專利名稱：Amp-18抗原多肽及其在制備治療腫瘤藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種AMP-18抗原多肽，更具體地說是一種腫瘤標(biāo)記物AMP-18抗原多肽，自身抗體在制備治療腫瘤藥物中的應(yīng)用，屬于生物工程領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
胃癌是嚴(yán)重危害人群健康最常見的腫瘤之一。其發(fā)病率和致死率僅列于肺癌之后，位居癌癥死因的次位。目前，世界上治療腫瘤的主要方法是手術(shù)、放療、化療和生物治療等四種。從醫(yī)學(xué)角度看，至今腫瘤的治療沒有一種完全有效的手段，尤其是已經(jīng)發(fā)生轉(zhuǎn)移的腫瘤患者，傳統(tǒng)的治療方法無法控制腫瘤的全身擴(kuò)散。研究證實，腫瘤直徑與手術(shù)后5年生存率密切相關(guān)，腫瘤直徑< 2cm，5年生存率100%，腫瘤直徑每增加lcm，5年生存率下降20%。所以早期診斷，甚至在原位癌階段診斷對于提高癌癥治愈率極具重要意義。
近年來，腫瘤的靶基因研發(fā)為本領(lǐng)域的研究熱點。根據(jù)迄今對腫瘤分子生物學(xué)的研究，與腫瘤發(fā)病相關(guān)的基因主要是兩類，即癌基因和抑癌基因。 一些眾所周知的抑癌基因是細(xì)胞周期的重要調(diào)控者，將它們的野生型轉(zhuǎn)入腫瘤細(xì)胞可明顯抑制其惡性程度，靶向抑癌基因的基因藥物是癌癥研究的熱點之一。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的一個目的是提供一種特異性腫瘤標(biāo)志物AMP-18抗原多肽及其衍生物。
本發(fā)明的第二目的在于提供編碼上述多肽的多核苷酸。 本發(fā)明的再一個目的是提供該在AMP-18抗原多肽在制備治療腫瘤藥物中的應(yīng)用。 為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明發(fā)明思路為利用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)篩選出胃癌相關(guān)蛋白AMP-18，并利用原核表達(dá)體系克隆表達(dá)該基因。因該基因為一分泌型蛋白質(zhì)，故我們將其作為藥物加入細(xì)胞培養(yǎng)基中，觀測其對胃癌細(xì)胞系的生物學(xué)功能。可應(yīng)用于臨床診斷和研發(fā)藥物的靶標(biāo)。 本發(fā)明的具體技術(shù)方案 —種AMP-18抗原多肽，其具有序列表中SEQ ID No. 1所示氨基酸序列。 上述的一種AMP-18抗原多肽的衍生序列，其是由SEQ ID No. 1所示氨基酸序列經(jīng)
氨基酸殘基的取代、缺失或添加而形成的氨基酸衍生序列，即在序列前端加入6個his。 —種多核苷酸，其特征在于，編碼上述SEQ ID No. 2多肽的多核苷酸。 AMP-18抗原多肽其是以正常胃組織為模板，根據(jù)AMP-18基因序列設(shè)計特異引物，
引物兩端連入Sal I和Xho I酶切位點 上游弓l物5， _Tgaaggatccaactataatatcaacgtc_3， 下坊,弓l物5， _Aaatgtcgacgttctccaccgtgtctcc_3， PCR擴(kuò)增出去除AMP-18信號肽序列的基因，經(jīng)雙酶切后與pQE30a連接，化學(xué)轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞DH5 a ，挑單克隆提取質(zhì)粒進(jìn)行測序，驗證序列無誤。篩選得到陽性克隆，lmmol/
3L IPTG誘導(dǎo)表達(dá)。誘導(dǎo)以后的菌株經(jīng)超聲后離心，上清和沉淀分別進(jìn)行SDS-PAGE電泳，結(jié) 果顯示表達(dá)的產(chǎn)物為非可溶性蛋白。大量搖菌后進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)，提取可溶的蛋白過鎳柱進(jìn) 行純化，50mM咪唑洗脫，SDS-PAGE電泳。 利用膠圖分析和質(zhì)譜鑒定，以及組織芯片和免疫組化相結(jié)合的方法進(jìn)行鑒定，結(jié) 果顯示AMP-18在正常組織中高表達(dá)，在相應(yīng)的癌組織中不表達(dá)或低表達(dá)，結(jié)果具有統(tǒng)計學(xué) 意義。 構(gòu)建pEGFP-AMP-18真核表達(dá)質(zhì)粒，并將其及空載體轉(zhuǎn)染至胃癌細(xì)胞系BGC_823。 利用免疫印跡法檢測AMP-18的蛋白表達(dá)。結(jié)果顯示在細(xì)胞及培養(yǎng)基中均可檢測到AMP-18 的表達(dá)。這意味著AMP-18蛋白質(zhì)是可能被分泌到細(xì)胞外的。運(yùn)用免疫印跡和confocal (激 光共聚焦掃描顯微技術(shù))兩種不同的實驗技術(shù)都獲得同一結(jié)論，AMP-18能夠與胃粘膜上皮 細(xì)胞相結(jié)合，是該細(xì)胞的一個自分泌蛋白質(zhì)。根據(jù)該特性，AMP-18與腫瘤細(xì)胞接觸后，可直 接作用于細(xì)胞，說明可將AMP-18制作成治療腫瘤的藥物。 應(yīng)用MTT(檢測細(xì)胞生存生長)Brdu摻入實驗(檢測細(xì)胞增殖)、集落生成實驗 (檢測細(xì)胞集落形成能力)檢測了 AMP-18對胃癌細(xì)胞系BGC-823的增殖影B向，結(jié)果顯示， AMP-18對腫瘤細(xì)胞BGC-823具有生長抑制作用。通過AMP-18裸鼠體內(nèi)實驗發(fā)現(xiàn)經(jīng)AMP-18 處理后，腫瘤細(xì)胞的惡性程度降低，增殖指數(shù)下降。說明AMP-18對腫瘤有抑制作用。
上述的AMP-18抗原多肽在制備治療腫瘤藥物中的應(yīng)用，其中所述藥物由有效量 的氨基酸序列如SEQ ID No. 1所示的AMP-18抗原多肽和一種或多種藥學(xué)上可接受的載體 或賦型劑組成。 本發(fā)明的優(yōu)點及有益效果 (1)本發(fā)明AMP-18抗原多肽具有極強(qiáng)的特異性，為腫瘤標(biāo)志物。 (2)此外，本發(fā)明AMP-18抗原多肽還可以作為新藥研發(fā)的靶標(biāo)，用于制備抗腫瘤
藥物，并且具有很好的抑瘤作用。 下面結(jié)合附圖和具體實施方式
對本發(fā)明做進(jìn)一步說明，以使本領(lǐng)域技術(shù)人員可以 更清楚地得知本發(fā)明的技術(shù)方案，并非對本發(fā)明的限制。


圖1是胃癌組織(T)及癌旁正常組織(N)表達(dá)差異蛋白及AMP-18的鑒定。圖1_A 是癌組織及癌旁正常組織蛋白差異表達(dá)譜；圖l-B是AMP-18在八對組織中的表達(dá)情況；圖 1-C是AMP-18 二級質(zhì)譜鑒定結(jié)果； 圖2是免疫組化法檢測AMP-18在胃癌配對組織中的表達(dá)；
圖3是免疫印跡法檢測AMP-18在細(xì)胞及培養(yǎng)基中的表達(dá)；
圖4是pEGFP-AMP-18與高爾基體的共定位； 圖5A是外源AMP-18在細(xì)胞中的表達(dá)圖5B是免疫熒光定位外源AMP-18 ;
圖6是外源性AMP-18對BGC-823的抑制作用。圖6A是MTT ;圖6B是Brdu摻入 實驗；圖6C是集落生成實驗； 圖7是外源性AMP-18在體內(nèi)對于腫瘤細(xì)胞的作用；
圖8是腫瘤組織經(jīng)AMP-18處理后HE染色。
具體實施方式
實驗材料 本試驗所用胃癌組織標(biāo)本來源于北京大學(xué)臨床腫瘤學(xué)院組織標(biāo)本庫。手術(shù)前停止供血30分鐘，切除的新鮮胃癌組織與其對應(yīng)的癌旁組織經(jīng)生理鹽水洗滌后，放入液氮保存。標(biāo)本均經(jīng)病理證實，并有患者知情同意書。
具體步驟 實施例1 AMP-18抗原多肽的制備
1、蛋白質(zhì)的提取 液氮凍存的組織經(jīng)金屬研缽研磨后，10% TCA/丙酮沉淀靜置2h，在4t:條件下，35000g離心15min，棄上清。沉淀經(jīng)_20°C預(yù)冷的丙酮清洗三次后真空干燥，用lysisbuffer (8M urea， 4 % CHAPS， 0. 5 % Ampholyte (3-10) ， 20mM Tris pH8. 5，用時加入2mMEDTA，lmM PMSF， 10mM DTT，Protease Inhibitor Cocktail)復(fù)溶，超聲5分鐘，在15。C條件下，40000g離心30min，取上清作為實驗所用蛋白。
2、蛋白質(zhì)的分離 蛋白質(zhì)經(jīng)過Bradford法定量后，應(yīng)用雙向電泳進(jìn)行分離。膠條為18cm、 pH3_10，聚焦過程設(shè)置如下0V*4h， 50V*8h， 500V*lh， 1000V*lh， 8000V*lh， 8000V, 60， OOOVhr。聚焦后，膠條用分別含有1% DTT和2. 5% IAM平衡液平衡15分鐘，轉(zhuǎn)至12% SDS-PAGE進(jìn)行分離。電泳結(jié)束后采用銀染顯色，如圖IA所示。
3 、膠圖分析和質(zhì)譜鑒定 銀染的膠圖經(jīng)掃描儀掃描后，采用ImageMaster 2D Plati皿m分析軟件進(jìn)行分析，
設(shè)定3倍以上的光密度差異為閾值。切取差異點，進(jìn)行膠內(nèi)的酶切消化，經(jīng)MALDI-TOF/TOF
鑒定。其中一個差異點被鑒定為AMP-18,如圖IB和圖1C所示。如圖IB箭頭所示，該蛋白
在正常組織中可被檢測到，而在癌組織中不可被檢測。結(jié)果提示，該蛋白在為正常組織中高
表達(dá)，在相應(yīng)的癌組織中不表達(dá)。 4、臨床大樣本檢測AMP-18的表達(dá) 為了在統(tǒng)計學(xué)意義上驗證AMP-18蛋白是否在胃癌中呈現(xiàn)下調(diào)趨勢，利用組織芯片和免疫組織化學(xué)相結(jié)合的方法，對該蛋白在36對胃癌和癌旁組織中的表達(dá)情況進(jìn)行了研究。從圖2中我們可以看出，AMP-18在正常組織中為強(qiáng)陽性表達(dá)，在相應(yīng)的癌組織中低表達(dá)(棕色為陽性表達(dá)，藍(lán)色為陰性表達(dá))，結(jié)果具有統(tǒng)計學(xué)意義P〈 0.001。因為AMP-18獨(dú)特表達(dá)于胃粘膜，且在胃癌中表達(dá)下調(diào)，因此將AMP-18作為胃癌的分子標(biāo)記，用于制備檢測腫瘤的試劑及作為抗腫瘤藥物的靶標(biāo)將是非常有意義的。
5、AMP-18全長蛋白的克隆，表達(dá)和純化 AMP-18抗原多肽其是以正常胃組織為模板，根據(jù)AMP-18基因序列設(shè)計特異引物，
引物兩端連入Sal I和Xho I酶切位點 上游弓l物5， _Tgaaggatccaactataatatcaacgtc_3， 下坊,弓l物5， _Aaatgtcgacgttctccaccgtgtctcc_3， PCR擴(kuò)增出去除AMP-18信號肽序列的基因(PCR參數(shù)95。C 5min ;95。C 30s55。C30s 72°C lmin，共40個循環(huán)；72t:后延伸10min)經(jīng)雙酶切后與pQE30a連接，化學(xué)轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞DH5a，挑單克隆提取質(zhì)粒進(jìn)行測序，驗證序列無誤。從測序正確的陽性菌(篩選
5方法加入lmmol/L IPTG誘導(dǎo)4小時。誘導(dǎo)以后的菌株經(jīng)超聲后離心，上清和沉淀分別進(jìn)行 SDS-PAGE電泳，結(jié)果顯示表達(dá)的產(chǎn)物為非可溶性蛋白。 大量搖菌后進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)，提取可溶的AMP-18蛋白經(jīng)Ni-NAT親和層析柱進(jìn)行純 結(jié)合，50mM咪唑洗脫AMP-18蛋白，SDS-PAGE電泳，切取條帶進(jìn)行MALDI-T0F/T0F鑒定，證實 表達(dá)產(chǎn)物為AMP-18。 實施例2確定AMP-18為分泌蛋白
1、確定AMP-18為一分泌蛋白質(zhì) 我們構(gòu)建了 pEGFP-AMP-18真核表達(dá)質(zhì)粒(pEGFP表達(dá)質(zhì)粒為商品化質(zhì)粒)，并將其 及空載體轉(zhuǎn)染至胃癌細(xì)胞系，BGC-823。轉(zhuǎn)染24小時后，收集細(xì)胞及培養(yǎng)基，利用免疫印跡 法檢測AMP-18的蛋白表達(dá)，如圖3所示，結(jié)果顯示，在細(xì)胞及培養(yǎng)基中均可檢測到AMP-18 的表達(dá)。這意味著AMP-18蛋白質(zhì)是被分泌到細(xì)胞外的。 —般情況下，經(jīng)典的自分泌蛋白質(zhì)是由信號肽介導(dǎo)，進(jìn)入內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，通過高爾基體進(jìn) 一步加工，成為有特定結(jié)構(gòu)和功能的蛋白質(zhì)，進(jìn)一步分泌到細(xì)胞外。因此，分泌蛋白與高爾 基體的共定位是檢測蛋白分泌特性的重要手段之一。我們將pEGFP-AMP-18利用lipo2000 轉(zhuǎn)染BGC-823(綠色)24h后，利用高爾基體染料(紅色)在4°C條件下將高爾基體著色 30min后，用3. 7%甲醛將細(xì)胞固定。通過confocal共定位技術(shù)發(fā)現(xiàn)，AMP-18是可以和高 爾基體共定位的，如圖4所示。由此，證明AMP-18為一經(jīng)典分泌蛋白。
2、確定AMP-18為自分泌蛋白 —般認(rèn)為，自分泌蛋白是由某一細(xì)胞自身分泌又重新作用于該類細(xì)胞的蛋白 質(zhì)。為了模擬AMP-18的分泌后狀態(tài)，我們在大腸桿菌中表達(dá)了去除信號肽的AMP-18蛋白 質(zhì)一t-AMP-18如SEQ ID No. 3和SEQ ID No. 4所示，為去除了信號肽的AMP_18。我們將 t-AMP-18加入BGC-823的無血清培養(yǎng)基中，在不同的培養(yǎng)時間點上收集細(xì)胞，并分離細(xì)胞 膜和胞漿。免疫印跡結(jié)果提示，在細(xì)胞總裂解液及細(xì)胞膜，中均可檢測到AMP-18，如圖5A所 示，但胞漿中未檢測到AMP-18的表達(dá)。說明t-AMP-18的確可以結(jié)合于BGC-823細(xì)胞膜，但 是不會轉(zhuǎn)運(yùn)至細(xì)胞內(nèi)。 我們還采用免疫熒光技術(shù)來檢測t-AMP-18的細(xì)胞定位。我們將t-AMP-18與 BGC-823共培養(yǎng)一段時間后，用3.7%的甲醛固定。用1 % BSA封閉一小時后，將細(xì)胞與 AMP-18多抗孵育2小時，TritonX-100漂洗后，用綠色FITC 二抗與細(xì)胞孵育，TritonX-100 再次漂洗，用Diab染核后封片。用confocal觀察t_AMP_18在細(xì)胞中的定位情況。如圖5B 所示，是免疫熒光定位外源AMP-18 ;t-AMP-18只是結(jié)合于細(xì)胞膜上。這樣，運(yùn)用免疫印跡和 confocal兩種不同的實驗技術(shù)都獲得同一結(jié)論，AMP-18能夠與胃粘膜上皮細(xì)胞相結(jié)合，是 該細(xì)胞的一個自分泌蛋白質(zhì)。 根據(jù)該特性，證明AMP-18與腫瘤細(xì)胞接觸后，可直接作用于腫瘤細(xì)胞，此結(jié)果說 明將AMP-18制作成治療腫瘤的藥物具有很好的抑瘤作用。
實施例3 AMP-18對腫瘤細(xì)胞增殖的影響
1、體外實驗中，AMP-18對腫瘤細(xì)胞增殖的影響 目前，用于檢測細(xì)胞增殖的方法，主要由MTT實驗、Brdu摻入實驗、細(xì)胞集落生成 實驗、裸鼠致瘤性實驗等。目前，我們主要應(yīng)用了 MTT如圖6A所示、Brdu如圖6B所示、集 落生成實驗，如圖6C所示，檢測了 AMP-18對胃癌細(xì)胞系BGC-823的增殖影響。如圖6A，將AMP-18與BGC-823孵育至72h，從48h起AMP-18可顯著抑制BGC-823的增殖。圖6B顯示， 將AMP-18與BGC-823孵育至48h，可發(fā)現(xiàn)AMP-18可顯著抑制BGC-823的增殖。圖6C顯示， 細(xì)胞經(jīng)AMP-18處理后，基本不能形成克隆。
2 、 AMP-18體內(nèi)實驗 每50萬個BGC-823細(xì)胞皮下注射入裸鼠兩后肢，共5只裸鼠。 一周后，每個腫瘤 約2*2mm。將t_AMP_18以lug隔天局部注射于裸鼠左側(cè)腫瘤，6次為一療程，右側(cè)腫瘤作為 實驗對照組。通過測量，結(jié)果提示AMP-18治療組腫瘤(體積和重量)明顯小于對照組，如 圖7所示。腫瘤組織經(jīng)福爾馬林固定后，切片，行HE染色，如圖8所示，左圖為經(jīng)AMP-18處 理前。發(fā)現(xiàn)經(jīng)AMP-18處理后，腫瘤細(xì)胞胞漿明顯可見，核質(zhì)比變小，核仁不可見，即細(xì)胞惡 性程度降低，增殖指數(shù)下降，即右圖所示。 根據(jù)以上動物實驗可知，AMP-18具有很有效的抑制腫瘤的作用，以其作為治療腫 瘤藥物的有效成分結(jié)合藥劑學(xué)上公知的載體或賦型劑，根據(jù)生物藥劑的常規(guī)制備方法即可 制備成治療腫瘤的藥物。序列表〈110〉中國科學(xué)院北京基因組研究所〈120>AMP-18抗原多肽及其在制備治療腫瘤藥物中的應(yīng)用〈130〉〈160>4〈170>PatentIn version 3. 5〈210>1〈211>199〈212>PRT〈213〉人工序列〈400>1Met Leu AlaTyrSerSer Val HisCysPheArgGluAspLysMetLys151015Phe Thr lieValPheAla Gly LeuLeuGlyValPheLeuAlaProAla202530Leu Ala AsnTyrAsnlie Asn ValAsnAspAspAsnAsnAsnAlaGly354045Ser Gly GinGinSerVal Ser ValAsnAsnGluHisAsnValAlaAsn505560Val Asp AsnAsnAsnGly Trp AspSerTrpAsnSerlieTrpAspTyr65707580Gly Asn GlyPheAlaAla Thr ArgLeuPheGinLysLysThrCyslie859095Val His LysMetAsnLys Glu ValMetProSerlieGinSerLeuAsp100105110Ala Leu ValLysGluLys Lys LeuGinGlyLysGlyProGlyGlyPro
7
115120125Pro Pro LysGly Leu Met Tyr Ser ValAsn Pro Asn Lys Val Asp Asp130135140Leu Ser LysPhe Gly Lys Asn lie AlaAsn Met Cys Arg Gly lie Pro145150155 160Thr Tyr MetAla Glu GluMet Gin GluAla Ser Leu Phe Phe Tyr Ser165170 175Gly Thr CysTyr Thr ThrSer Val LeuTrp lie Val Asp lie Ser Phe180185190Cys Gly AspThr Val GluAsn195〈210>2〈211>558〈212>DNA〈213〉人工序列〈400>2atg肌gttcacaattgtctttgctggacttcttggagtct ttctagctcc tgccctagct
60tcaacgtcaatgatgac肌caacaatgctg gaagtgggca gcagtcagtg
1203gtgtC肌C3tgtggccaatgttgac肌ta ac肌cggatg ggactcctgg
180aattccatctgggattatggaaatggctttgCtgC肌CC3 g3CtctttC3 肌3g肌g3C3
240tgcattgtgcac肌肌tg肌c肌gg肌gtcatgccctcca ttcaatccct tgatgcactg
300gtc肌gga肌3g肌gcttcagggt肌ggg3ccaggaggac cacctcccaa gggcctgatg
360tactcagtcaagtcgatgacctgagc肌gt tcgg肌肌肌 C3ttgC肌3C
420atgtgtcgtgggattccaacatacatggctgaggagatgc aagaggcaag cctgtttttt
■tactcagg肌cgtgctacacgaccagtgtactatggattg tggacatttc cttctgtgga
540g 3 c3c g g t g g
558〈210>3〈211>178〈212>PRT






























60
120
180
240
〈213〉人工序列 〈400>3 Ala Gly
1
lie
Val
Gly
Ala
65
Lys
Lys
Met
Lys
Glu 145 Thr
Asn
Ser
Trp
50
Thr
Glu
Lys
Tyr
Asn 130
Met
Ser
Leu
Val
Val
35
Asp
Arg
Val
Leu
Ser 115 lie
Gin
Val
Leu Gly 5
Asn Asp 20
Asn Asn
Ser Trp
Leu Phe
Met Pro
85 Gin Gly 100
Val Asn
Ala Asn
Glu Ala
Leu Trp 165
Val
Asp
Glu
Asn
Gin 70
Ser
Lys
Pro
Met
Ser 150 lie
Phe
Asn
His
Ser
55
Lys
lie
Gly
Asn
Cys 135 Leu
Val
Leu
Asn
Asn
40
lie
Lys
Gin
Pro
Lys 120 Arg
Phe
Asp
Ala
Asn
25
Val
Trp
Thr
Ser
Gly 105 Val
Gly
Phe
lie
Pro
10
Ala
Ala
Asp
Cys
Leu
90
Gly
Asp
lie
Tyr
Ser 170
Ala
Gly
Asn
Tyr
lie
75
Asp
Pro
Asp
Pro
Ser 155 Phe
Leu
Ser
Val
Gly
60
Val
Ala
Pro
Leu
Thr 140 Gly
Cys
Ala
Gly
Asp
45
Asn
His
Leu
Pro
Ser 125 Tyr
Thr
Gly
Asn
Gin
30
Asn
Gly
Lys
Val
Lys 110 Lys
Met
Cys
Asp
Tyr
15
Gin
Asn
Phe
Met
Lys
95
Gly
Phe
Ala
Tyr
Thr 175
Asn
Ser
Asn
Ala
Asn
80
Glu
Leu
Gly
Glu
Thr 160 Val
Glu Asn
〈210>4
〈211>498
〈212>DNA
〈213〉人工序列
〈400>4
肌ctat肌ta tc肌cgtc肌 tgatgac肌c 肌c肌tgctg g肌gtgggca gcagtcagtg 3gtgtc肌ca atg肌cac肌 tgtggcc肌t gttgac肌ta ac肌cggatg ggactcctgg
肌ttCC3tct ggg3tt3tgg 3肌tggCttt gCtgC肌CC3 g3CtctttC3 肌3g肌g3C3
tgcattgtgc acaaaatgaa caaggaagtc atgccctcca ttcaatccct tgatgcactg gtcaaggaaa agaagcttca gggtaaggga ccaggaggac cacctcccaa gggcctgatg
9300
360
420
■
498
t3CtC3gtC3 3CCC肌3C肌 3gtcgatgac ctgagc肌gt tcgg肌肌肌 C3ttgC肌3C
atgtgtcgtg ggattccaac atacatggct gaggagatgc aagaggcaag cctgtttttt
tactcaggaa cgtgctacac gaccagtgta ctatggattg tggacatttc cttctgtgga
g3C3Cggtgg 3g33Ct3權(quán)利要求
一種AMP-18抗原多肽，其特征在于，其具有序列表中SEQ ID No.1所示氨基酸序列。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的AMP-18抗原多肽，其特征在于，所述的AMP-18為自分泌蛋白。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種AMP-18抗原多肽，其特征在于，其是由SEQ ID No. 1所 示氨基酸序列經(jīng)氨基酸殘基的取代、缺失或添加而形成的氨基酸衍生序列。
4. 一種多核苷酸，其特征在于，編碼如權(quán)利要求1所述多肽的多核苷酸，如SEQ IDNo. 2 所示的堿基序列。
5. —種t-AMP-18抗原多肽，其特征在于，其具有序列表中SEQ ID No. 3所示氨基酸序列。
6. —種多核苷酸，其特征在于，編碼如權(quán)利要求5所述t-AMP-18抗原多肽的多核苷酸， 如SEQ ID No. 4所示的堿基序列。
7. AMP-18抗原多肽在制備治療腫瘤藥物中的應(yīng)用。
8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的AMP-18抗原多肽在制備治療腫瘤藥物中的應(yīng)用，其特征在 于，所述藥物由有效量的氨基酸序列如SEQ ID No. l所示的AMP-18抗原多肽和一種或多種 藥學(xué)上可接受的載體或賦型劑組成。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種腫瘤標(biāo)志物AMP-18抗原多肽，其具有序列表中SEQ ID No.1所示氨基酸序列。本發(fā)明還公開了用其基因克隆表達(dá)該蛋白，運(yùn)用免疫印跡和confocal兩種不同的實驗技術(shù)都獲得同一結(jié)論，AMP-18能夠與胃粘膜上皮細(xì)胞相結(jié)合，是該細(xì)胞的一個自分泌蛋白質(zhì)，并且進(jìn)行胃癌生物學(xué)行為判斷和動物實驗。由本發(fā)明所述的AMP-18具有很好的抑瘤作用，AMP-18抗原多肽可用于制備治療腫瘤藥物的應(yīng)用。
文檔編號A61P35/00GK101735315SQ200810227088
公開日2010年6月16日 申請日期2008年11月21日 優(yōu)先權(quán)日2008年11月21日
發(fā)明者劉斯奇, 呂有勇, 康濱, 張軍, 邢蕊 申請人:中國科學(xué)院北京基因組研究所