18 (m, 2H)，1. 96-1. 74(m，6H)。質(zhì)譜(ESI，m/z) =C27H28N6O 的計(jì)算值:453. 2 (M+H)，實(shí)測(cè)值453. 2。實(shí)例264-氰基-IH-咪唑-2-甲酸{2_環(huán)己烯基_4-「1-(2_羥基-乙基)_哌 啶-4-基1 -苯基丨-酰胺三氟乙酸鹽
本標(biāo)題化合物是根據(jù)實(shí)例21中的方法，從4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸(2_環(huán) 己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯基)_酰胺TFA鹽(如實(shí)例14的步驟(b)中制備)和羥 基-乙酸制備而得。1H-WrGOOMHz, CD3OD) δ 8. 18 (d, 1H)，8· 02 (s, 1H)，7· 22 (dd, 1H)， 7. 14 (d, 2H)，5. 82 (m, 1H)，3. 94 (m, 2H)，3. 74 (m, 2H)，3. 30 (m, 2H)，3. 18 (t, 2H)，2. 92 (m, 1H)， 2.30(m，4H)，2.20-1.98(m，4H)，1.96-1.74(m，4H)。質(zhì)譜(ESI，m/z) C24H29N5O2 的計(jì)算值 420. 2 (M+H)，實(shí)測(cè)值420. 2。實(shí)例274-氰基-IH-咪唑-2-甲酸{4-「1- (2~氰基-乙基)-哌啶_4_基1 環(huán)己烯基-苯基丨-酰胺三氟乙酸鹽
向燒瓶裝入4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸(2_環(huán)己烯基_4_哌啶_4_基-苯 基)_酰胺TFA鹽(77mg，0. 16mmol)(如實(shí)例 14 的步驟(b)中制備)、NEt3 (24 μ L，0. 16mmol)、 丙烯腈(12μ L,0. 18mmol)、0. ImL MeOH 禾 Π 1. OmLl，2-二氯乙烷，并在 80°C 下攪拌 1 小時(shí)。 將反應(yīng)混合物濃縮，并將標(biāo)題化合物通過(guò)RP-HPLC (C18)純化(用30-50% CH3CN于0. 1 % TFA/H20中的溶液洗脫12分鐘)，得到83mg(95 % )白色固體。1H-^RGOOMHz, CD3OD) δ 8. 18 (d, 1H)，8. 06 (m, 1H)，7. 22 (dd, 1H)，7. 12 (d, 1H)，5. 82 (m, 1H)，3. 76 (m, 2H)，3. 60 (m, 2H), 3. 28 (t，2H)，3. 12(t，2H)，2· 92 (m, 1H) ,2. 30 (m，4H)，2· 18-1. 98 (m, 4H)，1. 92-1. 74 (m, 4H)。質(zhì)譜(ESI，m/z) =C25H28N6O 的計(jì)算值429. 2 (M+H)，實(shí)測(cè)值429. 2。實(shí)例284-氰基-IH-咪唑-2-甲酸「4_(1_氨甲酰甲基-哌啶_4_基)環(huán)己烯 基-苯基]-酰胺三氟乙酸鹽 向燒瓶裝入4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸(2_環(huán)己烯基_4_哌啶_4_基-苯 基)_酰胺 TFA鹽(50mg，0. IOmmol)(如實(shí)例 14 的步驟(b)中制備)、NEt3 (32 μ L，0. 23mmol)、 2_溴乙酰胺(16mg，0. 12mmol)和0. 5mL DCM，并在25°C下攪拌4小時(shí)。將反應(yīng)混合物濃縮， 并將標(biāo)題化合物通過(guò)RP-HPLC (C18)純化(用30-50% CH3CN于0. 1 % TFA/H20中的溶液洗 脫 12 分鐘)，得至Ij 42mg(75% )白色固體。1H-NMR(400MHz, DMS0_d6) δ 14. 28 (br s, 1H)， 9. 78 (s，1H)，9. 50 (br s，1H)，8. 34 (s, 1H)，8. 00 (s, 1H)，7. 88 (d, 1H)，7. 72 (s, 1H)，7. 18 (dd, 1H)，7. 10 (d, 1H)，5. 76 (m, 1H)，3. 94 (s, 2H)，3. 58 (m, 2H)，3. 12 (m, 2H)，2. 80 (m, 1H)，2. 20 (m, 4H)，1. 98 (m，4H)，1. 80 (m，4H)。質(zhì)譜(ESI，m/z) =C24H28N6O2 的計(jì)算值=433. 2 (M+H)，實(shí)測(cè)值433. 2。實(shí)例294-氰基-IH-咪唑-2-甲酸{2_環(huán)己烯基「1_ (2~吡啶_2_基-乙酰基)-哌 啶-4-基1 -苯基丨-酰胺三氟乙酸鹽 向燒瓶裝入4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸(2-環(huán)己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯 基)_酰胺TFA鹽(25mg，0.05mmol)(如實(shí)例14的步驟(b)中制備)、吡啶_2_基-乙酸 鹽酸鹽(IOmg, 0. 06mmol)、EDCI (12mg, 0. 06mmol)、HOBt (8. Omg, 0. 06mmol)、DIEA (36 μ L, 0. 20mmol)和0. 2mL DMF,并在25°C下攪拌10小時(shí)。將反應(yīng)混合物用2mL H2O稀釋，將標(biāo) 題化合物通過(guò)RP-HPLC (C18)純化(用30-50% CH3CN于0. 1 % TFA/H20中的溶液洗脫9分 鐘)，得到 22mg(70 % )白色固體。1H-NMR(400MHz, CD3OD) δ 8. 82 (d, 1H)，8· 52 (t, 1H)， 8. 14 (d, 1H)，8. 04 (s, 1H)，7. 96 (m, 3H)，7. 20 (dd, 1H)，7. 10 (d, 1H)，5. 82 (m, 1H)，4. 68 (m, 1H)，4. 32 (m, 2H)，4. 18 (m, 1H)，3. 40 (m, 1H)，2. 88 (m, 2H)，2. 30 (m, 4H)，2. 06-1. 60 (m, 8H)。質(zhì) 譜(ESI，m/z) =C29H30N6O2 的計(jì)算值495. 2. 2 (M+H)，實(shí)測(cè)值495. 2。實(shí)例304-氰基-IH-咪唑-2-甲酸{2_環(huán)己烯基「1_ (2~吡啶_3_基-乙?；?-哌 啶-4-基1 -苯基丨-酰胺三氟乙酸鹽 本標(biāo)題化合物是按照實(shí)例29的方法，采用吡啶-3-基-乙酸，從4-氰基-IH-咪 唑-2-甲酸(2-環(huán)己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯基)_酰胺TFA鹽(如實(shí)例14的步驟 (b)中制備)制備而得。1H-NMR (400MHz, CD3OD) δ 8. 80(m，2H)，8· 54 (d, 1H)，8· 10 (d, 1Η)， 8. 06 (t, 1Η)，7. 98 (s, 1H)，7. 18 (dd, 1H)，7. 08 (d, 1H)，5. 78 (m, 1H)，4. 68 (m, 1H)，4. 20 (m, 1H)，4. 18 (s，2H)，3. 36 (m, 1H)，2. 84 (m, 2H)，2. 28 (m, 4H)，2. 06-1. 70 (m, 7H)，1. 62 (m, 1H)。質(zhì)
譜(ESI，m/z) =C29H30N6O2 的計(jì)算值495. 2 (M+H)，實(shí)測(cè)值495. 2。實(shí)例314-氰基-IH-咪唑-2-甲酸{2_環(huán)己烯基「1_ (2~吡啶_4_基-乙?；?-哌 啶-4-基1 -苯基丨-酰胺三氟乙酸鹽 本標(biāo)題化合物是按照實(shí)例29的方法，采用吡啶-4-基-乙酸，從4-氰基-IH-咪 唑-2-甲酸(2-環(huán)己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯基)_酰胺TFA鹽(如實(shí)例14的步驟 (b)中制備)制備而得。1H-NMR(400MHz, CD3OD) δ 8. 78 (d，2H)，8. 12 (d，1H)，8. 00 (m，3H)， 7. 18 (dd, 1H)，7. 0(d, 1H)，5. 80 (m, 1H)，4. 66 (m, 1H)，4. 22 (s, 2H)，4. 18 (m, 1H)，3. 34 (m, 1H)，2. 84 (m, 2H)，2. 24 (m, 4H)，2. 00-1. 70 (m, 7H)，1. 64 (m, 1H)。質(zhì)譜(ESI，m/z) C29H30N6O2 的計(jì)算值495. 2 (M+H)，實(shí)測(cè)值495. 2。實(shí)例324-氰基-IH-咪唑-2-甲酸(2-環(huán)己烯基-4-丨1-「2-(1_甲基-IH-咪 P半-4-某)-乙酰某1 -哌啶-4-某丨-苯某)-酰胺三氟乙酸鹽 本標(biāo)題化合物是按照實(shí)例29的方法，采用(1-甲基-IH-咪唑_4_基)-乙酸，從 4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸(2-環(huán)己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯基)-酰胺TFA鹽(如實(shí) 例 14 的步驟(b)中制備)制備而得。1H-匪R(400MHz,CD3OD) δ 8. 82 (s, 1H)，8· 10 (d, 1H)， 8. 00 (s，1H)，7. 42 (s, 1H)，7. 16 (dd, 1H)，7. 06 (d, 1H)，5. 80 (m, 1H)，4. 66 (m, 1H)，4. 12 (m, 1H)，4. 04 (m, 2H)，3. 92 (s,3H)，3. 28 (m, 1H)，2. 82 (m, 2H)，2. 26 (m, 4H)，2. 00-1. 70 (m, 7H)， 1. 64 (m, 1H)。質(zhì)譜(ESI，m/z) =C28H31N7O2 的計(jì)算值498. 2 (M+H)，實(shí)測(cè)值498. 2。實(shí)例334-氰基-IH-咪唑-2-甲酸丨2_環(huán)己烯基-4-「1-(2_1Η-咪唑_4_基-乙酰 本標(biāo)題化合物是按照實(shí)例29的方法，采用(1-甲基-IH-咪唑_4_基)-乙酸，從 4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸(2-環(huán)己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯基)-酰胺TFA鹽(如實(shí) 例 14 的步驟(b)中制備)制備而得。1H-匪R(400MHz,CD3OD) δ 8. 88 (s，1H)，8· 12 (d，1H)， 8. 02 (s，1H)，7. 44 (s, 1H)，7. 20 (dd, 1H)，7. 10 (d, 1H)，5. 82 (m, 1H)，4. 70 (m, 1H)，4. 18 (m, 1H)，4. 06 (m, 2H)，3. 36 (m, 1H)，2. 84 (m, 2H)，2. 30 (m, 4H)，2. 00-1. 70 (m, 7H)，1. 64 (m, 1H)。質(zhì) 譜(ESI，m/z) =C27H29N7O2 的計(jì)算值484· 2 (M+H)，實(shí)測(cè)值484· 2。實(shí)例344-氰基-IH-咪唑-2-甲酸{2_環(huán)己烯基_4-「1_ (2_嗎啉基-乙基)-哌 瞭-4-基1-苯基丨-酰胺二 -三氟乙酸鹽 向燒瓶裝入4-氰基-1- (2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-IH-咪唑_2_甲酸(2_環(huán) 己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯基)_酰胺TFA鹽(830mg，1. 34mmol)(如實(shí)例39的步驟
88a) 4-氰基-1- (2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-IH-咪唑_2_甲酸{2_環(huán)己M 基-4-「1- (2-嗎啉-4-基-乙基)-哌啶-4-基1 -苯基丨-酰胺
(a)中制備)、K2C03 (600mg, 4. 34mmol)、碘化鈉(40mg, 0. 27mmol)、4_ (2-氯-乙基)-嗎啉鹽 酸鹽(260mg，1. 40mmol)和5. OmL N，N- 二甲基乙酰胺，并在80°C下攪拌8小時(shí)。將反應(yīng)混 合物用EtOAc (50mL)稀釋，用NaHCO3 (2 X 50mL)和鹽水(50mL)洗滌并濃縮。將標(biāo)題化合物 通過(guò)快速色譜法(硅膠，5%Me0H/DCM)純化得到650mg(78% )白色固體物質(zhì)。質(zhì)譜(ESI， m/z) =C34H50N6O3Si 的計(jì)算值619. 4(M+H)，實(shí)測(cè)值619. 3。b) 4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸{2-環(huán)己烯基「1_ (2~嗎啉_4_基-乙基)-哌 啶-4-基1 -苯基丨-酰胺三氟乙酸鹽向4-氰基-1- (2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-IH-咪唑_2_甲酸{2_環(huán)己烯 基-4- [1- (2-嗎啉-4-基-乙基)-哌啶-4-基]-苯基}-酰胺(650mg, 1. 05mmol)(如前面 的步驟中制備)于IOmL DCM中的溶液中加入0. 3mLEt0H和3. OmL TFA，讓反應(yīng)在25°C下進(jìn) 行2小時(shí)。將反應(yīng)混合物用IOmLEtOH稀釋并濃縮。將標(biāo)題化合物通過(guò)RP-HPLC (C18)純化 (用30-50% CH3CN于0. 1 % TFA/H20中的溶液洗脫9分鐘)，得到600mg (80% )白色固體物 質(zhì)。1H-WR (400MHz ,CD3OD) δ 8. 18 (d, 1H)，8· 04 (s，1H)，7· 24 (dd, 1H)，7· 14 (d, 1H)，5· 84 (m, 1H)，3. 84 (m, 4H)，3. 76 (m, 2H)，3. 50 (m, 2H)，3. 30-3. 10 (m, 4H)，2. 92 (m, 5H)，2. 30 (m, 4H)， 2. 20-2. 00(m，4H)，1. 90-1. 74(m，4H)。質(zhì)譜(ESI，m/z) =C28H36N6O2 的計(jì)算值489. 2，實(shí)測(cè)值 489.2。實(shí)例354-氰基-IH-咪唑-2-甲酸「2-(1,1_ 二 氧代-1,2,3,6-四氫 λ 噻 喃-4-基)-4-哌啶-4-基-苯基1 -酰胺 a)三氟甲磺酸3,6- 二氫_2H_ PJl_ ~4~某酯 在-78°C于氬氣下，將四氫-噻喃-4-酮(1.00g，8.61mmOl)于IOml THF中的溶液 加入到LDA(2. 0M，4. 52mL，9. 04mmol)于20ml THF中的溶液中。將所得混合物升溫至室溫 并攪拌0.5小時(shí)，然后再冷卻至-78°C。加入N-苯基三氟甲磺酰亞胺(3. 42g，9. 47mmol)于 IOml THF中的溶液。將所得混合物升溫至室溫并在氬氣下攪拌0.5小時(shí)。用200ml EtOAc 處理，將混合物用H2O(3X 50mL)、鹽水(50mL)洗滌并干燥(Na2SO4)15減壓去除溶劑，然后在 娃膠(己烷EtOAc/己烷)上對(duì)殘余物進(jìn)行快速色譜純化，得到810mg(38% )呈無(wú)色 油狀的標(biāo)題化合物。1H-NMR(CDCl3 ；400MHz) δ 6. 01 (m, 1H)，3. 30 (m, 2H)，2. 86 (dd, 2H, J = 5. 7,5. 7Ηζ)，2· 58-2. 64(m，2H)。質(zhì)譜(ESI，m/z) =C6H7F3O3S2 的計(jì)算值249· 0 (M+H)，實(shí)測(cè)值
89249.3。b) 4- (4-硝基 ~ 苯基)-3,6- 二氫 _2H_ 噻喃 向4-硝基苯硼酸(418mg，2. 50mmol)、三氟甲磺酸3，6_ 二氫-2H-噻喃-4-基 酯(如前面的步驟中制備，931mg，3. 75mmol)、Pd(PPh3)4 (433mg，0. 375mmol)和氯化鋰 (LiCl) (212mg,5. Ommol)于2OmL 1，4_ 二氧雜環(huán)己烷中的混合物中加入2. OM Na2CO3水溶 液(3. 13mL，6. 25mmol)。將所得混合物在80°C下攪拌2小時(shí)，然后冷卻至室溫。用200mL EtOAc處理，將混合物用H2O(2X30mL)、鹽水(30mL)洗滌并干燥(Na2SO4)15減壓去除溶劑， 然后在硅膠(1-3% EtOAc/己烷)上對(duì)殘余物進(jìn)行快速色譜純化，得到470mg(85% )呈淺 褐色油狀的標(biāo)題化合物。1H-NMR (CDCl3 ；400MHz) δ 8. 19(d，2H，J = 9. 1Hz)，7. 48(d，2H，J =9. 1Ηζ)，6. 36 (m，lH)，3.39 (m，2H)，2.91 (t，2H，J = 5. 7Hz)，2. 72 (m，2H)。質(zhì)譜(ESI, m/ z) =C11H11NO2S 的計(jì)算值222. 1 (M+H)，實(shí)測(cè)值222. 3。c) 4-(4-硝基-苯基)-3,6- 二氫_2H_噻喃1,二氧化物在_78°C于氬氣下，將3-氯過(guò)氧苯甲酸(1.04g，4. 62mmol，77% )于15mL 二氯甲 烷(DCM)中的溶液緩慢加入到4- (4-硝基-苯基)-3，6- 二氫-2H-噻喃(如前面的步驟中 制備，465mg，2. 1 Ommol)于15mL DCM中的溶液中。將混合物在_78°C下攪拌0. 5小時(shí)，然后 升溫至室溫。用IOOmL EtOAc處理，將混合物用10% Na2SO3 (2 X 15mL)、飽和NaHCO3水溶液 (20mL)、H20(20mL)、鹽水(20mL)洗滌并干燥(Na2SO4)。減壓去除溶劑，然后在硅膠(2_5% EtOAc/DCM)上對(duì)殘余物進(jìn)行快速色譜純化，得到518mg(97% )呈白色固體的標(biāo)題化合物。 1H-WR (CDCl3 ；400MHz) δ 8. 23 (d, 2H, J = 9. OHz)，7. 52 (d, 2H, J = 9. OHz)，6. 04 (m, 1H)， 3. 86 (m, 2H)，3. 26-3. 31 (m, 2H)，3. 18-3. 23 (m, 2H)。d) 4- (1,1- 二氧代-六氫-1 λ 噻喃-4-基)-苯胺 將4-(4_硝基-苯基)-3，6_二氫-2H-噻喃1，1_二氧化物(如前面的步驟中制備， 502mg, 1. 98mmol)和 10% Pd/C(250mg，50wt% )于 15mL MeOH 中的混合物在室溫于 H2 (氣囊 壓)下攪拌2小時(shí)。通過(guò)在Celite上過(guò)濾來(lái)去除Pd催化劑，將濾液濃縮，得到314mg (70% ) 呈淺黃色固體的標(biāo)題化合物。1H-NMR(CDCl3 ；400MHz) δ 7. 03(d，2H，J = 8. 3Ηζ)，6· 67 (d，
2H, J = 8. 3Hz) ,3. 51-3. 79 (br s，2H)，3· 11-3. 17(m，4H)，2· 70(dddd, 1H, J = 12. 3，12. 3，
2. 9,2. 9Hz)，2. 31-2. 43 (m, 2H)，2. 15-2. 23 (m, 2H)。 e) 2-溴-4-(l, 1- 二氧代-六氫-1 λ 噻喃某)-苯胺在氬氣下，向0°C的4-(1，1_ 二氧代-六氫-1λ6-噻喃-4-基)_苯胺(如前 面的步驟中制備，174mg，0. 77mmol)于20mL 3 lDCM/MeOH中的懸浮液中加入N-溴琥 珀酰亞胺(NBS) (137mg，0. 77mmol)于5mL DCM中的溶液。將混合物升溫至室溫并在氬氣 下攪拌1小時(shí)。用IOOmL EtOAc處理，將混合物用H2O(2X20mL)、鹽水(20mL)洗滌并干 燥(Na2SO4)。減壓去除溶劑，然后在硅膠(2-3% EtOAc/DCM)上對(duì)殘余物進(jìn)行快速色譜 純化，得至IJ 155mg(66% )呈白色固體的標(biāo)題化合物。1H-NMR(O)Cl3 ； 400MHz) δ 7. 28 (d, 1H, J = 2. OHz) ,6. 97 (dd, 1H, J = 8. 3,2. OHz) ,6. 73 (d, 1H, J = 8. 3Hz) ,4. 07 (br s, 2H)，3· 09-3. 14(m，4H)，2. 66(dddd, 1H, J = 12. 1，12. 1,3. 3,3. 3Hz)，2. 26-2. 39(m，2H)， 2. 12-2. 21 (m，2H)。質(zhì)譜(ESI, m/z) =C11H14BrNO2S 的計(jì)算值:304· 0 (M+H)，實(shí)測(cè)值:304· 1。f) 2-環(huán)己-1-烯基-4- (1，1- 二氧代-六氫_1 λ 6-噻喃-4-基)-苯胺向2-溴-4- (1，1-二氧代-六氫-1 λ 6-噻喃_4_基)-苯胺(如前面的步驟中制備， 150mg，0. 493mmol)、環(huán)己烯 基硼酸(70mg，0. 542mmol)和 Pd (PPh3) 4 (57mg，0. 0493mmol) 于5mL 1，4-二氧雜環(huán)己烷中的混合物中加入2. OM Na2CO3水溶液(2. OmL，4. Ommol)。將 所得混合物在80°C于氬氣下攪拌8小時(shí)，然后冷卻至室溫。用50mL EtOAc處理，將混合 物用H2O(3X15mL)、鹽水(20mL)洗滌并干燥(Na2SO4)。減壓去除溶劑，然后在硅膠(2_5% EtOAc/DCM)上對(duì)殘余物進(jìn)行快速色譜純化，得到130mg(86% )呈褐色固體的標(biāo)題化合物。 1H-NMR (CDCl3 ；400MHz) δ 6. 89 (dd, 1H，J = 8. 4，2. 3Hz)，6. 84 (d, 1H, J = 2. 3Hz)，6. 65 (d, 1H, J = 8. 4Ηζ)，5· 74 (m, 1H)，3· 74 (br s，2H)，3· 08-3. 17(m，4H)，2· 66(dddd, 1H, J = 12. 1， 12. 1,3. 1,3. 1Hz)，2· 29-2. 42 (m，2H)，2· 13-2. 25(m，6H)，1. 73-1. 81 (m，2H)，1. 65-1. 73 (m, 2H)。質(zhì)譜(ESI, m/z) =C17H23NO2S 的計(jì)算值:306· 1 (M+H)，實(shí)測(cè)值:306· 1。r) 4-氰基-1- (2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-IH-咪唑_2_甲酸「2_環(huán)己烯 某-4- (1，1- 二氧代-六氫-1 λ __ -4-某)-苯某1 -酰胺 向2-環(huán)己-1-烯基-4-(l，l-二氧代-六氫-1λ6-噻喃-4-基)-苯胺(如前 面的步驟中制備，122mg，0. 50mmol)、4_氰基-1-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-IH-咪 唑-2-甲酸鉀(如實(shí)例3的步驟(d)中制備，134mg,0. 44mmol)和三吡咯烷基溴化鱗六氟磷 酸鹽(PyBroP) (205mg,0. 44mmol)于 5mLDMF 中的混合物中加入 DIEA(209y L，1. 20mmol)。 將所得混合物在室溫下于氬氣下攪拌18小時(shí)，冷卻至室溫。用50mL EtOAc處理，將混合 物用H2O(3X IOmL)、鹽水(IOmL)洗滌并干燥(Na2SO4)。減壓去除溶劑，然后在硅膠(1_3% EtOAc/DCM)上對(duì)殘余物進(jìn)行快速色譜純化，得到161mg(73% )呈無(wú)色油狀的標(biāo)題化合 物。1H-NMR(CDCl3 ；400MHz) δ 9. 69 (s, 1H) ,8. 29 (d, 1H, J = 8. 4Hz)，7. 78 (s, 1H)，7. 14 (dd, 1H, J = 8. 4，2. 2Hz)，7. 04 (d, 1H, J = 2. 2Hz)，5. 95 (s, 2H)，5. 83 (m, 1H)，3. 66 (t, 2H, J = 8. 2Hz) ,3. 11-3. 20(m，4H)，2· 77(dddd, 1H, J = 12. 1，12. 1,3. 2,3. 2Hz)，2. 35-2. 47 (m, 2H)， 2. 17-2. 33 (m, 6H)，1. 74-1. 89(m，4H)，0· 97(t，2H，J = 8. 2Ηζ)，0· 00(s，9H)。質(zhì)譜(ESI, m/ ζ) =C28H38N4O4SSi 的計(jì)算值555. 2(Μ+Η)，實(shí)測(cè)值555. 3。h) 4-氰基-IH-咪嗶-2-甲酸「2-環(huán)己-1-烯基(1，1~ 二氧代-六氫λ 噻 喃-4-基)-苯基1-酰胺 向4-氰基-1- (2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-IH-咪唑_2_甲酸[2_環(huán)己烯 基-4-(l，l-二氧代-六氫-1λ6-噻喃-4-基)-苯基]-酰胺(如前面的步驟中制備， 145mg，0. 261mmol)于6mL DCM中的溶液中加入0. 20mL EtOH，然后加入2mL TFA。將所得 溶液在室溫下攪拌3小時(shí)。減壓去除溶劑，然后在硅膠(20-25% EtOAc/DCM)上對(duì)殘余物 進(jìn)行快速色譜純化，得到83mg(90% )呈白色固體的標(biāo)題化合物。1H-NMR(OTCI3JOOMHz) δ 12. 34 (s，1Η)，9. 60 (s, 1H)，8. 35 (d, 1H, J = 8. 4Hz)，7. 75 (s, 1H)，7. 30 (dd, 1H, J = 8. 4， 2. 2Hz) ,7. 08 (d, 1H, J = 2. 2Hz)，5. 86 (m, 1H)，3. 11-3. 23 (m, 4H), 2. 80(dddd, 1H, J = 12. 2， 12. 2，2. 8，2. 8Hz)，2. 40-2. 57(m，2H)，2. 17-2. 35 (m，6H)，1. 74-1. 91 (m，4H)。質(zhì)譜(ESI, m/ z) =C22H24N4O3S 的計(jì)算值425. 2 (M+H)，實(shí)測(cè)值425. 6。實(shí)例36
4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸「2-(1,1_ 二 氧代-1,2,3,6-四氫 λ 噻 _ -4-某)-4-哌啶-4-某-苯某1-酰胺三氟乙酸鹽 a) 2-(3,6- 二氫 _2H_ 噻喃 _4_ 基)_5, 5_ 二甲基-「1, 3, 21 二氧硼雜環(huán)己燒 將三氟甲磺酸3，6_ 二氫-2H-噻喃-4-基酯(如實(shí)例35的步驟(a)中制備， 500mg，2. Olmmol)、聯(lián)硼酸新戊二醇酯(478mg，2. llmmol)、Pd(dppf) Cl2 (147mg, 0. 20mmol) 和K0Ac(592mg，6. 03mmol)于8mL 1，4-二氧雜環(huán)己烷中的混合物在80°C于氬氣下攪拌8小 時(shí)，然后冷卻至室溫。用50mL EtOAc處理，將混合物用H2O(2X IOmL)、鹽水(IOmL)洗滌并 干燥(Na2SO4)。減壓去除溶劑，然后在硅膠(0-5% EtOAc/DCM)上對(duì)殘余物進(jìn)行快速色譜純 化，得至IJ 351mg(82% )呈無(wú)色油狀的標(biāo)題化合物。1H-NMR(O)Cl3 ；400MHz) δ 6. 62 (m, 1H)， 3. 63(s，4H)，3. 21(m，2H)，2. 68(t，2H，J = 5. 8Hz)，2. 37(m，2H)，0· 96(s，6H)。質(zhì)譜(ESI,m/ ζ) =C10H17BO2S 的計(jì)算值213. 1 (Μ+Η)，實(shí)測(cè)值213. 1。b) 4-「4-氨基-3-(3,6~ 二氫_2H_噻喃基)-苯基1 -哌啶甲酸叔丁酯 向4-(4-氨基-3-溴-苯基)-哌啶-1-甲酸叔丁酯(如實(shí)例13的步驟(c)中 制備，200mg，0. 563mmol)、2_(3,6- 二氫-2H-噻喃-4-基)-5，5- 二甲基-[1，3，2] 二氧硼 雜環(huán)己烷(dioxaborinane)(如前面的步驟中制備，131mg，0. 619mmol)和 Pd(PPh3)4(65mg， 0. 056mmol)于5mL 1，4-二氧雜環(huán)己烷中的混合物中加入2. OM Na2CO3水溶液(2. 25mL， 4.5mmol)。將所得混合物在80°C于氬氣下攪拌7小時(shí)，然后冷卻至室溫。用5OmL EtOAc 處理，將混合物用H2O (3 X 15mL)、鹽水(20mL)洗滌并干燥(Na2SO4)。減壓去除溶劑，然后 在硅膠(15-30% EtOAc/己烷)上對(duì)殘余物進(jìn)行快速色譜純化，得到141mg(67% )呈無(wú)色油狀的標(biāo)題化合物。1H-NMR(CDCl3 ；400MHz) δ6. 91(dd，lH，J = 8. 2，2. 2Hz)，6. 81 (d， 1H, J = 2. 2Hz) ,6. 65 (d, 1H, J = 8. 2Hz), 5. 91 (m, 1H), 4. 22 (br s,2H) ,3. 66 (br s，2H)， 3. 29-3. 31 (m, 2H)，2. 87 (dd, 2H, J = 5. 7，5. 7Hz)，2. 77 (m, 2H)，2. 47-2. 56 (m, 3H)，1. 78 (d, 2H, J = 12. 6Hz)，1. 50-1. 63 (m, 2H)，1. 48(s，9H)。質(zhì)譜(ESI, m/z) =C21H30N2O2S 的計(jì)算值 375. 2 (M+H)，實(shí)測(cè)值375. 2。c) 4- Γ4- {Γ4-氰基(2~三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-IH-咪唑_2_羰基1 -氨 某1 -3-(3,6- 二氫-2H- PJl_ -4-某)-苯某1 -哌啶-1-甲酸叔丁酯 向4-[4_氨基-3-(3，6_ 二氫-2H-噻喃-4-基)_苯基]-哌啶-1-甲酸叔丁 酯(如前面的步驟中制備，45mg，0. 12mmol)、4-氰基-l-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲 基)-IH-咪唑-2-甲酸鉀(如實(shí)例3的步驟(d)中制備，44mg，0. 144mmol)和PyBroP (67mg， 0. 144謹(jǐn)ol)于2mL DMF中的混合物中加入DIEA (42 μ L，0. 24mmol)。將所得混合物在室溫 下于氬氣下攪拌4小時(shí)。用30mL EtOAc處理，將混合物用H2O (3 X IOmL)、鹽水(IOmL)洗滌 并干燥(Na2SO4)。減壓去除溶劑，然后在硅膠(1-2% EtOAc/DCM)上對(duì)殘余物進(jìn)行快速色譜 純化，得到64mg(85% )呈淺黃色油狀的標(biāo)題化合物。1H-NMR(O)Cl3 ；400MHz) δ 9. 51 (s, 1H)，8· 21 (d，1H，J = 8. 5Hz), 7. 78 (s, 1H), 7. 16 (dd, 1Η, J = 8. 5，2. 1Hz)，7. 02 (d，1Η，J =2. 1Hz)，6. 00 (m, 1H)，5. 92 (s, 2H)，4. 25 (br s，2H)，3. 66 (t, 2H, J = 8. 2), 3. 42 (m, 2H)， 2. 93 (dd, 2H, J = 5. 7，5. 7Hz)，2. 79 (m, 2H)，2. 63 (dddd, 1H, J = 12. 3,12. 3,3. 3,3. 3Hz)， 2. 49-2. 56 (m, 2H)，1. 82 (d, 2H, J = 12. 8Hz)，1. 56-1. 66 (m, 2H)，1. 49 (s,9H)，0. 97 (t, 2H, J =8. 2Hz) ,0. 00(s，9H)。d) 4-「4- {「4-氰基-1- (2~三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-IH-咪唑_2_羰基1 -氨 某 1 -3- (1，1- 二氧,代-1，2，3，6-四氫-1 λ L Pj|_ -4-某)-苯某 1 - RMPg -1-甲酸叔丁酯在-78°C于氬氣下，將3-氯過(guò)氧苯甲酸(91mg，0. 404謹(jǐn)ol，77% )于ImL DCM中 的溶液緩慢加入到4- [4- {[4-氰基-1- (2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-IH-咪唑-2-羰 基]-氨基} -3- (3,6- 二氫-2H-噻喃-4-基)-苯基]-哌啶-1-甲酸叔丁酯(如前面的 步驟中制備，120mg,0. 192mmol)于3mL DCM中的溶液中。將混合物在_78°C下攪拌15小 時(shí)，然后升溫至室溫。用40mLEt0Ac處理，將混合物用15 % Na2SO3(5mL)、飽和NaHCO3 /K 溶液(2X IOmL)、H2O(IOmL)、鹽水(IOmL)洗滌并干燥(Na2SO4)。減壓去除溶劑，然后在 硅膠(2-10% EtOAc/DCM)上對(duì)殘余物進(jìn)行快速色譜純化，得到85mg(67 % )呈無(wú)色油狀 的標(biāo)題化合物。1H-NMR(CDCl3 ；400MHz) δ 9. 23 (s, 1H)，8· 03 (d, 1H, J = 8. 3Hz)，7· 80 (s, 1H)，7. 21 (dd, 1H，J = 8. 3，2. OHz)，7. 06 (d, 1H, J = 2. OHz)，5. 93 (s, 2H)，5. 75 (t, 1H, J = 4. 1Hz)，4. 25 (brs, 2H)，3. 86 (br s，2H)，3. 66 (t, 2H, J = 8. 2Hz)，3. 29 (t, 2H, J = 6. 3Hz)， 3. 03 (t, 2H, J = 5. 4Hz)，2. 74-2. 86 (m, 2H)，2. 64 (dddd, 1H, J= 12. 3,12. 3,3. 3,3. 3Hz)， 1. 82 (d, 2H, J = 12. 3Hz)，1. 55-1. 65 (m, 2H)，1. 49 (s,9H)，0. 98 (t, 2H, J = 8. 2Hz)，0. 01 (s， 9H)。質(zhì)譜(ESI，m/z) =C32H45N5O6SSi 的計(jì)算值656. 3 (M+H)，實(shí)測(cè)值656. 7。e)4~ 氰基 _1Η_ 咪唑 _2_ 甲酸「2-(1,1_ 二 氧代-1,2,3,6-四氫噻 _ -4-某)-4-哌啶-4-某-苯某1 -酰胺，三氟乙酸鹽 向4- [4- {[4-氰基-1- (2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-IH-咪唑_2_羰基]-氨 基} _3-(1，1-二氧代-1,2, 3,6-四氫-1 λ 6-噻喃-4-基)-苯基]-哌啶-1-甲酸叔丁酯 (如前面的步驟中制備，81mg，0. 123mmol)于6mL DCM中的溶液中加入0. 20mL EtOH，然后加 入2mL TFA。將所得溶液在室溫下攪拌3小時(shí)。減壓去除溶劑，得到64mg(96% )呈白色固 體的標(biāo)題化合物。1H-NMR(CD3OD ；400MHz) δ 8. 02 (s, 1H), 7. 78 (d, 1H, J = 8. 3Hz), 7. 29 (dd, 1H, J =8. 3，2. 0Hz)，7. 21 (d, 1H, J = 2. OHz)，5. 71 (t，1H，J = 4. 2Hz)，3. 83 (br s，2H)，3. 51 (d, 2H, J = 12. 4Hz)，3. 33 (t, 2H, J = 6. OHz)，3. 15 (td, 2H, J = 13. 1,2. 6Hz)，3. 01 (m, 2H)， 2. 94 (dddd, 1H，J = 12. 2，12. 2，3. 5，3. 5Hz)，2. 08 (d，2H，J = 12. 9Hz)，1. 91 (m，2H，J = 13. 3，13. 3，13. 3，3. 8Hz)。質(zhì)譜(ESI，m/z) =C21H23N5O3S 的計(jì)算值426. 2 (M+H)，實(shí)測(cè)值: 426.2。實(shí)例374-氰基-IH-咪唑-2-甲酸「4_(1_乙酰基-哌啶_4_基)(1,二氧代, 2, 3,6-四氫-1 λ 噻喃-4-基)-苯基1 -酰胺
95 在室溫下向4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸[2_ (1，1_ 二氧代-1，2，3，6_四氫_1 λ 6-噻 喃-4-基)-4-哌啶-4-基-苯基]-酰胺三氟乙酸鹽(如實(shí)例36的步驟(e)中制備，62mg， 0. 115mmol)于 4mL 1 1DCM/DMF 中的懸浮液中加入 DIEA (60 μ L，0. 345mmol)。將混合物 攪拌5分鐘，然后將乙酸酐(llyL，0. 121mmol)緩慢加入至該混合物中，并將所得混合物 在室溫下攪拌0.5小時(shí)。用40mL EtOAc處理，將混合物用H2O(2X20mL)洗滌。將水層用 EtOAc (4X IOmL)萃取。真空濃縮合并的有機(jī)層。將殘余物在硅膠(1_4% MeOH/DCM)上進(jìn) 行快速色譜純化，得到50. 9mg(95% )呈白色固體的標(biāo)題化合物。1H-NMR(⑶Cl3 ；400MHz) δ 13. 0 (s，1Η)，9. 10 (s, 1H)，8. 13 (d, 1H, J = 8. 4Hz)，7. 77 (d, 1H, J = 2. 3Hz)，7. 26 (dd, 1H, J = 8. 4，2. OHz)，7. 08 (d, 1H, J = 2. OHz)，5. 77 (t, 1H, J = 4. 3Hz)，4. 84 (dt, 1H, J = 13. 3， 2. IHz)，4. 00 (dt, 1H, J= 13. 3,2. IHz)，3. 89 (br s，2H)，3. 31 (t，2H，J = 6. 2Hz)，3. 23 (td, 1H, J = 13. 2,2. 5Ηζ)，3· 02 (m，2Η)，2. 77(dddd, 1H, J = 11. 9，11. 9,3. 4,3. 4Hz)，2. 68(ddd, 1H, J = 12. 6，12. 6,2. 9Hz)，2. 18(s，3H)，1. 70-1. 97(m，4H)。質(zhì)譜(ESI，m/z) C23H25N5O4S 的 計(jì)算值468. 2 (M+H)，實(shí)測(cè)值468. 1。實(shí)例38a4-氰基-IH-咪嗶-2-甲酸|2_環(huán)己烯基_4-「1-(2_ 二甲氨基-乙?；?_哌 啶-4-基1-苯基丨-酰胺 將4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸(2_環(huán)己烯基_4_哌啶_4_基-苯基)-酰胺 三氟乙酸鹽(如實(shí)例14的步驟(b)中制備，655mg，l. 30mmol)于DCM(15mL)中的混合物冷 卻至0°C，加入DIEA (0. 92mL，5. 2mmol)。然后在10分鐘里分批加入二甲氨基乙酰氯鹽酸 鹽(211mg，1. 3mol)。將反應(yīng)混合物在0°C下攪拌30分鐘，然后讓其升溫至室溫并攪拌2小 時(shí)。真空去除溶劑，將所得殘余物在鹽水和DCM之間分配。分離有機(jī)層，干燥(Na2SO4)并 濃縮。將殘余物在硅膠(5%Me0H:DCM)上純化，得到432mg(70% )呈白色固體的標(biāo)題化合 物。1H-NMR(CDCl3 ；400MHz) δ 9. 49 (s, 1H) ,8. 24 (d, 1H, J = 2. 3Hz)，7. 70 (s, 1H)，7. 12 (dd, 1H, J = 8. 4，2. lHz)，7. 01(s，lH)，5. 82(m，lH)，4. 75(d，lH，J = 13. 4Hz)，4. 13 (d，1H，J
啶-4-基1-苯基丨-酰胺
某-4-哌啶-4-某-苯某)-酰胺，三氟乙酸鹽
將實(shí)例38a進(jìn)行HPLC純化還得到少量的4_氰基-IH-咪唑_2_甲酸{2_環(huán) 己-1-烯基-4- [ 1- (2-甲氨基-乙酰基)-哌啶-4-基]-苯基}-酰胺。1H-NMR (CD3OD ； 400MHz) δ 8. 02 (d, 1H, J = 8. 4Hz)，7. 92 (s, 1H)，7. 07 (dd, 1H, J = 8. 4Hz, J = 2. 4Hz)， 6. 98(d, 1H, J = 2. 4Hz) , 5. 73-5. 68 (m, 1Η) ,4. 60-4. 51 (m, 1Η) , 3. 76-3. 68 (m, 1Η)， 3. 20-3. 11 (m, 1Η)，2. 81-2. 70 (m，2Η)，2. 67(s，3H)，2· 22-2. 13(m，4H)，1. 88-1. 66(m，6H)， 1. 66-1. 46 (m，2H)。質(zhì)譜(ESI, m/z) =C25H30N6O2 的計(jì)算值:447· 2 (Μ+Η)，實(shí)測(cè)值:447· 3。實(shí)例394- {4-「(4-氰基-IH-咪唑_2_羰基)-氨基1 環(huán)己烯基-苯基丨-哌啶甲 酸(2-羥基-乙基)-酰胺
=13. 4Hz)，3. 57 (d, 1H, J = 14. 2Hz)，3. 18 (d, 1H, J = 14. 2Hz)，3. 12 (td, 1H, J = 13. 3， 2. 4Ηζ), 2. 73(dddd, 1H, J = 11. 9，11. 9,3. 8,3. 8Hz)，2. 65(ddd, 1H, J = 13. 3，13. 3,2. 4Hz)， 2. 40(s，6H)，2. 18-2. 32(m，4H)，1. 60-1. 98(m，8H)。質(zhì)譜(ESI，m/z) :C26H32N6O2 的計(jì)算值: 461. 3 (Μ+Η)，實(shí)測(cè)值461. 2。實(shí)例38b 4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸{2-環(huán)己-1-烯基-4-「l-(2-甲氨基_乙?；?_哌
SEM
在0°C向4-(4-{[4-氰基-1-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-IH-咪唑-2-羰 基]-氨基}-3_環(huán)己-1-烯基-苯基)_哌啶-1-甲酸叔丁酯(如實(shí)例14的步驟(a)中 制備，81mg，0. 123mmol)于18mL DCM中的溶液中加入ImL EtOH，然后加入5mL TFA0將所 得溶液在室溫下攪拌0. 5小時(shí)，用20mL EtOH處理，接著用20mL正丙醇和5mL H2O處理，然 后將混合物減壓濃縮，得到淺黃色固體物質(zhì)。將化合物在硅膠(2-4%Me0H/DCM)上進(jìn)行快 速色譜，得到0. 87g(85% )呈白色固體的標(biāo)題化合物。1H-NMR(O)Cl3 ；400MHz) δ 9. 70 (s, 1H)，9. 66 (br s，1H)，9. 15 (br s，1H)，8. 29 (d, 1H, J = 8. 3Hz)，7. 78 (s, 1H)，7. 13 (dd, 1H, J =8. 3，2. 2Hz)，7. 03 (d, 1H, J = 2. 2Hz)，5. 95 (s, 2H)，5. 83 (m, 1H)，3. 66 (t, 2H, J = 8. 4Hz)， 3. 55 (d, 2H, J = 12. 3Hz)，2. 95-3. 11 (m, 2H)，2. 76 (m, 1H)，2. 18-2. 33 (m, 4H)，1. 99-2. 15 (m, 4H)，1. 82(m，4H)，0· 97(t，2H，J = 8· 3Ηζ)，0· 00(s，9H)。質(zhì)譜(ESI, m/z) =C28H39N5O2Si 的計(jì) 算值506. 3(M+H)，實(shí)測(cè)值506. 1。b) 4- (4- {Γ4-氰基-1- (2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-IH-咪唑_2_羰基1 -氨 基丨-3-環(huán)己-1-烯基-苯基)-哌啶-1-甲酸(2-羥基-乙基)-酰胺
在_78°C于氬氣下，將4-氰基-l-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-1Η-咪 唑-2-甲酸(2-環(huán)己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯基)_酰胺三氟乙酸鹽(如前面的步驟中 制備，116mg，0. 192mmol)和DIEA (134 μ L, 0. 770mmol)于4mLDCM中的溶液緩慢加入到三光 氣(23mg，0. 0768mmol)于4mL DCM中的溶液中。將混合物在_78°C攪拌15分鐘，升溫至室 溫并攪拌15分鐘，然后再次冷卻至_78°C。加入2-氨基-乙醇(350 μ L，5. 77mmol)于4mL THF中的懸浮液，將所得混合物升溫至室溫并在氬氣下攪拌20小時(shí)。用IOOmL EtOAc處理， 將混合物用H20(3X20mL)、鹽水(20mL)洗滌并干燥(Na2SO4)。在真空中去除溶劑，然后在硅 膠(10% EtOAc/DCM，然后5% MeOH/DCM)上對(duì)殘余物進(jìn)行快速色譜純化，得到95mg(83% ) 呈無(wú)色油狀的標(biāo)題化合物。1H-NMR(CDCl3 ；400MHz) δ 9. 68 (s, 1H)，8. 25 (d，1H，J = 8. 4Hz)， 7. 77 (s，1H)，7. 12 (dd, 1H, J = 8. 4，2. 2Hz)，7. 01 (d, 1H, J = 2. 2Hz)，5. 94 (s, 2H)，5. 83 (m, 1H), 4. 96 (t, 1H, J = 5. 6Hz) ,4. ll(d，2H，J = 13. 3Hz)，3. 75(ddd，2H，J = 4. 4Hz)，3. 66 (t, 2H, J = 8. 3Hz)，3. 44 (ddd, 2H, J = 5. OHz)，3. 36 (t, 1H, J = 4. 6Hz)，2. 91 (ddd, 2H, J= 13. 0, 2. 2Hz)，2. 66 (dddd, 1H, J= 12. 2,12. 2,3. 3,3. 3Hz)，2. 18-2. 33 (m, 4H)，1. 75-1. 91 (m, 6H)， 1. 67 (dddd, 2H, J= 12. 9，12. 9，12. 9,4. OHz)，0. 97 (t, 2H, J = 8. 3Hz)，0. 00 (s,9H)。質(zhì)譜 (ESI，m/z) =C31H44N6O4Si 的計(jì)算值593. 3 (M+H)，實(shí)測(cè)值593. 1。c) 4-{4-Γ (4-氰基_1Η_咪唑羰基)-氨基1 ~3~環(huán)己烯基-苯基丨-哌 啶-1-甲酸(2-羥某-乙某)-酰胺 向4- (4- {[4-氰基-1- (2_三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-IH-咪唑_2_羰基]-氨 基}-3_環(huán)己-1-烯基-苯基)_哌啶-1-甲酸(2-羥基-乙基)_酰胺(如前面的步驟 中制備，95mg，0. 16謹(jǐn)ol)于3mL DCM中的溶液中加入0. IOmL EtOH，然后加入1. OmL TFA0 將所得溶液在室溫下攪拌6小時(shí)。減壓去除溶劑，然后在硅膠(2-8%Me0H/DCM)上對(duì) 殘余物進(jìn)行快速色譜純化，得到68mg(92% )呈白色固體的標(biāo)題化合物。1H-NMRKD3OD; 400MHz) δ 8. 09 (d, 1H, J = 8. 4Hz)，8. 00 (s, 1H)，7. 15 (dd, 1H, J = 8. 4，2. 2Hz)，5. 79 (m, 1H)，4. 15 (dd, 2H, J= 13. 3，1. IHz)，3. 61 (t，2H，J = 5. 9Hz)，3. 27-3. 32 (m, 2H)，2. 90 (ddd, 2H, J = 13. 0,13. 0,2. 5Ηζ), 2. 73 (dddd, 1H, J = 12. 1，12. 1，2. 6，2. 6Hz)，2. 26 (m，4H)， 1. 73-1. 88 (m, 6H)，1. 62 (dddd, 2H, J = 12. 6，12. 6，12. 6,4. OHz)。質(zhì)譜(ESI，m/z) C25H30N6O3 的計(jì)算值463. 2 (M+H)，實(shí)測(cè)值463. 2。實(shí)例404-氰基-IH-咪唑-2-甲酸{2_環(huán)己烯基_4-「1-(2_甲磺酰基-乙基)-哌 啶-4-基1-苯基丨-酰胺 a)甲磺酸2-甲磺?；鵢乙酯 在氬氣下，向0°C的甲磺酰氯(484mg，4. 23mmol)于15mL DCM中的溶液中加入 2_甲磺酰基-乙醇(500mg，4. 03mmol)于IOmL DCM中的溶液，然后加入DIEA(1. 05mL， 6. 05mmol)。將混合物升溫至室溫并在氬氣下攪拌20小時(shí)。將混合物用IOOmL EtOAc處理， 用H20(3X20mL)、鹽水(20mL)洗滌并干燥(Na2SO4)。在真空中去除溶劑，得到534mg(66% ) 呈褐色油狀的標(biāo)題化合物。1H-NMR (CDCl3 ；400MHz) δ 4. 67(d，2H，J = 5. 5Hz)，3. 46(d，2H， J = 5. 5Ηζ)，3· ll(s，3H)，3. 04(s，3H)。b) 4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸丨2_環(huán)己烯基-4_「l-(2_甲磺?；?乙基)-哌 啶-4-基1-苯基丨-酰胺 在室溫下向4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸(2_環(huán)己烯基_4_哌啶_4_基-苯 基)_酰胺三氟乙酸鹽(如實(shí)例14的步驟(b)中制備，85mg，0. 174mmol)和DIEA(91 μ L， 0. 521mmol)于3mL DCM中的溶液中加入2-甲磺酸2-甲磺?；?乙酯(如前面的步驟中 制備，42mg，0. 208mmol)。將所得混合物在室溫下攪拌3小時(shí)。用5OmL EtOAc處理，將混合 物用H20(2X20mL)、鹽水(IOmL)洗滌并干燥(Na2SO4)。真空去除溶劑，然后在硅膠(1_3% MeOH/DCM)上對(duì)殘余物進(jìn)行快速色譜純化，得到54mg(65% )呈白色固體的標(biāo)題化合物。 1H-NMR(CDCl3；400MHz) δ 9. 54(s，1H)，8. 25(d,1H,J = 8. 4Hz)，7. 72(s,1H)，7. 15 (dd,1H, J =8. 4，2. 0Hz)，7. 04 (d, 1H, J = 2. OHz)，5. 85 (m, 1H)，3. 21 (t，1H，J = 6. 5Hz)，3. 09 (s, 3H)， 3.02-3. ll(m，2H)，2. 92(t，2H，J = 6. 5Hz)，2. 52 (dddd，1H，J = 12. 1,12. 1，3. 3，3. 3Hz)， 2. 18-2. 34 (m, 4H), 2. 18(t，2H，J = 10. 8Hz)，1. 64-1. 94 (m, 8H)。質(zhì)譜(ESI，m/z) C25H31N5O3S 的計(jì)算值482. 2 (M+H)，實(shí)測(cè)值482. 2。已經(jīng)根據(jù)所指出的實(shí)例制備了如下化合物 4-氰基-IH-咪嗶-2-甲酸|2_環(huán)己烯基_4-「1_(吡啶_3_羰基)-哌 啶-4-基1-苯基丨-酰胺
100 將4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸(2-環(huán)己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯基)_酰 胺三氟乙酸鹽(如實(shí)例14的步驟(b)中制備，75.0mg，0. 15mmol)于CH2Cl2 (IOmL)中的溶 液用Et3N (64. IyL,0. 46mmol)處理，并冷卻至0°C。將混合物用煙酰氯鹽酸鹽(0. 030g, 0. 17mmol)處理，在0°C下攪拌15分鐘，然后在室溫下攪拌17小時(shí)。將反應(yīng)混合物直 接吸附至硅膠上。進(jìn)行硅膠色譜純化(10%Me0H的EtOAc溶液)，得到呈白色固體的 標(biāo)題化合物(61. Omg, 83 % )。1H-NMR(CDCl3 ；400MHz) δ 9. 51 (br s, 1H)，8· 77 (s, 1H)， 8. 70-8. 66 (m, 1H)，8. 32 (d, 1H, J = 8. 4Hz)，7. 86-7. 81 (m, 1H)，7. 70 (s, 1H)，7. 42-7. 37 (m, 1H)，7. 17 (d, 1H, J = 8. 4Hz)，7. 06-7. 04 (m, 1H)，5. 87-5. 82 (m, 1H)，4. 98-4. 87 (m, 1H)， 3. 94-3. 84 (m, 1H)，3. 29-3. 18 (m, 1H)，2. 98-2. 86 (m, 1H)，2. 86-2. 76 (m, 1H)，2. 34-2. 20 (m, 4H)，1. 94-1. 72 (m, 9H)。LC-MS (ESI，m/z) C28H28N6O2 的計(jì)算值:481. 2 (M+H)，實(shí)測(cè)值481. 3。實(shí)例444-氰基-IH-咪唑-2-甲酸(2_環(huán)己烯基-4-丨1-「2-(2_羥基-乙氨基)-乙 ?；? -哌啶-4-基丨-苯基)-酰胺三氟乙酸鹽 a)「2- (4~{4~「(4_氰基-IH-咪唑_2_羰基)-氨基1 環(huán)己烯基-苯基丨-哌 啶-1-某)-2_氧代-乙某1-氡某甲酸,叔丁酯 將 N-BOC-甘氨酸(0. 29g, 1. 63mmol)于 CH2Cl2(IOmL)中的溶液用 DIEA (0. 85mL, 4. 90mmol) ,HOBt (0. 26g, 1. 96mmol)和 EDCI (0. 38g, 1. 96mmol)處理。將所得混合物在室溫己-1-烯基-苯基1 _酰胺三氟乙酸鹽
將4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸{4-[1-(2_氨基-乙酰基)_哌啶-4-基]-2-環(huán) 己-1-烯基-苯基]-酰胺三氟乙酸鹽(如前面的步驟中制備，0.42g，0.77mmol)于 CH2Cl2 (20mL)中的懸浮液用 Na (OAc) 3BH(0. 33g, 1. 54mmol)和固體乙二酸(44. 6mg, 0. 77mmol)處理。將混合物在室溫下攪拌1小時(shí)，真空蒸發(fā)溶劑。將殘余物溶解于MeOH中， 濾出固體，使濾液真空濃縮。進(jìn)行反相HPLC(C-18柱)(20%至60%乙腈的水(具有0.1% TFA)溶液，進(jìn)行30分鐘)，得到呈白色固體的標(biāo)題化合物(83mg，兩個(gè)步驟為19% )。
將[2-(4-{4-[(4-氰基-IH-咪唑-2-羰基)_氨基]-3-環(huán)己-1-烯基-苯基}_哌 唳-1-基)-2_氧代-乙基]-氨基甲酸叔丁酯(如前面的步驟中制備，0. 41g，0. 77mmol) 于CH2Cl2 (20mL)中的溶液用EtOH(0. 2mL)和TFA(6mL)處理。將混合物在室溫下攪拌45分 鐘，并真空蒸發(fā)溶劑。將粗產(chǎn)物直接用于下一步驟。LC-MS(ESI，m/z) =C24H28N6O2的計(jì)算值: 433. 2 (M+H)，實(shí)測(cè)值433. 2。c) 4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸(2-環(huán)己烯基丨1_「2_ (2~羥基-乙氨基)-乙
下攪拌10分鐘，加入到4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸(2-環(huán)己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯 基)_酰胺三氟乙酸鹽(如實(shí)例14的步驟(b)中制備，0.80g，1.63mmOl)于CH2Cl2(20mL) 中的懸浮液中。將溶液在室溫下攪拌17小時(shí)。真空蒸發(fā)溶劑。進(jìn)行硅膠色譜(50% EtOAc 的己烷溶液)，得到呈白色固體的標(biāo)題化合物(o.4ig，47%)。1H-Nmr(OtCI3JoomHz) δ 9. 53 (S，1Η)，8. 26 (d, 1H, J = 8. 4Hz)，7. 80-7. 78 (m, 1H)，7. 71 (s，1H)，7. 45-7. 43 (m, 1H)， 7. 06 (d, 1H, J = 8. 4Hz)，7. 00 (s, 1H)，5. 83 (br s，1H)，5. 76 (br s，1H)，4. 78-4. 68 (m, 1H)， 3. 96-3. 85 (m, 2H)，3. 17-3. 03 (m, 1H)，2. 78-2. 63 (m, 2H)，2. 29 (br s，2H)，2. 22 (br s，2H)， 1. 95-1. 87(m，2H)，1. 86-1. 72 (m, 4H)，1. 70-1. 55(m，2H)，1. 44(s，9H)。LC-MS (ESI, m/z) C29H36N6O4 的計(jì)算值533. 3 (M+H)，實(shí)測(cè)值532. 9。 b)4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸{4_「1-(2_氨基-乙?；?-哌啶基1_2_環(huán)啶-3-基)_苯基1 _酰胺三氟乙酸鹽
TFA HN' a) 5-三氟甲磺酰氧基-3,6- 二氫_2H_吡啶甲酸叔丁酷 1H-NMR (CD3OD ；400MHz) δ 8. 16-8. 09 (m, 1H)，8. 05-8. 01 (m, 1H)，7. 22-7. 15 (m, 1H)，7. 11-7. 06 (m, 1H)，5. 84-5. 79 (m, 1H)，4. 72-4. 62 (m, 1H)，4. 24-3. 91 (m, 2H)， 3. 89-3. 80 (m, 2H)，3. 28-3. 18 (m, 2H)，2. 92-2. 79 (m, 2H)，2. 28 (br s，4H)，1. 98-1. 89 (m, 2H)，1. 89-1. 76(m，4H)，1. 76-1. 57(m，2H)。LC-MS(ESI，m/z) :Q6H32N603 的計(jì)算值: 477. 2 (M+H)，實(shí)測(cè)值477. 2。實(shí)例 454-氰基-IH-咪唑-2-甲酸(2-環(huán)己-1-烯基-4-丨1-「2-(2_羥基-乙基)_甲 基-氨基-乙?；? -哌啶-4-基丨-苯基)-酰胺三氟乙酸鹽
I O將4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸(2-環(huán)己烯基_4_ {1_ [2- (2-羥基-乙氨基)-乙 ?；鵠-哌啶-4-基}_苯基)_酰胺三氟乙酸鹽(如實(shí)例44的步驟(c)中制備，50.0mg，
0.085mmol)于 Me0H(3mL)中的溶液用 Na (OAc)3BH(39. 5mg，0. 19mmol)和 37% 甲酸水溶液 (8.2yL,0. IOmmol)處理。將所得混合物在室溫下攪拌5. 5小時(shí)，真空除去溶劑。進(jìn)行反 相HPLC (C-18柱)(10%至50%乙腈的水(具有0. TFA)溶液，進(jìn)行30分鐘)，得到呈白 色固體的標(biāo)題化合物(19. 5mg,47% )。1H-NMR(CD3C)D ；400MHz) δ 8. 12 (d, 1H, J = 8. 4Hz)， 8. 02 (s, 1H) ,7. 19 (dd, 1H, J = 8. 4，2. OHz)，7. 09 (d，1H，J = 2. OHz)，5. 84-5. 79 (m，1H)， 4. 72-4. 64 (m, 1H)，4. 39-4. 23 (m, 2H)，3. 84-3. 79 (m, 1H)，3. 31-3. 21 (m, 1H)，3. 03-2. 94 (m, 6H) , 2. 92-2. 80 (m，2H) , 2. 32-2. 24 (m，4H) , 2. 00-1. 90 (m, 2H) , 1. 90-1. 76 (m, 5Η)，
1.78-1. 59(m，2H)。LC_MS(ESI，m/z) C27H34N6O3 的計(jì)算值491· 3 (M+H)，實(shí)測(cè)值491· 2。實(shí)例464-氰基-IH-咪唑-2-甲酸「4_(1_乙酰基-哌啶基)(1, 2, 5,6_四氫-口比 將LDA (23. 4mL, 35. Immol, 1. 5M環(huán)己烷溶液)于THF(50mL)中的溶液在氬氣下冷 卻至-78 °C。將所得溶液通過(guò)滴加3-氧代-哌啶-1-甲酸叔丁酯(5. OOg, 25. Immol)于 THF(15mL)中的溶液進(jìn)行處理，攪拌15分鐘。將所得混合物用1，1，1-三氟-N-苯基-N-[(三 氟甲基)磺?；鵠甲磺酰亞胺(12. 5g，35. lmmol)于THF(40mL)中的溶液進(jìn)行處理。讓混合 物升溫至室溫并攪拌2. 5小時(shí)。將反應(yīng)混合物用飽和NaHCOyK溶液猝滅，用Et2O稀釋，并用 水洗滌。將有機(jī)層用MgSO4干燥并進(jìn)行真空濃縮。進(jìn)行硅膠色譜(5% EtOAc的己烷溶液)處 理，得到呈無(wú)色油狀的標(biāo)題化合物(2. 45g,30% L1H-NMR(O)Cl3 ；400MHz) δ 5. 97-5. 89 (m， 1H)，4. 09-4. 01 (m, 2H)，3. 54-3. 45 (m, 2H)，2. 36-2. 26 (m, 2H)，1. 48 (s,9H)。LC-MS (ESI，m/ ζ) =C11H16F3NO5S 的計(jì)算值332. 1 (Μ+Η)，實(shí)測(cè)值332. 1。b) 5- (4,4, 5, 5-四甲基-「1, 3, 21 二氧雜硼烷 _2_ 基)_3,6_ 二氫 _2H_ 吡啶 土 甲 酸叔丁酯將PdCl2dppf(0· 16g，0.22mmol)、K0Ac(2. 18g，22.2mmol)、4，4，5，5，4'，4'，5'， 5'-八甲基 _[2，2']雙[[1，3，2] 二氧雜硼烷基](2. 07g，8. 13mmol)和 dppf(0. 12g， 0. 22mmol)置于圓底燒瓶中，將燒瓶用Ar吹掃。將5-三氟甲磺酰氧基-3，6-二氫-2H-吡 啶-1-甲酸叔丁酯(如前面的步驟中制備，2.45g，7.40mmol)于二氧雜環(huán)己烷(70mL)中 的脫氣溶液加入燒瓶中，加熱至80°C保持16小時(shí)。將混合物通過(guò)燒結(jié)玻璃漏斗過(guò)濾，以 去除固體KOAc，真空濃縮濾液。進(jìn)行硅膠色譜(5% EtOAc的己烷溶液)，得到呈無(wú)色油狀 的標(biāo)題化合物(1.62g，71%)。1H-Wr(CdcI3JOOMHz) δ 6. 69-6. 60 (m, 1H), 3. 98 (br s, 2H)，3· 49-3. 42(m，2H)，2· 24-2. 16(m，2H)，1. 47(s，9H)，1. 27 (s, 12H)。LC-MS (ESI, m/z) C18H28BNO4 的計(jì)算值310. 2 (Μ+Η)，實(shí)測(cè)值311. O。c) 4- (4-硝基-苯基)-3,6- 二氫_2H_吡啶土甲酸叔丁酯 本標(biāo)題化合物是通過(guò)實(shí)例35步驟(b)中的Suzuki偶聯(lián)方法，用4_硝基苯硼酸 (167mg, 1. OOmmol)和4-三氟甲磺酰氧基-3，6-二氫-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯(如實(shí) 例13的步驟(a)中制備，295mg，1.00mmOl)制備而得。進(jìn)行硅膠色譜(10% EtOAc的己烷 溶液)，得到呈油狀的標(biāo)題化合物(273mg,90% )0 1H-NMR(O)Cl3 ；400MHz) δ 8. 19(d，2H， J = 8. 8Hz)，7. 50 (d, 2H, J = 8. 8Hz)，6. 23 (m, 1H)，4. 12 (m, 2H)，3. 66 (m, 2H)，2. 54 (m, 2H)， 1. 49(s，9H)。d) 1-Γ4- (4-氨基-苯基)-哌啶-1-基1 -乙酮將4-(4-硝基-苯基)-3，6-二氫_2!1-吡啶-1-甲酸叔丁酯(如前面的步驟中 制備，304mg，1. OOmmol)于DCM/TFA的1 1混合物(IOmL)中的溶液在室溫下攪拌3小時(shí) 并濃縮。將殘余物真空干燥過(guò)夜，溶解于CH2Cl2 (IOmL)中并冷卻至0°C。向該溶液中滴加 Ε 3Ν(280μ ，2πιπιΟ1)，然后加入乙酸酐(102 μ L，lmmol)。將所得混合物在0°C下攪拌1小 時(shí)，讓其升溫至室溫。將反應(yīng)混合物用鹽水洗滌，分離有機(jī)層、干燥并濃縮。用類似于實(shí)例4 步驟(d)的方法將所得產(chǎn)物還原，獲得標(biāo)題化合物(143mg，65% )。1H-NMR(⑶Cl3 ；400MHz) δ 6. 97 (d, 2H, J = 8. 4Hz)，6. 64 (d, 2H, J = 8. 4Hz)，4. 75 (m, 1H)，3. 93 (m, 1H)，3. 13 (m, 3H)， 2. 66 (m, 2H)，2. 12 (s, 3H)，1. 84 (m, 2H)，1. 57 (m, 2H)。e) 1-Γ4- (4~氨基_3_溴-苯基)-哌啶基1 -乙酮將1-[4-(4_氨基-苯基)_哌啶-1-基]-乙酮(如前面的步驟中制備，0.36g， 1. 66mmol)于 CH2Cl2 (IOmL)中的溶液冷卻至 _78°C，用 NBS (0. 28g, 1. 58mmol)于 CH2Cl2 (4mL) 中的懸浮液進(jìn)行處理。讓反應(yīng)物升溫至室溫并攪拌30分鐘。將反應(yīng)物用CH2Cl2稀釋，用飽 和NaHCO3水溶液洗滌。將有機(jī)層用MgSO4干燥，真空濃縮。將粗產(chǎn)物直接用于下一反應(yīng)。 LC-MS (ESI，m/z) =C13H17BrN2O 的計(jì)算值297. 1 (M+H)，實(shí)測(cè)值297. 1。f) 5-「5- (1-乙酰基-哌啶-4-基)_2_氨基-苯基1-3,6- 二氫_2H_吡啶甲 酸叔丁酯 將5- (4，4，5，5-四甲基-[1，3，2] 二氧雜硼烷 _2_ 基)-3，6_ 二氫 _2Η_ 吡啶 甲 酸叔丁酯(如實(shí)例46的步驟(b)中制備，0.62g，2.02mmol)和1_[4-(4-氨基-3-溴-苯 基)_哌啶-1-基]-乙酮(如前面的步驟中制備，0.20g，0.67mmol)于甲苯Et0H(2 1， 9mL)中的溶液用2. OM Na2CO3水溶液(2. 7mL，5. 38mmol)處理，并在氬氣下進(jìn)行超聲脫氣。 將混合物加熱至80°C，用Pd(PPh3)4(54mg，0. 05mmol)處理，并在80°C下攪拌4. 5小時(shí)。將 反應(yīng)混合物冷卻至室溫，用EtOAc稀釋，并用飽和NaHCO3水溶液洗滌。將有機(jī)層用MgSO4干 燥，真空濃縮，得到呈灰白色固體的標(biāo)題化合物(0. 25g，93%)。LC-MS(ESI，m/z) =C23H33N3O3 的計(jì)算值422. 2 (M+Na)，實(shí)測(cè)值422. 0。r) 5- (5- (1-乙酰基-哌啶-4-基)丨「4_氰基(2~三甲基硅烷基-乙氧基甲 某)-IH-瞇卩半-2-羰某1 -氡某丨-苯某)-3,6- 二氫-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯 將5- [5- (1-乙?；?哌啶-4-基)-2-氨基-苯基]-3，6_ 二氫_2H_吡啶甲 酸叔丁酯(如前面的步驟中制備，0. 25g，0. 63mmol)于CH2Cl2中的溶液用PyBroP(0. 44g，
0.94mmol)和4-氰基-1-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-IH-咪唑-2-甲酸鉀鹽(如實(shí) 例3的步驟(d)中制備，0. 21g，0. 69mmol)處理。將所得漿液冷卻至0°C并用DIEA (0. 33mL,
1.88mmol)進(jìn)行處理。移除冰浴，將混合物在室溫下攪拌18小時(shí)。將反應(yīng)混合物用CH2Cl2 稀釋，用飽和NaHCO3水溶液洗滌。將有機(jī)層用MgSO4干燥并進(jìn)行真空濃縮。進(jìn)行硅膠色譜 (25-45% EtOAc的己烷溶液，然后為100% EtOAc)，得到呈白色固體的標(biāo)題化合物(399mg， 98% )。LC-MS (ESI, m/z) =C34H48N6O5Si 的計(jì)算值649. 4(M+H)，實(shí)測(cè)值649. 9。 h) 4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸「4_ (1_乙酰基-哌啶_4_基)(1, 2, 5,6_四氫-吡 啶-3-基)-苯基1 -酰胺三氟乙酸鹽 將5- (5- (1-乙?；?哌啶-4-基)_2_ {[4_氰基(2_三甲基硅烷基-乙氧基 甲基)-IH-咪唑-2-羰基]-氨基}-苯基)-3，6- 二氫-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯(如前面 的步驟中制備,0. 40g，0. 61mmol)于 CH2Cl2 (20mL)和 Et0H(0.4mL)中的溶液用 TFA(3mL)處 理。將溶液在室溫下攪拌0.5小時(shí)。真空蒸發(fā)溶劑，將殘余物立即溶解于Et0H(25mL)中并 在5°C下保存11小時(shí)。真空濃縮該溶液，將殘余物溶解于CH2Cl2 (20mL)和Et0H(0. 4mL)中， 然后用TFA (6mL)處理。在室溫下攪拌反應(yīng)2小時(shí)，然后真空蒸發(fā)溶劑。進(jìn)行反相HPLC (C-18 柱)(10至80%乙腈的水(具有0. TFA)溶液，進(jìn)行30分鐘)，得到呈白色固體的標(biāo)題 化合物(56.9mg，22% )。1H-NMR (CDCl3 ；400MHz) δ 8. 06 (s，1H)，7. 81 (d，1H，J = 8. 4Hz)， 7. 32 (d, 1H, J = 8. 4Hz)，7. 22 (s, 1H)，6. 10-6. 03 (m, 1H)，4. 74-4. 64(m，2H)，4. 11-4. 02 (m, 1H)，3. 95 (s，2H)，3. 50-3. 37 (m, 2H)，3. 29-3. 20 (m, 1H)，2. 93-2. 82 (m, 1H)，2. 80-2. 69 (m, 1H)，2· 62-2. 53(m，2H)，2· 16(s，3H)，1. 98-1. 84(m，2H)，1. 78-1. 54 (m, 2H)。LC-MS (ESI, m/ ζ) =C23H26N6O2 的計(jì)算值:419. 2 (Μ+Η)，實(shí)測(cè)值:419· 2。實(shí)例47(4-{4-Γ (4-氰基-IH-咪嗶_2_羰基)_氨基1_3_環(huán)己烯基-苯基丨-哌 啶-1-基)-乙酸三氟乙酸鹽 向燒瓶裝入4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸(2_環(huán)己烯基_4_哌啶_4_基-苯 基)_酰胺TFA鹽(33mg，0. 067mmol)(如實(shí)例14的步驟(b)中制備)、溴乙酸叔丁酯(10 μ L, 0. 067mmol)、NEt3(20y L,0. 135mmol)和 0. 25mLDCM,并在 25 °C 下攪拌 10 小時(shí)。將反應(yīng) 混合物上樣至5g固相萃取柱(二氧化硅)上，用25% EtOAc/DCM洗脫出23mg(70% )的 (4- {4- [ (4-氰基-IH-咪唑-2-羰基)_氨基]-3-環(huán)己-1-烯基-苯基}-哌啶基)-乙 酸叔丁酯。將此化合物溶解于ImL DCM和20 μ L EtOH中，加入ImL TFA，在25°C攪拌反應(yīng)3 小時(shí)。將標(biāo)題化合物通過(guò)RP-HPLC(C18)純化(用30-50% CH3CN于0. TFA/H20中的溶 a)「3- (4~{4~「(4_氰基_1Η_咪唑_2_羰基)-氨基1 環(huán)己烯基-苯基丨-哌 啶-1-某)-1，1- 二甲某-3-氧,代-丙某1 -氡某甲酸叔丁酯 向4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸(2_環(huán)己烯基_4_哌啶_4_基-苯基)-酰胺三 氟乙酸鹽(如實(shí)例14的步驟(b)中制備，40. Omg, 0. 0818mmol)、3-叔-丁氧羰基氨基-3-甲 基-丁酸(J. Med. Chem.，34 (2)，633-642，(1991)，21. 4mg, 0. 0981mmol)和 PyBroP (55. Omg, 0. 0981mmol)于二氯乙烷(2mL)中的混合物中加入DIEA(43 μ L，0. 25mmol)，并將所得混 合物在室溫下于氬氣下攪拌1天。將混合物用EtOAc (30mL)稀釋，用H2O (2 X IOmL)、鹽水 (IOmL)洗滌，用Na2SO4干燥，然后進(jìn)行真空濃縮。將殘余物通過(guò)快速色譜(硅膠，10-40% EtOAc/己烷)純化，得到33. Omg(70% )呈無(wú)色油狀的標(biāo)題化合物。質(zhì)譜(ESI，m/z) C32H42N6O4 的計(jì)算值575. 3 (M+H)，實(shí)測(cè)值574. 8。b)4~氰基-IH-咪唑-2-甲酸{4_「1-(3_氨基_3_甲基-丁酰基)-哌 啶-4-某1 -2-環(huán)己-1-烯某-苯某丨-酰胺三氟乙酸鹽
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液洗脫 12 分鐘)，得到 IOmg(40% )白色固體物質(zhì)。1H-WRGOOMHziCD3OD) δ 8. 16(d，lH)， 8. 02 (s，1H)，7. 22 (dd, 1H)，7. 10 (d, 1H)，5. 72 (m, 1H)，4. 04. (s,2H)，3. 76 (m, 2H)，3. 22 (m, 2H)，2. 90 (m, 1H)，2. 29 (m, 4H)，2. 10 (m, 4H)，1. 82 (m, 4H)。質(zhì)譜(ESI，m/z) C24H27N5O3 的計(jì)算 值434. 2(M+H)，實(shí)測(cè)值434. 2。實(shí)例484-氰基-IH-咪唑-2-甲酸{4-「1- (3-氨基甲基-丁?；?-哌啶基1 環(huán) 己-1-烯基-苯基丨-酰胺三氟乙酸鹽
108 向0°C下的[3-(4-{4-[(4-氰基-IH-咪唑-2-羰基)_氨基]-3-環(huán)己-1-烯基-苯 基}-哌啶-1-基)-1，1- 二甲基-3-氧代-丙基]-氨基甲酸叔丁酯(33. Omg, 0. 0574mmol) (如前面的步驟中制備)于3mL DCM和0. IOmL EtOH中的溶液中加入1. OmL TFA,將混合 物升溫至室溫并攪拌3小時(shí)。將反應(yīng)混合物用3mL正丙醇稀釋，然后進(jìn)行真空濃縮。將殘 余物通過(guò)快速色譜(硅膠，3-8% MeOH/DCM)純化，得到33. 5mg(99% )呈白色固體的標(biāo)題 化合物。1H-匪R(400MHz，CDCl3) δ 13. 3 (s, 1H), 9. 52 (s, 1H), 8. 57 (br s,3H) ,8. 26 (d, 1H, J = 8. 6Hz)，7. 69 (s，1H)，7. 02 (dd, 1H，J = 8. 6，1. 7Hz)，6. 98 (d, 1H, J=L 7Hz)，5. 78 (m, 1H)，4. 67 (br d, 1H, J = 13. 4Hz)，3. 88 (br d, 1H, J = 13. 4Hz)，3. 10 (m, 1H)，2. 55-2. 85 (m, 4H)，2. 23 (m，4H)，1. 72-2. 01 (m，8H)，1. 50 (s,6H)。質(zhì)譜(ESI，m/z) =C27H34N6O2 的計(jì)算值: 475. 3 (M+H)，實(shí)測(cè)值475. 1。實(shí)例494Η-「1, 2,41 -三唑_3_甲酸(2_環(huán)己烯基哌啶基-苯基)-酰胺雙三氟乙酸鹽 a) 1-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-1H-[1，2,4]-三唑-3-甲酸甲酷 在0 °C向NaH(60 %分散體)(200mg，5. OOmmo 1)于DMF(5mL)中的懸浮液中滴加 1H-1，2，4-三唑甲酸甲酯(635mg，5. OOmmol)于DMF(5mL)中的溶液。將所得懸浮液在相同 溫度下攪拌30分鐘，并用SEMCl (0. 90mL, 5. Ommol)處理。將所得溶液在室溫下攪拌30分 鐘，并傾注于冰上。將產(chǎn)物用乙醚(3X20mL)萃取。將乙醚層合并，干燥(Na2SO4)并真空 向4-(3_環(huán)己-1-烯基-4-{[l-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-1Η-[1，2， 4]-三唑-3-羰基]-氨基}-苯基)-哌啶-1-甲酸叔丁酯(如前面的步驟中制備， 81. 9mg,0. 140mmol)于 DCM(0.4mL)和 Et0H(13yL)中的溶液中加入 TFA(0. 13mL)。將所 得溶液在室溫下攪拌3小時(shí)并真空濃縮。將獲得的殘余物真空干燥1小時(shí)，將其懸浮于
濃縮。將獲得的殘余物在二氧化硅上進(jìn)行色譜純化(10% EtOAc/己烷)，得到標(biāo)題化合物 (530mg,41% )。質(zhì)譜(ESI, m/z) =C10H19N3O3Si 的計(jì)算值258. 1 (M+H)，實(shí)測(cè)值258. 2。b) 4- (3-環(huán)己-1-烯基-4- {Tl- (2~三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-IH-「1, 2,4-1三 ρ半-3-羰某ι -氡某ι -苯某)-哌啶-ι- ^murm
▽ O
AV、τ
Ν O向1-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-IH-[1，2，4]-三唑-3-甲酸甲酯(如前面 的步驟中制備，257mg，l. OOmmol)于Et0H(2mL)中的溶液中加入2N KOH(0. 5mL，lmmol)。將 所得溶液在室溫下攪拌20分鐘并進(jìn)行真空濃縮。將殘余物懸浮于乙醚(IOmL)中并超聲處 理5分鐘。然后真空去除乙醚，將所得殘余物干燥4小時(shí)，得到1-(2-三甲基硅烷基-乙氧 基甲基)-IH-[1，2,4]-三唑-3-甲酸鉀鹽(273mg，97%),其無(wú)需任何進(jìn)一步的純化就直接 用于下一步驟。將1-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-IH-[1，2,4]-三唑_3_甲酸鉀鹽(如前面 制備，28mg, 0. IOmmol) ,DIEA (34 μ L, 0. 20mmol)、4_ (4-氨基-3-環(huán)己-1-烯基-苯基)-哌 啶-1-甲酸叔丁酯(如實(shí)例14的步驟(b)中制備，35. 6mg，0. 1 OOmmo 1)和PyBroP (69. 9mg， 0. 150mmol)于DCM(2mL)中的混合物在室溫下攪拌12小時(shí)。將反應(yīng)混合物用DCM(5mL)稀 釋，用飽和NaHCO3水溶液(IOmL)和水(IOmL)洗滌。分離有機(jī)層、干燥(Na2SO4)并真空濃 縮。將產(chǎn)物在二氧化硅上進(jìn)行色譜純化(20-40% EtOAc/己烷)，得到標(biāo)題化合物(31. 9mg, 55% )。質(zhì)譜(ESI, m/z) =C31H47N5O4Si 的計(jì)算值481· 2 (M-B0C+2H)，實(shí)測(cè)值481. 2。c) 4Η-「1, 2,4-1 -三唑_3_甲酸(2_環(huán)己烯基哌啶基-苯基)-酰胺 雙三氟乙酸鹽
a) 5-氯-1- (2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)_1Η_「1, 2,41 -三唑_3_甲酸甲酯 在0°C下向NaH(60%分散體，53. 9mg, 1. 34mmol)于DMF(5mL)中的懸浮液中滴加 5-氯-1H-[1，2，4]_ 三唑-3-甲酸甲酯(Bull. Pharm. Sci.，20(1) :47_61，(1997)，218mg， 1. 35mmol)于DMF(IOmL)中的溶液。將所得懸浮液在相同溫度下攪拌30分鐘，然后用 SEMCl (0. 24mL，1. 4mmol)處理。將所得溶液在室溫下攪拌30分鐘并傾注于冰上。將混合物 用乙醚(3X20mL)萃取，將乙醚層合并、干燥(Na2SO4)并真空濃縮。將獲得的殘余物在二氧 化硅上進(jìn)行色譜分離(10% EtOAc/己烷)，得到標(biāo)題化合物(227mg，58% )。質(zhì)譜(ESI，m/ ζ) =C10H18ClN3O3Si 的計(jì)算值292. 0 和 294. 0 (Μ+Η)，實(shí)測(cè)值291. 5 和 293. 6。b) 4- (4-丨「5-氯-1- (2~三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-IH-「1, 2,41 -三唑_3_搦 某1-氨某丨-3-環(huán)己-1-烯某-苯某)-哌啶-1-甲酸叔丁酯
乙醚(IOmL)中并超聲處理5分鐘。通過(guò)吸濾收集形成的固體，得到標(biāo)題化合物(56mg， 68%)。1H-WR(CD3ODdOOMHz) δ 8. 53 (br s，1H)，8. 20 (d，1H，J = 8. 4Hz)，7. 21 (dd，1H，J =8. 4,2. 1Ηζ)，7. ll(d，lH，J = 2. 1Hz), 5. 83 (br s，1H)，3. 45 (m，2H)，3. 19 (m，2H)，2. 98 (m， lH)，2.28(m，4H)，2. 14(m，2H)，和 1.95-1.75(m，6H)。質(zhì)譜(ESI，m/z) :C2tlH25N5O 的計(jì)算值: 352. 4 (Μ+Η)，實(shí)測(cè)值352. 2。實(shí)例505-氯-4Η_「1, 2,41 -三唑_3_甲酸(2_環(huán)己烯基哌啶基-苯基-酰 胺三氟乙酸鹽
111 向4-(4-{[5-氯-1-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-IH-[1，2，4]-三唑-3-羰 基]-氨基}-3_環(huán)己-1-烯基-苯基)_哌啶-1-甲酸叔丁酯(如前面的步驟中制備， 63. 3mg，0. 102mmol)于 DCM (0. 5mL)和 EtOH (11 μ L)中的溶液中加入 TFA (0. ImL)。將所得混 合物在室溫下攪拌12小時(shí)后，再加入0. lmLTFA。將反應(yīng)混合物在室溫下再攪拌5小時(shí)，蒸 發(fā)溶劑，將標(biāo)題化合物通過(guò)RP-HPLC (C18)純化(用20-70% CH3CN于0. TFA/H20中的溶
向4-(4-{[5_氯-l-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-1Η-[1，2，4]三唑_3_甲 酸甲酯(如前面的步驟中制備，227mg，0. 780mmol)于Et0H(2mL)中的溶液中加入2N K0H(0.4mL，0.8mmol)。將所得溶液在室溫下攪拌20分鐘并真空濃縮。將獲得的殘余物懸 浮于乙醚(IOmL)中，超聲處理5分鐘。然后除去乙醚，將所得殘余物真空干燥4小時(shí)，得到 4- (4- {[5-氯-1-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-IH-[1，2,4]三唑-3-甲酸鉀鹽(223mg, 91% )，其無(wú)需任何進(jìn)一步純化就直接用于下一步驟。將4-(4-{[5-氯-1-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-IH-[1，2，4]-三唑-3-甲 酸鉀鹽(如上制備，35mg，0. I(Mimol)、DIEA (34 μ L，0. lOmmol)、4_(4_ 氨基-3-環(huán)己-1-烯 基-苯基)-哌啶-1-甲酸叔丁酯(如實(shí)例14的步驟(b)中制備，35.6mg，0. IOOmmol)和 PyBroP(69. 9mg,0. 150mmol)于DCM(2mL)中的混合物在室溫下攪拌12小時(shí)。將反應(yīng)混合 物用DCM(5mL)稀釋，用飽和NaHCO3水溶液(IOmL)和水(IOmL)洗滌。分離有機(jī)層、干燥 (Na2SO4)并真空濃縮。將產(chǎn)物在二氧化硅上進(jìn)行色譜純化(20-40% EtOAc/己烷)，得到標(biāo) 題化合物(52mg，85% )。1H-NMR(CDCl3 ；400MHz) δ 9. 60 (s, 1H)，8· 29 (d, 1H, J = 8. 4Hz)， 7. 18(dd，lH，J = 8. 4,2. 2Hz), 7. 13 (d, 1H, J = 2. 2Hz), 5. 99(s,2H) ,5. 84 (br s，1H)， 4. 18-4. 25 (m, 2H)，3. 72-3. 76 (m, 2H)，2. 58-2. 67 (m, 2H)，2. 51-2. 64 (m, 1H)，2. 18-2. 33 (m, 4H)，1. 78-1. 92 (m, 6H)，1. 55-1. 65 (m, 2H)，1. 49 (s,9H)，0. 93-0. 98 (m, 2H)，0. 10 (s,9H)。c) 5-氯-IH-「1，2，4-1-三嗶_3_甲酸(2_環(huán)己烯基_4_哌啶-4-基-苯 基)_酰胺三氟乙酸鹽 a)_順式/反式2,6- 二甲某_4_氧代-哌啶甲酸叔丁酯 將順式/ 反式-2，6- 二甲基哌啶酮(Coll. Czech. Chem. Commun. 31 (11)， 4432-41, (1966), 1. 27g, 10. Ommol)于乙醚(IOOmL)中的溶液用 INNaOH 水溶液(llmL， llmmol)和(BOC)20(2. 18g，10. Ommol)處理。將所得混合物在室溫下攪拌48小時(shí)。將乙 醚層分離、干燥并濃縮。將殘余物在二氧化硅上進(jìn)行色譜純化(10%Et0Ac-己烷)，得到標(biāo) 題化合物(1. IOg, 50% ) =LC-MS (ESI, m/z) =C12H21NO3 的計(jì)算值=128. 1 (M-B0C+2H)，實(shí)測(cè)值 128.1。b) 4-(4-氨基-苯基)-順式/反式2,6- 二甲基-哌啶甲酸叔丁酯 將順式/反式N-Boc-2，6- 二甲基哌啶酮(如前面的步驟中制備，1. 14g， 5. OOmmol)于THF(20mL)中的溶液冷卻至_78°C，并在氬氣下用LDA(于環(huán)己烷、THF和乙苯 中的1. 5M溶液，4. 4mL，6. 5mmol)進(jìn)行處理。將所得混合物在相同溫度下攪拌30分鐘，用N-苯基三氟甲磺酰亞胺(2. 34g，
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液洗脫 20 分鐘)，得到標(biāo)題化合物(30mg,58% )。1H-WR(CD3C)D ；400MHz) δ 8. 14 (d，1H，J =8. 4Hz)，7. 20 (dd, 1H, J = 8. 4，2. 1Hz)，7. 13 (d, 1H, J = 2. 1Hz)，5. 82 (br s，1H)，3. 45 (m, 2H)，3· 19(m，2H)，2· 98 (m, 1Η)，2· 28(m，4H)，2· 14(m，2H)，和 1. 95-1. 75(m，6H)。質(zhì)譜(ESI, m/z) =C20H24ClN5O 的計(jì)算值386. 1 和 388. 1 (M+H)，實(shí)測(cè)值386. 2 和 388. 1。
實(shí)例 515-氰棊_-IH-咪P半-2-甲酸「2-環(huán)己-1-烯基I-(順式-2,6-，二甲基-哌啶-4-棊)_-苯棊1-酰胺雙三三氟,乙_鹽，禾口
5-氰棊--IH-咪唑-2-甲酸「2-環(huán)己-1-烯基反式-2,6-，二甲某-哌
啶-4-基)-苯基1 -酰胺雙三氟乙酸鹽
6. 55mmol)于THF(20mL)中的溶液處理。將反應(yīng)混合物再攪拌30分鐘并讓其升溫至室 溫。在室溫下30分鐘后，將反應(yīng)混合物真空濃縮，將殘余物溶解于乙醚(20mL)中并用冷水 (2X IOmL)洗滌。將乙醚層干燥(Na2SO4)和濃縮，得到順式/反式_2，6-二甲基-4-三氟 甲磺酰氧基-3，6-二氫-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯(890mg，49% )，其可直接用于下一步驟。隨后根據(jù)實(shí)例35步驟(b)的Suzuki偶聯(lián)方法，用4_氨基苯基硼酸(219mg， 1. OOmmol)和順式/反式_2，6- 二甲基-4-三氟甲磺酰氧基-3,6- 二氫-2H-吡啶-1-甲 酸叔丁酯(如上制備，321mg，l. OOmmol)制備本標(biāo)題化合物。進(jìn)行硅膠色譜純化(10_20% EtOAc/己烷)，得到4- (4-氨基-苯基)-2，6- 二甲基-3，6- 二氫-2H-吡啶-1-甲酸叔丁 酯(172mg,57% )質(zhì)譜(ESI，m/z) =C18H26N2O2 的計(jì)算值:303. 2 (M+H)，實(shí)測(cè)值303. 1。將4-(4-氨基-苯基)-2，6-二甲基-3，6-二氫-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯(如上 制備，380mg，1. 25mmol)于 MeOH(IOmL)中的溶液于 20psi 下在 10% Pd/C(190mg)上氫化 1 小時(shí)。將溶液通過(guò)Celite墊過(guò)濾并濃縮，得到標(biāo)題化合物(360mg，94%)。質(zhì)譜(ESI，m/ z) =C18H28N2O2 的計(jì)算值305. 2 (Μ+Η)，實(shí)測(cè)值305. 6。c) 4-(4-氨基-3-環(huán)己-1-烯基-苯基)_順式/反式2,6_ 二甲基-哌啶甲 酸叔丁酯 向4-(4-氨基-苯基)-2，6- 二甲基-哌啶甲酸叔丁酯(如前面的步驟中制 備，334mg，1. 09mmol)于DCM(IOmL)中的溶液中加入NBS(195mg, 1. 09mmol)，并將反應(yīng)混合 物在室溫下攪拌12小時(shí)。將反應(yīng)混合物用DCM(IOmL)稀釋，用飽和NaHCO3水溶液(IOmL) 和水(IOmL)洗滌。分離有機(jī)層、干燥(Na2SO4)并真空濃縮，得到4-(4-氨基-3-溴-苯 基)-順式/反式-2，6_ 二甲基-哌啶-1-甲酸叔丁酯(367mg，87%)。質(zhì)譜(ESI，m/z) C18H27BrN2O2 的計(jì)算值327. 0 和 329. 0 (M-t-Bu+H)，實(shí)測(cè)值327. 0 和 328. 9。然后根據(jù)實(shí)例12步驟(d)的Suzuki偶聯(lián)方法，用環(huán)己-1-烯基硼酸(157mg， 1. 25mmol)和4-(4-氨基-3-溴-苯基)-2，6-二甲基-哌啶-1-甲酸叔丁酯(如上制備， 382mg, 1. OOmmol)制備標(biāo)題化合物，將其在二氧化硅上進(jìn)行色譜純化(20% EtOAc/己烷)， 得到254mg(66 % )化合物。質(zhì)譜(ESI, m/z) =C24H36N2O2的計(jì)算值:384· 2_)，實(shí)測(cè)值 385. 1。d) 4- (4- {Γ4-氰基-1- (2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-IH-咪唑_2_羰基1 -氨 某1 -3-環(huán)F1 -1-烯某-苯某)-順式-2，6- 二甲某-_定-1-甲酸叔丁酯和4- (4- {「4- M 基-1- (2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-IH-咪唑-2-羰基1 -氨基丨-3-環(huán)己-1-烯基-苯 某)-反式-2，6- 二甲某-哌啶-1-甲酸叔丁酯 將4-氰基-1- (2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-IH-咪唑_2_甲酸鉀鹽(如實(shí)例3 的步驟(d)中制備，384mg, 1. OOmmo 1) ,DIEA (0. 34 μ L, 2. Ommo 1)、4_ (4-氨基-3-環(huán)己-1-烯 基-苯基)-2，6- 二甲基-哌啶-1-甲酸叔丁酯(如前面的步驟中制備，384mg，1. OOmmol) 禾口 PyBroP (699mg，l. 50mmol)于DCM(20mL)中的混合物在室溫下攪拌12小時(shí)。將反應(yīng)混合 物用DCM(IOmL)稀釋，用飽和NaHCO3水溶液(IOmL)和水(IOmL)洗滌。分離有機(jī)層、干燥 (Na2SO4)并真空濃縮，得到上面兩種標(biāo)題化合物的混合物(321mg，50.7%)。將該混合物在 二氧化硅上進(jìn)行色譜純化(10-20% EtOAc/己烷)，得到各標(biāo)題化合物。4-(4-{[4-氰基-l-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)_1Η_咪唑_2_羰基]-氨 基}-3_環(huán)己-1-烯基-苯基)-反式-2，6-二甲基-哌啶-1-甲酸叔丁酯(31mg)。質(zhì)譜 (ESI, m/z) =C35H51N5O4Si 的計(jì)算值634. 3 (M+H)，實(shí)測(cè)值634. 1。4-(4-{[4-氰基-l-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)_1Η_咪唑_2_羰基]-氨 基}-3_環(huán)己-1-烯基-苯基)-順式-2，6-二甲基-哌啶-1-甲酸叔丁酯，帶10% 4- (4- {[4-氰基-1- (2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-IH-咪唑-2-羰基]-氨基} _3_環(huán) 己-1-烯基-苯基)-反式-2，6-二甲基-哌啶-1-甲酸叔丁酯(290mg)雜質(zhì)。質(zhì)譜(ESI， m/z) =C35H51N5O4Si 的計(jì)算值634· 3 (M+H)，實(shí)測(cè)值634. 1。e) 5-氰基_1Η_咪嗶_2_甲酸「2_環(huán)己烯基(順式_2，6_ 二甲基-哌 啶-4-基)_苯基1-酰胺雙三氟乙酸鹽和5-氰基-IH-咪嗶-2-甲酸「2-環(huán)己-1-烯 基-4-(反式-2，6- 二甲基-哌啶-4-基)-苯基1 -酰胺雙三氟乙酸鹽 本標(biāo)題化合物是按照實(shí)例14步驟(b)中的方法，用290mg (0. 457mmol)的 4- (4- {[4-氰基-1- (2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-IH-咪唑-2-羰基]-氨基} _3_環(huán) 己-1-烯基-苯基)-順式-2，6- 二甲基-哌啶-1-甲酸叔丁酯和31mg(0. 048mmol)的31 二氧龍環(huán)-4-羰某)-哌啶-4-某1 _苯某丨_酰胺
酰基)-哌啶-4-基1-苯基丨-酰胺
a) 5-氰基-IH-咪唑 _2_ 甲酸{2_ 環(huán)己 烯基 「1_ (R) - (+) 2, 2_
向(R)-(+)-2，2_ 二甲基-1，3- 二 氧戊環(huán)-4-甲酸甲酯(0. 16mL, 1. Ommo 1)于 MeOH(2mL)中的溶液中加入2N KOH(0. 5mL，lmmol)。將所得溶液在室溫下攪拌20分鐘并真
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甲基-「1,
4- (4- {[4-氰基-1- (2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-IH-咪唑-2-羰基]-氨基} _3_環(huán) 己-1-烯基-苯基)-反式-2，6- 二甲基-哌啶-1-甲酸叔丁酯制備而得。5-氰基-IH-咪唑-2-甲酸[2_環(huán)己烯基_4_(順式_2，6_ 二甲基-哌 唆-4-基)_ 苯基]-酰胺雙三氟乙酸鹽(93mg,32% ) =1H-WR(CD3ODdOOMHz) δ 8. 17 (d, 1H, J = 8. 4Hz) ,8. 03 (s, 1H), 7. 22 (d, 1H, J = 8·4Ηζ)，7· 11 (s，1Η)，5· 72 (br s，1H)， 3. 87 (m, 1H)，3. 78 (m, 1H)，3. 45 (m, 1H)，3. 23 (m, 1H)，3. 07 (m, 1H)，2. 22 (m, 4H)，2. 19 (m, 2H)，1. 75-1. 92(m，4H)，1. 56 (m, 3H)，1. 37(m，6H)。質(zhì)譜，ESI，m/z) =C24H29N5O 的計(jì)算值: 404. 2 (M+H)，實(shí)測(cè)值404. 2。5-氰基-IH-咪唑-2-甲酸[2-環(huán)己烯基_4_ (反式_2，6- 二甲基-哌 啶-4-基)-苯基]-酰胺雙三氟乙酸鹽(17. 3mg，56%) ο 1H-NMR(CDCl3 ；400MHz) δ 13. 9 (br s，1H)，10. 3 (br s, 1H)，9. 98 (s, 1H)，8. 41 (d, 1H, J = 8. 4Hz)，7. 75 (br s，1H)，7. 26 (dd, 1H, J =8. 4，2. OHz)，7. 15 (d, 1H, J = 2Hz)，5. 92 (brs, 1H)，4. 12 (m, 1H)，3. 59 (m, 1H)，3. 1-3. 3 (m, 4H)，2. 25-2. 42 (m, 6H)，2. 05-1. 78 (m, 6H)，1. 62 (d, 3H, J = 7. IHz)，1. 43 (d, 3H, J = 6. 3Hz)。 質(zhì)譜(ESI，m/z) =C24H29N5O 的計(jì)算值404. 2 (M+H)，實(shí)測(cè)值404. 2。實(shí)例525-氰某-IH-咪唑-2-甲酸{2-環(huán)己 烯基-4_「1_ (R) - (+) - (2, 3_ 二羥基-丙空濃縮。將獲得的殘余物懸浮于乙醚(IOmL)中并超聲處理5分鐘。然后除去乙醚，將所得 殘余物真空干燥4小時(shí)，得到(R)-(+)-2，2-二甲基-1，3-二氧戊環(huán)-4-甲酸鉀鹽(173mg， 94% )，其無(wú)需純化就直接用于下一步驟。向4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸(2-環(huán)己烯基_4_哌啶_4_基-苯基)_酰胺 三氟乙酸鹽(如實(shí)例14的步驟(b)中制備，40mg，0. 08mmol)于DCM(1.5mL)中的溶液中 加入(R)-(+)-2，2-二甲基-1，3-二氧戊環(huán)-4-甲酸鉀鹽(如上制備，18mg，0. 090mmol)、 EDCI (18. 8mg，0. 0900mmol)、HOBt (13. 2mg，0. 0900mmol)和 DIEA(42y L，0. 24mmol)的混合 物。將所得混合物在室溫下攪拌6小時(shí)。加入水(IOmL)，將DCM層分離、干燥(Na2SO4)并濃 縮。將獲得的殘余物在二氧化硅上進(jìn)行色譜純化(2%Me0H/DCM)，得到標(biāo)題化合物(47mg， 97% ) ο 質(zhì)譜(ESI，m/z) =C28H33N5O4 的計(jì)算值504. 2 (M+H)，實(shí)測(cè)值503. 9。b) 5-氰某-IH-咪唑-2-甲酸{2-環(huán)己 烯基 「1_(R) -(+) ~(2,3~ 二羥基-丙 酰基)-哌啶-4-基1-苯基丨-酰胺 向 5-氰基-IH-咪唑-2-甲酸{2-環(huán)己-1-烯基-4-[l_(R)-(2，2-二甲基 _[1，3] 二氧戊環(huán)-4-羰基)-哌啶-4-基]-苯基}-酰胺(如前面的步驟中制備，45mg，0. 090mmol) 于MeOH(ImL)中的溶液中加入2NHC1水溶液(2mL)。將所得混合物在室溫下攪拌12小時(shí)。 真空去除溶劑，并將所得殘余物干燥4小時(shí)。加入乙醚(IOmL)并超聲處理5分鐘。真空去 除乙醚，將殘余物干燥12小時(shí)，得到標(biāo)題化合物(21.3mg,52% )0 1H-WR(DMSOdOOMHz) δ 14. 1 (br s, 1H)，9. 85 (s, 1H)，8. 32 (s, 1H)，7. 92 (d, 1H, J = 8. 4Hz)，7. 18 (dd, 1H, J = 8. 4，2. IHz)，7. 13 (d, 1H, J = 2. IHz)，5. 72 (br s, 1H) ,4. 51 (m, 1H)，4. 33 (m, 1H)，4. 15 (m, 1H)，3. 55 (m, 1H)，3. 43 (m, 1H)，3. 08 (m, 1H)，2. 81 (m, 1H)，2. 63 (m, 1H)，2. 12-2. 24 (m, 4H)， 1. 31-1. 38 (m，10H)。質(zhì)譜(ESI，m/z) =C25H29N5O4 的計(jì)算值464. 2 (M+H)，實(shí)測(cè)值464. 1。實(shí)例535-氰基-IH-咪唑-2-甲酸「2-環(huán)己烯基_4-(1_甲氧基-哌啶基)-苯 基1-酰胺三氟乙酸鹽 a)4-(l~甲氧基-1,2,3,6-四氫-吡啶基)-苯胺 將N-甲氧基哌啶酮(J. Org. Chem.，26，1867，(1961), 650mg, 5. OOmmol)于 THF(20mL)中的溶液冷卻至_78°C，在氬氣下用LDA(于環(huán)己烷、THF和乙苯中的1. 5M溶液， 4. 3mL，6. 4mmol)進(jìn)行處理。將所得混合物在相同溫度下攪拌30分鐘，并用N-苯基三氟 甲磺酰亞胺(2. 3g，6.4mmol)于THF(20mL)中的溶液處理。將反應(yīng)混合物再攪拌30分鐘 并讓其升溫至室溫。在室溫下30分鐘后，將反應(yīng)混合物真空濃縮，將獲得的殘余物溶解于 EtOAc (20mL)中并用冷水(2 X IOmL)洗滌。將EtOAc層干燥(Na2SO4)和濃縮，得到呈白色 泡沫的三氟甲磺酸1-甲氧基-1，2，3，6-四氫-吡啶-4-基酯(980mg，71%),其可直接用 于下一步驟。隨后按照實(shí)例35步驟(b)的Suzuki偶聯(lián)方法，用4_氨基苯基硼酸(219mg， 1. OOmmol)和三氟甲磺酸1_甲氧基_1，2，3，6_四氫-吡啶_4_基酯(如上制備， 261mg, 1. OOmmol)制備本標(biāo)題化合物。進(jìn)行硅膠色譜純化(20-50% EtOAc/己烷)，得到 60mg(29% )化合物。質(zhì)譜(ESI, m/z) =C12H16N2O 的計(jì)算值205. 1 (M+H)，實(shí)測(cè)值205. 2。b) 2-環(huán)己-1-烯基-4-(l-甲氧基-哌啶-4-基)-苯胺 將4-(1_甲氧基-1，2，3，6-四氫-吡啶_4_基)-苯胺(如前面的步驟中制備， 40. 8mg，0. 200mmol)于 MeOH(5mL)中的溶液于 20psi 下在 10% Pd/C(20. 4mg)上氫化 1 小 時(shí)。將溶液通過(guò)Celite墊過(guò)濾并濃縮，得到4-(1_甲氧基-哌啶-4-基)-苯胺(38mg， 92% )，其無(wú)需純化就直接用于下一步驟。向4-(1-甲氧基-哌啶-4-基)-苯胺(如上制備，42mg，0. 20mmol)于DCM(2mL) 中的溶液中加入NBS (36. 2mg,0. 20mmol)，將該反應(yīng)混合物在室溫下攪拌12小時(shí)。將反應(yīng) 混合物用DCM(IOmL)稀釋，用飽和NaHCO3水溶液(IOmL)和水(IOmL)洗滌。分離有機(jī)層、 干燥(Na2SO4)并真空濃縮，得到2-溴-4- (1-甲氧基-1，2，3，6-四氫-吡啶-4-基)-苯胺 (43mg，74. 5% )，其無(wú)需純化就用于下一步驟。隨后按照實(shí)例12步驟(d)的Suzuki偶聯(lián)方法，用環(huán)己-1-烯基硼酸(27. 9mg， 1. OOmmol)和2-溴-4- (1-甲氧基-1，2，3，6-四氫-吡啶_4_基)-苯胺(如上制備，44mg， 0. 15mmol)制備標(biāo)題化合物，將其在二氧化硅上進(jìn)行色譜純化(20-50% EtOAc/己烷)，得 到2-環(huán)己-1-烯基-4-(1-甲氧基-哌啶-4-基)-苯胺(33mg，74% )。質(zhì)譜(ESI，m/z) C18H26N2O 的計(jì)算值287. 2 (M+H)，實(shí)測(cè)值286. 8。
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c) 4-氰基-1- (2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-IH-咪唑_2_甲酸「2_環(huán)己M 基-4- (i-甲氧基-哌啶-4-基)_苯基]_酰胺 向4-氰基-1- (2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-IH-咪唑_2_甲酸[2_環(huán)己烯 基-4-(1-甲氧基-哌啶-4-基)-苯基]-酰胺(如前面的步驟中制備，31mg，0. 020mmol)于 DCM(0. 5mL)和EtOH(11 μ L)中的溶液中加入TFA (0. ImL)。將所得溶液在室溫下攪拌6小 時(shí)。將反應(yīng)混合物真空濃縮，將所得殘余物干燥1小時(shí)，懸浮于乙醚(IOmL)中并超聲處理5 分鐘。通過(guò)吸濾收集形成的固體，得到標(biāo)題化合物(17. 3mg,58% )。1H-NMR(DMSC) ；400MHz) δ 9. 70 (s，1Η)，8. 30 (s, 1H)，7. 83 (d, 1H, J = 8. 4Hz)，7. 14 (d, 1H, J = 8. 4Hz)，7. 05 (s, 1H)， 5. 71 (br s, 1H)，3. 30-3. 55 (m, 5H)，2. 41-2. 62 (m, 2H)，2. 12-2. 19 (m, 4H)，1. 60-1. 85 (m, 8H)。質(zhì)譜(ESI，m/z) =C23H27N5O2 的計(jì)算值406. 2 (M+H)，實(shí)測(cè)值406. 1。實(shí)例544-氰基-IH-咪唑-2-甲酸「6-(4,4_二甲基-環(huán)己-1-烯基)_1' ,2' ,3' ,4', 5'，6'-六氫-「2，4' 1聯(lián)吡啶-5-某1-酰胺三氟乙酸鹽 將4-氰基-l-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-1Η-咪唑-2-甲酸鉀鹽(如實(shí) 例 3 的步驟(d)中制備，35. 6mg，0. IOOmmol)、DIEA (0. 34 μ L，0. 20mmol)、2_ 環(huán)己-1-烯 基-4-(l-甲氧基-哌啶-4-基)-苯胺(如前面的步驟中制備，28.6mg，0. Immo 1)和 PyBroP(69. 9mg,0. 150mmol)于DCM(2mL)中的混合物在室溫下攪拌12小時(shí)。將反應(yīng)混合 物用DCM(IOmL)稀釋，用飽和NaHCO3水溶液(IOmL)和水(IOmL)洗滌。分離有機(jī)層、干燥 (Na2SO4)并真空濃縮。將產(chǎn)物在二氧化硅上進(jìn)行色譜純化(20-40% EtOAc/己烷)，得到標(biāo)題 化合物(26mg,48% )。質(zhì)譜(ESI，m/z) =C29H41N5O3Si 的計(jì)算值536. 3 (M+H)，實(shí)測(cè)值536. 2。d) 5-氰基-IH-咪唑-2-甲酸「2_環(huán)己烯基(1_甲氧基-哌啶基)-苯 基1-酰胺三氟乙酸鹽 a)5_ 硝某-3'，6' -二氫 H_「2，4' 1 聯(lián)吡啶 -甲酸叔丁酯 將202mg (0. 994mmol) 2_溴_5_硝基吡啶于4mL甲苯和2mL EtOH中的溶液用 338mg(l. 09mmol)4-三氟甲磺酰氧基-3,6- 二氫-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯(Synthesis, 993，(1991))和1.49mL(2. 981mmol)2M Na2CO3水溶液處理。將混合物通過(guò)超聲脫氣，置 于氬氣下，用80. 3mg(0. 00700mmol)Pd(PPh3)4處理，并加熱至80°C保持4小時(shí)。將混合 物用EtOAc稀釋并用水洗滌。將有機(jī)層用MgSO4干燥并進(jìn)行真空濃縮。將所得殘余物 在50-g Varian MegaBond Elut 二氧化硅柱上，用10-25 % EtOAc-己烷進(jìn)行色譜純化， 得到226mg(75% )呈淺黃色固體的標(biāo)題化合物質(zhì)譜(ESI，m/z) =C15H19N3O4的計(jì)算值 306. 1(M+H)，實(shí)測(cè)值305. 7。b)5_ 氨某-3' ,4' ,5' ,6'-四氫 H_「2，4' 1 聯(lián)吡啶 -甲酸叔丁酯 在室溫下，將226mg(0. 740mmol)5-硝基-3'，6' -二氫 _2 ‘ H_[2，4']聯(lián)批 啶-1'-甲酸叔丁酯(如前面的步驟中制備)于15mL MeOH中的溶液用IlOmglO% Pd/ C (Degussa E101-NE/W型，Aldrich, 50重量％的水)和1大氣壓H2處理18小時(shí)。將混合 物通過(guò)Celite過(guò)濾，將濾餅用MeOH洗滌。濃縮得到220mg(107% )呈無(wú)色玻璃狀固體的標(biāo) 題化合物。質(zhì)譜(ESI，m/z) =C15H23N3O2 的計(jì)算值278. 2 (M+H)，實(shí)測(cè)值278. 0。c)5_氨基-6-溴-3' ,4' ,5' ,6'-四氫 H-「2,4' 1 聯(lián)吡啶 -甲酸叔 丁酯 在室溫下，將220mg(0.793mmol)5-氨基-3'，4'，5'，6'-四氫-2' H-[2, 4']聯(lián)吡啶-1'-甲酸叔丁酯(如前面的步驟中制備)于IOmL CH2Cl2中的溶液用 134mg(0. 753mmol)N-溴琥珀酰亞胺處理20分鐘。將混合物用CH2Cl2稀釋，用飽和NaHCO3 水溶液洗滌。將有機(jī)層用MgSO4干燥并進(jìn)行真空濃縮。在50-g Varian MegaBond Elut 二 氧化硅柱上用10-35% EtOAc-己烷對(duì)殘余物進(jìn)行色譜純化，得到209mg(74% )呈無(wú)色玻 璃狀固體的標(biāo)題化合物。1H-NMR(CDCl3 ；400MHz) δ 6. 97 (d, 1H, J = 8. OHz) ,6. 91 (d, 1H, J =8. 0Hz)，4. 28-4. 15 (br s，2H)，4. 06-3. 90 (m, 2H)，2. 85-2. 75 (m, 2H)，2. 77-2. 68 (m, 1H)， 1. 92-1. 83 (m, 2H)，1. 68-1. 54 (m, 2H)，1. 47 (s,9H)。d) 5-氨基-6-(4,4-二甲基-環(huán)己-1-烯基)-3' ,4' ,5' ,6'-四氫 H-「2, 4' 1聯(lián)吡啶-1'-甲酸叔丁酯 將209mg(0. 587mmol)5-氨基-6-溴-3'，4'，5'，6'-四氫-2' H_[2，4'] 聯(lián)吡啶-Γ -甲酸叔丁酯(如前面的步驟中制備)于5mL甲苯和2. 5mL EtOH中的溶液 用 99. 3mg (0. 645mmol)4,4- 二環(huán)己-1-烯基硼酸和 2. 34mL (4. 69mmol)2M Na2CO3 水溶液處 理。將混合物通過(guò)超聲脫氣，置于氬氣下，用47. 4mg (0. 0410mmol) Pd (PPh3) 4處理，并加熱至 80°C16小時(shí)。將混合物用EtOAc稀釋并用水洗滌。將水層用另外的EtOAc萃取，將合并的 有機(jī)層用MgSO4干燥并真空濃縮。在50-g Varian MegaBond Elut 二氧化硅柱上用25% EtOAc-己烷對(duì)殘余物進(jìn)行色譜純化，得到150mg(66% )呈白色泡沫狀固體的標(biāo)題化合物。 質(zhì)譜(ESI，m/z) =C23H35N3O2 的計(jì)算值386. 3 (M+H)，實(shí)測(cè)值386. 3。e) 5-丨「4_氰基-1-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-IH-咪唑-2-羰基1 -氨 基}-6-(4,4_ 二甲基-環(huán)己-1-烯基)-3' ,4' ,5' ,6'-四氫-2' H_「2,4' 1 聯(lián)吡 啶-1'-甲酸叔丁酯 在室溫下，將215mg(0. 339mmol) 5-{[4-氰基-1_(2_三甲基硅烷基-乙氧基甲 基)-1Η-咪唑-2-羰基]-氨基}-6-(4，4_ 二甲基-環(huán)己-1-烯基)-3'，4'，5'，6'-四 氫-2' H-[2，4']聯(lián)吡啶-Γ -甲酸叔丁酯(如前面的步驟中制備)于IOmLCH2Cl2 中的溶液用三滴MeOH和3mL TFA處理4小時(shí)。加入MeOH(IOmL)并真空蒸發(fā)溶劑。在 50-g Varian MegaBond Elut 二氧化硅柱上用10 % MeOH-CH2Cl2對(duì)殘余物進(jìn)行色譜純化， 得到 2IOmg(97% )呈白色固體的標(biāo)題化合物。1H-NMR(CD3C)D ；400MHz) δ8. 59(d，lH，J =8. 4Hz)，8. 04 (s，1H)，7. 28 (d, 1H, J = 8. 4Hz)，6. 02-5. 93 (m, 1H)，3. 58-3. 48 (m, 2H)， 3.32-3.03(m，3H)，2.54-2.42(m，2H)，2.23-2.02(m，6H)，l. ll(s，6H)。質(zhì)譜(ESI, m/z) C23H28N6O 的計(jì)算值405. 2 (M+H)，實(shí)測(cè)值405. 2。實(shí)例554-氰基-IH-咪唑-2-甲酸「Γ -(2-二甲氨基-乙酰基)-6-(4,4-二甲基-環(huán) P1-I-烯某)-1' ’ 2'，3'，4'，5'，6'-六氫-「2，4' 1聯(lián)吡啶-5-某1-酰胺三氟乙酸 在室溫下，將150mg(0. 389mmol)5-氨基-6-(4，4-二甲基-環(huán)己-1-烯基)-3'， 4'，5'，6'-四氫-2' H-[2，4']聯(lián)吡啶-甲酸叔丁酯(如前面的步驟中制備) 于15mL CH2Cl2中的溶液用131mg (0. 428mmol) 4-氰基-1-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲 基)-IH-咪唑-2-甲酸鉀鹽(如實(shí)例3的步驟(b)中制備)、272mg(0. 584mmol)PyBroP和 203 μ L(l. 17mmol)DIEA處理3小時(shí)。將混合物用CH2Cl2稀釋，用飽和NaHCO3水溶液洗滌。 將有機(jī)層用MgSO4干燥并進(jìn)行真空濃縮。在50-g Varian MegaBond Elut 二氧化硅柱上用 50% EtOAc-己烷對(duì)殘余物進(jìn)行色譜純化，得到215mg(87% )呈白色固體的標(biāo)題化合物。質(zhì) 譜(ESI, m/z) =C34H50N6O4Si 的計(jì)算值:635· 4_)，實(shí)測(cè)值635. 3。f)4_ 氰基-IH-咪唑-2-甲酸「6-(4,4_ 二甲基-環(huán)己-1-烯基)-Γ ,2' ,3', 4'，5'，6'-六氫-「2，4' 1聯(lián)吡啶-5-某1-酰胺三氟乙酸鹽 在室溫下，將 70. 0mg(0. 135mmol)4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸[6-(4，4-二甲 基-環(huán)己-1-烯基)-1'，2'，3'，4'，5'，6'-六氫-[2，4']聯(lián)吡啶_5_基]-酰胺 (如實(shí)例54的步驟(f)中制備)于IOmL CH2Cl2中的溶液用32. 7mg(0. 162mmol)甲磺酸 2-甲磺?；?乙酯(如實(shí)例40的步驟(a)中制備)和70. 5μ L(0. 405mmol)DIEA處理6 小時(shí)。將混合物用CH2Cl2稀釋并用水洗滌。將有機(jī)層用MgSO4干燥并進(jìn)行真空濃縮。將 殘余物通過(guò)RP-HPLC (C18)純化(用20-60% CH3CN于0. 1 % TFA/H20中的溶液洗脫30分 鐘)，得到 48mg(85% )呈白色固體的標(biāo)題化合物。1H-NMR(CD3C)D ；400MHz) δ 8. 65 (d, 1H， J = 8. 4Hz), 8. 05 (s, 1H), 7. 34 (d, 1Η, J = 8. 4Hz)，6. 05-5. 98 (m，1Η)，3. 85-3. 66 (m，6Η)， 在室溫下，將20. 9mg(0. 203mmol)N, N- 二甲基甘氨酸于4mL CH2Cl2中的懸浮液用 49. 8mg(0. 197mmol)雙(2-氧代-3-噁唑烷基)次磷酰氯(BOP-Cl)和 75 μ L(0. 54mmol) Et3N處理1小時(shí)。隨后將混合物在室溫下用70. Omg(0. 135mmol)4-氰基-IH-咪唑-2-甲 酸[6-(4，4_ 二甲基-環(huán)己-1-烯基)-1'，2'，3'，4'，5'，6'-六氫-[2，4']聯(lián) 吡啶-5-基]-酰胺三氟乙酸鹽(如實(shí)例54的步驟(f)中制備)處理18小時(shí)。將混 合物用CH2Cl2稀釋并用水洗滌。將有機(jī)層用MgSO4干燥并進(jìn)行真空濃縮。將殘余物通 過(guò)RP-HPLC(C 18)純化(用10-80 % CH3CN于0. 1 % TFA/H20中的溶液洗脫30分鐘)，得 到 34. 9mg(53% )呈白色固體的標(biāo)題化合物。1H-NMR(CD3C)D ；400MHz) δ 8. 38 (d, 1H, J = 8. 4Hz)，8. 05 (s，1H)，7. 33 (d, 1H, J = 8. 4Hz)，6. 05-5. 98 (m, 1H)，4. 68 (d, 1H, J = 15. 2Hz)， 3. 82 (d, 1H, J = 15. 2Hz)，3. 16-3. 05 (m, 1H)，3. 01-2. 94 (m, 6H)，2. 52-2. 40 (m, 2H)，2. 39 (s, 6H), 2. 17-2. 10 (m, 2H), 2. 09-1. 87 (m, 2H)，1. 67-1. 59 (m, 2H)，1. 12(s，6H)。質(zhì)譜(ESI，m/z) C27H35N7O2 的計(jì)算值490. 3 (M+H)，實(shí)測(cè)值490. 4。實(shí)例564-氰基-IH-咪唑-2-甲酸「6-(4,4_ 二甲基-環(huán)己烯基)-Γ ~(2~甲磺酰 某-乙某)-1' ’ 2’，3' ,4' ,5' ,6'-六氫_「2，4' 1聯(lián)吡啶-5-某酰胺三氟乙酸鹽
1233. 29-3. 21 (m, 2H)，3. 20-3. 01 (m, 1H)，3. 14 (s,3H)，2. 53-2. 45 (m, 2H)，2. 30-2. 15 (m, 4H)， 2. 15-2. 10(m，2H)，1. 62(t，2H，J = 6. 4Hz)，1. ll(s，6H)。質(zhì)譜(ESI, m/z) =C26H34N6O3S 的計(jì) 算值511. 2(M+H)，實(shí)測(cè)值511. 3。實(shí)例575-氰基-IH-咪唑-2-甲酸{4_「(2_氨基甲基-丙?；?-哌啶基1 環(huán) 己-1-烯基-苯基丨-酰胺三氟乙酸鹽 a) {2-Γ4-(4_丨「4_氰基(2_三甲基硅烷基-乙氧基甲基)_1Η_咪唑_2_羰 基1 -氨基丨-3-環(huán)己-1-烯基-苯基)-哌啶-1-基1 -1,1- 二甲基-2-氧代-乙基丨-氨 基甲酸叔丁酯 向4- (4- {[4-氰基-1- (2_三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-IH-咪唑_2_羰基]-氨 基} -3-環(huán)己-1-烯基-苯基)-哌啶-1-甲酸叔丁酯(231mg, 0. 380mmol)(如實(shí)例14的步 驟(a)中制備)于2. 5mL DCM和0. 4mL EtOH中的溶液中加入700 μ L TFA,并將所得溶液在 25°C下攪拌3小時(shí)。將反應(yīng)混合物用4mL EtOH稀釋，然后濃縮得到5-氰基-1-(2-三甲基 硅烷基_乙氧基甲基)-IH-咪唑-2-甲酸(2-環(huán)己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯基)-酰胺 三氟乙酸鹽與原料的大約2 1混合物(通過(guò)1H-NMR和LC/MS測(cè)得)，其無(wú)需進(jìn)一步純化 就用于下一步驟。將該混合物溶于3mL DCM中加入到2-叔丁氧基羰基氨基-2-甲基-丙酸 (53mg, 0. 70mmol)、DIEA (122 μ L, 0. 700mmol)和 PyBroP (144mg, 0. 300mmol)于 3mL DCM 中的 溶液中，在25°C下攪拌反應(yīng)過(guò)夜。將反應(yīng)混合物用EtOAc (25mL)稀釋，用飽和NaHCO3水溶液 (lX25mL)和鹽水(25mL)洗滌，并將有機(jī)層用Na2SO4干燥然后濃縮。通過(guò)制備型TLC(50% EtOAc-己烷)純化殘余物，得到40mg(15% )呈白色固體的標(biāo)題化合物。質(zhì)譜(ESI，m/z) C37H55N6O5Si 的計(jì)算值691· 3(M+H)，實(shí)測(cè)值691. 1。b)5~氰基-IH-咪唑-2-甲酸{4_「1-(2_氨基_2_甲基-丙?；?-哌 啶-4-某1 -2-環(huán)己-1-烯某-苯某丨-酰胺三氟乙酸鹽
向{2-[4-(4-{[4_氰基-l-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-1Η-咪唑-2-羰 基]-氨基}-3_環(huán)己-1-烯基-苯基)_哌啶-1-基]-1，1-二甲基-2-氧代-乙基}-氨 基甲酸叔丁酯(40mg，0. 050mmol)于2mL DCM和20 μ L EtOH中的溶液中加入1. 5mL TFA。 將溶液在25°C下攪拌3小時(shí)，用2mL EtOH稀釋并真空濃縮。在乙醚中研磨殘余物，得 IlJ 8. 4mg(29 % )呈白色固體的標(biāo)題化合物。1H-WR(CD3ODdOOMHz) 5 8. 10(d, 1H, J = 8. 4Hz)，8. 00 (s，1H)，7. 16 (d, 1H, J = 8. 4Hz)，7. 07 (s, 1H)，5. 79 (s, 1H)，4. 55-4. 48 (m, 1H)， 3. 30 (s，6H)，2. 89-2. 87 (m, 2H)，2. 40-2. 25 (m, 4H)，1. 96-1. 93 (m, 2H)，1. 86-1. 83 (m, 6H)， 1. 64-1. 61 (m，2H)。質(zhì)譜(ESI, m/z) =C26H33N6O2 的計(jì)算值461. 2 (M+H)，實(shí)測(cè)值461. 3。實(shí)例585-氰基-IH-咪唑-2-甲酸「6-環(huán)己-1-烯基-1' _(2_甲磺?；?乙基)‘, 2'，3'，4'，5'，6'-六氫-「2，4' 1 聯(lián)吡啶-5-某 酰胺 向5-氨基-6-溴-3' ,4' ,5' ,6'-四氫 H-[2,4']聯(lián)吡啶-1'-甲酸 叔丁酯(331mg，0. 93mmol)(如實(shí)例54的步驟(c)中制備)和環(huán)己烯-I-基硼酸(141mg， 1. llmmol)于 5mL EtOH、IOmL 甲苯和 5mL 2M Na2CO3 中的混合物中加入 Pd(PPh3)4(107mg， 0. 0930mmol)，并在80°C下加熱16小時(shí)。將反應(yīng)混合物用IOOmL乙醚和IOOmL鹽水稀釋， 分離各層。將有機(jī)層干燥(Na2SO4)并真空濃縮。通過(guò)柱色譜法(硅膠，30-60%乙醚-己 烷)純化殘余物，得到248mg(74%)呈淺褐色油狀的標(biāo)題化合物。LC-MS(ESI，m/z) C21H32N3O2 (M+H)的計(jì)算值358. 2，實(shí)測(cè)值358. 1。b) 5-丨「4_氰基-1-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-IH-咪唑-2-羰基1 -氨 某1-6-環(huán)己-1_烯某-3' ,4' ,5' ,6'-四氫-2' H_「2，4' 1聯(lián)吡啶-1 ‘-甲酸叔丁 向4-氰基-1-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-IH-咪唑-2-甲酸鉀鹽(296mg，
0.970mmol)(如實(shí)例3的步驟(d)中制備)于8mL DCM中的溶液中加入DIEA(291 μ L，
1.72mmol)和 PyBroP (512mg，1. lOmmol)，在 25°C下攪拌反應(yīng) 15 分鐘。加入 5-氨基-6-環(huán) 己-1-烯基-3'，4'，5'，6'-四氫-2' H-[2，4']聯(lián)吡啶 -甲酸叔丁酯(233mg， 0. 65mmol)(如前面的步驟中制備)于4mLDCM中的溶液，并在25°C下攪拌反應(yīng)過(guò)夜。將反應(yīng) 混合物用EtOAc (25mL)稀釋，用NaHCO3 (1 X 25mL)和鹽水(25mL)洗滌，并將有機(jī)層用Na2SO4 干燥然后濃縮。通過(guò)快速色譜法(硅膠，5% MeOH-CHCl3)純化殘余物，得到167mg(40% ) 呈白色固體的標(biāo)題化合物。質(zhì)譜(ESI，m/z) =C32H46N6O4Si的計(jì)算值:607· 3_)，實(shí)測(cè)值 607. 3。c) 5-氰基-IH-咪唑-2-甲酸(6-環(huán)己-1-烯基-1' ,2' ,3' ,4'，5' ,6'-六 M~f2,4' 1聯(lián)吡啶-5-某)-酰胺三氟乙酸鹽 本標(biāo)題化合物是采用類似于實(shí)例14的步驟(b)的方法，從5-{[4-氰基-1-(2-三 甲基硅烷基-乙氧基甲基)-1Η-咪唑-2-羰基]-氨基}-6_環(huán)己-1-烯基-3' ,4'， 5'，6'-四氫-2' H-[2，4']聯(lián)吡啶-Γ -甲酸叔丁酯(167mg，0. 27mmol)制備，得至IJ 57mg(43% )呈白色固體的標(biāo)題化合物。LC-MS (ESI，m/z) =C21H24N6O 的計(jì)算值377. 2 (M+H)， 實(shí)測(cè)值377. 2。d) 5-氰基-IH-咪唑-2-甲酸「6-環(huán)己-1-烯基-1' _ (2_甲磺?；?乙基)‘, 2'，3'，4'，5'，6'-六氫-「2，4' 1 聯(lián)吡啶-5-某 酰胺向5-氰基-IH-咪唑-2-甲酸(6-環(huán)己-1-烯基-1'，2' ,3' ,4' ,5' ,6'-六 氫-[2，4']聯(lián)吡啶-5-基)-酰胺三氟乙酸鹽(57mg，0. llmmol)于5mL DCM中的漿液中 加入0記六(50.4“1^，0.290讓01)，然后加入30.511^(0. 150mmol)甲磺酸2-甲磺?；?乙 酯(如實(shí)例40的步驟(a)中制備)。讓反應(yīng)攪拌過(guò)夜，用20mL DCM稀釋，用飽和NaHCO3 水溶液(lX20mL)洗滌并用Na2SO4干燥。通過(guò)制備型TLC (硅膠，40 % EtOAc-己烷)純 化，得到22. 3mg(40% )呈白色固體的標(biāo)題化合物。1H-WR(DMSOdOOMHz) δ 10. 02 (s, 1H) ,8. 24 (s, 1H) ,8. ll(d，lH，J = 8. 4Hz)，7. 18 (d, 1H, J = 8. 4Hz)，5. 96 (s，1H)，3. 04 (s， 3H)，3· 02-2. 99(m，3H)，2· 73(t，2H，J = 2. 7Ηζ)，2· 39-2. 37 (m，2Η)，2. 11-2. 05(m，4H)，1. 85-1. 64 (m，10H)。質(zhì)譜(ESI，m/z) =C24H31N6O3S 的計(jì)算值483· 2 (M+H)，實(shí)測(cè)值483. 3。實(shí)例59下面描述了用于合成實(shí)例3中所述中間體的替代方法。4-氰基-l-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-1Η-咪唑-2-甲酸鉀鹽 a) IH-咪唑土甲腈將配有機(jī)械攪拌器、溫度傳感器、冷凝器和帶氮?dú)馊肟诘募恿下┒返?2L四頸圓 底燒瓶裝入 IH-咪唑-4-甲醛(Aldrich,l. IOkg, 11. 5mol)和吡啶(3. 0L, 3. Omol) 將反 應(yīng)燒瓶用冰浴冷卻至8°C，緩慢分批加入鹽酸羥胺(871g，12.5mol)以保持內(nèi)部溫度低于 30°C。將反應(yīng)物冷卻至環(huán)境溫度并在環(huán)境溫度下攪拌2小時(shí)。將所得的粘稠的黃色溶液用 加熱套加熱至80°C，在200分鐘里滴加乙酸酐(2. 04L, 21. 6mol)，以保持在加入期間溫度低 于110°C。將反應(yīng)混合物在100°C下加熱30分鐘，之后讓其冷卻至環(huán)境溫度，然后在冰浴中 進(jìn)一步冷卻。通過(guò)以使得內(nèi)部溫度保持低于30°C的速率加入25wt% NaOH(5. 5L)，將pH調(diào) 節(jié)至8.0(pH計(jì))。然后將反應(yīng)混合物轉(zhuǎn)移至22L分液漏斗并用乙酸乙酯(6. 0L)萃取。將 合并的有機(jī)層用鹽水(2X4. 0L)洗滌，用MgSO4干燥，過(guò)濾，并在35°C下減壓濃縮至干燥，得 到呈黃色半固體的粗產(chǎn)物。將所得半固體物質(zhì)懸浮于甲苯(3. 0L)中并攪拌1小時(shí)，之后將 其過(guò)濾得到淺黃色固體，將其再懸浮于甲苯(3. 0L)中并攪拌1小時(shí)。將所得漿液過(guò)濾，將 濾餅用甲苯(2X500mL)洗滌，得到呈淺黃色固體的標(biāo)題化合物(870g，82%)。1H和13C核 磁共振譜與確定的結(jié)構(gòu)一致。b)l-(2_三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-1Η-咪唑-4-甲腈和3_(2_三甲基硅烷 基_乙氧基甲基)-3H-咪唑-4-甲腈
0988] 將配有機(jī)械攪拌器、溫度傳感器和帶氮?dú)馊肟诘募恿下┒返?2L四頸圓底燒瓶裝 入IH-咪唑-4-甲腈(830g，8. 91mol，如前面的步驟中制備)、碳酸鉀(2. 47kg，17. 8mol)和 丙酮(6.0L)。開(kāi)始攪動(dòng)并將混合物用冰浴冷卻至10°C。通過(guò)加料漏斗在210分鐘里加入 SEMCl (1. 50kg, 9. OOmol)，以保持內(nèi)部溫度低于15°C。隨后讓反應(yīng)物升溫至環(huán)境溫度并在環(huán) 境溫度下攪拌過(guò)夜(20小時(shí))。然后將反應(yīng)混合物在冰浴中冷卻至10°C，通過(guò)在30分鐘里 緩慢加入水(8. 0L)猝滅，以保持內(nèi)部溫度低于30°C。將所得混合物轉(zhuǎn)移至22L分液漏斗， 用乙酸乙酯(2X7. 0L)萃取。將合并的有機(jī)相在35°C下減壓濃縮，得到呈深棕色油狀的粗 產(chǎn)物，將該粗產(chǎn)物通過(guò)硅膠柱(16. 5 X 20cm，2. 4kg硅膠)用2 1庚烷/乙酸乙酯(15L)作為洗脫液進(jìn)行純化。將含有產(chǎn)物的級(jí)分合并，在35°C下減壓濃縮，得到呈淺褐色油狀的 標(biāo)題化合物的混合物[1785g，90%)。1H核磁共振譜與確定的結(jié)構(gòu)一致，且表明存在比率為 64 36的區(qū)域異構(gòu)體。c) 2-溴-1-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-IH-咪唑-4-甲腈 將配有機(jī)械攪拌器、溫度傳感器和帶氮?dú)馊肟诘睦淠鞯?2L四頸圓底燒瓶裝入 1-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-IH-咪唑-4-甲腈和3- (2-三甲基硅烷基-乙氧基甲 基)-3H-咪唑-4-甲腈(600g，2. 69mol，如前面的步驟中制備)和四氯化碳(1. 8L)的混合 物。開(kāi)始攪動(dòng)并將混合物加熱至60°C。此時(shí)，將N-溴琥珀酰亞胺(502g，2.82mol)在30分 鐘里分幾批加入，這導(dǎo)致放熱達(dá)到74°C。讓反應(yīng)冷卻至60°C并在60°C下進(jìn)一步攪拌1小 時(shí)。讓反應(yīng)緩慢冷卻至環(huán)境溫度，將所得漿液過(guò)濾并將濾液用飽和NaHCO3溶液(4. 0L)洗 滌。使有機(jī)相通過(guò)硅膠柱(8\15_，硅膠60(^)，用2 1的庚烷/乙酸乙酯(6. 0L)作為 洗脫液。將含有產(chǎn)物的級(jí)分(根據(jù)TLC分析)合并，減壓濃縮得到晶狀淺黃色固體，然后將 其濾出，用庚烷(500mL)洗滌，得到呈晶狀白色固體的標(biāo)題化合物[593g，73%)。1H和13C 核磁共振譜與確定的結(jié)構(gòu)一致，且顯示沒(méi)有微量區(qū)域異構(gòu)體的跡象。d)4_氰基-l-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-1Η-咪唑-2-甲酸乙酯 將配有機(jī)械攪拌器、溫度傳感器和帶氮?dú)馊肟诘募恿下┒返?2L四頸圓底燒瓶 裝入2-溴-l-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-1Η-咪唑-4-甲腈(390g，1.29mol，如前 面的步驟中制備)和無(wú)水四氫呋喃(4.0L)。開(kāi)始攪動(dòng)，并用干冰/丙酮浴將反應(yīng)混合物 冷卻至_50°C。通過(guò)加料漏斗在30分鐘里加入異丙基氯化鎂(2. OM的THF溶液，760mL， 1. 52mol)，以保持內(nèi)部溫度低于-40°C。將反應(yīng)物在_43°C下再攪拌30分鐘，之后將其冷卻 至-78V。通過(guò)加料漏斗在10分鐘里加入氯甲酸乙酯(210mL，2. 20mol)，以保持內(nèi)部溫度 低于-60°C。在-70°C下再攪拌反應(yīng)40分鐘，到時(shí)間時(shí)移除干冰/丙酮浴，并讓反應(yīng)混合物 在1. 5小時(shí)里升溫至環(huán)境溫度。將反應(yīng)混合物在冰浴中冷卻至0°C，并通過(guò)以使得內(nèi)部溫 度保持低于10°C的速率緩慢加入飽和氯化銨溶液(1.8L)進(jìn)行猝滅。將反應(yīng)混合物轉(zhuǎn)移至 12L分液漏斗，用乙酸乙酯(4. 0L)稀釋，并分離各層。將有機(jī)層用鹽水(2X2. 0L)洗滌，并 在35°C下減壓濃縮得到褐色油狀物。將粗油狀物溶解于二氯甲烷(300mL)中，通過(guò)色譜法 (15 X 22cm，1.5kg硅膠，10 1至4 1的庚烷/乙酸乙酯)純化，得到黃色油狀物，將該 黃色油狀物溶解于EtOAc (IOOmL)中，用庚烷(2. 0L)稀釋并在冰箱中保存5小時(shí)。將所得 漿液過(guò)濾，得到呈晶狀白色固體的標(biāo)題化合物(141g，37%)。1H和13C核磁共振譜與確定的 結(jié)構(gòu)一致。e)4_氰基-l-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-1Η-咪唑-2-甲酸鉀鹽
128 將配有機(jī)械攪拌器、溫度傳感器和帶氮?dú)馊肟诘募恿下┒返?-L三頸圓底燒瓶裝 入5[400g，1.35mol)和乙醇(4.0L)。開(kāi)始攪動(dòng)，并在所有固體都溶解后施加水浴。通過(guò)加 料漏斗在15分鐘里加入6N KOH(214. OmL, 1. 29mol)溶液，以保持內(nèi)部溫度低于25°C，在室 溫下攪拌反應(yīng)5分鐘。隨后將溶液在20°C下減壓濃縮至干燥，得到白色固體物質(zhì)。將所得 固體物質(zhì)懸浮于甲基叔丁基醚(MTBE，4.0L)中并攪拌30分鐘，之后將所得漿液過(guò)濾，并將 濾餅用MTBE(1. 0L)洗滌，得到呈白色固體的標(biāo)題化合物，將其在環(huán)境溫度下進(jìn)一步真空干 燥4天(366g，89%)。1H核磁共振、13C核磁共振和質(zhì)譜與確定的結(jié)構(gòu)一致。C11H16KN3O3Si的 計(jì)算值-.C A3. 25 ；H, 5. 28 ；N, 13. 76。實(shí)測(cè)值=C, 42. 77 ；H, 5. 15 ；N, 13. 37?？?費(fèi)休法測(cè) 得1· 3% H2O0實(shí)驗(yàn)材料和方法。本文圖.IA中示出的實(shí)例38&，4-氰基4-[2-(1-環(huán)己烯-1-基)-4-[1-[(二甲氨 基)乙?；鵠-4-哌啶基]苯基]-IH-咪唑-2-甲酰胺一鹽酸鹽(本文中稱為“JNJ-141”) 是如本文所述制備。激酶測(cè)定。如Schalk-Hihi C 等人，J Biol Chem 2007 ;208 :40854093 中所述，從桿狀病毒系 統(tǒng)表達(dá)和純化 CSF-IR (CSF-1R 538-972)和 CSF-1R 樣酪氨酸激酶 3 (FLT3 [FLT3 571-993]) 的完整胞質(zhì)區(qū)(涵括酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域)。干細(xì)胞因子受體酪氨酸激酶(KIT)購(gòu)自 ProQinase (德國(guó)漢堡)。AXL 受體酪氨酸激酶(AXL)購(gòu)自 Upstate (Lake Placid, NY)。神 經(jīng)營(yíng)養(yǎng)蛋白受體酪氨酸激酶 A(TRKA)購(gòu)自 Invitrogen (Carlsbad，CA)。CSF-IR 555-568 肽(SYEGNSYTFIDPTQ)由 AnaSpec (San Jose, CA)合成和純化。CSF-1R 用測(cè)量 CSF-1R 555-568肽在Y561處的CSF-IR磷酸化的熒光偏振競(jìng)爭(zhēng)性免疫測(cè)定法進(jìn)行測(cè)定。反應(yīng)混 合物(IOyL)含有 IOOmM HEPES pH7.5、lmM DTT、0. 01 % 吐溫-20 (ν/ν)、2% DMS0、308 μ M CSF-IR 555-568 肽、ImM ATP、5mM MgCl2 和 0. 7nM CSF-IR0 反應(yīng)用 ATP 引發(fā)，在室溫下溫育 80分鐘，通過(guò)添加5. 4mM EDTA猝滅。將10 μ L熒光偏振緩沖液/示蹤物/磷酸-Y抗體混 合物(酪氨酸激酶檢測(cè)試劑盒，Green Ρ2837, Invitrogen,Madison WI)加入到該經(jīng)猝滅的 反應(yīng)物中，在 30 分鐘后用 Analyst reader (Molecular Devices)在 485/530nm 的激發(fā) / 發(fā) 射下測(cè)量熒光偏振。如對(duì)CSF-IR所述，用熒光偏振競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)定FLT3、KIT、TRKA和AXL，不 同的是使用聚Glu4Tyr (Sigma，St Louis, MO)作為通用底物。在使用之前，將AXL通過(guò)與 ImM ATPUOmM MgCl2UOOmM HEPESpH 7. 5—起在室溫下溫育60分鐘來(lái)進(jìn)行磷酸化，并將其 在-70°C下保存。FLT3 反應(yīng)含有 IOnM FLT3U13yM ATP 和 20 μ g/ml 聚 Glu4Tyr，反應(yīng) 25 分鐘。KIT 反應(yīng)含有 InM KIT、50 μ M ATP 和 100 μ g/ml 聚 Glu4Tyr，反應(yīng) 30 分鐘。TRKA 反 應(yīng)含有 5nM TRKA、20yM ATP 和 20 μ g/ml 聚 Glu4Tyr，反應(yīng) 30 分鐘。AXL 反應(yīng)含有 0. 5nM AXL,20 μ M ATP 和 25 μ g/ml 聚 Glu4Tyr,反應(yīng) 11 分鐘。FLT3、KIT、TRKA 和 AXL 的 ATP Km 值 (米氏常數(shù))分別為5(^] 、44“]\1、29“]\1和 16 μ M。用 InvitrogenSelectScreen 激酶譜 型分析服務(wù)(Kinase Profiling Service)測(cè)定60種激酶在1和0. 1 μ M下的LCK IC50和
129抑制。用 Millipore 激酶譜型分析服務(wù)(Millipore KinaseProfiler Assay Service)測(cè) 定另外的51種激酶。細(xì)胞測(cè)定如先前在 Baumann CA 等人，J Biochem Biophys Methods2004 ;60 :69_79 中所 述，用經(jīng)轉(zhuǎn)染而過(guò)度表達(dá)野生型CSF-IR的HEK293細(xì)胞及ELISA和免疫印跡分析，測(cè)量對(duì) CSF-I-誘導(dǎo)的CSF-IR磷酸化的抑制。采用類似的方法，測(cè)量對(duì)經(jīng)轉(zhuǎn)染而過(guò)度表達(dá)野生型 FLT3的Baf3細(xì)胞中FLT3配體誘導(dǎo)的FLT3磷酸化的抑制。將經(jīng)轉(zhuǎn)染而過(guò)度表達(dá)野生型FLT3 的Baf3細(xì)胞用于研究對(duì)細(xì)胞中FLT3激酶活性的抑制。(Yee，KffH,等人，Blood, 2002年10 月15日，第100卷，第8期，第2941-2949頁(yè))。在用FLT3-L刺激后，對(duì)FLT3的磷酸化狀態(tài) 進(jìn)行評(píng)估。將細(xì)胞與梯度濃度的JNJ-141或DMSO溶媒溫育1小時(shí)后，將其接種于具有0. 5% 血清和0. 01ng/mL IL-3的RPMI 1640中16小時(shí)。將細(xì)胞在37°C下用100ng/mL FLT3-L處 理10分鐘并立即溶解。用夾心型ELISA對(duì)磷酸化的FLT3進(jìn)行定量。將澄清的裂解物轉(zhuǎn)移 至包被有50ng/孔FLT3抗體的微量滴定板(Santa Cruz Biotechnology Corp,Santa Cruz, CA ；sc-480)并用 SeaBlock試劑(Pierce Chemicals,Rockford, IL)封閉。將裂解物在 4°C 溫育2小時(shí)。將洗滌過(guò)的板在室溫下與HRP綴合的磷酸酪氨酸抗體(克隆4G10，Upstate Biotechnology)的1 8000稀釋液溫育1小時(shí)。在最后的洗滌后，在Berthold Orion微
孔板光度計(jì)上按照生產(chǎn)商的說(shuō)明書完成采用SuperSignal Pico試劑(Pierce Chemical, Rockford, IL)進(jìn)行的信號(hào)檢測(cè)。抑制和IC5tl數(shù)據(jù)分析是用GraphPad prism 軟件，以多參 數(shù)、S型劑量-響應(yīng)(可變斜率)方程采用非線性回歸擬合來(lái)進(jìn)行。GAS6-誘導(dǎo)的AXL磷酸化是用經(jīng)轉(zhuǎn)染而過(guò)度表達(dá)AXL的HEK293細(xì)胞來(lái)測(cè)量。將 HEK293E細(xì)胞工程改造成能表達(dá)全長(zhǎng)Axl，隨后用于測(cè)定JNJ-141對(duì)Gas6介導(dǎo)的Axl磷酸 化的抑制。將附加型表達(dá)載體pCEP4-His6用于在HEK293E細(xì)胞中過(guò)度表達(dá)全長(zhǎng)人Axl。 將人GAS6從由GAS6/HEK293E細(xì)胞系產(chǎn)生的調(diào)理培養(yǎng)基純化(Fisher Pff等人，Biochem. J. (2005)387,727-735)。將 Axl/HEK293E 細(xì)胞用 JNJ-141 預(yù)處理 40 分鐘，然后用 200ng/ml 人GAS6刺激10分鐘。將細(xì)胞用RIPA緩沖液(Santa Cruz sc-24948)溶解，將Axl用人Axl 抗體(Santa Cruz，sc-1096)進(jìn)行免疫沉淀過(guò)夜，收集至A/G瓊脂糖(Santa Cruz sc-2003) 上。將免疫沉淀物在4-12% NuPAGE凝膠上分離并轉(zhuǎn)移至硝化纖維。用HRP綴合的磷酸酪 氨酸抗體(克隆4G10，Upstate)或人Axl抗體探測(cè)洗滌過(guò)的免疫沉淀物的復(fù)制印跡，以確 認(rèn)總Axl的上樣相等。用SuperSignai8West化學(xué)發(fā)光底物檢測(cè)蛋白質(zhì)。用UVP生物成像 系統(tǒng)和LabWorks軟件，通過(guò)掃描測(cè)光密度法對(duì)χ光膠片進(jìn)行定量。抑制和IC5tl數(shù)據(jù)分析是 用GraphPad Prism 軟件，以多參數(shù)、S型劑量_響應(yīng)(可變斜率)方程采用非線性回歸擬 合來(lái)進(jìn)行。使用有關(guān)CSF-I驅(qū)動(dòng)的小鼠巨噬細(xì)胞增殖和CSF-I-誘導(dǎo)的人單核細(xì)胞MCP-I 產(chǎn)生的測(cè)定法，來(lái)檢驗(yàn)對(duì)CSF-IR的功能性抑制。使用得自StemCell Technologies的 RosetteSep 人單核細(xì)胞富集混合物(目錄號(hào)15068)，通過(guò)負(fù)選擇從人血液分離單核細(xì) 胞，將單核細(xì)胞在圓底96孔聚丙烯板(Corning 3790)中培養(yǎng)(2 X IO5/孔)30分鐘，該板 具有含10%熱滅活的FBS和梯度濃度的JNJ-141的RMPI 1640。然后用lOOng/ml重組人 CSF-I (R&D Systems)刺激細(xì)胞16小時(shí)，用特異性ELISA (R&DSystems)檢測(cè)培養(yǎng)上清液的MCP-1。小鼠巨噬細(xì)胞衍生自從 B6C3F1 小鼠(Harlan Industries, Indianapolis, IN)的 股骨沖洗出的骨髓。將懸浮(IXlO6個(gè)細(xì)胞/ml)于培養(yǎng)基(含有10%FBS、2mM谷氨酰胺、 100IU/ml 青霉素和 100ug/ml 鏈霉素以及 50ng/ml 重組小鼠 CSF-I (R&D Systems)的 EMEM) 中的骨髓細(xì)胞在37°C和5% CO2下于組織培養(yǎng)瓶(Falcon)中培養(yǎng)過(guò)夜。將未貼壁的細(xì)胞重 新接種到IOOmm細(xì)菌學(xué)培養(yǎng)皿(Falcon 351029) (10ml/培養(yǎng)皿)中，在三天和六天后更換 培養(yǎng)基。在第七天，將骨髓衍生的巨噬細(xì)胞(BMDM)用CellstripperTM(CellGro，Mediatech， Inc. ,Herndon,VA)收獲，重懸于無(wú)CSF-I的培養(yǎng)基中，并以每孔5000個(gè)細(xì)胞的密度接種于 Costar 96孔組織培養(yǎng)板中。過(guò)夜培養(yǎng)后，將各孔調(diào)節(jié)成含有5ng/ml CSF-IU μ M吲哚美 辛和梯度濃度的JNJ-141。二十四小時(shí)后，將各孔進(jìn)一步調(diào)節(jié)成含有溴脫氧尿苷(BrDU)再 保持6小時(shí)。通過(guò)ELISA(Exalpha Corp. ffatertown,MA)對(duì)BrDU向增殖的巨噬細(xì)胞的DNA 中的摻入進(jìn)行定量，用GraphPad Prism 軟件和四參數(shù)logistics方程計(jì)算抑制BrDU摻入 達(dá)百分之五十的JNJ-141濃度。分別使用MV-4-11AML細(xì)胞系(ATCC號(hào)CRL_9591)、M07e紅白血病細(xì)胞系(DSMZ 號(hào)ACC 104)和TF-I髓細(xì)胞性白血病細(xì)胞系(ATCC號(hào)CRL_2003)對(duì)依賴于ITD_FLT3、KIT 和TRKA的細(xì)胞增殖進(jìn)行評(píng)估。由于組成型活性ITD-FLT3突變體的表達(dá)，MV-4-11細(xì)胞是 生長(zhǎng)因子非依賴性的(Quentmeier H等人，Leukemia2003 ；17 :120_124)。M07e細(xì)胞能表達(dá) KIT 并響應(yīng) SCF 而增殖(B Lange 等人，Blood 1987 ；70 192-199)。TF-1 細(xì)胞能表達(dá) TRKA 并 響應(yīng)NGF而增殖(B Lange等人，Blood 1987;70:192-199)。將細(xì)胞與梯度濃度的JNJ-141 一起分配至Costar 96孔組織培養(yǎng)板(10，000個(gè)細(xì)胞/孔)中。將M07e和TF-I培養(yǎng)物調(diào) 節(jié)成分別含有25ng/ml SCF或1. 4ng/ml NGF。在72小時(shí)培養(yǎng)時(shí)間后，用CellTiterGlo 試劑(Promega)測(cè)定相對(duì)細(xì)胞數(shù)。根據(jù)第3天與第O天的熒光差值計(jì)算MV-4-11的生長(zhǎng)情 況。根據(jù)在生長(zhǎng)因子存在和不存在下所培養(yǎng)的細(xì)胞的熒光差值計(jì)算M07e和TF-I的生長(zhǎng)情 況。IC5tl值是用GraphPad Prism 軟件，以多參數(shù)、S型劑量-響應(yīng)(可變斜率)方程采用 非線性回歸擬合來(lái)測(cè)定。如 Maier JA 等人，Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters2006 ； 16 3646-3650中所述，測(cè)定對(duì)細(xì)胞LCK的抑制。將Jurkat細(xì)胞(IO5個(gè)細(xì)胞/孔)(ATCC TIB-152)(克隆E6-1)在圓底96孔聚丙烯板中用梯度濃度的JNJ-141預(yù)處理1小時(shí)。將細(xì) 胞轉(zhuǎn)移至預(yù)包被有⑶3 ε抗體(MAB100R&D Systems)的培養(yǎng)皿中。隨后加入PMA至終濃度 為lOng/ml，并將細(xì)胞在37°C下溫育過(guò)夜。收獲二十四小時(shí)培養(yǎng)物上清液，通過(guò)ELISA(R&D Systems)測(cè)定IL-2蛋白的表達(dá)。用CellTiter-Glo 試劑確定細(xì)胞活力。動(dòng)物研究將動(dòng)物圈養(yǎng)在經(jīng)美國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物評(píng)估和認(rèn)可委員會(huì)(AmericanAssociation for Assessment and Accreditation of Laboratory Animal Care (AAALAC))完全認(rèn)可的設(shè)施 中，并且涉及動(dòng)物的研究過(guò)程均遵照關(guān)于試驗(yàn)動(dòng)物護(hù)理和使用的NIH指南(NIH Guide for the Care and Use ofLaboratory Animals)來(lái)進(jìn)行。JNJ-141的體內(nèi)藥效動(dòng)力學(xué)活性向各由六只8周齡的B6C3F1小鼠(Taconic Farms)組成的各組口服給予10或20mg/kg的溶媒(20%羥丙基-β -環(huán)糊精(HP β⑶)水溶 液)或JNJ-141。八小時(shí)后，經(jīng)由尾部靜脈給小鼠施予鹽水或0. 8 μ g重組小鼠CSF-I (Cell Biosciences Inc，Norwood，ΜΑ)。在尾部靜脈注射十五分鐘后，處死小鼠并分離脾臟，用干冰速凍。將該冷凍組織用Iml Trizol (Invitrogen) /每50mg組織進(jìn)行均化，根據(jù)Trizol 的技術(shù)說(shuō)明書純化RNA，用6. 8孔尼茨(Kunitz)單位的無(wú)RNA酶的DNA酶((Qiagen， Valencia, CA)處理以降解污染性基因組DNA。用RNeasy柱(Qiagen)進(jìn)一步純化RNA。使 用逆轉(zhuǎn)錄酶 qPCR 主混合物(Reverse Transciptase qPCR Master Mix) (Eurogentec)和大 約 50ng 1 ^在25“1^反應(yīng)體積中進(jìn)行肌- 0 。小鼠 c_fos mRNA (part#Mm00487425)或 18S rRNA(part#4333760F)的引物探針組得自 Applied Biosystems，Inc.，(Foster City，CA)。 用ABI Prism 7000序列檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行擴(kuò)增和檢測(cè)。使用從用溶媒處理的、CSF-I誘導(dǎo)的小 鼠分離的RNA產(chǎn)生c-fos mRNA和18s rRNA的標(biāo)準(zhǔn)曲線，并將其用于計(jì)算所有其他樣品中 的相對(duì)表達(dá)水平。將c-fos mRNA值相對(duì)18S rRNA含量進(jìn)行歸一化。將鹽水(無(wú)CSF-1) 處理組的取平均值的、經(jīng)歸一化的c-fos含量賦值為1，所有其他組以“誘導(dǎo)倍數(shù)”表示。NCI-H460人肺腫瘤異種移植物模型將NCI-H460人肺惡性腫瘤細(xì)胞(ATCC號(hào) HTB-177)以IX IO7個(gè)細(xì)胞/mL懸浮于無(wú)菌PBS中，并取IOOuL皮下注射于得自Charles River Laboratories (Wilmington,ΜΑ)的雌性無(wú)胸腺裸鼠(CD_l，nu/nu，9 至 10 周齡)的左 腹股溝區(qū)中。三天后，將小鼠隨機(jī)分成四組(每組15只)，用管飼法以25、50和100mg/kg 的劑量給予溶媒或JNJ-141。在非周末期間每天給予兩次，在周末每天給予一次，連續(xù)進(jìn)行 25天。用電子游標(biāo)卡尺，采用公式(LXW)2/2(其中L=腫瘤長(zhǎng)度(mm)，W=腫瘤寬度(最 短距離，單位mm))確定腫瘤體積。在實(shí)驗(yàn)終止時(shí)，在CO2麻醉下通過(guò)心臟穿刺收集血樣于肝 素鋰包被的管子中。通過(guò)在4°C下離心(3000rpm)10分鐘獲得血漿，冷凍保藏于-80°C下直 至用特異性ELISA (R&D Systems)分析人和小鼠CSF-1。將每例腫瘤的一半浸入Tissue-Tek O.C.T.(最佳切片溫度)介質(zhì)(VWR，West Chester,PA)中，速凍并進(jìn)行處理以進(jìn)行腫瘤脈管 系統(tǒng)的免疫組織化學(xué)染色。將每例腫瘤的另一半在10%福爾馬林中固定并包埋于石蠟中， 以進(jìn)行TAM的免疫組織化學(xué)量化定量。將五ym切片用大鼠抗小鼠F4/80(克隆Cl :A3_1， Serotec)和包括生物素化的兔抗大鼠免疫球蛋白(Dako Cytomation,目錄號(hào)E0468)的 HRP檢測(cè)系統(tǒng)以及具有標(biāo)記聚合物-HRP (Dako Cytomation,目錄號(hào)K4003)和DAB的抗兔 Envision進(jìn)行染色。對(duì)于每例腫瘤，以200x倍放大倍數(shù)評(píng)估三個(gè)巨噬細(xì)胞密度最高的區(qū) 域。借助于Image Pro Plus軟件測(cè)定每個(gè)視野中F4/80染色細(xì)胞陽(yáng)性的百分比，并對(duì)每例 腫瘤的該三個(gè)視野求平均值。為了評(píng)估腫瘤血管密度，將8 μ m恒冷箱切片在冷丙酮中固定 5分鐘并風(fēng)干。將切片在PBS洗滌，用5%山羊血清的PBS溶液封閉，并用抗生物素蛋白-生 物素溶液(SP-2001, Vector Corporation, Burlingame, CA)進(jìn)一步封閉。洗滌后，將切片 用含有 10 μ g/ml 大鼠抗小鼠 CD31(RM5200,Caltag Laboratories,Burlingame,CA)的 PBS 覆蓋60分鐘，洗滌并用ABC-AP Rat試劑盒(AK-5004，Vector Corporation)染色。將左旋 咪唑與基質(zhì)(substrate)以抑制內(nèi)源性堿性磷酸酶。將大鼠IgG(Caltag Labs, R2a00)用 作陰性對(duì)照，并且在所有情況下均是陰性的。將切片進(jìn)行稍作復(fù)染，并用4x倍物鏡獲取照 片。用Image Pro Plus (Phase 3Image)計(jì)算脈管所占的腫瘤橫截面積的百分比。大鼠MRMT-I骨轉(zhuǎn)移模型已經(jīng)描述了將大鼠乳腺M(fèi)RMT-I腺癌細(xì)胞接種進(jìn) 胚骨，作為骨轉(zhuǎn)移模型(Medhurst SJ 等人，Pain2002 ；96 129-40)。由 MDS Pharma Services (Bothel, WA)進(jìn)行了該模型的改建(Roudier MP 等人，Clin Exp Metastasis 2006，23 167-75)。使大約 125-150 克的雌性 Sprague-Dawley 大鼠(Harlan Sprague Dawley, Inc.，Indianapolis, IN)適應(yīng)環(huán)境一周。用氯胺酮/賽拉嗪麻醉這些大鼠，將右腿部刮毛并用氯己定和70%乙醇(S0P-SUR026)擦拭。在脛骨上半部上的皮膚中產(chǎn)生Icm的 頭-尾切口(rostral-caudal incision).用鈍器解剖法暴露脛骨近端，并用通過(guò)23號(hào)針 頭引導(dǎo)的Hamilton注射器將3μ 1的鹽水(假手術(shù))或含有3 X IO4個(gè)MRMT-I細(xì)胞的鹽水 注射進(jìn)每只大鼠的右邊脛骨近端的髓腔中。用骨蠟封閉注射部位。用外科手術(shù)釘縫合傷口。 從第3天開(kāi)始用溶媒(0.5%羥丙基甲基纖維素)或JNJ-141(20或60mg/kg)，每日兩次， 隔10小時(shí)通過(guò)管飼法給動(dòng)物施藥。給第四組每隔一日皮下施用鹽水中的0. 03mg/kg唑來(lái) 膦酸鹽，以作為對(duì)照。每組對(duì)八只大鼠進(jìn)行給藥。在第17天處死大鼠。切除右脛骨以及周 圍的腫瘤組織，用 MX-20X-射線系統(tǒng)(Faxitron X-ray Corporation, Wheeling, IL)制作 X 射線顯微照片。如下對(duì)X射線顯微照片進(jìn)行腫瘤誘導(dǎo)的骨質(zhì)溶解的評(píng)分0，沒(méi)有破壞跡象； 1，一至三個(gè)小的射線可透的病損；2，三至六個(gè)病損并丟失骨髓骨；3，丟失骨髓骨并且皮質(zhì) 骨溶蝕；4，全厚度單皮質(zhì)骨丟失；5，全厚度雙皮質(zhì)骨丟失和/或骨骼斷裂移位。將放射照 片用于從每組中選擇代表性的骨進(jìn)行微CT成像。將所有脛骨固定于10%中性緩沖福爾馬 林中兩天，脫鈣并切片用于組織病理學(xué)評(píng)價(jià)。如此前在Liu，C.等人，1987. Histochemistry 86 559-565中所述，進(jìn)行TRAP染色。對(duì)于每份脛骨，在具有最高破骨細(xì)胞頻率的三個(gè)200 倍視野中，對(duì)腫瘤相關(guān)的TRAP+破骨細(xì)胞數(shù)目進(jìn)行計(jì)數(shù)。用半定量三點(diǎn)評(píng)分法對(duì)各處理組 就骨小梁體積(3，>40面積；2，> 10% <40%面積(正常)；1，1-10%面積；0，無(wú))和腫 瘤體積(3，大；2，適度；1，?。?，無(wú))進(jìn)行比較。疼痛行為評(píng)價(jià)在手術(shù)前以及在第5、7、10、14和16天，對(duì)動(dòng)物進(jìn)行觸覺(jué)異常性疼痛 的行為分析。將在手術(shù)前測(cè)定的觸覺(jué)異常性疼痛的行為測(cè)試用于將動(dòng)物隨機(jī)分配到各處理 組。讓大鼠適應(yīng)von Frey測(cè)試裝置，通過(guò)將一系列經(jīng)校準(zhǔn)的尼龍纖維穿過(guò)籠底并壓向后爪 的跖面，來(lái)測(cè)定觸覺(jué)(即機(jī)械)異常性疼痛。在測(cè)試過(guò)程中大鼠自由活動(dòng)并不用手觸過(guò)。von Frey纖絲的直徑對(duì)應(yīng)所施加力的對(duì)數(shù)標(biāo)度，因而對(duì)應(yīng)所感覺(jué)到的強(qiáng)度的線性區(qū)間標(biāo)度。根 據(jù) Chaplan 的“上下(up-down) ”方法(Chaplan SR 等人，J Neurosci Methods 199453(1) 55-63)測(cè)定縮回閾值，該方法涉及使用漸次變大和變小的纖維以使得能確定50%縮回閾 值。簡(jiǎn)而言之，當(dāng)大鼠響應(yīng)壓力而提起其爪子時(shí)，記錄纖絲的尺寸，接著使用刺激較弱的纖 絲。反之，在沒(méi)有響應(yīng)時(shí)，使用較強(qiáng)刺激。因而產(chǎn)生了一系列相似應(yīng)答，并用響應(yīng)變量電子 表格計(jì)算出50%響應(yīng)閾值。觸覺(jué)異常性疼痛的顯著差異是基于組平均值的比較。繼發(fā)性骨腫瘤疼痛和骨質(zhì)溶解的2472肉瘤模型在成年雄性C3H/HeJ小鼠 (Jackson Laboratories, Bar Harbor, ME, USA)上進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，小鼠在進(jìn)行腫瘤細(xì)胞注射時(shí) 大約7-8周齡，重25-30g。在用氯胺酮/賽拉嗪(2 1比例；肌內(nèi)注射(i.m.))誘導(dǎo)全身 麻醉后，進(jìn)行關(guān)節(jié)切開(kāi)術(shù)。將針頭插入髓腔內(nèi)，以產(chǎn)生用于肉瘤細(xì)胞進(jìn)入的通道。然后使 用氣動(dòng)式牙科高速手持件產(chǎn)生一凹陷。給小鼠注射Hanks緩沖鹽水(HBSS) (20ul，Sigma, St. Louis, MO, USA)或含有 2472 肉瘤系(ATCC, Rockville, MD, USA)的 HBSS0 用牙科汞齊 填料密封注射部位，以將細(xì)胞封閉在髓腔內(nèi)，然后用無(wú)菌水(低滲溶液)沖洗。最后，用縫 合夾實(shí)現(xiàn)切口閉合。在第5天移除縫合夾以便不干擾行為測(cè)試。利用Faxitron分析(MX-20型標(biāo)本X射線攝影系統(tǒng)(Faxitron X-ray Corporation，Wheeling，IL)和柯達(dá)膠片(Kodak film Min-R 2000,Rochester, NY))，以放 射學(xué)方法對(duì)腫瘤誘導(dǎo)的骨重組(骨質(zhì)溶解)的程度進(jìn)行評(píng)估。以0至5的標(biāo)度對(duì)荷瘤股骨 的X射線照片進(jìn)行評(píng)分(0)沒(méi)有破壞跡象的正常骨；(1)小的骨破壞凹陷(數(shù)目為1-3)；(2)凹陷增多的外觀(3-6)以及骨髓骨丟失；(3)骨髓骨丟失以及皮質(zhì)骨丟失；(4)全厚度 的單皮質(zhì)骨丟失；(5)全厚度的雙皮質(zhì)骨丟失以及骨骼斷裂移位。將多個(gè)行為測(cè)量結(jié)果用于評(píng)估骨癌疼痛的程度。自發(fā)性疼痛反應(yīng)行為在2分鐘的觀察期間，記錄代表疼痛反應(yīng)行為的自發(fā)性退 縮和防衛(wèi)的次數(shù)。退縮定義為動(dòng)物提起其后爪的次數(shù)，防衛(wèi)定義為動(dòng)物保持后爪提起同時(shí) 不動(dòng)的次數(shù)。觸診誘導(dǎo)的疼痛反應(yīng)行為通過(guò)對(duì)股骨遠(yuǎn)端進(jìn)行通常非有害的觸診，每秒鐘一次， 持續(xù)2分鐘，來(lái)評(píng)價(jià)膝關(guān)節(jié)處的機(jī)械異常性疼痛。在2分鐘的觸診后，將小鼠置于觀察箱中， 如上所述對(duì)其觸診誘導(dǎo)的防衛(wèi)和退縮行為另外測(cè)量2分鐘。強(qiáng)迫行走防衛(wèi)強(qiáng)迫行走防衛(wèi)是用Roto-Rod(IITC，Woodland Hills, CA)確定。 Roto-Rod機(jī)器具有旋轉(zhuǎn)桿并配有速度、加速度和靈敏度控制。動(dòng)物將會(huì)被置于4倍速度、 加速度8. O、靈敏度2. 5的桿上。以0-5的標(biāo)度評(píng)定強(qiáng)迫行走防衛(wèi)(5)正常使用，(4)有些 蹣跚，但不明顯，(3)明顯蹣跚，(2)明顯蹣跚并且肢體的防衛(wèi)延長(zhǎng)，(1)部分地不能使用肢 體，(0)完全不能使用。統(tǒng)計(jì)分析通過(guò)ANOVA和Durmett t_檢驗(yàn)對(duì)處理動(dòng)物和對(duì)照動(dòng)物之間的差異進(jìn)行 統(tǒng)計(jì)分析，？值< 0. 05 (雙尾檢驗(yàn))認(rèn)為是在統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著。將GraphPad Prism Version 4. O用于數(shù)據(jù)的所有統(tǒng)計(jì)分析和圖形顯示。結(jié)果。JNJ-141是CSF-IR和FLT3的強(qiáng)效抑制劑，激酶選擇譜較窄。在酶測(cè)定法中， JNJ-141抑制了人CSF-IR激酶，IC50值為0. 00069 μ Μ。檢驗(yàn)了對(duì)CSF-IR的特異性以及對(duì) 110種其他激酶的特異性。有九十三種激酶在ΙμΜ時(shí)受抑制低于50%。在剩下的十七種 激酶中，五種的 IC5tl值低于 0. 1 μ Μ，包括KIT (0. 005 μ Μ) ,AXL (0. 012 μ Μ) ,TRKA (0. 015 μ Μ)、 FLT3 (0· 030 μ Μ)和 LCK (0· 088 μ Μ)。將JNJ-141在細(xì)胞測(cè)定中進(jìn)一步進(jìn)行了表征。結(jié)果示于表1中。 較低的納摩爾濃度抑制了重組HEK細(xì)胞中的CSF-IR自磷酸化(圖1B)以及小鼠 巨噬細(xì)胞的CSF-IR依賴性增殖和人單核細(xì)胞的MCP-I表達(dá)(表1)。相對(duì)于CSF-IR抑制， 大約高七倍濃度的JNJ-141抑制了 MV-4-11細(xì)胞的FLT3依賴性增殖和重組Baf3細(xì)胞中 的FLT3自磷酸化。大約高十五倍的濃度抑制了 M07e細(xì)胞的KIT依賴性增殖。在亞微摩 爾濃度的JNJ-28312141下TF-I細(xì)胞的TRKA依賴性增殖也被抑制。相比于CSF_1R、FLT3、 KIT和TRKA細(xì)胞效價(jià)，AXL自磷酸化和LCK依賴性IL-2產(chǎn)生的細(xì)胞IC5tl值大于一微摩爾。 JNJ-141 (5 μ Μ)沒(méi)有抑制H460、MDA-MB-231或Α375腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)因子非依賴性增殖。總 體來(lái)說(shuō)，數(shù)據(jù)確定了 JNJ-141為CSF-IR的強(qiáng)效選擇性抑制劑，另外在納摩爾濃度下對(duì)FLT3、 KIT和TRKA也有細(xì)胞抑制作用。JNJ-141的體內(nèi)藥效動(dòng)力學(xué)活性為了確認(rèn)體內(nèi)CSF-IR抑制作用，基于所報(bào)道的 CSF-I 升高巨噬細(xì)胞 c-fos mRNA 的能力(Orlofsky A 等人，EMBO J 1987;6:2947-52) 開(kāi)發(fā)了一種簡(jiǎn)單的藥效動(dòng)力學(xué)模型。因?yàn)榫奘杉?xì)胞大量存在于脾臟中，因此在靜脈注射 重組CSF-I后對(duì)小鼠脾臟中的c-fos mRNA進(jìn)行了評(píng)估。在十五分鐘內(nèi)CSF-I誘導(dǎo)了脾 c-fos mRNA增加10倍至50倍，但到第30分鐘恢復(fù)至基線。誘導(dǎo)是劑量依賴性的(ED5tl為 大約0. 8yg/小鼠)，并且在投與0. 2mg CSF-I中和性單克隆5A1抗體(BD Biosciences Pharmingen)(腹膜內(nèi))的小鼠中100%被阻斷。當(dāng)在用0. 8 μ g CSF-I攻擊前八小時(shí)經(jīng)口 給予10或20mg/kg JNJ-141時(shí)，c-fos mRNA誘導(dǎo)分別降低33%和79%，如圖2所示。JNJ-141對(duì)H460肺腺癌異種移植物的生長(zhǎng)抑制作用將JNJ-141用于檢驗(yàn)CSF-IR 依賴性巨噬細(xì)胞能支持實(shí)體瘤生長(zhǎng)的假設(shè)?；谌齻€(gè)標(biāo)準(zhǔn)選擇H460肺腺癌異種移植物作 為模型。首先，在H460細(xì)胞中或在異種移植物中通過(guò)RT-PCR無(wú)法檢測(cè)到人CSF-IR表達(dá)，
135并且H460細(xì)胞在培養(yǎng)物中的生長(zhǎng)不受JNJ-141抑制(參見(jiàn)上面的表1)。其次，H460腫瘤 的裂解物含有大量(35ng/g濕重)的人CSF-1，并且H460腫瘤產(chǎn)生出聚集有大量巨噬細(xì)胞 的基質(zhì)(參見(jiàn)圖4)。最后，活的H460細(xì)胞局限于鄰近滲入的蛇形脈管基質(zhì)的區(qū)域，表明了 基質(zhì)依賴性的腫瘤生長(zhǎng)?？偲饋?lái)看，這些腫瘤特性使得有機(jī)會(huì)來(lái)研究CSF-IR依賴性巨噬細(xì) 胞對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的推定的貢獻(xiàn)。JNJ-141劑量依賴性地減少了 H460異種移植物的生長(zhǎng)速率(參見(jiàn)圖3A)。在研究 結(jié)束時(shí)，對(duì)于以25、50和100mg/kg給藥，最終腫瘤重量分別減少了 21%、32%和45% (參 見(jiàn)圖3B)。在為期25天的處理過(guò)程中，沒(méi)有觀察到明顯的毒性或?qū)w重的不利影響(參見(jiàn) 圖 3C)。JNJ-141減少了腫瘤相關(guān)的巨噬細(xì)胞和血管分布。 為了在細(xì)胞水平上研究JNJ-141的作用機(jī)理，通過(guò)圖像分析定量TAMS。F4/80陽(yáng) 性巨噬細(xì)胞在用溶媒處理過(guò)的小鼠的腫瘤基質(zhì)中豐富(圖4A)，并存在于腫瘤細(xì)胞占優(yōu)勢(shì) 的區(qū)域內(nèi)(盡管數(shù)目較少)。JNJ-141以劑量依賴性方式有效地減少了腫瘤相關(guān)的巨噬細(xì) 胞(表2和圖4B)，在100mg/kg劑量下觀察到大約97%的減少。剩下的陽(yáng)性細(xì)胞小且圓， 缺乏成熟的組織巨噬細(xì)胞的形態(tài)。為了確定巨噬細(xì)胞計(jì)數(shù)減少是否與腫瘤微脈管密度減少相關(guān)聯(lián)，對(duì)腫瘤進(jìn)行染色 并進(jìn)行CD31+微脈管系統(tǒng)的定量(圖4C和4D)。在用溶媒處理過(guò)的小鼠中，CD31+微脈管 系統(tǒng)存在于整個(gè)腫瘤基質(zhì)(圖4C)。用JNJ-141處理導(dǎo)致了腫瘤血管分布的劑量依賴性減 少，在最高劑量下觀察到66%的減少(表2和圖4D)。骨轉(zhuǎn)移的大鼠模型中JNJ-141對(duì)破骨細(xì)胞形成和骨質(zhì)溶解的抑制肺癌和乳癌常常與溶解性骨骼轉(zhuǎn)移相關(guān)(Roodman GD.，NEJM 2004 ；350 =1655-64)。因?yàn)闊o(wú)CSF-I的小鼠 缺乏破骨細(xì)胞，因此檢驗(yàn)了 口服JNJ-141在得到很好表征的大鼠同系MRMT乳腺癌骨轉(zhuǎn)移模 型中的效果(Medhurst SJ等人，Pain 2002 ；96 129-40) 0將JNJ-141的效果與雙膦酸酯、 唑來(lái)膦酸鹽進(jìn)行了比較。在將MRMT乳腺癌細(xì)胞接種進(jìn)脛骨后，在骨髓腔和周圍的骨膜中均 形成了腫瘤。到第17天，X射線顯微照相術(shù)(結(jié)果在表3中示出)和顯微計(jì)算機(jī)輔助斷層 攝影技術(shù)(參見(jiàn)圖5)揭示了在用溶媒處理的大鼠中存在骨小梁大量損失和全厚度骨皮質(zhì) 病變。
形成鮮明的對(duì)照的是，用JNJ-141處理有效地保持了骨。到第17天，在給予20
或60mg/kg JNJ-141的十四只大鼠中有三只仍無(wú)法通過(guò)X射線顯微照相術(shù)檢測(cè)到溶蝕，而
十四只大鼠中有十一只可辨別出一至三個(gè)小的射線可透的病變。JNJ-141對(duì)X射線照片評(píng)
分的影響與施用唑來(lái)膦酸鹽后的相類似。組織學(xué)檢查確認(rèn)了在用溶媒處理過(guò)的負(fù)荷MRMT
腫瘤的大鼠中存在廣泛的骨小梁丟失病變(圖6和表3)。JNJ-141防止了腫瘤相關(guān)的溶蝕，
總體的骨小梁評(píng)分與假手術(shù)(無(wú)腫瘤)大鼠沒(méi)有差別。全厚度皮質(zhì)骨病變?cè)谌苊教幚斫M中
是常見(jiàn)的，但在用JNJ-141或唑來(lái)膦酸鹽處理的大鼠中沒(méi)有觀察到。不管什么處理，幾乎所
有接種腫瘤的大鼠的髓腔都充滿了壞死的腫瘤，而活性腫瘤包封了脛骨。在第17天評(píng)估得知，JNJ-141和唑來(lái)膦酸鹽均減少了包封的腫瘤的總體尺寸。在溶媒處理的大鼠中，大的多 核化TRAP+破骨細(xì)胞在腫瘤中豐富，并內(nèi)襯于殘留的皮質(zhì)骨上(圖6)。使用唑來(lái)膦酸鹽，腫 瘤相關(guān)的破骨細(xì)胞減少64%，在低倍放大條件下保持可見(jiàn)。相比之下，在用JNJ-141處理的 大鼠中，難以發(fā)現(xiàn)腫瘤相關(guān)的破骨細(xì)胞。JNJ-141減少了腫瘤相關(guān)的破骨細(xì)胞達(dá)95%以上， 剩余的少數(shù)破骨細(xì)胞小并且通常是單核的。JNJ-141防止了轉(zhuǎn)移性骨痛的發(fā)生在最終時(shí)間點(diǎn)時(shí)，與用介質(zhì)接種的動(dòng)物相比，將 MRMT-I細(xì)胞接種進(jìn)脛骨近端顯著增加了用MRMT-I細(xì)胞接種的動(dòng)物中的機(jī)械性異常性疼 痛；p<0.01。用嗎啡處理患病動(dòng)物自第二個(gè)時(shí)間點(diǎn)起逆轉(zhuǎn)了異常性疼痛，而與用腫瘤接種 的動(dòng)物相比較，用20mpk或60mpk的JNJ-141處理在最終時(shí)間點(diǎn)減少了異常性疼痛(ρ分別 小于0. 05和0. 01)。與用腫瘤接種的動(dòng)物相比較，唑來(lái)膦酸鹽處理也減少了異常性疼痛，但 該效果未達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性。圖7中的數(shù)值表示組平均值士 SEM。骨轉(zhuǎn)移的小鼠模型中JNJ-141對(duì)骨質(zhì)溶解和疼痛相關(guān)行為的抑制將同系NCTC 2472溶骨肉瘤細(xì)胞接種進(jìn)C3H/HeJ小鼠的股骨中，可提供已得到很好表征的具有疼痛和溶 骨終點(diǎn)的骨轉(zhuǎn)移模型(Sevcik MA等人，Pain 2005 ；115 128-41) 0 JNJ-141在該模型中以 劑量依賴性方式防止了腫瘤相關(guān)的骨質(zhì)溶蝕(表4)。骨質(zhì)溶解的防止伴隨著在骨腫瘤界 面處出現(xiàn)抗酒石酸鹽酸性磷酸酶(TRACP)陽(yáng)性破骨細(xì)胞數(shù)目的減少。在溶媒處理組中，疼 痛相關(guān)行為(包括自發(fā)的和觸診誘導(dǎo)的防衛(wèi)(SG，PIG)和退縮(SF，PIF))在腫瘤接種后七 天明顯并隨時(shí)間而發(fā)展(圖8和表4)。JNJ-141以劑量依賴的方式防止了疼痛相關(guān)行為的 逐漸增加。到第15天，在用120mg/kg JNJ-141處理的小鼠中扣診誘導(dǎo)的退縮減少了大約 50% (表 4)。表4 JNJ-141在腫瘤誘導(dǎo)的骨疼的嚙齒動(dòng)物模型中的功效 a在第0天用鹽水(假手術(shù))或IO5個(gè)NCTC 2472細(xì)胞接種股骨后，在第3天開(kāi)始 給藥，每日兩次，直至在第15天結(jié)束研究。b基于X射線顯微照片的目測(cè)評(píng)分(標(biāo)度0-5)。[1044]^每個(gè)高倍視野的計(jì)數(shù)。破骨細(xì)胞定義為抗酒石酸鹽酸性磷酸酶(TRACP)陽(yáng)性細(xì) 胞，巨噬細(xì)胞定義為CD68陽(yáng)性細(xì)胞。<1在2分鐘的觀察時(shí)間內(nèi)叩診誘導(dǎo)的(PIF)或自發(fā)性(SF)退縮的次數(shù)。e在2分鐘的觀察時(shí)間內(nèi)動(dòng)物保持后爪提起(防衛(wèi))同時(shí)不動(dòng)的時(shí)間(sec ；SG = 自發(fā)防衛(wèi)；PIG =叩診誘導(dǎo)的防衛(wèi)。*相對(duì)于對(duì)照ρ < 0. 05 ;**相對(duì)于對(duì)照ρ < 0. 01 如本文所描述的實(shí)驗(yàn)中所證明，JNJ-141是一種強(qiáng)效CSF-IR抑制劑，能夠阻斷體 外單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞的增殖和趨化因子表達(dá)，以及能防止體內(nèi)CSF-I誘導(dǎo)的c-fos mRNA 表達(dá)。對(duì)111種各式各樣的重組激酶的測(cè)定鑒定了另外五種潛在的酪氨酸激酶靶標(biāo)(即 KIT、FLT3、TRKA, LCK和AXL)，其可受低于IOOnM的濃度抑制。然而，其中亞微摩爾濃度的 JNJ-141抑制了依賴于KIT、FLT3和TRKA的細(xì)胞功能，但需要微摩爾濃度才能抑制AXL和 LCK依賴性細(xì)胞活性。需要相對(duì)較高濃度的JNJ-141才能影響細(xì)胞AXL和LCK測(cè)定，這可反 映出純化的重組激酶與它們的天然細(xì)胞對(duì)等物之間的構(gòu)象差異。總體來(lái)說(shuō)，JNJ-141的激 酶譜對(duì)預(yù)防和治療原發(fā)性和繼發(fā)性骨癌來(lái)說(shuō)是有吸引力的，因?yàn)镃SF-IR依賴性巨噬細(xì)胞 和破骨細(xì)胞據(jù)信可分別支持腫瘤的生長(zhǎng)和介導(dǎo)轉(zhuǎn)移性骨疾病中的骨質(zhì)溶解。此外，對(duì)FLT3、 KIT和TRKA的抑制可有助于所需的JNJ-141的治療活性。肥大細(xì)胞依賴KIT來(lái)存活并且與 巨噬細(xì)胞一起促進(jìn)腫瘤血管生成和惡性發(fā)展(Soucek L等人，Nature Medicine2007 ；10 1211-1218)。另外，肥大細(xì)胞與骨丟失相關(guān)(Chiappetta N 和 Gruber B, Semin Arthritis Rheum 2006 ；36 :32_6)，KIT 在某些骨肉瘤(Entz-Werle N 等人，Int J Cancer 2007 ；120 2510-6)和胃腸間質(zhì)瘤(Demetri GD.，Seminars in Oncology 2001 ；28 19-26)上過(guò)度表 達(dá)并可驅(qū)動(dòng)這些瘤。因而，抑制KIT可有助于減緩腫瘤生長(zhǎng)和骨質(zhì)溶解，并且可引起某些原 發(fā)性和繼發(fā)性骨腫瘤的退化。與FMS相似，F(xiàn)LT3由巨噬細(xì)胞和破骨細(xì)胞祖細(xì)胞高度表達(dá)， 并且在某些環(huán)境下可增強(qiáng)或取代FMS (Lean JM等人，Blood 2001;98:2707-13)。因此抑制 FLT3可有助于JNJ-141的骨保護(hù)活性，以及有助于抑制腫瘤血管生成。TRKA是神經(jīng)生長(zhǎng)因 子(NGF)的專有受體。TRKA和NGF為傷害性感受器的生長(zhǎng)和存活所必需，中和NGF的抗體 可在繼發(fā)性骨癌模型中顯著減少疼痛相關(guān)的行為(Halvorson KG等人，Cancer Res 2005 ； 65 9426-35)。小鼠中所得的這些數(shù)據(jù)表明，JNJ-141抑制TRKA可有助于減少M(fèi)RM-I和2472 肉瘤模型中的腫瘤介導(dǎo)的傷害感受，有可能為遭受與原發(fā)性或繼發(fā)性骨癌相關(guān)的嚴(yán)重疼痛 影響的患者緩解疼痛。JNJ-141對(duì)H460細(xì)胞不太可能有直接作用，因?yàn)镴NJ-141在比體內(nèi) 所達(dá)到的濃度高的濃度(5μΜ)下沒(méi)有影響Η460細(xì)胞在培養(yǎng)物中的血清依賴性增殖。在本文所描述的實(shí)驗(yàn)中，在用JNJ-141處理過(guò)的小鼠中，腫瘤相關(guān)的巨噬細(xì)胞的 耗減較完全(>97%)。CSF-I抑制可通過(guò)若干種機(jī)制影響巨噬細(xì)胞數(shù)目。CSF-I對(duì)巨噬 細(xì)胞具有直接的趨化活性(Webb SE等人，J Cell Science 1996;109:793-803)并可誘導(dǎo) 巨噬細(xì)胞表達(dá)趨化肽，即單核細(xì)胞趨化蛋白_1(CCL2) (Baran CP等人，Am J Respir Crit Care Med2007 ；176 :78_89)。在CSF-I的影響下，募集的巨噬細(xì)胞或它們的前體原位增殖， 并且CSF-I即使在低的濃度下也是強(qiáng)效的巨噬細(xì)胞存活和分化因子(Chitu V等人，Curr Opin Immunol 2006 ； 18 39-48) 因此，JNJ-141可減少單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞祖細(xì)胞募集至 生長(zhǎng)中的H460腫瘤，這些細(xì)胞一旦被募集就不能存活、增殖和分化。GM-CSF、IL_3、VEGF,
139CCL2和其他未確定的生長(zhǎng)因子途徑能支持巨噬細(xì)胞的募集和存活(Takahashi K.，J Clin Exp Hematopathology 2001;41:1-33)。即使有這些潛在的眾多途徑，JNJ-141對(duì)TAM的近 乎定量的減少也是驚人的。TAM和腫瘤生長(zhǎng)的減少與腫瘤脈管密度減少66%相關(guān)聯(lián)。據(jù)報(bào)道，TAM可表達(dá)大 量的支持血管生成的生長(zhǎng)因子和蛋白酶(如VEGF、bFGF、IL-8、尿激酶、MMP-2和MMP-9等) (Mantovani A.等人，Trends in Immunology 2002;23:549-555)。用 JNJ-141 獲得的結(jié)果 與越來(lái)越多的認(rèn)為TAM是最佳腫瘤血管生成所必須的文獻(xiàn)相一致。腸胃外給藥的氯膦酸鹽 脂質(zhì)體(一種選擇性巨噬細(xì)胞毒素)據(jù)報(bào)道可分別減緩F9畸胎癌和A673橫紋肌肉瘤異種 移植物生長(zhǎng)達(dá) 75%和 66% (van Rooijen N 等人，Methods Enzymol 2003;373:3-16)。生 長(zhǎng)抑制伴隨著腫瘤相關(guān)的F4/80+巨噬細(xì)胞的耗減和腫瘤脈管系統(tǒng)的顯著減少。在A673腫 瘤中，CDl+微脈管系統(tǒng)密度的減少優(yōu)于用抗VEGF所實(shí)現(xiàn)的減少。更近些時(shí)候，鑒定了一亞群的單核細(xì)胞，其能表達(dá)Tie2并且為最佳腫瘤血管生成 所需(De Palma M等人，Cancer Cell 2005;8:211-226)。該亞群的選擇性缺失導(dǎo)致了裸 鼠中神經(jīng)膠質(zhì)瘤異種移植物的退化。其他研究更具體地將CSF-1/CSF-1R與腫瘤生長(zhǎng)和血 管生成相關(guān)聯(lián)(參見(jiàn)本文的“背景技術(shù)”，以及Nowickki A等人，Int J Cancer 1996 ；65 112-119 ；Okazaki T 等人，J Immunol 2005 ； 174 7531-7538 ；Aharinejad S 等人，Cancer Res 2002 ；62 :5317_5324 ；Aharinejad S 等人，Cancer Res2004 ；64 :5378_5384 ；Paulus P 等人，Cancer Res 2006 ；66 :4349_56)。在CSF-I缺陷型嚙齒動(dòng)物中破骨細(xì)胞幾乎不存在，這確定了 CSF-I在正常的破骨 細(xì)胞形成中的關(guān)鍵作用(Pollard, J. W.等人，Adv in DevelBiochem 1995 ；4 153-193 ；Van Wesenbeeck L 等人，PNAS2002 ；99 14303-14308)。破骨細(xì)胞形成失調(diào)發(fā)生在關(guān)節(jié)炎和轉(zhuǎn)移性骨疾病中。中和性CSF-IR抗體在關(guān)節(jié) 炎的小鼠模型中顯著停止了骨質(zhì)溶解，這確定了 CSF-I在免疫介導(dǎo)的破骨細(xì)胞形成中的作 用(Kitaura H 等人，J Clin Invest ；2005 ；115 :3418_27)。本文所描述的實(shí)驗(yàn)證明，在同系乳癌骨轉(zhuǎn)移模型中可見(jiàn)JNJ-141幾乎完全抑制了 破骨細(xì)胞形成和骨溶蝕。這些數(shù)據(jù)充實(shí)了先前的一個(gè)報(bào)道，該報(bào)道說(shuō)明另選的CSF-IR激 酶抑制劑Ki20227在骨轉(zhuǎn)移和骨溶蝕的黑素瘤模型中能保護(hù)骨質(zhì)(參見(jiàn)Ohno H等人，Mol Cancer Ther2006 ；5 :2634_2643)。在本文所描述的實(shí)驗(yàn)中得出的數(shù)據(jù)也支持CSF-I在腫瘤誘導(dǎo)的破骨細(xì)胞形成中 的關(guān)鍵作用以及JNJ-141在治療幾乎85%的晚期乳癌患者(會(huì)被診斷有骨轉(zhuǎn)移并有骨折、 骨痛和高鈣血癥的風(fēng)險(xiǎn))中的治療用途。高劑量的雙膦酸鹽(帕米膦酸和唑來(lái)膦酸鹽)被指出可在患有骨轉(zhuǎn)移的個(gè)體中防 止骨骼事件(參見(jiàn)，Body J. J.，Clin Cancer Res 2006 ； 12 (20Suppl) 6258s_6263s)，并且 denosumaMRANKL抗體)在臨床試驗(yàn)中具有有前景的抗再吸收活性(參見(jiàn)，Body J. J等人， Clin Cancer Res2006 ;12 :1221_1228)。然而，作用時(shí)間短并且可容易逆轉(zhuǎn)的CSF-1R抑制 劑(例如JNJ-141)可作為雙膦酸鹽(其與骨結(jié)合的半壽期為幾個(gè)月，這是一個(gè)可有助于骨 壞死的特點(diǎn)，尤其是隨著患者預(yù)期壽命延長(zhǎng))的有吸引力的替代藥物。JNJ-141似乎可減緩軟組織轉(zhuǎn)移和骨骼轉(zhuǎn)移兩者的生長(zhǎng)速率，這由在本文所述的 實(shí)驗(yàn)中所見(jiàn)的H460和MRMT腫瘤的生長(zhǎng)抑制得到證實(shí)。這與唑來(lái)膦酸鹽相反，唑來(lái)膦酸鹽似乎不會(huì)影響軟組織轉(zhuǎn)移的生長(zhǎng)(Mundy GR等人，Semin Oncol 2001 ；28(suppl6) 35-44)。JNJ-141減緩了實(shí)體瘤的生長(zhǎng)并防止了骨骼轉(zhuǎn)移對(duì)骨質(zhì)的溶蝕。JNJ-141對(duì) CSF-IR的抑制將可用于在各種情形下治療癌癥。例如，JNJ-141將可用于聯(lián)合療法，因?yàn)閾?jù) 證實(shí)抗CSF-I的中和性抗體可減少化學(xué)抗性基因的腫瘤表達(dá)(Paulus P等人，Cancer Res 2006 ；66 :4349-56)，并且移除巨噬細(xì)胞衍生的生長(zhǎng)和存活因子可延緩化學(xué)療法后的腫瘤 恢復(fù)。另外，因?yàn)镃SF-IR具有致癌潛能(Kirma N等人，Cancer Res2004 ；64 4162-70), 并在多種癌上表達(dá)(Kascinshi B.，Cancer Treat Res2002 ；107 :285_82)，在某些情況下， CSF-IR抑制劑可具有直接的抗癌活性。此外，瘤內(nèi)趨化性研究和實(shí)況視頻顯微鏡檢查已證 實(shí)，腫瘤細(xì)胞通過(guò)依賴于EGF和CSF-I兩者的過(guò)程與巨噬細(xì)胞一起移動(dòng)(Wyckoff J等人， Cancer Res 2004 ；64 :7022_7029)，并且小鼠的遺傳學(xué)分析已確定了 CSF-I在乳腺癌向肺 的自發(fā)性轉(zhuǎn)移中的關(guān)鍵作用(Lin EY等人，J ExpMed 2001;193:727-739)。盡管已證實(shí)在 某些腫瘤中循環(huán)腫瘤細(xì)胞數(shù)目可精確預(yù)測(cè)存活情況(Budd GT等人，Clin Cancer Res2006 ； 12 :6403-6409)，但當(dāng)前還沒(méi)有針對(duì)轉(zhuǎn)移過(guò)程的療法。干預(yù)CSF-I依賴性腫瘤細(xì)胞外出可最 終減緩會(huì)導(dǎo)致晚期癌患者死亡的持續(xù)轉(zhuǎn)移播散。治療/預(yù)防方法本文所用的術(shù)語(yǔ)“癌”指一亞組或多亞組的細(xì)胞在多細(xì)胞生物體中的有害細(xì)胞增 殖，這種增殖會(huì)導(dǎo)致對(duì)所述多細(xì)胞生物體的損害(即不適或預(yù)期壽命縮短)。本文所用的 “細(xì)胞增殖疾病，，包括腫瘤件疾病。本文所用的“腫瘤件疾病”指由非ιΗ常的或不警控制的 細(xì)胞生長(zhǎng)引起的腫瘤。本文所用的術(shù)語(yǔ)“骨癌”應(yīng)意指在骨組織中起源的癌(在本文中稱為“原發(fā)件骨 癌”)和從別的地方i千移至骨的癌細(xì)胞(在本文中稱為“繼發(fā)件骨癌”或“轉(zhuǎn)移件骨癌”。原發(fā)性骨癌細(xì)胞包括(但不限于)骨肉瘤細(xì)胞、來(lái)自Ewing腫瘤家族的細(xì)胞、軟骨 肉瘤細(xì)胞、惡性巨細(xì)胞腫瘤細(xì)胞、惡性纖維組織細(xì)胞瘤細(xì)胞和釉質(zhì)上皮瘤。骨癌的類型包括(但不限于)骨肉瘤，其為骨的癌性腫瘤，通常是手臂、腿或骨盆 的癌性腫瘤(最常見(jiàn)的原發(fā)性癌)；軟骨肉瘤，其為軟骨的癌(第二最常見(jiàn)的原發(fā)性癌)； Ewing肉瘤，其為通常在腿骨和上肢骨的骨腔中發(fā)展的腫瘤；纖維肉瘤和惡性纖維組織細(xì) 胞瘤，其為在諸如腱、韌帶、脂肪、肌肉之類的軟組織中發(fā)展并轉(zhuǎn)移至腿骨、上肢骨和頌骨的 癌；巨細(xì)胞瘤，其為僅在約10%的時(shí)間為惡性的并且最常見(jiàn)于上肢骨或腿骨中的原發(fā)性骨 腫瘤；以及脊索瘤，其為通常出現(xiàn)在顱骨和脊柱中的原發(fā)性骨腫瘤。繼發(fā)性骨癌或轉(zhuǎn)移性骨癌細(xì)胞(在本文中也稱為“骨轉(zhuǎn)移”)是已從諸如乳腺、肺、 前列腺和腎臟之類的其他組織轉(zhuǎn)移而來(lái)的癌細(xì)胞。這類癌另外也稱為”轉(zhuǎn)移至骨”的癌起源 器官或組織的癌一例如遷移至骨的肺癌。旨在將這類癌包括在本文的“骨癌”的定義內(nèi)。本發(fā)明提供用于治療患有骨癌以及與骨癌相關(guān)的骨丟失和骨痛的受試者的治療 方法，以及用于在有發(fā)展骨癌以及與骨癌相關(guān)的骨丟失和骨痛的風(fēng)險(xiǎn)(或易于發(fā)展骨癌以 及與骨癌相關(guān)的骨丟失和骨痛)的受試者中進(jìn)行預(yù)防的預(yù)防方法，所述方法包括施用式I 化合物，優(yōu)選實(shí)例38a。本文所用的術(shù)語(yǔ)“受試者”指已成為治療、觀察或試驗(yàn)對(duì)象的動(dòng)物，優(yōu)選哺乳動(dòng)物， 最優(yōu)選人。在一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明提供在有需要的受試者中治療骨癌(包括原發(fā)性骨癌和繼發(fā)性骨癌，優(yōu)選繼發(fā)性骨癌)的方法，所述方法包括給受試者施用治療有效量的藥物組 合物，所述藥物組合物包含式I化合物，優(yōu)選實(shí)例38a，以及可藥用載體。所述治療劑的施用 可在骨癌特征性癥狀顯現(xiàn)的同時(shí)進(jìn)行。優(yōu)選地，所述繼發(fā)性骨癌包括來(lái)自乳腺、肺和前列腺 癌的骨轉(zhuǎn)移，最優(yōu)選乳腺癌轉(zhuǎn)移。在另一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明提供在有需要的受試者中治療與骨癌(包括原發(fā)性骨 癌和繼發(fā)性骨癌，優(yōu)選繼發(fā)性骨癌)相關(guān)的骨丟失和骨痛的方法，所述方法包括給所述受 試者施用治療有效量的藥物組合物，所述藥物組合物包含式I化合物，優(yōu)選實(shí)例38a，以及 可藥用載體。所述治療劑的施用可在骨癌特征性癥狀顯現(xiàn)的同時(shí)進(jìn)行以對(duì)抗骨丟失和骨 痛。優(yōu)選地，所述繼發(fā)性骨癌包括來(lái)自乳腺、肺和前列腺癌的置_，最優(yōu)選乳腺癌轉(zhuǎn)移。在一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明提供在有需要的受試者中預(yù)防骨癌(包括原發(fā)性骨癌和 繼發(fā)性骨癌，優(yōu)選繼發(fā)性骨癌)的方法，所述方法包括給所述受試者施用預(yù)防有效量的藥 物組合物，所述藥物組合物包含可藥用載體和式I化合物，優(yōu)選實(shí)例38a，和可藥用載體。所 述預(yù)防劑的施用可在骨癌特征性癥狀顯現(xiàn)之前進(jìn)行，使得該疾病得以預(yù)防，或其發(fā)展受到 延緩。優(yōu)選地，所述繼發(fā)性骨癌包括來(lái)自乳腺、肺和前列腺癌的置_，最優(yōu)選乳腺癌轉(zhuǎn)移。在另一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明提供在有需要的受試者中預(yù)防與骨癌(包括原發(fā)性 骨癌和繼發(fā)性骨癌，優(yōu)選繼發(fā)性骨癌)相關(guān)的骨丟失的方法，所述方法包括給所述受試者 施用預(yù)防有效量的藥物組合物，所述藥物組合物包含可藥用載體和式I化合物，優(yōu)選實(shí)例 38a，和可藥用載體。所述預(yù)防劑的施用可在骨癌特征性的骨丟失癥狀顯現(xiàn)之前進(jìn)行，使得 該疾病得以預(yù)防，或其發(fā)展受到延緩。優(yōu)選地，所述繼發(fā)性骨癌包括來(lái)自乳腺、肺和前列腺 癌的骨轉(zhuǎn)移，最優(yōu)選乳腺癌轉(zhuǎn)移。在另一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明提供在有需要的受試者中預(yù)防與骨癌(包括原發(fā)性骨 癌和繼發(fā)性骨癌，優(yōu)選繼發(fā)性骨癌)相關(guān)的骨痛的方法，所述方法包括給所述受試者施用 預(yù)防有效量的藥物組合物，所述藥物組合物包含可藥用載體和式I化合物，優(yōu)選實(shí)例38a， 和可藥用載體。所述預(yù)防劑的施用可在骨癌特征性的骨痛癥狀顯現(xiàn)之前進(jìn)行，使得該疾病 得以預(yù)防，或其發(fā)展受到延緩。優(yōu)選地，所述繼發(fā)性骨癌包括來(lái)自乳腺、肺和前列腺癌的1 _，最優(yōu)選乳腺癌轉(zhuǎn)移。術(shù)語(yǔ)“MM^M”指可在受試者中抑制或延緩疾病的發(fā)作的活性化合物或藥劑 的量，其中抑制或延緩疾病的發(fā)作是研究人員、獸醫(yī)、醫(yī)生或其他臨床醫(yī)師正在尋求的。本文所用的術(shù)語(yǔ)“治療有效量”指在警試者中引起牛物學(xué)響應(yīng)或醫(yī)學(xué)響應(yīng)的活件 化合物或藥劑的量，其中引起生物學(xué)響應(yīng)或醫(yī)學(xué)響應(yīng)是研究人員、獸醫(yī)、醫(yī)生或其他臨床醫(yī) 師正在尋求的，其包括緩解所治療病患或疾病的癥狀。用于確定包含本發(fā)明化合物的藥物組合物的治療或預(yù)防有效劑量的方法在本文 中有公開(kāi)并且是本領(lǐng)域已知的。在本發(fā)明預(yù)防和治療方法的又一方面，本發(fā)明涵蓋用于治療患有骨癌(包括原發(fā) 性骨癌和繼發(fā)性骨癌，優(yōu)選繼發(fā)性骨癌)以及與所述骨癌相關(guān)的骨丟失和骨痛的患者的聯(lián) 合療法，或用于在有發(fā)展骨癌(包括原發(fā)性骨癌和繼發(fā)性骨癌，優(yōu)選繼發(fā)性骨癌)以及與所 述骨癌相關(guān)的骨丟失和骨痛的風(fēng)險(xiǎn)(或易于發(fā)展骨癌，包括原發(fā)性骨癌和繼發(fā)性骨癌，優(yōu) 選繼發(fā)性骨癌，以及與所述骨癌相關(guān)的骨丟失和骨痛)的患者中進(jìn)行預(yù)防的聯(lián)合療法。優(yōu) 選地，所述繼發(fā)性骨癌包括來(lái)自乳腺、肺和前列腺癌的骨轉(zhuǎn)移,最優(yōu)選乳腺癌轉(zhuǎn)移。
142[1077]該聯(lián)合療法包括給所述患者施用治療或預(yù)防有效量的藥物組合物和一種或多種 其他抗細(xì)胞增殖療法(包括化學(xué)療法、放射療法、基因療法和免疫療法)，所述藥物組合物 包含本發(fā)明化合物和可藥用載體。本t所用的“化學(xué)療法”指渉及化學(xué)治療劑的療法。有多種化學(xué)治療劑可用于本 文所公開(kāi)的聯(lián)合治療方法?？煽紤]的示例性化學(xué)治療劑包括(但不限于)鉬化合物(如， 順鉬、卡鉬、奧沙利鉬)；紫杉烷化合物(如，紫杉醇、多烯紫杉醇)；喜樹(shù)堿化合物(依立替 康、托泊替康)；長(zhǎng)春花生物堿(如，長(zhǎng)春新堿、長(zhǎng)春堿、長(zhǎng)春瑞濱)；抗腫瘤核苷衍生物(如， 5-氟尿嘧啶、亞葉酸、吉西他濱、卡培他濱)；烷化劑(如，環(huán)磷酰胺、卡莫司汀、洛莫司汀、噻 替哌)；表鬼臼毒素類/鬼臼毒素類(如，依托泊苷、替尼泊苷)；芳香酶抑制劑(如，阿那曲 唑、來(lái)曲唑、依西美坦)；抗雌激素化合物(如，他莫昔芬、氟維司群)、抗葉酸劑(如，培美曲 塞二鈉)；低甲基化劑(如，氮雜胞苷)；生物制劑(如，吉姆單抗、西妥昔單抗、利妥昔單抗、 帕妥珠單抗、曲妥單抗、貝伐單抗、埃羅替尼)；抗生素/蒽環(huán)類抗生素(如，伊達(dá)比星、放線 菌素D、博來(lái)霉素、柔紅霉素、多柔比星、絲裂霉素C、更生霉素、去甲柔紅霉素、道諾霉素)； 抗代謝劑(如，氨喋呤、氯法拉濱、阿糖胞苷、甲氨蝶呤)；微管蛋白結(jié)合劑(如，考布他汀、 秋水仙堿、諾考達(dá)唑)；拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑(如，喜樹(shù)堿)。另外可用的藥劑包括維拉帕米， 其為鈣拮抗劑，發(fā)現(xiàn)可用于與抗腫瘤劑聯(lián)合以在對(duì)所接受的化學(xué)治療劑有抗性的腫瘤細(xì)胞 中建立化學(xué)敏感性以及加強(qiáng)這類化合物在藥物敏感的惡性腫瘤中的功效(參見(jiàn)，Simpson WG, Cell Calcium. 1985Dec ；6 (6) :449_67)。另外，尚未出現(xiàn)的化學(xué)治療劑也認(rèn)為可用于與 本發(fā)明化合物聯(lián)合。本文所用的“放射療法”指包括將有需要的警試者暴露于輻射的療法。這種療法 是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。放射療法的合適方案將與其中放射療法單獨(dú)使用或與其他化學(xué) 療法聯(lián)合使用的臨床療法中已經(jīng)采用的那些方案相似。本文所用的“基因療法”指靶向渉及腫瘤發(fā)展的特定基因的療法?？赡艿幕?療法策略包括缺陷型癌抑制基因的恢復(fù)、用對(duì)應(yīng)于編碼生長(zhǎng)因子及其受體的基因的反義 基因進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)或轉(zhuǎn)染、基于RNA的策略例如核酶、RNA誘餌、反義信使RNA和小干擾 RNA(SiRNA)分子和所謂的'自殺基因'。本文所用的“免疫療法”指靶向渉及腫瘤發(fā)展的特定蛋白質(zhì)的療法,其是通過(guò)這類 蛋白的特異性抗體來(lái)進(jìn)行。例如，已將抗血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的單克隆抗體用于治療癌癥。如果除了包含本發(fā)明化合物的藥物組合物外還使用第二藥物組合物，則可將兩種 藥劑在大致相同的時(shí)間以任一順序依次同時(shí)施用(例如以單獨(dú)的或整體的組合物施用)， 或以單獨(dú)的給藥方案施用。在后一種情形中，兩種藥物組合物將在一定時(shí)期內(nèi)，以足以確保 可實(shí)現(xiàn)有利或協(xié)同效果的量和方式施用。應(yīng)當(dāng)理解，優(yōu)選的施用方法和順序以及該組合的 每種組分各自的劑量和給藥方案將取決于與本發(fā)明藥物組合物協(xié)同施用的具體化學(xué)治療 劑、它們的施用途徑、所治療的具體腫瘤以及所治療的具體宿主。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員將理解，合適的化學(xué)治療劑的劑量將通常類似于或低于其中 化學(xué)治療劑單獨(dú)施用或與其他化學(xué)療法聯(lián)合施用的臨床療法中已經(jīng)采用的劑量。最佳的施 用方法和順序以及劑量和給藥方案可由本領(lǐng)域技術(shù)人員用常規(guī)的方法以及在考慮本文所 列信息情況下容易地確定。劑量可每療程施用例如一次、兩次或更多次，該療程可例如每7、14、21或28天重復(fù)進(jìn)行?？蓪⒈景l(fā)明的藥物組合物系統(tǒng)地施用給受試者，例如以靜脈內(nèi)、口服、皮下、肌內(nèi)、 真皮內(nèi)或非腸道的方式施用。也可將本發(fā)明的藥物組合物局部地施用給受試者。局部遞送 系統(tǒng)的非限制性例子包括使用管腔內(nèi)的醫(yī)療器械，包括血管內(nèi)藥物遞送導(dǎo)管、絲線、藥理學(xué) 支架和腔內(nèi)敷膜。還可將本發(fā)明的藥物組合物與靶向劑聯(lián)合施用給受試者，以在靶標(biāo)部位實(shí)現(xiàn)高的 局部濃度。此外，可將本發(fā)明的藥物組合物配制成快速釋放或緩慢釋放，以使藥物或藥劑與 靶組織保持接觸數(shù)小時(shí)至數(shù)周的時(shí)間。本t所用的術(shù)語(yǔ)“纟目合物”旨在涵蓋包含規(guī)定量的規(guī)定成分的產(chǎn)品，以及通過(guò)組合 規(guī)定量的規(guī)定成分而直接或間接得到的任何產(chǎn)品。本文所用的短語(yǔ)“E^fflffi”指當(dāng)施用給動(dòng)物或人(如果適用的話)時(shí)，不會(huì)產(chǎn)生 不利的、變應(yīng)性的或其他不利的反應(yīng)的分子實(shí)體和組合物。獸用用途同樣包括在本發(fā)明內(nèi)， “可藥用”制劑包括用于臨床和/或獸用用途兩者的制劑。本發(fā)明的藥物組合物包含根據(jù)常規(guī)的藥物配混技術(shù)與藥用載體緊密混合的式I 化合物(作為活性成分)，取決于給藥(如口服或諸如肌內(nèi)注射之類的腸胃外給藥)所需的 制劑形式，所述載體可采取各種各樣的形式。本發(fā)明的藥物組合物可含有約0. Img至lOOOmg，優(yōu)選約100至500mg的式I化合 物，并且可以配成任何適合于所選給藥模式的形式。_包括必要的且惰性的藥用賦形劑，包括但不限于粘結(jié)劑、懸浮劑、潤(rùn)滑劑、矯 味劑、甜味劑、防腐劑、染料和包衣材料。適用于口服給藥的組合物包括固體形式，例如丸 劑、片劑、小膠囊劑、膠囊劑(各包括速釋型、定時(shí)釋放型和持續(xù)釋放型)、顆粒劑和散劑；以 及液體形式，如溶液劑、糖漿劑、酏劑、乳劑和混懸劑?？捎糜谀c胃外給藥的形式包括無(wú)菌溶 液劑、乳劑和混懸劑。在制備口服劑型的組合物時(shí)，可以采用任何常用的藥用介質(zhì)。因而，對(duì)于液體口 服制劑，例如混懸劑、酏劑和溶液劑，合適的載體和添加劑包括水、二醇類、油類、醇類、調(diào)味 劑、防腐劑、著色劑等；對(duì)于固體口服制劑，例如散劑、膠囊劑、小膠囊劑、軟膠囊劑和片劑， 合適的載體和添加劑包括淀粉、糖、稀釋劑、?；瘎?、潤(rùn)滑劑、粘結(jié)劑、崩解劑等。由于其在給 藥方面的方便性，片劑和膠囊劑代表了最有利的口服單位劑型，在該情形中顯然采用固體 藥用載體。如果需要，片劑可通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)包糖衣或包腸溶衣。對(duì)于腸胃外給藥劑型，載體將通常包含無(wú)菌水，不過(guò)還可包含其它成分，例如用于 諸如幫助溶解或防腐之類的目的。還可以制備可注射混懸劑，在該情形中，可以采用合適的液態(tài)載體、懸浮劑等。本發(fā)明的藥物組合物還包括用于緩慢釋放式I化合物的藥物組合物。該組合物包 含緩釋載體(通常為聚合物型載體)和式I化合物。緩釋的可生物降解載體是本領(lǐng)域所熟知的。這些是可形成顆粒的材料，所形成的 顆粒在其中封閉有活性化合物并在合適的環(huán)境(如水性、酸性、堿性環(huán)境等)下緩慢降解/ 溶解，從而在體液中降解/溶解并釋放出其中的活性化合物。顆粒優(yōu)選為納米顆粒(即，直 徑范圍為約1至500nm，優(yōu)選直徑為約50-200nm，最優(yōu)選直徑為約IOOnm)。在制備用于緩釋的制劑時(shí)，將緩釋載體(通常為聚合物型載體)和本發(fā)明化合物
144首先溶解或擴(kuò)散于有機(jī)溶劑中。然后將獲得的有機(jī)溶劑加至水溶液中以獲得水包油型乳 劑。優(yōu)選的是，該水溶液包含表面活性劑。隨后，將有機(jī)溶劑從該水包油乳劑蒸發(fā)，以獲得 含有緩釋載體和本發(fā)明化合物的顆粒的膠態(tài)懸浮液。本文的藥物組合物每劑量單位(如每片、每粒膠囊、每份散劑、每支注射劑、每茶 匙等)將包含為遞送上述有效劑量所需的活性成分量。本文的藥物組合物每單位劑量單 位(如每片、每粒膠囊、每份散劑、每支注射劑、每只栓劑、每茶匙等)將含有約0. Olmg至 200mg/kg體重/天，優(yōu)選約0. 03至約100mg/kg體重/天，最優(yōu)選約2至40mg/kg/天。最優(yōu)選的是，JNJ-141的制劑包含硅化微晶纖維素、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、硬脂酸 鎂、丁基化羥基苯甲醚和丁基化羥基甲苯。該組合物可按照每天1到5次的給藥方案進(jìn)行施用。然而，取決于患者的要求、正 在治療的病癥的嚴(yán)重性和所采用的具體的式I化合物，劑量可以變化。可以采用每日給藥 或周其月后給藥(post-periodic dosing)。優(yōu)選的是，本發(fā)明的藥物組合物為單位劑型，例如片劑、丸劑、膠囊劑、散劑、顆粒 劑、腸胃外用無(wú)菌溶液劑或混懸劑、計(jì)量氣霧劑或液體噴霧劑、滴劑、安瓿劑、自動(dòng)注射裝置 或栓劑；用于口服給藥、腸胃外給藥、鼻內(nèi)給藥、舌下或直腸給藥，或用于通過(guò)吸入或吹入給 藥?；蛘?，藥物組合物可以適用于每周一次或每月一次給藥的形式呈現(xiàn)；例如活性化合物的 不溶性鹽(如癸酸鹽)可適于提供用于肌內(nèi)注射的貯庫(kù)型制劑(cbpot pr印aration)。為制備諸如片劑之類的固體組合物，將主要的活性成分與藥用載體(如常規(guī)的制 片成分，例如玉米淀粉、乳糖、蔗糖、山梨醇、滑石粉、硬脂酸、硬脂酸鎂、磷酸二鈣或樹(shù)膠) 以及其它藥用稀釋劑(如水)混合，以形成含有本發(fā)明化合物或其可藥用鹽的均勻混合物 的固體預(yù)配制組合物。當(dāng)將這些預(yù)配制組合物稱為均勻時(shí)，是意指活性成分在整個(gè)組合物 中均勻分散，以便該組合物可容易細(xì)分成等效劑型，例如片劑、丸劑和膠囊劑。然后將這種 預(yù)配制組合物細(xì)分成含有0. 1至約500mg本發(fā)明活性成分的上述類型的單位劑型。可對(duì)本發(fā)明的藥物組合物的片劑或丸劑進(jìn)行包衣或以別的方式進(jìn)行配混，以提供 具有長(zhǎng)效作用優(yōu)點(diǎn)的劑型。例如，片劑或丸劑可包含內(nèi)劑量組分和外劑量組分，后者為覆蓋 前者的包層的形式。這兩種組分可通過(guò)腸溶層分開(kāi)，該腸溶層起到防止在胃中崩解的作用， 進(jìn)而使內(nèi)組分完整地進(jìn)入十二指腸或得以延遲釋放。有多種材料可用于這種腸溶層或包 衣，這類材料包括多種聚合酸與諸如紫膠、乙?；己痛姿崂w維素之類的材料?？蓳饺胧絀化合物以供口服或注射給藥的液體形式包括水溶液劑、適當(dāng)調(diào)味的糖 漿劑、水性或油性混懸劑和具有食用油(例如棉籽油、芝蔴油、椰子油或花生油)的調(diào)味乳 劑，以及酏劑和類似的藥用溶媒。適用于水性混懸劑的合適分散劑或懸浮劑包括合成膠或 天然膠(例如黃蓍膠、阿拉伯樹(shù)膠、藻酸鹽、葡聚糖、羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、聚乙烯 基-吡咯烷酮或明膠。適當(dāng)調(diào)味的懸浮劑或分散劑中的液體形式還可包括合成的和天然的 膠，例如黃蓍膠、阿拉伯樹(shù)膠、甲基纖維素等。對(duì)于腸胃外給藥，無(wú)菌混懸劑和溶液劑是所需 的。當(dāng)需要進(jìn)行靜脈內(nèi)給藥時(shí)，采用通常包含合適防腐劑的等滲制劑。有利的是，用于本發(fā)明的藥物組合物可以單份日劑量施用，或總的日劑量可以每 日二次、三次或四次的分開(kāi)劑量施用。本領(lǐng)域技術(shù)人員可容易地確定待施用的最佳劑量，并 且最佳劑量將隨所使用的具體化合物、給藥模式、制劑強(qiáng)度、給藥模式和疾病狀況的進(jìn)展而 變化。此外，與正在治療的具體患者相關(guān)的因素，包括患者年齡、體重、飲食以及給藥時(shí)間，將導(dǎo)致需要調(diào)節(jié)劑量。施用本發(fā)明化合物的另一備選方法可以是通過(guò)將化合物綴合至靶向劑，該靶向劑 將綴合物引導(dǎo)至其預(yù)定的作用部位，即引導(dǎo)至骨腫瘤細(xì)胞、繼發(fā)性骨腫瘤細(xì)胞或骨腫瘤相 關(guān)的巨噬細(xì)胞或破骨細(xì)胞。抗體和非抗體靶向劑兩者均可使用。因?yàn)榘邢騽┡c其相應(yīng)的 結(jié)合伴侶之間有特異性的相互作用，所以可將本發(fā)明化合物以高的局部濃度施用在靶標(biāo)部 位處或附近，因而可更有效地在靶標(biāo)部位對(duì)疾病進(jìn)行治療。例如，可將雙膦酸酯基團(tuán)加至 JNJ-141，以便將其引導(dǎo)至骨。當(dāng)諸如抗體或生長(zhǎng)因子之類的蛋白質(zhì)或多糖用作靶向劑時(shí)，它們優(yōu)選以可注射組 合物的形式施用。就骨癌而言，腔內(nèi)給藥可能是優(yōu)選的。綴合至靶向劑的本發(fā)明化合物的治療有效劑量取決于個(gè)體、骨癌類型和狀態(tài)以及 其他臨床因素。該有效劑量可用得自動(dòng)物模型的數(shù)據(jù)(包括本文給出的那些)而容易地確定。雖然上述說(shuō)明書以提供實(shí)例用于說(shuō)明目的的方式教導(dǎo)了本發(fā)明的原理，但應(yīng)當(dāng)理 解本發(fā)明的實(shí)踐涵蓋了在如下權(quán)利要求書和它們的等同物范圍內(nèi)的所有常見(jiàn)變型形式、修 改形式和/或修飾形式。
14權(quán)利要求
一種在有需要的受試者中治療骨癌的方法，所述方法包括向所述受試者施用治療有效量的藥物組合物，所述藥物組合物包含可藥用載體和式I化合物或其溶劑化物、水合物、互變異構(gòu)體或可藥用鹽其中A為苯基或吡啶基，其任一者可被氯、氟、甲基、 N3、 NH2、 NH(烷基)、 N(烷基)2、 S(烷基)、 O(烷基)或4 氨基苯基中的一者取代；W為吡咯基、咪唑基、異噁唑基、噁唑基、1，2，4 三唑基或呋喃基，其任一者可通過(guò)任何碳原子連接，其中所述吡咯基、咪唑基、異噁唑基、噁唑基、1，2，4 三唑基或呋喃基可含有一個(gè)連接至任何其他碳的 Cl、 CN、 NO2、 OMe或 CF3取代基；R2為環(huán)烷基、噻吩基、二氫砜代吡喃基、苯基、呋喃基、四氫吡啶基或二氫吡喃基，其任一者可獨(dú)立地由每個(gè)如下基團(tuán)中的一者或兩者取代氯、氟和C(1 3)烷基，前提條件是，四氫吡啶基通過(guò)碳 碳鍵連接至環(huán)A；X為Z為CH或N；D1和D2各自為氫或合在一起形成連接氧的雙鍵；D3和D4各自為氫或合在一起形成連接氧的雙鍵；D5為氫或 CH3，其中所述 CH3可相對(duì)地取向?yàn)轫樖交蚍词?；Ra和Rb獨(dú)立地為氫、環(huán)烷基、鹵代烷基、芳基、芳烷基、雜芳基或雜芳烷基；E為N、S、O、SO或SO2，前提條件是，如果同時(shí)滿足以下三個(gè)條件則E不可以為NQa不存在；Qb不存在；且R3為其中與E的連接點(diǎn)為N的氨基或環(huán)氨基；Qa為不存在、 CH2 、 CH2CH2 或C(O)；Qb為不存在、 NH 、 CH2 、 CH2CH2 或C(O)，前提條件是，如果Qa為C(O)則Qb不可以為C(O)，另外的前提條件是，如果E為N且Qa不存在則Qb不可以為 NH ，進(jìn)一步的前提條件是，如果R3為其中與Qb的連接點(diǎn)為N的氨基或環(huán)氨基則Qb不可以為 NH ；R3為氫、羥烷基氨基、(羥烷基)2氨基、烷基氨基、氨基烷基、二羥基烷基、烷氧基、二烷基氨基、羥烷基、 COOH、 CONH2、 CN、 SO2 烷基 R4、 NH2，或含有至少一個(gè)雜原子N并且可任選含有選自S、SO2、N和O的額外雜部分的5或6元環(huán)，并且所述5或6元環(huán)可以是飽和、部分不飽和或芳族的，其中所述5或6元環(huán)中的芳族氮可以作為N 氧化物存在，并且所述5或6元環(huán)可任選被甲基、鹵素、烷基氨基或烷氧基取代；R3也可以不存在，前提條件是當(dāng)E為氮時(shí)R3不能不存在；R4為氫、 OH、烷氧基、羧基、甲酰胺基或氨甲酰基。FPA00001176816600011.tif,FPA00001176816600012.tif
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中 A為苯基或吡啶基； X為 并且相對(duì)于-NHCO-W為對(duì)位取向。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其中W為3H-2-咪唑基-4-甲腈t
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其中R2為可被-
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其中 X為-個(gè)或兩個(gè)甲基取代的環(huán)己烯基。 Z為 CH ；D1 和 D2 各自為氫； D3 和 D4 各自為氫； D5為-CH3，其中所述-CH3可相對(duì)地取向?yàn)轫樖交蚍词剑?E為 N； Qb為 不存在、-CH2-, -CH2CH2-或C (0)，前提條件是，如果Qa為C (0)則Qb不可以為C (0)，另 外的前提條件是，如果R3為其中與Qb的連接點(diǎn)為N的氨基或環(huán)氨基則Qb不可以為-NH-；并 且R3為氫、羥烷基氨基、(羥烷基)2氨基、烷基氨基、氨基烷基、二羥基烷基、烷氧基、二烷 基氨基、羥烷基、-C00H、-CONH2, -CN、_S02_CH3、_NH2、吡啶基、吡啶基-N-氧化物或嗎啉基。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中 X為或
7. 或其溶劑化物、水合物、互變異構(gòu)體或可藥用鹽。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中所述骨癌為繼發(fā)性骨癌。
9.一種在有需要的受試者中預(yù)防骨癌的方法，所述方法包括向所述受試者施用預(yù)防有 效量的藥物組合物，所述藥物組合物包含可藥用載體和式I化合物或其溶劑化物、水合物、 互變異構(gòu)體或可藥用鹽 其中 A為苯基或吡啶基，其任一者可被氯、氟、甲基、-N3、-NH2, -NH(烷基)、-N(烷基)2、-S (烷 基)、-0 (烷基)或4-氨基苯基中的一者取代； W為吡咯基、咪唑基、異噁唑基、噁唑基、1，2，4-三唑基或呋喃基，其任一者可通過(guò)任何碳原 子連接，其中所述吡咯基、咪唑基、異噁唑基、噁唑基、1，2，4-三唑基或呋喃基可含有一個(gè)連 接至任何其他碳的-Cl、-CN、-NO2、-OMe或-CF3取代基； R2為:環(huán)烷基、噻吩基、二氫砜代吡喃基、苯基、呋喃基、四氫吡啶基或二氫吡喃基，其任一者 可獨(dú)立地由每個(gè)如下基團(tuán)中的一者或兩者取代氯、氟和C(1_3)烷基，前提條件是，四氫吡啶 基通過(guò)碳_碳鍵連接至所述環(huán)A ； X為Z為CH 或 N ； D1 和 D2各自為氫或合在一起形成連接氧的雙鍵； D3 和 D4各自為氫或合在一起形成連接氧的雙鍵； D5為氫或-CH3，其中所述-CH3可相對(duì)地取向?yàn)轫樖交蚍词剑?Ra和Rb獨(dú)立地為氫、環(huán)烷基、商代烷基、芳基、芳烷基、雜芳基或雜芳烷基； E為N、S、0、S0或SO2,前提條件是，如果同時(shí)滿足以下三個(gè)條件則E不可以為N =Qa不存在； Qb不存在；且R3為其中與E的連接點(diǎn)為N的氨基或環(huán)氨基； Qa為不存在、-CH2-、-CH2CH2-或 C (0)； Qb為不存在、-NH-、-CH2-、-CH2CH2-或C (0)，前提條件是，如果Qa為C (0)則Qb不可以為C (0)， 另外的前提條件是，如果E為N且Qa不存在則Qb不可以為-NH-，進(jìn)一步的前提條件是，如 果R3為其中與Qb的連接點(diǎn)為N的氨基或環(huán)氨基則Qb不可以為-NH-； R3為:氫、羥烷基氨基、(羥烷基)2氨基、烷基氨基、氨基烷基、二羥基烷基、烷氧基、二烷基氨 基、羥烷基、-C00H、-CONH2, -CN、-SO2-烷基-R4、-NH2,或含有至少一個(gè)雜原子N并且可任選 含有選自S、SO2、N和0的額外雜部分的5或6元環(huán)，并且所述5或6元環(huán)可以是飽和、部分 不飽和或芳族的，其中所述5或6元環(huán)中的芳族氮可以作為N-氧化物存在，并且所述5或 6元環(huán)可任選被甲基、商素、烷基氨基或烷氧基取代；R3也可以不存在，前提條件是當(dāng)E為氮 時(shí)R3不能不存在； R4為:氫、-0H、烷氧基、羧基、甲酰胺基或氨甲?；?。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其中 A為苯基或吡啶基； X為并且相對(duì)于-NHCO-W為對(duì)位取向。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其中W為3H-2-咪唑基-4-甲腈。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法，其中R2為可被一個(gè)或兩個(gè)甲基取代的環(huán)己烯基。
13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其中 X為 D1 和 D2 各自為氫； D3 和 D4 各自為氫； D5為-CH3，其中所述-CH3可相對(duì)地取向?yàn)轫樖交蚍词剑?E為 N； Qb為不存在、-CH2-, -CH2CH2-或C (0)，前提條件是，如果Qa為C (0)則Qb不可以為C (0)，另 外的前提條件是，如果R3為其中與Qb的連接點(diǎn)為N的氨基或環(huán)氨基則Qb不可以為-NH-；并 且R3為氫、羥烷基氨基、(羥烷基)2氨基、烷基氨基、氨基烷基、二羥基烷基、烷氧基、二烷 基氨基、羥烷基、-C00H、-CONH2, -CN、_S02_CH3、_NH2、吡啶基、吡啶基-N-氧化物或嗎啉基。
14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的方法，其中 X為
15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法，其中所述式I化合物為 或其溶劑化物、水合物、互變異構(gòu)體或可藥用鹽。
16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中所述骨癌為繼發(fā)性骨癌。
17.一種在有需要的受試者中預(yù)防與骨癌相關(guān)的骨丟失的方法，所述方法包括向所述 受試者施用預(yù)防有效量的藥物組合物，所述藥物組合物包含可藥用載體和式I化合物或其 溶劑化物、水合物、互變異構(gòu)體或可藥用鹽χ仗其中 A為 苯基或吡啶基，其任一者可被氯、氟、甲基、-N3、-NH2, -NH(烷基)、-N(烷基)2、-S (燒 基)、-0 (烷基)或4-氨基苯基中的一者取代； W為吡咯基、咪唑基、異噁唑基、噁唑基、1，2，4-三唑基或呋喃基，其任一者可通過(guò)任何碳原 子連接，其中所述吡咯基、咪唑基、異噁唑基、噁唑基、1，2，4-三唑基或呋喃基可含有一個(gè)連 接至任何其他碳的-Cl、-CN、-NO2、-OMe或-CF3取代基； R2為:環(huán)烷基、噻吩基、二氫砜代吡喃基、苯基、呋喃基、四氫吡啶基或二氫吡喃基，其任一者 可獨(dú)立地由每個(gè)如下基團(tuán)中的一者或兩者取代氯、氟和C(1_3)烷基，前提條件是，四氫吡唳 基通過(guò)碳_碳鍵連接至所述環(huán)A ； X為 D1 和 D2各自為氫或合在一起形成連接氧的雙鍵； D3 和 D4各自為氫或合在一起形成連接氧的雙鍵； D5為氫或-CH3，其中所述-CH3可相對(duì)地取向?yàn)轫樖交蚍词剑?Ra和Rb獨(dú)立地為氫、環(huán)烷基、商代烷基、芳基、芳烷基、雜芳基或雜芳烷基； E為N、S、0、S0或SO2,前提條件是，如果同時(shí)滿足以下三個(gè)條件則E不可以為N =Qa不存在； Qb不存在；且R3為其中與E的連接點(diǎn)為N的氨基或環(huán)氨基； Qa為不存在、-CH2-、-CH2CH2-或 C (0)； Qb為不存在、-NH-、-CH2-、-CH2CH2-或C (0)，前提條件是，如果Qa為C (0)則Qb不可以為C (0)， 另外的前提條件是，如果E為N且Qa不存在則Qb不可以為-NH-，進(jìn)一步的前提條件是，如 果R3為其中與Qb的連接點(diǎn)為N的氨基或環(huán)氨基則Qb不可以為-NH-； R3為:氫、羥烷基氨基、(羥烷基)2氨基、烷基氨基、氨基烷基、二羥基烷基、烷氧基、二烷基氨 基、羥烷基、-C00H、-CONH2, -CN、-SO2-烷基-R4、-NH2,或含有至少一個(gè)雜原子N并且可任選 含有選自S、SO2、N和0的額外雜部分的5或6元環(huán)，并且所述5或6元環(huán)可以是飽和、部分 不飽和或芳族的，其中所述5或6元環(huán)中的芳族氮可以作為N-氧化物存在，并且所述5或 6元環(huán)可任選由甲基、商素、烷基氨基或烷氧基取代；R3也可以不存在，前提條件是當(dāng)E為氮 時(shí)R3不能不存在； R4為:氫、-0H、烷氧基、羧基、甲酰胺基或氨甲?；?。
18.根據(jù)權(quán)利要求17所述的方法，其中 A為苯基或吡啶基； X為并且相對(duì)于-NHCO-W為對(duì)位取向。9
19.根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法，其中W為3H-2-咪唑基-4-甲腈。
20.根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中R2為可被一個(gè)或兩個(gè)甲基取代的環(huán)己烯基。
21.根據(jù)權(quán)利要求20所述的方法，其中 X為 或Z為 CH ；D1 和 D2 各自為氫； D3 和 D4 各自為氫； D5為-CH3，其中所述-CH3可相對(duì)地取向?yàn)轫樖交蚍词剑?E為 N； Qb為不存在、-CH2-, -CH2CH2-或C (0)，前提條件是，如果Qa為C (0)則Qb不可以為C (0)，另 外的前提條件是，如果R3為其中與Qb的連接點(diǎn)為N的氨基或環(huán)氨基則Qb不可以為-NH-；并 且R3為氫、羥烷基氨基、(羥烷基)2氨基、烷基氨基、氨基烷基、二羥基烷基、烷氧基、二烷 基氨基、羥烷基、-C00H、-CONH2, -CN、_S02_CH3、_NH2、吡啶基、吡啶基-N-氧化物或嗎啉基。
22.根據(jù)權(quán)利要求21所述的方法，其中 X為
23.根據(jù)權(quán)利要求22所述的方法，其中所述式I化合物為 或其溶劑化物、水合物、互變異構(gòu)體或可藥用鹽。
24.根據(jù)權(quán)利要求23所述的方法，其中所述骨癌為繼發(fā)性骨癌。
25.一種在有需要的受試者中治療與骨癌相關(guān)的骨丟失的方法，所述方法包括向所述 受試者施用治療有效量的藥物組合物，所述藥物組合物包含可藥用載體和式I化合物或其 溶劑化物、水合物、互變異構(gòu)體或可藥用鹽其中 A為 苯基或吡啶基，其任一者可被氯、氟、甲基、-N3、-NH2, -NH(烷基)、-N(烷基)2、-S (烷 基)、-0 (烷基)或4-氨基苯基中的一者取代； W為吡咯基、咪唑基、異噁唑基、噁唑基、1，2，4-三唑基或呋喃基，其任一者可通過(guò)任何碳原 子連接，其中所述吡咯基、咪唑基、異噁唑基、噁唑基、1，2，4-三唑基或呋喃基可含有一個(gè)連 接至任何其他碳的-Cl、-CN、-NO2、-OMe或-CF3取代基； R2為:環(huán)烷基、噻吩基、二氫砜代吡喃基、苯基、呋喃基、四氫吡啶基或二氫吡喃基，其任一者 可獨(dú)立地由每個(gè)如下基團(tuán)中的一者或兩者取代氯、氟和C(1_3)烷基，前提條件是，四氫吡啶 基通過(guò)碳_碳鍵連接至所述環(huán)A ； X為 各自為氫或合在一起形成連接氧的雙鍵； D3 和 D4各自為氫或合在一起形成連接氧的雙鍵； D5為氫或-CH3，其中所述-CH3可相對(duì)地取向?yàn)轫樖交蚍词剑?Ra和Rb獨(dú)立地為氫、環(huán)烷基、商代烷基、芳基、芳烷基、雜芳基或雜芳烷基； E為N、S、0、S0或SO2,前提條件是，如果同時(shí)滿足以下三個(gè)條件則E不可以為N =Qa不存在； Qb不存在；且R3為其中與E的連接點(diǎn)為N的氨基或環(huán)氨基； Qa為不存在、-CH2-、-CH2CH2-或 C (0)； Qb為不存在、-NH-、-CH2-、-CH2CH2-或C (0)，前提條件是，如果Qa為C (0)則Qb不可以為C (0)， 另外的前提條件是，如果E為N且Qa不存在則Qb不可以為-NH-，進(jìn)一步的前提條件是，如 果R3為其中與Qb的連接點(diǎn)為N的氨基或環(huán)氨基則Qb不可以為-NH-； R3為:氫、羥烷基氨基、(羥烷基)2氨基、烷基氨基、氨基烷基、二羥基烷基、烷氧基、二烷基氨 基、羥烷基、-C00H、-CONH2, -CN、-SO2-烷基-R4、-NH2,或含有至少一個(gè)雜原子N并且可任選 含有選自S、SO2、N和0的額外雜部分的5或6元環(huán)，并且所述5或6元環(huán)可以是飽和、部分 不飽和或芳族的，其中所述5或6元環(huán)中的芳族氮可以作為N-氧化物存在，并且所述5或 6元環(huán)可任選被甲基、商素、烷基氨基或烷氧基取代；R3也可以不存在，前提條件是當(dāng)E為氮 時(shí)R3不能不存在； R4為:氫、-0H、烷氧基、羧基、甲酰胺基或氨甲?；?br> 26.根據(jù)權(quán)利要求25所述的方法，其中 A為苯基或吡啶基； X為 并且相對(duì)于-NHCO-W為對(duì)位取向。
27.根據(jù)權(quán)利要求26所述的方法，其中W為3H-2-咪唑基-4-甲腈。
28.根據(jù)權(quán)利要求27所述的方法，其中R2為可被一個(gè)或兩個(gè)甲基取代的環(huán)己烯基。
29.根據(jù)權(quán)利要求28所述的方法，其中 X為Z為 CH ； D1 和 D2 各自為氫； D3 和 D4 各自為氫； D5為-CH3，其中所述-CH3可相對(duì)地取向?yàn)轫樖交蚍词剑?E為 N； Qb為不存在、-CH2-, -CH2CH2-或C (0)，前提條件是，如果Qa為C (0)則Qb不可以為C (0)，另 外的前提條件是，如果R3為其中與Qb的連接點(diǎn)為N的氨基或環(huán)氨基則Qb不可以為-NH-；并 且R3為氫、羥烷基氨基、(羥烷基)2氨基、烷基氨基、氨基烷基、二羥基烷基、烷氧基、二烷 基氨基、羥烷基、-C00H、-CONH2, -CN、_S02_CH3、_NH2、吡啶基、吡啶基-N-氧化物或嗎啉基。 30.根據(jù)權(quán)利要求29所述的方法，其中 X為
30.
31.根據(jù)權(quán)利要求30所述的方法，其中所述式I化合物為或其溶劑化物、水合物、互變異構(gòu)體或可藥用鹽。
32.根據(jù)權(quán)利要求31所述的方法，其中所述骨癌為繼發(fā)性骨癌。
33.一種在有需要的受試者中治療與骨癌相關(guān)的骨痛的方法，所述方法包括向所述受 試者施用治療有效量的藥物組合物，所述藥物組合物包含可藥用載體和式I化合物或其溶 劑化物、水合物、互變異構(gòu)體或可藥用鹽其中 A為 苯基或吡啶基，其任一者可被氯、氟、甲基、-N3、-NH2, -NH(烷基)、-Ν(烷基)2、-S (烷 基)、-O (烷基)或4-氨基苯基中的一者取代； W為吡咯基、咪唑基、異噁唑基、噁唑基、1，2，4-三唑基或呋喃基，其任一者可通過(guò)任何碳原 子連接，其中所述吡咯基、咪唑基、異噁唑基、噁唑基、1，2，4-三唑基或呋喃基可含有一個(gè)連 接至任何其他碳的-Cl、-CN、-NO2、-OMe或-CF3取代基； R2為:環(huán)烷基、噻吩基、二氫砜代吡喃基、苯基、呋喃基、四氫吡啶基或二氫吡喃基，其任一者 可獨(dú)立地由每個(gè)如下基團(tuán)中的一者或兩者取代氯、氟和C(1_3)烷基，前提條件是，四氫吡啶 基通過(guò)碳_碳鍵連接至所述環(huán)A ； CH 或 N ； D1 和 D2各自為氫或合在一起形成連接氧的雙鍵； D3 和 D4各自為氫或合在一起形成連接氧的雙鍵； D5為氫或-CH3，其中所述-CH3可相對(duì)地取向?yàn)轫樖交蚍词剑?Ra和Rb獨(dú)立地為氫、環(huán)烷基、商代烷基、芳基、芳烷基、雜芳基或雜芳烷基； E為N、S、0、S0或SO2,前提條件是，如果同時(shí)滿足以下三個(gè)條件則E不可以為N =Qa不存在； Qb不存在；且R3為其中與E的連接點(diǎn)為N的氨基或環(huán)氨基； Qa為不存在、-CH2-、-CH2CH2-或 C (0)； Qb為不存在、-NH-、-CH2-、-CH2CH2-或C (0)，前提條件是，如果Qa為C (0)則Qb不可以為C (0)， 另外的前提條件是，如果E為N且Qa不存在則Qb不可以為-NH-，進(jìn)一步的前提條件是，如 果R3為其中與Qb的連接點(diǎn)為N的氨基或環(huán)氨基則Qb不可以為-NH-； R3為:氫、羥烷基氨基、(羥烷基)2氨基、烷基氨基、氨基烷基、二羥基烷基、烷氧基、二烷基氨 基、羥烷基、-C00H、-CONH2, -CN、-SO2-烷基-R4、-NH2,或含有至少一個(gè)雜原子N并且可任選 含有選自S、SO2、N和0的額外雜部分的5或6元環(huán)，并且所述5或6元環(huán)可以是飽和、部分 不飽和或芳族的，其中所述5或6元環(huán)中的芳族氮可以作為N-氧化物存在，并且所述5或 6元環(huán)可任選由甲基、商素、烷基氨基或烷氧基取代；R3也可以不存在，前提條件是當(dāng)E為氮 時(shí)R3不能不存在； R4為:氫、-0H、烷氧基、羧基、甲酰胺基或氨甲酰基。 34.根據(jù)權(quán)利要求33所述的方法，其中
34. 并且相對(duì)于-NHCO-W為對(duì)位取向。
35.根據(jù)權(quán)利要求34所述的方法，其中W為3H-2-咪唑基-4-甲腈。
36.根據(jù)權(quán)利要求35所述的方法，其中R2為可被一個(gè)或兩個(gè)甲基取代的環(huán)己烯基。
37.根據(jù)權(quán)利要求36所述的方法，其中 X為或 D1 和 D2 各自為氫； D3 和 D4 各自為氫； D5為-CH3，其中所述-CH3可相對(duì)地取向?yàn)轫樖交蚍词剑?E為 N； Qb為不存在、-CH2-, -CH2CH2-或C (0)，前提條件是，如果Qa為C (0)則Qb不可以為C (0)，另 外的前提條件是，如果R3為其中與Qb的連接點(diǎn)為N的氨基或環(huán)氨基則Qb不可以為-NH-；并 且R3為氫、羥烷基氨基、(羥烷基)2氨基、烷基氨基、氨基烷基、二羥基烷基、烷氧基、二烷 基氨基、羥烷基、-C00H、-CONH2, -CN、_S02_CH3、_NH2、吡啶基、吡啶基-N-氧化物或嗎啉基。 38.根據(jù)權(quán)利要求37所述的方法，其中 X為
38.
39.根據(jù)權(quán)利要求38所述的方法，其中所述式I化合物為 或其溶劑化物、水合物、互變異構(gòu)體或可藥用鹽。
40.根據(jù)權(quán)利要求39所述的方法，其中所述骨癌為繼發(fā)性骨癌。
41.一種在有需要的受試者中預(yù)防與骨癌相關(guān)的骨痛的方法，所述方法包括向所述受 試者施用預(yù)防有效量的藥物組合物，所述藥物組合物包含可藥用載體和式I化合物或其溶 劑化物、水合物、互變異構(gòu)體或可藥用鹽其中 A為 苯基或吡啶基，其任一者可被氯、氟、甲基、-N3、-NH2, -NH(烷基)、-Ν(烷基)2、-S (烷 基)、-0 (烷基)或4-氨基苯基中的一者取代； W為吡咯基、咪唑基、異噁唑基、噁唑基、1，2，4-三唑基或呋喃基，其任一者可通過(guò)任何碳原 子連接，其中所述吡咯基、咪唑基、異噁唑基、噁唑基、1，2，4-三唑基或呋喃基可含有一個(gè)連 接至任何其他碳的-Cl、-CN、-NO2、-OMe或-CF3取代基； R2為:環(huán)烷基、噻吩基、二氫砜代吡喃基、苯基、呋喃基、四氫吡啶基或二氫吡喃基，其任一者 可獨(dú)立地由每個(gè)如下基團(tuán)中的一者或兩者取代氯、氟和C(1_3)烷基，前提條件是，四氫吡啶 基通過(guò)碳_碳鍵連接至所述環(huán)A ； 各自為氫或合在一起形成連接氧的雙鍵； D3 和 D4各自為氫或合在一起形成連接氧的雙鍵； D5為氫或-CH3，其中所述-CH3可相對(duì)地取向?yàn)轫樖交蚍词剑?Ra和Rb獨(dú)立地為氫、環(huán)烷基、商代烷基、芳基、芳烷基、雜芳基或雜芳烷基； E為N、S、0、S0或SO2,前提條件是，如果同時(shí)滿足以下三個(gè)條件則E不可以為N =Qa不存在； Qb不存在；且R3為其中與E的連接點(diǎn)為N的氨基或環(huán)氨基； Qa為不存在、-CH2-、-CH2CH2-或 C (0)； Qb為不存在、-NH-、-CH2-、-CH2CH2-或C (0)，前提條件是，如果Qa為C (0)則Qb不可以為C (0)， 另外的前提條件是，如果E為N且Qa不存在則Qb不可以為-NH-，進(jìn)一步的前提條件是，如 果R3為其中與Qb的連接點(diǎn)為N的氨基或環(huán)氨基則Qb不可以為-NH-； R3為:
42.氫、羥烷基氨基、(羥烷基)2氨基、烷基氨基、氨基烷基、二羥基烷基、烷氧基、二烷基氨 基、羥烷基、-C00H、-CONH2, -CN、-SO2-烷基-R4、-NH2,或含有至少一個(gè)雜原子N并且可任選 含有選自S、SO2、N和0的額外雜部分的5或6元環(huán)，并且所述5或6元環(huán)可以是飽和、部分 不飽和或芳族的，其中所述5或6元環(huán)中的芳族氮可以作為N-氧化物存在，并且所述5或 6元環(huán)可任選由甲基、商素、烷基氨基或烷氧基取代；R3也可以不存在，前提條件是當(dāng)E為氮 時(shí)R3不能不存在； R4為:氫、-0H、烷氧基、羧基、甲酰胺基或氨甲?；?42.根據(jù)權(quán)利要求41所述的方法，其中18CN 101917994 A權(quán)禾1J 要求書17/21頁(yè)D:D'D2 D3QbR3〇D1、R ΜRa、Nι或 RbX為并且相對(duì)于-NHCO-W為對(duì)位取向。
43.根據(jù)權(quán)利要求42所述的方法，其中W為3H-2-咪唑基-4-甲腈。
44.根據(jù)權(quán)利要求43所述的方法，其中R2為可被一個(gè)或兩個(gè)甲基取代的環(huán)己烯基。
45.根據(jù)權(quán)利要求44所述的方法，其中 X為 D1 和 D2 各自為氫； D3 和 D4 各自為氫； D5為-CH3，其中所述-CH3可相對(duì)地取向?yàn)轫樖交蚍词剑?E為 N； Qb為
46.不存在、-CH2-, -CH2CH2-或C (0)，前提條件是，如果Qa為C (0)則Qb不可以為C (0)，另 外的前提條件是，如果R3為其中與Qb的連接點(diǎn)為N的氨基或環(huán)氨基則Qb不可以為-NH-；并 且R3為氫、羥烷基氨基、(羥烷基)2氨基、烷基氨基、氨基烷基、二羥基烷基、烷氧基、二烷 基氨基、羥烷基、-C00H、-CONH2, -CN、_S02_CH3、_NH2、吡啶基、吡啶基-N-氧化物或嗎啉基。 46.根據(jù)權(quán)利要求45所述的方法，其中 X為
47.根據(jù)權(quán)利要求46所述的方法，其中所述式I化合物為或其溶劑化物、水合物、互變異構(gòu)體或可藥用鹽。
48.根據(jù)權(quán)利要求47所述的方法，其中所述骨癌為繼發(fā)性骨癌。
49.一種在有需要的受試者中治療骨癌的方法，所述方法包括向所述受試者施用治療 有效量的藥物組合物，所述藥物組合物包含可藥用載體和下式化合物或其溶劑化物、水合 物、互變異構(gòu)體或可藥用鹽，和可藥用載體
50.根據(jù)權(quán)利要求49所述的方法，還包括施用化學(xué)治療劑。
51.根據(jù)權(quán)利要求49所述的方法，其中所述藥物組合物是通過(guò)從管腔內(nèi)醫(yī)療裝置釋放 所述化合物通過(guò)可控遞送來(lái)給予。
52.根據(jù)權(quán)利要求49所述的方法，其中所述藥物組合物還包含靶向劑。
53.一種在有需要的受試者中預(yù)防骨癌的方法，所述方法包括向所述受試者施用預(yù)防 有效量的藥物組合物，所述藥物組合物包含可藥用載體和下式化合物或其溶劑化物、水合 物、互變異構(gòu)體或可藥用鹽，和可藥用載體
54.根據(jù)權(quán)利要求53所述的方法，還包括施用化學(xué)治療劑。
55.根據(jù)權(quán)利要求53所述的方法，其中所述藥物組合物是通過(guò)從管腔內(nèi)醫(yī)療裝置釋放 所述化合物通過(guò)可控遞送來(lái)給藥。
56.根據(jù)權(quán)利要求53所述的方法，其中所述藥物組合物還包含靶向劑。
57.一種在有需要的受試者中治療與骨癌相關(guān)的骨丟失的方法，所述方法包括向所述 受試者施用治療有效量的藥物組合物，所述藥物組合物包含可藥用載體和下式化合物或其 溶劑化物、水合物、互變異構(gòu)體或可藥用鹽，和可藥用載體
58.根據(jù)權(quán)利要求57所述的方法，還包括施用化學(xué)治療劑。
59.根據(jù)權(quán)利要求57所述的方法，其中所述藥物組合物是通過(guò)從管腔內(nèi)醫(yī)療裝置釋放 所述化合物通過(guò)可控遞送來(lái)給藥。
60.根據(jù)權(quán)利要求57所述的方法，其中所述藥物組合物還包含靶向劑。
61.一種在有需要的受試者中治療與骨癌相關(guān)的骨痛的方法，所述方法包括向所述受 試者施用治療有效量的藥物組合物，所述藥物組合物包含可藥用載體和下式化合物或其溶 劑化物、水合物、互變異構(gòu)體或可藥用鹽，和可藥用載體
62.根據(jù)權(quán)利要求61所述的方法，還包括施用化學(xué)治療劑。
63.根據(jù)權(quán)利要求61所述的方法，其中所述藥物組合物是通過(guò)從管腔內(nèi)醫(yī)療裝置釋放 所述化合物通過(guò)可控遞送來(lái)給藥。
64.根據(jù)權(quán)利要求61所述的方法，其中所述藥物組合物還包含靶向劑。
65.一種在有需要的受試者中預(yù)防與骨癌相關(guān)的骨痛的方法，所述方法包括向所述受 試者施用預(yù)防有效量的藥物組合物，所述藥物組合物包含可藥用載體和下式化合物或其溶 劑化物、水合物、互變異構(gòu)體或可藥用鹽，和可藥用載體
66.根據(jù)權(quán)利要求65所述的方法，還包括施用化學(xué)治療劑。
67.根據(jù)權(quán)利要求65所述的方法，其中所述藥物組合物是通過(guò)從管腔內(nèi)醫(yī)療裝置釋放 所述化合物通過(guò)可控遞送來(lái)給藥。
68.根據(jù)權(quán)利要求65所述的方法，其中所述藥物組合物還包含靶向劑。
69.一種在有需要的受試者中預(yù)防與骨癌相關(guān)的骨丟失的方法，所述方法包括向所述 受試者施用預(yù)防有效量的藥物組合物，所述藥物組合物包含可藥用載體和下式化合物或其 溶劑化物、水合物、互變異構(gòu)體或可藥用鹽，和可藥用載體
70.根據(jù)權(quán)利要求69所述的方法，還包括施用化學(xué)治療劑。
71.根據(jù)權(quán)利要求69所述的方法，其中所述藥物組合物是通過(guò)從管腔內(nèi)醫(yī)療裝置釋放 所述化合物通過(guò)可控遞送來(lái)給藥。
72.根據(jù)權(quán)利要求69所述的方法，其中所述藥物組合物還包含靶向劑。
全文摘要
本發(fā)明提供用于治療患有骨癌以及與骨癌相關(guān)的骨丟失和骨痛的受試者的治療方法，以及用于在有發(fā)展骨癌以及與骨癌相關(guān)的骨丟失和骨痛的風(fēng)險(xiǎn)(或易于發(fā)展骨癌以及與骨癌相關(guān)的骨丟失和骨痛)的受試者中進(jìn)行預(yù)防的預(yù)防方法，所述方法包括施用式I化合物或其溶劑化物、水合物、互變異構(gòu)體或可藥用鹽。
文檔編號(hào)A61K31/4439GK101917994SQ200880123752
公開(kāi)日2010年12月15日 申請(qǐng)日期2008年10月29日 優(yōu)先權(quán)日2007年11月2日
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