專(zhuān)利名稱(chēng)：：內(nèi)臟脂肪減少劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及以乳酸菌、特別是乳桿菌屬及乳球菌屬乳酸菌的菌體及/或其培養(yǎng)物為有效成分的內(nèi)臟脂肪減少劑。此外，本發(fā)明還涉及通過(guò)配合上述內(nèi)臟脂肪減少劑，從而賦予了減少內(nèi)臟脂肪作用的新型飲食品或飼料。內(nèi)臟脂肪的積累是與血栓癥、胰島素抵抗、糖代謝異常、高血壓等未來(lái)循環(huán)系統(tǒng)疾病的發(fā)病有關(guān)的所謂代謝綜合征的原因，通過(guò)攝取本發(fā)明的內(nèi)臟脂肪減少劑，可減少積累的內(nèi)臟脂肪，有效地預(yù)防治療代謝綜合征。
背景技術(shù)：
：近年來(lái)，隨著生活習(xí)慣的歐美化，呈現(xiàn)作為生活習(xí)慣病的糖尿病、高血壓、高血脂癥、動(dòng)脈硬化癥病狀的人口正在增加。特別是因心血管疾病和腦血管疾病引起的死亡約占死因的3分之1，且其數(shù)量在逐年增加，所以，針對(duì)這些的對(duì)策已成為國(guó)民性的課題。這些動(dòng)脈硬化性疾病隨著高血壓、高血脂癥、糖耐量異常等危險(xiǎn)因素的聚集而使發(fā)病的危險(xiǎn)度顯著上升。此危險(xiǎn)因素聚集的狀態(tài)被稱(chēng)為代謝綜合征，并己被廣泛認(rèn)識(shí)。由對(duì)日本的12萬(wàn)企業(yè)勞動(dòng)者的調(diào)査可知，即使是具有癥狀較輕的"肥胖"、"高血壓"、"高血糖"、"高甘油三酯(中性脂肪)血癥"、或"高膽固醇血癥"中的危險(xiǎn)因素中的1項(xiàng)的人的心臟病發(fā)病危險(xiǎn)也為5倍，具有2項(xiàng)的人為10倍，同時(shí)具有34項(xiàng)的人為31倍。而且，在厚生勞動(dòng)省的調(diào)査中，報(bào)道了高血壓患者的數(shù)量為3,900萬(wàn)人、高血脂癥為2,200萬(wàn)人、糖尿病(包含預(yù)備軍)為1，620萬(wàn)人、肥胖癥為468萬(wàn)人，這些患者還在逐年增加。代謝綜合征是指"內(nèi)臟脂肪的積累、和在此基礎(chǔ)上并發(fā)胰島素抵抗性及糖代謝異常、脂質(zhì)代謝異常、高血壓多項(xiàng)的多重危險(xiǎn)因素綜合征，是易患動(dòng)脈硬化的病狀"，因而內(nèi)臟脂肪的積累無(wú)疑是其根本性原因。作為生物體最大分泌組織的脂肪組織產(chǎn)生各種內(nèi)分泌因子，與維持生物體的恒常性有關(guān)。但是，現(xiàn)在已經(jīng)了解了內(nèi)臟脂肪的過(guò)度積累會(huì)破壞內(nèi)分泌因子的分泌平衡，而引發(fā)各種病狀。特別是纖溶酶原激活物抑制物(PAI-1)、腫瘤壞死因子(TNF-ci)、瘦蛋白等的內(nèi)分泌因子隨內(nèi)臟脂肪的積累而分泌量增加，從而引起血栓癥、胰島素抵抗性、糖代謝異常、高血壓等。另一方面，已知脂肪組織特異性分泌的脂聯(lián)素通常在血液中高濃度存在，但隨內(nèi)臟脂肪的積累其濃度減少。己知脂聯(lián)素具有抗糖尿病、抗動(dòng)脈硬化、抗炎癥作用、抗高血壓等各種生理功能，在血液中促進(jìn)脂聯(lián)素濃度的增加、或抑制脂聯(lián)素濃度的減少對(duì)預(yù)防.治療代謝綜合征非常重要。以往，作為針對(duì)代謝綜合征的各種病狀的對(duì)策進(jìn)行過(guò)藥物療法，但具有需要處方和伴隨副作用等的問(wèn)題。而且還可知，針對(duì)一種病狀進(jìn)行治療時(shí)，其他病狀卻有機(jī)會(huì)而向嚴(yán)重病狀發(fā)展，所以需要調(diào)整在這種狀態(tài)的上游存在的來(lái)自脂肪細(xì)胞的內(nèi)分泌因子的分泌平衡。因此，在由內(nèi)臟脂肪的積累引起的代謝綜合征的預(yù)防，治療中，與藥物療法相比，采取運(yùn)動(dòng)療法、飲食療法等改善每天的生活方式更為重要。因此，希望有可日常攝取、即使長(zhǎng)期攝取安全性也高、對(duì)內(nèi)臟脂肪積累所引起的代謝綜合征的預(yù)防，治療有效的藥劑、飲食品或詞料。專(zhuān)利文獻(xiàn)1中公開(kāi)了作為對(duì)人體有效的成分的乳酸菌的適用屬于被分類(lèi)為嗜酸乳桿菌(Lactobacillusacidophilus)、巻曲乳桿菌(Lactobacilluscrispatus)、食淀奶粉桿菌(Lactobacillusamylovorus)、格氏乳桿菌(Lactobacillusgasseri)、雞乳桿菌(Lactobacillusgallinarum)及約氏乳豐干菌(Lactobacillusjohnsonii)的嗜酸乳桿菌復(fù)合物(Lactobacillusacidophiluscomplex),與唾液酸基缺乏(asialo)GM1有親和性的乳酸菌及其提取物、對(duì)與唾液酸基缺乏(asialo)GM1有親和性的病原體的感染預(yù)防有效。此外，在專(zhuān)利文獻(xiàn)2中記載了以格氏乳桿菌(Lactobacillusgasseri)的菌體或其發(fā)酵產(chǎn)物為有效成分的炎性腸疾病及過(guò)敏性腸綜合征的預(yù)防-治療劑有效。而且在專(zhuān)利文獻(xiàn)3中還公開(kāi)了以屬于格氏乳桿菌(Lactobacillusgasseri)的乳酸菌及其培養(yǎng)物、和屬于長(zhǎng)雙歧桿菌(Bifidobacteriumlongum)的乳酸菌及其培養(yǎng)物為有效成分的糖尿病并發(fā)癥的預(yù)防.改善*治療劑。作為以培養(yǎng)屬于格氏乳桿菌(Lactobacillusgasseri)的乳酸菌而得到的菌體及培養(yǎng)物為有效成分的制劑，除上述以外，專(zhuān)利文獻(xiàn)4中還公開(kāi)了血清膽固醇上升抑制劑。此外，專(zhuān)利文獻(xiàn)5中還記載了以培養(yǎng)同樣屬于格氏乳桿菌(Lactobacillusgasseri)的乳酸菌而得到的菌體及其培養(yǎng)物為有效成分的骨吸收抑制劑，公開(kāi)了具有骨吸收抑制作用的飲食品或飼料。專(zhuān)利文獻(xiàn)6中公開(kāi)了不是單獨(dú)使用屬于格氏乳桿菌(Lactobacillusgasseri)的乳酸菌，而是將燕麥等的禾本科谷粒及其加工物與屬于格氏乳桿菌(Lactobacillusgasseri)的乳酸菌組合用于增強(qiáng)免疫的免疫增強(qiáng)劑及免疫增強(qiáng)用飲食品，其顯示出與各個(gè)單獨(dú)使用相比，巨噬細(xì)胞被激活，細(xì)胞因子產(chǎn)生量協(xié)同增高，增大了免疫增強(qiáng)效果。但是，格氏乳桿菌(Lactobacillusgasseri)的培養(yǎng)物、或其菌體自身具有減少內(nèi)臟脂肪作用還不為人所知。而且，從古至今就作為代表性的乳業(yè)乳制品用乳酸菌發(fā)酵劑使用、且作為乳桿菌屬(Lactobacillussp.)的乳酸菌的瑞士乳桿菌(Lactobacillushelveticus)具有強(qiáng)的蛋白水解活性，特別是具有高活性的菌體外蛋白酶對(duì)乳品發(fā)酵性起著重要的作用。即菌體外蛋白酶水解乳蛋白質(zhì)，生成各種肽片段。生成的肽受肽酶組的作用，形成更低分子的肽。已知通過(guò)蛋白質(zhì)水解酶組的作用而在培養(yǎng)基中生成的肽的一部分被攝入乳酸菌的菌體內(nèi)，作為氮源利用。另一方面，非專(zhuān)利文獻(xiàn)l中報(bào)到了在培養(yǎng)基中生成的肽中，存在對(duì)于作為升壓作用的原因物質(zhì)的血管緊張肽轉(zhuǎn)換酶(AngiotensinConvertingEnzyme,以下稱(chēng)ACE)具有抑制活性的肽。對(duì)于以抑制ACE的酶活性、抑制血壓上升為目的的肽，非專(zhuān)利文獻(xiàn)2中已報(bào)道了乳蛋白質(zhì)、大豆蛋白質(zhì)或魚(yú)肉蛋白水解物等中的多種有效肽，公開(kāi)了使用了瑞士乳桿菌(Lactobacillushelveticus)的發(fā)酵乳中具有ACE抑制活性的肽是Val-Pro-Pro和Ile-Pro-Pro，且這些lactotripeptide具有強(qiáng)降壓作用，該結(jié)論已通過(guò)使用自然發(fā)病的高血壓大鼠(SHR)的實(shí)驗(yàn)得到了證實(shí)。這樣，含有由瑞士乳桿菌(Lactobacillushelveticus)發(fā)酵的酸奶的功能性食品不僅具有降壓活性，還具有緩解精神壓力的作用，這已由專(zhuān)利文獻(xiàn)7及8進(jìn)行了闡明。此外，專(zhuān)利文獻(xiàn)9中還揭示了瑞士乳桿菌(Lactobacillushelveticus)、干酪乳桿菌(Lactobacilluscasei)、德氏乳桿菌保加利亞亞種(L.delbrueckiisubsp，bulgaricus)、德氏乳桿菌乳酸亞禾中(L.delbrueckiisubsp.lactis)等的乳酸菌具有免疫賦活作用。但是，這些乳酸菌的菌體自身或其培養(yǎng)物具有減少內(nèi)臟脂肪作用，還不為人所知。乳酸乳球菌(Lactococcuslactis)及乳月旨乳球菌(Lactococcuscremoris)是乳制品制造中廣泛使用的乳酸菌，但有關(guān)其生理功能還知之甚少，雖已知用乳球菌屬乳酸菌使牛乳、豆乳、咸菜等發(fā)酵時(shí)能產(chǎn)生Y氨基丁酸(GABA)等，具有調(diào)節(jié)血壓的作用等，但其有助于內(nèi)臟脂肪的減少還不為人所知。專(zhuān)利文獻(xiàn)1日本特開(kāi)平8-268899號(hào)公報(bào)專(zhuān)利文獻(xiàn)2日本特開(kāi)2003-95963號(hào)公報(bào)專(zhuān)利文獻(xiàn)3日本特開(kāi)2003-252770號(hào)公報(bào)專(zhuān)利文獻(xiàn)4日本特開(kāi)2003-306436號(hào)公報(bào)專(zhuān)利文獻(xiàn)5日本特開(kāi)2004-315477號(hào)公報(bào)專(zhuān)利文獻(xiàn)6日本特開(kāi)2006-69993號(hào)公報(bào)專(zhuān)利文獻(xiàn)7日本特開(kāi)平10-45610號(hào)公報(bào)專(zhuān)利文獻(xiàn)8日本特開(kāi)平11-98978號(hào)公報(bào)專(zhuān)利文獻(xiàn)9日本特開(kāi)2006-76961號(hào)公報(bào)非專(zhuān)利文獻(xiàn)1J.DairySci.,78:777-783(1995)非專(zhuān)利文獻(xiàn)2J.DairySci.,78:1253-1257(1995)
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的課題是提供可日常攝取、且通過(guò)攝取使內(nèi)臟脂肪減少?gòu)亩鴮?duì)代謝綜合征的預(yù)防，治療有效的內(nèi)臟脂肪減少劑、及賦與了該功能的飲食品或飼料。本發(fā)明者對(duì)乳成分中使引起代謝綜合征的內(nèi)臟脂肪降低的成分進(jìn)行銳意研究，其結(jié)果，在乳酸菌、特別是乳桿菌屬(Lactobacillussp.)及乳球菌屬(Lactococcussp.)乳酸菌中，發(fā)現(xiàn)了極強(qiáng)的減少內(nèi)臟脂肪作用，從而完成了本發(fā)明。已知上述乳桿菌屬及乳球菌屬的乳酸菌可用于發(fā)酵乳、奶酪、咸菜物等各種發(fā)酵食品的制造，是從乳業(yè)乳酸菌、人體消化道的腸道菌群中分離的乳酸菌，不僅具有調(diào)節(jié)腸胃功能的作用，還具有免疫調(diào)節(jié)作用、降低血清膽固醇作用、預(yù)防感染作用等多種生理功能，而本發(fā)明中指以乳桿菌屬及乳球菌屬乳酸菌的菌體及/或其培養(yǎng)物為有效成分的內(nèi)臟脂肪減少劑及賦與了該功能的飲食品或飼料。上述內(nèi)臟脂肪減少劑的使用方式有片劑、散劑、膠囊劑等。且其使用用途的指定考慮為發(fā)酵乳、健康食品或奶酪類(lèi)等的飲食品或詞料等。本發(fā)明原則上是由以下構(gòu)成形成的發(fā)明。(1)內(nèi)臟脂肪減少劑，其以乳酸菌的菌體及/或其培養(yǎng)物為有效成分。(2)根據(jù)上述(1)中的內(nèi)臟脂肪減少劑，其特征在于，以乳桿菌屬及/或乳球菌屬乳酸菌的菌體及/或其培養(yǎng)物為有效成分。(3)根據(jù)上述(2)中的內(nèi)臟脂肪減少劑，其特征在于，以格氏乳桿菌(Lactobacillusgasseri)、瑞士乳桿菌(Lactobacillushelveticus)、乳酸乳球菌(Lactococcuslactis)、乳月旨乳球菌(Lactococcuscremoris)中的任一種以上的菌體及/或其培養(yǎng)物為有效成分。(4)減少內(nèi)臟脂肪用片劑、散劑、膠囊劑、飲食品或飼料，其特征在于，配合了上述(1)(3)中任一項(xiàng)所述的乳酸菌的菌體及/或其培養(yǎng)物。(5)根據(jù)上述(4)中的飲食品，其特征在于，上述飲食品為發(fā)酵乳、健康食品或奶酪類(lèi)等。本發(fā)明的以乳酸菌的菌體及/或其培養(yǎng)物為有效成分的內(nèi)臟脂肪減少劑、及含有該內(nèi)臟脂肪減少劑且賦與了減少內(nèi)臟脂肪作用的飲食品或飼料對(duì)因內(nèi)臟脂肪積累而發(fā)病的所謂代謝綜合征的預(yù)防，治療有效。且本發(fā)明的內(nèi)臟脂肪減少劑、及賦與了減少內(nèi)臟脂肪作用的飲食品或飼料，因使用乳桿菌屬(Lactobacillussp.)乳酸菌及乳球菌屬(Lactococcussp.)乳酸菌、特別是其中的格氏乳桿菌(Lactobacillusgasseri)、瑞士乳桿菌(Lactobacillushelveticus)、乳酸乳球菌(Lactococcuslactis)或乳月旨乳球菌(Lactococcuscremoris)的培養(yǎng)物或其菌體自身，所以可比較廉價(jià)、大量地供給，且具有安全性極高的效果。具體實(shí)施例方式作為本發(fā)明中的乳酸菌，可例舉屬于乳桿菌屬(Lactobacillussp.)的乳酸菌及乳球菌屬(Lactococcussp.)的乳酸菌、特別是其中的格氏乳桿菌(Lactobacillusgasseri)、瑞士乳桿菌(Lactobacillushelveticus)、乳酸孚L球菌(Lactococcuslactis)或孚L月旨乳球菌(Lactococcuscremoris)的乳酸菌?？蛇x擇屬于格氏乳桿菌(Lactobacillusgasseri)的乳酸菌中的格氏乳桿菌(Lactobacillusgasseri)SBT2055株、格氏乳桿菌(Lactobacillusgasseri)JCM1131株及格氏乳桿菌(Lactobacillusgasseri)ATCC19992株。且SBT2055株的保藏接收編號(hào)為FERMABP-10953，保藏于日本的獨(dú)立行政法人產(chǎn)業(yè)技術(shù)綜合研究所專(zhuān)利生物保藏中心(茨城縣筑波市東1丁目l番地l中央第6、接收日；2008年2月26曰)。另外，JCM1131株是獨(dú)立行政法人理化學(xué)研究所的公開(kāi)菌株，ATCC19992株是美國(guó)菌種保藏中心(AmericanTypeCultureCollection)的公開(kāi)菌株。而且，可選擇屬于瑞士乳桿菌(Lactobacillushelveticus)的乳酸菌中的瑞士乳桿菌(Lactobacillushelveticus)SBT2171株、瑞士乳桿菌(Lactobacillushelveticus)ATCC10386株及瑞士乳桿菌(Lactobacillushelveticus)ATCC10797株。此外，SBT2171株的保藏編號(hào)為FERMBP-5445，保藏于獨(dú)立行政法人產(chǎn)業(yè)技術(shù)綜合研究所專(zhuān)利生物保藏中心(茨城縣筑波市東1丁目1番地l中央第6、接收曰；1996年3月6日)。且ATCC10386株及ATCC10797株為美國(guó)菌種保藏中心(AmericanTypeCultureCollection)的公開(kāi)菌株。而且，還可選擇屬于乳酸乳球菌(Lactococcuslactis)的乳酸菌中的乳酸乳球菌(Lactococcuslactis)JCM1107株。乳酸乳球菌(Lactococcuslactis)JCM1107株為獨(dú)立行政法人理化學(xué)研究所的公開(kāi)菌株。進(jìn)而還可選擇屬于乳脂乳球菌(Lactococcuscremoris)的乳酸菌中的乳脂乳球菌(Lactococcusc腿oris)ATCC11602株、乳脂乳球菌(Lactococcuscremoris)ATCC14365株、乳月旨乳球菌(Lactococcuscremoris)ATCC19257株。此外，ATCC11602株、ATCC14365株及ATCC19257株為美國(guó)菌種保藏中心(AmericanTypeCultureCollection)的公開(kāi)菌株。且對(duì)于乳酸菌的篩選，隨著逐步篩選耐胃酸性高、低pH條件下生育良好、對(duì)人體腸道顯示高定居性、與人體腸道細(xì)胞顯示高度親和性、有耐膽汁酸性、在腸道內(nèi)定居、適用于食品時(shí)存活性高、香味、物性也優(yōu)異的菌株，可篩選出更適合本發(fā)明的乳酸菌。特別是格氏乳桿菌(Lactobacillusgasseri)SBT2055株(FERMABP-10953)與人體腸道細(xì)胞有高度親和性，經(jīng)口給藥時(shí)，能以存活狀態(tài)到達(dá)腸道內(nèi)，且可長(zhǎng)時(shí)間常駐于腸道內(nèi)，通過(guò)在腸道內(nèi)生長(zhǎng)發(fā)育而對(duì)宿主起作用，具有減少內(nèi)臟脂肪效果的活性高。對(duì)從體外投給的屬于格氏乳桿菌(Lactobacillusgasseri)的乳酸菌在腸內(nèi)定居而顯示上述生理效果還全然不知，由本發(fā)明者首次查明了這一點(diǎn)。而且在本發(fā)明中，不限于上述菌株，即使是從人體、發(fā)酵乳中分離的格氏乳桿菌(Lactobacillusgasseri)，不僅是活菌體，即使是死菌體，只要顯示上述作用，均可使用。此外，也可使用作為格氏乳桿菌(Lactobacillusgasseri)的突變株、顯示上述作用的菌株。即使是上述乳酸菌中的格氏乳桿菌(Lactobacillusgasseri)以外的乳酸菌，與格氏乳桿菌(Lactobacillusgasseri)同樣被稱(chēng)作嗜酸乳桿菌(Lactobacillusacidophilus)君羊的巻曲乳桿菌(Lactobacilluscrispatus)、作為高溫性同型的保加利亞乳桿菌(Lactobacillusdelbrueckiisubsp.Bulgaricus)等的乳品加工用乳酸菌、作為中溫性同型的乳酸菌的植物乳桿菌(Lactobacillusplantarum)、干酪乳桿菌(Lactobacilluscasei)等也具有同樣的減少內(nèi)臟脂肪的效果。培養(yǎng)作為本發(fā)明的乳酸菌的格氏乳桿菌(Lactobacillusgasseri)的培養(yǎng)基，可使用乳培養(yǎng)基或含有乳成分的培養(yǎng)基、不含有該成分的半合成培養(yǎng)基等的各種培養(yǎng)基。作為此種培養(yǎng)基，可例示還原脫脂乳后加熱殺菌的還原脫脂乳培養(yǎng)基。這些乳桿菌屬及乳球菌屬乳酸菌的培養(yǎng)法，為進(jìn)行靜置培養(yǎng)或進(jìn)行將pH控制為恒定的中和培養(yǎng)，但只要是菌體良好生長(zhǎng)發(fā)育的條件，對(duì)培養(yǎng)法無(wú)特別限制。菌體根據(jù)乳酸菌培養(yǎng)的常法進(jìn)行培養(yǎng)，可將從所得到的培養(yǎng)物中通過(guò)離心分離等的集菌方法分離后的產(chǎn)物直接作為本發(fā)明的有效成分使用。此外，作為菌體，不僅可使用單純分離的菌體，還可使用培養(yǎng)物、懸浮物、其他的菌體含有物、使用酶、物理手段處理菌體后的細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞壁組分。而且，不僅可使用活菌體，也可使用死菌體。本發(fā)明的內(nèi)臟脂肪減少劑以乳桿菌屬(Lactobacillussp.)及乳球菌屬(Lactococcussp.)的乳酸菌的培養(yǎng)物及/或其菌體自身為有效成分。而且，在制備制劑時(shí)，除可適當(dāng)配合制劑上允許的賦形劑、穩(wěn)定劑、矯味劑等后進(jìn)行濃縮、冷凍干燥以外，還可以加熱干燥成死菌體。也包含這些的干燥物、濃縮物、糊狀物。此外，在不妨礙菌體、培養(yǎng)物的作用的范圍內(nèi)，還可混合賦型劑、粘合劑、崩解劑、潤(rùn)滑劑、矯味矯臭劑、懸浮劑、包衣劑、其他任意的藥劑來(lái)制備制劑。作為劑形，可為片劑、丸劑、膠囊劑、顆粒劑、散劑、粉劑、糖漿劑等，并希望將這些經(jīng)口給藥。此外，本發(fā)明還指以乳桿菌屬(Lactobacillussp.)乳酸菌及乳球菌屬(Lactococcussp.)的乳酸菌、特別是其中的格氏乳桿菌(Lactobacillusgasseri)、瑞士乳桿菌(Lactobacillushelveticus)、孚L酸乳球菌(Lactococcuslactis)或乳脂乳球菌(Lactococcuscremoris)的培養(yǎng)物、或其菌體自身為有效成分并賦與了減少內(nèi)臟脂肪功能的飲食品或飼料。作為本發(fā)明的賦與了減少內(nèi)臟脂肪作用的飲食品或飼料，可以是乳桿菌屬(Lactobacillussp.)乳酸菌及乳球菌屬(Lactococcussp.)乳酸菌、特別是其中的格氏乳桿菌(Lactobacillusgasseri)、瑞士乳桿菌(Lactobacillushelveticus)、乳酸乳球菌(Lactococcuslactis)或乳月旨孚L球菌(Lactococcuscremoris)的培養(yǎng)物或其菌體自身，也可以是配合了菌體、培養(yǎng)物自身的飲食品。作為培養(yǎng)物的形態(tài)，酸奶、奶酪等的發(fā)酵食品均為適合形態(tài)。菌體、培養(yǎng)物可配合在任意飲食品中，也可在飲食品的制造過(guò)程中添加到原料中。做為飲食品的例子，可例舉乳飲料、發(fā)酵乳、果汁飲料、果凍、糖果、乳制品、沙拉醬等的蛋類(lèi)加工品、黃油蛋糕等的點(diǎn)心.面包類(lèi)等的食品。此外，除各種奶粉以外，還可例示配合在以嬰兒、幼兒及低出生體重兒等為對(duì)象的營(yíng)養(yǎng)組合物中的飲食品。作為活菌體利用時(shí)，作為材料也可使用乳桿菌屬(Lactobacillussp.)乳酸菌及乳球菌屬(Lactococcussp.)乳酸菌、特別是其中的格氏乳桿菌(Lactobacillusgasseri)、瑞士乳桿菌(Lactobacillushelveticus)、乳酸乳球菌(Lactococcuslactis)或乳月旨乳球菌(Lactococcuscremoris)的菌株自身、及使上述乳酸菌的菌體發(fā)酵后得到的發(fā)酵乳、奶酪，制成用于減少內(nèi)臟脂肪的面包、休閑食品、蛋糕、布丁等。因這些飲食品可日常攝取且具有減少內(nèi)臟脂肪的作用，所以對(duì)代謝綜合征的預(yù)防.治療有效。本發(fā)明還進(jìn)一步指以乳桿菌屬(Lactobacillussp.)乳酸菌及乳球菌屬(Lactococcussp.)乳酸菌、特別是其中的格氏乳桿菌(Lactobacillusgasseri)、瑞士乳桿菌(Lactobacillushelveticus)、學(xué)L酸孚L球菌(Lactococcuslactis)或乳脂乳球菌(Lactococcuscremoris)的培養(yǎng)物、或其菌體自身為有效成分并賦與了減少內(nèi)臟脂肪功能的飼料。作為家畜用飼料，與所述飲食品同樣，菌體、培養(yǎng)物可與任何飼料配合，也可在飲食品的制造過(guò)程中添加到原料中。在本發(fā)明中，為發(fā)揮減少內(nèi)臟脂肪作用，成人的情況下，可將乳桿菌屬(Lactobacillussp.)乳酸菌及乳球菌屬(Lactococcussp.)乳酸菌、特別是其中的格氏乳桿菌(Lactobacillusgasseri)、瑞士乳桿菌(Lactobacillushelveticus)、乳酸乳球菌(Lactococcuslactis)或乳月旨乳球菌(Lactococcuscremoris)的培養(yǎng)物調(diào)節(jié)到每天可攝取10200g、或調(diào)節(jié)到每天可攝取其菌體自身0.15，000mg的配合量等。乳酸菌的含有比例無(wú)特別限定，可結(jié)合制造的容易性、優(yōu)選的每天給藥量等適當(dāng)調(diào)節(jié)。例如劑型為液體時(shí)，優(yōu)選乳酸菌體濃度為1X105cells/mllX1010cells/ml，為固體時(shí)，優(yōu)選為1X105cells/glX1010cells/g。作為活菌給藥時(shí)，成人每人以1081012cfU/日給藥，即可發(fā)揮本發(fā)明的目的效果。通過(guò)如此攝取，可使乳酸菌在腸道內(nèi)定居并發(fā)揮所需的效果。以乳桿菌屬的乳酸菌的菌體及其培養(yǎng)物為有效成分的內(nèi)臟脂肪積累抑制劑及賦與了抑制內(nèi)臟脂肪積累作用的飲食品(日本特愿2006-239290號(hào))已由本申請(qǐng)人進(jìn)行了申請(qǐng)，但其是以抑制內(nèi)臟脂肪本身的積累為目的的發(fā)明，而其中未發(fā)現(xiàn)如本發(fā)明中的內(nèi)臟脂肪積累后的減少作用。此外，本發(fā)明不僅具有更迅速且有效地改善代謝綜合征的各種病狀的特征，而且在屬于乳球菌屬的乳酸菌的菌體及其培養(yǎng)物中也發(fā)現(xiàn)了有效成分。因本發(fā)明中的內(nèi)臟脂肪減少劑、或減少內(nèi)臟脂肪用飲食品、飼料具有減少內(nèi)臟脂肪的效果，所以，可非常有益于預(yù)防、治療、改善由前述的內(nèi)臟脂肪積累所引起的種種病狀。本發(fā)明中使用的乳酸菌體自古以來(lái)被用于發(fā)酵乳、奶酪的制造，所以，本發(fā)明的內(nèi)臟脂肪減少劑、或減少內(nèi)臟脂肪用飲食品、詞料具有不存在安全性問(wèn)題的特征。12實(shí)施例以下表示實(shí)施例及試驗(yàn)例，對(duì)本發(fā)明進(jìn)行更加詳細(xì)的說(shuō)明，但這些只不過(guò)是單純的舉例，本發(fā)明不受這些的任何限定。實(shí)施例i(格氏乳桿菌培養(yǎng)物粉末的制備1)將還原脫脂乳培養(yǎng)基(含有13重量％脫脂奶粉、0.5重量％酵母浸膏)在95。C下殺菌30分鐘后，接種格氏乳桿菌(Lactobacillusgasseri)SBT2055(FERMABP-10953)，37。C下培養(yǎng)16小時(shí)，冷凍干燥所得到的培養(yǎng)物后，得到格氏乳桿菌(Lactobacillusgasseri)SBT2055(FERMABP-10953)的培養(yǎng)物粉末。該培養(yǎng)物粉末可直接作為本發(fā)明的內(nèi)臟脂肪減少劑使用。實(shí)施例2(格氏乳桿菌培養(yǎng)物粉末的制備2)將還原脫脂乳培養(yǎng)基(含有13重量％脫脂奶粉、0.5重量％酵母浸膏)在95°C下殺菌30分鐘后，接種格氏乳桿菌(Lactobacillusgasseri)JCM1131，37"C下培養(yǎng)16小時(shí)，冷凍干燥所得到的培養(yǎng)物后，得到格氏乳桿菌(Lactobacillusgasseri)JCM1131的培養(yǎng)物粉末。該培養(yǎng)物粉末可直接作為本發(fā)明的內(nèi)臟脂肪減少劑使用。實(shí)施例3(片劑的制造)將格氏乳桿菌(Lactobacillusgasseri)SBT2055(FERMABP-10953)的液體培養(yǎng)物在4"C、7，000rpm的條件下離心分離15分鐘后，重復(fù)進(jìn)行3次用滅菌水洗滌和離心分離，得到洗滌菌體。將該洗滌菌體進(jìn)行冷凍干燥處理后，得到菌體粉末。在該菌體粉末1份中混合脫脂奶粉4份，用壓片機(jī)將該混合粉末通過(guò)常法按每片lg進(jìn)行壓片，從而制備本發(fā)明的含200mg格氏乳桿菌(Lactobacillusgasseri)SBT2055(FERMABP-10953)的菌體的片劑。實(shí)施例4(發(fā)酵乳的制造)將格氏乳桿菌(Lactobacillusgasseri)SBT2055(FERMABP-10953)在MRS液體培養(yǎng)基(商品名LactobacilliMRSBroth,Difco公司制品)中培養(yǎng)。將處于對(duì)數(shù)增殖期的各培養(yǎng)液在添加有0.3重量％的酵母浸膏的10重量％還原脫脂乳(115°C、20分鐘滅菌后)中接種1重量％，制成母種培養(yǎng)液。在其中添加10重量％的還原脫脂乳，在IOO'C下加熱IO分鐘的酸奶混合物中添加2.5重量％來(lái)進(jìn)行制備。在37t:下進(jìn)行發(fā)酵，在乳酸酸度達(dá)到0.85時(shí)進(jìn)行冷卻，使發(fā)酵結(jié)束，得到本發(fā)明的減少內(nèi)臟脂肪用發(fā)酵乳。實(shí)施例5(散劑的制造)將格氏乳桿菌(Lactobacillusgasseri)SBT2055(FERMABP-10953)接種于5LMRS液體培養(yǎng)基(商品名LactobacilliMRSBroth,Difco公司)中后，進(jìn)行37'C下18小時(shí)的靜置培養(yǎng)。培養(yǎng)結(jié)束后，進(jìn)行7,000rpm、15分鐘的離心分離，得到培養(yǎng)液的1/50量的濃縮菌體。而后，將該濃縮菌體與含有脫脂奶粉10重量％、谷氨酸鈉1重量％的分散介質(zhì)等量混合，pH調(diào)整到7后進(jìn)行冷凍干燥。將所得到的冷凍干燥物用60目的篩子整粒，制造冷凍干燥菌粉。以第13改正日本藥局方解說(shuō)書(shū)制劑總則"散劑"的規(guī)定為依據(jù)，在該冷凍干燥菌粉lg中加入乳糖(日局)400g、馬鈴薯淀粉(日局)600g均勻混合，制得本發(fā)明的減少內(nèi)臟脂肪用散劑。實(shí)施例6(棒狀健康食品的制造)在實(shí)施例1中得到的格氏乳桿菌(Lactobacillusgasseri)SBT2055(FERMABP-10953)的培養(yǎng)物粉末30g中，加入維生素C和檸檬酸的等量混合物40g、精制白砂糖100g、玉米淀粉和乳糖的等量混合物60g后進(jìn)行混合。將混合物裝入棒狀袋中，制成本發(fā)明的減少內(nèi)臟脂肪用棒狀健康食品。實(shí)施例7(天然奶酪的制造)將調(diào)整了脂肪率的原料乳在75。C下進(jìn)行15秒的片式加熱殺菌后，冷卻到30°C，添加0.01重量％氯化鈣。而后，在這些原料乳中添加市售的乳酸菌發(fā)酵劑(科漢森(Chr.Hansen)公司制)0.7重量％及格氏乳桿菌(Lactobacillusgasseri)SBT2055(FERMABP-10953)1重量％，添加凝乳酶0.003重量％使乳凝固后，切割并攪拌至pH為6.26.1，排出乳清，得到凝乳粒。再將此凝乳粒成型壓榨，進(jìn)一步鹽漬，制成本發(fā)明的減少內(nèi)臟脂肪用天然奶酪。實(shí)施例8(膠囊劑的制造)按表1中所示的組成將原料混合、整粒后，填充到膠囊中，制成本發(fā)明的減少內(nèi)臟脂肪用膠囊劑。表1S已T2055(FERMA巳P—10953)培養(yǎng)物粉末(實(shí)施例l)乳糖可溶性淀粉硬脂酸鎂_實(shí)施例9(飲料的制造)按表2中所示的組成將原料混合、填充到容器中后，進(jìn)行加熱殺菌，制成本發(fā)明的減少內(nèi)臟脂肪用飲料。20.0(重量％)24.555.00.515S巳T2055(F"ERMA巳P—10953)培養(yǎng)物粉末(實(shí)施例2)砂糖檸檬酸蘋(píng)果果汁水2.5(重量％)實(shí)施例10(低脂肪硬質(zhì)天然奶酪的制造)使用使奶酪中的脂肪率為1230重量％而制備的原料乳，制成多種低脂肪硬質(zhì)天然奶酪。即將調(diào)整了脂肪率的原料乳在75'C下進(jìn)行15秒的片式加熱殺菌后，冷卻到30°C，添加0.01重量％氯化鈣。而后，在這些原料乳中添加乳酸菌發(fā)酵劑(科漢森(Chr.Hansen)公司制)0.7重量％及瑞士乳桿菌(Lactobacillushelveticus)SBT2171(FERMBP-5445)1重量％，添加凝乳酶0.003重量％使乳凝固后，切割并攪拌至pH為6.26.1，排出乳清，得到凝乳粒。再將此凝乳粒成型壓榨，進(jìn)一步鹽漬，制成本發(fā)明的減少內(nèi)臟脂肪用高達(dá)奶酪(Goudacheese)型低脂肪硬質(zhì)天然奶酪。實(shí)施例11(發(fā)酵乳的制造)使用瑞士乳桿菌(Lactobacillushelveticus)SBT2171(FERMBP-5445)進(jìn)行發(fā)酵乳的制造。將瑞士乳桿菌(Lactobacillushelveticus)SBT2171(FERMBP-5445)使用脫脂乳100g在37。C下培養(yǎng)12小時(shí)后的產(chǎn)物在新的相同培養(yǎng)基3kg中接種，37。C下培養(yǎng)12小時(shí)。將培養(yǎng)結(jié)束后的乳全部作為發(fā)酵劑使用，使脫脂乳100kg在32"C下發(fā)酵20小時(shí)，從而得到本發(fā)明的減少內(nèi)臟脂肪用發(fā)酵乳。瑞士乳桿菌(Lactobacillushelveticus)SBT2171(FERMBP-5445)的發(fā)酵乳中的活菌數(shù)為8.2X108cells/g。實(shí)施例12(飲料型酸乳(Drinkingyoghurt)的制造)在實(shí)施例11中得到的發(fā)酵乳43kg中加入精制白砂糖4kg、水3kg、果膠0.15kg后進(jìn)行均質(zhì)化，得到50kg飲料型酸乳(Drinkingyoghurt)。此飲料型酸乳(Drinkingyoghurt)具有清淡、受歡迎的風(fēng)味，pH為3.6，瑞士乳桿菌(Lactobacillushelveticus)SBT2171(FERMBP-5445)在飲料型酸乳(Drinkingyoghurt)中的活菌數(shù)為4.6X108cells/g。實(shí)施例13在與實(shí)施例11同樣得到的發(fā)酵物5kg中添加等量的水后，用連續(xù)離心分離機(jī)進(jìn)行3,500XG、20分鐘的離心分離，只分離回收菌體。為去除沉淀物中含有的非菌體成分，在添加lkg水后，再次進(jìn)行離心分離，重復(fù)3次此操作。最終回收瑞士乳桿菌(Lactobacillushelveticus)SBT2171(FERMBP-5445)的菌體20g。實(shí)施例14按照表3中所示的組成混合原料，制成本發(fā)明的減少內(nèi)臟脂肪用飼料。表3<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>[試驗(yàn)例1](減少內(nèi)臟脂肪作用的確認(rèn))使用各種乳酸菌，確認(rèn)減少內(nèi)臟脂肪作用。將小鼠脂肪細(xì)胞3T3-L1株在含有10。/。胎牛血清的Dulbecco改良Eagle培養(yǎng)基中培養(yǎng)到融合后，用胰蛋白酶處理將細(xì)胞從塑料壁面上剝下，回收于離心分離管中。通過(guò)離心分離(1，000XG，IO分鐘)回收細(xì)胞后，用含有0.9重量％食鹽的磷酸緩沖液(PBS、pH7.2)分散為2X107個(gè)/ml的濃度。在Balb/c系3周齡的56只裸鼠的腸間膜脂肪組織內(nèi)，按照每次1X107個(gè)(0.5ml)移植3T3-L1細(xì)胞。用一般標(biāo)準(zhǔn)飼料CE2飼養(yǎng)4星期后，使用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物用微型CT裝置每隔l星期測(cè)定內(nèi)臟脂肪量，確認(rèn)內(nèi)臟脂肪為充分積累。而且，用將各種乳酸菌以0.1%含量配合的CE2飼料飼養(yǎng)4星期后，通過(guò)解剖后計(jì)量?jī)?nèi)臟脂肪量來(lái)進(jìn)行評(píng)價(jià)。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)為1組4□結(jié)果如表4所示。相對(duì)于未攝取乳酸菌的小鼠及攝取嗜熱鏈球菌(Streptococcusthermophilis)的小鼠的內(nèi)臟脂肪量，顯示出攝取配合了乳桿菌屬乳酸菌及乳球菌屬乳酸菌的詞料的小鼠的內(nèi)臟脂肪量為顯著的低值。表4內(nèi)臟脂肪量(g)格氏乳桿菌S巳T2055株(FERMA巳P—10953)1-05±0.67JCM1131株1-12±0.49ATCC19992株1-58iO-62瑞士乳桿菌S已T2171株(FERM巳P—5445)1-SS±0.55ATCC10386株1-41±0.39ATCC10797株1-32±0.42乳酸乳球菌JCM1107株1-31tO-31乳脂乳球菌ATCC11602株1-SS±0.56ATCC14365株1-38±0,21ATCC19257株1-44±0.44嗜熱鏈球菌StreptococcusthennophilusATCC14485株2.55±0,33對(duì)照乳酸菌非投給2.64±0.62平均士標(biāo)準(zhǔn)偏差(n二4)權(quán)利要求1.內(nèi)臟脂肪減少劑，其特征在于，以乳酸菌的菌體及/或其培養(yǎng)物為有效成分。2.根據(jù)權(quán)利要求1中所述的內(nèi)臟脂肪減少劑，其特征在于，乳酸菌的菌體及/或其培養(yǎng)物為乳桿菌屬及/或乳球菌屬乳酸菌的菌體及/或其培養(yǎng)物。3.根據(jù)權(quán)利要求2中所述的內(nèi)臟脂肪減少劑，其特征在于，乳桿菌屬及/或乳球菌屬乳酸菌的菌體及/或其培養(yǎng)物為格氏乳桿菌(Lactobacillusgasseri)、瑞士乳桿菌(Lactobacillushelveticus)、乳酸乳球菌(Lactococcuslactis)、乳月旨乳球菌(Lactococcuscremoris)中的任——禾中以上的菌體及/或其培養(yǎng)物。4.減少內(nèi)臟脂肪用片劑、散劑、膠囊劑、飲食品或飼料，其特征在于，配合了權(quán)利要求13中任一項(xiàng)所述的乳酸菌的菌體及/或其培養(yǎng)物。5.根據(jù)權(quán)利要求4中的飲食品，其特征在于，飲食品為發(fā)酵乳、健康食品或奶酪類(lèi)。全文摘要本發(fā)明提供以乳酸菌、特別是乳桿菌屬及乳球菌屬的乳酸菌的菌體及/或其培養(yǎng)物為有效成分，用于減輕作為高血壓、高血脂癥、糖耐量異常等危險(xiǎn)因素聚集后的狀態(tài)的代謝綜合征的病狀、減少內(nèi)臟脂肪積累的內(nèi)臟脂肪減少劑、含有該內(nèi)臟脂肪減少劑的飲食品或飼料。文檔編號(hào)A61K35/74GK101616680SQ20088000546公開(kāi)日2009年12月30日申請(qǐng)日期2008年2月29日優(yōu)先權(quán)日2007年3月2日發(fā)明者川上浩,椎木靖彥,門(mén)岡幸男申請(qǐng)人:雪印乳業(yè)株式會(huì)社