專利名稱：：與病毒相關腫瘤的成像和療法的制作方法與病毒相關腫瘤的成像和療法相關申請案交叉引用本案主張2007年4月10日遞交的序列號為60/922，755的美國臨時申請案和2007年5月25日遞交的序列號為60/931，921的美國臨時申請案的權益，上述兩案的整體內(nèi)容以引用形式倂入本發(fā)明。聯(lián)邦資助研究下進行的發(fā)明的權利聲明此項工作部分由NIH基金US24CA92871和P50CA96888資助。美國政府享有本發(fā)明部分權利。
技術領域：
：本發(fā)明涉及與病毒相關腫瘤的成像與治療方法，尤其涉及用于檢測、選擇用于監(jiān)控以及治療與病毒感染相關瘤形成的治療方法的組合物及方法。
背景技術：
：盡管很多人將EB病毒(Epstein-Barrvirus,EBV)與傳染性單核細胞增多癥關聯(lián)起來，EBV是一種牽涉多種人類癌癥包括伯基特淋巴瘤(Burkitt'slymphoma)、AIDS患者的淋巴瘤和全部何杰金癥(Hodgkin'sdisease)的半數(shù)病例的腫瘤病毒。包括人類乳突瘤病毒、乙肝病毒和EBV在內(nèi)的腫瘤病毒為造成人類所有癌癥中接近15%的原因。現(xiàn)存用于診斷、監(jiān)控和治療與病毒相關瘤形成的方法并不充分，因此急需改進的方法。
發(fā)明內(nèi)容如下文所述，本發(fā)明特色為用于診斷、監(jiān)控和治療與天然發(fā)生的感染(如病毒感染或細菌感染)相關的瘤形成的組合物和方法。一方面，本發(fā)明特色為用于治療病毒天然感染瘤形成的經(jīng)標記藥物組合物。所述組合物包括有效量的裂解誘導試劑，如蛋白酶體抑制齊ll(proteasomeinhibitor)、微管石皮壞齊U(microtubuledisruptingagent)、糖皮質(zhì)素(glucocorticoid)或甾類(steroid)激素、核苷類似物和抗炎劑，其用量優(yōu)選為足以在給予該組合物的受驗者體內(nèi)誘導病毒基因表達或病毒復制。此外，用以誘導病毒基因表達或病毒復制所需的量優(yōu)選為非細胞毒性的。裂解誘導試劑包括，但不限于，硼替佐米(Bortezomib)、曲尼司特(Tranilast)、來氟米特(Leflunomide)、甲苯達唑(Mebendazol)、阿糖胞苷(Cytarabine)和吲哚洛芬(Indoprofen)。一具體實施例中，所述藥物組合物可進一步包括2'-氟-2'-脫氧-e-D-5-碘尿嘧啶-呋喃阿拉伯糖苷(FIAU)的經(jīng)放射性標記的類似物。所述組合物可用于治療與諸如EB病毒(EBV)或卡波西氏肉瘤皰疹病毒(K即osi'ssarcomaherpesvirus)感染相關的瘤形成，所述瘤形成如淋巴瘤、胃癌、卡波西氏肉瘤或鼻咽癌。另一方面，本發(fā)明特色為用于診斷與天然發(fā)生的感染(如病毒感染或細菌感染)相關的瘤形成的藥物組合物。所述藥物組合物包括有效量的2'-氟-2'-脫氧-13-D-5-碘尿嘧啶-呋喃阿拉伯糖苷(FIAU)的經(jīng)放射性標記的類似物。所述經(jīng)放射性標記的組合物6可經(jīng)標記而通過SPECT或PET看見，如使用碘-123I、124I或125I。所述經(jīng)放射性標記的組合物可包括使用具有病毒裂解誘導試劑的組合物的說明書。—方面，本發(fā)明特色為用于治療與感染(如病毒感染或細菌感染)相關的瘤形成的藥物組合物。所述組合物包括有效量的2'-脫氧-5-碘-I-13-D-呋喃阿拉伯糖基尿嘧啶(FIAU)的經(jīng)放射性標記的類似物。所述標記可以是a、13或Y粒子輻射體，如^Y、^Re、188Re、64CU、67CU、212Pb、212Bi、123I、211At、213Bi或131I。放射性核素優(yōu)選放射至少約0.5至2戈雷(Gy)，且以約0.001至約0.1毫克/公斤(mg/kg)或約0.01至約0.lmg/kg濃度給予受驗者。所述組合物可用于治療與病毒(諸如EB病毒(EBV)或卡波西氏肉瘤皰疹病毒)感染相關瘤形成，所述瘤形成如淋巴瘤、胃癌、卡波西氏肉瘤或鼻咽癌。所述經(jīng)放射性標記的組合物可包括使用具有病毒裂解誘導試劑的組合物的說明書?！矫?，本發(fā)明特色為用于鑒定病毒裂解誘導試劑的方法。所述方法包括使具有潛在病毒感染的腫瘤細胞與試劑接觸，再檢測細胞內(nèi)病毒裂解多肽的表達或活性的增加或病毒復制的增加。可通過一種或多種ZTA表達、RTA表達、病毒胸苷激酶表達或活性的增加，來檢測細胞中病毒裂解多肽或基因的表達或活性。通過檢測諸如處于BZLFIE啟動子序列或Zta啟動子序列控制之下的報告體多肽或基因表達的增加，可測定所述病毒裂解多肽或基因的表達或活性。報告體包括，但不限于，例如使用微量培養(yǎng)盤判讀器檢測且與對照組相比較的相對熒光單位(RFU)的增加可予以檢測的熒光素酶(luciferase)或綠色熒光蛋白。病毒裂解誘導試劑包括，但不限于，蛋白酶體抑制劑、微管破壞劑、糖皮質(zhì)素或甾類激素、核苷類似物和抗炎劑。另一方面，本發(fā)明特色為用于檢測受驗者體內(nèi)與感染(如細菌感染或病毒感染)相關瘤形成的方法。所述方法包括給予受驗者有效量的病毒裂解誘導試劑和2'-脫氧-5-碘-I-P-D-呋喃阿拉伯糖基尿嘧啶(FIAU)的經(jīng)放射性標記的類似物，再使所述瘤形成可見化(文中另外有稱為視覺化或是可看見情況)。例如，所述經(jīng)放射性標記的類似物是使用碘-123I、124I或125I標記的，并使用如SPECT或PET而看見。所述方法可用于治療與病毒(諸如EB病毒(EBV)或卡波西氏肉瘤皰疹病毒)感染相關的瘤形成，所述瘤形成如淋巴瘤、胃癌、卡波西氏肉瘤或鼻咽癌?！矫?，本發(fā)明特色為選擇用于具有與感染相關的瘤形成的受驗者的治療方法。所述方法包括給予受驗者有效量的病毒裂解誘導試劑和2'-脫氧-5-碘-D-呋喃阿拉伯糖基尿嘧啶(FIAU)的經(jīng)放射性標記的類似物；以及檢測受驗者體內(nèi)裂解誘導存在與否。裂解誘導的增加鑒定出受驗者為可接受裂解誘導試劑治療和酶靶向放射性療法。另一方面，本發(fā)明特色為用于治療和預防受驗者體內(nèi)與感染(如病毒感染或細菌感染)相關瘤形成的方法。所述方法包括給予受驗者有效量的病毒裂解誘導試劑和2'-脫氧-5-碘-D-呋喃阿拉伯糖基尿嘧啶(FIAU)的經(jīng)放射性標記的類似物?！矫妫景l(fā)明特色為用于殺滅受病毒或細菌感染的腫瘤細胞的方法。所述方法包括使所述細胞與有效量的病毒裂解誘導試劑和2'-脫氧-5-碘-D-呋喃阿拉伯糖基尿嘧啶(FIAU)的經(jīng)放射性標記的類似物接觸。本發(fā)明的多個具體實施例中，舉例來說，所述裂解誘導試劑是蛋白酶體抑制劑、微管破壞劑、糖皮質(zhì)素或甾類激素、核苷類似物或抗炎劑。舉例來說，用于本發(fā)明的裂解誘導試劑的更具體實例包括硼替佐米、曲尼司特、來氟米特、甲苯達唑、阿糖胞苷和吲哚洛芬。本發(fā)明的多個具體實施例中，用于本發(fā)明的治療方法及組合物的放射性核素標記可以是a、P或Y粒子輻射體，如9QY86Re、腦Re、64Cu、67Cu,2pb、21281、1231、21^、21381舉例來說，本發(fā)明的多個具體實施例中，用于在SPECT或PET中成像用途的放射性核素標記是碘_1231、1241或1251。本發(fā)明的多個具體實施例中，與受如FB病毒(EBV)或卡波西氏肉瘤皰疹病毒感染相關的瘤形成，所述瘤形成為例如淋巴瘤、胃癌、卡波西氏肉瘤或鼻咽癌。—方面，本發(fā)明特色為用于診斷或監(jiān)控受驗者體內(nèi)與感染相關瘤形成的試劑盒。所述試劑盒包括有效量的病毒裂解誘導試劑和2'-脫氧-5-碘-D-呋喃阿拉伯糖基尿嘧啶(FIAU)的經(jīng)放射性標記的類似物，以及使用所述試劑盒診斷瘤形成的說明書。所述試劑盒可用于診斷或監(jiān)控與病毒感染或細菌感染(如與受諸如EB病毒(EBV)或卡波西氏肉瘤皰疹病毒感染)相關的瘤形成，所述瘤形成如淋巴瘤、胃癌、卡波西氏肉瘤或鼻咽癌。所述與感染相關瘤形成可以碘-123I、124I或125I作為放射性核素而使用SPECT或PET成像。所述裂解誘導試劑可以是蛋白酶體抑制劑、微管破壞劑、糖皮質(zhì)素或甾類激素、核苷類似物或抗炎劑，如硼替佐米、曲尼司特、來氟米特、甲苯達唑、阿糖胞苷或吲哚洛芬?！矫?，本發(fā)明特色為用于治療受驗者體內(nèi)與病毒相關瘤形成的試劑盒。所述試劑盒包括有效量的病毒裂解誘導試劑和2'-脫氧-5-碘-D-呋喃阿拉伯糖基尿嘧啶(FIAU)的經(jīng)放射性標記的類似物，以及使用所述試劑盒診斷瘤形成的說明書。所述裂解誘導試劑可以是蛋白酶體抑制劑、微管破壞劑、糖皮質(zhì)素或甾類激素、核苷類似物或抗炎劑，如硼替佐米、曲尼司特、來氟米特、甲苯達唑、阿糖胞苷和吲哚洛芬。所述與感染(例如EB病毒(EBV)或卡波西氏肉瘤皰疹病毒)相關的瘤形成例如為淋巴瘤、胃癌、卡波西氏肉瘤或鼻咽癌。—方面，本發(fā)明特色為殺滅細菌的方法，包含使細菌與2'-脫氧-5-碘-I-!3-D-呋喃阿拉伯糖基尿嘧啶(FIAU)的經(jīng)放射性標記的類似物接觸。所述放射性標記可以是a、P或Y輻射體，如9QY86Re88Re、64Cu、67Cu，Pb，Bi3l、2"ACi或1311。細菌包括革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌兩者。另一方面，本發(fā)明特色為治療受驗者體內(nèi)細菌感染的方法，所述方法包含給予受驗者有效量的2'-脫氧-5-碘-1_|3-0-呋喃阿拉伯糖基尿嘧啶(FIAU)的經(jīng)放射性標記的類似物。所述放射性標記可以是a、13或Y輻射體，如^Y、^Re、，Re，Cu,Cu、^Pb、212Bi、123I、211At、213Bi或mI。細菌包括革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌兩者。定義"天然感染(naturallyinfected)"指未經(jīng)人為干涉輔助即出現(xiàn)的感染。人為干涉的實例包括基因療法、細胞轉(zhuǎn)化或細胞轉(zhuǎn)染。"蛋白酶體抑制劑"指降低蛋白酶體活性(如使泛素化蛋白降解)的化合物。示例性蛋白酶體抑制劑包括，但不限于硼替佐米、乳胞素(Lactacystin)和MG132。"微管破壞劑"指中斷微管的生物功能、穩(wěn)定性或生長的試劑。示例性試劑包括秋水仙堿(colchicine)、脫羰秋水仙堿(demecolcine)、長春堿(vinblastine)、長春新堿(vincristine)、鬼臼毒素(podophyllotoxin)禾口諾考達唑(nocodazole)。"糖皮質(zhì)素"指合成或天然存在的皮質(zhì)甾類藥物或激素，是腎上腺所產(chǎn)生的內(nèi)源性8糖皮質(zhì)素的結(jié)構性或功能性類似物。示例性糖皮質(zhì)素包括脫氫皮質(zhì)醇(prednisolone)、甲基皮質(zhì)醇(methylprednisolone)、氫化可的松(hydrocortisone)、倍他米松(betamethasone)禾口地塞米松(dexamethasone)。"甾類激素"指具有四環(huán)的環(huán)戊烷并菲(cyclopent即henanthrene)骨架的合成或天然存在的藥物或激素。"核苷類似物"指具有糖和嘌呤或嘧啶堿基的合成或天然存在的化合物。示例性核苷類似物包括2'-氟-2'-脫氧-13-D-5-碘尿嘧啶_呋喃阿拉伯糖苷，以及各種脫氧腺苷類似物(如去羥肌苷(Didanosine)、阿糖腺苷(Vidarabine))、脫氧胞苷類似物(如阿糖胞苷、恩曲他濱(Emtricitabine)、拉米夫定(Lamivudine)、扎西他濱)(Zalcitabine)、脫氧鳥苷類似物(如阿巴卡韋(Abacavir))、脫氧胸苷類似物(如司他夫定(Stavudine)、齊多夫定(Zidovudine)、疊氮胸苷(Azidothymidine,AZT))和脫氧尿苷類似物(如碘苷(Idoxuridine)、曲氟尿苷(Trifluridine))。來氟米特、卩引哚洛芬、甲苯達唑"抗炎劑"指抑制發(fā)炎及其癥狀的試劑。示例性抗炎劑包括，但不限于N-(3，4-二甲氧基肉桂酰)鄰氨基苯甲酸(曲尼司特)、N-(4'-三氟甲基苯基)-5-甲基異惡唑-4-甲酰胺(來氟米特)、和非甾類抗炎藥(NSAIDs)。"改善"指降低、抑壓(su卯ression)、減毒、縮小、阻止或穩(wěn)定疾病的發(fā)展或進展。"類似物"指非同一但具有類似的功能或結(jié)構特點的分子。"改變"指經(jīng)如本文所闡述的那些
技術領域：
中已知的標準方法所檢測的基因或多肽表達水平或活性的變化(增加或降低)。本文所使用的改變包括表達水平的10%變化，優(yōu)選為表達水平的25%變化，更優(yōu)選為表達水平的40%變化，最優(yōu)選為表達水平的50%或更大變化。術語"瘤形成"包括以細胞過度增殖或生長、或細胞死亡減少為特征的惡性腫瘤。特定的具體實施例中，術語"癌癥"包括但不限于癌、肉瘤、白血病和淋巴瘤。術語"癌"還包括原發(fā)性惡性腫瘤，如腫瘤細胞尚未轉(zhuǎn)移至除原始腫瘤部位外的受驗者身體其他部位的惡性腫瘤；以及繼發(fā)性惡性腫瘤，如由轉(zhuǎn)移所產(chǎn)生的惡性腫瘤，該腫瘤細胞轉(zhuǎn)移至不同于原始腫瘤部位的繼發(fā)性部位。化合物"療法有效量"或"療法有效劑量"指對至少一種與待治療狀態(tài)、不適(disorder)或疾病有關或造成的癥狀提供可檢測的改進所必需或足夠的量。所述療法有效量可作為單劑或分時多劑給予?？赏瑫r使用兩種或多種化合物提供"療法有效量"來提供可檢測改進，其中單獨使用相同量的任一化合物均不足以提供療法有效量。術語"成像化合物"旨在包括能被視覺化的化合物或可用于視覺化細胞、組織或器官的化合物。例如，通過平面伽馬成像(planargammaimaging)、單光子發(fā)射型電腦斷層顯像(singlephotonemissioncomputedtomography，SPECT)或正電子成像術(positronemissiontomogr即hy，PET)。所述化合物可以是經(jīng)放射性標記的化合物或熒光化合物。特定的具體實施例中，所述化合物是結(jié)合至激酶，如胸苷激酶的核苷或核苷類似物。術語"病毒裂解誘導試劑"理解為誘導病毒改變其基因表達圖譜并開始表達與病毒粒子產(chǎn)生有關的RNA和蛋白質(zhì)的試劑。已經(jīng)誘導病毒裂解的跡象包括，但不限于，病毒多肽或多核苷酸(如與裂解階段有關的多肽)表達的增加或病毒復制的增加。用于測定多肽表達水平的方法包括，但不限于，用以測量多肽水平的免疫測定(如ELISA、蛋白質(zhì)印跡(Westernblot)或放射性免疫測定)。用于測定多核苷酸表達的方法為
技術領域：
已知方法和/或本文所闡述的方法。這些方法包括使用自所述核酸分子制備的任意合適片段作為雜交探針的微陣列分析、RNA印跡分析(Northernblotanalysis)和即時PCR(RT-PCR)。比較候選化合物存在下的基因表達水平和缺少候選分子的對照培養(yǎng)基中測得的水平。術語"藥物學可接受載劑"是
技術領域：
可認知的，包括適用于給予受驗者(如哺乳動物)本文所闡述方法中使用的化合物的藥物學可接受材料、組合物或運載子(vehicle)。所述載劑包括參與將目標試劑從一個器官或身體部分擔載或運輸?shù)搅硪黄鞴倩蛏眢w部分的液體或固體填料、稀釋劑、賦形劑、溶劑或膠囊化材料。從與配方的其他成分相容性且不傷害患者角度來看，各載劑必須是"可接受的"?？勺鳛樗幬飳W可接受載劑的材料的某些實例包括糖，如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉，如玉米淀粉和馬鈴薯淀粉；纖維素及其衍生物，如羧甲基纖維素鈉、以及乙基纖維素和醋酸纖維素；粉末化黃芪膠凌芽糖；明膠；滑石粉；賦形劑，如可可脂和栓蠟；油，如花生油、棉籽油、紅花油、芝麻油、橄欖油、玉米油和豆油；二醇類，如丙二醇；多元醇類，如甘油、山梨醇、甘露醇和聚乙二醇；酯類，如油酸乙酯和月桂酸乙酯；瓊脂；緩沖劑，如氫氧化鎂和氫氧化鋁；褐藻酸；無生膿原水；等滲鹽水；林格溶液；乙醇；磷酸鹽緩沖溶液；以及其他用于藥物配方的無毒性相容物質(zhì)。本文所使用術語"成像"指于給予細胞、組織或器官后，使用技術可見的可檢測化合物。一個具體實施例中，通過在給予后化合物的局部化來測量該化合物發(fā)射的能量來完成成像。所應用的成像技術如正電子成像術(PET)、SPECT-CT等。本文所使用的"正電子成像術成像"或"PET"涵蓋所有正電子成像術成像系統(tǒng)或等同者，以及所有能進行正電子成像術成像的裝置。本發(fā)明方法可藉由使用任何一種此類裝置、或PET裝置或等同者的變體、或與任何已知PET方法協(xié)同實施。如，見美國專利案US6，151，377;US6，072，177;US5，900，636;US5，608，221;US5，532，489;US5，272，343;US5，103，098，上述各專利均以引用方式并入本文。包括動物成像模態(tài)如微正電子成像術(micro-PETs)(CorcordeMicrosystems,Inc.)。圖1提供AGS細胞內(nèi)熒光素酶活性的四張定量圖。熒光素酶是在Zta啟動子(-5787+13)控制下被表達的。所述Zta啟動子在AGS細胞內(nèi)經(jīng)TPA、丁酸鹽和2-丙基戊酸鹽(valproate)活化。Zta啟動子不能被DNA轉(zhuǎn)甲基酶抑制劑5'-氮脫氧胞嘧啶(5，-Azadeoxycytidine)活化。圖2A至2C顯示重組病毒EBV誘導后AKATA-BX1細胞內(nèi)的GFP信號。圖2A包括4張顯示通過抗免疫球蛋白G抗體(anti-IgG)處理來誘導的重組EB病毒內(nèi)的GFP信號的顯微照片。使用倒置熒光顯微鏡檢查相位差和GFP表達。以anti-IgG誘導時，AKATA-BX1內(nèi)的GFP信號亮得多。通過微量培養(yǎng)盤判讀器檢測使用EBV裂解誘導的GFP信號提升。圖2B顯示誘導信號被抑制裂解性感染的藥物抑壓的的圖。PurvalanolA抑制EBV即刻早期基因(immediatelyearlygene)ZTA表達。圖2C是顯示GFP驅(qū)動的CMV啟動子未經(jīng)TPA、anti-IgG或5'-氮脫氧胞嘧啶活化的Hela細胞中GFP信號的圖。圖3是顯示AKATA-BX1細胞內(nèi)5_氮脫氧胞嘧啶誘導裂解性感染的GFP信號圖。圖4顯示GFP整體病毒測定的典型讀出。中間10列是80種庫存藥物。右邊平臺是沒有細胞或藥物的素基質(zhì)，以減少背景。左邊平臺上，前4孔是未經(jīng)任何處理的細胞，作為負對照；后4孔是以裂解誘導藥物處理的細胞，作為正對照。于第O天進行GFP讀數(shù)，以消除藥物的自發(fā)熒光。第3天，所述正對照孔已經(jīng)顯示急劇增加的GFP信號，任意與之相當?shù)淖x數(shù)均作為命中物。培養(yǎng)更長時間后顯示，某些孔的讀數(shù)低于平均值。io天后挑出抑壓命中物。圖5是顯示在上述兩種測定中核實已知用以誘導EBV內(nèi)裂解性感染的藥物的范氏圖(Vendiagram)。圖6顯示化合物曲尼司特和來氟米特能將AGS中BZLF1啟動子誘導高達至15倍。圖7A至7C顯示阿糖胞苷(Ara-c)結(jié)果。于體外(invitro)Ara-c誘導B細胞和上皮細胞中EBV裂解性感染。圖7A顯示Ara-c的結(jié)構式。圖7B是顯示熒光素酶測定中Ara-c誘導BZLFl啟動子的圖。圖7C是顯示LCL細胞中Ara-c誘導ZTA表達的蛋白質(zhì)印跡。圖8A至8D顯示Ara-C結(jié)果。于體外Ara-c誘導B細胞和上皮細胞中EBV裂解性感染。圖8A是顯示以1yMAra-c處理48小時的EBV陽性細胞株AKATA、LCL和SNU719的結(jié)果的蛋白質(zhì)印跡，并隨后通過蛋白質(zhì)印跡測定BZLF1蛋白質(zhì)進行EBVIE基因表達的測定。免疫印跡顯示Ara-c誘導EBV陽性細胞株中BZLF1蛋白質(zhì)的表達。圖8B提供6張顯示以1iiMAra-c處理48小時的EBV-陽性淋巴細胞樣細胞的顯微照片。進行免疫熒光測定以檢測BZLF1蛋白。將細胞以BZLF1(紅)染色，并用DAPI(藍)染色細胞核。通過1PMAra-c將40%的LCL細胞誘導為裂解性感染。圖8C使顯示Ara-c誘導EBV早前裂解基因TK表達的蛋白質(zhì)印跡。圖8D提供兩張顯示Ara-c不活化EBV病毒復制的圖。以1yMAra-c處理LCL和SNU719細胞48小時。即時PCR表明，經(jīng)Ara-c處理后，EBV病毒DNA拷貝數(shù)并未擴增。圖9A至9D顯示吲哚洛芬結(jié)果。圖9A顯示吲哚洛芬的結(jié)構式。圖9B是AGS中熒光素酶測定的定量結(jié)果圖，顯示吲哚洛芬能在10yM誘導BZLFl啟動子。圖9C是顯示吲哚洛芬誘導SNU719細胞中ZTA表達的蛋白質(zhì)印跡。圖9D是顯示吲哚洛芬不誘導SNU719細胞中EBV病毒復制的圖。圖IOA至IOC顯示硼替佐米結(jié)果。圖10A顯示兩張圖。圖IOA(左邊)顯示AGS細胞中熒光素酶測定的定量結(jié)果，顯示硼替佐米在10nM誘導BZLF1啟動子。圖10B(右邊)顯示在10nM，硼替佐米誘導AKATA-BX1細胞中GFP測定的GFP信號。圖10B顯示Rael細胞內(nèi)硼替佐米誘導的ZTA表達。圖10C顯示Rael細胞中硼替佐米誘導的EBV病毒復制。以20nM硼替佐米處理Rael細胞8小時，48小時后收集DNA。即時PCR表明，EBV病毒DNA拷貝數(shù)增加20倍。圖IIA至IIE顯示甲苯達唑結(jié)果。圖IIA顯示甲苯達唑的結(jié)構式。圖11B是顯示AGS細胞中熒光素酶測定的定量結(jié)果。這些結(jié)果顯示甲苯達唑在1PM誘導BZLF1啟動子。圖11C顯示，在liiM，甲苯達唑誘導AGS-BXl細胞中GFP測定中的GFP信號。圖IID是顯示甲苯達唑誘導LCL細胞和AKATA細胞中ZTA表達的蛋白質(zhì)印跡。甲苯達唑還誘導LCL細胞和Rael細胞中的EBV病毒復制。圖11D顯示即時PCR量化結(jié)果。以lyM甲苯達唑處理細胞48小時，收集DNA。即時PCR表明，EBV病毒DNA拷貝數(shù)增加20倍。圖12A至12D顯示硼替佐米誘導EBV-TK和Zta表達。圖12A和12B是顯示以硼替佐米處理后的EBV(+)伯基特細胞(Burkitt，scell)株(Rael)中之EBV-TK(A)和Zta(B)表達的免疫印跡。分離總細胞蛋白，并以每泳道10pg蛋白質(zhì)通過12XSDS-PAGE分離。圖12C是顯示以硼替佐米劑量依賴方式之Zta熒光素酶活性增加的圖。以硼替佐米處理表達Zta啟動子的AGS-HC13細胞，且測量熒光素酶活性(圖12C)。以硼替佐米處理后，EBV(+)伯基特細胞[EBV(+)Akata、EBV(+)Real而非EBV(-)伯基特細胞[EBV(-)Akata]中，[14C]FIAU的蓄積增加(圖12D)。"BL"指代伯基特淋巴瘤。圖13A至13D顯示硼替佐米上調(diào)GFP表達(13A和13B)禾PEBV病毒負載(13C)。圖13A是顯示以硼替佐米處理表達GFP的BX-1細胞48小時的效果的圖。圖13B包括兩張顯示48小時Rael細胞GFP表達的顯微照片。圖13C使顯示通過即時PCR測量的病毒負載的量化圖。圖13D為顯示由即時PCR測量的被擔載IkB超阻抑子IkB(sr)的表達載體和對照載體轉(zhuǎn)染的EBV(+)Rael細胞內(nèi)病毒負載的量化圖。圖14A和14B是顯示經(jīng)硼替佐米治療后，通過體內(nèi)平面伽馬閃爍掃描評估的伯基特淋巴瘤異種移植物[EBV(H-)Akata]攝入[125I]FIAU的時間進程的圖像。大箭頭指出腫瘤。黑色區(qū)域(圖14A，小箭頭)表示膀胱的鉛遮罩以改進所述圖像動態(tài)范圍。每一動物具有置于后肢內(nèi)的一個腫瘤。圖14A中，僅以PBS預處理的動物(對照組)中，沒有明顯的腫瘤攝入。圖14B中，在較晚時間點上，可見預處理動物(2iig/g硼替佐米)的腫瘤。離體(exvivo)生物分布圖像得自被犧牲的代表性動物，詳細的定量數(shù)據(jù)如表l。圖15A和15B顯示通過單光子發(fā)射型電腦斷層顯像/電腦斷層顯像(SPECT/CT(SPECT-CT))體內(nèi)評估的另一種EBV(+)伯基特淋巴瘤異種移植物(Akata)攝入[1251]FIAU的時間進程的圖像。箭頭指示腫瘤(直徑-lcm)。每一動物具有置于側(cè)腹部的一個腫瘤。圖15A顯示注射放射性藥物72小時后的[125I]FIAU腫瘤攝入。圖15B顯示96小時后的[^1]FIAU攝入。在給予放射性藥物24小時前，用硼替佐米(2yg/g，ix.)治療動物。腫瘤組織顯示為藍色，而骨(來自CT)顯示為紅色。圖16A至16D是顯示SPECT/CT(SPECT-CT)獲得的體內(nèi)骨肉瘤攝入[125I]FIAU的圖像。圖16A禾口16B顯示設計(engineered)成構成式表達(constitutivelyexpress)EBV-TK(TK143b)的骨肉瘤143b。圖16C和16D顯示以空載體(V143b)進行假工程化的骨肉瘤143b。如大箭頭所示，每一動物中均存在兩個腫瘤。黑色區(qū)域(圖16A，小箭頭)表示膀胱的鉛遮罩以改進所述圖像動態(tài)范圍。預先以硼替佐米(2iig/g)治療圖16C和16D中所顯示的動物，從而確定所述試劑是否導致可能是FIAU磷酸化原因的細胞激酶的上調(diào)。圖17是鼠科異種移植物模型中[125I]FIAU組織分布的圖。向植入EBV-TK(+)腫瘤的嚴重聯(lián)合免疫缺陷(severecombinedimmunodeficient，SCID)小鼠靜脈給予[125iiCi]FIAU。殺死動物(每一時間點3至4只)，并測量組織分布。顯示每公克組織之注射劑量(injecteddose，ID)的百分比。圖18A至18C是顯示腫瘤生長的曲線圖。圖19A是顯示具有對照腫瘤(具有空載體的人類骨肉瘤143B)或TK表達腫瘤(表達EBVTK的人類骨肉瘤143B細胞)的腫瘤生長小鼠的圖，其中，以1.6mCi[mi]FIAU的IV或緩沖鹽水處理。圖19B顯示腫瘤生長劑量回應。以緩沖鹽水、lmCi[mi]FIAU或3mCi[mi]FIAU處理具有EBV-TK表達腫瘤的小鼠。圖18C顯示以1.7mCi[wi]FIAU處理通過植入EBV-TK表達腫瘤細胞和對照腫瘤細胞混合物得到的腫瘤內(nèi)的腫瘤生長。每一時間點對應3只動物。繪制均值、SEM，并做最小二乘線性回12歸。腫瘤生長曲線最適線性回歸的斜率的可靠區(qū)間(CI，95%)見圖例說明的圓括號內(nèi)。圖19A至20顯示鼠科異種移植物中的腫瘤生長。圖19A顯示EBV(+)伯基特淋巴瘤(Rael);圖20B顯示EBV(+)胃腺癌(KT);圖19C顯示KSHV(+)原發(fā)滲出性淋巴瘤(BCBL1);上述腫瘤均經(jīng)過如下處理靜脈注射緩沖鹽水、靜脈注射緩沖鹽水24小時后靜脈注射[^1]FIAU、靜脈注射硼替佐米、或靜脈注射硼替佐米24小時后靜脈注射[131I]FIAU。每一時間點對應3只動物。繪制均值、SEM，并做最小二乘線性回歸。腫瘤生長曲線最適線性回歸的斜率的可靠區(qū)間(CI，95%)見圖例說明的圓括號內(nèi)。圖20A和20B顯示硼替佐米治療后腫瘤的[125I]FIAUSPECT-CT成像。圖20A顯示72小時p.i.的EBV(+)胃腺癌(KT)腫瘤。圖20B顯示48小時p.i.的KSHV(+)淋巴瘤(BCBL1)。黃色箭頭指示腫瘤位置。彩條指示以％ID/g((a)中0.68%，(b)中1.53%)計的「51]FIAU攝入范圍。圖21顯示KSHV腫瘤(BCBL1)的酶促分子放射性療法。圖22是顯示以[131I]FIAU和硼替佐米治療后KSHV腫瘤尺寸減小的圖。圖23是顯示"旁觀者效應"的示意圖。圖24是用于蒙特卡羅細胞水平放射量計算(MonteCarlocell-leveldosimetrycalculation)的幾何模型圖。以通過細胞簇中部的橫截面上的細胞水平活性分布顯示10%、50%和100%的細胞攝取活性。為檢查與總攝入形成對照的活性分布，使所述腫瘤中的總活性保持恒定。因此，如彩色程度所示，處于10%情境的細胞比100%模型的細胞具有更高的單細胞活性(紅色分量vs灰色)；每一細胞內(nèi)活性均勻分布。圖25顯示10%(頂行)、50%(中間行)禾口100%(底行)轉(zhuǎn)染細胞自兩千五百萬131I衰變的劑量體積直方圖(第一列)和吸收劑量空間散點圖(第二列)。所述劑量體積直方圖(第一列)顯示已接受特定吸收劑量(x軸)的細胞數(shù)(y軸)；垂直虛線對應分布的均值，所述均值還列于該圖上方。散點圖(第2列)中的各點對應該處個體細胞所接受的吸收劑量；虛線對應球形腫瘤表面的位置。圖26提供可用于本發(fā)明方法的細菌及其相應胸苷激酶的序列。具體實施方式本發(fā)明特色為可用于下述用途的組合物和方法用于腫瘤成像、用于治療和預防與感染(如病毒感染或細菌感染)相關的瘤形成、用于為患有瘤形成的受驗者選擇有效療法、和用于監(jiān)控療效。在其他具體實施例中，本發(fā)明可用于治療細菌感染(如治療含有細菌胸苷激酶的細菌)。特定具體實施例中，為了對腫瘤組織進行靶向放射治療，本發(fā)明提供用以調(diào)節(jié)病毒基因表達的試劑。本發(fā)明至少部分基于下文將詳細報導的大量發(fā)現(xiàn)。這些發(fā)現(xiàn)包括裂解階段誘導化合物的鑒定及其在用于腫瘤成像中的用途；患有與潛在病毒感染相關疾病且可接受裂解療法治療的患者的鑒定和監(jiān)控這些患者療效；以及對于可用放射性藥物治療的腫瘤表達病毒多肽的發(fā)現(xiàn)。EB病毒(EBV)與多種惡性腫瘤相關。EBV相關腫瘤中，EBV胸苷激酶(TK)不被表達或以極低水平表達。如本文所述，可使用若干種促進病毒裂解誘導的試劑進行體外誘導EBV-TK表達。使用[2—14C]2'-氟-2'-脫氧-|3_D_5-碘尿嘧啶-呋喃阿拉伯糖苷(["C]FIAU)的體外測定和使用[^1]FIAU的離體生物分布研究顯示，經(jīng)放射性標記的FIAU的攝入和留存是表達EBV-TK的細胞所特有的。SCID小鼠內(nèi)EBV(+)伯基特淋巴瘤異種移植物的平面伽馬成像證明，經(jīng)這種誘導試劑之一(硼替佐米)治療后，[^1]FIAU位在腫瘤內(nèi)。這些結(jié)果表明通過基于放射性藥物的技術如單光子發(fā)射型電腦斷層顯像(SPECT)和正光子成像(PET)而將化學療法介導(chemother即y-mediated)的病毒裂解誘導成像的可行性。此外，如本文所述，使用鼠科異種移植物模型，發(fā)現(xiàn)[1251]2'-氟_2'-脫氧-e-D-5-碘尿嘧啶-呋喃阿拉伯糖苷([125I]FIAU)可以表達EB病毒(EBV)-胸苷激酶(TK)的腫瘤為靶標。表達這病毒多肽的腫瘤可為治療用放射性藥物(如[mI]FIAU)的靶標，而減緩或停止腫瘤的生長或?qū)崿F(xiàn)腫瘤退化。這些結(jié)果是在具有構成式表達EBV-TK的腫瘤的異種移植物和天然感染EBV的腫瘤細胞株的異種移植物實現(xiàn)的。伯基特淋巴瘤和胃癌需要以硼替佐米預處理所完成的病毒基因表達的活化。也可在硼替佐米活化后在天然感染卡波西肉瘤皰疹病毒(K即osi'ssarcomaherpesvirus,KSHV)的腫瘤中達到腫瘤生長的顯著變化。以受硼替佐米誘導酶為靶標的靶向放射(bortezomib-inducedenzyme-targetedradiation,BETR)的療法表明了通過藥理學調(diào)節(jié)腫瘤基因表達來影響耙向放射療法的可行性。盡管特殊的實例顯示曲尼司特、來氟米特、吲哚洛芬、阿糖胞苷、甲苯達唑和硼替佐米作為EBV裂解誘導試劑，且可用于治療與EBV相關的腫瘤，本發(fā)明并不局限于此。本發(fā)明方法可使用任何病毒裂解誘導試劑進行實踐。所屬
技術領域：
的技術人員應意識到，以與EBV相關腫瘤獲得的結(jié)果通?？蓪嶋H用于與病毒感染相關的任何瘤形成。此外，由于實施例闡述以FIAU和病毒(EBV/KSHV)胸苷激酶實現(xiàn)的結(jié)果，這些結(jié)果可外推至其他病毒和病毒激酶。與病毒相關的瘤形成EB病毒(EBV)與多種淋巴瘤和癌相關?？úㄎ魅饬霭捳畈《?KSHV，HHV-8)與肉瘤和淋巴瘤相關。患有這些腫瘤的患者中，只要這些病毒通常感染極低百分比的淋巴細胞且患者體內(nèi)幾乎所有被感染細胞均為腫瘤細胞，則此病毒基因組作為幾乎腫瘤特異性的靶標。因此，與病毒相關的代謝途徑近乎為腫瘤特異性代謝途徑。通過使用以l型單純皰疹(HSV1)胸苷激酶(TK)基因進行設計的載體來監(jiān)控使用放射性標記的核苷酸類似物的基因療法環(huán)境中的基因表達，研究者已證明放射性同位素以皰疹病毒代謝途徑為靶標的能力。發(fā)展以細胞和病毒代謝途徑為靶標的新療法的可能性已受限于腫瘤細胞內(nèi)實際不存在TK和大多數(shù)其他由EBV基因組編碼的酶的表達。使放射性藥物以特殊組織為靶標提供了一種惡性腫瘤療法的重要工具。藉由單克隆抗體的放射性結(jié)合體來靶標組織特異性表面抗原(如B細胞上的CD20)已將放射療法的應用拓展至超出體外放療或其他空間指向方法所能實施的療法之外。這些方法可能受表達水平或抗體與靶向分子的親和性或抗體的藥物動力學所限制。即使在B細胞譜系的淋巴瘤中，一般來說，CD20表達程度不適用抗體靶向療法。其他例子中，抗體結(jié)合體的物理特性阻礙其向大腫瘤內(nèi)或被保護的隔室(如中樞神經(jīng)系統(tǒng))內(nèi)的細胞輸送。以代謝途徑為靶標(如涉及以碘同位素的濃縮腺體內(nèi)碘的代謝途徑)是已建立的另一種方法，其更常規(guī)應用已受到其鑒定適當腫瘤特異性途徑的能力所限制。如本文所述，若使用病毒TK的藥理學誘導試劑，可使用經(jīng)放射性標記的核苷類似物來成像攜帶EBV的天然發(fā)生腫瘤細胞(Fu，D.X.，etal.Virus-associatedtumorimagingbyinductionofviralgeneexpression.ClinCancerRes13，1453-1458(2007))。這發(fā)現(xiàn)已拓展至提供用于治療攜帶病毒的瘤形成的新穎組合物和方法如同在EBV和KSHV異種移植物模型中使用攜帶病毒的腫瘤細胞的體內(nèi)實驗所證明者。所述方法包括使具有放射治療性核苷類似物的誘導試劑靶標攜帶病毒的瘤形成細胞。用于本發(fā)明組合物和方法的放射性核素的物理和化學性質(zhì)對其用于放射性療法的選擇非常重要，如必須考慮粒子發(fā)射的類型。a粒子具有有效殺死細胞的高線性能量轉(zhuǎn)移(linearenergytransfer,LET)，和若干細胞直徑的范圍40-80ym。P粒子離子化密度較低，具有比a粒子發(fā)射體更長的范圍，因此對腫瘤分布的需求限制較低。Y射線的能力和豐度也是重要的物理性質(zhì)，因為Y射線的存在提供體外成像的可能性，但也增加了整體放射劑量。本發(fā)明方法在治療瘤形成的應用并不局限于與EBV和HSV相關的瘤形成，實際上也能適用于與瘤形成相關的任何病毒感染。例如，與宮頸癌發(fā)展相關的人類乳突狀病毒感染；與結(jié)腸癌發(fā)展相關的JC病毒；與肝癌發(fā)展相關的乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒；以及與T-細胞白血病發(fā)展相關的人類T-淋巴細胞病毒(humanT-lymphotrophicvirus)。治療方法的選擇受驗者經(jīng)診斷患有與病毒感染相關的瘤形成之后，選擇治療方法。將患有與可誘導進入裂解階段的病毒感染相關的瘤形成的受驗者鑒定為可接受本發(fā)明方法的治療。通過掃描這些受驗者的身體來鑒定該受驗者體內(nèi)瘤形成(例如腫瘤)的病毒裂解存在與否，從而鑒定出這些受驗者。已將具有可視覺化的腫瘤(即其內(nèi)病毒裂解已被誘導)的受驗者鑒定為可接受本發(fā)明方法的治療。已將具有不能視覺化的腫瘤(即其內(nèi)病毒裂解未被誘導)的受驗者鑒定為對本發(fā)明方法的治療具有抗性。患者監(jiān)控本發(fā)明診斷方法也可用于監(jiān)控患者瘤形成進程或評估療法規(guī)則(therapeuticregimene)的實效。于一具體實施例中，本發(fā)明診斷方法用于周期性監(jiān)控與病毒相關腫瘤的尺寸。于一實施例中，在給予療法之前使用本發(fā)明的診斷測定來表征化所述瘤形成。這測定提供闡述所述腫瘤尺寸或闡述腫瘤對病毒裂解誘導試劑治療的易感性的基線。在療法進程中給予其他診斷測定以監(jiān)控所選療法規(guī)則的實效。當本發(fā)明診斷方法檢測到所述腫瘤細胞中病毒裂解誘導的增加或檢測到腫瘤尺寸的減小，則鑒定所述療法有效。本發(fā)明的裂解誘導化合物設計病毒基因以作為各種基因療法模型中的報告體(r印orter)。尤其尤其已經(jīng)廣泛使用單純皰疹病毒(HSV)胸苷激酶(TK)。HSV-TK同系物是由EB病毒(EBV)所編碼，EBV為與多種腫瘤(包括地方性伯基特淋巴瘤、移植后淋巴瘤(post-transplantlymphoma)、AIDS淋巴瘤、何杰金淋巴瘤(Hodgkin'slymphoma)、鼻咽癌和胃癌)相關的皰疹病毒。EBV-TK將選擇性磷酸化核苷類似物2'-氟-2'-脫氧-13-D-5-碘尿嘧啶-呋喃阿拉伯糖苷(FIAU)。然而，由于潛在的病毒感染，酶不被表達或以非常低的水平被表達，因此使用FIAU的經(jīng)放射性標記之類似物對EBV相關腫瘤進行直接平面伽馬成像或PET成像是不可能的。裂解誘導造成細胞凋亡和病毒產(chǎn)生。故意的裂解誘導已被提議為EBV相關腫瘤的潛在療法。理論上，這一策略可在若干水平產(chǎn)生作用EBV的裂解性感染可直接殺滅宿主細胞，所表達的裂解基因能將更昔洛韋(Ganciclovir)變成更昔洛韋的細胞毒性形式并殺滅宿主細胞，且裂解抗原能被CTLs識別，CTL將幫助自體內(nèi)清除所述宿主細胞。因為，那些已報導來用作誘導EBV裂解周期的藥物具細胞毒性的，且不能以足以15在足夠數(shù)量細胞內(nèi)誘導EBV裂解周期進而產(chǎn)生治療效果的量給予，所以EBV裂解誘導作為EBV相關腫瘤特異性療法的想法并未進一步實踐。使用傳統(tǒng)的細胞毒性的療法來重新活化內(nèi)源性EBV基因組喪失了特異性療法的原始目的和殺滅病毒/宿主腫瘤細胞而不傷害正常細胞的優(yōu)勢。本發(fā)明提供誘導病毒裂解誘導的組合物和方法。EBV對上皮細胞的感染造成產(chǎn)毒感染，其伴隨病毒的復制和被感染細胞的溶解。即刻早前基因?qū)Σ《净虮磉_的調(diào)節(jié)者(包括BZLF1和BRLF1蛋白)進行編碼，其作為用以啟動裂解性感染的開關。BZLF1蛋白抑制干擾素-Y受體的表達并抑制干擾素-Y的活性。早前基因?qū)ι婕安《綝NA合成的蛋白質(zhì)(如病毒DNA聚合酶和胸苷激酶)進行編碼。晚期基因?qū)Σ《镜慕Y(jié)構蛋白(包括病毒衣殼抗原和主要的包膜糖蛋白gp350)進行編碼。原始感染期后，EBV病毒、皰疹病毒和其他病毒科進入潛伏期，此時活性病毒產(chǎn)生停止，但病毒仍然存在。某些條件下，病毒退出潛伏期并再次進入裂解階段。本發(fā)明提供誘導病毒進入裂解階段的試劑。這些試劑以"病毒裂解誘導試劑"指代。優(yōu)選地，這些試劑對誘導病毒裂解有效而不具有對宿主或正常組織產(chǎn)生細胞毒性的不良反應。病毒裂解誘導試劑包括蛋白酶體抑制劑、抗微管蛋白藥物、糖皮質(zhì)素和載體激素、核苷類似物和抗炎藥?？蓪⑦@些試劑給予具有與潛在病毒感染相關的瘤形成的受驗者，從而誘導所述病毒進入裂解階段。病毒成像劑病毒裂解階段的誘導造成病毒多肽的產(chǎn)生。這些多肽可用作診斷和/或監(jiān)控與病毒相關瘤形成的特異性記號。特定的具體實施例中，本發(fā)明提供病毒酶的底物(substance)。因為所述底物容許成像或包括允許其被成像的部分，可使用傳統(tǒng)成像方法如PET或SPECT-CD視覺化該底物。病毒酶在腫瘤細胞內(nèi)濃縮所述底物，從而允許腫瘤細胞被視覺化。于體內(nèi)使腫瘤代謝成像的能力具有廣泛應用，典型如使用[18F]氟脫氧葡萄糖(FDG-PET)的正光子成像術的臨床應用增加。當然，這種用于腫瘤組織的掃描的特異性局限在多種組織和快速代謝葡萄糖的惡性腫瘤范圍內(nèi)。因此，腦、心肌和發(fā)炎病灶全部導致FDG-PET成像的信號。化合物的"成像有效量"是提供足以視覺化腫瘤存在與否的信號所必需或足夠的量。腫瘤可使用
技術領域：
中已知的或本文所述的任何方法成像，如平面伽馬成像、單光子發(fā)射型電腦斷層顯像(SPECT)和正光子成像(PET)。所述有效量可依據(jù)諸如受驗者尺寸及重量、疾病類型或特定化合物的因子而變動。例如，化合物的選擇能影響"成像有效量"的構成。所屬
技術領域：
的技術人員能得知本文所含的因素并不經(jīng)過度實驗即可進行所述化合物有效量的確定。成像能允許檢測結(jié)合至諸如胸苷激酶的成像劑的存在和/或位置。存在可包括低于檢測水平或不存在，位置可包括沒有。本發(fā)明尤其提供試劑，包括于有機體內(nèi)特異性結(jié)合至多肽的試劑(如結(jié)合至病毒胸苷激酶多肽的胸苷激酶結(jié)合化合物)，所述試劑產(chǎn)生可用于獲得受驗者圖像及確定受驗者體內(nèi)胸苷激酶(優(yōu)選為病毒胸苷激酶)的存在和位置的可檢測信號。胸苷激酶尤其適合本發(fā)明的方法。病毒胸苷激酶具有激酶催化結(jié)構域的共有序列，而哺乳動物胸苷激酶的激酶催化結(jié)構域不具有此序列。因此，對病毒胸苷激酶具高親和性的化合物對哺乳動物胸苷激酶的親和性大量降低。本發(fā)明使用容易合成、且可被成像裝置(如PET或SPECT儀器)檢測的胸苷激酶結(jié)合化合物。一具體實施例中，所述化合物是結(jié)合至激酶的核苷類似物。特定具體實施例中，所述激酶是胸苷激酶。舉例來說，W02006/002142提供了用于本發(fā)明方法的胸苷激酶結(jié)合化合物，該專利以弓I用形式并入本發(fā)明。成像通常，成像技術包括給予受驗者可在受驗者體外檢測的化合物。憑借成像劑在受驗者體內(nèi)各種部位蓄積的空間分布的不同，產(chǎn)生圖像。本發(fā)明的方法，成像技術依賴被優(yōu)先結(jié)合至受驗者體內(nèi)如病毒胸苷激酶的化合物?？墒褂萌魏魏线m手段(如平面伽馬成像、單光子發(fā)射型電腦斷層顯像(SPECT)和正光子成像(PET))測量在受驗者體內(nèi)(如腫瘤體積內(nèi))蓄積的成像劑的空間分布?；蛘?，本發(fā)明方法可使用檢測熒光的成像技術。可用于本發(fā)明方法的示例性化合物包括2'-氟_2'-脫氧-1-13-D-呋喃阿拉伯糖基_5-碘-尿嘧啶([125I]-FIAU)、2'-氟-2'脫氧-1-13-D-呋喃阿拉伯糖基_5-碘-尿嘧啶(n]-FIAU)、9-(4」8F-氟-3-[羥甲基]丁基)鳥嘌呤([，]-FHBG)、(18)F-l-(2'-脫氧-2'-氟-13-D-呋喃阿拉伯糖基)胸腺嘧啶([18F]-FMAU)、18F-2'_氟_2'脫氧-1P_D_呋喃阿拉伯糖基-5_乙基-尿嘧啶([18F]-FEAU)和l-(2'-脫氧-2'-氟-P-D-呋喃阿拉伯糖基)-5-[，]碘尿嘧啶([18F]-FIAU)。近來，Golankiewicz等((2001)J.Med.Chem.44:4284-7)和Goslinski等((2002)J.Med.Chem.45:5052-7)闡述了可用于本發(fā)明方法的示例性熒光化合物。Goslinski等闡述的熒光三環(huán)阿昔洛韋(acyclovir)和更昔洛韋類似物，尤其是GCV3被預期用于權利要求所請方法中作為胸苷激酶結(jié)合化合物。術語"胸苷激酶結(jié)合化合物"理解為具有足夠的胸苷激酶親和性的化合物，因此該化合物能用作成像劑和/或治療劑。一具體實施例中，胸苷激酶結(jié)合化合物可以是病毒胸苷激酶結(jié)合化合物。病毒胸苷激酶結(jié)合化合物對病毒胸苷激酶的親和性比其對哺乳動物胸苷激酶的親和性高至少10倍、優(yōu)選100倍、優(yōu)選1000倍。舉例來說，胸苷激酶結(jié)合化合物包括FIAU、FHBG、FMAU、FEAU、三環(huán)阿昔洛韋和更昔洛韋類似物(如GCV3)。胸苷激酶結(jié)合化合物可改性為包括官能團者，以利于其作為成像劑和/或治療劑使用。特定具體實施例中，本發(fā)明提供核苷類似物，如l-(2'-脫氧-2'_氟-13-D-呋喃阿拉伯糖基)-5_碘尿嘧啶(FIAU)，例如，該化合物闡述在美國專利第4，211，773號中作為抗病毒和抗腫瘤試劑。底物是否用于成像或治療僅僅依賴于所使用的放射性核素如用于成像的I-123、I-124或I-125以及用于治療的I-131或At-211。使用放射性同位素如碘、氟、釔、鉍或砹的放射性同位素標記核苷類似物。另一具體實施例中，所述核苷類似物可以是熒光的。本發(fā)明優(yōu)選的經(jīng)放射性標記的化合物為容易合成且限于體內(nèi)代謝的核苷類似物。如美國專利第5，879，661號和第6，331，287號所闡述的化合物可用于本發(fā)明方法中。PET中所使用的最普通的正電子放射核是"C、13N、150和18F。通過俘獲電子和/或Y放射而衰變的同位素用于SPECT中，且包括如123I和124I。本發(fā)明的方法包括PET。具體地，通過使用檢測系統(tǒng)掃描患者整體或患者的特定區(qū)域進行成像，并檢測信號如所述放射性同位素信號。隨后將所檢測的信號轉(zhuǎn)變?yōu)閳D像。所得圖形應由有經(jīng)驗的觀察者如內(nèi)科醫(yī)生讀取。本文將上述過程指代為對患者"成像"。通常在給予本發(fā)明方法所使用的化合物1分鐘至約48小時后進行成像。所屬
技術領域：
的技術17人員可輕易獲知，精確的成像時間將依賴于多種因素如所給予化合物的清除率。—旦已經(jīng)獲得圖像，所屬
技術領域：
的技術人員將能確定所述化合物的位置。使用這一資訊，技術工作者能確定例如，是否存在腫瘤、是否病毒已經(jīng)進入裂解階段、腫瘤的程度、或受驗者正在經(jīng)歷的治療的實效。不同時間點(如12小時、24小時、36小時、48小時或更長時間)時間點所獲得的圖像尤其可用于確定治療(如裂解療法和/或化學療法治療)實效。與當前所使用的方法不同，臨床醫(yī)生可通過本文所闡述的成像方法辨別潛在階段病毒感染的腫瘤和裂解階段病毒感染的腫瘤。篩選測定本發(fā)明提供用于鑒定可用于病毒裂解誘導的試劑、用于腫瘤成像的試劑，或可作為用于治療瘤形成的試劑(如作為放射性藥物)的方。本文所闡述的實施例具體探討FIAU作為病毒胸苷激酶底物的應用，所屬
技術領域：
的技術人員理解本發(fā)明的方法并不局限于此。實際上，本發(fā)明的方法可使用能作為病毒多肽底物的任何試劑，和能通過改性而包括提供在成像技術中可見部分的試劑，或如通過給予腫瘤細胞釋放致死劑量的放射物提供細胞死亡誘導的試劑(如作為放射性藥物)。本發(fā)明的方法適用于候選試劑(適于作為成像劑、病毒誘導試劑或放射性藥物)的高通量低成本篩選。本發(fā)明的方法可使用經(jīng)分離或在體外測定或體內(nèi)測定測試活性的試劑。所屬
技術領域：
的技術人員應意識到，候選試劑對細胞的影響典型是通過與相應的不與所述候選試劑接觸的對照細胞比較而得出的。因此，一具體實施例中，所述篩選方法包括將與候選試劑接觸的裂解誘導(于具有潛在病毒感染的細胞內(nèi))與未處理的對照細胞內(nèi)觀察到的誘導相比較。其他具體實施例中，將以候選試劑處理的細胞內(nèi)病毒多肽的表達或活性與未經(jīng)處理的對照樣品相比較，而鑒定出于接觸細胞內(nèi)增加病毒多肽的表達或活性、或增加病毒復制的候選化合物。可通過該技術中廣為人知的過程如蛋白質(zhì)印跡、流式細胞術、免疫細胞化學、結(jié)合至磁性和/或CD137特異性抗體包覆微珠、原位雜交、熒光原位雜交(fluorescenceinsituhybridization，F(xiàn)ISH)、ELISA、微陣列分析、RT-PCR、RNA印跡、或比色測定(如考馬斯亮藍法(BradfordAssay)和福林酚試劑法(LowryAssay))來比較多肽表達或活性?！ぷ鲗嵤├校瑢⒉煌瑵舛鹊囊环N或多種候選試劑加入含有具有潛在病毒誘導的細胞的培養(yǎng)基中。將促進病毒多肽表達或報告體基因表達(于細胞內(nèi)表達的病毒啟動子控制下表達)的試劑視為可用于本發(fā)明；例如，這種試劑可用作預防、推遲、改善、穩(wěn)定或治療與病毒感染相關的瘤形成疾病的治療劑。一旦得以鑒定，本發(fā)明的試劑(如特異性結(jié)合至病毒多肽和/或剌激病毒裂解誘導的試劑)可用于受驗者體內(nèi)腫瘤的成像和治療。也可以選擇或另外通過下述方式鑒定候選化合物首先測定特異性結(jié)合至且活化病毒多肽的候選化合物，再如本文所述測試候選化合物對病毒裂解誘導的作用。一具體實施例中，候選試劑的實效依賴于其與胸苷激酶相互反應或作為胸苷激酶底物的能力。這一相互反應可使用任何數(shù)量的標準結(jié)合技術和功能測定(如前文所述Ausubel等所闡述的方法)輕易測定。例如，可體外測試候選化合物與本發(fā)明多肽的相互反應性和結(jié)合性，以及候選化合物調(diào)節(jié)潛在病毒感染的能力。—特定實施例中，結(jié)合至病毒多肽的候選化合物可使用基于色譜的技術予以鑒定。例如，重組病毒多肽可通過標準技術而從設計成表達所述多肽的細胞中純化或可通過化學合成，所述多肽一旦純化即固定化于柱上。隨后使候選試劑溶液通過該柱，基于所述試劑結(jié)合病毒多肽和固定于柱上的能力來鑒定特異性結(jié)合所述病毒多肽或其片段的試劑。為了分離所述試劑，洗滌該柱以除去非特異性結(jié)合的分子，隨后從柱上釋放感興趣的試劑并收集。如果需要，通過這種方法(或任何其他適當方法)分離的試劑可進一步(如通過高效液相色譜)純化。此外，可測試這些候選試劑作為病毒誘導試劑或作為病毒多肽底物(如本文所述)的能力。舉例來說，通過這方法分離的試劑也可用來作為治療或預防與病毒相關瘤形成發(fā)作(onset)的治療劑。被鑒定為以小于或等于lnM、5nM、10nM、100nM、lmM或10mM的親和常數(shù)結(jié)合至病毒多肽的化合物尤其適用于本發(fā)明。例如，這些試劑可用作抗擊瘤形成的治療劑。視需要而定，任何上述測定所鑒定的試劑可被認為在任何標準動物模型(如嚙齒目動物異種移植物模型)中有效，并且，如果成功，可用作抗瘤形成的治療劑。測試化合物和提取物通常，根據(jù)
技術領域：
已知方法，從大量天然產(chǎn)物或合成(或半合成)提取物庫、或化合庫、或從多肽或核酸庫中鑒定出作為病毒裂解誘導試劑的試劑、作為病毒多肽底物的試劑或特異性結(jié)合至病毒多肽的試劑。熟悉藥物發(fā)現(xiàn)和發(fā)展領域的人士將理解，測試提取物或化合物的確切來源對本發(fā)明篩選過程并不起決定性作用。篩選中所使用的試劑可包括已知作為治療病原體感染的治療劑的試劑?；蛘?，實際上可使用本文所闡述的方法篩選任何數(shù)量的未知的化學提取物或化合物。這些提取物或化合物的實例包括，但不限于，基于植物、真菌、原核生物或動物的提取物、發(fā)酵液和合成化合物，以及現(xiàn)存多肽的改性物。通過商業(yè)手段可從大量來源處包括英國生物技術公司(Biotics，Sussex,區(qū))、英國克賽諾瓦公司(Xenova，Slough，區(qū))、圣盧西亞港海洋研究分所(HarborBranch0ceangraphicsInstitute,Ft.Pierce,Fia.)禾口馬爾制藥美國公司(PharmaMar，U.S.A.，Cambridge,Mass.)獲取細菌提取物、真菌提取物、植物提取物和動物提取物形式的天然多肽庫?？墒褂帽疚乃龅脑?br>技術領域：
已知方法將這些多肽改性為包括蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)導結(jié)構域。此外，如果需要，根據(jù)該
技術領域：
已知方法(如標準萃取和分餾方法)生產(chǎn)天然或合成地生產(chǎn)的庫。分子庫合成方法的實例可從
技術領域：
中找到(如DeWittetal.，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.90:6909，1993;Erbetal.，Proc.Natl.Acad.Sci./7X491:11422，1994;Zuckermannetal.，J.Med.Chem.37:2678，1994;Choetal.，Science,261:1303，1993;Carrelletal.，Angew.Chem.INt.Ed.Engl.33:2059，1994;Carelletal.，Angew.Chem.Int.Ed.Engl.33:2061，1994;和Gallopetal.，J.Med.Chem.37:1233，1994)。再者，如果需要，使用標準化學、物理學或生物學方法可輕易進行任合庫或化合物的改性。也有多種方法可用于隨機或指向性合成(如半合成或全合成)任何數(shù)量的多肽、化學化合物，包括但不限于基于糖、脂類、肽和核酸的化合物。合成化合物庫可自布蘭登聯(lián)合共色(BrandonAssociates,Merrimack,N.H.)禾口奧德里奇化學(AldrichChemical,Milwaukee,Wis.)通過商業(yè)手段獲取?；蛘撸鳛楹蜻x化合物的化學化合物可使用具有該
技術領域：
具有通常知識的人士所知的標準合成技術和方法從易于獲取的起始材料合成。用于合成通過本文所闡述方法鑒定的化合物的合成化學轉(zhuǎn)變和保護基團的方法(保護和去保護)是
技術領域：
中已知者，包括例如R.Larock著《綜合有機轉(zhuǎn)變》(ComprehensiveOrganicTransformations，VCHPublishers(1989))、T.W.Greene禾口P.G.M.Wuts著《有機合成中的保護基》(第二片反)(ProtectiveGroupsinOrganicSynthesis,2nded.，JohnWileyandSons(1991))、L.Fieser和M.Fieser著《費歇爾和費歇爾的有機合成試劑》(FieserandFieser'sReagentsforOrganicSynthesis,JohnWileyandSons(1994))，禾口L.Paquette編著《有機合成試齊U百禾斗全書》(EncyclopediaofReagentsforOrganicSynthesis,JohnWileyandSons(1995))及其后續(xù)版本中所闡述的。化合物庫可存在于溶液內(nèi)(如Houghten，Biotechniques13:412-421，1992)，或微珠上(Lam，Nature354:82-84，1991)、晶片上(Fodor，Nature364:555-556，1993)、細菌上(Ladner，美國專利第5，223，409號)、孢子上(Ladner，美國專利第5，223，409號)、質(zhì)粒上(Culletal.，ProcNatlAcadSciUSA89:1865-1869,1992)或噬菌體上(ScottandSmith,Science249:386_390，1990;Devlin，Science249:404_406，1990;Cwirlaetal.，Proc.Natl.Acad.Sci.87:6378—6382，1990;Felici，J.Mol.Biol.222:301—310，1991;上述Ladner的著述)。此外，熟悉藥物發(fā)現(xiàn)和發(fā)展的人士輕易理解，只要可能，就應使用去重復(der印lication)(如分類學去重復、生物學去重復和化學去重復或其任意組合)方法或消除活性已知的材料的復制物和重復的方法。當發(fā)現(xiàn)粗提取物具有病毒多肽結(jié)合和/或病毒裂解誘導活性時，需要進一步分餾(fractionation)正向提取物(positiveleadextract)，以分離出導致所觀察到的效果的分子構成。因此，提取、分餾和純化過程的目標是對可用作成像劑、病毒裂解誘導試劑或瘤形成治療劑的所述粗提取物內(nèi)的化學個體進行仔細的表征和鑒定。這些異源提取物的分餾和純化方法是
技術領域：
中已知的。如果需要，根據(jù)
技術領域：
已知方法對可用作治療劑的化合物進行化學改性。治療方法被鑒定起病毒裂解誘導試劑作用、起病毒多肽底物作用、起病毒多肽結(jié)合作用和/或起放射性藥物作用的試劑可用于預防或改善與病毒感染(如潛在病毒感染)相關的瘤形成疾病。與病毒感染相關的癌包括，但不限于，與EB病毒相關的地方性伯基特淋巴瘤、移植后淋巴瘤、AIDS淋巴瘤、何杰金淋巴瘤、鼻咽癌和胃癌，以及與皰疹病毒相關的卡波西肉瘤腫瘤。與病毒相關的瘤形成可使用本發(fā)明的方法和組合物進行治療、診斷、成像和監(jiān)控?！委煼椒ㄖ?，將經(jīng)本文所述鑒定的試劑給予可能的或真實的患病組織或進行系統(tǒng)給予。所給予試劑的劑量依賴于大量因素包括患者個體的尺寸和健康狀況。對于任何特定受驗者，具體劑量規(guī)則應根據(jù)個體需要和給予組合物或監(jiān)督給予組合物的人的專業(yè)判斷隨時間進行調(diào)整。藥物治療本發(fā)明提供用于鑒定能結(jié)合至病毒多肽或起病毒多肽底物作用、能誘導病毒裂解階段、或能起治療或預防瘤形成的治療劑作用的組合物(包括核酸、肽、小分子抑制劑和抗體)的簡單手段。因此，使用本文所述方法發(fā)現(xiàn)的具有醫(yī)學價值的化學個體科用作藥物或用作現(xiàn)存化合物結(jié)構改性如通過推理性藥物設計進行改性的資訊。這些方法可用于篩選對病毒感染相關的各種瘤形成有效的試劑。對于療法用途，使用本文所述方法鑒定的組合物或試劑可進行系統(tǒng)給予，如配制入藥物學可接受的緩沖劑如生理鹽水中。舉例來說，優(yōu)選的給予路徑包括向患者體內(nèi)提供連續(xù)的相同水平的藥物的靜脈注射、腹腔內(nèi)注射、肌肉注射或皮內(nèi)注射。將使用位于生理性可接受的載體內(nèi)的療法有效量的本文所鑒定的治療劑進行人類患者或其他動物的治療。舉例來說，E.W.Martin的《雷明登氏制藥科學》(Remington'sPharmaceuticalSciences)闡述了適用的載體及其配方。待給予的治療劑的量依賴于給予方式、患者年齡和體重、以及病原體感染或瘤形成的臨床癥狀而改變。盡管某些例子因為化合物的特異性增加而需要較低量，但所述量通常處于用于治療其他病原體感染或瘤形成的其他試劑的用量范圍內(nèi)。以通過熟悉該技術的人士已知的方法或使用任何測量病毒啟動子、病毒多肽或病毒復制的表達或生物活性的測定所確定的有效誘導病毒裂解(如誘導被感染腫瘤細胞的至少約3%至5%、5%至10%、10%至15%、15%至20%、20%至30%、30%至50%、50%至75%或75%至100%進行裂解)的劑量給予化合物?？赏ㄟ^任何適當手段給予用于治療瘤形成的化合物，得到所述化合物與其他成分組合的治療濃度，對改善、降低或穩(wěn)定瘤形成有效。所述化合物可以任何合適的量包含在任何適當?shù)妮d體物質(zhì)中，且通常以所述組合物總重量的1%至95%存在?？梢赃m用于非腸道給予路徑(如皮下給予、靜脈給予、肌肉給予或腹腔給予)的劑型提供所述組合物?？筛鶕?jù)傳統(tǒng)藥物實踐配制所述藥物組合物(如見A.R.Gennaro編著的第20版《雷明登制藥科學與實踐》(Remington:TheScienceandPracticeofPharmacy(20thed.)，LippincottWilliams&Wilkins,2000)以及J.Swarbrick和J.C.Boylan編著的《藥物技術百科全書》(EncyclopediaofPharmaceuticalTechnology,1988-1999，MarcelDekker，NewYork))。細菌感染病毒并不是唯一的表達胸苷激酶的病原體。很多細菌病原體也表達這些激酶。因此，細菌感染也對FIAU(包括經(jīng)放射性標記的FIAU類似物)治療敏感。革蘭氏陽性菌包括，但不限于，巴斯德菌(Pasteurella)種species、葡萄球菌(Staphylococci)種和鏈球菌(Str印tococcus)屬。革蘭氏陰性菌包括，但不限于大腸桿菌(Escherichiacoli)、假單胞菌(Pseudomonas)種和沙門氏菌(Salmonella)種。感染性細菌的具體實例包括但不限于，幽門螺桿菌(Helicobacterpyloris)、伯氏疏螺旋菌(Boreliaburgdorferi)、嗜月市軍團菌(Xegionell即neumophilia)、結(jié)核菌(Mycobacteria)種(如結(jié)核分枝桿菌(M.tuberculosis)、鳥分枝桿菌(M.avium)、胞內(nèi)分枝桿菌(M.intracellular)、堪薩斯分枝桿菌(M.kansaii)、戈登分枝桿菌(M.gordonae))、金黃葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、淋病雙球菌(Neisseriagonorrhoeae)、腦膜炎雙球菌(Neisseriameningitidis)、單核增生李其jf特氏菌(Listeriamonocytogenes)、化膿性鏈球菌(Str印tococcuspyogenes)(A族鏈球菌)、無乳鏈球菌(Str印tococcusagalactiae)(B族鏈球菌)、鏈球菌(草綠色)、糞鏈球菌(Str印tococcusfaecalis)、牛鏈球菌(Str印tococcusbovis)、鏈球菌(厭氧性菌種)、肺炎雙球菌(Str印tococcuspneumoniae)、病原性彎曲菌(Campylobacter)禾中.、腸球菌(Enterococcus)禾中、流感嗜血桿菌(Haemophilusinfluenzae)、炭疽桿菌(Bacillusantracis)、白喉桿菌(corynebacteriumdiphtheriae)、棒狀桿菌(corynebacterium)禾中、豬紅斑丹毒絲菌(Erysipelothrixrhusiopathiae)、產(chǎn)氣莢膜梭菌(Clostridiumperfringers)、破傷風梭菌(Clostridiumtetani)、產(chǎn)氣腸桿菌(Enterobacteraerogenes)、月市炎克氏桿菌(Klebsiellapneumoniae)、多殺性巴氏桿菌(pasteurellamultocida)、擬桿菌(Bacteroides)禾中、具核梭桿菌(Fusobacteriumnucleatum)、念珠狀鏈桿菌(Str印tobacill體oniliformis)、梅毒密螺旋體(Tr印o固apallidium)、細弱密螺旋體(Tr印onemaperte皿e)、螺旋體(X印tospira)、立克次氏體(Rickettsia)禾口衣氏放線菌(Actinomycesisraelii)。其他細菌病原體包括產(chǎn)氣桿菌(Aerobacter)、氣單胞菌(Aeromanas)、不動桿菌(Acinetobacter)、衣氏方文線菌、土壤桿菌(Agrobacterium)、桿菌(Bacillus)、炭疽桿菌、擬桿菌(Bacteroides)、巴爾通氏體(Bartonella)、博代氏桿菌(Bordetella)，鼠博代氏桿菌(Bortella)、疏螺旋體(Borrelia)、布魯氏菌(Brucella)、伯克霍爾德氏菌(Burkholderia)、莢膜菌(Caly,tobacteri咖)、彎曲菌(Campylobacter)、擰檬酸桿菌(Citrobacter)、梭菌(Clostridium)、產(chǎn)氣莢膜梭菌、破傷風梭菌、棒狀桿菌(Cornyebacterium)屬、白喉棒狀桿菌、棒狀桿菌屬、腸桿菌、產(chǎn)氣腸桿菌、腸球菌(Enterococcus)、豬紅斑丹毒絲菌、埃希氏菌(Escherichia)、弗朗西斯氏菌(Francisella)、具核梭桿菌、力口德納菌(Gardnerella)、嗜血桿菌(Haemophilus)、哈夫尼菌(Hafnia)、螺桿菌(Helicobacter)、克雷白氏菌(Klebsiella)、肺炎克氏桿菌、乳酸菌(Lactobacillus)、軍團桿菌(Legionella)、螺旋體、利斯特氏菌(Listeria)、摩根氏菌(Morganella)、莫拉氏菌(Moraxella)、分支桿菌(Mycobacterium)、奈瑟氏菌(Neisseria)、巴斯德氏菌(Pasteurella)、巴斯德桿菌(Pasturellamultocida)、變形桿菌(Proteus)、普羅威登斯菌(Providencia)、假單胞菌(Pseudomonas)、立克次氏體、沙門氏菌(Salmonella)、沙雷氏菌(Serratia)、志賀氏菌(Shigella)、葡萄球菌、寡養(yǎng)單胞菌(Stentorophomonas)、鏈球菌、念珠狀鏈桿菌、密螺旋體(Tr印onema)、梅毒密螺旋體、細弱密螺旋體、黃單胞桿菌(Xanthomonas)、弧菌(Vibrio)和耶爾森氏菌(Yersinia)。不經(jīng)腸道給予的組合物所述藥物組合物可以劑型、配方或借助適當運載裝置或含有傳統(tǒng)的非毒性藥物學可接受載劑和輔劑的移植物型式通過注射、輸液或植入(皮下、靜脈、肌肉、腹腔等)而不經(jīng)腸道給予。這些組合物的配方和制劑是藥物配方
技術領域：
技術人員所熟知的?？稍谏鲜觥禦emington:TheScienceandPracticeofPharmacy》中找至Ll配方。不經(jīng)腸道使用的組合物可提供為單位劑型(如單劑量安瓿)或含有若干劑量的小瓶，其中，可加入適當?shù)姆栏瘎?見下文)。所述組合物的形式可以是溶液、懸浮液、乳液、輸液裝置或用于植入的運載裝置，或該組合物可以干粉形式存在，在使用前與水或其他適當運載子重構。除了包括降低或改善病原體感染或瘤形成的活性試劑外，所述組合物可包括適當?shù)牟唤?jīng)腸道給予可接受的載體和/或賦形劑。為了控制釋放，可將所述活性治療劑并入微球、微膠囊、納米顆粒、脂質(zhì)體等中。再者，所述組合物可包括懸浮劑、增溶劑、穩(wěn)定劑、pH調(diào)節(jié)劑、等滲調(diào)節(jié)劑和/或分散劑。如上所述，本發(fā)明的藥物組合物可以適用于無菌注射的形式存在。為了制備這種組合物，將適用的活性活性發(fā)炎性腸病病治療劑溶解或懸浮于不經(jīng)腸道給予可接受的液體運載子中?？墒褂玫目山邮艿倪\載子和溶劑是水(通過加入適量鹽酸、氫氧化鈉或適當緩沖劑調(diào)節(jié)至適當pH的水)，l，3-丁二醇，林格溶液(Ringer'ssolution)和等滲氯化鈉溶液和葡萄糖溶液。所述水性配方也可以含有一種或多種防腐劑(如對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸乙酯或?qū)αu基苯甲酸正丙酯)。在所述化合物之一僅僅微溶或難溶于水的情形22下，可加入溶解促進劑或增溶劑，或所述溶劑可包括10%(w/w)至60%(w/w)的丙二醇等?？刂漆尫诺牟唤?jīng)腸道給予的組合物控制釋放的不經(jīng)腸道給予的組合物的形式可以是水懸浮液、微球、微膠囊、磁性微球、油溶液、油懸浮液或乳液?；蛘撸钚运幬锟刹⑷肷锵嗳葺d體、脂質(zhì)體、納米顆粒、移植物或輸液裝置內(nèi)。用于微球和/或微膠囊制劑的材料是，例如生物降解/生物侵蝕聚合物如丙交酯乙交酯共聚物(polygalactin)、聚(氰基丙烯酸異丁酯)、聚(2-羥乙基-L-谷氨酰胺)(p0ly(2-hydroxyethyl-L-glutam-nine)和聚乳酸?？捎糜谂渲撇唤?jīng)腸道給予的組合物的生物相容載體是碳水化合物(如右旋糖苷)、蛋白質(zhì)(如白蛋白)、脂蛋白或抗體。用于移植物的材料可以是非生物降解的(如聚二甲基硅氧烷)或生物降解的(如聚己內(nèi)酯、聚乳酸、聚乙醇酸或聚原酸酯或其組合)?？诜猛镜墓腆w劑型口服制劑包括含有所述活性成分與非毒性藥物學可接受的賦形劑的混合物的片劑。這些配方是所屬
技術領域：
的技術人員所已知的。舉例來說，賦形劑可以是惰性稀釋劑或填料(如蔗糖、山梨醇、糖、甘露醇、微晶纖維素、淀粉(包括馬鈴薯淀粉)、碳酸鈣、氯化鈉、乳糖、磷酸鈣、硫酸鈣、或磷酸鈉)；成粒劑和崩解劑(如纖維素衍生物包括微晶纖維素、淀粉包括馬鈴薯淀粉、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、褐藻酸鹽或褐藻酸)；粘合劑(如蔗糖、葡萄糖、山梨醇、阿拉伯膠、褐藻酸、褐藻酸鈉、明膠、淀粉、預膠化淀粉、微晶纖維素、硅酸鎂鋁、羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、乙基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮或聚乙二醇)；以及潤滑劑、助流劑和抗粘劑(如硬脂酸鎂、硬脂酸鋅、硬脂酸、二氧化硅、氫化植物油或云母)。其他藥物學可接受的賦形劑可以是著色劑、芳香劑、增塑劑、潤濕劑、緩沖劑等。所述片劑可以非包衣片，或可通過已知技術包衣，以視需要推遲在胃腸道內(nèi)的崩解和吸收，從而在較長時期提供持續(xù)作用。所述包衣可適應以預定方式(如為了實現(xiàn)控制釋放配方)釋放所述活性藥物，或可適應直到通過胃之前均不釋放所述活性藥物(腸衣)。所述包衣可以是糖衣、膜衣(如基于羥丙基甲基纖維素、甲基纖維素、甲基羥乙基纖維素、羥丙基纖維素、羧甲基纖維素、丙烯酸酯共聚物、聚乙二醇和/或聚乙烯吡咯烷酮)、或腸衣(如基于甲基丙烯酸共聚物、鄰苯二甲酸醋酸纖維素、鄰苯二甲酸羥丙基甲基纖維素、醋酸琥珀酸羥丙基甲基纖維素、聚醋酸乙烯鄰苯二甲酸乙烯酯、蟲膠和/或以及乙基纖維素)。再者，可采用時間推遲材料如甘油單硬脂酸酯或甘油二硬脂酸酯。所述固體片劑組合物可包括適應保護所述組合物不經(jīng)受非期望化學變化(如釋放所述活性抗病原體或抗瘤形成的治療性物質(zhì)之前的化學降解)的包衣?？墒褂妙愃朴谏鲜觥禘ncyclopediaofPharmaceuticalTechnology》中所闡述的方式將包衣施力口于固體劑型上?？蓪⒅辽賰煞N抗病原體或抗瘤形成治療劑一起混合在所述片劑中或分開使用。一實施例中，在所述片劑中，將第一活性抗病原體或抗瘤形成治療劑含于所述片劑內(nèi)部，而將第二活性抗病原體或抗瘤形成治療劑置于片劑外部，因此，在所述第一活性抗病原體或抗瘤形成治療劑釋放之前，所述第二活性抗病原體或抗瘤形成治療劑的一實質(zhì)部分已釋放。口服用途的制劑形式也可以是咀嚼片；或硬膠囊，其中所述活性成分與惰性固體稀釋劑(如馬鈴薯淀粉、乳糖、微晶纖維素、碳酸鈣、磷酸鈣或高嶺土)混合；或軟膠囊，其中23所述活性成分與水或油基如花生油、液體石蠟或橄欖油混合?？墒褂蒙鲜銎瑒┖湍z囊成分以傳統(tǒng)方式使用諸如混合器、流動床儀器或噴霧干燥設備制備粉劑和顆粒劑?？刂漆尫诺目诜┬涂刂漆尫诺目诜M合物可以設計成例如通過控制活性物質(zhì)的溶解和/或擴散來釋放抗瘤形成治療劑?？赏ㄟ^適當包覆化合物的片劑、膠囊、丸劑或顆粒配方，或通過將該化合物并入適當基質(zhì)中實現(xiàn)控制釋放溶解或擴散?？刂漆尫虐驴砂ㄒ环N或多種上述包衣物質(zhì)和/或，例如蟲膠、蜂蠟、甘油蠟(glycowax)、蓖麻蠟、硬脂醇、甘油單硬脂酸酯、甘油二硬脂酸酯、甘油棕櫚酸硬脂酸酯、乙基纖維素、丙烯酸系樹脂、(11-聚乳酸、醋丁纖維素、聚氯乙烯、聚醋酸乙烯酯、乙烯基吡咯烷酮、聚乙烯、聚甲基丙烯酸酯、甲基丙烯酸甲酯、2-羥基甲基丙烯酸酯、甲基丙烯酸酯水凝膠、1，3_丁二醇、甲基丙烯酸乙二醇酯和/或聚乙二醇。控制釋放基質(zhì)配方中，基質(zhì)材料也可以包括，如水合甲基纖維素、巴西棕櫚蠟和硬脂醇、卡波普934(carbopo1934)、硅酮、甘油三硬脂酸酯、丙烯酸甲酯-甲基丙烯酸甲酯、聚氯乙烯、聚乙烯和/或鹵代氟碳化合物。含有一種或多種治療化合物的控制釋放組合物可以是胃漂浮片或膠囊(即口服給予時在一定時期內(nèi)漂浮于胃內(nèi)容物的頂部的片劑或膠囊)?？赏ㄟ^將化合物和賦形劑的混合物以及20%(w/w)至75%(w/w)的水狀膠體如羥乙基纖維素、羥丙基纖維素或羥丙基甲基纖維素造粒來制備所述化合物的胃漂浮片劑。接著可將所得粒劑壓制成片劑。所述片劑與胃液接觸后，形成環(huán)繞片劑表面的完全不透水凝膠屏障。這一凝膠屏障參與保持低于1的密度，從而允許所述片劑保持漂浮于胃液中。組合療法視需要而定，抗瘤形成治療劑可與任何其他標準抗瘤形成療法組合給予；這些方法是所屬
技術領域：
的技術人員所已知的，并在E.W.Martin著《Remington'sPharmaceuticalSciences》中有所闡述。[OH1]試劑盒本發(fā)明提供用于與病毒相關瘤形成的診斷性成像、治療、預防或監(jiān)控的試劑盒。一具體實施例中，所述試劑盒包括含有有效量(如單位劑型)的用于治療瘤形成的試劑的組合物。另一具體實施例中，所述試劑盒包括含有病毒裂解誘導試劑的組合物。再一具體實施例中，所述試劑盒包括用于將瘤形成成像的試劑。一些具體實施例中，所述試劑盒包含無菌容器，該容器含有治療性或預防性細胞組合物；這些容器可以是盒子、安瓿、瓶子、小瓶、管、袋、小袋、透明包裝或
技術領域：
中已知的其他適用容器形式。這些容器可由塑膠、玻璃、層壓紙、金屬箔或其他適用于容納藥品的材料。如果需要，本發(fā)明試劑可與給予患有瘤形成或具有瘤形成傾向的受驗者該試劑的說明書同時提供。所述說明書一般包括關于組合物用于將瘤形成成像、或用于治療或預防瘤形成的資訊。其他具體實施例中，所述說明書包括下述至少一項治療劑或成像劑的描述；用于治療或預防瘤形成或其癥狀的用量和給予方法；注意事項；警告；適應癥；禁忌癥；用藥過量資訊；不良反應；動物藥理；臨床研究和/或參考文獻。所述說明書可直接列印在容器上(若存在容器)，或作為粘附在容器上的標簽，或作為單頁、冊、卡或折頁放入容器內(nèi)或與容器同時提供。除特別說明外，本發(fā)明實踐采用所屬
技術領域：
的技術人員知識范圍內(nèi)的分子生物學(包括重組技術)、微生物學、細胞生物學、生物化學和免疫學傳統(tǒng)技術。文獻資料如《分子克隆實驗室手冊(第二版)》("MolecularCloning:ALaboratoryManual",secondedition(Sambrook，1989))、《寡核苷酸合成》("01igo薦leotideSynthesis，，(Gait，1984))、《動物細胞培養(yǎng)》("AnimalCellCulture"(Freshney，1987))、《酶學方法》("MethodsinEnzymology")、《實驗免疫學手冊》("HandbookofExperimentallmm皿ology"(Weir，1996))、《哺乳動物細胞的基因轉(zhuǎn)移載體》("GeneTransferVectorsforMammalianCells"(MillerandCalos，1987))、《分子生物學實驗室指南》("CurrentProtocolsinMolecularBiology"(Ausubel，1987))、《PCR:聚合酶鏈反應》("PCR:ThePolymeraseChainReaction",(Mullis，1994))、《免疫學實驗室指南》("CurrentProtocolsinImmunology"(Coligan，1991))中完整解釋了這些技術。這些技術科用于本發(fā)明聚核苷酸和多肽的生產(chǎn)，因此，本身可認為用來完成和實踐本發(fā)明。下文將探討對特定具體實施例尤其有用的技術。下列實施例的提出向所屬
技術領域：
的技術人員提供如何完成和使用本發(fā)明的測定、篩選和治療方法的完全公開，下列實施例并不用來對發(fā)明人認為是其發(fā)明的范疇作成限制。通過下列實施例進一步闡明本發(fā)明，該實施例不應被認為用以限制本發(fā)明。實施例實施例1:由熒光素酶測定所鑒定的Zta啟動子活化試劑Zta是EBV裂解性感染中的關鍵反式啟動因數(shù)。所有已報導的裂解誘導試劑均活化Zta的轉(zhuǎn)錄。為了鑒定誘導EBV中即刻早期基因表達的藥物，評估胃癌細胞株背景下Zta啟動子熒光素酶報告體的活性以檢測已知的EBV裂解基因表達誘導試劑。如圖l所示，這個啟動子-上皮細胞測定中，使用佛波醇12-十四酸酯13-醋酸酯(phorboll2-tetradecanoate13-acetate，TPA)和丁酸酯(TPA/butyrate)以及丙戊酸進行處理導致劑量熒光素酶的表達以劑量依賴的方式增加，而5'-氮脫氧胞嘧啶不活化這個啟動子(圖1)。所述啟動子-報告體系統(tǒng)可能不反映病毒游離基因環(huán)境中Zta啟動子的調(diào)控。所示ZTA啟動子-上皮細胞測定聚焦于無病毒系統(tǒng)中EBV復制的單一、明確定義的態(tài)樣。在多水平上調(diào)整EBV裂解性感染，包括裂解啟動子的后天修飾和潛在蛋白質(zhì)抑壓。ZTA熒光素酶不鑒定藥物如5'-氮脫氧胞嘧啶。因此發(fā)展用于高通量篩選的基于互補病毒-細胞的測定。實施例2:用來鑒定EBV裂解誘導試劑的GFP-病毒基測定的發(fā)展BX-I是具有中斷BXLF10RF的重組EBV，用來編碼GFP，而AKATA-BX1細胞是具有這個重組EBV的Akata陰性細胞。顯微鏡方法顯示，當以抗-IgG誘導AKATA-BX1細胞中EBV裂解性感染時，GFP信號將隨著裂解誘導而增加(圖2A)。由于GFP是通過EBV重組病毒編碼的，病毒復制將產(chǎn)生更多GFP并獲得更強的熒光信號。通過微量培養(yǎng)盤判讀器檢測這個GFP信號。在裂解誘導之后，檢測相對熒光單位(RFU)的增加(圖2A)。GFP信號被S階段CDK抑制劑PurvalanolA特異性地抑制，有報導稱PurvalanolA抑制EBV裂解誘導[7](圖2B)。為了確定GFP信號誘導是否由CMV啟動子活化或反射裂解性復制造成，使用具有GFP質(zhì)粒驅(qū)動的CMV啟動子的穩(wěn)定Hela細胞株作為對照。此對照細胞株中，所研究的裂解誘導試劑無一顯示增加的GFP信號(圖2C)。與熒光素酶測定相比，Akata-BXl細胞內(nèi)的GFP信號被5'-氮脫氧胞嘧啶以劑量依賴的方式誘導(圖3)。以96-孔型式，所述GFP測定可輕易適應高通量測定。實施例3:基于臨床化合物的庫的藥物篩選約翰霍普金斯臨床化合物庫(JohnsHopkinsClinicalCompoundLibrary，JHCCL)含有2720中化合物，以10iiM的最終濃度篩選該庫中的化合物。將化合物溶解于匿S0或PBS中，加入96-孔盤中。圖4顯示GFP全病毒測定的典型讀出。于一個或兩個測定中，超過200中化合物被鑒定為潛在的裂解誘導藥物。經(jīng)鑒定具有活性的大部分試劑可被分成5大類蛋白酶體抑制劑、抗微管蛋白藥物、糖皮質(zhì)素和載體激素、核苷類似物、以及抗炎藥。盡管很多命中物是共有的，淋巴瘤細胞株/全病毒測定中糖皮質(zhì)素活性是最頻繁被鑒定的，而在上皮細胞-啟動子報告體測定中抗微管蛋白藥物最常被發(fā)現(xiàn)。有意思的是，很多抑壓命中物并不是通常為人所知為細胞毒性藥物的藥物。那些命中物中有辛伐他汀(simvastatin)和洛伐他汀(lovastatin)，近來，有報導稱這兩種藥物誘導EBV轉(zhuǎn)型類淋巴母細胞株的凋亡(Katanoetal.，ProcNatlAcadSciUSA，2004.101(14):4960-5)。這些試劑的進一步研究可能揭示EBV相關腫瘤的某些腫瘤特異性療法。對先前已顯示誘導EBV裂解周期的藥物進行再鑒定，表示用于上述兩種測定的方法的決定性確認。通過上皮細胞啟動子報告體測定得以證實的藥物僅為甲氨喋呤、順鉑、5-FU和紫杉醇。通過淋巴瘤細胞株/全病毒測定得以證實的藥物僅為大部分糖皮質(zhì)素藥物和抗-IgG。通過兩種測定均得以證實的藥物是阿霉素、PMA和部分糖皮質(zhì)素藥物。通過兩種測定均未得以證實的藥物是丁酸鈉、精氨酸丁酸酯和氯化鈷(圖5)。隨后以5iiM、liiM、100nM和lOnM進行相同測定來進一步研究所述命中物，從而確定用于誘導裂解性感染的ECs。。接著在EBV陽性細胞株中測試有希望的命中物。對于這些進一步的科學研究，在該庫中單獨獲得化合物。這些是部分基于所述試劑在進一步分析中的可用性，以及部分用以表示最初篩選中鑒定的化合物的多樣性而選擇的。對于在較低分子濃度具有活性的化合物和并非傳統(tǒng)細胞毒性藥物的化合物的興趣較小。實施例4:被鑒定作為裂解誘導試劑的硼替佐米、甲苯達唑、阿糖胞苷啟動子-上皮細胞測定揭示很多藥物能誘導BZLF啟動子。曲尼司特是抑壓肥大細胞脫顆粒作用、組胺釋放和纖維化過程的抗過敏性藥物(圖6)。所述抗炎效果是通過NF-KB功能的抑制達到的。來氟米特抑制二氫乳清酸酯脫氫酶(嘧啶生物合成中的第四種酶)，并于體外對抗生長因數(shù)介導的平滑肌細胞增殖。來氟米特用來治療風濕性關節(jié)炎。治療性血漿濃度的曲尼司特和來氟米特將BZLF啟動子誘導高至15倍(圖6)。有報導稱僅即刻早期蛋白BZLF就足以觸發(fā)整個裂解連鎖反應。然而，能在熒光素酶測定中誘導BZLF啟動子的藥物不必誘導BZLF蛋白質(zhì)表達。上述試劑不誘導EBV陽性細胞株如SNU719、AKATA、Raji、LCL和Rael細胞內(nèi)的BZLF蛋白質(zhì)表達。所述熒光素酶測定中的其他命中物誘導BZLF1蛋白質(zhì)而非病毒的復制。這一類別的藥物包括阿糖胞苷(Ara-C)(圖7A)和吲哚洛芬(圖9A)。Ara-C在熒光素酶測定中誘導BZLFI啟動子(圖7B)，且誘導LCL細胞中的ZTA表達(圖7C)。阿糖胞苷和吲哚洛芬觸發(fā)EBV即刻早期基因表達，但停止晚期的裂解連鎖反應。阿糖胞苷誘導SNU719、LCL、AKATA-BX1細胞中的即刻早期蛋白ZTA(圖8A和8B)，也誘導裂解基因RPA和TK表達(圖8C)，但不誘導病毒復制(圖8D)。噴哚洛芬誘導SNU719中的ZTA，但不誘導病毒復制(圖9A至9D)。硼替佐米是兩種測定中最突出的命中物(圖IOA)。所述測定中，硼替佐米ECs。是納摩爾規(guī)模的，這與治療性血漿濃度一致。當在EBV(+)B細胞中測試時，硼替佐米不僅誘導裂解基因如ZTA(圖10B)、RTA和EBV-TK，還誘導EBV復制(圖10C)。甲苯達唑也能誘導EBV+細胞株內(nèi)的BZLF1蛋白質(zhì)表達和病毒復制(圖11)。總而言之，通過在臨床化合物庫中應用兩種測定，所述篩選鑒定很多具有強大EBV裂解誘導活性的FDA核準藥物。已有報導稱，被oriP穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的質(zhì)粒中Zta啟動子的調(diào)整與EBV中內(nèi)源Zta啟動子的調(diào)整相似(Jenkinsetal.，JVirol，2000.74(2):p.710-20)。在oriP質(zhì)粒中的染色質(zhì)結(jié)構被保持在乙酰化期間時，Zp啟動子區(qū)域不被甲基化。盡管該報導使用"規(guī)則的"pGL2質(zhì)粒用于藥物篩選，仍觀察到相似的染色質(zhì)結(jié)構。所述Zp啟動子被丁酸鹽(HDAC抑制劑)誘導，但不被甲基化抑制劑(5-氮脫氧胞嘧啶)誘導。所觀察到的GFP信號對應于病毒復制，且是EBV裂解誘導的可靠報告體。GFP信號在復制過程中的連續(xù)產(chǎn)生和容易定量化是重要長處。GFP已經(jīng)作為報告體用在很多病原體如結(jié)核菌(Mycobacteriumtuberculosis)(Collinsetal.，AntimicrobAgentsChemother,1998.42(2):p.3447)、HIV(Daelemansetal.，MolPharmacol,2005.67(5):p.1574-80)、CMV和HCF(Leeetal.，JVirolMethods,2004.116(1):p.27-33)的藥物篩選測定中。本發(fā)明確立用于即時監(jiān)控細胞內(nèi)EBV復制的新穎測定，并使這個測定適應高通量篩選。在GFP和熒光素酶測定中發(fā)現(xiàn)的不同命中物反映兩種測定的不同特點。而且，和使用其他高通量篩選的結(jié)果相同，所述測定的敏感度和特異性為篩選中所使用的藥物濃度所限制。兩種篩選均未檢出精氨酸丁酸酯和丁酸鈉，這是因為測試濃度(10PM)遠遠低于報導的有效濃度(0.5至2mM)。如本文所示，本發(fā)明提供誘導EBV裂解感染的試劑。EBV裂解感染也被認為在移植后淋巴增生疾病(Posttransplantationlymphoproliferativedisorders,PTU))中扮演重要角色。理解各種能再活化EBV復制的試劑可能對治療這些病癥有用。曲尼司特和來氟米特在治療性濃度活化所述裂解啟動子。盡管它們并不誘導B細胞或胃上皮細胞(SNU719)中的裂解蛋白表達或病毒復制，吲哚洛芬在以高劑量誘導SNU719細胞中的Zta蛋白質(zhì)顯示希望。我們的命中物中大多數(shù)是細胞毒性藥物，可能與病毒回應壓力而活化的觀念一致。一組截然不同的藥物是微管破壞藥物。阿糖胞苷代表能誘導即刻早期和早期基因表達，但不誘導整個裂解復制的一類特殊藥物。其作用可能歸因于對病毒DNA聚合酶的抑制。這類藥物能完成宿主細胞凋亡所需的主要步驟而不造成病毒血癥，因此引起研究者興趣。不僅是即刻早期基因BZLFl和BRLF1被誘導，裂解連鎖反應可波及TK，這允許更昔洛韋和病毒成像能運作。發(fā)現(xiàn)現(xiàn)存藥物的新用途是有希望的方法?，F(xiàn)存化合物的篩選可能鑒定某些已知藥物的新活性/適應癥。此庫的一個顯而易見的優(yōu)點是，所述篩選之后的臨床試驗繞開了確立毒性和藥代動力學所需的費時費錢的過程。實施例5:硼替佐米誘導EBV-TK如免疫印跡(圖12A和12B)、ZTA/熒光素酶活性(圖12C)、和["C]FIAU蓄積所反映的TK功能活性(圖12D)所評估的，硼替佐米治療誘導EBV-TK和EBV-ZTA表達。不存在硼替佐米時或EBV(-)細胞株中，未檢測到抗原或功能活性。如表達綠色熒光蛋白(GFP)的BX-I細胞株(圖13A和13B)所示，硼替佐米的效果是劑量依賴的。通過即時DNAPCR測量的病毒拷貝數(shù)也隨著治療而增加(圖13C)。良好識別的硼替佐米的效果之一是IkB的穩(wěn)定化和由之而來的NF-kB的抑制。在確定之一路徑對于裂解基因表達的誘導是否也重要的嘗試中，以伯基特細胞株轉(zhuǎn)染實驗中的IkB超阻遏者(IkB(sr))研究硼替佐米的效果。如圖13D所示，轉(zhuǎn)染后，EBV病毒負載增加大約12倍。此外，在20nM硼替佐米存在下培養(yǎng)EBV(+)Akata細胞48小時后，67X的細胞進入裂解周期，且該誘導被證明是劑量依賴的。以硼替佐米或磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)處理攜帶EBV(+)伯基特淋巴瘤異種移植物的小鼠，并在注射[^1]FIAU后的多個時間成像(圖14)。總是在給予[125I]FIAU的24小時前，給予硼替佐米，也是靜脈給予。早期時間點獲得的圖像僅揭示心血池、肝臟、膀胱和甲狀腺，與所確立的[^1]FIAU生物分布一致。在注射放射性藥物l天后，可以看見以硼替佐米處理的動物體內(nèi)的腫瘤，且在注射4天后，被處理動物體內(nèi)的腫瘤清晰可見，盡管膀胱內(nèi)的放射活性非常豐富。此細胞株被處理96小時后，2iig/g的硼替佐米剌激最大靶標信號與非靶標信號的比例。如同時進行的離體伽馬計算所述，圖14B中96小時時間點上箭頭所指的放射活性是腫瘤內(nèi)的。攜帶另一EBV(+)伯基特細胞株(Rael)異種移植物的動物中也獲得了相似結(jié)果。該例中，以硼替佐米而非PBS處理的腫瘤于放射性藥物注射30小時后得以清晰視覺化。圖15顯示給予放射性藥物72小時和96小時后，EBV(+)Akata細胞株異種移植物的SPECT-CT圖像。該圖像中，72小時和96小時的每克注射劑量百分比(％ID/g)分別是1.13±0.01和0.70±0.01。僅有一只鼠使用SPECT-CT成像，因此使用每一圖像的多層掃描計算標準偏差(SD)值。實施例6:離體生物分布為了證實圖14和15的圖像中看起來位于腫瘤內(nèi)部的放射活性實際上也位于腫瘤內(nèi)并對攝入量定量，對攜帶EBV(+)異種移植物的動物進行附加實驗來實現(xiàn)離體生物分布測定。以硼替佐米預處理的動物的腫瘤內(nèi)，盡管更早期[^1]FIAU攝入的明顯增加，峰值出現(xiàn)在注射后96小時。圖14A顯示96小時處，以PBS預處理的小鼠體內(nèi)缺乏腫瘤攝入(0.039%ID/g);圖14B顯示以硼替佐米預處理的動物的腫瘤攝入的時間進程。以硼替佐米處理后，腫瘤對放射性藥物的吸收從0.039%ID/g增加至0.85%ID/g，比基線值增加了幾乎22倍(表1)。表l攜帶人類EBV(+)腫瘤(Akata)的嚴重聯(lián)合免疫缺陷的小鼠體內(nèi)[^1]FIAU的組織分布28<table>tableseeoriginaldocumentpage29</column></row><table>于其他組織即肝臟、脾、腎和肌肉內(nèi)檢測到的放射活性于24小時至96小時的時間點間減少。為了證實硼替佐米處理后的腫瘤成像能力并不反映導致FIAU蓄積的人類細胞激酶的誘導，還對EBV(-)骨肉瘤異種移植物進行成像。經(jīng)或不經(jīng)硼替佐米處理的腫瘤攝入都不明顯。然而，被設計成構成式表達EBV-TK的相同細胞株可輕易成像(圖16)。這些結(jié)果表明，與成像相關的病理學誘導效果是由病毒TK而非細胞激酶活性介導的。報告體轉(zhuǎn)基因(r印ortertransgene)在確定感興趣的內(nèi)源性基因表達中的用途已經(jīng)成為細胞和分子生物學的主干。那些先前僅用于體外研究的技術已經(jīng)拓展至體內(nèi)成像。體內(nèi)分子-基因成像的相對較新領域使用各種模型，大部分對應臨床使用的技術包括磁共振成像和PET。通過以適用的成像報告體(主要是但不限于HSV1-TK)轉(zhuǎn)染細胞，并使用各種經(jīng)放射性標記的物質(zhì)和配體，研究者能測量各種細胞進程包括T-細胞運輸(T-cellstrafficking)、免疫活化、對機理特異性抗癌劑的回應和蛋白質(zhì)相互反應網(wǎng)的組裝。兩個報導使用分子-基因成像來鑒定患者體內(nèi)被抗腫瘤基因治療制劑中的HSVl-TK產(chǎn)生性轉(zhuǎn)染的細胞。本發(fā)明將內(nèi)源性TK表達成像，來研究結(jié)腸癌實驗模型的聯(lián)合細菌裂解治療(combinedbacteriolytictherapy)禾口一般性細菌感染(Bettegowdaetal.，ProcNatlAcadSciUSA2005;102:1145，該文獻以引用形式并入本文)。本文使用分子-基因成像來研究基因EBV-TK的表達(將EBV-TK作為誘導病毒裂解周期的替代標志)，從而可避免使用基因轉(zhuǎn)染步驟。對EBV伯基特和Akata淋巴瘤異種移植物進行病毒TK表達的藥理學誘導后，使用專門的伽馬相機以「si]FIAU成像。與病原性病毒相關的腫瘤們本身即提供用于腫瘤直接成像的報告體基因。所述方法敏感度高，僅有占腫瘤質(zhì)量5%的細胞需要誘導進入裂解周期即可通過特定EBV(+)細胞株的成像進行檢測。盡管所使用的腫瘤模型是皮下的，Y射線顯著衰變的缺乏暗示所述方法可用于身體內(nèi)的腫瘤深處。如上所述，自2，700種食品和藥物管理局(FoodandDrugAdministration)核準的藥物中篩選，鑒定出硼替佐米作為誘導EBV裂解周期的最高活性藥物，提供本研究的邏輯依據(jù)。抑制NF-kb路徑會誘導所述ebv裂解周期。已知硼替佐米藉由抑制IkB的降解而具有抗NFkB活性。本文所報導的結(jié)果揭露了抗-NFkB活性與裂解誘導之間的連接，提供在所研究的與EBV相關淋巴瘤中觀察到的結(jié)果的機理。基于這些發(fā)現(xiàn)，用于成像的腫瘤的病毒相關性很可能可用于癌癥的治療。值得注意的是，已有人探索一些涉及腫瘤中病毒基因表達調(diào)制的治療策略(Jacobsetal.，Lancet2001;358:727-9;Yaghoubietal.，JNuclMed2006;47:706-15)。這些療法可通過本報導所述的潛伏期模型進行非侵襲性監(jiān)控；或使用已經(jīng)臨床使用的放射性標記的核苷類似物在患者體內(nèi)進行非侵襲性監(jiān)控(Jacobsetal.，Lancet2001;358:727-9;Yaghoubietal.，JNuclMed2006;47:706-15)。優(yōu)化某些與病毒相關腫瘤治療的方法是常規(guī)且為熟悉該技術的人士所知的方法。硼替佐米是先前已知對誘導裂解感染有效的眾多新試劑之一，是可通過成像調(diào)整而用于具體患者的特定試劑。舉例來說，引發(fā)治療后，如果腫瘤不能在短期內(nèi)被十分肯定地描繪在[mi]FIAU-PET掃描圖上，應停止該患者的裂解誘導治療而代之以另一潛在地更有益方法。在指示治療有益效果的成像研究中的陽性信號與天然關于病毒基因組的特異性基因誘導機理性聯(lián)系，而不需要所述成像報告體的病毒轉(zhuǎn)染或其他轉(zhuǎn)染，這證明可向抗癌療法提供可輕易轉(zhuǎn)譯的優(yōu)點。實施例7:設計成構成式EBVTK表達為了評價可能以病毒TK誘導實現(xiàn)的關于腫瘤組織中2'-氟-2'-脫氧-!3-D-5-碘尿嘧啶-呋喃阿拉伯糖苷(FIAU)的特異性，使用先前設計成表達EBV-TK的人類骨肉瘤細胞株(Moore，S.M.，Ca翻n，J.S.，Tanhehco，Y.C.，Hamzeh，F(xiàn).M.&Ambinder，R.F.InductionofEpstein_Barrviruskinasestosensitizetumorcellsto皿cleosideanalogues.AntimicrobAgentsChemother45，2082-2091(2001))。將腫瘤細胞皮下移植入SCID小鼠的側(cè)腹部。腫瘤可觸知后，靜脈給予[^1]FIAU，并在不同時間點殺死鼠進行組織分布研究(圖17)。2小時處，TK(+)腫瘤內(nèi)放射活性的選擇濃度明顯，且直到96小時的最后時間點為止，所述腫瘤內(nèi)放射活性水平保持恒定，但非靶標組織內(nèi)的放射活性水平降低。在較遲時間點進行的平行實驗中，從2小時起至4天后的最后時間點，腫瘤內(nèi)的放射活性穩(wěn)定。腫瘤內(nèi)放射活性與肌肉內(nèi)放射活性的比值從輸液后2小時的4.6爬升，輸液后24小時升至峰值205，并在輸液后96小時下降至114。為了確定腫瘤組織內(nèi)EBV-TK介導的放射性同位素濃度是否足以實現(xiàn)治療效果，以[mi]FIAU或緩沖鹽水處理具有腫瘤的鼠(圖18A至18C)。注射緩沖鹽水的鼠體內(nèi)的對照腫瘤與TK腫瘤、和注射[mi]FIAU的鼠體內(nèi)的對照腫瘤顯示相似的生長曲線，值得注意的是，這些生長曲線的斜率(線性回歸確定)的95%可靠區(qū)間重疊。注射[mi]FIAU的鼠體內(nèi)TK腫瘤的生長斜率平坦(即以[mi]FIAU處理的TK的斜率可靠區(qū)間尤其包括零斜率評估值且不與其他生長曲線的可靠區(qū)間重疊)，表明所述處理的生長速度顯著減緩。獨立實驗中，增加[131I]FIAU的劑量與提高腫瘤生長減緩效果相關(圖18B)。當植入TK腫瘤細胞和對照腫瘤細胞的混合物以產(chǎn)生惡性腫瘤時，所述混合物中TK表達腫瘤細胞百分比的增加也與提高腫瘤生長減緩效果相關(圖18C)。實施例8:EBV-伯基特淋巴瘤的硼替佐米誘導的酶靶向放射性治療如上所述，蛋白酶體抑制劑硼替佐米被鑒定為體外伯基特淋巴瘤細胞株和鼠科異種移植物模型細胞株內(nèi)裂解性EBV感染的誘導試劑。為了評價可能通過天然感染的腫瘤組織中的藥理學誘導實現(xiàn)的特異性，將EBV(+)伯基特淋巴瘤細胞皮下移植入SCID小鼠的側(cè)腹部。腫瘤可觸知后，在給予硼替佐米24小時后靜脈給予[mi]FIAU，并殺死鼠進行組織分布研究。這些腫瘤中，所測得的每克組織內(nèi)放射活性的選擇濃度明顯(表l)。30表2注射后(p.i.)，攜帶人類腫瘤的小鼠體內(nèi)[125I]FIAU(5iiCi)的組織分布<table>tableseeoriginaldocumentpage31</column></row><table>因此，進行治療性同位素的評價。如上所述，移植入EBV伯基特淋巴瘤異種移植物的SCID小鼠接受緩沖劑或硼替佐米，并在第二天使用[mi]FIAU治療或不進行治療。由圖19A可見，注射緩沖劑后接受[mI]FIAU的鼠的腫瘤生長曲線與僅注射緩沖劑的鼠的腫瘤生長曲線類似。接受硼替佐米而不使用[mi]FIAU者減緩腫瘤生長。接受硼替佐米再接受[^1]FIAU則停止腫瘤生長(95%可靠區(qū)間與0重疊，但不與僅接受緩沖劑或接受緩沖劑和[^1]FIAU的生長曲線斜率的95^可靠區(qū)間重疊)。使用第二種EBV(+)伯基特淋巴瘤細胞株(Akata)的實驗得到平行(parallel)結(jié)果。因此，硼替佐米允許了具有治療效果的[mi]FIAU的靶向性。其他蛋白酶體抑制劑也似乎有活性。部分已經(jīng)在臨床試驗中。實施例9:EBV胃癌的硼替佐米誘導的酶靶向放射性治療盡管EBV是在非洲伯基特淋巴瘤中發(fā)現(xiàn)的，且與很多AIDS相關的淋巴瘤和何杰金淋巴瘤有關，與EBV具有數(shù)量上最重要相關性的是上皮癌。EBV實際上與所有鼻咽癌(每年80，000例新病例)和將近10%的胃癌(每年93，000例新病例)相關。為了確定硼替佐米-誘導策略是否也可以用于上皮癌，在可移植與人類EBV相關胃癌(KT)的異種移植物模型中研究硼替佐米誘導的FIAU靶向性(Chong，J.M.etal.，Interleukin-lbetaexpressioninhumangastriccarcinomawithEpstein—Barrvirusinfection.JVirol76,6825-6831(2002))。移植入KT腫瘤后，以硼替佐米誘導并隨后以[125I]FIAU處理SCID小鼠，使用單光子發(fā)射型電腦斷層顯像(SPECT)對腫瘤成像(圖20A)。組織分布研究顯示腫瘤組織中[125I]FIAU的選擇濃度，盡管腫瘤組織內(nèi)和其他組織內(nèi)[^1]FIAU選擇濃度的比不如伯基特株中的顯著(表l)。當誘導之后進行[mi]FIAU處理時，腫瘤生長速度減弱(圖19B)。實施例10:KSHV惡性腫瘤的硼替佐米誘導的酶靶向放射性治療如對兩種攜帶KSHV的原發(fā)滲出性淋巴瘤(PEL)細胞株的研究所示，在與EBV相關腫瘤中觀察到的方法也可用于其他與KSHV相關腫瘤中。SCID異種移植物模型中，硼替佐米允許使用[^1]FIAU成像BCBL1和BC3兩者(圖20B)。使用硼替佐米之后的組織分布研究顯示腫瘤組織內(nèi)的選擇濃度(表l)。最終，當以硼替佐米誘導之后使用[mi]FIAU處理后，腫瘤退化(圖19C)。HSV1-TK已經(jīng)作為工具用在癌癥的基因治療方法中。已經(jīng)在臨床科研究和動物模型中研究通過逆轉(zhuǎn)錄病毒載體、腺病毒載體等進入腫瘤細胞的引入。同樣，已有報導使用組蛋白去乙?；敢种苿┱T導EBV-TK再使用KSHV進行治療來誘發(fā)一些患者癥狀的緩解。本文所報導的結(jié)果提供一個新方法硼替佐米誘導的酶靶向放射性核素(bortezomib-inducedenzymetargetingofradionuclide,BETR)治療。對鼠禾斗的人類腫瘤異種移植物的BETR療法顯示，BETR療法在誘導淋巴惡性腫瘤和上皮癌的緩解方面更有效。1311標記的抗體對抗患者體內(nèi)的淋巴瘤的結(jié)果表明，向腫瘤給予O.5至2Gy可實現(xiàn)臨床回應。利用圖17的生物分布數(shù)據(jù)評估每一給予活度下腫瘤和重要器官所吸收的劑量，圖17的生物分布數(shù)據(jù)還暗示，對于[mi]FIAU，腎和紅骨髓為劑量限制性器官。如在線增補中的詳細敘述，向70kg患者體內(nèi)的1克腫瘤輸送0.5至2Gy具有重要器官劑量是低于細胞毒性。關于BETR治療的潛在臨床用途，與FIAU相關毒性成為討論的依據(jù)。先前已經(jīng)將FIAU作為抗病毒劑進行研究。FIAU的長期定量給予與肝損害和一些致命病理有關，顯然是損害線粒體的結(jié)果。那些試驗中，治療時間少于4周、累積劑量小于200mg的治療是與毒性的臨床證據(jù)或生物化學證據(jù)無關。因此，F(xiàn)IAU的"無效劑量"可保守性評估為每次給予0.lmg/kg。已經(jīng)給予患者[咖I]FIAU而成像而不會對肝功能有不良反應(Diazetal.，PloSONE2，el007(2007))。從異種移植物實驗推知，似乎可給予比人體無效劑量低數(shù)個量級的倍數(shù)的劑量的FIAU來實現(xiàn)放射性治療效果。上述結(jié)果顯示，硼替佐米處理導致淋巴瘤和癌癥異種移植物模型中FIAU的濃縮并影響每個所研究腫瘤的生長曲線(圖19)。在所述淋巴瘤模型中，生長停止，而在所述胃癌模型中，生長減緩。使用常規(guī)方法優(yōu)化胃癌中硼替佐米給予劑量和[mi]FIAU給予量，應能實現(xiàn)與淋巴瘤中所觀察到的相類似的實效水平。由于阿拉伯糖基("直立")構造中含有2'-氟取代基的嘧啶核苷中，N-糖基鏈結(jié)的化學穩(wěn)定性和代謝穩(wěn)定性高而使得FIAU的生物轉(zhuǎn)化(transformation)受到限制，因此FIAU不易于產(chǎn)生影響其他放射性藥物效果的的安全問題(Jacobsetal.，JNuclMed42，467-475(2001))。24小時周期內(nèi)的血清和全血研究中，97.8%±0.1%的經(jīng)標記化合物未變化，表明優(yōu)異的穩(wěn)定性和低脫碘敏感度。FIAU還可以從血漿中更迅速清除。由于所給出的低脫碘水平和更快的清除速度，預期對健康組織的不良反應為最小。此外，必須在理解放射是治療很多與EBV相關腫瘤(包括胃癌、鼻咽癌、何杰金淋巴瘤和非何杰金淋巴瘤)的主要方法的背景下評估放射的潛在不良反應。放射對腫瘤組織的特異代謝靶向性應已最小化關于暴露于其中的正常組織的不良反應。BETR療法提供超越其他裂解誘導致死前藥方法的優(yōu)勢。所有裂解誘導方法都受限于丙肝病毒潛伏趨勢。當更昔洛韋或類似試劑介導細胞殺滅時，治療效果將可能需要大部分腫瘤細胞表達病毒酶。盡管已經(jīng)證實，旁觀者殺滅(bystanderkilling)現(xiàn)像歸因于通過縫隙連接(gapjunctions)的細胞之間進行的磷酸化核苷和核苷類似物的交換，這種殺滅仍受限?；蛑委熤校呀?jīng)進行嘗試來設計基因載體中連接素蛋白的表達增加，從而增加這種殺滅。然而，這增加旁觀者殺滅的方法在不涉及基因治療的方法中不易使用。事實上，一些用于治療腫瘤的治療劑可干擾所述旁觀者殺滅。[mI]FIAU旁觀者殺滅不受連接素表達或縫隙連接的限制，但[mi]FIAU旁觀者殺滅是最大能量為0.61MeV的P發(fā)射的函數(shù)，能量的90%沉積于半徑為0.7mm[26的球內(nèi)。此"交叉火力(cross-fire)"效果似乎是淋巴瘤放射免疫療法實效的重要貢獻者。使用[^1]FIAU的"交叉火力"可從圖19C中推出，其中，當甚至10X的腫瘤細胞攜帶EBV-TK時，腫瘤生長速度被充分減緩。圖24表示細胞水平放射劑量測定建模。裂解誘導致死前藥方法的第二限制是更昔洛韋介導的殺滅依賴于細胞周期。幾個科研組報導EBV和KSHV感染的細胞中裂解感染的活化導致細胞周期停滯，因此可能包含細胞周期依賴的腫瘤殺滅。相比之下，放射效果并不因裂解誘導而同樣減輕。BETR療法也可以提供超越放射免疫治療方法的優(yōu)勢。放射免疫偶聯(lián)物的內(nèi)移可導致游離放射性同位素的降解和釋放，結(jié)果喪失特異性。與之相反，注射FIAU后，放射性同位素與EBV-TK表達腫瘤穩(wěn)定關聯(lián)(圖17A)。酶促磷酸化和DNA的并入(如已經(jīng)在HSV1-TK表達細胞中報導的)提供在腫瘤組織內(nèi)實現(xiàn)不被濃度梯度限制的高濃度的可能性。最后，因FIAU和硼替佐米兩者都是小分子，因此可預期比抗體偶聯(lián)物具有更好的腫瘤滲透性。FIAU不穿越血腦屏障，但確實到達腦部腫瘤，反映了血腦屏障的破壞。更廣泛地，使用小分子來活化組織或腫瘤特異性代謝方法暗示，放射的代謝靶向性可能具有超出甲狀腺癌的應用。實施例11:KSHV腫瘤治療圖22至24描述使用硼替佐米和[131I]FIAU治療KSHV腫瘤。實施例12:將鼠類生物分布數(shù)據(jù)放大至人類并使用0LINDA軟體進行MIRD放射劑量測定計算通過假設小鼠中器官或腫瘤內(nèi)藥物濃度與全身濃度的比值與人類相等，將鼠類生物分布數(shù)據(jù)換算為與之相當?shù)娜祟悢?shù)據(jù)而用于放射劑量測定。表3列出了重要正常器官的吸收劑量評估值。表3重要器官所吸收劑量評估值<table>tableseeoriginaldocumentpage33</column></row><table>假設對于人類的1公克(gm)腫瘤，從鼠類腫瘤1.95%ID/g的起始(即2_h)活性濃度換算為7X10—4%ID/g。如生物分布數(shù)據(jù)所示，假設這濃度下1311的生物清除可忽略，70kg人類的lgm腫瘤的每一給予活度吸收劑量(absorbeddoseperadministeredactivity)是0.lmGy/MBq(0.38rad/mCi)。使用131I_標記的抗體對抗患者體內(nèi)淋巴瘤的實驗暗示，以0.5至2Gy照射腫瘤即實現(xiàn)回應。實現(xiàn)這個劑量范圍所需的5至20GBq(135to540mCi)恰當?shù)靥幱诒碇兴械恼Ｆ鞴傥談┝吭u估值所給出的正常器官耐受內(nèi)。20GBq的總給予活度將分別造成對腎的0.2Gy和對紅骨髓的0.02Gy?；谕獠苛Ｗ邮头派潆膶嶒灒I可耐受25至27Gy而不中毒；紅骨髓的最大耐受劑量是2Gy。給予540mCi劑量將可能存在邏輯問題，但這些能通過3次或4次注射分批給予而加以避免。實施例13:細胞水平的放射劑量測定分析使用蒙特卡羅類比包GEANT4，構建呈不同尺寸(每邊約10個細胞、約20個細胞、約50個細胞、約150個細胞)的六邊形晶格(74%占據(jù)體積vs.52%立方晶格)的球形細胞的球形腫瘤模型。1311根據(jù)三個不同圖形隨機衰變-全部細胞都含有1311_50%的細胞含有1311_10%的細胞含有1311收集每個細胞中累積的能量，并(通常)在歷經(jīng)1千萬次蒙特卡羅解析(MonteCarlohistories)之后計算每個細胞內(nèi)的劑量。圖24顯示細胞簇內(nèi)的活度分布。不顧表達TK的細胞的百分比，腫瘤細胞簇的平均吸收劑量約為每250萬衰變4.3至4.4Gy。TK表達細胞的百分比較低時，每個細胞的劑量有輕微比例的增加，這是因為總活度分配至較少數(shù)目(隨機選擇)的細胞。因為相對于腫瘤細胞尺寸，1311的P粒子的發(fā)射為較長范圍，每個細胞的平均劑量不依賴于接受活度的比例。下圖描述不同百分比的TK表達細胞對腫瘤吸收劑量輪廓的影響。不顧表達TK的細胞的百分比，腫瘤細胞簇的平均吸收劑量約為每250萬衰變4.3至4.4Gy。TK表達細胞的百分比較低時，每個細胞的劑量有輕微比例增加，這是因為總活度分配至較小數(shù)目(隨機選擇)的細胞。因為相對于腫瘤細胞尺寸，I-131的P粒子的發(fā)射為較長范圍，每個細胞的平均劑量不依賴于接受活度的比例。使用下述方法和材料進行實施例1至6的實驗。細胞株和質(zhì)粒研究兩種EBV(+)伯基特淋巴瘤細胞株，和一種缺少EBV的次株(Rael，AkataEBV(+)，AkataEBV(_))(Ambinderetal.，HematolOncolClinNorthAm2003;17:697-702，v-vi;andFengetal.，JVirol2004;78:1893-902)。在具有10%胎牛血清、100U/ml青霉素、100iig/mL鏈霉素和lOOmML-谷氨酰胺的1640RPMI(LifeTechnologies)中維持月中瘤細胞株。如先前所述(Mooreetal.，AntimicrobAgentsChemother2001;45:2082-91)，以表達EBV-TK的質(zhì)粒和對照載體(PCDNA3)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染人類骨肉瘤細胞株(143B)。于溴脫氧尿嘧啶(BrdU，Sigma，St.Louis，M0)中傳代所述143B細胞株以保存細胞TK(-)表現(xiàn)型。將TK-143B和V143B細胞維持在添加10%胎牛血清(GeminiBioProducts，Calabasas，CA)、100U/mL青霉素、100iig/mL鏈霉素、2mML_谷氨酸酰胺和400iig/mL用于選擇的G418的杜伯克改性基本成分培養(yǎng)基(Dulbecco'smodifiedessentialmedium)(GibcoBRL，Gaithersburg，MD)中，在37°C、5%C02下培養(yǎng)。BX-I是編碼GFP且具有BXLF10RF斷裂的重組EBV細胞株。從CMV啟動子轉(zhuǎn)錄GFP。Akata-BXl和AGS-BX1細胞分別是含有這種重組EBV的Akata細胞核AGS細胞(Wangetal.，JVirol11，9590-9612(2003))。基于IkBa的NF-kB超阻遏者(sr)IkBa(sr)是通過進行絲氨酸-32和絲氨酸_36的突變而產(chǎn)生的，該絲氨酸-32和絲氨酸-36是IkB激酶的耙標；或通過刪除?？恐吝@些耙標的IkB的N端部分而產(chǎn)生的。IkBa(sr)通過防止其磷酸化和后續(xù)降解來阻遏剌激誘導的NF-KB活化。將DNA片段克隆至表達載體pEVRF中(Wangetal.，(1999)NatMed5，412-7;Fuetal.，(2004)JBiolChem279,12819-26)?；瘜W藥品硼替佐米由千禧預測醫(yī)藥公司(MillenniumPredictiveMedicinelnc.)(Cambridge,MA)提供。5-氮-2'_脫氧胞嘧啶、丁酸鈉和更昔洛韋(GCV)自Sigma公司(St.Louis，MO)購買。[2-14C]2'-氟-2'-脫氧-|3-0-5-碘尿嘧啶-呋喃阿拉伯糖苷(["C]FIAU)、FIAU和2'-氟-2'-脫氧-尿嘧啶-e-D-呋喃阿拉伯糖苷(FAU)來自莫拉維克生化試劑公司(MoravekBiochemicals)(Brea，CA)。[125I]NaI自MP生化試劑公司(MPBiomedicals)(CostaMesa，CA)購買。根據(jù)Jacobs等報導的方法(Jacobsetal.，(2001)JNuclMed42,467-75)合成r5l]FIAU。簡單地說，將30iigFAU(1.22mmol)溶解于170iiL2MHN03中。向所述溶液加入1至5mCi的[1251]亂在130。C加熱內(nèi)容物45分鐘。以150iiL高效液相色譜(HPLC)流動相(20:79.9:0.1MeCN:H20:三乙胺)淬滅反應。使用PhenomenexLunaC18半制備柱(Phenomenex，Torrance,CA)(10um，4.6X250mm)和2mL/min流速的與上述流動相權利相等物的反相HPLC純化所得[125I]FIAU。減壓濃縮產(chǎn)物，配制于0.9%生理鹽水中，以0.22iim針頭過濾器無菌過濾。將配方保存在lmCi/mL，以最小化注射入vul3鼠尾靜脈的體積。最終放射化學產(chǎn)率50%，且放射化學純度>99%。比放射性始終^2，000Ci/,l。體外細胞攝入對于體外[14C]FIAU攝入研究，以5X105細胞/mL接種細胞，以10nM硼替佐米在37。C培養(yǎng)6至12小時。洗滌細胞，再以0.04iiCi/mL[14C]FIAU在37。C培養(yǎng)2、4、8、24、48、72小時。離心分離使細胞成球，用未標記的FIAU洗滌。隨后通過以貝克曼庫爾特LS5000TA閃爍計數(shù)器(BeckmanCoulterLS5000TAscintillationcounter)(Fullerton，CA)分別對所分離細胞的放射活度和合并有洗滌液的培養(yǎng)基的放射活度進行閃爍計數(shù)。通過在裂解緩沖液(0.05MTris，pH7.6，0.15MNaCl，l%triton-X100，2mMEDTA)中培養(yǎng)來提取總細胞蛋白，通過離心分離移除細胞碎片。收集上清液，使用BCA蛋白測定試劑盒(Pierce，Rockford，IL)根據(jù)制造商說明書確定蛋白濃度。以蓄積率表示細胞攝入，即每克細胞的每分鐘計數(shù)(cpm/g)除以培養(yǎng)基的cpm/g(mL)。腫瘤產(chǎn)生將5X106個細胞再次懸浮于200iiL基質(zhì)膠基質(zhì)(MatrigelMatrix)(EDBiosciences,Bedford,MA)中，經(jīng)皮下注入6至7周齡的雄性SCID小鼠的肩膀附近。當腫瘤直徑達到大約1cm時進行后續(xù)研究。免疫印跡分析為了檢測EBV-TK或EBV-ZTA的表達，首先在4。C將細胞以含有蛋白酶抑制劑的裂解緩沖液(O.05MTris，pH7.6，0.15MNaCl，1%triton-X100，2mMEDTA)處理10分鐘，提取總細胞蛋白。4°CT10分鐘內(nèi)將下列試劑加入lmL裂解緩沖液中2yL亮肽素(5mg/mL)、1iiL0.2MNa3V04、1iiLNaF、1PL抑肽酶(10mg/ml)、1PL抑肽素(2mM)和lOiiLPMSF(100mM)。離心分離，收集上清液并儲存在_80°C。使用BCA蛋白測定試劑35盒(Pierce,Rockford，IL)根據(jù)制造商說明書確定蛋白濃度。在7.5%SDS-聚丙烯酰胺凝膠上將總細胞蛋白的lOyg等分試樣分級。將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移至PROTRAN硝基纖維素膜(Schleicher&Schue11，Keene，NH)上。4。C下，在含有0.1%TWEEN-20(PBS-T)的PBS內(nèi)以5%印跡級脫脂奶粉(Bio-rad，Hercules,CA)阻斷該膜過夜。隨后以PBS-T洗滌該膜兩次，室溫下，以來自兔子(經(jīng)合成EBV-TK肽(GRHESGLDAGYLKSVNDAC)免疫兔)的兔抗TK血漿或抗ZTA單克隆抗體(Argene，NorthMass即equa，NY)的1/1，000稀釋液培養(yǎng)1小時。洗滌后，以HRP偶合的羊抗兔IgG抗體或HRP偶合的羊抗小鼠IgG抗體(AmershamPharmaciaBiotech,Piscataway，NJ)的1/5，000PBS-T稀釋液在室溫下培養(yǎng)1小時。洗滌該膜兩次，使用ECL蛋白質(zhì)印跡測試試劑(AmershamPharmaciaBiotech)檢測蛋白質(zhì)。室溫下將該膜曝光顯影于X-OMAT膠片(Kodak,Rochester,NY)。用于EBV拷貝數(shù)的即時PCR使用QIAampDNA微試劑盒(Qiagen，CA)根據(jù)制造商說明書從被處理細胞中提取基因組DNA。使用TaqManPCR通用試劑盒(Perkin-ElmerCorp.，Branchburg,NJ)設定50iiL的PCRs。熒光探針是通過Perkin-Elmer應用生物系統(tǒng)定制合成的。PCR引物是GibcoBRL(Frederick,Md.)合成的。每一反應含有5iiL的10X緩沖液A(4mMMgCl2)、擴增引物(300nM)、熒光探針(25nM)、dATP、dCTP和dGTP(各200iiM)、dUTP(400uM)、0.25U的AmpliTaq金和0.5U的AmpErase尿嘧啶N糖基化酶。所提取的基因組DNA用于擴增。在DNAPerkin-Elmer應用生物系統(tǒng)7700序列檢測器(Perkin-ElmerAppliedBiosystems7700sequencedetector)中的96孔反應盤內(nèi)進行擴增。對每一樣品進行二重復分析，每次分析中均包括多個負水空白。使用從EBV陽性細胞株Namalwa中提取的DNA作為標樣，平行進行標準曲線且每次分析進行二重復。動物準備所有工作均在符合約翰*霍普金斯動物管理和使用委員會(JohnsHopkinsAnimalCareandUseCommittee)章程的條件下進行。成年雄性SCID小鼠(5至6周齡)自國立癌癥研究所(NationalCancerlnstitute)(Frederick,MD)購買。成像的3天前，所有小鼠每天均接受lmL腹腔內(nèi)(i.p.)注射的0.9%Nal溶液，連續(xù)注射3天，來阻斷甲狀腺對游離放射性碘核的攝入。注射[^1]FIAU的24小時之前，以硼替佐米引發(fā)裂解誘導。每只小鼠均i.P.注射劑量為2iig/g的硼替佐米。硼替佐米是溶解于PBS中的新鮮溶液，注射前方使用0.2iim針頭過濾器(Millipore，Billerica，MA)無菌過濾。對照小鼠則僅i.p.注射PBS。注射放射性示蹤劑當天，i.p.注射2.3mL/kg的混合物(25mg/mL克他命(ketamine)和2mg/mL乙酰丙嗪的0.9%鹽水)進行麻醉。給予異氟烷(isoflurane)(0.5至1L/分，0.5%至1%)來保持麻醉。隨后，將使用劑量校準器(CRC-15R，C即intec，Ramsey,NJ)測量的4.44MBq(1.2mCi)的[125I]FIAU注射入每只小鼠的尾靜脈中。體外生物分布以硼替佐米處理后，通過尾靜脈注射O.074MBq(2iiCi)的[125I]FIAUPBS溶液。每一指示時間通過頸脫位法殺死4只小鼠。移除腫瘤、肝、脾、腎、脂肪、血液和肌肉并稱重，之后使用自動伽馬計數(shù)器測量組織放射活度，。還收集O.lmL血液樣品。通過與原始劑量的標準稀釋樣品比較，計算組織的每克注射劑量百分比(percentinjecteddosepergram(%ID/g))。還計算標準偏差(SD)。平面伽馬成像和SPECT-CT作為離體生物分布研究的附屬研究，進行成像。除了采用SPECT-CT的例子(見下文)之外，不從圖像中獲取定量數(shù)據(jù)。X-SPECT(GammaMedicaInstruments，Northridge，CA)具有尺寸為20.5cmX15cmX9em的y射線檢測頭和120mmX125mm的視野(F0V)。本研究所使用的高解析度平行孔型準直器具有下列規(guī)格1.22mm孔直徑、0.20mm隔片厚度、25.4mm鉆孔長度。檢測頭材料或閃爍晶體由NaI[Tl]構成，具有2mmX2mmX6mm的圖元尺寸。將小鼠以俯伏狀放置在該平行孔型準直器上，以使用精確噴霧器(VetEquip，Pleasanton，CA)輸送的異氟烷保持麻醉。使用X-SPECT隨附的LumaGEMTM軟體的靜態(tài)獲取協(xié)定(staticacquisitionprotocol)。獲得每只小鼠的十分鐘高解析度掃描。使用上述Y射線檢測器和CT檢測器依續(xù)進行SPECT-CT，而不必從工作臺上移除該小鼠。成像數(shù)據(jù)分析使用開源門戶網(wǎng)站SourceForge(http://amide,sourceforge.net)提供的用于SPECT-CT的免費軟體ImageJ1.30v(http:〃rsb.info.nih.gov/ij.NationalInstitutesofHealth,Bethesda，MD)或AMIDE(AMedicalImageDataExaminer)分析圖像。細胞株Akata-BX-1細胞源自具有重組GFPEBV的AkataEBV(-)細胞。AGS-BX-I細胞是具有重組GFP-EBV的AGS細胞(Haubner，R.，Avril，N.，Hantzopoulos，P.A.，Gansbacher，B.&Schwaiger，M.Invivoimagingofherpessimplexvirustype1thymidinekinasegeneexprossion:earlykineticsofradiolabeledFIAU.EurJNuc1Med27，283-291(2000))。GFP轉(zhuǎn)錄自CMV即刻早期啟動子。為了控制所述CMV啟動子的非特異性活化，使用具有包含CMV啟動子驅(qū)動的GFP的PegfpNi質(zhì)粒(CL0NTECH)的穩(wěn)定的Hela細胞株。在添加10%胎牛血清(FBS)禾P0.8mg/mlG418的RPMI1640培養(yǎng)基(Akata)、DMEM(Hela)或Ham'sF-12培養(yǎng)基(AGS-BX1)中生長細胞。質(zhì)粒HC131含有鏈結(jié)至熒光素酶報告體基因的BZLFIE啟動子序列(-578—13，相對于mRNA開始位點)。通過HC131和pBabc-puro對AGS細胞的共轉(zhuǎn)染構建含有HC131質(zhì)粒的穩(wěn)定細胞株，并通過1pg/ml嘌呤霉素選擇該細胞株。穩(wěn)定表達適當基礎水平(decentbasallevel)的熒光素酶的AGS細胞克隆體已用于藥物篩選。在具有10%FBS和lug/ml嘌呤霉素的HamsF-12中生長AGSHC131。在具有10%FBS的RPMI1640培養(yǎng)基中生長LCL、Raji和SNU_719。所有細胞均在37°C、5%C02和100%濕度下生長?；瘜W藥品和庫約翰霍普金斯臨床化合物庫(JHCCL)含有2720種化合物。將上述所有臨床化合物溶于匿S0或PBS中，以200iiM濃度配制于96孔盤中。每盤包括80個藥物孔和16個空白對照孔(每側(cè)一列)。Anti-IgG自ABI獲得。曲尼司特、甲苯達唑、吲哚洛芬、Ara-c、丁酸鹽、2-丙基戊酸鹽、來氟米特和TPA自Sigma(St.Louis，M0)獲得。硼替佐米自千禧預測醫(yī)藥公司(Cambridge,MA)獲得。PurvalanolA自Calbiochem獲得。對于裂解誘導研究，以106/ml量接種細胞，以測試化合物處理48小時。平行培養(yǎng)未經(jīng)處理的對照細胞。GFP微板讀出對于GFP熒光掃描將AKATA-BX-I細胞以每孔2X10s細胞/200iil等分置入96孔盤(Costar3595)中。接著，對于每孔，將待測藥物(10yl，200yM)從藥物板轉(zhuǎn)移至細胞板中并混合，得到10i!M的濃度。該板中除了含測試藥物外，還包括含有培養(yǎng)基而不含細胞或藥物的孔和含有細胞而無藥物的孔。將anti-IgG加入4個孔中作為正對照。保持板達30天。每隔一天讀一次板。以熒光計數(shù)微板熒光劑(FluorocountMicroplatefluorometer)(PackardBioscienceCompany,Weliesley,MA)掃描板。在485nm激發(fā)GFP，而在530nm測量發(fā)射量。將讀數(shù)輸出至Excel進行試算表分析。于加入該庫中的藥物30分鐘后進行第一次讀數(shù)，從而排除自發(fā)熒光的藥物。第3天，正對照顯示增加的GFP信號，將任何大于該正對照讀數(shù)2/3的讀數(shù)均視為采樣數(shù)。熒光素酶報告體測定為完成熒光素酶測定，將AGS-HC131細胞以4X104/200的濃度接種入96孔盤中，放置過夜。接著，對于每個孔，均將lOiU的200iiM藥物從藥物板中轉(zhuǎn)移到細胞板中，混合。向每個板的空白列中加入丁酸鹽作為正對照。隨后培養(yǎng)該板48小時，再進行熒光素酶測定。從Promega獲得熒光素酶報告體基因測定試劑，根據(jù)制造商說明書進行所述測定。蛋白質(zhì)印跡分析以PBS洗滌細胞兩次。以裂解緩沖液提取總細胞蛋白。在聚丙烯酰胺中進行該蛋白的電泳，隨后將該蛋白轉(zhuǎn)移至PROTRAN硝基纖維素膜(Schleicher&Schue11，Keene，NH)上。在4t:，使用初級抗體(Ab)探針探測印跡過夜后。洗滌后，加入HRP偶聯(lián)的二級Ab，并用增強化學發(fā)光系統(tǒng)(enhancedchemiluminescencesystem,ECU(Amersh咖)檢測。使用下列抗體抗ZTA(Argene)、抗f3肌動蛋白(anti-f3-actin)(Sigma)和抗小鼠(Sigma)。IFA以1iiMAra-c處理LCL細胞48小時。隨后以PBS洗滌所述細胞，再懸浮，并放置于多溶素載玻片上。進行間接免疫熒光測定和熒光顯微測定。于-2(TC以甲醇固定所述載玻片，以PBS洗滌，以初級抗體抗ZTA(l:200)(Argene)培養(yǎng)，以PBS洗滌，再用若丹明偶聯(lián)的驢IgG(donkeyrhodamine-conjugatedIgG)(JacksonPharmaceuticals,westGrove，Pa)進行二級抗體培養(yǎng)。使用含有4'，6'-二酰胺基-2-苯基吲哚(DAPI)(VectorShield)的封固液標示所述細胞的細胞核。使用Metamorph軟體(UniversialImaging-MolecularDevices)以40X物鏡的帶有CCD鏡頭(PrincetonInstruments)的E800顯微鏡觀察并拍照載玻片。定量PCR以使用ICycler系統(tǒng)(Biorad，Hercules,CA)的即時PCR對EBV基因組定量。使用小量血液DNA試劑盒(Qiagen，Valencia,CA)提取模板DNA。BamHI-W弓|物為BamH5'(5'-CCCAACACTCCACCACACC-3')和BamH3'(5'-TCTTAGGAGCTGTCCGAGGG3')和熒光探針(5'-(FAM)CACACACTACACACACCCACCCGTCTC3')。平行進行標準曲線且每次分析進行二重復，使用從每個細胞中含有兩個完整病毒基因組的EBV陽性二倍體細胞株Namalwa中提取的DNA作為標準物。以MyiQ信號彩色即時PCR檢測器(Biorad)收集擴增數(shù)據(jù)，并用Biorad研發(fā)的MyiQ軟體分析該擴增數(shù)據(jù)。使用下列方法和材料實現(xiàn)實施例7至10所報導的結(jié)果。細胞株和質(zhì)粒在含有10X胎牛血清、100units/mL盤尼西林、100iig/mL鏈霉素和100mmol/LL-谷氨酰胺的RPMI1640(LifeTechnologies,Gaithersburg，MD)中懸浮培養(yǎng)以維持淋巴瘤細胞株(如上所述的)。如先前所述(Mooreetal.，AntimicrobAgentsChemother45,2082-2091(2001))，TK-143B和V143B細胞為來自攜帶表達EBV-TK的質(zhì)?；?qū)φ蛰d體(PCDNA3)的人類骨肉瘤(143B)細胞的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞株。將這些細胞維持在添加10%胎牛血清(GeminiBioProducts，Calabasas，CA)、100units/mL盤尼西林、100Ag/mL鏈霉素、2mmol/LL_谷氨酰胺和400Ag/mLG418的DMEM(LifeTechnologies)中以進行選擇。將KT可移植EBV(+)胃腺癌在SCID小鼠中傳代(Chongetal.，JVirol76，6825-6831(2002))。化學藥品以1.67iig/克靜脈給予硼替佐米。自MoravekBiochemicals(Brea，CA)獲得FIAU和2'-氟_2'-脫氧-尿嘧啶-P-D-呋喃阿拉伯糖苷。自MPBiomedicals(CostaMesa，CA)購買[125I]和[131I]NaI。如先前所述合成『1]FIAU和[131I]FIAU。為了進行成像或治療，在給予硼替佐米24小時后給予FIAU。在所述每次實驗中，以單一劑量型式給予硼替佐米。腫瘤產(chǎn)生對所培養(yǎng)的細胞株進行支原體測試，并發(fā)現(xiàn)為陰性。再次將細胞(5X106)懸浮于200iiL基質(zhì)凝膠基質(zhì)(BDBiosciences,Bedford,MA)中，注入6至7周齡的雄性SCID小鼠中。每隔一天用卡鉗測量一次最長垂直腫瘤直徑。根據(jù)三維橢圓公式4^i/3X(寬度/2)2X(長度/2)(LeBlancetal.，CancerRes62，4996-5000(2002))計算腫瘤體積。當腫瘤直徑達到1厘米尺寸時，進行治療和成像研究。離體生物分布如先前所述，將溶解在PBS的r5l]FIAU注射入尾靜脈中，在每個指示時間點殺死3至4只小鼠，移除器官并稱重，使用自動伽馬計數(shù)器測量組織放射活度。通過與原始劑量的標準稀釋相比，計算組織的每克注射劑量百分比(％ID/g)。平面伽馬成像、SPECT計算X射線斷層攝影技術和成像分析如本文先前所述，作為離體生物分布研究的附屬進行成像。X-SPECT(GammaMedicaInstruments,Northridge,CA)具有尺寸為20.5X15X9cm的y射線檢測頭和120X125mm的視野(FOV)。本研究所使用的高解析度平行孔型準直器具有下列規(guī)格1.22mm孔直徑、0.20mm隔片厚度、25.4mm鉆孔長度。由NaI[Tl]材料構成的檢測頭具有2X2X6mm的圖元尺寸。將小鼠以俯伏狀姿放置在該平行孔型準直器上，以異氟烷保持麻醉。獲得每只小鼠的十分鐘高解析度掃描。使用上述y射線檢測器和CT檢測器依續(xù)進行SPECT-CT，而不必從工作臺上移除小鼠。以用于SPECT-CT的ImageJvl.30(NIH，Bethesda，MD)或AMIDE(AMedicalImageDataExaminer)(SourceForge所提供的免費軟體)分析成像數(shù)據(jù)。生物統(tǒng)計學。使用GraphPadSoftware(SanDiegoCaliforniaUSA，www.graphpad.com)的Windows環(huán)境下的GraphPadPrism軟體(version5.0)進行線性回歸禾口曲線擬合。其他具體實施例從上述說明書可知，顯然，可對本發(fā)明進行改動和變更以使其適應各種用途和條39件。這些具體實施例也落入權利要求的范疇內(nèi)。本文中對于一個變數(shù)的任何定義的元件列表的敘述包括該變數(shù)作為任何單一元件或所列元件組合(亞組合)的定義。本文中具體實施例的敘述包括該具體實施例作為任意單一具體實施例或與其他具體實施例或其部分組合。本說明書中提及的全部專利和出版物均以引用形式并入本文，引用程度等同于具體且單獨標示為通過引用形式并入。權利要求一種用于治療病毒天然感染瘤形成(neoplasia)的經(jīng)標記藥物組合物，所述組合物包含有效量的病毒裂解誘導試劑，其中，所述試劑選自蛋白酶體抑制劑、微管破壞劑、糖皮質(zhì)素或甾類激素、核苷類似物或抗炎劑。2.—種用于治療與病毒相關瘤形成的藥物組合物，所述組合物包含有效量的選自硼替佐米、曲尼司特、來氟米特、甲苯達唑、阿糖胞苷或吲哚洛芬的試劑。3.根據(jù)權利要求1所述的藥物組合物，其中，所述組合物進一步包含2'-氟_2'-脫氧-p-D-5-碘尿嘧啶-呋喃阿拉伯糖苷(FIAU)的經(jīng)放射性標記的類似物。4.根據(jù)權利要求1或2所述的藥物組合物，其中，所述有效量為足以在受驗者體內(nèi)誘導病毒基因表達或病毒復制。5.根據(jù)權利要求1或2所述的藥物組合物，其中，所述有效量為非細胞毒性的。6.根據(jù)權利要求1所述的藥物組合物，其中，所述蛋白酶體抑制劑是硼替佐米。7.根據(jù)權利要求1所述的藥物組合物，其中，所述瘤形成是受EB病毒(EBV)或卡波西氏肉瘤皰疹病毒天然感染形成的。8.根據(jù)權利要求1所述的藥物組合物，其中，所述瘤形成是淋巴瘤、胃癌、卡波西氏肉瘤或鼻咽癌。9.一種用于診斷與天然發(fā)生的感染相關瘤形成的藥物組合物，所述組合物包含有效量的2'-氟-2'-脫氧-13-D-5-碘尿嘧啶-呋喃阿拉伯糖苷(FIAU)的經(jīng)經(jīng)放射性標記的類似物。10.根據(jù)權利要求9所述的藥物組合物，其中，所述感染是病毒感染或細菌感染。11.根據(jù)權利要求9所述的藥物組合物，其中，所述組合物包含使用根據(jù)權利要求1至6項中任意一項所述的具有病毒裂解誘導試劑的組合物的說明書。12.根據(jù)權利要求9所述的藥物組合物，其中，使用SPECT或PET可見所述放射性標記。13.根據(jù)權利要求9所述的藥物組合物，其中，所述類似物包括碘-1231、1241或1251的放射性核素。14.一種用于治療與感染相關瘤形成的藥物組合物，所述組合物包含有效量的2'_氟-2'-脫氧-5-碘-D-呋喃阿拉伯糖基尿嘧啶(FIAU)的經(jīng)放射性標記的類似物。15.根據(jù)權利要求14所述的藥物組合物，其中，所述放射性核素為a、e或Y粒子輻射體。16.根據(jù)權利要求14所述的藥物組合物，其中，所述放射性核素選自9°Y、186Re、188Re、64CU、67Cu、212Pb、212Bi、123I、211At、213B或131I。17.根據(jù)權利要求14所述的藥物組合物，其中，所述放射性核素放射至少約0.5至2Gy。18.根據(jù)權利要求14所述的藥物組合物，其中，所述FIAU的有效量為約0.001至0.lmg/kg之間。19.根據(jù)權利要求14所述的藥物組合物，其中，所述FIAU的有效量為約0.01至0.lmg/kg之間。20.根據(jù)權利要求14所述的藥物組合物，其中，所述瘤形成是受EB病毒(EBV)或卡波西氏肉瘤皰疹病毒天然感染形成的。21.根據(jù)權利要求14所述的藥物組合物，其中，所述瘤形成的結(jié)果是淋巴瘤、胃癌、卡波西氏肉瘤或鼻咽癌。22.根據(jù)權利要求14所述的藥物組合物，其中，所述組合物包含使用根據(jù)權利要求1至6項中任意一項所述的具有病毒裂解誘導試劑的組合物的說明書。23.—種用于鑒定病毒裂解誘導試劑的方法，所述方法包含使具有潛在病毒感染的腫瘤細胞與試劑接觸和檢測該細胞內(nèi)病毒裂解多肽的表達或活性的增加或病毒復制的增加。24.根據(jù)權利要求23所述的方法，其中，所述方法鑒定一種或多種ZTA表達、RTA表達、病毒胸苷激酶表達或活性、和病毒復制的增加。25.根據(jù)權利要求23所述的方法，其中，通過檢測報告體多肽表達的增加測定所述病毒裂解多肽的表達或活性。26.根據(jù)權利要求25所述的方法，其中，所述報告體受BZLFIE啟動子序列或Zta啟動子序列控制。27.根據(jù)權利要求26所述的方法，其中，所述報告體是熒光素酶或綠色熒光蛋白。28.根據(jù)權利要求27所述的方法，其中，所述方法包括檢測病毒復制的增加。29.根據(jù)權利要求27所述的方法，其中，用微量培養(yǎng)盤判讀器檢測所述報告體。30.根據(jù)權利要求28所述的方法，其中，所述微量培養(yǎng)盤判讀器檢測相對熒光單位(RFU)的增加，所述相對熒光單位的增加鑒定出所述試劑為裂解誘導試劑。31.根據(jù)權利要求22所述的方法，其中，所述試劑選自蛋白酶體抑制劑、微管破壞劑、糖皮質(zhì)素或甾類激素、核苷類似物或抗炎劑。32.—種用于檢測受驗者體內(nèi)與感染相關的瘤形成的方法，所述方法包括給予所述受驗者有效量的病毒裂解誘導試劑和2'-脫氧-5-碘-D-呋喃阿拉伯糖基尿嘧啶(FIAU)的經(jīng)放射性標記的類似物，并可見所述瘤形成。33.根據(jù)權利要求32所述的方法，其中，使用SPECT或PET可見所述經(jīng)放射性標記的類似物。34.根據(jù)權利要求32所述的方法，其中，所述類似物經(jīng)碘-1231、1241或1251的放射性核素標記。35.根據(jù)權利要求32所述的方法，其中，所述感染是病毒感染或細菌感染。36.根據(jù)權利要求32所述的方法，其中，所述瘤形成是受EB病毒(EBV)或卡波西氏肉瘤皰疹病毒天然感染形成的。37.根據(jù)權利要求32所述的方法，其中，所述瘤形成的結(jié)果是淋巴瘤、胃癌、卡波西氏肉瘤或鼻咽癌。38.—種選擇用于具有與感染相關的瘤形成的受驗者的治療方法，所述方法包括給予所述受驗者有效量的病毒裂解誘導試劑和2'-脫氧-5-碘-D-呋喃阿拉伯糖基尿嘧啶(FIAU)的經(jīng)放射性標記的類似物；以及檢測所述受驗者體內(nèi)裂解誘導存在與否，其中，裂解誘導的增加鑒定出所述受驗者為可接受裂解誘導試劑治療和酶靶向放射性療法。39.—種用于治療或預防受驗者體內(nèi)與感染相關的瘤形成的方法，所述方法包含給予所述受驗者有效量的病毒裂解誘導試劑和2'-脫氧-5-碘-I-13-D-呋喃阿拉伯糖基尿嘧啶(FIAU)的經(jīng)放射性標記的類似物。40.根據(jù)權利要求39所述的方法，其中，所述感染是病毒感染或細菌感染。41.一種用于殺滅受病毒或細菌感染的腫瘤細胞的方法，所述方法包括使所述細胞與有效量的病毒裂解誘導試劑和2'-脫氧-5-碘-I-!3-D-呋喃阿拉伯糖基尿嘧啶(FIAU)的經(jīng)放射性標記的類似物接觸。42.根據(jù)權利要求38至41項中任意一項所述的方法，其中，所述裂解誘導試劑選自蛋白酶體抑制劑、微管破壞劑、糖皮質(zhì)素或甾類激素、核苷類似物或抗炎劑。43.根據(jù)權利要求38至41任意一項所述的方法，其中，所述裂解誘導試劑選自硼替佐米、曲尼司特、來氟米特、甲苯達唑、阿糖胞苷或吲哚洛芬。44.根據(jù)權利要求38至41任意一項中所述的方法，其中，所述放射性標記選自9°Y、186Re、188Re、64CU、67CU、212Pb、212Bi、123I、211At、213Bi或131I。45.根據(jù)權利要求38至41中任意一項所述的方法，其中，所述瘤形成是受EB病毒(EBV)或卡波西氏肉瘤皰疹病毒天然感染形成的。46.根據(jù)權利要求38至41任意一項中所述的方法，其中，所述瘤形成是淋巴瘤、胃癌、卡波西氏肉瘤或鼻咽癌。47.—種用于診斷或監(jiān)控受驗者體內(nèi)與感染相關瘤形成的試劑盒，所述試劑盒包含有效量的病毒裂解誘導試劑和2'-脫氧-5-碘-I-!3-D-呋喃阿拉伯糖基尿嘧啶(FIAU)的經(jīng)放射性標記的類似物，以及使用所述試劑盒診斷所述瘤形成的說明書。48.根據(jù)權利要求47所述的試劑盒，其中，所述感染是病毒感染或細菌感染。49.根據(jù)權利要求47所述的試劑盒，其中，所述瘤形成是受EB病毒(EBV)或卡波西氏肉瘤皰疹病毒天然感染形成的。50.根據(jù)權利要求47所述的試劑盒，其中，所述瘤形成是淋巴瘤、胃癌、卡波西氏肉瘤或鼻咽癌。51.根據(jù)權利要求47所述的試劑盒，其中，使用SPECT或PET可見所述放射性標記的類似物。52.根據(jù)權利要求47所述的方法，其中，所述類似物經(jīng)碘-1231、1241或1251的放射性核素標記。53.根據(jù)權利要求47所述的試劑盒，其中，所述裂解誘導試劑選自蛋白酶體抑制劑、微管破壞劑、糖皮質(zhì)素或甾類激素、核苷類似物或抗炎劑。54.根據(jù)權利要求47所述的試劑盒，其中，所述裂解誘導試劑選自硼替佐米、曲尼司特、來氟米特、甲苯達唑、阿糖胞苷或吲哚洛芬。55.—種用于治療受驗者體內(nèi)與病毒相關的瘤形成的試劑盒，所述試劑盒包含有效量的病毒裂解誘導試劑和2'-脫氧-5-碘-I-!3-D-呋喃阿拉伯糖基尿嘧啶(FIAU)的經(jīng)放射性標記的類似物，以及使用所述試劑盒診斷該瘤形成的說明書。56.根據(jù)權利要求55所述的試劑盒，其中，所述裂解誘導試劑選自蛋白酶體抑制劑、微管破壞劑、糖皮質(zhì)素或甾類激素、核苷類似物或抗炎劑。57.根據(jù)權利要求55所述的試劑盒，其中，所述裂解誘導試劑選自硼替佐米、曲尼司特、來氟米特、甲苯達唑、阿糖胞苷或吲哚洛芬。58.根據(jù)權利要求55所述的試劑盒，其中，所述瘤形成是受EB病毒(EBV)或卡波西氏肉瘤皰疹病毒天然感染形成的。59.根據(jù)權利要求55所述的試劑盒，其中，所述瘤形成是淋巴瘤、胃癌、卡波西氏肉瘤或鼻咽癌。60.—種殺滅細菌的方法，包括使所述細菌與2'-脫氧-5-碘-D-呋喃阿拉伯糖基尿嘧啶(FIAU)的經(jīng)放射性標記的類似物接觸。61.根據(jù)權利要求60所述的方法，其中，所述放射性標記選自9°Y、186Re、188Re、64CU、67CU、2，b，Bi3l、2"At、2"Bi或1311。62.—種治療受驗者體內(nèi)細菌感染的方法，包括給予受驗者有效量的2'-脫氧-5-碘-I-P-D-呋喃阿拉伯糖基尿嘧啶(FIAU)的經(jīng)放射性標記的類似物。63.根據(jù)權利要求62所述的方法，其中，所述放射性標記選自9°Y、186Re、188Re、64CU、67CU、2，b，Bi3l、2"At、2"Bi或1311。全文摘要本發(fā)明特色為用于檢測(detecting)、選擇用于監(jiān)控以及治療與病毒感染相關瘤形成(neoplasia)的治療方法的組合物及方法。文檔編號A61K38/16GK101730538SQ200880019523公開日2010年6月9日申請日期2008年4月10日優(yōu)先權日2007年4月10日發(fā)明者C·宗,J·K·劉,M·G·龐珀,R·F·安賓德申請人:約翰·霍普金斯大學