專利名稱：：用于消化道或泌尿道病癥的細(xì)菌提取物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及可用作適應(yīng)癥(例如消化道或泌尿道病癥)的治療的得自細(xì)菌菌株的提取物、包含該提取物的組合物、和使用不引起朊病毒病(priondisease)的風(fēng)險(xiǎn)的培養(yǎng)基制造該提取物的方法。發(fā)明背景和概述本發(fā)明涉及可用于治療適應(yīng)癥(例如泌尿道或消化病癥)的包含細(xì)菌提取物的組合物。該提取物可包含得自選自一種或更多種大腸桿菌物種的培養(yǎng)物的細(xì)菌裂解產(chǎn)物。在一些實(shí)施方案中，提取物可包含一種或更多種選自下列大腸桿菌的菌株的物種NCTC:8603、8621、8622、8623、9026、9111、9119、9707、和9708及I:081、082、083、084、085、086、087、088、和089。這些菌株根據(jù)布達(dá)佩斯條約(Bud即estTreaty)保藏。名單中所指示的具有I-號碼的菌株由法國巴斯德研究所國立微生物保藏中心(CollectionNationaledeCulturedesMicroorganismesattheInstitutPasteur，25rueduDr.Roux，75724巴黎，法國)編入索引。所有其他菌株由倫敦國立典型培養(yǎng)物保藏中心(NationalCollectionofTypeCulturesinLondon)編入索弓l。在一些實(shí)施方案中，提取物從所有這些菌株制備。在其他實(shí)施方案中，僅選擇一些菌株。在一些實(shí)施方案中，例如，一種或更多種菌株選自"I"組和一種或更多種菌株選自"NCTC，，組。在一些實(shí)施方案中，一種或更多種上述特定菌株可被省略、或用來自大腸桿菌或來自不同物種的細(xì)菌的不同菌株取代。提取物可在細(xì)胞于培養(yǎng)基中生長至適當(dāng)光學(xué)密度之后通過堿裂解的方法獲得。在一些實(shí)施方案中，細(xì)菌各自在不引起朊病毒病相關(guān)疾病的風(fēng)險(xiǎn)或其他可通過攝取得自基于動物的培養(yǎng)基的產(chǎn)物傳染的疾病的風(fēng)險(xiǎn)的培養(yǎng)基上生長。例如，在一些實(shí)施方案中使用基于植物的培養(yǎng)基(例如基于大豆的培養(yǎng)基)來培養(yǎng)細(xì)胞。在一些實(shí)施方案中，合成培養(yǎng)基可用于細(xì)胞培養(yǎng)，或可使用包括生物提取物(例如酵母提取物和馬血清)的培養(yǎng)基，其也不引起此類疾病的風(fēng)險(xiǎn)。也可過濾裂解產(chǎn)物以除去核酸和較大細(xì)胞碎片。由于過濾，在一些實(shí)施方案中，存在于提取物中的核酸的量小于100微克/毫升。在一些實(shí)施方案中，也通過過濾除去不溶性化合物，例如細(xì)胞壁碎片和降解不足的脂多糖(LPS)。因此，在一些實(shí)施方案中，所產(chǎn)生的提取物包含可溶性分子成分且不包含顯著量的不溶或顆粒物質(zhì)。糖成分可保持在提取物中，包括脂多糖(LPS)成分。在裂解方法期間，糖可變成化學(xué)修飾的，例如裂解成較小結(jié)構(gòu)或用其他官能團(tuán)取代。在裂解方法期間氨基酸的外消旋作用也從天然蛋白質(zhì)中所發(fā)現(xiàn)的天然存在的L-氨基酸產(chǎn)生D-氨基酸。D-氨基酸在增加提取物的有效時間上會是有益的，因?yàn)樗鼈冊诓溉閯游锏哪c中不被有效地消化。因此，在裂解期間被化學(xué)修飾而包含D-氨基酸的提取物中的抗原性分子留在病人的身體中較長時間，潛在地允許較強(qiáng)免疫剌激作用。雖然在現(xiàn)有技術(shù)中已使用細(xì)菌提取物來剌激免疫系統(tǒng)抵抗消化和泌尿道疾病，但仍存在對更好標(biāo)準(zhǔn)化和控制這些提取物的需要以便使其更安全、更有效、和較持久。例如，為了安全理由，原先認(rèn)為應(yīng)從細(xì)菌提取物中除去糖成分，包括潛在有毒的脂多糖(LPS)成分。(參見例如，美國專利第5，424，287號)。然而，本發(fā)明提供一種產(chǎn)生充分化學(xué)修飾的LPS成分且安全地保留糖的方法。保留這些成分也可通過提供額外抗原而改良功效。例如，發(fā)明人已發(fā)現(xiàn)監(jiān)測裂解作用的pH和時間可允許潛在地變應(yīng)性或有毒的細(xì)胞壁成分的充分降解。較低PH或較短時間的先前裂解條件，對比之下，產(chǎn)生其中細(xì)胞壁成分和LPS化學(xué)修飾不足的提取物。(參見例如，GB2054374A)。所產(chǎn)生的提取物對欲安全施用的患者而言變應(yīng)原性過強(qiáng)?？偟膩碚f，發(fā)明人已發(fā)現(xiàn)在太低pH和/或在太短時間裂解的產(chǎn)物具有較高毒性、較低蛋白質(zhì)提取、和較低過濾性。除此之外，本發(fā)明在不引起疾病風(fēng)險(xiǎn)(例如來自朊病毒病)的培養(yǎng)基中生長細(xì)菌菌株。在一些情形中過濾方法也可影響所產(chǎn)生的提取物的性質(zhì)，如過濾器的孔徑，和有時，過濾器表面的化學(xué)性質(zhì)，改變被除去和保留的物質(zhì)的類型。例如，本發(fā)明使用一種保留某些糖但除去其他分子成分(例如核酸)的過濾方法。因此，本發(fā)明提供標(biāo)準(zhǔn)化細(xì)菌提取物以幫助維持一致的安全性和功效的參數(shù)。附圖簡述圖1:用于在細(xì)菌裂解之后制備細(xì)菌提取物的切向流過濾(TFF)系統(tǒng)的示意圖。該示意圖顯示過濾器的2種不同配置其中所有過濾器同時工作的平行模式和其中過濾器以連續(xù)模式配置的蛇形模式。圖2:提取物在外周血單核細(xì)胞(PBMC)試驗(yàn)中的活性，用于裂解的起始生物質(zhì)(biomass)濃度為12.5克/升(部分A)和25克/升(部分B)(更多細(xì)節(jié)參見實(shí)施例5A)。圖3:提取物在PBMC試驗(yàn)中的活性，用于裂解的起始生物質(zhì)濃度為25克/升(部分A)和100克/升(部分B)。圖4:提取物在外周血單核細(xì)胞(PBMC)試驗(yàn)中的活性，裂解時間為24小時(部分A)和72小時(部分B)。圖5:在裂解期間NaOH的濃度對巨噬細(xì)胞的一氧化氮(NO)活性的影響。圖6:在不同實(shí)驗(yàn)組的膀胱(部分A)和腎(部分B)組織中的平均總菌落形成單位(CFU)值。圖7:用104CFU鼠傷寒沙門氏菌(Salmonellatyphimurium)感染后在21天期間實(shí)驗(yàn)組中的死亡記錄。發(fā)明的詳述定義提取物提取物，如在本文中定義的，表示在一種或更多種細(xì)菌菌株的裂解作用之后所獲得的物質(zhì)。在一些情形中，該提取物僅得自一種菌株而在其他情形中提取物為得自數(shù)種不同菌株的提取物的混合物。6堿裂解其為一種在堿性條件下(例如使用有機(jī)或無機(jī)堿)裂解細(xì)菌細(xì)胞的方法。裂解產(chǎn)物一種得自細(xì)胞裂解方法的細(xì)菌的提取物。過濾一種過濾方法，如在本文中描述的，表示提取物或提取物的混合物通過一種或更多種過濾器例如微過濾器(即微過濾)或超濾器(即超濾)。該過濾可不需要除去100%的計(jì)劃除去的成分。在一些情形中，在數(shù)個通路或循環(huán)中重復(fù)過濾。初始pH:該術(shù)語表示于步驟(例如細(xì)菌裂解作用或過濾)的開始時測量的pH。糖糖，如在文中定義的，包括單糖、二糖、以及較大的糖例如直鏈和支鏈多糖。糖也包括經(jīng)取代或化學(xué)修飾的糖，例如脂多糖(LPS)和它們的化學(xué)修飾變體。D-氨基酸該術(shù)語是指以右旋異構(gòu)形式存在的氨基酸，而不是以左旋異構(gòu)形式存在的生物合成所產(chǎn)生的L-氨基酸。外消旋作用該術(shù)語指L-氨基酸至少部份化學(xué)修飾成D-氨基酸。避免基于朊病毒(prion)的疾病的風(fēng)險(xiǎn)的培養(yǎng)基表示一種使用于制備該提取物的任何階段且不包含取自動物(例如?；蜓?、或取自任何可傳染基于朊病毒的疾病的其他動物的物質(zhì)例如血清或肉提取物的培養(yǎng)基。該培養(yǎng)基的例子包括基于植物的或合成的化學(xué)成分明確的培養(yǎng)基以及使用馬血清的培養(yǎng)基或包含取自不傳染朊病毒病的動物物種的物質(zhì)的培養(yǎng)基?；陔貌《镜募膊〉睦影?例如)瘋牛病、羊騷癢癥、和克雅病(Creutzfeld-Jacobdisease)。非動物培養(yǎng)基為一種不包含得自動物的成分的培養(yǎng)基。例子包括基于植物的(即植物性)培養(yǎng)基，例如大豆培養(yǎng)基、和合成培養(yǎng)基。治療，如在本文中使用的，表示現(xiàn)有感染及其他癥狀的治療(例如)，以及預(yù)防或防止新感染的發(fā)展(例如)二者。受試者，如在本文中使用的，表示任何動物受試者，包括哺乳動物受試者，例如人和馴養(yǎng)的哺乳動物。應(yīng)了解本文所定義和本發(fā)所使用的特定細(xì)菌菌株可包括得自本文所列舉的原保藏或其遺傳克隆的菌株，包括在較遲的時間再保藏的具有不同保藏碼名字但遺傳上被認(rèn)為是與原保藏版本相同的菌株的菌株。本文中所使用的所有數(shù)字是大約的，考慮在其測量中的固有誤差、舍入、和有效數(shù)字。提取物的制備本發(fā)明的細(xì)菌提取物可通過發(fā)酵接著生物質(zhì)的熱滅活、濃縮和收獲、在確定的條件下單一細(xì)菌生物質(zhì)的堿裂解或細(xì)菌生物質(zhì)的混合物的堿裂解制備。不同條件下的堿裂解產(chǎn)物可在通過過濾純化之前進(jìn)行混合。所得濾液可進(jìn)一步純化，例如除去顆粒物質(zhì)，且也可進(jìn)行冷凍干燥和/或配制。對于各菌株，為了獲得足夠量的物質(zhì)，發(fā)酵培養(yǎng)物可從工作種子批次開始接著接種于較大發(fā)酵容器中。各物種所使用的培養(yǎng)基可以相同。然而，可引入補(bǔ)充生長因子以提高一些物種的生長。在一些實(shí)施方案中，避免基于朊病毒的疾病的風(fēng)險(xiǎn)的培養(yǎng)基可用于生長至少一些，或全部，菌株。例子包括非動物培養(yǎng)基例如基于植物的培養(yǎng)基和合成培養(yǎng)基。其他例子包括包含馬血清或另一動物提取物的培養(yǎng)基，其取自不引起朊病毒病的威脅的動物物種，與在7可引起該風(fēng)險(xiǎn)的牛血清或肉提取物的存在下生長的菌株不同。在一些實(shí)施方案中，發(fā)酵可用小量培養(yǎng)物(例如O.1至1.0升)開始，于30至40°C(例如37°C)培養(yǎng)約3至6小時以獲得3.0至5.0的于700nm處的光學(xué)密度(OD)。小規(guī)模培養(yǎng)步驟之后，在一個或一系列較大發(fā)酵槽中的額外培養(yǎng)可在3(TC至4(TC下進(jìn)行3小時至20小時，例如3-10小時，或8小時。發(fā)酵之后，來自各菌株或一組菌株的生物質(zhì)可通過熱處理滅活、濃縮、和冷凍。在解凍冷凍的生物質(zhì)之后，可用氫氧根離子(例如來自NaOH)的濃溶液稀釋和堿化細(xì)菌懸浮液以裂解細(xì)菌細(xì)胞。在一些實(shí)施方案中，約10至約120克/升的來自一種菌株或菌株混合物的細(xì)菌干重被裂解，例如約15至約80克/升，或約15至約35克/升，例如15、20、25、30、或35克/升。在一些實(shí)施方案中，約40至約80克/升被裂解，例如40、50、60、70、或80克/升。(細(xì)菌干重濃度以每升裂解液的干生物質(zhì)的量定義。干重濃度通過在小瓷皿中于105t:干燥5毫升的物質(zhì)直到其達(dá)到恒定質(zhì)量然后以克/升記錄該質(zhì)量而測量)。在一些實(shí)施方案中，使用0.01N至1.2N的強(qiáng)堿濃度，例如，從0.ION至I.1N、或從0.ION至O.65N、或從O.ION至O.4N、或從0.1、0.2、0.3、或0.4N開始或結(jié)束的范圍、或從0.6N至1.1N、或從0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、或1.1N開始或結(jié)束的范圍、或使用堿濃度以達(dá)到12或更高的初始pH、或大于12的pH、大于12且小于13.5的pH、例如大于12.5、大于12.6、大于12.8、或從pH12.6至pH13.4。在可溶性化合物的提取后，在裂解作用期間的pH可降低。因此，在該步驟期間可調(diào)整pH。裂解溫度可為30至60°C，例如從35-40°C，例如37°C。裂解作用的時間可為20小時至數(shù)天，例如5、6、7、8、9、或10天、或從30至120小時、或從30至50小時，例如30、35、40、45、或50小時、或從60至120小時，例如60、72、84、96、108、或120小時。然后可使提取物回到較低PH，混合在一起(需要時)，和過濾。裂解之后，可溶性干重可為20至180毫克/毫升。(可溶性干重通過與上述細(xì)菌干重相同的方法測量且可選擇地以毫克/克單位報(bào)告，假定可溶性裂解產(chǎn)物的密度為1克/毫升)。通過Lowry方法測量的剩下的蛋白質(zhì)濃度可為8至75毫克/毫升，例如10至70毫克/毫升，20至60毫克/毫升，或從10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、或70毫克/毫升開始或結(jié)束的范圍。通過總還原糖的蒽酮方法(在菌株的混合物的裂解之后)測定的糖的濃度可為0.8至4毫克/毫升，例如1至3.5毫克/毫升，1.2至3毫克/毫升，或從1、1.5、2、2.5、3、3.5、或4毫克/毫升開始或結(jié)束的范圍。裂解可以一次只對一種菌株進(jìn)行、或?qū)θ克杈甑幕旌衔镞M(jìn)行。例如，混合的提取物可通過混合(例如)二種或更多種細(xì)菌裂解產(chǎn)物獲得。每一種裂解產(chǎn)物可包含io克/升的生物質(zhì)干重至90克/升，例如15-85克/升，或20-80克/升，或25-75克/升、或30-70克/升，或35-65克/升或40-60克/升，或15-35克/升，或40-80克/升。每一種裂解產(chǎn)物可包含(例如)約20體積％至80體積％的總提取物。混合二種裂解產(chǎn)物的體積比例可為(例如)25%-75%、或75%-25%、70%_30%、或30%_70%、或60%-40%、或40%-60%、或50-50%。裂解產(chǎn)物可通過離心和/或過濾純化。例如，裂解產(chǎn)物可于9000x重力下離心，接著0.2微米過濾器上的一次或多次過濾可用于純化提取物。在一些情形中，可使用連續(xù)幾次在較大孔過濾器上的過濾接著在O.2微米過濾器上過濾。也可采用超濾方法以便幫助從該提取物中提取可溶性物質(zhì)，例如，循環(huán)超濾滲透物(permeate)以進(jìn)一步微過濾。在一些實(shí)施方案中，切向流過濾(tangentialflowfiltration,TFF)方法可用于過濾提取物和用于從較大細(xì)胞碎片中提取可溶性分子。(參見圖l)。(參見例如，SeparationsTechnology,PharmaceuticalandBiotechnologyApplications,WayneP.Olson，Editor,InterpharmPress,Inc.，BuffaloGrove，IL，美國，第126至135頁-ISBN:0-935184-72-4)。在該TFF方法的開始時，稀釋的細(xì)菌裂解產(chǎn)物可儲存在第一個槽中。開始微過濾(MF)回路(loop)，和泵抽產(chǎn)物?；厥账a(chǎn)生的MF滯留物(retentate)，而MF滲透物被轉(zhuǎn)移到第二個槽。到達(dá)適當(dāng)程度的濃度之后，可開始超濾(UF)回路。為了從裂解產(chǎn)物中連續(xù)提取可溶性化合物，UF滲透物可再循環(huán)回到第一個槽而UF滯留物儲存在第二個槽中。在連續(xù)提取期間，在槽1和2中的體積可通過調(diào)節(jié)微過濾和超濾滲透物的速率調(diào)整?？捎肨FF或另一過濾方法進(jìn)行數(shù)個該提取循環(huán)。在使用TFF的實(shí)施方案中，在最后一個循環(huán)結(jié)束時，可關(guān)閉超濾回路且可單獨(dú)進(jìn)行微過濾回路和將MF滲透物轉(zhuǎn)移到槽2。微過濾回路可裝設(shè)1.2微米至0.1微米的過濾器，例如0.65至0.2微米、或0.45微米的過濾器。交叉流可在1000升/小時米2(LHM)和3000LHM之間，例如在1500和2500LHM之間、或2000LHM且具有0.6至2巴(例如在0.8和1.5巴之間、或1.0巴)的透膜壓力(TMP)。超濾回路可裝設(shè)10KDa至1000KDa(例如從10KDa至100KDa、或從10KDa至30KDa、或從30KDa至100KDa)的過濾器。交叉流可在30LHM和1000LHM之間，例如在20和500LHM之間且具有0.2至1.5巴(例如在0.4禾P1.2巴之間、或0.5巴)的TMP。在5和20之間的滲濾體積可用于從細(xì)菌細(xì)胞壁提取可溶性化合物。在一些實(shí)施方案中，使用在8和15之間的體積。因此(例如)在一些實(shí)施方案中，可使用在5和15次循環(huán)之間的過濾，在一些情形中在8和15次循環(huán)之間，例如8、9、10、11、12、13、14、或15次循環(huán)。過濾之后，可進(jìn)一步濃縮或離心提取物(如果需要)。例如，可進(jìn)行另一使用較小孔過濾器，例如0.2微米過濾器的微過濾。過濾之后，通過Lowry測量的可溶性蛋白質(zhì)的產(chǎn)率可為50至90%或大于60%。過濾之后，提取物可在使用配制之前冷凍干燥。在一些本發(fā)明的實(shí)施方案中，可選擇裂解條件以獲得"強(qiáng)"或"溫和"裂解作用。例如，在一些實(shí)施方案中，強(qiáng)裂解可通過于30-4(TC，例如35-40°C、30-35"、或37"用0.6至1.1N氫氧根離子，例如0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、或1.1N或由這些濃度限制的較小范圍裂解約15至約35克/升細(xì)菌干重，例如15、20、25、30、和35克/升或由這些濃度限制的較小范圍(例如15-20、20-25、20-30、等等)，持續(xù)60至120小時，例如60、70、80、90、100、110、和120小時或由這些時間限制的較小范圍達(dá)到。因此，如在本文中使用的，"強(qiáng)"裂解作用包括落在上述各最寬范圍內(nèi)的細(xì)菌干重濃度、氫氧根離子濃度、時間、和溫度的使用。在其他實(shí)施方案中，溫和裂解作用可通過于30-4(TC，例如35-40°C、30-35t:、或37。C用0.1至0.4N氫氧根離子(即0.1、0.2、0.3、或0.4)裂解約40至約80克/升細(xì)菌干重(例如40、45、50、55、60、65、70、75、或80)30至50小時(例如30、35、40、45、或50小時)達(dá)到。因此，如在本文中使用的，"溫和"裂解作用包括落在上述各最寬范圍內(nèi)的細(xì)菌干重濃度、氫氧根離子濃度、時間、和溫度的使用。在一些實(shí)施方案中，可制備如上所述的二種細(xì)菌裂解產(chǎn)物例如強(qiáng)和溫和裂解產(chǎn)物的混合物，例如以體積計(jì)10%對90%混合物，20/80、25/75、35/65、50/50混合物(參見(例如)下述實(shí)施例8和9)。在一些實(shí)施方案中，用于提取的所有菌9株可進(jìn)行強(qiáng)及溫和裂解作用二者，接著混合所產(chǎn)生的裂解產(chǎn)物。或者可選地，一些菌株可進(jìn)行強(qiáng)裂解作用而其他進(jìn)行溫和裂解作用。裂解產(chǎn)物的過濾可在混合之前或之后發(fā)生，例如，通過TFF方法經(jīng)由具有O.65至0.2微米過濾器(例如O.6、0.55、0.5、0.45、0.4、0.35、0.3、或0.25微米過濾器)的MF回路和具有10或30KDa過濾器的UF回路，經(jīng)總共8_15次循環(huán)、例如8、9、10、11、12、13、14、或15次循環(huán)。一旦制備，可純化本發(fā)明的提取物以除去顆粒物質(zhì)。細(xì)菌提取物的化學(xué)性質(zhì)—些根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施方案可包含(例如)5-75毫克/毫升的蛋白質(zhì)、或10-65毫克/毫升，或20-45毫克/毫升，或5-40毫克/毫升，或5-20毫克/毫升的蛋白質(zhì)或從5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70或75毫克/毫升開始或結(jié)束的范圍；1.5至2.5毫克/毫升的游離氨基酸(A.A.)，或1.5至2毫克/毫升，或2至2.5毫克/毫升的游離A.A.，或從1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、或2.5毫克/毫升開始或結(jié)束的范圍的游離A.A.，從谷氨酸(147.1克/摩爾)計(jì)算；及0.3至4.5毫克/毫升的多糖和單糖、或0.3至4毫克/毫升，或0.4至4毫克/毫升，或0.5至3.5毫克/毫升，或0.6至3毫克/毫升或0.3至1毫克/毫升或從0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、或4.5毫克/毫升開始或結(jié)束的范圍的多糖和單糖。例如，一些實(shí)施方案包含約5至9毫克/毫升的蛋白質(zhì)、2毫克/毫升的游離氨基酸(A.A.)，從谷氨酸(147.1克/摩爾)計(jì)算和/或約0.3至0.6毫克/毫升的多糖和單糖。在一些實(shí)施方案中，基于鱟變形細(xì)胞裂解物(limulusamoebocytelysate，LAL)產(chǎn)色試驗(yàn)的LPS當(dāng)量的濃度小于5000納克/毫升，或小于2000納克/毫升，或小于1000納克/毫升，或小于750納克/毫升，或小于500納克/毫升，或小于200納克/毫升，或小于100納克/毫升。根據(jù)本發(fā)明的細(xì)菌的裂解作用可導(dǎo)致兩親性化合物(例如脂多糖和脂肽)的部份水解作用。根據(jù)本發(fā)明的細(xì)菌的裂解作用也可導(dǎo)致蛋白質(zhì)的部份水解作用以及脫氨基作用、脫酰胺基作用、和氨基酸從L至D的部分外消旋化。在根據(jù)本發(fā)明提取物的一個分析研究中，在提取物的總HC1水解作用和氨基酸的衍生作用之后，觀察到D-天冬氨酸和D-天冬酰胺、0-谷氨酸和D-谷氨酰胺.D-絲氨酸J-甲硫氨酸.D-組氨酸.D-丙氨酸.D-精氨酸、D-苯丙氨酸、D-酪氨酸、D-亮氨酸、D-賴氨酸、D-纈氨酸、D-蘇氨酸的氣相層析峰。在該研究中這些種類的0-氨基酸的百分比范圍從3%至80%。因此，一些本發(fā)明的實(shí)施方案允許絲氨酸、甲硫氨酸、天冬氨酸和天冬酰胺、蘇氨酸、組氨酸、丙氨酸、精氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸、和賴氨酸中的一種或多種的外消旋化作用，例如所有的上述氨基酸、或任何一種以上但小于全部的上述氨基酸的選擇，例如，絲氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺、丙氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、和賴氨酸，或這些氨基酸的選擇。在一些實(shí)施方案中，至少10%的一種或更多種的上述氨基酸可從L外消旋化變成D。在其他實(shí)施方案中，至少30%的一種或更多種的上述氨基酸可變成外消旋化的。細(xì)菌提取物的生物活性根據(jù)本發(fā)明的提取物可有效治療罹患或處于發(fā)展泌尿道或消化道病癥(例如消化和泌尿道感染)的風(fēng)險(xiǎn)的患者。根據(jù)本發(fā)明的提取物可有效預(yù)防復(fù)發(fā)性泌尿道感染?？赏ㄟ^本發(fā)明提取物治療的病癥的例子包括大腸桿菌和其他細(xì)菌感染、尿道炎、腎小管間質(zhì)性腎炎、阻塞性腎盂腎炎、由阻塞性和反流性尿路病變導(dǎo)致的泌尿道感染、包括慢性膀胱炎的膀胱炎、包括慢性前列腺炎的前列腺炎、前列腺膀胱炎、雌性骨盆炎性疾病、克羅恩病(Crohn，sdisease);禾口腸易激綜合征(irritablebowelsyndrome)。提取物的生物活性可通過數(shù)種測定測量。例如，外周血單核細(xì)胞(PBMC)測定檢測了來自PBMC的細(xì)胞因子IL-6的產(chǎn)生且可篩選提取物剌激免疫系統(tǒng)的能力。例如，在一些實(shí)施方案中，在用本發(fā)明提取物剌激的PBMC的上清液中測量的體外IL-6濃度范圍為2000皮克/毫升至70，000皮克/毫升、2000皮克/毫升至50，000皮克/毫升、2000皮克/毫升至30，000皮克/毫升、2000皮克/毫升至20，000皮克/毫升、2000皮克/毫升至10，000皮克/毫升、或5000皮克/毫升至70，000皮克/毫升、5000皮克/毫升至50，000皮克/毫升、5000皮克/毫升至30，000皮克/毫升、5000皮克/毫升至25，000皮克/毫升、或5000皮克/毫升至10，000皮克/毫升、或15，000皮克/毫升至25，000皮克/毫升。當(dāng)LPS用作激動劑對照時(于0.01微克/毫升)，所得值取決于供體、范圍從5，000皮克/毫升至70,000皮克/毫升。鼠一氧化氮(N0)試驗(yàn)測量鼠巨噬細(xì)胞所產(chǎn)生的NO，其也指示免疫剌激。例如，巨噬細(xì)胞產(chǎn)生NO以便殺死侵入細(xì)菌。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明實(shí)施方案的一氧化氮(N0)體外活性(在0.001毫克/毫升至10毫克/毫升的可溶性干重的濃度下檢測)提供范圍為3iiM至100iiM—氧化氮、或3iiM至90iiM、3iiM至80iiM、3iiM至70iiM、3iiM至60iiM、3iiM至50iiM、3iiM至40iiM、3iiM至30iiM、3iiM至20iiM、3iiM至10iiM、或5iiM至80iiM、5iiM至60iiM、5iiM至40iiM、5iiM至20iiM、或10iiM至80iiM、10iiM至70iiM、10iiM至50iiM、10至30iiM、或10iiM至15iiM、或從3、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、或100yM開始或結(jié)束的范圍的最大反應(yīng)。在體外人類外周血單核細(xì)胞和鼠巨噬細(xì)胞中所觀察到的活性可取決于變量例如待裂解的細(xì)菌干重，即用于裂解的"起始材料"的量，堿裂解的持續(xù)時間、和NaOH的初始百分比或裂解作用中所使用的初始pH。體外活性試驗(yàn)例如PBMC和NO與LPS濃度的測定(例如通過LAL)的組合也可提供關(guān)于給定的細(xì)菌提取物的活性對毒性風(fēng)險(xiǎn)的平衡的信息。在感染模型動物體內(nèi)觀察到的活性顯示一些本發(fā)明的實(shí)施方案具有保護(hù)效果。參見(例如)實(shí)施例9，顯示動物用根據(jù)本發(fā)明的示例性提取物進(jìn)行重復(fù)的治療。在大腸桿菌泌尿道感染的體內(nèi)模型(實(shí)施例8)中，接受根據(jù)本發(fā)明的示例性提取物的預(yù)防性重復(fù)口服施用的動物顯示在泌尿道(膀胱和腎)中的較低細(xì)菌量。例如，當(dāng)這些小鼠首先用有效量的本發(fā)明的一些實(shí)施方案處理10天時，至少8只LPS-不敏感小鼠用尿道致病性大腸桿菌菌株1677攻擊之后13天的存活率為至少60%?？蛇x擇用于攻擊的尿道致病性大腸桿菌的劑量以使未處理的小鼠或用水或包含賦形劑但沒有提取物的空白制劑對照處理的小鼠具有60%或更少的存活率，例如50%或更少。在一些情形中，在該模型中用本發(fā)明的實(shí)施方案處理的小鼠的存活率為至少70%，至少80%，至少80%，至少90%、或至少95%。作為另一例子，當(dāng)這些小鼠首先用有效量的本發(fā)明的一些實(shí)施方案處理10天時，至少8只具有野生型LPS敏感性的小鼠用鼠傷寒沙門氏菌攻擊13天之后的存活率為至少60%?？蛇x擇用于攻擊的鼠傷寒沙門氏菌的劑量以使未處理的小鼠或用水或包含賦形劑但11沒有提取物的空白制劑對照處理的小鼠具有60%或更少的存活率，例如50%或更少。在一些情形中，提取物處理的小鼠的存活率為至少70%，至少80%，至少80%，至少90%、或至少95%。包含細(xì)菌提取物的組合物可以許多不同的方式配制根據(jù)本發(fā)明的提取物用于最后施用。例如，可制備口服片劑、膠囊、丸劑，以及液體制劑或氣霧劑。也可制備輸注或注射用制劑。本發(fā)明的實(shí)施方案可被配制(例如)成固體劑型或液體劑型。示例性固體劑型可包括(例如)包含提取物和任選的一種或更多種營養(yǎng)和/或膳食補(bǔ)充劑的片劑，例如包衣片、咀嚼片、泡騰片、舌下片、粒劑、粉劑、或膠囊。固體劑型也可包含稀釋劑、填充劑、和/或其他賦形劑?？杉尤肫渌x形劑成分，例如防腐齊U、著色齊U、調(diào)味齊U、和甜味齊IJ。也可能制備粉末或顆粒制劑。液體劑型如溶液、糖漿、懸浮液、或滴劑也可用于口服途徑。實(shí)施例實(shí)施例1.大腸桿菌菌株的培養(yǎng)物的制備用于大腸桿菌(E.coli)1-081(E81)、大腸桿菌1-082(E82)、大腸桿菌1-083(E83)、大腸桿菌1-084(E84)、大腸桿菌1-085(E85)、大腸桿菌1-086(E86)、大腸桿菌1-087(E87)、大腸桿菌1-088(E88)、大腸桿菌1-089(E89)、大腸桿菌NCTC8603(E8603)、大腸桿菌NCTC8621(E8621)、大腸桿菌NCTC8622(E8622)、大腸桿菌NCTC8623(E8623)、大腸桿菌NCTC9026(E9026)、大腸桿菌NCTC9111(E9111)、大腸桿菌NCTC9119(E9119)、大腸桿菌NCTC9707(E9707)，和大腸桿菌NCTC9708(E9708)的培養(yǎng)基通過將下列成分溶解在純化的水中而制得氯化鈉3.75克/升；磷酸氫二鈉2.5克/升；乙酸鈉0.625克/升；植物蛋白胨(大豆木瓜蛋白酶消化物(Soyap即aicdigest))50克/升；肌苷0.125克/升；氯化鈣0.025克/升；氯化鉀0.125克/升；碳酸氫鈉0.75克/升；精氨酸1克/升；丙酮酸鈉0.35克/升；葡萄糖3克/升；和"濃縮的元素的溶液"O.625毫升/升(其包含硫酸銅3毫克/升；氯化鐵830毫克/升；硫酸鋅860毫克/升；和硫酸1.1毫升/升)。用1.5毫升的冷凍細(xì)菌接種0.l升的培養(yǎng)基且在300毫升錐形瓶中于37t:培養(yǎng)4小時并攪拌。然后，1.0升的培養(yǎng)基在3000毫升錐形瓶中用30毫升的前述300毫升培養(yǎng)物接種且在攪拌下于37t:再次培養(yǎng)4小時。表1.1:連續(xù)培養(yǎng)步驟的光學(xué)密度<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>制備用于在較大規(guī)模發(fā)酵槽中的下一次培養(yǎng)的與上述相同的培養(yǎng)基，但在滅菌之前加入0.05毫升/升聚丙二醇和6克/升的葡萄糖。培養(yǎng)溫度調(diào)整為37°C，并在培養(yǎng)期間攪拌及曝氣。pH調(diào)整為6.8。在培養(yǎng)期間加入十二千克的葡萄糖。約10.5小時之后，通過加熱至90至IO(TC將培養(yǎng)物滅活并將其轉(zhuǎn)移到收獲槽。然后通過離心分離培養(yǎng)基的生物質(zhì)和濃縮。根據(jù)所述培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件，制備培養(yǎng)物，如下表和說明書中所示。表1.313<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>實(shí)施例1.20以與實(shí)施例1.2所述相同的條件用合成培養(yǎng)基培養(yǎng)NCTC9111。培養(yǎng)基通過將下列溶解在540升的純化的水中而制得0.2220千克的肌苷、0.3330千克的一水合檸檬酸、I.4430千克的谷氨酸、1.1655千克的氯化銨、0.7825千克的硫酸鎂2H20、1.5096千克的磷酸鉀(KH2P04)、0.3330千克的精氨酸、0.1110千克的尿嘧啶、0.0189千克的氯化鈣、II.8200千克的氯化鈉、0.5435千克的L-亮氨酸、0.5435千克的L-賴氨酸HCL、0.5435千克的L-絲氨酸、0.5435千克的L-甲硫氨酸、0.5435千克的L-纈氨酸、0.5435千克的L-丙氨酸、0.5435千克的L-天冬酰胺、14.0000升氫氧化銨、0.3420升的氫氧化鉀、40.5000千克的葡萄糖、4.1667克的氯化鐵、4.1667克的氯化鈷、4.1667克的鉬酸鈉、4.1667克的硫酸錳、4.1667克的硫酸鋅、4.1667克的硫酸鎳、0.0833克的硼酸、0.1667硫酸銅、1.8333毫升的硫酸(95-97%)。實(shí)施例2:細(xì)胞的堿裂解實(shí)施例2.1在室溫下解凍包含1810克細(xì)菌干重的一等分試樣的各下列菌株E81、E82、E83、E084、E085、E086、E087、E088、E89、E9111、E8603、E8621、E8622、E8623、E026、E9119、E9707、和E9708,然后用純化的水稀釋至26克/升的細(xì)菌生物質(zhì)(干重)。以0.8M氫氧化鈉進(jìn)行堿化作用。裂解2小時之后測量pH且為13.1。然后，該裂解作用在連續(xù)攪拌下于35-40。C溫育120小時。溫育之后，用濃HC1將pH調(diào)整至11.3。(可溶性干重)；SDW:59.4毫克/毫升；Prot:17.4毫克/毫升?？扇苄愿芍赝ㄟ^獲得5毫升的得自該裂解作用的可溶性級分且在小瓷皿中于105t:將其干燥至恒定質(zhì)量而測量。實(shí)施例2.2在根據(jù)實(shí)施例1.1至1.19，室溫下解凍包含總計(jì)9264克細(xì)菌干重的3等分試樣的E81、E82、E084、E086、E087、E89、2等分試樣的E83和E085、4等分試樣的E088、6等分試樣的E9111、9等分試樣的E8603、E9119、7等分試樣的E8621、E9707和8等分試樣的E8622、E8623、E9026、和E9708，然后用純化的水稀釋至50.1克/升的細(xì)菌生物質(zhì)濃度(干重)。堿化(用0.2N氫氧根離子)為12.3。該裂解作用在連續(xù)攪拌下于35-4(TC溫育32小時。裂解期間，監(jiān)測pH以使其減少不超過1.3pH單位。添加濃HC1將pH調(diào)整至11.3。(可溶性干重);SDW:60.7毫克/毫升;Prot:32.0毫克/毫升。實(shí)施例2.3根據(jù)表2，將生物質(zhì)稀釋至58克/升的細(xì)菌生物質(zhì)濃度。以0.4MNaOH進(jìn)行堿化作用。該裂解作用在連續(xù)攪拌下于35-4(TC溫育l天。(可溶性干重)；SDW:96.8毫克/毫升；Prot:35.3毫克/毫升。實(shí)施例2.4根據(jù)表2，將生物質(zhì)稀釋至92克/升的細(xì)菌生物質(zhì)濃度。以10NNaOH進(jìn)行于0.4M的堿化作用。該裂解作用在連續(xù)攪拌下于35-4(TC溫育l天。SDW:146.6毫克/毫升；Prot:62.9毫克/毫升。實(shí)施例2.5根據(jù)表2，將生物質(zhì)稀釋至58克/升的細(xì)菌生物質(zhì)濃度。以0.4MNaOH進(jìn)行堿化作用。該裂解作用在連續(xù)攪拌下于35-40。C溫育7天。SDW:97.7毫克/毫升；Prot:42.4毫克/毫升。實(shí)施例2.6根據(jù)表2，將生物質(zhì)稀釋至92克/升的細(xì)菌生物質(zhì)濃度。以0.4麗aOH進(jìn)行堿化作用。該裂解作用在連續(xù)攪拌下于35-40。C溫育7天。SDW:153.0毫克/毫升；Prot:78.9實(shí)施例2.7根據(jù)表2，將生物質(zhì)稀釋至58克/升的細(xì)菌生物質(zhì)濃度。以0.4MNaOH進(jìn)行堿化作用。該裂解作用在連續(xù)攪拌下于35-40。C溫育3天。SDW:98.6毫克/毫升；Prot:29.6毫克/毫升。實(shí)施例2.8根據(jù)表2，將生物質(zhì)稀釋至92克/升的細(xì)菌生物質(zhì)濃度。以0.4MNaOH進(jìn)行堿化作用。該裂解作用在連續(xù)攪拌下于35-4(TC溫育3天。SDW:127.4毫克/毫升；Prot:60毫克實(shí)施例2.9根據(jù)表2，將生物質(zhì)稀釋至43克/升的細(xì)菌生物質(zhì)濃度。以0.2MNa0H進(jìn)行堿化作用。該裂解作用在連續(xù)攪拌下于35-40。C溫育168小時。SDW:43.2毫克/毫升；Prot:8.2實(shí)施例2.10根據(jù)表2，將生物質(zhì)稀釋至57克/升的細(xì)菌生物質(zhì)濃度。以0.4MNaOH進(jìn)行堿化作用。該裂解作用在連續(xù)攪拌下于35-4(TC溫育3天。SDW:69.5毫克/毫升；Prot:20.2毫克/毫升。實(shí)施例2.11根據(jù)表2，將生物質(zhì)稀釋至30克/升的細(xì)菌生物質(zhì)濃度。以l麗aOH進(jìn)行堿化作用。該裂解作用在連續(xù)攪拌下于35-4(TC溫育3天。SDW:86.9毫克/毫升；Prot:13毫克實(shí)施例2.12根據(jù)表2，將生物質(zhì)稀釋至27克/升的細(xì)菌生物質(zhì)濃度。1MNaOH進(jìn)行堿化作用。該裂解作用在連續(xù)攪拌下于35-40。C溫育3天。SDW:91.3毫克/毫升；Prot:11.8毫克/實(shí)施例2.13根據(jù)表2，將生物質(zhì)稀釋至14克/升的細(xì)菌生物質(zhì)濃度。以0.1MNaOH進(jìn)行堿化作用。該裂解作用在連續(xù)攪拌下于35-4(TC溫育1天。SDW:25.2毫克/毫升；Prot:5.8毫克實(shí)施例2.14根據(jù)表2，將生物質(zhì)稀釋至14克/升的細(xì)菌生物質(zhì)濃度。以0.2MNaOH進(jìn)行堿化作用。該裂解作用在連續(xù)攪拌下于35-4(TC溫育3天。SDW:26.6毫克/毫升；Prot:5.7毫克實(shí)施例2.15根據(jù)表2，將生物質(zhì)稀釋至14克/升的細(xì)菌生物質(zhì)濃度。以0.1MNaOH進(jìn)行堿化作用。該裂解作用在連續(xù)攪拌下于35-4(TC溫育IO天。SDW:20.0毫克/毫升；Prot:2.1毫克/毫升。實(shí)施例2.16根據(jù)表2，將生物質(zhì)稀釋至114克/升的細(xì)菌生物質(zhì)濃度。以l麗aOH進(jìn)行堿化作用。該裂解作用在連續(xù)攪拌下于35-40。C溫育1天。SDW:163.3毫克/毫升；Prot:68.4毫克/毫升。實(shí)施例2.17根據(jù)表2，將生物質(zhì)稀釋至114克/升的細(xì)菌生物質(zhì)濃度。以0.4MNaOH進(jìn)行堿化作用。該裂解作用在連續(xù)攪拌下于35-40。C溫育3天。SDW:163.0毫克/毫升；Prot:60.3實(shí)施例2.18根據(jù)表2，將生物質(zhì)稀釋至114克/升的細(xì)菌生物質(zhì)濃度。以l麗aOH進(jìn)行堿化作用。該裂解作用在連續(xù)攪拌下于35-40。C溫育10天。SDW:171.2毫克/毫升；Prot:71.017實(shí)施例2.19根據(jù)表2，將生物質(zhì)稀釋至25克/升的細(xì)菌生物質(zhì)濃度。以0.45MNa0H進(jìn)行堿化作用。該裂解作用在連續(xù)攪拌下于35-40。C溫育4天。SDW:48.5毫克/毫升；Prot:15.2毫克/毫升；A.A:4.0毫克/毫升；糖0.86毫克/毫升。實(shí)施例2.20根據(jù)表2，將生物質(zhì)稀釋至28克/升的細(xì)菌生物質(zhì)濃度。用。該裂解作用在連續(xù)攪拌下于35-40。C溫育4天。SDW:59.4毫克/毫升；A.A:5.4毫克/毫升；糖1.22毫克/毫升。實(shí)施例2.21根據(jù)表2，將生物質(zhì)稀釋至58克/升的細(xì)菌生物質(zhì)濃度。用。該裂解作用在連續(xù)攪拌下于35-4(TC溫育4天。SDW:64.4毫克/毫升；A.A:5.6毫克/毫升；糖1.84毫克/毫升。實(shí)施例2.22根據(jù)表2，將生物質(zhì)稀釋至56克/升的細(xì)菌生物質(zhì)濃度。用。該裂解作用在連續(xù)攪拌下于35-4(TC溫育3天。SDW:61.0毫克/毫升；A.A:5.6毫克/毫升；糖1.88毫克/毫升。實(shí)施例2.23根據(jù)表2，將生物質(zhì)稀釋至39克/升的細(xì)菌生物質(zhì)濃度。用。該裂解作用在連續(xù)攪拌下于35-40。C溫育4天。SDW:78.32毫克/毫升；A.A:7.8毫克/毫升；糖1.54毫克/毫升。實(shí)施例2.24在室溫下解凍包含1810克細(xì)菌干重的一等分試樣的各下列菌株E82、E83、E084、E086、E087、E088、E9111、E8603、E8621、E8622、E8623、E026、E9119、E9707、和E9708，然后用純化的水稀釋至25克/升的細(xì)菌生物質(zhì)(干重)。以1.0M氫氧化鈉進(jìn)行堿化作用。裂解2小時之后測量pH且為13.5。然后，該裂解作用在連續(xù)攪拌下于35-4(TC溫育72小時。溫育之后，用濃HC1將pH調(diào)整至11.4。(可溶性干重);SDW:75.4毫克/毫升;Prot:14.8毫克/毫升；A.A:5.4毫克/毫升；糖0.9毫克/毫升。表2:大腸桿菌裂解產(chǎn)物的組合物以O(shè).;克/以O(shè).;克/以o.;克/以o.克6MNaOH進(jìn)行堿化作毫升；Prot:16.8毫2MNaOH進(jìn)行堿化作毫升；Prot:32.4毫2MNaOH進(jìn)行堿化作毫升；Prot:30.0毫7MNaOH進(jìn)行堿化作/毫升;Prot:20.60CO寸卜一ON一豕CM實(shí)零寸零豕so零例1.17例1.18軍C3實(shí)軍零豕豕零嗜嗜，嗜裙，，竭嗜，裙嗜裙裙裙諒械械械械鈦械挑械沐'鉍械詠CO械沐詠械I—械OO械\oCN04SOCOOQOOOOpqOOpqOOOOpqOOOOOOOOOOIX]CT>ONON2.32.4X2.5X2.6X2.7XXxXXX2.8XxXXXXXX2.9X2.10X2.11XXxXXXX2.12XXXXX2.13XXXXXXXXXXXXXXXX2.14xXXXXXXXXXXXXXx2.15XXXXXXxxXXX2.16XXXXXXXXXXXXXXX2.17XXXXXXXXXXXXXXXXX2.18XXXXXXXXXXXXXXXXX2.19XXXXXXXXXXXXXXX2.20XXXXXXXXXXXXXXX2.21XXXXXXXXXXXXX2,22XX^XXXXXXXXXXXX2.23XXX>;XXXXXXX實(shí)施例3:裂解產(chǎn)物的混合物混合一些細(xì)菌提取物并調(diào)整pH，結(jié)果如下實(shí)施例3.10.845千克的大腸桿菌實(shí)施例2.4和1.4千克的大腸桿菌實(shí)施例2.3混合?；旌衔镉眉兓乃♂屩?2千克。將稀釋的細(xì)菌裂解產(chǎn)物混合物轉(zhuǎn)移至微過濾槽。分析結(jié)果為可溶性干重(SDW):29.7毫克/毫升；Prot:10.0毫克/毫升。實(shí)施例3.21.4千克的大腸桿菌實(shí)施例2.7和0.85千克的大腸桿菌實(shí)施例2.8混合?；旌衔镉眉兓乃♂屩?2千克。將稀釋的細(xì)菌裂解產(chǎn)物混合物轉(zhuǎn)移至微過濾槽。分析結(jié)果為可溶性干重(SDW):32.3毫克/毫升；Prot:10.3毫克/毫升。如實(shí)施例2中所述測量SDW。蛋白質(zhì)濃度通過Lowry測定測量(參見歐洲藥典2.5.33，"總蛋白質(zhì)-方法2")。實(shí)施例3.31.4千克的大腸桿菌實(shí)施例2.5和0.86千克的大腸桿菌實(shí)施例2.6混合?；旌衔?9用純化的水稀釋至12千克。將稀釋的細(xì)菌裂解產(chǎn)物混合物轉(zhuǎn)移至微過濾槽。分析結(jié)果為SDW:26.8毫克/毫升；Prot:9.6毫克/毫升。實(shí)施例3.42.4千克的大腸桿菌實(shí)施例2.7和1.5千克的大腸桿菌實(shí)施例2.8混合。混合物用純化的水稀釋至20千克。將稀釋的細(xì)菌裂解產(chǎn)物混合物轉(zhuǎn)移至微過濾槽。分析結(jié)果為SDW:22.0毫克/毫升；Prot:9.5毫克/毫升。實(shí)施例3.59.0千克的大腸桿菌實(shí)施例2.9用純化的水稀釋至9.3千克。將稀釋的細(xì)菌裂解產(chǎn)物混合物轉(zhuǎn)移至微過濾槽。分析結(jié)果為SDW:45.7毫克/毫升；Prot:20.6毫克/毫升。實(shí)施例3.68.1千克的大腸桿菌實(shí)施例2.10用純化的水稀釋至12千克。將稀釋的細(xì)菌裂解產(chǎn)物混合物轉(zhuǎn)移至微過濾槽。分析結(jié)果為SDW:39.7毫克/毫升；Prot:17.3毫克/毫升。實(shí)施例3.73.2千克的大腸桿菌實(shí)施例2.11和3.2千克的大腸桿菌實(shí)施例2.12混合。混合物用純化的水稀釋直至12.8千克。將稀釋的細(xì)菌裂解產(chǎn)物混合物轉(zhuǎn)移至微過濾槽。分析結(jié)果為SDW:39.9毫克/毫升；Prot:8.0毫克/毫升。實(shí)施例3.8248千克的大腸桿菌實(shí)施例2.19用純化的水稀釋至400千克。將稀釋的細(xì)菌裂解產(chǎn)物混合物轉(zhuǎn)移至微過濾槽。分析結(jié)果為SDW:31.6毫克/毫升；Prot:10.2毫克/毫升；游離氨基酸(A.A.):2.6毫克/毫升；糖0.59毫克/毫升。根據(jù)D.Herbert等人，Meth.Microbiol.5B:266及以下(1971)在酸水解和衍生化之后分析糖濃度?？傆坞x氨基酸濃度通過將氨基酸轉(zhuǎn)化成異吲哚衍生物和于340nm處測量吸光值而測得(根據(jù)RothM.，F(xiàn)luorescencereactionforaminoacids，Anal.Chem.，43，880-882，(1971))。結(jié)果以谷氨酸的當(dāng)量表示。實(shí)施例3.9248千克的大腸桿菌實(shí)施例2.20用純化的水稀釋至400千克。將稀釋的細(xì)菌裂解產(chǎn)物混合物轉(zhuǎn)移至微過濾槽。分析結(jié)果為SDW:38.9毫克/毫升；Prot:10.8毫克/毫升；A.A.:3.6毫克/毫升；糖0.74毫克/毫升。實(shí)施例3.10247千克的大腸桿菌實(shí)施例2.21用純化的水稀釋至400千克。將稀釋的細(xì)菌裂解產(chǎn)物混合物轉(zhuǎn)移至微過濾槽。分析結(jié)果為SDW:40.08毫克/毫升；Prot:20.0毫克/毫升；A.A.:3.6毫克/毫升；糖1.17毫克/毫升。實(shí)施例3.11247千克的大腸桿菌實(shí)施例2.22用純化的水稀釋至400千克。將稀釋的細(xì)菌裂解產(chǎn)物混合物轉(zhuǎn)移至微過濾槽。分析結(jié)果為SDW:43.9毫克/毫升；Prot:19.1毫克/毫升；氨基酸(A.A.):3.9毫克/毫升；糖1.27毫克/毫升。實(shí)施例3.121.9千克的大腸桿菌實(shí)施例2.21和6千克的大腸桿菌實(shí)施例2.23混合?；旌衔镉眉兓乃♂屩?2千克。將稀釋的細(xì)菌裂解產(chǎn)物混合物轉(zhuǎn)移至微過濾槽。分析結(jié)果為20SDW:45.4毫克/毫升；Prot:12.6毫克/毫升；A.A.:3.8毫克/毫升；糖0.82毫克/毫升。實(shí)施例3.134千克的大腸桿菌實(shí)施例2.21和4千克的大腸桿菌實(shí)施例2.23混合?；旌衔镉眉兓乃♂屩?2千克。將稀釋的細(xì)菌裂解產(chǎn)物混合物轉(zhuǎn)移至微過濾槽。分析結(jié)果為SDW:47.0毫克/毫升;Prot:15.0毫克/毫升；A.A.:3.9毫克/毫升；糖1.14毫克/毫升。實(shí)施例3.1472.4千克的大腸桿菌實(shí)施例2.1和185.2千克的大腸桿菌實(shí)施例2.2混合?；旌衔镉眉兓乃♂屩?00千克。將稀釋的細(xì)菌裂解產(chǎn)物混合物轉(zhuǎn)移至微過濾槽。分析結(jié)果為SDW:40.8毫克/毫升;Prot:17.7毫克/毫升；A.A.:3.7毫克/毫升；糖1.24毫克實(shí)施例3.1575.4千克的大腸桿菌實(shí)施例2.24和185.2千克的大腸桿菌實(shí)施例2.2混合?；旌衔镉眉兓乃♂屩?00千克。將稀釋的細(xì)菌裂解產(chǎn)物混合物轉(zhuǎn)移至微過濾槽。分析結(jié)果為SDW:43.6毫克/毫升;Prot:17.0毫克/毫升；A.A.:3.3毫克/毫升；糖1.16毫克實(shí)施例4:裂解產(chǎn)物的純化實(shí)施例4.1將實(shí)施例3.1的細(xì)菌裂解產(chǎn)物的混合物轉(zhuǎn)移到微過濾(MF)槽。微過濾(MF)單元使用蛇形模式的0.45微米切向流過濾(TFF)過濾器(PALLProcette)或平行模式的Schleicher&Schuell過濾器。(參見圖1TFF裝置的示例性示意圖)。對于蛇形模式，交叉流調(diào)整為2000升/小時米、LHM)且透膜壓力(TMP)調(diào)整為1.3巴。將滲透物轉(zhuǎn)移到超濾(UF)槽?！┝呀猱a(chǎn)物在微過濾槽中的體積達(dá)到初始體積的一半，啟動UF單元。交叉流調(diào)整至1500LHM且TMP調(diào)整至0.3巴。MF(MF的初始體積稱為ViMF)和UF槽的體積維持于相同水平。在各滲濾體積(對應(yīng)于ViMF)下，在蛋白質(zhì)提取后通過Braford微量菌斑測定(microplaqueassay)進(jìn)行蛋白質(zhì)的測量。通過此測量，確定提取循環(huán)的數(shù)目以提取所有的可溶性化合物。IO滲濾體積之后，停止UF，且在MF槽中濃縮細(xì)菌裂解產(chǎn)物?；厥阵w積為9.55千克。然后將產(chǎn)物稀釋至7.0毫克/毫升和然后通過0.2微米無菌過濾器過濾?？扇苄愿芍?SOT):24.2毫克/毫升;Prot:6.4毫克/毫升。A.A:1.3毫克/毫升，糖0.5毫克/毫升。D-氨基酸百分比:29%D-Ala，4%D-Thr，11%D_Leu，45%D_Ser，36%D_Asx，29%D-Met，26%D-Phe，21%D_Glx，25%D_Tyr，9%D-Lys。在20，000-倍(CI)、2000-倍(C2)、和200-倍(C3)稀釋之后測量NOx(巨噬細(xì)胞一氧化氮)產(chǎn)量且結(jié)果如下:C1:6.3ilM、C2:7.4ilM、和C3:13.lilM。如下所述通過切向流過濾(TFF)過濾一些另外的混合物。實(shí)施例4.2將實(shí)施例3.2的裂解產(chǎn)物轉(zhuǎn)移到MF槽。TFF裝置類似于實(shí)施例4.1。對于蛇形模式，將交叉流調(diào)整為2500LHM和TMP調(diào)整為1.30巴。10滲濾體積之后停止UF且第一個循21環(huán)中的滲透通量(permeateflux)為38.2LHM。干重提取產(chǎn)率為65%，蛋白質(zhì)提取產(chǎn)率為80%和體積產(chǎn)率為80%。所得濃縮物包含SDW:26.1毫克/毫升；Prot:8.1毫克/毫升；A.A.:1.4毫克/毫升；糖0.6毫克/毫升；DNA:4.8微克/毫升。D_氨基酸百分比29%D-Ala，4%D-Thr，11%D_Leu，45%D_Ser，36%D-Asx，29%D-Met，26%D-Phe，21%D-Glx，25%D-Tyr，9%D-Lys。20，000-倍(CI)、2000-倍(C2)、和200-倍(C3)稀釋之后的NOx產(chǎn)量Cl:5.5iiM，C2:7.5iiM，C3:5.5iiM。實(shí)施例4.3將實(shí)施例3.3的裂解產(chǎn)物轉(zhuǎn)移到MF槽。TFF裝置類似于實(shí)施例4.1。對于蛇形模式，將交叉流調(diào)整為2450(升/小時米2)LHM和(透膜壓力)TMP調(diào)整為1.3巴。10滲濾體積之后停止UF且第一個循環(huán)中的滲透通量為26.2升/小時.米2。干重提取產(chǎn)率為65%，蛋白質(zhì)提取產(chǎn)率為75%和體積產(chǎn)率為88%。所得濃縮物包含SDW:24.5毫克/毫升；Prot:7.0毫克/毫升；A.A.:2.1毫克/毫升；糖0.5毫克/毫升；DNA:8.2微克/毫升。D_氨基酸百分比45%D-Ala，11%D-Leu，48%D_Ser，44%D-Asx，41%D-Met，26%D_Phe，25%D-Glx，38%D-Tyr，27%D-Lys。20，000-倍(CI)、2000-倍(C2)、和200-倍(C3)稀釋之后的NOx產(chǎn)量C1:5.1iiM，C2:6.8iiM，C3:13.7iiM。實(shí)施例4.4將實(shí)施例3.4的裂解產(chǎn)物轉(zhuǎn)移到MF槽。TFF裝置類似于實(shí)施例4.1。對于蛇形模式，將交叉流調(diào)整為2000(升/小時米2)LHM和透膜壓力TMP調(diào)整為1.8巴。10滲濾體積之后停止UF且第一個循環(huán)中的滲透通量為22.5升/小時.米2。干重提取產(chǎn)率為67%，蛋白質(zhì)提取產(chǎn)率為84%和體積產(chǎn)率為92%。所得濃縮物包含SDW:21.5毫克/毫升；Prot:6.1毫克/毫升；A.A.:1.5毫克/毫升；糖0.3毫克/毫升；DNA:5.6微克/毫升。D_氨基酸百分比44%D-Ala，15%D-Thr，12%D_Leu，48%D_Ser，40%D_Asx，40%D_Met，30%D-Phe，26%D-Glx，31%D-Tyr，18%D-Lys。實(shí)施例4.5將實(shí)施例3.5的裂解產(chǎn)物轉(zhuǎn)移到MF槽。TFF裝置類似于實(shí)施例4.1。對于蛇形模式，將交叉流調(diào)整為2000(升/小時米"LHM和透膜壓力TMP調(diào)整為1.3巴。10滲濾體積之后停止UF且第一個循環(huán)中的滲透通量為27.7升/小時.米2。干重提取產(chǎn)率為72%，蛋白質(zhì)提取產(chǎn)率為69%和體積產(chǎn)率為86%。所得濃縮物包含SDW:36.9毫克/毫升；Prot:16.9毫克/毫升；A.A.:2.8毫克/毫升；糖0.815毫克/毫升；DNA:46.7微克/毫升。D-氨基酸百分比27%D-Ala，16%D-Thr，11%D_Leu，48%D_Ser，40%D_Asx，39%D_Met，36%D-Phe，32%D-Glx，31%D-Tyr。20，000-倍(CI)、2000-倍(C2)、和200-倍(C3)稀釋之后的NOx產(chǎn)量Cl:6.2iiM，C2:10.9yM，C3:18.3yM。實(shí)施例4.6將實(shí)施例3.6的裂解產(chǎn)物轉(zhuǎn)移到MF槽。TFF裝置類似于實(shí)施例4.1。對于蛇形模式，將交叉流調(diào)整為2000(升/小時米"LHM和(透膜壓力)TMP調(diào)整為1.3巴。10滲濾體積之后停止UF且第一個循環(huán)中的滲透通量為15.7升/小時.米2。干重提取產(chǎn)率為53%，蛋白質(zhì)提取產(chǎn)率為51%和體積產(chǎn)率為81%。所得濃縮物包含SDW:30.l毫克/毫升；Prot:12.7毫克/毫升；A.A.:2.6毫克/毫升；糖0.364毫克/毫升。D-氨基酸百分比40%D-Ala，16%D-Thr，12%D_Leu，49%D_Ser，43%D_Asx，44%D_Met，40%D_Phe，38%22D-Glx，36%D-Tyr，24%D-Lys。20，000-倍(CI)、2000-倍(C2)、和200-倍(C3)稀釋之后的NOx產(chǎn)量Cl:5.8iiM，C2:7.1iiM，C3:15.1iiM。實(shí)施例4.7將實(shí)施例3.7的裂解產(chǎn)物轉(zhuǎn)移到MF槽。TFF裝置類似于實(shí)施例4.1。對于蛇形模式，將交叉流調(diào)整為2000(升/小時米^LHM和(透膜壓力)TMP調(diào)整為1.35巴。10滲濾體積之后停止UF且第一個循環(huán)中的滲透通量為30.0升/小時.米2。干重提取產(chǎn)率為82%，蛋白質(zhì)提取產(chǎn)率為83%和體積產(chǎn)率為92%。所得濃縮物包含SDW:38.2毫克/毫升；Prot:5.4毫克/毫升。20，000-倍(CI)、2000-倍(C2)、和200-倍(C3)稀釋之后的NOx產(chǎn)量C1:0.4線C2:2.1線C3:16.3iiM。實(shí)施例4.8500毫升的實(shí)施例2.13的裂解產(chǎn)物于9000g離心30分鐘。然后上清液通過具有0.8微米、0.45微米和0.2微米孔隙度的連續(xù)過濾器過濾。用HC1將pH調(diào)整至10.5。體積產(chǎn)率為45%。所得濃縮物包含SDW:25.21毫克/毫升；Prot:5.85毫克/毫升；DNA:7.5微克/毫升。D-氨基酸百分比:24%D-Ala，16%D_Thr，9%D_Leu，43%D_Ser，20%D-Asx，16%D-Met，10%D-Phe，8%D_Glx，7%D—Tyr。實(shí)施例4.9500毫升的實(shí)施例2.14的裂解產(chǎn)物于9000g離心30分鐘。然后上清液通過具有0.8微米、0.45微米和0.2微米孔隙度的連續(xù)過濾器過濾。用HC1將pH調(diào)整至10.5。體積產(chǎn)率為53%。所得濃縮物包含SDW:26.62毫克/毫升；Prot:5.75毫克/毫升；DNA:6.5微克/毫升。D-氨基酸百分比:35%D-Ala，22%D-Thr，腦D_Leu，45%D_Ser，35%D-Asx，35%D-Met，31%D_Phe，24%D_Glx，22%D-Tyr，12%D-Lys。于1毫克活性干重/毫升的PBMC:IL-6:9232皮克/毫升。實(shí)施例4.10500毫升的實(shí)施例2.15的裂解產(chǎn)物于9000g離心30分鐘。然后上清液通過具有0.8微米、0.45微米和0.2微米孔隙度的連續(xù)過濾器過濾。用HC1將pH調(diào)整至10.5。體積產(chǎn)率為53%。所得濃縮物包含SDW:20毫克/毫升；Prot:2.13毫克/毫升；DNA:3.5微克/毫升。D-氨基酸百分比:35%D-Ala，4%D-Thr，11%D_Leu，46%D_Ser，34%D_Asx，32%D-Met，24%D-Phe，24%D_Glx，15%D-Tyr。以毫克活性干重/毫升表示的NOx產(chǎn)量0.01毫克/毫升(CI)，0.1毫克/毫升(C2)，禾P1.0毫克/毫升(C3);Cl:3.6iiM，C2:4.4iiM，C3:7.9iiM。實(shí)施例4.11500毫升的實(shí)施例2.16的裂解產(chǎn)物于9000g離心30分鐘。然后上清液通過具有0.8微米、0.45微米和0.2微米孔隙度的連續(xù)過濾器過濾。用HC1將pH調(diào)整至10.5。體積產(chǎn)率為33%。所得濃縮物包含SDW:163.33毫克/毫升；Prot:68.42毫克/毫升；DNA:14.l微克/毫升。D-氨基酸百分比:38%D-Thr，l%D_Leu，49%D_Ser，43%D_Asx，64%D-Met，30%D-Phe，31%D_Glx，4%D-Tyr。實(shí)施例4.12500毫升的實(shí)施例2.17的裂解產(chǎn)物于9000g離心30分鐘。然后上清液通過具有0.8微米、0.45微米和0.2微米孔隙度的連續(xù)過濾器過濾。用HCl將pH調(diào)整至lO.5。體積產(chǎn)率為17%。所得濃縮物包含SDW:162.78毫克/毫升；Prot:60.26毫克/毫升；DNA:14.8微克/毫升。D-氨基酸百分比:10%D-Leu，40%D_Ser，34%D_Asx，62%D_Met，27%D-Phe，23%D-Glx，5%D-Tyr。實(shí)施例4.13500毫升的實(shí)施例2.18的裂解產(chǎn)物于9000g離30分鐘。然后上清液通過具有0.8微米、0.45微米和0.2微米孔隙度的連續(xù)過濾器過濾。用HC1將pH調(diào)整至10.5。體積產(chǎn)率為13%。所得濃縮物包含SDW:171.16毫克/毫升；Prot:71.02毫克/毫升；DNA:16.9微克/毫升。實(shí)施例4.14將實(shí)施例3.8的裂解產(chǎn)物轉(zhuǎn)移到MF槽。TFF裝置類似于實(shí)施例4.1。對于蛇形模式，將交叉流調(diào)整為2300(升/小時米2)LHM和透膜壓力TMP調(diào)整為1.5巴。11滲濾體積之后停止UF且第一個循環(huán)中的滲透通量為32.5升/小時.米2。干重提取產(chǎn)率為86%，蛋白質(zhì)提取產(chǎn)率為87%和體積產(chǎn)率為90%。所得濃縮物包含SDW:26.6毫克/毫升；Prot:8.1毫克/毫升；A.A.:2.3毫克/毫升；糖0.42毫克/毫升；DNA:68.5微克/毫升。于1毫克活性干重/毫升的PBMC:IL-6:29898皮克/毫升，IL-10:446皮克/毫升，TNF-a:3429皮克/毫升。以毫克活性干重/毫升表示的NOx產(chǎn)量0.02毫克/毫升(Cl)，O.2毫克/毫升(C2)，和2.0毫克/毫升(C3);C1:2.3iiM，C2:16.6yM，C3:4.OyM。實(shí)施例4.15將實(shí)施例3.9的裂解產(chǎn)物轉(zhuǎn)移到MF槽。TFF裝置類似于實(shí)施例4.1。對于蛇形模式，將交叉流調(diào)整為2375(升/小時米2)LHM和透膜壓力TMP調(diào)整為1.3巴。10滲濾體積之后停止UF且第一個循環(huán)中的滲透通量為32.5升/小時.米2。干重提取產(chǎn)率為83%，蛋白質(zhì)提取產(chǎn)率為79%和體積產(chǎn)率為92%。所得濃縮物包含SDW:24.9毫克/毫升；Prot:7.2毫克/毫升；A.A.:2.3毫克/毫升；糖0.49毫克/毫升。于1毫克活性干重/毫升的PBMC:IL-6:23709皮克/毫升，IL-10:385皮克/毫升，TNF-a:2917皮克/毫升。以毫克活性干重/毫升表示的NOx產(chǎn)量0.02毫克/毫升(Cl)，0.2毫克/毫升(C2)，和2.0毫克/毫升(C3);C1:1.1線C2:13.8ilM，C3:4.2ilM。實(shí)施例4.16將實(shí)施例3.10的裂解產(chǎn)物轉(zhuǎn)移到MF槽。TFF裝置類似于實(shí)施例4.1。對于蛇形模式，將交叉流調(diào)整為2500(升/小時米^LHM和透膜壓力TMP調(diào)整為1.0巴。10滲濾體積之后停止UF且第一個循環(huán)中的滲透通量為15.0升/小時.米2。干重提取產(chǎn)率為58%，蛋白質(zhì)提取產(chǎn)率為59%和體積產(chǎn)率為79%。所得濃縮物包含SDW:22.0毫克/毫升；Prot:8.1毫克/毫升；A.A.:1.6毫克/毫升；糖0.46毫克/毫升；DNA:23.9微克/毫升。于1毫克活性干重/毫升的PBMC:IL-6:21458皮克/毫升，IL-10:281皮克/毫升，TNF-a:123皮克/毫升。以毫克活性干重/毫升表示的NOx產(chǎn)量0.02毫克/毫升(Cl)，O.2毫克/毫升(C2)，和2.0毫克/毫升(C3);C1:14.6線C2:23.8線C3:16.9yM。D-氨基酸百分比27%D-Ala，22%D—Thr，11%D—Leu，44%D—Ser，27%D—Asx，26%D—Met，22%D—Phe，16%D-Glx，15%D-Tyr，8%D-Lys。實(shí)施例4.17將實(shí)施例3.11的裂解產(chǎn)物轉(zhuǎn)移到MF槽。TFF裝置類似于實(shí)施例4.1。對于蛇形模24式，將交叉流調(diào)整為2500(升/小時米2)LHM和透膜壓力TMP調(diào)整為1.0巴。10滲濾體積之后停UF且第一個循環(huán)中的滲透通量為17.5升/小時.米2。干重提取產(chǎn)率為69%，蛋白質(zhì)提取產(chǎn)率為69%和體積產(chǎn)率為78%。所得濃縮物包含SDW:22.2毫克/毫升；Prot:8.3毫克/毫升；A.A.:1.8毫克/毫升；糖0.5毫克/毫升；DNA:33.3微克/毫升。于1毫克活性干重/毫升的PBMC:IL-6:19304皮克/毫升，IL-10:343皮克/毫升，TNF-a:220皮克/毫升。以毫克活性干重/毫升表示的NOx產(chǎn)量0.02毫克/毫升(CI)，0.2毫克/毫升(C2)和2.0毫克/毫升(C3);Cl:14.4iiMC2:20.5yMC3:18.9yM。D-氨基酸百分比:30%D-Ala，18%D-Thr，10%D_Leu，44%D_Ser，29%D_Asx，28%D_Met，23%D-Phe，18%D-Glx，18%D-Tyr，11%D-Lys。七十升的液體形式用196毫升的HC125%中和且然后與10.44千克的甘露醇混合。然后冷凍干燥混合物。冷凍干燥循環(huán)期間產(chǎn)物冷凍于-5(TC然后加熱至-25t:。冷凍干燥器中的壓力維持于0.2和0.5毫巴之間且通過過濾的空氣噴射控制。然后，在第二次干燥中，將產(chǎn)物加熱直至其最終冷凍干燥溫度(+30°C)同時保持0.2毫巴以下的真空程度。當(dāng)冷凍干燥循環(huán)完成時，在冷凍干燥器中用過濾的空氣再建立常壓。冷凍干燥產(chǎn)物通過適合的振動篩篩分?；厥?1.95千克的冷凍干燥產(chǎn)物。實(shí)施例4.18500毫升的實(shí)施例3.13的裂解產(chǎn)物于9000g離心30分鐘。然后上清液通過具有0.8微米、0.45微米和0.2微米孔隙度的連續(xù)過濾器過濾。用HC1將pH調(diào)整至10.5。所得濃縮物包含SDW:42.8毫克/毫升；Prot:12.5毫克/毫升；A.A.:3.5毫克/毫升；糖1.13毫克/毫升；DNA:14.1微克/毫升。20，000-倍(CI)、2000-倍(C2)、和200-倍(C3)稀釋之后的NOx產(chǎn)量C1:0.4iiM，C2:5.7iiM，C3:25.liiM。濃縮物的稀釋體積(毫升)的PBMC:稀釋100:IL-6:2101皮克/毫升。D-氨基酸百分比:25%D-Ala，12%D_Thr，10%D-Leu，45%D_Ser，35%D_Asx，35%D_Met，29%D_Phe，26%D-Glx。實(shí)施例4.19500毫升的實(shí)施例3.12的裂解產(chǎn)物于9000g離心30分鐘。然后上清液通過具有0.8微米、0.45微米和0.2微米孔隙度的連續(xù)過濾器過濾。用HC1將pH調(diào)整至10.5。所得濃縮物包含SDW:38毫克/毫升；Prot:9.7毫克/毫升；A.A.:3.1毫克/毫升；糖0.82毫克/毫升;DNA:80.1微克/毫升。20，000-倍(CI)、2000-倍(C2)、和200-倍(C3)稀釋之后的NOx產(chǎn)量:Cl:0.3線C2:2.6線C3:19.2iiM。濃縮物的稀釋體積(毫升)的PBMC:稀釋100:IL-6:2802皮克/毫升。D-氨基酸百分比:35%D_Ala，25%D-Thr，10%D-Leu，46%D-Ser，40%D_Asx，38%D_Met，34%D_Phe，32%D_Glx，32%D_Tyr，24%D-Lys。實(shí)施例4.20將實(shí)施例3.14的裂解產(chǎn)物轉(zhuǎn)移到MF槽。TFF裝置類似于實(shí)施例4.1。對于蛇形模式，將交叉流調(diào)整為2500(升/小時米"LHM和透膜壓力TMP調(diào)整為1.2巴。13滲濾體積之后停止UF且第一個循環(huán)中的滲透通量為16.0升/小時.米2。干重提取產(chǎn)率為64%，蛋白質(zhì)提取產(chǎn)率為62%和體積產(chǎn)率為78%。所得濃縮物包含SDW:22.4毫克/毫升；Prot:8.7毫克/毫升；A.A.:1.8毫克/毫升；糖0.54毫克/毫升；DNA:39.1微克/毫升。D-氨基酸百分比:32%D-Ala，18%D-Thr，于1毫克活性干重/毫升的PBMC:IL-6:22303皮克/毫升，IL-IO:561皮克/毫升，TNF-a:336皮克/毫升。以毫克活性干重/毫升表示的NOx產(chǎn)25量O.02毫克/毫升(Cl)，O.2毫克/毫升(C2)，和2.0毫克/毫升(C3):C1:11.3yM，C2:15.3iiM，C3:13.5iiM。D-氨基酸百分比:32%D_Ala，18%D-Thr，腦D_Leu，44%D-Ser，26%D-Asx，23%D-Met，17%D-Phe，15%D-Glx，14%D_Tyr，9%D-Lys。實(shí)施例4.21將實(shí)施例3.15的裂解產(chǎn)物轉(zhuǎn)移到MF槽。TFF裝置類似于實(shí)施例4.1。對于蛇形模式，將交叉流調(diào)整為2500(升/小時米"LHM和(透膜壓力)TMP調(diào)整為1.0巴。13滲濾體積之后停止UF且第一個循環(huán)中的滲透通量為15.0升/小時.米2。干重提取產(chǎn)率為69%，蛋白質(zhì)提取產(chǎn)率為66%和體積產(chǎn)率為77%。所得濃縮物包含SDW:21.4毫克/毫升；Prot:7.6毫克/毫升；A.A.:1.6毫克/毫升；糖0.5毫克/毫升；DNA:25.9微克/毫升。D-氨基酸百分比D-氨基酸百分比12.5%D-Ala，3.4%Val，16.6%，65%D-Ser，26.1%D-Asx，18.8%D-Met，15.6%D_Glx，9.1%D-Lys。以毫克活性干重/毫升表示的NOx產(chǎn)量0.02毫克/毫升(Cl)，0.2毫克/毫升(C2)，和2.0毫克/毫升(C3):C1:10.3iiM，C2:15.2線C3:12.3iiM。如實(shí)施例4.17中所述冷凍干燥該液體形式。蛋白質(zhì)含量(Lowry)為每克冷凍干燥產(chǎn)物44毫克蛋白質(zhì)。冷凍干燥產(chǎn)物的以毫克活性干重/毫升表示的NOx產(chǎn)量0.01毫克/毫升(Cl)，O.l毫克/毫升(C2)，和1.0毫克/毫升(C3):C1:6.4iiM，C2:12.9yM，C3:19.4iiM。膠囊通過混合50.4千克的冷凍干燥產(chǎn)物與64.68千克的淀粉1500PT、2.52千克的硬脂酸鎂和50.4千克的甘露醇而制得。膠囊的以毫克活性干重/毫升表示的NOx產(chǎn)量0.01毫克/毫升(Cl)，0.1毫克/毫升(C2)，禾P1.0毫克/毫升(C3):C1:6.8ilM，C2:12.l線C3:19.liiM。實(shí)施例5實(shí)施例5A:"起始材料"的量對通過人類PBMC分泌的IL-6測量的細(xì)菌裂解產(chǎn)物的活性的影響人PBMC和細(xì)胞培養(yǎng)物的制備將得自健康供體的夕卜周血(Centredetransfusion,H6pita1Universitaire，日內(nèi)瓦)離心以獲得血沉棕黃層(buffycoat)。將血沉棕黃層和Hank氏平衡生理鹽水(HBSS，Sigma，Buchs，瑞士)混合，在FicollPaquePlus(AmershamPharmacia)上分層至1.077克/毫升并離心(2800rpm，2(TC，25分鐘)。從界面收獲的細(xì)胞在室溫下于800rpm在HBSS中洗滌15分鐘且將沉淀細(xì)胞再懸浮于HBSS中。使用Neubauer細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。全部細(xì)胞培養(yǎng)在補(bǔ)充青霉素(100U/毫升)、鏈霉素(100微克/毫升)、L-谷氨酰胺(2毫摩爾/升)和10%胎牛血清(FCS)的RPMI-1640培養(yǎng)基(全部得自Sigma)中進(jìn)行。對于體外剌激，細(xì)胞以1X106活細(xì)胞/孔的濃度培養(yǎng)。剌激和IL-6在培養(yǎng)上清液中的測量外周血單核細(xì)胞(PBMC)于37C在5%C02氛圍下培養(yǎng)，且本發(fā)明的產(chǎn)物以0.25、0.5、1、和2毫克/毫升"可溶性干重，SDW"(在RPMI-1640培養(yǎng)基中)進(jìn)行測試。24小時之后收獲培養(yǎng)物的上清液且根據(jù)制造商的說明，通過酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)(HumanIL-6ELISASet,BDOptEIA，SanDiego，USA)測量IL-6的濃度。檢測極限為10皮克IL-6/毫升。首先在PBMC試驗(yàn)中測試活性。(參見圖2a和2b，顯示"起始材料"的量(細(xì)菌生物質(zhì)的濃度，以克干重每升裂解產(chǎn)物表示)從12.5克/升(圖2a)增加26至25克/升(圖2b)的影響。提取物的活性依賴于經(jīng)歷堿裂解的"起始材料"的量(12.5克/升對25克/升)。Na0H(2X體積/體積)的百分比和堿裂解(72小時)的時間為恒定的。圖3a和3b顯示起始材料從25克/升增加至100克/升的影響。堿裂解的時間固定為168小時和NaOH的百分比固定為1%。根據(jù)圖2和3，"起始材料"水平越高，所得活性越高。實(shí)施例5B:裂解的持續(xù)時間對本發(fā)明產(chǎn)物在PBMC試驗(yàn)中的活性的影響。"起始材料"為12.5克/升，且在24小時(圖4a)或72小時(圖4b)期間用2%NaOH處理。根據(jù)這些圖，較長裂解時間產(chǎn)生較低活性。實(shí)施例6:NaOH的初始百分比(體積/體積)對本發(fā)明的細(xì)菌裂解產(chǎn)物在鼠一氧化氮試驗(yàn)中的活性的影響通過C02吸入殺死六周大雄性C57/BL6小鼠(六周大雄性，SPF品質(zhì)，CharlesRivier，F(xiàn)R)。從后附肢移出髖骨、大腿骨、和脛骨。在切割兩端部分之后通過將達(dá)爾伯克改良伊格爾培養(yǎng)基(Dulbecco'smodifiedEaglemedium)(DH)注射通過骨從內(nèi)腔提取骨髓。洗滌之后，將干細(xì)胞再懸浮(40，000細(xì)胞/毫升)于用20%馬血清和30XL929細(xì)胞上清液補(bǔ)充的DH培養(yǎng)基。細(xì)胞懸浮液在培養(yǎng)箱中于37t:在8%C02及飽和濕氣氛圍下培養(yǎng)8天。然后用冰冷PBS分離巨噬細(xì)胞，洗滌和再懸浮于用5%胎牛血清(FCS)、氨基酸和抗生素補(bǔ)充的DH培養(yǎng)基(DHE培養(yǎng)基)中。將細(xì)胞密度調(diào)整至700，000細(xì)胞/毫升。產(chǎn)物的水溶液直接在微量滴定板中連續(xù)地稀釋于DHE培養(yǎng)基中。以一式三份測試產(chǎn)物且每個微量滴定板包含由培養(yǎng)基組成的陰性對照。在各孔中最終體積為100微升。將100微升的細(xì)胞懸浮液加至該稀釋的產(chǎn)物且細(xì)胞在培養(yǎng)箱中于37t:在8%C02及飽和濕氣氛圍下培養(yǎng)22小時。在培養(yǎng)期結(jié)束時，將100微升的上清液轉(zhuǎn)移到另一微量滴定板且通過進(jìn)行革利士(Griess)反應(yīng)測定在各上清液中所產(chǎn)生的亞硝酸鹽濃度。將在2.5%磷酸水溶液中的100微升的革利士試劑(5毫克/毫升的磺胺+0.5毫克/毫升的N-(l-萘基)乙二胺鹽酸鹽)加至各孔。用分光光度計(jì)(SpectraMaxPlus,MolecularDevices)，于562nm處(對照690nm處的參照)讀取微量滴定板。亞硝酸鹽濃度與所形成的一氧化氮含量成比例。亞硝酸鹽含量根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線測定。結(jié)果以PM—氧化氮(NO)表達(dá)為平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差且繪制為劑量應(yīng)答曲線。在圖5中所顯示的試驗(yàn)中，起始材料的量(25克/升)和裂解的時間(168小時)是相似的，測試的變量為用于獲得二種裂解產(chǎn)物的NaOH的濃度(1%(部分A)對4%(部分B))。當(dāng)使用4%NaOH(圖5中的B)時，與1%NaOH(圖5中的A)相比，觀察到較低活性，暗示內(nèi)毒素樣分子的可能的堿劑量_依賴性降解。取決于起始材料、NaOH的濃度、和裂解的時間，在NO巨噬細(xì)胞試驗(yàn)中可產(chǎn)生不同的免疫活性。實(shí)施例7:鱟變形細(xì)胞裂解物(LAL)產(chǎn)色試驗(yàn)為了測定內(nèi)毒素樣分子的存在，用Bio-Whittaker的Chromogenic-LALKit進(jìn)行LAL試驗(yàn)。此試驗(yàn)基于通過存在于LAL中的酶促級聯(lián)利用脂多糖(LPS)或可比較結(jié)構(gòu)的產(chǎn)物的活化作用。此酶促活化作用通過用蛋白酶切開連接到肽的色素原來證明。酶促反應(yīng)于37t:進(jìn)行和色素原隨時間的形成在405nm處進(jìn)行測量。記錄達(dá)到0.2單位D.0.所需的時間和相對于LPS標(biāo)準(zhǔn)(標(biāo)準(zhǔn)曲線)計(jì)算的內(nèi)毒素活性。根據(jù)本發(fā)明的提取物的該類示例性實(shí)驗(yàn)的結(jié)果以相對于標(biāo)準(zhǔn)化大腸桿菌LPS制劑的EU(內(nèi)毒素單位)表示于下表中(1EU對應(yīng)于0.09納克當(dāng)量LPS)。裂解條件(裂解時間、起始材料量、NaOH的初始百分比)EU/毫升納克當(dāng)量LPS/毫升T=24小時-12.5克/升-2%NaOH343±622±0.4T=24小時-12.5克/升-1%NaOH33530±1762163±11T=24小時-25克/升-2%NaOH908±5.158±0.3T=24小時-50克/升-4%NaOH48±0.43±0.1T=24小時-50克/升-3%NaOH355±1123±0.7T=72小時-12.5克/升-2%NaOH<50<3T=72小時-25克/升-3%NaOH65±0.94.±0.1T=72小時-50克/升-2%NaOH196±613±0.4T=72小時-50克/升-3%NaOH45±33±0.2T=72小時-50克/升-4%NaOH162±311±0.2T=168小時-12.5克/升-2%NaOH26±0.72±0.1T=168小時-12.5克/升-3%NaOH45±33±0.2T=168小時-25克/升-3%NaOH25±12±0.04T=168小時-50克/升-2%NaOH55±14±0.04T=168小時-50克/升-3%NaOH1035±4267±2.7T=168小時-50克/升-4%NaOH46±23±0.1水<0.005<0.0003實(shí)施例8:本發(fā)明的實(shí)施方案在泌尿道大腸桿菌感染模型(在小鼠的LPS-不敏感28株系中)中的效果根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施方案在大腸桿菌泌尿道感染模型中(在LPS-不敏感小鼠中)進(jìn)行測試(參見Hopkins等人，InheritanceofsusceptibilitytoinducedEscherichiacolibladderandkidneyinfectionsinfemaleC3H/HeJmice,JInfectDis.2003Feb1;187(3):418-23)。三組10-12周大雌性C3H/HeJ小鼠(每組8只小鼠)在大腸桿菌感染之前用三種提取物之一口服處理(參見下文)10天。C3H/HeJ小鼠包含在Toll樣受體基因(TLR4)中的突變且對TLR4激動劑例如脂多糖(LPS)不敏感。因此此模型適合于檢測經(jīng)由其他途徑而非TLR4起作用的藥效。小鼠在處理期間維持在18-26°C的周圍溫度和30至70%的相對濕度的正常條件下。光方案設(shè)定為12:12小時的光暗循環(huán)。動物用由HarlanSpragueDawley(Indianapolis,IN)實(shí)驗(yàn)室提供的標(biāo)準(zhǔn)膳食飼養(yǎng)。隨意提供自來水，除非另有說明。所試驗(yàn)的三種提取物為a)通過18種大腸桿菌菌株的強(qiáng)裂解作用獲得的提取物b)通過18種大腸桿菌菌株的溫和裂解作用獲得的提取物c)通過a)和b)(分別為1/4和3/4)的混合物獲得的提取物。每只小鼠每天一次口服給予二十五毫克的細(xì)菌提取物連續(xù)10天。根據(jù)減少腎的反流相關(guān)接種的可能性和在所有接種的動物中誘發(fā)感染的最小接種方案，用磷酸鹽緩沖生理鹽水(PBS)或用尿道致病性大腸桿菌菌株1677膀胱內(nèi)(intravesically)接種小鼠。在這些實(shí)驗(yàn)中使用大腸桿菌菌株1677，其分離自具有發(fā)熱性UTI的婦女的尿液。此菌株為06且包含(例如)溶血素、產(chǎn)氣菌素(aerobactin)、P菌毛(fimbriae)、和1型菌毛的基因，但不包含(例如)非菌毛黏附物質(zhì)(afimbrialadhesin)1、細(xì)胞毒性壞死因子1、和S菌毛的基因。為了制備接種物，在胰蛋白胨肉湯(Difco實(shí)驗(yàn)室)中通過2個通路從冷凍原液生長細(xì)菌，用PBS洗滌，且再懸浮到2X101Q細(xì)菌/毫升的濃度。剝奪小鼠的水1小時且緊在接種之前從他們的膀胱取出尿。在異氟醚麻醉下通過導(dǎo)尿術(shù)將十微升的細(xì)菌接種物滴入膀胱內(nèi)，產(chǎn)生每只小鼠2X108大腸桿菌的劑量。使這些動物從麻醉恢復(fù)和1小時后恢復(fù)水。接種10天之后殺死小鼠以評估膀胱和腎感染的強(qiáng)度。取出各動物的膀胱和兩個腎，稱重，且在無菌PBS中均質(zhì)化，其后將均質(zhì)物連續(xù)地涂布在列文氏(Levine's)伊紅-亞甲藍(lán)瓊脂(Difco實(shí)驗(yàn)室)上。在37t:下培養(yǎng)過夜之后計(jì)數(shù)在各平板上的大腸桿菌菌落的數(shù)目且用于計(jì)算在各膀胱或每對腎中的細(xì)菌的總數(shù)。使用費(fèi)雪保護(hù)最小顯著差數(shù)法(Fisher'sprotectedleastsignificantdifferencetest)測定不同組小鼠的平均總菌落形成單位(CFU)值之間的統(tǒng)計(jì)上顯著的差異(PBS、未處理的感染組、和處理且感染的組)。膀胱和腎感染數(shù)據(jù)使用總CFU二loglO[(CFU+100)/毫克組織]轉(zhuǎn)換，其中CFU為每個組織樣品所計(jì)算的菌落形成單位總數(shù)。膀胱和腎的所得結(jié)果分別地說明于圖6a和6b中?？偟膩碚f，3種試驗(yàn)的細(xì)菌提取物將所獲得的對數(shù)值減少因子>3(膀胱)和>2(腎)，暗示從膀胱和腎培養(yǎng)的菌落的數(shù)目分別地減少至少1000和100的因子。這些結(jié)果證明本發(fā)明實(shí)施方案的免疫活性。如在C3H/HeJ小鼠中產(chǎn)生的結(jié)果，觀察到的效果不依賴于TLR4。實(shí)施例9:本發(fā)明的實(shí)施方案在腹膜內(nèi)鼠傷寒沙門氏菌感染的鼠模型(在小鼠的LPS敏感性株系中)中的效果也在具有正常LPS-敏感性的C57/bl小鼠中測試實(shí)施例8中所述的三種本發(fā)明提取物。所試驗(yàn)的三種提取物為a)通過18種大腸桿菌菌株的強(qiáng)裂解作用獲得的提取物b)通過18種大腸桿菌菌株的溫和裂解作用獲得的提取物c)通過a)和b)(分別為1/4和3/4)的混合物獲得的提取物。C57BL/6小鼠在用上述物質(zhì)口服處理之前保持7天。實(shí)驗(yàn)由4個實(shí)驗(yàn)組-3組用本發(fā)明的化合物處理，和一個對照組-組成。各實(shí)驗(yàn)組包含20只小鼠。對照組中小鼠通過使用每天口服施用0.5毫升水接受假處理10天。對于其他組，每天將提取物溶解在蒸餾水中以便在0.5毫升的最終體積中具有單一劑量。用沙門氏菌(Salmonella)攻擊所有小鼠之前，將0.5毫升體積每天一次口服給予各小鼠連續(xù)10天。在每次施用中給予每只動物10毫克細(xì)菌提取物。為了攻擊，將鼠傷寒沙門氏菌菌株415的懸浮液腹膜內(nèi)注入各小鼠(I.MechnokovInstituteforVaccinesandSera，RussianAcademyofMedicalSciences)。達(dá)到攻擊的初步劑量(未顯示)的范圍在每只小鼠102至105CFU的沙門氏菌內(nèi)。主要的實(shí)驗(yàn)選擇104CFU的劑量，因?yàn)樵谖刺幚淼膭游镏写藙┝刻峁┐蠹s50%的存活者。攻擊之后，將小鼠保持在實(shí)驗(yàn)用動物的標(biāo)準(zhǔn)條件下。在感染后的21天期間每天觀察和紀(jì)錄死亡?；衔锏目垢腥竟π?參見下表)根據(jù)對每個實(shí)驗(yàn)組計(jì)算的感染后存活率(SR)、感染后平均壽命(ADL)、防御因子(DF)、和制劑功效指數(shù)(EI)評估。SR為在感染后第21天實(shí)驗(yàn)組中的活動物的百分比。ADL、DF和EI使用下列公式計(jì)算ADL=(X1+X2+...+Xn):N，其中ADL為平均壽命、X1至Xn為實(shí)驗(yàn)小鼠#1至#n的感染后壽命，和N為實(shí)驗(yàn)組中動物的總數(shù)。DF=CD:ED，其中DF為防御因子，CD為對照組中的死亡百分比，和ED為實(shí)驗(yàn)組的死亡百分比。EI=[(DF_1):DF]X100%，其中EI為制劑功效指數(shù)和DF為防御因子。在用104CFU的鼠傷寒沙門氏菌感染后21天期間紀(jì)錄實(shí)驗(yàn)組中的死亡。相同的結(jié)果表示于圖7中。<table>tableseeoriginaldocumentpage31</column></row><table>*:在所示天數(shù)發(fā)現(xiàn)的死亡小鼠的數(shù)目提取物在鼠傷寒沙門氏菌致死感染模型中(在C57BL/6小鼠中)的防御功效。<table>tableseeoriginaldocumentpage31</column></row><table>從強(qiáng)堿裂解(強(qiáng))和從強(qiáng)和溫和裂解的混合物(混合物)制造的提取物(a)和(c)具良好耐受性。從溫和裂解(溫和)制造的提取物(b)顯示高于其他的毒性。在用提取物(b)處理的組中觀察到小鼠身體大小的減少、和小鼠生長的延遲，雖然未進(jìn)行測量。在處理期間在實(shí)驗(yàn)組(b)或"溫和"中20只小鼠有四只死亡。因此，在此組中稍后僅16只小鼠用沙門氏菌攻擊。在用水預(yù)處理的小鼠的對照組中，在觀察期間(21天)存活率為58%，和ADL為15.3天。提取物(b)似乎沒有提供對抗沙門氏菌感染的防衛(wèi)，且提取物加速感染動物的死亡。特別地，90X的小鼠在感染后7天內(nèi)死亡，和ADL為3.3天。在感染后21天內(nèi)此組中的存活率低至6%(參見上表和圖7)。對比之下，從強(qiáng)裂解(強(qiáng))或從強(qiáng)和溫和裂解的混合物(混合物)制造的提取物(a)和(c)增加小鼠對鼠傷寒沙門氏菌感染的抗性。兩物質(zhì)顯示良好的保護(hù)功效。特別地，存活率在用提取物(c)，(混合物)攻擊之后為90%，而在用提取物(a)，(強(qiáng))攻擊之后，其為85%(上表和圖7)。額外的實(shí)施例得自一種或更多種大腸桿菌菌株的提取物，其中，在該提取物的制備期間，該一種或更多種細(xì)菌菌株在大于12的pH下裂解，且該提取物經(jīng)處理以除去核酸；并且其中該提取物在施用給患者后不引起朊病毒病的風(fēng)險(xiǎn)。前述段落的提取物，其得自至少一種選自NCTC:8603、8621、8622、8623、9026、9H1、9119、9707、和9708、及I:081、082、083、084、085、086、087、088、和089的大腸桿菌菌株。前述段落的提取物，其得自下列大腸桿菌菌株的每一種NCTC:8603、S621、8622、8623、9026、9111、9119、9707、和9708及I:081、082、083、084、085、086、087、088、和089。三個前述段落的任何提取物，其中該提取物包含小于100微克/毫升的核酸。任何前述段落的提取物，其中該提取物包含至少0.3毫克/毫升的糖。任何前述段落的提取物，其中至少一種糖選自單糖、二糖和多糖。前述段落的提取物，其中至少一種多糖為支鏈多糖。任何前述段落的提取物，其中至少一種糖被化學(xué)修飾。任何前述段落的提取物，其中該提取物包含在0.3和4.5毫克/毫升之間的糖。任何前述段落的提取物，其中裂解在12.6至13.4的pH下進(jìn)行。任何前述段落的提取物，其中該提取物通過用15至80克/升的生物質(zhì)裂解30至120小時而獲得。任何前述段落的提取物，其中該提取物經(jīng)處理以除去顆粒和/或不溶性成分。任何前述段落的提取物，其中該提取物包含在1.5至2.5毫克/毫升之間的游離氨基酸。任何前述段落的提取物，其中各細(xì)菌菌株培養(yǎng)于不引起朊病毒病的風(fēng)險(xiǎn)的培養(yǎng)基中。任何前述段落的提取物，其中從其獲得提取物的各細(xì)菌菌株培養(yǎng)于植物性或合成培養(yǎng)基。任何前述段落的提取物，其中至少一種選自天冬氨酸、谷氨酸、絲氨酸、組氨酸、丙氨酸、精氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、和賴氨酸的氨基酸被外消旋至少10%。任何前述段落的提取物，其中該提取物的游離氨基酸包含在l和80X之間的D-氨基酸。任何前述段落的提取物，其中該提取物的游離氨基酸包含在10和45%之間的D-氨基酸。前述段落的提取物，其中該提取物的游離氨基酸包含在25和35%之間的D-氨基酸。任何前述段落的提取物，其中該提取物包含至少一種選自D-天冬氨酸和D-天冬酰胺、0-谷氨酸和D-谷氨酰胺.D-絲氨酸J-甲硫氨酸.D-組氨酸.D-丙氨酸.D-精氨酸、D-苯丙氨酸、D-酪氨酸、D-亮氨酸、D-賴氨酸、D-纈氨酸、和D-蘇氨酸的D-氨基酸。前述段落的提取物，其中任何一種D-氨基酸的濃度包含在1和50X之間的游離氨基酸濃度。前述段落的提取物，其中任何一種D-氨基酸的濃度包含在10和40%之間的游離氨基酸濃度。前述段落的提取物，其中任何一種D-氨基酸的濃度包含在15和35%之間的游離氨基酸濃度。任何前述段落的提取物，其中該提取物包含小于5000內(nèi)克的根據(jù)鱟變形細(xì)胞裂解物(LAL)產(chǎn)色試驗(yàn)的LPS當(dāng)量。任何前述段落的提取物，其中該提取物包含在8和75毫克/毫升之間的一種或更多種蛋白質(zhì)。任何前述段落的提取物，其中該一種或更多種蛋白質(zhì)具有小于30kDa的分子量。任何前述段落的提取物，其中該一種或更多種蛋白質(zhì)具有小于10kDa的分子量。任何前述段落的提取物，其中至少8LPS不敏感小鼠用尿道致病性大腸桿菌菌株1677攻擊之后13天的存活率為至少70%，其中選擇該尿道致病性大腸桿菌菌株1677的劑量以使至少8只對照小鼠的存活率為60%或更低。前述段落的提取物，其中該存活率為至少80%。前述段落的提取物，其中該存活率為至少90%。任何前述段落的提取物，其中至少8只具有野生型LPS敏感性的小鼠用鼠傷寒沙門氏菌攻擊之后13天的存活率為至少70%，其中選擇該鼠傷寒沙門氏菌的劑量以使至少8只對照小鼠的存活率為60%或更低。前述段落的提取物，其中該存活率為至少80%。前述段落的提取物，其中該存活率為至少90%?！N藥物組合物，其包含任何上述段落的提取物。用于治療罹患消化道或泌尿道病癥或處于發(fā)展消化道或泌尿道病癥的風(fēng)險(xiǎn)的受試者的方法，其包括將有效量的任何上述段落的提取物施用給所述受試者。任何前述段落的方法，其中該受試者為人。任何前述段落的方法，其中該消化道或泌尿道病癥選自尿道炎、腎小管間質(zhì)性腎炎、阻塞性腎盂腎炎、由于阻塞性和反流性尿路病變引起的泌尿道感染、包括慢性膀胱炎的膀胱炎、包括慢性前列腺炎的前列腺炎、前列腺膀胱炎、雌性骨盆炎性疾病、克羅恩病、和腸易激綜合征。制備獲自一種或更多種大腸桿菌的菌株的提取物的方法，其包括(a)在不引起朊病毒病的風(fēng)險(xiǎn)的培養(yǎng)基中培養(yǎng)各菌株；(b)在大于12的pH下裂解各菌株；禾口(c)將(b)的產(chǎn)物通過微過濾器至少一次和通過超濾器至少一次。前述段落的方法，其中該提取物得自至少一種選自下列的大腸桿菌菌株NCTC:8603、8621、8622、8623、9026、9111、9119、9707、和9708及I:081、082、083、084、085、086、087、088、和089。前述段落的方法，其中該提取物得自下列大腸桿菌菌株的每一種NCTC:8603、8621、8622、8623、9026、9111、9119、9707、和9708及I:081、082、083、084、085、086、087、088、和089。任何前述段落的方法，其中該裂解在大于12.5的初始pH下進(jìn)行。任何前述段落的方法，其中該裂解在12.6至13.4的初始pH下進(jìn)行。任何前述段落的方法，其中該裂解在0.1N至1.1N的初始?xì)溲醺x子濃度下進(jìn)行。33任何前述段落的方法，其中該裂解在0.2N至IN的初始?xì)溲醺x子濃度下進(jìn)行。任何前述段落的方法，其中該裂解在30-6(TC進(jìn)行20小時至10天。任何前述段落的方法，其中該裂解在35t:至4(TC進(jìn)行40小時至72小時。任何前述段落的方法，其中該微過濾器為0.45微米和超濾器為30KDa。任何前述段落的方法，進(jìn)一步包括將(c)的產(chǎn)物通過0.2微米的第二個微過濾器。任何前述段落的方法，其中(c)部分通過切向流過濾進(jìn)行。前述段落的方法，其中該切向流過濾進(jìn)行5至15個循環(huán)。任何前述段落的方法，其中該切向流過濾如圖1中所述進(jìn)行。任何前述段落的方法，其中該切向流過濾如圖1中所述，以蛇形模式進(jìn)行。任何前述段落的方法，其中(b)部分用10-120克/升細(xì)菌干重的物質(zhì)進(jìn)行。任何前述段落的方法，其中(b)部分用15-80克/升細(xì)菌干重的物質(zhì)進(jìn)行。通過任何前述段落的方法獲得的產(chǎn)物。用于治療罹患消化道或泌尿道病癥或處于發(fā)展消化道或泌尿道病癥的風(fēng)險(xiǎn)的受試者的方法，其包括將有效量的通過任何一種上述段落的方法獲得的任何產(chǎn)物施用給該受試者。前述段落的方法，其中該受試者為人。3權(quán)利要求得自一種或更多種大腸桿菌細(xì)菌菌株的提取物，其中，在所述提取物的制備期間，所述一種或更多種細(xì)菌菌株在大于12的pH下裂解，且所述提取物經(jīng)處理以除去核酸；并且其中所述提取物在施用給患者后不引起朊病毒病的風(fēng)險(xiǎn)。2.權(quán)利要求1的提取物，其得自至少一種選自NCTC:8603、8621、8622、8623、9026、9111、9119、9707和9708以及I:081、082、083、084、085、086、087、088和089的大腸桿菌菌株。3.權(quán)利要求1的提取物，其得自下列大腸桿菌菌株的每一種NCTC:8603、8621、8622、8623、9026、9111、9119、9707和9708以及I:081、082、083、084、085、086、087、088和089。4.權(quán)利要求1、2或3的提取物，其中所述提取物包含小于100微克/毫升的核酸。5.權(quán)利要求1、2、3或4的提取物，其中所述提取物包含至少0.3毫克/毫升的糖。6.權(quán)利要求5的提取物，其中所述提取物包含在0.3和4.5毫克/毫升之間的糖。7.權(quán)利要求5的提取物，其中至少一種糖選自單糖、二糖和多糖。8.權(quán)利要求7的提取物，其中至少一種多糖為支鏈多糖。9.權(quán)利要求5的提取物，其中至少一種糖被化學(xué)修飾。10.權(quán)利要求1-9中任一項(xiàng)的提取物，其中裂解在12.6至13.4的pH下進(jìn)行。11.權(quán)利要求i-io中任一項(xiàng)的提取物，其中所述提取物經(jīng)處理以除去顆粒和/或不溶性成分。12.權(quán)利要求1-11中任一項(xiàng)的提取物，其中各細(xì)菌菌株培養(yǎng)于不引起朊病毒病的風(fēng)險(xiǎn)的培養(yǎng)基中。13.權(quán)利要求12的提取物，其中從其獲得提取物的各細(xì)菌菌株培養(yǎng)于植物性或合成培養(yǎng)基。14.權(quán)利要求1-13中任一項(xiàng)的提取物，其中所述提取物包含在1.5至2.5毫克/毫升之間的游離氨基酸。15.權(quán)利要求1-14中任一項(xiàng)的提取物，其中所述提取物包含至少一種被外消旋至少10%的選自天冬氨酸、谷氨酸、絲氨酸、組氨酸、丙氨酸、精氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸和賴氨酸的氨基酸。16.權(quán)利要求14-15中任一項(xiàng)的提取物，其中在所述提取物中游離氨基酸包含在1和80%之間的0-氨基酸。17.權(quán)利要求16的提取物，其中在所述提取物中游離氨基酸包含在10和45%之間的D-氨基酸。18.權(quán)利要求17的提取物，其中在所述提取物中游離氨基酸包含在25和35%之間的D-氨基酸。19.權(quán)利要求l-18中任一項(xiàng)的提取物，其中所述提取物包含至少一種選自D-天冬氨酸和D-天冬酰胺、D-谷氨酸和D-谷氨酰胺、D-絲氨酸、D-甲硫氨酸、D-組氨酸、D-丙氨酸、D-精氨酸、D-苯丙氨酸、D-酪氨酸、D-亮氨酸、D-賴氨酸、D-纈氨酸和D-蘇氨酸的D-氨基酸。20.權(quán)利要求19的提取物，其中任何一種D-氨基酸的濃度在游離氨基酸濃度的1至50%之間。21.權(quán)利要求20的提取物，其中任何一種D-氨基酸的濃度在游離氨基酸濃度的10至40%之間。22.權(quán)利要求21的提取物，其中任何一種D-氨基酸的濃度在游離氨基酸濃度的15至35%之間。23.權(quán)利要求1-22中任一項(xiàng)的提取物，其中所述提取物包含小于5000納克的根據(jù)鱟變形細(xì)胞裂解物(LAL)產(chǎn)色試驗(yàn)的LPS當(dāng)量。24.權(quán)利要求1-23中任一項(xiàng)的提取物，其中所述提取物包含在8和75毫克/毫升之間的一種或更多種蛋白質(zhì)。25.權(quán)利要求24的提取物，其中所述一種或更多種蛋白質(zhì)具有小于30kDa的分子量。26.權(quán)利要求24的提取物，其中所述一種或更多種蛋白質(zhì)具有小于10kDa的分子量。27.權(quán)利要求1-24中任一項(xiàng)的提取物，其中至少8LPS不敏感小鼠用尿道致病性大腸桿菌菌株1677攻擊后13天的存活率為至少70%，其中選擇所述尿道致病性大腸桿菌菌株1677的劑量以使至少8只用水處理的對照小鼠的存活率為60%或更低，且其中在攻擊之前實(shí)驗(yàn)和對照小鼠用所述提取物或用水處理10天。28.權(quán)利要求27的提取物，其中所述存活率為至少80%。29.權(quán)利要求27的提取物，其中所述存活率為至少90%。30.權(quán)利要求1-29中任一項(xiàng)的提取物，其中至少8只具有野生型LPS敏感性的小鼠用鼠傷寒沙門氏菌攻擊之后13天的存活率為至少70%，其中選擇所述鼠傷寒沙門氏菌的劑量以使至少8只用水處理的對照小鼠的存活率為60%或更低，且其中在攻擊之前實(shí)驗(yàn)和對照小鼠用所述提取物或用水處理10天。31.權(quán)利要求30的提取物，其中所述存活率為至少80%。32.權(quán)利要求30的提取物，其中所述存活率為至少90%。33.—種適合施用給人受試者的藥物組合物，其包含權(quán)利要求1-32中任一項(xiàng)的提取物。34.用于治療罹患消化道或泌尿道病癥或處于發(fā)展消化道或處泌尿道病癥的風(fēng)險(xiǎn)的受試者的方法，其包括給所述受試者施用有效量的權(quán)利要求1-32中任一項(xiàng)的提取物或權(quán)利要求33的藥物組合物。35.權(quán)利要求34的方法，其中所述受試者為人或馴養(yǎng)的哺乳動物。36.權(quán)利要求34或35的方法，其中所述消化道或泌尿道病癥選自尿道炎、腎小管間質(zhì)性腎炎、阻塞性腎盂腎炎、由阻塞性和反流性尿路病變引起的泌尿道感染、包括慢性膀胱炎的膀胱炎、包括慢性前列腺炎的前列腺炎、前列腺膀胱炎、雌性骨盆炎性疾病、克羅恩病和腸易激綜合征。37.制備得自一種或更多種大腸桿菌的菌株的提取物的方法，其包括(a)在不引起朊病毒病的風(fēng)險(xiǎn)的培養(yǎng)基中培養(yǎng)各菌株；(b)在大于12的pH下裂解各菌株；禾口(c)將(b)的產(chǎn)物通過微過濾器至少一次和通過超濾器至少一次。38.權(quán)利要求37的方法，其中所述提取物得自至少一種選自下列的大腸桿菌菌株NCTC:8603、8621、8622、8623、9026、9111、9119、9707和9708以及I:081、082、083、084、085、086、087、088和089。39.權(quán)利要求38的方法，其中所述提取物得自下列大腸桿菌菌株的每一種NCTC:‘8603、8621、8622、8623、9026、9111、9119、9707和9708以及I:081、082、083、084、085、086、’087、088和089。40.權(quán)利要求37、38或39的方法，其中所述裂解在大于12.5的初始pH下進(jìn)行。41.權(quán)利要求34的方法，其中所述裂解在12.6至13.4的初始pH下進(jìn)行。42.權(quán)利要求37、38或39的方法，其中至少一部分的裂解在0.IN至1.IN的初始?xì)溲醺x子濃度下進(jìn)行。43.權(quán)利要求37、38或39的方法，其中至少一部分的裂解在0.2N至IN的初始?xì)溲醺x子濃度下進(jìn)行。44.權(quán)利要求37-43中任一項(xiàng)的方法，其中至少一部分的裂解在30至4(TC進(jìn)行30至50小時。45.權(quán)利要求37-43中任一項(xiàng)的方法，其中至少一部分的裂解在30至4(TC進(jìn)行60至120小時。46.權(quán)利要求37-45中任一項(xiàng)的方法，其中微過濾器為0.45微米且超濾器為30KDa。47.權(quán)利要求37-46中任一項(xiàng)的方法，其進(jìn)一步包括將(c)的產(chǎn)物通過0.2微米的第二個微過濾器。48.權(quán)利要求37-47中任一項(xiàng)的方法，其中(c)部分通過切向流過濾進(jìn)行。49.權(quán)利要求48的方法，其中所述切向流過濾進(jìn)行5至15個循環(huán)。50.權(quán)利要求37-49中任一項(xiàng)的方法，其中(b)部分用10-120克/升細(xì)菌干重的物質(zhì)進(jìn)行。51.權(quán)利要求37-50中任一項(xiàng)的方法，其包括在強(qiáng)裂解條件下裂解至少一種菌株和在溫和裂解條件下裂解至少一種菌株，且進(jìn)一步包括將強(qiáng)和溫和裂解的產(chǎn)物混合在一起。52.權(quán)利要求37-50中任一項(xiàng)的方法，其包括在強(qiáng)和溫和裂解條件兩者下裂解各菌株，和進(jìn)一步包括將強(qiáng)和溫和裂解的產(chǎn)物混合在一起。53.通過權(quán)利要求37-53中任一項(xiàng)的方法獲得的產(chǎn)物。54.用于治療罹患消化道或泌尿道病癥或處于發(fā)展消化道或泌尿道病癥的風(fēng)險(xiǎn)的受試者的方法，其包括給所述受試者施用有效量的權(quán)利要求53的產(chǎn)物。55.權(quán)利要求54的方法，其中所述受試者為人或馴養(yǎng)的哺乳動物。全文摘要本發(fā)明涉及可用作病癥(例如消化道或泌尿道病癥)的治療的來自細(xì)菌菌株的提取物、包含該提取物的組合物和從不引起朊病毒病的風(fēng)險(xiǎn)的培養(yǎng)基制造該提取物的方法。文檔編號A61K39/108GK101743019SQ200880010610公開日2010年6月16日申請日期2008年3月5日優(yōu)先權(quán)日2007年3月5日發(fā)明者C·馳阿瓦洛麗,J·A·鮑爾,J-P·L·維格洛克斯,L·查爾維特,M·薩爾瓦格尼申請人:Om藥物公司