專利名稱：：RNAi介導(dǎo)的眼部靶標(biāo)的抑制的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及干擾RNA組合物的領(lǐng)域，該組合物用于抑制青光眼特別是原發(fā)性開角型青光眼眼壓靶標(biāo)的表達(dá)。
背景技術(shù)：
：青光眼是具有一定臨床特征的視神經(jīng)異質(zhì)化群體。青光眼視力的喪失是由于神經(jīng)視網(wǎng)膜中的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞選擇性死亡造成的，臨床診斷表現(xiàn)為視野的特征性變化、神經(jīng)纖維層缺損和視盤(ONH)的進(jìn)行性凹陷。青光眼形成的主要危險(xiǎn)因素之一是存在高眼壓(升高的眼內(nèi)壓，IOP)。適當(dāng)?shù)难蹆?nèi)壓對(duì)于保持眼睛形狀和提供壓力梯度使房水向無(wú)血管角膜和晶狀體流動(dòng)是必要的。普通眼壓性青光眼(NTG)的發(fā)病機(jī)理可能也涉及IOP水平，受益于降IOP藥物的患者可以證明這一,l對(duì)NTG患者進(jìn)行眼壓測(cè)量時(shí)，一旦調(diào)整中央角膜厚度，可能就會(huì)發(fā)現(xiàn)這些患者中許多人有高眼壓。與青光目財(cái)關(guān)的升高的IOP是由于小梁(TM)中升高的房水排出受阻所致，小梁是位于目姊前房的虹膜-角膜角中微小的專門組織。TM的青光和積聚。另夕卜，青光眼的ONH中也發(fā)生變化。在青光眼中，ONH神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中存在形態(tài)學(xué)上的和移動(dòng)性的變化。應(yīng)答升高的IOP和/或短暫性腦缺血損傷，ONH細(xì)胞外基質(zhì)組分發(fā)生變化以皿質(zhì)細(xì)胞和視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞軸突的形態(tài)發(fā)生改變。原發(fā)性青光眼起因于具有解剖學(xué)或生理學(xué)基礎(chǔ)的眼內(nèi)液流動(dòng)紊亂。繼發(fā)性青光B艮是由于眼損傷或眼外傷或原有疾病所致。原發(fā)性開角型青光眼(POAG)，也稱為慢性或單純性青光眼，占所有原發(fā)性青光眼的90%。POAG的特征在于小梁的變性，導(dǎo)致對(duì)眼中引流產(chǎn)生異常高的阻力。這種阻力的結(jié)果是導(dǎo)致IOP升高，IOP升高是為了驅(qū)動(dòng)由眼睛正常產(chǎn)生的流體以克服增加的阻力。目前，抗青光眼的治療包括通過(guò)使用房水形成的抑制劑或增加眼色素層鞏膜外流量的試劑降低IOP、激光小梁成形術(shù)或小梁切除術(shù)(其為改善引流的過(guò)濾手術(shù))。藥物學(xué)上的抗青光眼方法表現(xiàn)出多種不良副作用。例如，縮瞳藥如匹魯卡品可引起視力才莫糊和其他負(fù)面的視力副作用。全身性施用的碳酸酐酶抑制劑(CAI)也可引起惡心、消化不良、疲勞和代謝性酸中毒。另外，某些p受體阻滯劑已日益變得與嚴(yán)重的肺部副作用相關(guān)，這歸因于它們對(duì)肺組織中P-2受體的影響。仿交感神經(jīng)作用的胺物引起心動(dòng)過(guò)速、心律失常和高血壓。這種負(fù)面的副作用可能導(dǎo)致病人的M性減少或治療的終上此外，目前的IOP降低療法的療效相對(duì)較短，需絲天重復(fù)給藥，且在某些情況下，藥效隨時(shí)間而減弱。鑒于高眼壓在青光眼中的重要性以及以前治療方法的不足，需要有一種治療高目艮壓的改良的方法來(lái)解決其逸艮的根本原因。發(fā)明概述本發(fā)明是針對(duì)干擾RNA，該干擾RNA沉默高目艮壓耙標(biāo)mRNA表達(dá)，從而降低開角型青光眼及高眼壓患者的眼內(nèi)壓。高眼壓靶標(biāo)包括碳酸酐酶II、IV和XII;pi和P2腎上腺素能受體；乙酰膽堿酯酶；Na+/K+-ATP酶和Na-K-2Cl協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白。本發(fā)明的干擾RNA有助于治療開角型青光BML高眼壓患者。本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案提供了在受試者中減弱高眼壓把標(biāo)mRNA表達(dá)的方法，該高目艮壓耙標(biāo)mRNA是如碳酸酐酶II、IV或XII;pi或p2腎上腺素能受體；乙酰膽堿酯酶；貝3+/1<:+41酶或者~3-1<:-2<:1協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白mRNA。該方法包括給受試者施用組合物，該組合物包括有效量的具有19-49個(gè)核苷酸長(zhǎng)度的干擾RNA和藥物可接受載體對(duì)受試者的眼部給藥，以減弱人體內(nèi)高眼壓乾標(biāo)的表達(dá)。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，干擾RNA包括有義核苷酸鏈、反義核酸鏈和至少19個(gè)核苷酸的至少近乎完全連續(xù)互補(bǔ)的區(qū)域。另外，反義鏈在生理?xiàng)l件下與mRNA的部分雜充所述mRNA對(duì)應(yīng)于SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:101、SEQIDNO:123、SEQIDNO:124、SEQIDNO:125、SEQIDNO:126、SEQIDNO:127、SEQIDNO:128、SEQIDNO:129、SEQIDNO:130、SEQIDNO:131、SEQIDNO:132、SEQIDNO:133或SEQIDNO:134，這些是有義cDNA序列，分別編碼碳酸酐酶II和IV、pi和P2腎上腺素能受體、乙酰膽堿酯酶(ACHE)的變體E4-E5、Na+/K+-ATP酶a2多肽、Na-K-2C1協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白NKCC2(SLC12A1)、碳酸酐酶XII變體1、乙酰膽堿酯酶變體E4-E6、Na+/K+-ATP酶al多肽變體1和2、Na+/K+-ATP酶a3多肽、Na+/K+-ATP酶a4多肽變體1和2、Na+/K+-ATP酶pi多肽變體1和2、Na+/K+-ATP酶卩2多肽、Na+/K+-ATP酶卩3多肽、Na-K-2C1協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白NKCC1(SLC12A2)和碳酸酐酶XII變體2。反義鏈有至少19個(gè)核苷酸的近乎完全連續(xù)互補(bǔ)的區(qū)域，該區(qū)域含有mRNA的雜交部分，所述mRNA分別對(duì)應(yīng)于SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:101、SEQIDNO:123、SEQIDNO:124、SEQIDNO:125、SEQIDNO:126、SEQIDNO:127、SEQIDNO:128、SEQIDNO:129、SEQIDNO:130、SEQIDNO:131、SEQIDNO:132、SEQIDNO:133或SEQIDNO:134。這種組合物的施用減弱了受試者的高眼壓耙標(biāo)mRNA的表達(dá)。在一個(gè)實(shí)施方案中，高眼壓靶標(biāo)mRNA編碼碳酸酐酶II、IV或XII，而反義鏈在生理?xiàng)l件下與對(duì)應(yīng)于SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:101或SEQIDNO:134的mRNA的部分雜交并且包含與分別對(duì)應(yīng)于SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:101或SEQIDNO:134的mRNA的雜交部分有至少19個(gè)核苷酸近乎完全連續(xù)互補(bǔ)的區(qū)域。在另一個(gè)實(shí)施方案中，高B艮壓靶標(biāo)mRNA編碼pi或P2腎上腺素能受體，而反義鏈在生理?xiàng)l件下與對(duì)應(yīng)于SEQIDNO:3或SEQIDNO:4的mRNA的部分雜交，并且包含與分別對(duì)應(yīng)于SEQIDNO:3或SEQIDNO:4的mRNA的雜交部分有至少19個(gè)核苷酸近乎完全連續(xù)互補(bǔ)的區(qū)域。在另外一個(gè)實(shí)施方案中，高目艮壓靶標(biāo)mRNA編碼乙酰膽堿酯酶，而反義鏈在生理?xiàng)l件下與對(duì)應(yīng)于SEQIDNO:5或SEQIDNO:123的mRNA的部分雜交，并且包含與分別對(duì)應(yīng)于SEQIDNO:5或SEQIDNO:123的mRNA的雜交部分有至少19個(gè)核苷酸近乎完全連續(xù)互補(bǔ)的區(qū)域。在另一個(gè)實(shí)施方案中，高眼壓靶標(biāo)mRNA編碼Na+/K+-ATP酶的亞基而反義鏈在生理?xiàng)l件下與mRNA的部分雜交(該mRNA對(duì)應(yīng)于SEQIDNO:6>SEQIDNO:124SEQIDNO:125*SEQIDNO:SEQIDNO:127、SEQIDNO:12&SEQIDNO:12ASEQIDNO:13(XSEQIDNO:131或SEQIDNO:132),并且包含與mRNA的雜交部分有至少19個(gè)核苷酸近乎完全連續(xù)互補(bǔ)的區(qū)域(該mRNA分別對(duì)應(yīng)于SEQIDNO:6SEQIDNO:124、SEQIDNO:125、SEQIDNO:126、SEQIDNO:127、SEQIDNO:128、SEQIDNO:129、SEQIDNO:130、SEQIDNO:131、或SEQIDNO:132)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，高眼壓靼標(biāo)mRNA編碼Na-K-2C1協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，而反義鏈在生理?xiàng)l件下與對(duì)應(yīng)于SEQIDNO:7或SEQIDNO:133的mRNA的部分雜充并且包含與分別對(duì)應(yīng)于SEQIDNO:7或SEQIDNO:133的mRNA的雜交部分有至少19個(gè)核苷酸近乎完全連續(xù)互補(bǔ)的區(qū)域。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，干擾RNA被設(shè)計(jì)成以mRNA為靶標(biāo)，該mRNA對(duì)應(yīng)于SEQIDNO:l，包含核苷酸232、527、721、728、809、810、855、856、921、1139、506、547、548、740、911、1009、1140、1149、1150、1151、1188、1194、1195、1223、1239、1456、1457、1458、100、158、166、247、286、318、322、328、371、412、482、504、505、541、734、772、777、814、972、998、1232、317或401。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，干擾RNA被i殳計(jì)成以mRNA為靶標(biāo)，該mRNA對(duì)應(yīng)于SEQIDNO:2，包含核苷酸213、252、258、266、399、457、463、490、595、1064、109、112、125、126、150、261、265、280、398、453、459、462、467、492、534、785、801、825、827、876、1003或1012。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，干擾RNA,皮設(shè)計(jì)成以mRNA為靶標(biāo)，該mRNA對(duì)應(yīng)于SEQIDNO:101，包含核苷酸191、239、274、275、341、389、412、413、423、687、689、695、710、791、792、794、983、993、994、995、691、1039、1568、2326、2332、2425、2433、2844、2845、2880、2884、2891、2954、2955、2956、2957、2964、2965、3006、3007、3012或3026。在另一個(gè)實(shí)施方案中，千擾RNA被設(shè)計(jì)成以mRNA為靶標(biāo)，該mRNA對(duì)應(yīng)于SEQIDNO:134，包含核苷酸687、1535、2293、2299、2392、2400、2811、2812、2847、2851、2858、2921、2922、2923、2924、2931、2932、2973、2974、2979或2993。本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案提供被設(shè)計(jì)成以mRNA為靶標(biāo)的干擾RNA，該mRNA對(duì)應(yīng)于SEQIDNO:3，包含核苷酸468、523、799、1563、1565、1569、1593、1613、1614、1626、310、322、726、769、772、801、802、1501、1576、1577、1579、1580、1581、1586、1590、1592、1594、1615、1616、1632、1633或1654。本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案提供被設(shè)計(jì)成以mRNA為靶標(biāo)的干擾RNA,該mRNA對(duì)應(yīng)于SEQIDNO:4，包含核苷酸32孓3751031、1046、1149、1163、1371、1401、1426、1880、283、607、608、609、619、623、722、857、1037、1091、1115、1124、1136、1137、1151、1164、1393、1394、1395、1406、1407、1427、1428、1429、1442、1725、1726、1756、1757、1758、1767、1790、1791、1792、1793、1803、1861、1869、1971、1972或1979。在本發(fā)明另一個(gè)實(shí)施方案中，干擾RNA被設(shè)計(jì)成以mRNA為靶標(biāo)，該mRNA對(duì)應(yīng)于SEQIDNO:123，包含核苷酸1875、1890、1891、2011、2012、2133或2134。本發(fā)明另一個(gè)實(shí)施方案提供被設(shè)計(jì)成以mRNA為把標(biāo)的干擾RNA,該mRNA對(duì)應(yīng)于SEQIDNO:5，包含核苷酸366、370、384、385、525、588、768、1045、1046、1061、1090、1232、1314、1316、1460、1461、1462、1528、1607、1705、1713、382、393、397、622、1131、1459、1530、2251、2885、2886、386、1231、1315、2047、2049、2053、2055、2057、2125、2126、2127、2250、2253、2258、2260、2318、2395、2397、2404、2405、2643、2645或2887。在另一個(gè)實(shí)施方案中，干擾RNA被設(shè)計(jì)成以mRNA為靶標(biāo)，該mRNA對(duì)應(yīng)于SEQIDNO:124，包含核苷酸2208、2275、2307、2526、2538、2592、2628、2979、2985、3093、3474、3504、3505、3506、3518、343、442、700、707、811、907、1059、1363、1594、1662、1758、1760、1896、2037或2147。在另一個(gè)實(shí)施方案中，干擾RNA被設(shè)計(jì)成以mRNA為靶標(biāo)，該mRNA對(duì)應(yīng)于SEQIDNO:125,包含核苷酸436、441、443、552、617、701、702、832、2204、2291或2495。本發(fā)明另一個(gè)實(shí)施方案提供被設(shè)計(jì)成以mRNA為乾標(biāo)的干擾RNA，該mRNA對(duì)應(yīng)于SEQIDNO:6，包含核苷酸471、1990、3080、3797、4037、4093、4225、4323、5213、5285、214、467、470、472、473、632、825、946、1693、1767、1768、2157、2263、2589、2590、2765、2988、3094、3144、3145、3344、3345、3418、3666、3828、3850、4040、4041、4061、4882、4894、4900、5040、5114、5115、5128、5129、5253、5296、5375、5384或5385。在本發(fā)明另一個(gè)實(shí)施方案中，干擾RNA被設(shè)計(jì)成以mRNA為靶標(biāo)，該mRNA對(duì)應(yīng)于SEQIDNO:126，包含核苷酸240、272、362、1836、1851、2103、2137、2138、2139、2157、2158、2160、2425、2580、2601、2646、2650、2794、2803、3116、3124、3126、3129或3377。在本發(fā)明另一個(gè)實(shí)施方案，干擾RNA設(shè)計(jì)成以mRNA為耙標(biāo)，該mRNA對(duì)應(yīng)于SEQIDNO:127，包含核普酸113、612、702、833、1101、1732、1733、1836、2070、2071、2143、2328、2475、2861、2862、2952、3203、3281、3377、3379、3470、3471、3554、3614、3615、3616、3617、3625、3626、3642、3646、3647、3653、3655、3797、3801、3803、3809或3810。在另一個(gè)實(shí)施方案中，干擾RNA被設(shè)計(jì)成以mRNA為靶標(biāo)，該mRNA對(duì)應(yīng)于SEQIDNO:128，包含核苦酸126、251、252、253、331、427、429、520、521、530、601、602、603、604、664、665、666、667、675、676、692、696、697、702、703、705、707、847、851、853、859或860。在另一個(gè)實(shí)施方案中，干擾RNA被設(shè)計(jì)成以mRNA為靶標(biāo)，該mRNA對(duì)應(yīng)于SEQIDNO:129，包含核苷酸1096、1099、1130、1131、1167、1299、1441、1450、1451、1452、1564、1746、1750、1751、1752、1795、203、204、214、222、224、225、226、380、525、591、612、613、615、635、636、663、664、669、699、765、790、839、840、841、卯0、909、933或947。在另一個(gè)實(shí)施方案中，干擾RNA被設(shè)計(jì)成以mRNA為乾標(biāo)，該mRNA對(duì)應(yīng)于SEQIDNO:130，包含核苦酸1063、1102、1106、1107、1108、1109、1111或1151。在另一個(gè)實(shí)施方案中，干擾RNA被設(shè)計(jì)成以mRNA為靶標(biāo)，該mRNA對(duì)應(yīng)于SEQIDNO:131，包含核苷酸653、654、771、773、841、849、853、917、918、926、927、931、981、983、984、996、998、1022、1023、1160、1214、1355、1356、1381、1394、1425、1474、1550、1620、1707、1740、1753、1825、1956、1965、2598、2599、2608、2828、2829、2888、3012或3251。在本發(fā)明另一個(gè)實(shí)施方案中，千擾RNA被設(shè)計(jì)成以mRNA為耙標(biāo)，該mRNA對(duì)應(yīng)于SEQIDNO:132，包含核苷酸292、434、438、457、459、488、490、498、499、592、639、723、774、775、788、857、858、910、911、930、931、932、1009、1010、1023、1024、1111、1146、1147、1220、1246、1321、1325、1326、1327、1331、1437、1548、1571、1785、1786或1787。本發(fā)明另一個(gè)實(shí)施方案提供被設(shè)計(jì)成以mRNA為耙標(biāo)的干擾RNA，該mRNA對(duì)應(yīng)于SEQIDNO:7，包含核苷酸675、974、1373、1780、2102、2151、2315、2542、2609、3197、67、71、73、353、405、864、911、912、913、1409、1748、1811、1935、1937、1993、2012、2346、2388、2437、2586、3007、3008、3022、3130、3210、3237或3271。本發(fā)明另一個(gè)實(shí)施方案提供被設(shè)計(jì)成以mRNA為靶標(biāo)的干擾RNA，該mRNA對(duì)應(yīng)于SEQIDNO:133，包含核苷酸748、749、753、1119、1169、1499、1509、1820、2081、2118、2147、2615、2644、2659、2663、2671、2672、2793、2812、2914、2948、3044、3334、3391、3480、3520、3549、3639、3840、3941、3944、4001、4995、4997、5141、5143、5249、5375、5834、5852、5981或6678。除第一種干擾RNA夕卜，本發(fā)明還提供向受試者施用第二種千擾RNA。該方法包括向受試者施用長(zhǎng)度為19-49個(gè)核苷酸的第二種干擾RNA，所述第二種干擾RNA還包括有義核普酸鏈、反義核酸鏈和至少19個(gè)核苦酸的近乎完全連續(xù)互補(bǔ)的區(qū)域；其中第二種干擾RNA的反義鏈在生理?xiàng)l件下與mRNA的部分雜交，該mRNA對(duì)應(yīng)于SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:101、SEQIDNO:123、SEQIDNO:124、SEQID戮125、SEQIDNO:126、SEQIDNO:127、SEQIDNO:128、SEQIDNO:129、SEQIDNO:130、SEQIDNO:131、SEQIDNO:132、SEQIDNO:133或SEQIDNO:134，而反義鏈與mRNA的第二個(gè)雜交部分有至少19個(gè)核苷酸的近乎完全連續(xù)互補(bǔ)的區(qū)域，該mRNA分別對(duì)應(yīng)于SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:lOl、SEQIDNO:123、SEQIDNO:124、SEQIDNO:125、SEQIDNO:126、SEQIDNO:127、SEQIDNO:128、SEQIDNO:129、SEQIDNO:130、SEQIDNO:131、SEQIDNO:132、SEQIDNO:133或SEQIDNO:134。第二干擾RNA可能和第一干擾RNA以相同的mRNA為耗標(biāo)或以不同的mRNA為乾標(biāo)。另外，也可以以相似的方式施用第三種、第四種或第五種等千擾RNA。本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案是應(yīng)受試者需要治療高眼壓的方法。該方法包括給受試者眼部施用組合物，該組合物包含有效量的長(zhǎng)度為19-49個(gè)核苷酸的干擾RNA和藥物可接受載體。該干擾RNA含有有義核苷酸鏈、反義核苷酸鏈和至少19個(gè)核苷酸的近乎完全連續(xù)互補(bǔ)的區(qū)域.該反義鏈在生理務(wù)fr下與mRNA的部分雜交，該mRNA對(duì)應(yīng)于SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:101、SEQIDNO:123、SEQIDNO:124、SEQIDNO:125、SEQIDNO:126、SEQIDNO:127、SEQIDNO:128、SEQIDNO:129、SEQIDNO:130、SEQIDNO:131、SEQIDNO:132、SEQTDNO:133或SEQIDNO:134，并且包含與mRNA的雜交部分有至少19個(gè)核苷酸近乎完全連續(xù)互補(bǔ)的區(qū)域，該mRNA分別對(duì)應(yīng)于SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQID隱4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:101、SEQIDNO:123、SEQIDNO:124、SEQIDNO:125、SEQIDNO:126、SEQIDNO:127、SEQIDNO:128、SEQIDNO:129、SEQID隱130、SEQIDNO:131、SEQIDNO:132、SEQIDNO:133或SEQIDNO:134。由此治療高眼壓。本發(fā)明另一個(gè)實(shí)施方案是在受試者中減弱高眼壓靶標(biāo)mRNA表達(dá)的方法，包括給受試者施用組合物，該組合物包含有效量的長(zhǎng)度為19-49個(gè)核苷酸的單鏈干擾RNA和藥物可接受栽體。為減弱高眼壓乾標(biāo)的表達(dá)，該單鏈干擾RNA在生理?xiàng)l件下與對(duì)應(yīng)于序列標(biāo)識(shí)符和反義鏈的上述核苷酸位點(diǎn)的mRNA的部分雜交。本發(fā)明另一個(gè)實(shí)施方案是在受試者中減弱高眼壓靶標(biāo)mRNA表達(dá)的方法，包括給受試者施用組合物，該組合物包含有效量的長(zhǎng)度為19-49個(gè)核苦酸的單鏈干擾RNA和藥物可接受栽體，其中，干擾RNA包含至少13個(gè)連續(xù)核苷酸的區(qū)域，該連續(xù)核苷酸與以下任一序列的3'端次末端的13個(gè)核苷酸具有至少90%的序列互補(bǔ)性或至少90%的序列同一性，所述序列為SEQIDNO:8、SEQIDNO:14誦SEQIDNO:100、SEQIDNO:102-SEQIDNO:122、SEQIDNO:135-SEQIDNO:717、SEQIDNO:720和SEQIDNO:721。當(dāng)高眼壓靼標(biāo)mRNA編碼碳酸酐酶時(shí)，干擾RNA包含至少13個(gè)連續(xù)核苷酸的區(qū)域，該連續(xù)核苷酸與以下^f壬一序列的3'端次末端的13個(gè)核苷酸具有至少90。/。的序列互補(bǔ)性或至少90%的序列同一性，所述序列為SEQIDNO:8、SEQIDNO:14-SEQIDNO:32、SEQIDNO:83-SEQIDNO:IOO、SEQIDNO:102-SEQIDNO:122、SEQIDNO:135-SEQIDNO:219、SEQIDNO:720和SEQIDNO:721。當(dāng)高眼壓靼標(biāo)mRNA編碼l-腎上腺素能受體時(shí)，干擾RNA包含至少13個(gè)連續(xù)核苷酸的區(qū)域，該連續(xù)核苦酸與以下任一序列的3'端次末端的13個(gè)核苷酸具有至少90%的序列互補(bǔ)性或至少90%的序列同一性，所述序列為SEQIDNO:33-SEQIDNO:52和SEQIDNO:220-SEQIDNO:282。當(dāng)高眼壓乾標(biāo)mRNA編碼ACHE時(shí)，干擾RNA包含至少13個(gè)連續(xù)核苷酸的區(qū)域，該連續(xù)核苷酸與以下任一序列的3'端次末端的13個(gè)核苷酸具有至少90。/。的序列互補(bǔ)性或至少90%的序列同一性，所述序列為SEQIDNO:53-SEQIDNO:62和SEQIDNO:283-333。當(dāng)高眼壓耙標(biāo)mRNA編碼ATP1A1時(shí)，干擾RNA包含至少13個(gè)連續(xù)核苷酸的區(qū)域，該連續(xù)核苷酸與以下任一序列的3'端次末端的13個(gè)核苷酸具有至少卯％的序列互補(bǔ)性或至少90%的序列同一性，所述序列為SEQIDNO:334-SEQIDNO:374'當(dāng)高眼壓乾標(biāo)mRNA編碼ATP1A2時(shí)，干擾RNA包含至少13個(gè)連續(xù)核苷酸的區(qū)域，該連續(xù)核苷酸與以下任一序列的3'端次末端的13個(gè)核苷酸具有至少卯％的序列互補(bǔ)性或至少90%的序列同一性，所述序列為SEQIDNO:63畫SEQIDNO:72和SEQIDNO:375-SEQIDNO:416。當(dāng)高眼壓把標(biāo)mRNA編碼ATP1A3時(shí)，干擾RNA包含至少13個(gè)連續(xù)核苷酸的區(qū)域該連續(xù)核苷酸與以下任一序列的3'端次末端的13個(gè)核苷酸具有至少90%的序列互補(bǔ)性或至少90%的序列同一性，所述序列為SEQIDNO:417-SEQIDNO:440。當(dāng)高眼壓把標(biāo)mRNA編碼ATP1A4時(shí)，干擾RNA包含至少13個(gè)連續(xù)核苷酸的區(qū)域，該連續(xù)核苷酸與以下任一序列的3，端次末端的13個(gè)核苷酸具有至少90%的序列互補(bǔ)性或至少90%的序列同一性，所述序列為SEQIDNO:441-SEQIDNO:511,當(dāng)高眼壓把標(biāo)mRNA編碼ATP1B1時(shí)，干擾RNA包含至少13個(gè)連續(xù)核苷酸的區(qū)域，該連續(xù)核苷酸與以下任一序列的3'端次末端的13個(gè)核苷酸具有至少卯％的序列互補(bǔ)性或至少90%的序列同一性，所述序列為SEQIDNO:512-SEQIDNO:563。當(dāng)高眼壓把標(biāo)mRNA編碼ATP1B2時(shí)，干擾RNA包含至少13個(gè)連續(xù)核苷酸的區(qū)域，該連續(xù)核苷酸與以下任一序列的3'端次末端的13個(gè)核苷酸具有至少90%的序列互補(bǔ)性或至少90%的序列同一性，所述序列為SEQIDNO:564-SEQIDNO:606。當(dāng)高眼壓乾標(biāo)mRNA編碼ATP1B3時(shí)，干擾RNA包含至少13個(gè)連續(xù)核苷酸的區(qū)域，該連續(xù)核苷酸與以下任一序列的3'端次末端的13個(gè)核苷酸具有至少90%的序列互補(bǔ)性或至少90%的序列同一性，所述序列為SEQIDNO:607畫SEQIDNO:648。當(dāng)高目^LH乾標(biāo)mRNA編碼SLC12A1時(shí)，干擾RNA包含至少13個(gè)連續(xù)核苷酸的區(qū)域，該連續(xù)核苷酸與以下任一序列的3'端次末端的13個(gè)核苷酸具有至少90%的序列互補(bǔ)性或至少90%的序列同一性，所述序列為SEQIDNO:73-SEQIDNO:82和SEQEDNO:649-SEQIDNO:675。當(dāng)高眼壓靶標(biāo)mRNA編碼SLC12A2時(shí)，干擾RNA包含至少13個(gè)連續(xù)核苷酸的區(qū)域，該連續(xù)核苷酸與以下任一序列的3'端次末端的13個(gè)核苷酸具有至少卯％的序列互補(bǔ)性或至少90%的序列同一性，所述序列為SEQIDNO:676-SEQIDNO:717。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，連續(xù)核苷酸區(qū)域含有至少14個(gè)連續(xù)核苷酸，該連續(xù)核苷酸與序列標(biāo)識(shí)符的序列的3'端次末端的14個(gè)核苷酸具有至少85。/。的序列互補(bǔ)性或至少85%的序列同一性。而在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，連續(xù)核苷酸區(qū)域含有至少15、16、17或18個(gè)連續(xù)核苷酸，分別與序列標(biāo)識(shí)符的序列的3'端次末端的15、16、17或18個(gè)核苷酸具有至少80%的序列互補(bǔ)性或至少80%的序列同一性。本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案是包含干擾RNA的組合物和藥物可接受載體，該干擾RNA長(zhǎng)度為19-49個(gè)核普酸并且具有SEQIDNO:8、SEQIDNO:14-SEQIDNO:IOO、SEQIDNO:102-SEQIDNO:122、SEQIDNO:135-SEQIDNO:717、SEQEDNO:720以及SEQIDNO:721中任何一個(gè)核苷酸序列或其互補(bǔ)序列。在一個(gè)實(shí)施方案中，干擾RNA是分離的。術(shù)語(yǔ)"分離的"意指干擾RNA是從其總的天然環(huán)境游離的。本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案是應(yīng)受試者需要治療高眼壓的方法。該方法包括給受試者眼部施用組合物，該組合物包含有效量的長(zhǎng)度為19-49個(gè)核苦酸的干擾RNA和藥物可接受載體，該千擾RNA包含至少13個(gè)連續(xù)核苷酸的區(qū)域，該連續(xù)核苷酸與以下任一序列的3'端次末端的13個(gè)核苷酸具有至少90%的序列互補(bǔ)性或至少卯％的序列同一性，所述序列為SEQIDNO:8、SEQIDNO:14-SEQIDNO:IOO、SEQIDNO:102-SEQIDNO:122、SEQIDNO:135-SEQIDNO:717、SEQIDNO:720和SEQIDNO:721，由此治療高眼壓。本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案是減弱受試者高眼壓靶標(biāo)mRNA第一種變體的表達(dá)而不減弱高眼壓把標(biāo)mRNA第二種變體的表達(dá)的方法。該方法包括給受試者施用組合物，該組合物包含有效量的長(zhǎng)度為19-49個(gè)核苷酸的干擾RNA和藥物可接受載體，該干擾RNA包含至少13個(gè)連續(xù)核苷酸的區(qū)域，所述連續(xù)核苷酸與第一種變體的3，端次末端的13個(gè)核苷酸具有至少90%的序列互補(bǔ)性或至少90%的序列同一性，其中第一種變體mRNA的表達(dá)被減弱，而沒(méi)有減弱第二個(gè)變體mRNA的表達(dá)，且其中笫一種變體耙標(biāo)mRNA是SEQIDNO:lOl、SEQIDNO:5、SEQIDNO:124、SEQIDNO:127或SEQIDNO:129，和第二種變體靶標(biāo)mRNA是SEQIDNO:134、SEQIDNO:123、SEQIDNO:125、SEQIDNO:128或SEQIDNO:130。在以上所述方法的另一個(gè)實(shí)施方案中，第一種變體把標(biāo)mRNA是SEQIDNO:134、SEQIDNO:123、SEQIDNO:125、SEQIDNO:128或SEQIDNO:130，并且第二種變體耙標(biāo)mRNA是SEQIDNO:101、SEQIDNO:5、SEQIDNO:124、SEQIDNO:127或SEQIDNO:129。這里描述的任何實(shí)施方案在制備用于咸弱高眼壓mRNA表達(dá)的藥物中的用途也是本發(fā)明的實(shí)施方案。附圖筒述圖1提供western印跡，用抗CA2和肌動(dòng)蛋白的抗體檢測(cè)以CA2siRNA#l、#3、#4和#5、無(wú)耙向?qū)φ誷iRNA和緩沖液對(duì)照(-siRNA)轉(zhuǎn)染的HeLa細(xì)胞。SiRNA濃度為100nM或1nM。箭頭指示30-kDaCA2蛋白和42-kDa肌動(dòng)蛋白帶的位置。發(fā)明詳述RNA千擾(RNAi)是使用雙鏈RNA(dsRNA)來(lái)沉lt^因表達(dá)的過(guò)程。盡管不期望被理論所束縛，RNAi首先通過(guò)類RNaseIII酶-dicer將長(zhǎng)dsRNA切割成小的千擾RNA(siRNA)。SiRNA是長(zhǎng)度通常為約19-28個(gè)核香酸或20-25個(gè)核苦酸或21-22個(gè)核苷酸并且通常含有2-核苷酸的3，突出端以及5'磷酸和3'羥基末端的dsRNA。siRNA的一條鏈被摻入核糖核蛋白復(fù)合體即RNA誘導(dǎo)的沉默復(fù)合體(RISC)中。RISC利用這一siRNA鏈來(lái)識(shí)別與并入的siRNA鏈至少部分互補(bǔ)的mRNA分子，并且然后切割這些乾標(biāo)mRNA或抑制它們的翻譯。因此，摻入RISC的siRNA鏈被稱為引導(dǎo)鏈或反義鏈。另一條siRNA鏈(稱為傳遞鏈或有義鏈)從siRNA上被除去，并且至少與靼標(biāo)RNA有部分同源性。本領(lǐng)域技術(shù)人員公認(rèn)，原則上siRNA的任一M都能被摻入RISC中并作為引導(dǎo)M作用。然而，siRNA設(shè)計(jì)(例如，在反義鏈的5'端降低的siRNA雙螺旋穩(wěn)定性)能夠有利于反義鏈摻入RISC中。RISC介導(dǎo)的具有與引導(dǎo)鏈至少部分互補(bǔ)的序列的mRNA切割導(dǎo)致該mRNA和由該mRNA編碼的相關(guān)蛋白質(zhì)的穩(wěn)態(tài)水平降低。備選地，RISC也能通過(guò)抑制翻譯來(lái)減少相關(guān)蛋白質(zhì)的表達(dá)，而不切割靶標(biāo)mRNA。其他RNA分子和類RNA分子也能夠與RISC相互作用并沉默基因表達(dá)。能夠與RISC相互作用的其他RNA分子的實(shí)例包括短發(fā)夾RNA(shRNA)、單鏈siRNA、微小RNA(miRNA)和dicer-底物27聚體雙螺旋。除非另有說(shuō)明，術(shù)語(yǔ)"siRNA"指雙鏈干擾RNA。能與RISC相互作用的類RNA分子的實(shí)例包括含有一個(gè)或多個(gè)經(jīng)化學(xué)修飾的核苷酸、一個(gè)或多個(gè)脫氧核糖核苷酸、和/或一個(gè)或多個(gè)非磷酸二酯鍵連接的RNA分子。對(duì)于本討論的目的而言，將所有能與RISC相互作用并參與到RISC介導(dǎo)的基因表達(dá)的改變中的RNA或類RNA分子稱為"干擾RNA"。因此，SiRNA、shRNA、miRNA和dicer-底物27聚體雙螺旋都是"干擾RNA，，的亞群。本發(fā)明實(shí)施方案中的干擾RNA似乎以催化方式切割靶標(biāo)mRNA，即干擾RNA能夠在亞化學(xué)計(jì)量上對(duì)乾標(biāo)mRNA起抑制作用。與反義療法相比，在這樣的切割條件下提供療效所需要的干擾RNA明顯減少。本發(fā)明涉及到應(yīng)用干擾RNA抑制高眼壓乾標(biāo)mRNA的表達(dá)，從而減少開角型青光眼或高眼壓患者的眼內(nèi)壓。高眼壓靶標(biāo)包括碳酸酐酶II、IV和XII;pi和P2腎上腺素能受體；乙酰膽堿酯酶；Na+/K+-ATP酶亞基和Na-K-2C1協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白。根據(jù)本發(fā)明，外源提供的或內(nèi)源表達(dá)的干擾RNA使眼部組織中高眼壓乾標(biāo)mRNA沉默。碳酸酐酶催化二氧化碳的可逆水合并且似乎對(duì)房水分泌起調(diào)節(jié)作用。碳酸酐酶抑制劑通過(guò)減少產(chǎn)生的流體量來(lái)降低眼內(nèi)壓力。碳酸酐酶抑制劑可作為滴眼液(多佐胺(dorzolamide)、布林佐胺(brinzolamide))或片劑/膠嚢(乙酰唑胺(acetazolamide)、醋甲唑胺(methazolamide))使用。滴眼液的副作用比片劑或膠嚢少，可以更好地被很多病人所接受。AZOPT⑧(布林佐胺)1。/o的眼懸浮液是典型的碳酸肝酶抑制劑(AlconLaboratories,Inc.,FortWorth,TX)。眼部P受體阻滯劑通過(guò)減少眼內(nèi)產(chǎn)生的流體量來(lái)降低眼內(nèi)壓力。這些藥物被分為兩類非選擇性卩受體阻滯劑(漆嗎心安(timolol)、左布諾洛爾(levobunolol)、美替洛爾(metipranolol)、卡替洛爾(carteolol))和卩-1選擇性受體阻滯劑(倍他洛爾(betaxolol))。通常劑量是每次每眼一滴，一天一至兩次，取決于所使用的藥物。該產(chǎn)品的實(shí)例是BETOPTICS⑧(鹽酸倍他洛爾(betaxololHCl))0.25。/o的眼懸浮液(AlconLaboratories,Ine.，F(xiàn)ortWorth,TX)。乙酰膽堿酯酶的抑制劑通過(guò)阻斷造成乙酰膽堿水解的酶(乙酰膽堿酯酶)使乙酰膽堿保留在受體位點(diǎn)。乙酰膽堿積聚于受體，通過(guò)睫狀肌的收縮降低眼內(nèi)壓力，與直接作用的膽喊能激動(dòng)劑作用相似。Na+/K+-ATP酶抑制劑例如烏本苷、一氧化氮供體和內(nèi)皮素降低Na+/K+-ATP酶的活性，減小由睫狀突分泌房水的驅(qū)動(dòng)力。氯化物轉(zhuǎn)運(yùn)抑制劑，例如利尿酸改變小梁細(xì)胞容量以增加流出易度。除非另外注明，這里引用的核酸序列都是按5，到3'方向書寫的。這里使用的術(shù)語(yǔ)"核酸"，指DNA或RNA或其修飾形式，包含存在于DNA(腺嘌呤"A"、胞嘧啶"C"、鳥噤呤"G"、胸腺嘧啶"T")或RNA(腺嘌呤"A"、胞嘧咬"C"、鳥嘌呤"G"、尿嘧啶"U，，)中的嘌呤或嘧咬堿基。這里提供的干擾RNA可能包含"T"堿基，特別是在3'末端，盡管"T"4^通常并不存在于RNA中。"核酸，，包括術(shù)語(yǔ)"寡核苷酸，，和"多核苷酸，，并且可以指單鏈分子或雙鏈分子。雙鏈分子通過(guò)A和T堿基、C和G威基、人和11>^之間的Watson-Crick堿基配對(duì)而形成。雙鏈分子的雙鏈之間可以是部分、基本或完全的互補(bǔ)，并形成一個(gè)雙螺旋雜交體，其鍵強(qiáng)度取決于M序列互4卜的性質(zhì)和禾呈度。很容易vM目應(yīng)的DNA序列推斷出mRNA序列。例如，SEQIDNO:l提供對(duì)應(yīng)于編碼碳酸酐酶IImRNA的DNA的有義鏈序列。mRNA序列與DNA有義妙列是一樣的，其中，"U"堿基代替"T"堿基。因此，從SEQIDNO:l可知碳酸酐酶II的mRNA序列；從SEQIDNO:2可知碳酸酐酶IV的mRNA序列；從SEQIDNO:3可知pi-腎上腺素能受體的mRNA序列；從SEQIDNO:4可知卩2-腎上腺素能受體的mRNA序列；從SEQIDNO:5可知乙酰膽堿酯酶剪接變體E4-E5的mRNA序列；從SEQIDNO:6可知Na+/K+-ATP酶a2的mRNA序列；從SEQIDNO:7可知Na畫K-2Cl協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白Al的mRNA序列；從SEQIDNO:101可知碳酸酐酶XII變體1的mRNA序列；從SEQIDNO:123可知乙酰膽堿酯酶剪接變體E4-E6的mRNA序列；從SEQIDNO:124可知Na+/K+-ATP酶al，變體1的mRNA序列；從SEQIDNO:125可知Na+/K+-ATP酶al，變體2的mRNA序列；從SEQIDNO:126可知Na+/K-ATP酶a3的mRNA序列；從SEQIDNO:127可知Na+/K+-ATP酶a4，變體1的mRNA序列；從SEQIDNO:128可知Na+/K+-ATP酶a4，變體2的mRNA序列；從SEQIDNO:129可知Na+/K+-ATP酶pi變體1的mRNA序列；從SEQIDNO:130可知Na+/K+-ATP酶卩l(xiāng)，變體2的mRNA序列;從SEQIDNO:131可知Na+/K+-ATP酶p2的mRNA序列；從SEQIDNO:132可知Na+/K+-ATP酶(33的mRNA序列；從SEQIDNO:133可知Na-K-2C1協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白A2的mRNA序列；從SEQIDNO:134可知碳酸酐酶XII，變體2的mRNA序列。碳酸酐酶II、IV和XII的mRNA(CA2，CA4和CA12):正如在ncbi.nlm.nih.gov上美國(guó)國(guó)立生物技術(shù)信息中心的GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)所描述的，碳酸酐酶(CA)II、IV和XII是催化二氧化碳可逆水合的鋅金屬酶大家族成員。碳酸酐酶涉及重要的生理過(guò)程例如代謝組織和肺部之間C(V碳酸氫鹽的呼吸和運(yùn)輸、pH和C02的內(nèi)穩(wěn)態(tài)、在多種組織和器官中的電解質(zhì)分泌、生物合成反應(yīng)(如糖異生、脂肪生成和尿素生成)、骨吸收、鈣化作用和肺瘤發(fā)生。已鑒定出14種不同的碳酸酐酶同工酶具有不同的亞細(xì)胞定位和組織分布。碳酸酐酶II;U&質(zhì)同功酶，而碳酸酐酶IV和XII是膜結(jié)合的。已鑒定出編碼CA-XII基因的不同亞型的兩個(gè)轉(zhuǎn)錄變體；變體1編碼較長(zhǎng)的亞型，而變體2與變體1轉(zhuǎn)錄物相比缺少一個(gè)內(nèi)編碼的外顯子，從而與亞型l相比缺少了ll個(gè)氨基酸的區(qū)段。全身施用碳酸酐酶抑制劑(CAI)有利于降低青光眼特征的升高的眼內(nèi)壓(IOP)。存在于晚狀突的同工酶抑制作用(磺胺易感同工酶CAII和CAIV)降低碳酸氫鹽和房水分泌的速率，從而導(dǎo)致IOP降低25-30%。然而，存在于眼外組織的多種CA同功酶的抑制作用產(chǎn)生副作用，包括四肢的麻痹和麻刺感、金屬味、抑郁癥、疲乏、不適、重量減輕、性欲減少、腸胃道刺激、代謝性酸中毒、腎結(jié)石和短暫性近視。GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)以登記號(hào)NM—000067提供CA2的DNA序列，其在"序列表"中被提供為SEQIDNO:l。SEQIDNO:l提供DNA的有義鏈序列，對(duì)應(yīng)于編碼CAII的mRNA(除了"1">^替代"11">5^)。CAII的編碼序列來(lái)自核苷酸66-848。與以上所迷的CA2mRNA序列相當(dāng)?shù)氖沁x擇性剪接體、等位形式、同工酶或其同源物。同源物指來(lái)源于其它哺乳動(dòng)物物種并且與SEQIDNO:l同源的CA2mRNA(即直系同源物)。與SEQIDNO:l有關(guān)的CA2核酸序列包括GenBank登記號(hào)M77181、X03251、BC011949、BC035424、CR536526、CR54187S、J03037、M36532、S69526和Y00339的那些序列。GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)以登記號(hào)NM—000717提供CA4的DNA序列，在"序列表，，中以SEQIDNO:2提供。SEQIDNO:2提供DNA的有義絲列，對(duì)應(yīng)于編碼CAIV的mRNA(除了"T"^5^替代了"U"堿基)。CAIV的編碼序列來(lái)自核苷酸47-985。與以上所述的CA2mRNA序列相當(dāng)?shù)氖沁x擇性剪接體、等位形式、同工酶或其同源物。同源物指來(lái)源于其它哺乳動(dòng)物物種并且與SEQIDNO:l同源的CA2mRNA(即直系同源物)。與SEQIDNO:2有關(guān)的CA4核酸序列包括GenBank登記號(hào)L10955、BC057792、BC069649、BC074768、CR541766和M83670的那些序列，GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)以登記號(hào)NM—001218提供CA12的DNA序列，在"序列表，，中以SEQIDNO:lOl提供。SEQIDNO:101提供DNA的有義鏈序列，對(duì)應(yīng)于編碼CAXII變體1的mRNA(除了"1">^替代了"U">5^)。CAXII變體1的編碼序列來(lái)自核苷酸157-1221。與以上所述的CA12變體1的mRNA序列相當(dāng)?shù)氖沁x擇性剪掩體、等位形式、同工酶或其同源物。同源物指來(lái)源于其它哺乳動(dòng)物物種并且與SEQIDNO:101同源的CA12mRNA(即直系同源物)。GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)為以登記號(hào)NM—206925提供CA12變體2的DNA序列，在"序列表，，中以SEQIDNO:134提供。SEQIDNO:134提供DNA的有義鏈序列，對(duì)應(yīng)于編碼CAXII變體2的mRNA(除了"T"堿基替代了"U"CAXII變體2的編碼序列來(lái)自核苷酸157-1188。與變體1相比，變體2缺少內(nèi)編碼的外顯子。與以上所述的CA12變體2mRNA序列相當(dāng)?shù)氖沁x擇性剪接體、等位形式、同工酶或其同源物。同源物指來(lái)源于其它哺乳動(dòng)物物種并且與SEQIDNO:134同源的CA12mRNA(即直系同源物)。腎上腺素能受體-pi和-p2mRNA(ADRB1和ADRB2):正如在ncbi.nlm.nih.gov上美國(guó)國(guó)立生物4支術(shù)信息中心的GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)所描述的，腎上腺素能受體(亞型al、a2、pi和(52)是介導(dǎo)荷爾蒙腎上腺素和神經(jīng)遞質(zhì)去甲腎上腺素的生理效應(yīng)的G蛋白偶聯(lián)受體的原型家族。GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)以登記號(hào)NM—000684提供ADRB1的DNA序列，在"序列表"中以SEQIDNO:3提供。SEQIDNO:3提供DNA的有義鏈序列，對(duì)應(yīng)于編碼pi-腎上腺素能受體的mRNA(除了"T"g替代了"U"堿基)。PI-腎上腺素能受體的編碼序列是核苷酸87-1520。與以上所述的ADRB1mRNA序列相當(dāng)?shù)氖沁x擇性剪接體、等位形式或其同源物。同源物是指來(lái)源于其它哺乳動(dòng)物物種并且與SEQIDNO:3同源的ADRB1mRNA(即直系同源物)。與SEQIDNO:3有關(guān)的ADRB1核酸序列包括GenBank登記號(hào)AF169006、AF169007、AY567837和J03019的那些序列。GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)以登記號(hào)NM—000024提供ADRB2的DNA序列，在"序列表"中以SEQIDNO:4提供。SEQIDNO:4提供DNA的有義鏈序列，對(duì)應(yīng)于編碼p2-腎上腺素能受體的mRNA(除了"T"堿基替代了"U")。P2-腎上腺素能受體的編碼序列是核苦酸220-1461。與以上所述的ADRB2mRNA序列相當(dāng)?shù)氖沁x擇性剪接體、等位形式或其同源物。同源物是指來(lái)源于其它哺乳動(dòng)物物種的并與SEQIDNO:4同源的ADRB2mRNA(即直系同源物)。與SEQIDNO:4有關(guān)的ADRB2核酸序列包括GenBank登記號(hào)AF022953、AF022954、AF022955、AF022956、AF169225、AF202305、AF203386、AY011291、J02960、Y00106、AY136741、BC012481、BC063486、BC073856、M15169和X04827的那些序列。乙酰膽堿酯酶剪接變體E4-E6和E4-E5(ACHE):正如在ncbi.nlm.nih.gov上美國(guó)國(guó)立生物技術(shù)信息中心的GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)所描述的，乙酰膽堿酯酶在神經(jīng)肌肉接頭和腦膽喊能突觸水解神經(jīng)遞質(zhì)乙酰膽堿，從而終止信號(hào)傳輸。同時(shí)也發(fā)現(xiàn)在紅血細(xì)胞膜上，其構(gòu)成了Yt血型抗原。乙酰膽堿酯酶以多種分子形式存在，其具有相似的催化性能，但在其寡聚體組裝和對(duì)細(xì)胞表面的細(xì)胞翁附模式上不同。它是由單個(gè)ACHE基因編碼的，且基因產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)多樣性來(lái)自選擇性的mRNA剪接以及催化亞基和結(jié)構(gòu)亞基的翻譯后締合。在腦、肌肉和其它組織中發(fā)現(xiàn)的乙酰膽堿酯酶的主要形式是親水型，該親水型與膠原性亞基或含脂的結(jié)構(gòu)亞基形成二硫鍵連接的寡聚體。另一方面，主要表達(dá)于紅細(xì)胞組織的選擇性剪接體在C-末端不同，且含有帶GPI-錨定位點(diǎn)的可切割的疏水肽。它通過(guò)翻譯后加入的磷酸肌醇(PI)的部分與膜締合。剪接變體E4-E6是主要的轉(zhuǎn)錄物并且產(chǎn)生于外顯子4至外顯子6的剪接。剪接變體E4-E5產(chǎn)生于外顯子4至外顯子5的選擇性剪接。GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)以登記號(hào)NM—015831提供ACHE剪接變體E4-E5的DNA序列，在"序列表，，中以SEQIDNO:5提供。SEQIDNO:5提供DNA的有義鏈序列，對(duì)應(yīng)于編碼乙酰膽堿酯酶E4-E5的mRNA(除了"T"堿基替代了"U"堿基)。乙酰膽堿酯酶E4-E5的編碼序列是核苷酸95-1948。與以上所述的ACHEmRNA序列相當(dāng)?shù)氖沁x擇性剪接體、等位形式或其同源物。同源物是指來(lái)源于其它哺乳動(dòng)物物種并與SEQIDNO:5同源的ACHEmRNA(即直系同源物)。與SEQIDNO:5有關(guān)的ACHE核^列包括GenBank登記號(hào)ACOl1895、AF002993、AF312(B2、AY750146、CH236956、L06484、L42812、S71129、AF334270、BC026315、BC036813、28M55040和NM一000665那些序列，GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)以登記號(hào)NM—000665提供ACHE剪接變體E4-E6的DNA序列，在"序列表，，中以SEQIDNO:123提供。SEQIDNO:123提供DNA的有義鏈序列，對(duì)應(yīng)于編碼乙酰膽堿酯酶E4-E6變體的mRNA(除了，，T，，堿基替代了"U")。乙酰膽堿酯酶E4-E6的編碼序列是核苷酸95-1939'與以上所述的ACHEmRNA序列相當(dāng)?shù)氖沁x擇性剪接體、等位形式或其同源物。同源物是指來(lái)源于其它哺乳動(dòng)物物種的并與SEQIDNO:123同源的ACHEmRNA(即直系同源物)。與SEQIDNO:123有關(guān)的ACHE核酸序列包括GenBank登記號(hào)NM—015831、AC011895、AF002993、AF312032、AY750146、CH236956、L06484、L42812、S71129、AF334270、BC026315、BC036813和M55040那些序列。Na+/K+-ATP酶a和pmRNA(ATPl-Al變體l、-Al變體2、-A2、-A3、-A4變體1、-A4變體2、-Bl變體1、-B1變體2、-B2和-B3):正如在GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)所描述，由所述基因編碼的蛋白質(zhì)屬于P-型陽(yáng)離子轉(zhuǎn)運(yùn)ATP酶家族，并屬于Na+/K+-ATP酶亞家族。Na+/K+-ATP酶是整合的膜蛋白，負(fù)責(zé)建立和維持用于鈉離子和鉀離子跨越質(zhì)膜的電化學(xué)梯度。這些梯度對(duì)于滲透調(diào)節(jié)、各種有機(jī)和無(wú)機(jī)分子的鈉偶聯(lián)的轉(zhuǎn)運(yùn)以及神經(jīng)和肌肉的電興奮性是必不可少的。該酶由兩個(gè)亞基組成，即大的催化亞基(a或A)和較小的糖蛋白亞基(p或B)。Na+/K+-ATP酶的催化亞基由多基因編碼。GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)以登記號(hào)NM—000701提供ATP1A1變體1的DNA序列，在"序列表"中以SEQIDNO:124提供。SEQIDNO:124提供DNA的有義,列，對(duì)應(yīng)于編碼Na+/K+-ATP酶亞基Al變體1的mRNA(除了"T"^J^替代了"U"堿基)。Na+/K+-ATP酶亞基Al變體1的編碼序列是核苷酸299-3370。與以上所述的ATP1A1變體1mRNA序列相當(dāng)?shù)氖沁x擇性剪接體、等位形式或其同源物。同源物是指來(lái)源于其它哺乳動(dòng)物物種并且與SEQIDNO:124同源的ATP1A1變體1mRNA(即直系同源物)。GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)以登記號(hào)NM_001001586提供ATP1A1變體2的DNA序列，在"序列表"中以SEQIDNO:125提供。SEQIDNO:125提供DNA的有義鏈序列，對(duì)應(yīng)于編碼Na+/K+-ATP酶亞基Al變體2的mRNA(除了，，T"堿基替代了"U"^&)。Na+/K+-ATP酶亞基Al變體2的編碼序列是核苷酸299-2344。與以上所述的ATP1A1變體2mRNA序列相當(dāng)?shù)氖沁x擇性剪接體、等位形式或其同源物。同源物是指來(lái)源于其它哺乳動(dòng)物物種并且與SEQIDNO:125同源的ATP1A1變體2mRNA(即直系同源物)。GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)以登記號(hào)NM—000702提供ATP1A2的DNA序列，在"序列表，，中以SEQIDNO:6提供。SEQIDNO:6提供DNA的有義M^列，對(duì)應(yīng)于編碼Na+/K+-ATP酶A2亞基的mRNA(除了，，T"堿基替代了"U">5^J0。Na+/K+-ATP酶A2亞基的編碼序列^1核苷酸105-3167。與以上所述的ATP1A2mRNA序列相當(dāng)?shù)氖沁x擇性剪接體、等位形式或其同源物。同源物是指來(lái)源于其它哺乳動(dòng)物物種并且與SEQIDNO:6同源的ATP1A2mRNA(即直系同源物)。與SEQIDNO:6有關(guān)的ATP1A2核,列包括GenBank登記號(hào)J05096、M27578、AB018321、AK091617、AK124581、AK126573、AL831991、AL831997、BC013680、BC047533、BC052271、M16795和Y07494的那些序列。GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)以登記號(hào)NM—152296提供ATP1A3的DNA序列，在"序列表，，中以SEQIDNO:126提供。SEQIDNO:126提供DNA的有義鏈序列，對(duì)應(yīng)于編碼Na+/K+-ATP酶A3亞基的mRNA(除了，，T"堿基替代了"U"堿基)。3+/1<:+-人1酶A3亞基的編碼序列是核苷酸155-3196。與以上所迷的ATP1A3mRNA序列相當(dāng)?shù)氖沁x擇性剪接體、等位形式或其同源物。同源物是指來(lái)源于其它哺乳動(dòng)物物種并且與SEQIDNO:126同源的ATP1A3mRNA(即直系同源物)。GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)以登記號(hào)NM—144699提供ATP1A4變體1的DNA序列，在"序列表"中以SEQIDNO:127提供。SEQIDNO:127提供DNA的有義鏈序列，對(duì)應(yīng)于編碼Na+/K+-ATP酶A4亞基變體1的mRNA(除30了"1">$^替代了"11"堿基)。Na+/K+-ATP酶A4亞基變體1的編碼序列是核普酸469-3558。與以上所述的ATP1A4變體1mRNA序列相當(dāng)?shù)氖沁x擇性剪接體、等位形式或其同源物。同源物是指來(lái)源于其它哺乳動(dòng)物物種并且與SEQIDNO:127同源的ATP1A4變體1mRNA(即直系同源物)。GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)以登記號(hào)NM—01001734提供ATP1A4變體2的DNA序列，在"序列表，，中以SEQIDNO:128提供。SEQIDNO:128提供DNA的有義鏈序列，對(duì)應(yīng)于編碼Na+/K+-ATP酶A4亞基變體2的mRNA(除了，，T，，^^替代了"U"堿基)。Na+/K+-ATP酶A4亞基變體2的編碼序列是核普酸111-608。與以上所述的ATP1A4變體2mRNA序列相當(dāng)?shù)氖沁x擇性剪接體、等位形式或其同源物。同源物是指來(lái)源于其它哺乳動(dòng)物物種并且與SEQIDNO:128同源的ATP1A4變體2mRNA(即直系同源物)。GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)以登記號(hào)NM—001677提供ATP1B1變體1的DNA序列，在"序列表，，中以SEQIDNO:129提供。SEQIDNO:129提供DNA的有義鏈序列，對(duì)應(yīng)于編碼Na+/K+-ATP酶Bl亞基變體1的mRNA(除了，，T，，4^替代了，，U，，磁J^)。Na+/K+-ATP酶Bl亞基變體1的編碼序列是核苷酸122-1033。與以上所述的ATP1B1變體1mRNA序列相當(dāng)?shù)氖沁x擇性剪接體、等位形式或其同源物。同源物是指來(lái)源于其它哺乳動(dòng)物物種并且與SEQIDNO:129同源的ATP1B1變體1mRNA(即直系同源物)。GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)以登記號(hào)NM—001001787提供ATP1B1變體2的DNA序列，在"序列表，，中以SEQIDNO:130提供。SEQIDNO:130提供DNA的有義^^列，對(duì)應(yīng)于編碼Na+/K"-ATP酶Bl亞基變體2的mRNA(除了"T，，^^替代了"U">^J0。Na+/K+-ATP酶Bl亞基變體2的編碼序列是核苷酸122-1027。與以上所述的ATP1B1變體2mRNA序列相當(dāng)?shù)氖沁x擇性剪接體、等位形式或其同源物。同源物是指來(lái)源于其它哺乳動(dòng)物物種并且與SEQID31NO:130同源的ATP1B1變體2mRNA(即直系同源物)。GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)以登記號(hào)NM_001678提供ATP1B2的DNA序列，在"序列表，，中以SEQIDNO:131提供。SEQIDNO:131提供DNA的有義鏈序列，對(duì)應(yīng)于編碼Na+/K+-ATP酶B2亞基的mRNA(除了"T，M5^替代了"U"堿基)。Na+/K+-ATP酶B2亞基的編碼序列是核苷酸584-1456。與以上所述的ATP1B2mRNA序列相當(dāng)?shù)氖沁x擇性剪掩體、等位形式或其同源物。同源物是指來(lái)源于其它哺乳動(dòng)物物種并且與SEQIDNO:131同源的ATP1B2mRNA(即直系同源物)。GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)以登記號(hào)NM_001679提供ATP1B3的DNA序列，在"序列表"中以SEQIDNO:132提供。SEQIDNO:132提供DNA的有義鏈序列，對(duì)應(yīng)于編碼Na+/K+-ATP酶B3亞基的mRNA(除了"T，，堿基替代了，，U，，礎(chǔ)J^)。Na+/K+-ATP酶B3亞基的編碼序列是核苷酸175-1014。與以上所述的ATP1B3mRNA序列相當(dāng)?shù)氖沁x擇性剪接體、等位形式或其同源物。同源物是指來(lái)源于其它哺乳動(dòng)物物種并且與SEQIDNO:132同源的ATP1B3mRNA(即直系同源物)。Na-K-2C1協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(SLC12A1和SLC12A2):鈉-鉀-氯化物協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(Na-K-2Cl協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白或NKCC)便于Na+、K+和CT離子的偶聯(lián)協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)i^越質(zhì)膜。有兩種亞型NKCC1和NKCC2。NKCC1在包括眼睛的大多數(shù)組織中表達(dá)。相比之下，NKCC2主要在腎中表達(dá)，然而，有證據(jù)證明這一亞型在眼睛中也有較低水平的表達(dá)。NKCC1由SLC12A2基因(溶質(zhì)載體家族12，成員2)編碼且NKCC2由SLC12A1基因編碼。小梁細(xì)胞具有有力的Na-K-2C1協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白。該協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的活性由神經(jīng)遞質(zhì)和激素調(diào)節(jié)，如去甲腎上腺素降低協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)活性，或血管加壓素增強(qiáng)協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)活性。GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)以躬己號(hào)NM—000338提供SLC12A1的DNA序列，在"序列表，，中以SEQIDNO:7提供。SEQIDNO:7提供DNA的有義妙列，對(duì)應(yīng)于編碼Na-K-2C1協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白NKCC2的mRNA(除了"T，M5^替代了"U，，4^i0。Na-K-2C1協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白NKCC2的編碼序列是核苷酸20-3319。與以上所述的Na-K-2C1NKCC2協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白mRNA序列相當(dāng)?shù)氖沁x擇性剪接體、等位形式或其同源物.同源物指來(lái)源于其它哺乳動(dòng)物物種并且與SEQIDNO:7同源的Na-K-2C1協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白NKCC2mRNA(即直系同源物)。與SEQIDNO:7有關(guān)的SLC12A1核斷列包括GenBank登記號(hào)AJ005332、AJ005333、AB032525、AB032527、BC040138、BX647067、BX647484和U58130的那些序列。GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)以登記號(hào)NM_001046提供SLC12A2的DNA序列，在"序列表，，中以SEQIDNO:133提供。SEQIDNO:133提供DNA的有義鏈序列，對(duì)應(yīng)于編碼Na-K-2Cl協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白NKCC1的mRNA(除了"T"堿基替代了"U")。Na-K-2C1協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白NKCC1的編碼序列是核苷酸165-3803,與以上所述的Na-K-2C1NKCC1協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白mRNA序列相當(dāng)?shù)氖沁x擇性剪接體、等位形式或其同源物。同源物指來(lái)源于其它哺乳動(dòng)物物種并且與SEQIDNO:133同源的Na-K-2C1協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白NKCC1mRNA(即直系同源物)。mRNA的減弱表達(dá)這里使用的短語(yǔ)"mRNA的減弱表達(dá)"，意指施用或表達(dá)一定量的千擾RNA(如siRNA)，通過(guò)切割mRNA或直接抑制翻譯來(lái)減少靶標(biāo)mRNA翻譯成蛋白質(zhì)，靶標(biāo)mRNA或相應(yīng)蛋白質(zhì)的表達(dá)的降低通常稱為"敲除"，并且是相對(duì)于所報(bào)道的施用或表達(dá)無(wú)靶標(biāo)對(duì)照RNA(如無(wú)耙標(biāo)對(duì)照siRNA)后的水平。這里的實(shí)施方案考慮到包括并在50%-100%之間的表達(dá)量的敲除。然而，對(duì)于本發(fā)明的目的而言，不必要達(dá)到這樣的敲除水平。在一個(gè)實(shí)施方案中，施用靶向高眼壓耙標(biāo)之一的單獨(dú)的千擾RNA以降低IOP。在其它實(shí)施方案中，施用靶向相同的高眼壓耙標(biāo)(如CA2)的兩個(gè)或多個(gè)千擾RNA以降低IOP。還有一些實(shí)施方案中，施用靼向多個(gè)高眼壓靶標(biāo)(如CA2和ADRB2)的兩個(gè)或多個(gè)干擾RNA以降低IOP。通常通過(guò)使用定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(qPCR)擴(kuò)增測(cè)定mRNA水平，或免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)測(cè)定蛋白質(zhì)水平來(lái)評(píng)估敲除。蛋白質(zhì)水平的分析為mRNA切割和翻譯抑制兩者提供了評(píng)估。測(cè)定敲除的其它技術(shù)包括RNA溶液雜交、核酸S^護(hù)、northern雜交、用基因芯片的基因表達(dá)監(jiān)控、抗體結(jié)合、放射性免疫測(cè)定以及熒光激活的細(xì)胞分析。通過(guò)觀察青光眼癥狀的改善，例如眼內(nèi)壓的改善、視野喪失的改善或視盤變化的改善，推斷在人體或哺乳動(dòng)物中也存在這里所述的靶標(biāo)的抑制作用。本發(fā)明實(shí)施方案中的干擾RNA似乎以催化方式切割耙標(biāo)mRNA，即干擾RNA能夠在亞化學(xué)計(jì)量上對(duì)乾標(biāo)mRNA起抑制作用。與反義療法相比，在這樣的切割條件下提供療效所需要的干擾RNA明顯減少。干擾RNA:在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，干擾RNA(如siRNA)有有義鏈和反義鏈，并且有義鏈和反義鏈包含至少19個(gè)核苷酸的至少近乎完全連續(xù)互補(bǔ)的區(qū)域。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，干擾RNA包含至少13、14、15、16、17或18個(gè)連續(xù)核苷酸的區(qū)域，分別與mRNA中相應(yīng)靶標(biāo)序列的3，端次末端的13、14、15、16、17或18個(gè)核苷酸有一定百分比的序列互補(bǔ)性或序列同一性。干擾RNA每條鏈的長(zhǎng)度包含19-49個(gè)核苷酸，還可能包含19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48或49個(gè)核普酸的長(zhǎng)度。siRNA的反義鏈?zhǔn)莝iRNA的活性導(dǎo)向劑，因?yàn)榉戳x鏈被摻入RISC中，從而使RISC識(shí)別與反義siRNA鏈至少有部分互補(bǔ)的耙標(biāo)mRNA以用于切割或抑制翻譯。在本發(fā)明中，通過(guò)使用可獲得的設(shè)計(jì)工具選擇耙標(biāo)mRNA序列中的干擾RNA靶標(biāo)序列(如siRNA把標(biāo)序列)。通過(guò)轉(zhuǎn)染表達(dá)乾標(biāo)mRNA的細(xì)胞iM^驗(yàn)對(duì)應(yīng)于這些靼標(biāo)序列的干擾RNA，隨后如上所述通過(guò)敲除來(lái)評(píng)估。選擇產(chǎn)生50%-100%表達(dá)的敲除的干擾RNA用作進(jìn)一步分析。選擇siRNA的靶標(biāo)序列的技術(shù)由Tuschl，T.等人，"ThesiRNAUser34Guide",修訂于2004年5月6日提供，可獲于Rockefeller大學(xué)網(wǎng)站；也可由Ambion公司的Ambion網(wǎng)站上"siRNADesignGuidelines"中的TechnicalBulletin#506提供；也可以通過(guò)其它基于網(wǎng)絡(luò)的設(shè)計(jì)工具，例如，Invitrogen、Dharmacon、IntegratedDNATechnologies、Genscript或Proligo網(wǎng)站獲知，起始搜索參數(shù)可包括介于35%-55%之間的G/C含量和19-27個(gè)核普酸之間的siRNA長(zhǎng)度。靶標(biāo)序列可以定位于mRNA的編碼區(qū)或定位于mRNA的5'或3'端非翻譯區(qū)。在一個(gè)實(shí)施方案中，碳酸酐酶II的19個(gè)核苷酸的DNA耙標(biāo)序列存在于SEQIDNO:l的核苷酸232-250中5'-CCCTGAGGATCCTCAACAA-3'SEQIDNO:8。用作靶向SEQIDNO:8的相應(yīng)mRNA序列并且具有21個(gè)核苷酸鏈和2-核苷酸3'突出端的本發(fā)明的siRNA是5，-CCCUGAGGAUCCUCAACAA跳3，SEQIDNO:93-NNGGGACUCCUAGGAGUUGUU-5'SEQIDNO:10。每個(gè)"N，，殘基可以是任何核苷酸(A、C、G、U、T)或修飾的核苷酸。3'末端可以具有的"N，，殘基數(shù)目在1、2、3、4、5和6之間并包括它們。任一^Ji的"N"殘基可以相同(如UU、AA、CC、GG或TT)也可以不同(如AC、AG、AU、CA、CG、CU、GA、GC、GU、UA、UC或UG)。3'突出端可以相同也可以不同。在一個(gè)實(shí)施方案中，兩^^都有3，UU突出。耙向SEQIDNO:8的相應(yīng)mRNA序列并且具有21個(gè)核苷酸鏈和在每M上有3'UU突出端的本發(fā)明的siRNA是5'畫CCCUGAGGAUCCUCAACAAUU畫3'SEQIDNO:ll3'-UUGGGACUCCUAGGAGUUGUU-5'SEQIDNO:12。干擾RNA也可能有5'核苷酸的突出端或其可能有平末端。靶向SEQIDNO:8的相應(yīng)mRNA序列并且具有19個(gè)核苷酸鏈和平末端的本發(fā)明的siRNA是5，-CCCUGAGGAUCCUCAACAA-3，SEQIDNO:7223國(guó)GGGACUCCUAGGAGUUGUU畫5'SEQIDNO:723.雙鏈干擾RNA(如siRNA)的鏈可以連結(jié)形成一個(gè)發(fā)夾或莖環(huán)結(jié)構(gòu)(如shRNA)。靶向SEQIDNO:8的相應(yīng)mRNA序列并且具有19個(gè)>5^對(duì)的雙鏈莖區(qū)域和3'UU突出端的本發(fā)明的shRNA是/\/HUH本領(lǐng)域普通技術(shù)人員/^PN是核苷酸A、T、C、G、U或其修飾形式。環(huán)中核苷酸N的數(shù)目在3-23或5-15或7-13或4-9或9-11之間并包括它們，或者核苷酸N的數(shù)目是9。環(huán)中的一些核苷酸可能涉及與環(huán)中其他核苷酸的堿基對(duì)相互作用?？捎脕?lái)形成環(huán)的寡核苷酸序列的實(shí)例包括5，畫UUCAAGAGA-3'(Brummelkamp，T.R.等人，(2002)Science296:550)和5'誦UUUGUGUAG誦3，(Castanotto，D.等人，(2002)RNA8:1454)。本領(lǐng)域技術(shù)人員公認(rèn)產(chǎn)生的單鏈寡核苷酸形成莖環(huán)或發(fā)夾結(jié)構(gòu)，該結(jié)構(gòu)包含能與RNAi系統(tǒng)相互作用的雙鏈區(qū)域。上面確定的siRNA靶標(biāo)序列能在3'末端延伸以利于dicer底物27聚體雙螺旋的設(shè)計(jì)。通過(guò)6個(gè)核苷酸在碳酸酐酶I1DNA序列(SEQIDNO:l)中識(shí)別的19個(gè)核苷酸的DNA靶標(biāo)序列(SEQIDNO:8)的延伸，得到25個(gè)核苷酸的DNA靶標(biāo)序列，其存在于SEQIDNO:1中的核苷酸232-256:5'國(guó)CCCTGAGGATCCTCAACAATGGTCA誦3，SEQIDNO:724。靶向SEQIDNO:724的相應(yīng)mRNA序列的本發(fā)明的dicer底物27聚體雙螺狄5國(guó)CCCUGAGGAUCCUAACAAUGGUCA-3，SEQIDNO:718S'-UUGGGACUCCUAGGAGUUGUIIACCAGU-S'SEQIDNO:719。有義鏈3'末端的兩個(gè)核苷酸(即SEQIDNO:718的CA核苦酸)可能是用于提高的加工的脫氧核苷酸。正如在這里提供的，從19-21個(gè)核苷酸耙標(biāo)序列的dicer底物"聚體雙螺旋的設(shè)計(jì)在整合DNA技術(shù)(IDT)網(wǎng)站和Kim，D.-H.等人(February，2005)NatureBiotechnology23:2;222-226中有進(jìn)一步的討論。當(dāng)通過(guò)化學(xué)合成產(chǎn)生干擾RNA時(shí)，在一條或兩^(如果存在)的5'末端核苷酸5'位置的磷酸化作用能增強(qiáng)結(jié)合的RKC復(fù)合體的siRNA有效性和特異性，但是因?yàn)榱姿峄饔媚茉诩?xì)胞內(nèi)發(fā)生，所以并不需要進(jìn)行磷酸化。表1列出CA2、CA4以及CA12變體1和變體2的DNA序列(分別是SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:101和SEQIDNO:134)中的siRNA靶標(biāo)序列的實(shí)例，以如上闡明的方式從其設(shè)計(jì)本發(fā)明的siRNA。CA2、CA4以及CA12變體l和變體2分別編碼碳酸酐酶n、IV以及XII變體1和2。表1.CA2、CA4和CA12的siRNA乾標(biāo)序列<table>tableseeoriginaldocumentpage37</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage38</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage39</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage40</column></row><table>TGCCATTAGCATGCCTCAT2973216GCCATTA(3CATGCCTCATG2974217TAGCATGCCTCATGCATCA29792182993219表2列出ADRB1和ADRB2DNA序列(分別是SEQIDNO:3和SEQIDNO:4)中的siRNA靶標(biāo)序列的實(shí)例，按如上闡明的方式從其中設(shè)計(jì)本發(fā)明的siRNA。如上所述，ADRBl和ADRB2分別編碼卩l(xiāng)-和p2-腎上腺素能受體。表2.ADRB1和ADRB2的siRNA把標(biāo)序列M)RB1乾標(biāo)序列起始核苷酸位置，參考SEQIDNO:3SEQID恥TCCTTCTTCTGCGAGCTGT46833TCGAGACCCTGTGTGTCAT52334GCATCATGGCCTTCGTGTA79935GA&CGAG6AGATCTGTGTT156336ACGAG6AGATCTGTGTTTA15S537GGAGATCTGTGTTTACTTA156938GATAGCA(3GTGAACTCGAA159339CCCACAATCCTCGTCTGAA161340CCACAATCCTCOTCTGAAT161441TCTGAATCATCCGAGGCAA162642GCAATGTGCTGGTGATCGT310220TGATCOTGGCCATCGCCAA322221AAGTGCTGCGACTTCGTCA726222CGTCCGTAGTCTCCTTCTA769223CCGTA(3TCTCCTTCTACGT772224ATCATGGCCTTCGTGTACC801225TCATG(3CCTTCGTOTACCT802226CCTCG(3AATCCAAGGTGTA1501227TOTGTTTACTTAA(3ACCGA1576228GTGTTTACTTAAGACCGAT1577229GTTTACTTAAGACCGATAG1579230TTTACTTAAGACCGATAGC1580231TTACTTAA說(shuō)CCGATAGCA1581232TAAGACCGATAGCAGGT說(shuō)1586233ACCGATA(3CAGGTGAACTC1590234C(3ATAGCA66TGAACTCGA1592235ATAGCAGGTGAACTCGAAG1594236CACAATCCTCGTCTGAATC161523741<table>tableseeoriginaldocumentpage42</column></row><table>ATGTATCTACCTCACTATT1758271CCTCACTATTCAA(3TATTA1767272TAATATATTGCTGCTGOTA1790273AATATATTGCTGCTCSGTAA1791274ATATATTGCTGCTGGTAAT1792275TATATT(3CT(3CTGOTAATT1793276CTGGTAATTTGTATCTGAA1803277GAOTATCTCGGACCTTTCA1861278C郞ACCTTTCAGCTGTGAA1869279CGAGCAAAGGTCTAAAGTT197128019722811979282表3列出剪接變體E4-E5和E4-E6的ACHEDNA序列(分別是SEQIDNO:S和SEQIDNO:lM)中siRNA靶標(biāo)序列的實(shí)例，按如上闡明的方式從其中設(shè)計(jì)本發(fā)明的siRNA.如上所述，ACHE編碼乙酰膽堿酯酶。表3.ACHE的siRNA乾標(biāo)序列ACHEE4-E5乾標(biāo)序列起始核苷酸位置，參考SEQIDBTOs5SE(2IDNOsCCAGAGTGTCTGCTACCAA38253GCTACCAATATGTGGACAC39354CCAATATGTGGACACCCTA39755GCTGOTGTCCATGAACTAC62256TCATCAACGCGGGAGACTT113157GGTCTACGCCTACOTCTTT145958153059225160288561GCTGCAAATAAACTGTTAC288662AGTGTCT(3CTACCAATATG386283A說(shuō)CAAC6AGTCTCTCATC1231284GGCTGTGGTCCTGCATTAC1315285CTTCCTCCTCAAACCGAGA2047286TCCTCCTCAAACCGAGAGA2049287CCTCAAACCGAGAGACTCA2053288TCAAACCGAGAGACTCACA2055289AAACCGAGAGACTCACACT2057290CCACGCCTTTGTTOTTTGA2125291CACGCCTTTGTTGTTTGAA2126292ACOCCTTTGTTOTTTGA&T212729343GGCTATAACG6TCAACCAT2250294TATAACGGTCAACCATTTC2253295CGGTCAACCATTTCT(3TCT2258296GTCAACCATTTCTGTCTCT2260297CCOTCTTCCGGTCATTCTT2318298CCTCTCGTCTTTCGCACAT2395299TCTCOTCTTTCGCACATTC2397300TTTC(3CACATTCTCCT(3AT2404301TTCGCACATTCTCCTGATC2405302AGAACCAGTTCGACCACTA2643303AACCAGTTCGACCACTACA2645304CTGCAAATAAACTGTTACA2887305ACHEE4-E5和E4-E6乾標(biāo)序歹'J起始核苷酸位置，參考SEQID恥5SEQIDNOsTAGACGCTACAACCTTCCA366306CGCTACAACCTTCCAGAGT370307AGAGTGTCTGCTACCAATA384308GAGTGTCT(3CTACCAATAT385309CTGTCCTCGTCTGGATCTA525310ATGGCCGCTTCTTG6TACA588311CGACATCAGTGACGCTOTT768312GCACGTGCTGCCTCAAGAA1045313CAC6TGCTGCCTCAAGAAA1046314GAAAGCGTCTTCCG(3TTCT1061315TGTGGTAGATGGAGACTTC1090316GACAAC(3AGTCTCTCATCA1232317AGGCTGTGGTCCTGCATTA13"318GCTGTGGTCCTGCATTACA1316319GTCTACGCCTACGTCTTTG1460320TCTACGCCTACGTCTTTGA1461321CTACGCCTACGTCTTTGAA1462322CGGCTACGAGATCGAGTTC1528323CAGCGACTGATGCGATACT1607324郞CTCAGCAGTACGTTAGT1705325ACTACGTTAGTCTGGACCT1713326ACHEE4誦E6^lfc沖示序歹iJ起始核苷酸位置，參考SEQIDNO:123SEQID恥sACATGGTGCACTG(3AAC!AA1875327AGAACCAGTTCGACCACTA1890328GAACCAGTTCGACCACTAC1891329GGCTATAACACAGACGAGC201133044GCTATAAC&CAGACGAGCC2012331GCTGCAAATAAACTGTTAC21333322134333表4列出Na+/K+-ATP酶A和B亞基DNA序列(ATP1Al變體1，SEQIDNO:124;ATP1A1變體2，SEQIDNO:125;ATP1A2，SEQIDNO:6;ATP1A3,SEQIDNO:126;ATP1A4變體1，SEQIDNO:127;ATP1A4變體2,SEQIDNO:128;ATP1B1變體1，SEQIDNO:129;ATP1B1變體2,SEQIDNO:130;ATP1B2，SEQIDNO:131和ATP1B3,SEQIDNO:132)中siRNA靶標(biāo)序列的實(shí)例，按如上闡明的方式從其中i更計(jì)本發(fā)明的siRNA'表4.ATP1A和ATP1B的siRNA耙標(biāo)序列ATP1A1變體1靶標(biāo)序列起始核苷酸位置，參考SEQIDNO:124SEQID恥s2208334TGCCAAGGCCTGCGTAGTA2275335TAAAGGACATGACCTCCGA2307336AGCAAGCTGCT(3ACATGAT252S337ACAT(3ATTCTTCTGGATGA2538338GTC(3TCTGATCTTTGATAA2592339CTTATACCTTAACCAGTAA.2628340GGATCAACGATGTGGAAGA2979341ACGATGTGGAAGACAGCTA2985342CC說(shuō)CTTGGTCATCTCTAA3093343TA66AAAGCACC6CAGCAT3474344AGAC(3TCCTGGAATGAAGC3504345GACGTCCTGGAATGAA6CA3505346ACGTCCTGGAATGAAGCAT35063473518348ATP1A1變體1和變體2的共有靶標(biāo)序列起始核香酸位置，養(yǎng)考SEQIDNO:124SEQID恥TTCAGAACAAGGTGATAAA343349442350GGTGCTATCAGCCGTTGTA700351TCAGCCGTTGTAATC&TAA707352811353CAGAATCATATCTGCAA&T907354CACGTGGTATTCTTGTCTA1059355CTGCTTAGTGAAGAACTTA13"35645<table>tableseeoriginaldocumentpage46</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage47</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage48</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage49</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage50</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage51</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage52</column></row><table>TAATATGCCGTGCTATGTA1325639AATATGCCGTGCTATGSTAA1326"0ATATGCCGTGCTATGTAAA1327641GCCGTGCTATGTAAATATT1331642T(3CAA(3AAAT(3TGGTATGT1437643ATGCTGAATTA(3CCTCGAT154864415716451785646GCAGACTGTG說(shuō)CTGTAAT1786647CA說(shuō)CT(3TGGACT(3TAATA1787648表5列出SLC12A1和SLC12A2的DNA序列(分別是SEQIDN0:7和SEQIDNO:13"中siRNA靶標(biāo)序列的例子，按如上闡明的方式從其中設(shè)計(jì)本發(fā)明的siRNA。如上面所述，SLC12A1和SLC12A2分別編碼Na-K-2C1協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白NKCC2和NKCC1。表5.SLC12A1的siRNA把標(biāo)序列Sl!C12Alfe標(biāo)序歹'J起始核苷酸位置，參考SEQIDNO:7SEQIDNOsCCACCATAGTAACGACAAT67573GGA2VTGGAATGGGA6GCAA974746GGATGAACTGCAAT郞TT137375CCATGCCTCTTATGCCAAA178076CCT(3CTCTCCTGGACATAA210277GCATCTGCTGTGAAGTCTT2151786CCTCAG6CTTA(3GAAGAA23157966AAGCGACTATCAAAGAT2542806CTGGCAA(3TT6AACATTA2S0981GCAAGAAAG郞ATCCATAT319782TAATACCAATC(3CTTTCAA67649ACCAATCGCTTTCAAOTTA71650CAATC(3CTTTCAAGTTAGT73651ATA6AGTACTATCGTAACA353652CCASCCTGCTTGAGATTC&405653CTGTAGTAGATCTACTTAA8S4S54ACCAATGACATCCGGATTA911655CCAAT說(shuō)CATCCGGATTAT912656CAATGACATCCG(3ATTATA913657GGCTATGACTTCTCAA(3AT1409S58GCCTCATATGCACTTATTA1748659AGACCTGCGTATG6AATTT1811S6053<table>tableseeoriginaldocumentpage54</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage55</column></row><table>如上面的例子所述，本領(lǐng)域任一技術(shù)人員能夠使用表l-5中提供的靶標(biāo)序列信息來(lái)設(shè)計(jì)干擾RNA，該千擾RNA具有比表1-5中提供的序列更短或更長(zhǎng)的長(zhǎng)度，通過(guò)參考在SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:101、SEQIDNO:123、SEQIDNO:124、SEQIDNO:125、SEQIDNO:126、SEQIDNO:127、SEQIDNO:128、SEQIDNO:129、SEQIDNO:130、SEQIDNO:131、SEQIDNO:132、SEQIDNO:133或SEQIDNO:134中的序列位置，以及對(duì)分別與SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:101、SEQIDNO:123、SEQIDNO:124、SEQIDNO:125、SEQIDNO:126、SEQIDNO:127、SEQIDNO:128、SEQIDNO:129、SEQIDNO:130、SEQIDNO:131、SEQIDNO:132、SEQIDNO:133或SEQIDNO:134互補(bǔ)或近似互補(bǔ)的核苷酸的增加或缺失而實(shí)現(xiàn)。由siRNA和其他形式的干擾RNA引導(dǎo)的耙標(biāo)RNA切割反應(yīng)是高度序列特異的。通常，這里所述的用作抑制mRNA的siRNA實(shí)施方案是siRNA,其包含在序列上與耙標(biāo)mRNA的部分一致的有義核苷酸鏈和與耙標(biāo)mRNA的部分完全互補(bǔ)的反義核苷酸鏈。然而，對(duì)于實(shí)施本發(fā)明不需要反義siRNA鏈和耙標(biāo)mRNA之間或反義siRNA鏈與有義siRNA鏈之間100%的序列互補(bǔ)。因此，舉例而言，本發(fā)明允許由于基因突變、菌抹多態(tài)性或進(jìn)化趨異而可以預(yù)計(jì)的序列變化。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，siRNA的反義鏈與乾標(biāo)mRNA具有至少19個(gè)核苷酸的至少近乎完全連續(xù)互補(bǔ)。這里使用的"近乎完全"意指siRNA的反義鏈與耙標(biāo)mRNA的至少部分是"基本互補(bǔ)的，，，并且siRNA的有義鏈與靶標(biāo)mRNA的至少部分是"基本一致的"。如本領(lǐng)域所有普通技術(shù)人員公知，"同一性"是指通過(guò)匹配序列之間核苷酸的順序和特征來(lái)確定核苷酸序列之間的序列關(guān)聯(lián)程度。在一個(gè)實(shí)施方案中，siRNA的反義鏈與粑標(biāo)mRNA序列具有80%和80%-100%之間的互補(bǔ)，例如，85%、90%或95%的互補(bǔ)，這被認(rèn)為是近乎完全的互補(bǔ)并且可以在本發(fā)明中應(yīng)用。"完全的"連續(xù)互補(bǔ)是指相鄰^&對(duì)的標(biāo)準(zhǔn)Watson-Crick戚基配對(duì)。"至少近乎完全的"連續(xù)互補(bǔ)包括在這里用到的"完全的，，互補(bǔ)。設(shè)計(jì)用于測(cè)定同一性或互補(bǔ)性的計(jì)算機(jī)方法來(lái)確定核苷酸序列的最大匹配程度，例如BLASTN(Altschul，S.F,等人(19卯)J.Mol.Biol.215:403-410)。術(shù)語(yǔ)"同一性百分?jǐn)?shù)"描述連續(xù)核苷酸在第一個(gè)核酸分子中的百分比，該術(shù)語(yǔ)也描述一系列相同長(zhǎng)度的連續(xù)核苷酸在第二個(gè)核酸分子中所占的百分比。術(shù)語(yǔ)"互補(bǔ)百分?jǐn)?shù)"描述連續(xù)核苷酸在第一個(gè)核酸分子中的百分比，該核酸分子能按Watson-Crick原則與第二個(gè)核酸分子中一系列連續(xù)核苷酸進(jìn)行威基配對(duì)。乾標(biāo)mRNA(有義鏈)和siRNA中的一#^(有義鏈)之間的關(guān)系就是同一性。siRNA的有義鏈，如果存在，也被稱為傳遞鏈。耙標(biāo)mRNA(有義鏈)和siRNA的另一^^(反義鏈)之間的關(guān)系就是互補(bǔ)。siRNA的反義鏈也被稱為引導(dǎo)鏈。以5'到3'的方向書寫的核酸序列的次末端^是倒數(shù)第二個(gè)威基，即3'端威基的相鄰?fù)?。?'到3'的方向書寫的核酸序列的次末端13個(gè)g是3，端^5lJ^目鄰的最后13個(gè)堿基序列，且不包括3'端堿基。相似地，以5'到3'的方向書寫的核酸序列的次末端14、15、16、17或18個(gè)>5^分別是3'端堿勤目鄰的最后14、15、16、17或18個(gè)磁J^序列，且不包括3'端短語(yǔ)"與任何一個(gè)(序列標(biāo)識(shí)符)的3'末端次末端的13個(gè)核苷酸具有至少90%序列互補(bǔ)性或至少卯％序列同一性的至少^^有13個(gè)連續(xù)核苷酸的區(qū)域"允許一個(gè)核苷酸取代。兩個(gè)核苷酸的取代(即11/13=85%同一性/互補(bǔ)性)不包括在這樣的短語(yǔ)中。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，連續(xù)核苷酸區(qū)域是至少14個(gè)連續(xù)核苷酸的區(qū)域，該區(qū)域與每個(gè)序列標(biāo)識(shí)符識(shí)別的序列3'末端次末端的14個(gè)核苷酸具有至少85%序列互補(bǔ)性或至少85%序列同一性。兩個(gè)核普酸的取^R(即12/14=86%同一性/互補(bǔ)性)不包括在這樣的短語(yǔ)中。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，連續(xù)核苷酸的區(qū)域是至少15、16、17或18個(gè)連續(xù)核苷酸的區(qū)域，該區(qū)域與序列標(biāo)識(shí)符的序列3，末端次末端的14個(gè)核苷酸具有至少80%序列互補(bǔ)性或至少80%序列同一性。三個(gè)核苷酸的取代不包括在這樣的短語(yǔ)中。mRNA中對(duì)應(yīng)于SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:101、SEQIDNO:123、SEQIDNO:124、SEQIDNO:125、SEQIDNO:126、SEQIDNO:127、SEQIDNO:128、SEQIDNO:129、SEQIDNO:130、SEQIDNO:131、SEQIDNO:132、SEQIDNO:133或SEQIDNO:134的耙標(biāo)序列可能在mRNA的5'或3'端非翻譯區(qū)以及在mRNA的編碼區(qū)。雙鏈干擾RNA的一條或兩條鏈可能含有1至6個(gè)核苷酸的3'突出端，該3'突出端可能是核糖核苷酸或脫氧核糖核苷酸或其混合物。突出端的核苷酸不是堿基配對(duì)的。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，干擾RNA包括TT或UU的3'突出端。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，干擾RNA包括至少一個(gè)平末端。該末端通常含有5'磷酸基或3'羥基，在其他實(shí)施方案中，反義鏈具有5'磷酸基，而有義鏈含有5'羥基。在另外一些實(shí)施方案中，該末端通過(guò)共價(jià)加入其他分子或功能團(tuán)而被進(jìn)一步修飾。雙鏈siRNA的有義鏈和反義鏈可能是如上所述的兩條單鏈的雙螺旋形式，也可能是單獨(dú)的分子，其中互補(bǔ)區(qū)域是威基配對(duì)的并通過(guò)發(fā)夾環(huán)共價(jià)連接以形成單獨(dú)的鏈。普遍認(rèn)為，稱為dicer的蛋白質(zhì)在細(xì)胞內(nèi)切割發(fā)57夾以形成兩個(gè)單獨(dú)的堿基配對(duì)的RNA分子的干擾RNA。通過(guò)添加、刪除、取代或修飾一個(gè)或多個(gè)核苷酸，千擾RNA可不同于自然形成的RNA。非核苷酸材料可能結(jié)合到干擾RNA的5'末端或者3'末端或者其內(nèi)部。通常設(shè)計(jì)這樣的修飾來(lái)增加干擾RNA的核酸酶抗性、改善細(xì)胞的4HX、增強(qiáng)細(xì)胞的靶向性、協(xié)助追蹤千擾RNA、進(jìn)一步改善穩(wěn)定性或減少干擾素通路的活化作用潛能。例如，干擾RNA可能在突出端末端包含噤呤核苷酸。例如，膽固醇通過(guò)吡咯烷接頭連接到siRNA分子有義鏈的3，末端也給siRNA提供穩(wěn)定性。進(jìn)一步j(luò)奮飾包括例如3'末端生物素分子、已知具有細(xì)胞穿透性能的肽、納米顆粒、擬肽類、熒光染料或樹狀聚體?？梢栽诜肿拥腲部分、糖基部分或磷酸部分修飾核苷酸并在本發(fā)明的實(shí)施方案中發(fā)揮作用。修飾包括用如烷基、烷氧基、氛基、脫氮、鹵素、羥基、巰基或其組合物取代。可以用更穩(wěn)定的類似物取代核苷酸，如用脫氧核糖核苷酸取代核糖核苷酸，或具有糖基修飾例如用2'氨基、2'O-甲基、2'甲氧基乙基或2，-0，4'-C亞甲基橋取代2'-羥基。核苷酸的嘌呤或嘧啶類似物的例子包括黃噤呤、次黃噪呤、氮雜嘌呤、甲硫基腺噤呤、7-脫氮腺苷以及O-修飾的和N-修飾的核苷酸。核苷酸的磷酸基可通過(guò)用氮或硫(硫代磷酸)來(lái)取代磷酸基中的一個(gè)或多個(gè)氧來(lái)修飾。修飾有利于，例如，增強(qiáng)功能性，提高穩(wěn)定性或滲透性或指導(dǎo)定位或靶向。反義干擾RNA鏈可以有一個(gè)或多個(gè)區(qū)域與SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:101、SEQIDNO:123、SEQIDNO:124、SEQIDNO:125、SEQIDNO:126、SEQIDNO:127、SEQIDNO,128、SEQIDNO:129、SEQIDNO:130、SEQIDNO:131、SEQIDNO:132、SEQIDNO:133或SEQIDNO:134的部分并不互補(bǔ)。非互補(bǔ)區(qū)域可能是在互補(bǔ)區(qū)域的或兩個(gè)互補(bǔ)區(qū)域之間的3，端、5'端或這兩個(gè)末端同時(shí)?？赏ㄟ^(guò)化學(xué)合成、體外轉(zhuǎn)錄，或者使用dicer或其它具有相似活性的合適的核酸酶切割較長(zhǎng)的雙鏈RNA而外源性生成干擾RNA?？蓮纳虡I(yè)供應(yīng)商如AmbionInc.(Austin,TX)、Invitrogen(Carlsbad,CA)或Dharmacon(Lafayette,CO)處獲得化學(xué)合成的千擾RNA，該干擾RNA是使用常規(guī)的DNA/RNA合成儀、從保護(hù)的核糖核苷亞磷酰胺中制得。可通過(guò)例如利用溶劑或樹脂的萃取，沉淀、電泳、層析或這些方法的結(jié)合來(lái)純化干擾RNA。備選地，可以使用沒(méi)有純化或經(jīng)過(guò)極少純化的干擾RNA以避免因樣品加工處理而造成的損失。干擾RNA也可以從質(zhì)?；虿《颈磉_(dá)載體或從最小表達(dá)盒(例如由PCR產(chǎn)生的片段，其包含一個(gè)或多個(gè)啟動(dòng)子和干擾RNA的一個(gè)或多個(gè)合適的模板)進(jìn)行內(nèi)源表達(dá)。商品化的shRNA的基于質(zhì)粒的表達(dá)載體的實(shí)例包括pSilencer系列產(chǎn)品(Ambion，Austin,TX)和pCpG-siRNA(InvivoGen，SanDiego,CA)。表達(dá)干擾RNA的病毒栽體可能來(lái)源于多種病毒，包括腺病毒、腺相關(guān)病毒、慢病毒(如HIV、FIV和EIAV)和皰滲病毒。商品化的表達(dá)ShRNA的病毒栽體的實(shí)例包括pSilenceradeno(Ambion，Austin，TX)和pLenti6/BLOCK-iTTM-DEST(Invitrogen,Carlsbad,CA)。病毒載體的選擇、從栽體表達(dá)干擾RNA的方法和傳遞病毒栽體的方法都在本領(lǐng)域普通技術(shù)人員的能力范圍之內(nèi)。用作生產(chǎn)PCR產(chǎn)生的shRNA表達(dá)盒的試劑盒的實(shí)例包括SilencerExpress(Ambion,Austin,TX)和siXpress(Minis,Madison,WT)?？梢詮谋绢I(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的多種真核啟動(dòng)子包括polIII啟動(dòng)子(如U6或HI啟動(dòng)子)或者polII啟動(dòng)子(如巨細(xì)胞病毒啟動(dòng)子)中表達(dá)干擾RNA。本領(lǐng)域的那些技術(shù)人員承認(rèn)這些啟動(dòng)子也適用于允許干擾RNA的誘導(dǎo)表達(dá)。在生理?xiàng)l件下雜交在在本發(fā)明的某些實(shí)施方案中，干擾RNA的反義鏈與在體內(nèi)作為RISC復(fù)合物部分的mRNA雜交。"雜交"指其中單鏈核酸與互補(bǔ)或近乎互補(bǔ)的4^序列相互作用以形成稱為雜交體的氫鍵復(fù)合物的過(guò)程。雜交反應(yīng)具有靈敏性和選擇性。在體外，雜交的特異性(即嚴(yán)緊性)由例如在預(yù)雜交和雜交溶液中的鹽或甲酰胺的濃度以及雜交溫度控制，這些操作是本領(lǐng)域所熟知的。特別地，嚴(yán)緊性通過(guò)59降低鹽濃度、增加甲酰胺濃度或升高雜交溫度而增強(qiáng)。例如，在大約50%甲酰胺、37°C-42GC時(shí)產(chǎn)生高嚴(yán)緊性條件。在大約35%-25%甲酰胺、300C-35°C時(shí)產(chǎn)生降低的嚴(yán)緊性務(wù)降。用于雜交的嚴(yán)緊性條件的實(shí)例提供在Sambrook，J.，1989，MolecularCloning:ALaboratoryManual,ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,N.Y.中。嚴(yán)緊性雜交條件的其它實(shí)例包括400mMNaCl、40mMPIPES,pH6.4、1mMEDTA、50°C或70°C下12-16小時(shí)后再洗滌；或者在70。C、lxSSC或50。C、lxSSC和50。/。甲酰胺中雜交后，在700C、0.3xSSC中洗滌；或者在70。C、4xSSC或50°C、4xSSC和50%甲酰胺中雜交后，在67°(:、lxSSC中洗滌。雜交溫度比雜交體的熔點(diǎn)(TnO大約低5-10"C,使用下面的計(jì)算方法確定19-49個(gè)>5^對(duì)長(zhǎng)度的雜交體的熔點(diǎn)Tm:Tm0C=81.5+16.6(log10[Na+)+0.41(%G+C)-(600/N),其中N是雜交體中g(shù)數(shù)，且Na+是雜交緩沖液中鈉離子的濃度。上述體外雜交測(cè)定提供預(yù)測(cè)在候選siRNA和把標(biāo)之間的結(jié)合是否具有特異性的方法。然而，在RISC復(fù)合物體系中，用不能證明體外雜交的高嚴(yán)緊性的反義鏈也能對(duì)靶標(biāo)進(jìn)行特異性的切割。單鏈干擾RNA:如上所述，千擾RNA最終作為單^作用。已發(fā)現(xiàn)單鏈(ss)干擾RNA能影響mRNA沉默，但是比雙鏈RNA效率低。因此，本發(fā)明的實(shí)施方案也提供施用ss干擾RNA，其在生理?xiàng)l件下與SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:lOl、SEQIDNO:123、SEQIDNO:124、SEQIDNO:125、SEQIDNO:126、SEQIDNO:127、SEQIDNO:128、SEQIDNO:129、SEQIDNO:130、SEQIDNO:131、SEQIDNO:132、SEQIDNO:133或SEQIDNO:134的部分雜交，并有至少19個(gè)核苷酸的至少近乎完全連續(xù)互補(bǔ)的區(qū)域，雜交部分分別對(duì)應(yīng)于SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:lOl、SEQIDNO:123、SEQIDNO:124、SEQIDNO:125、SEQIDNO:126、SEQIDNO:127、SEQIDNO:128、SEQIDNO:129、SEQIDNO:130、SEQIDNO:131、SEQIDNO:132、SEQIDNO:133或SEQIDNO:134。與上述ds干擾RNA—樣，ss干擾RNA長(zhǎng)度為19-49個(gè)核苷酸。ss干擾RNA含有5，端磷酸或在原位或體內(nèi)的5'端位置被磷酸化。術(shù)語(yǔ)"5'磷酸化"用于描述，例如，具有磷酸基團(tuán)的多核苷酸或寡核苷酸，該磷酸基團(tuán)在所述多核苷酸或寡核苷酸的5'末端經(jīng)由酯鍵連接到糖(例如核糖、脫氧核糖或相同的類似物)的C5羥基上。與ds干擾RNA—樣，通過(guò)化學(xué)合成或體外轉(zhuǎn)錄或從載體或表達(dá)盒內(nèi)源性表達(dá)得到ss干擾RNA?？梢酝ㄟ^(guò)激酶加入5'端磷酸基，或5'端磷酸可以由RNA的核酸酶切割生成。施用與ds干擾RNA—樣。在一個(gè)實(shí)施方案中，施用具有保護(hù)的末端和核酸酶抗性修飾的ss千擾RNA來(lái)實(shí)現(xiàn)沉默。ss干擾RNA可以干燥貯存或溶解于水溶液中。為了抑制退火或?yàn)榱朔€(wěn)定，該溶液可以包含緩沖液或鹽。發(fā)夾干擾RNA:發(fā)夾千擾RNA是單個(gè)分子(如單個(gè)寡核苷酸鏈)，包含莖環(huán)或發(fā)夾結(jié)構(gòu)中的干擾RNA的有義鏈和反義鏈兩者(如shRNA)。例如，shRNA能從DNA載體表達(dá)，其中編碼有義干擾RNA鏈的DNA寡核香酸通過(guò)短的間隔區(qū)與編碼反向互補(bǔ)的反義干擾RNA鏈的DNA寡核苷酸相連接。如果出于所選擇表達(dá)載體的需要，可以加入3，末端T，s和形成限制性位點(diǎn)的核苷酸。得到的RNA轉(zhuǎn)錄物自身折疊以形成莖環(huán)結(jié)構(gòu)。給藥模式可以通過(guò)眼組織注射如眼周、結(jié)膜、筋膜嚢(subtenon)、前房?jī)?nèi)(intracameral)、玻璃體內(nèi)(intravitreal)、眼內(nèi)、視網(wǎng)膜下、結(jié)膜下、眼球后或淚管內(nèi)(intracanalicular)的注射；或通過(guò)使用導(dǎo)管或其他放置裝置如視網(wǎng)膜藥丸、眼內(nèi)插入、栓劑或包含多孔的、非多孔的或^狀物質(zhì)的M物直接運(yùn)用到眼睛；通過(guò)局部眼滴劑或藥骨；或通過(guò)盲管中或#^的相鄰鞏膜(鞏膜睫狀體(transcleral))或在眼內(nèi)的緩慢釋放裝置將干擾RNA直接遞送到眼部。前房?jī)?nèi)注射可通過(guò)角膜進(jìn)入前房，讓藥劑到達(dá)小梁。淚管內(nèi)注射可^靜脈收集管引流施萊姆管或^施萊姆管。預(yù)期可以進(jìn)行全身的或腸道外施用，包括但不限于靜脈內(nèi)、皮下和經(jīng)口給藥。受試者需要治療高眼壓或有iL艮成高眼壓危險(xiǎn)的受試者是患有高眼壓或具有;Ul成有高眼壓危險(xiǎn)的人或哺乳動(dòng)物，所述高眼壓與這里所述的靶標(biāo)的不需要或不適當(dāng)?shù)谋磉_(dá)或活性有關(guān)，所述耙標(biāo)即碳酸酐酶II、IV或XII;pi-或卩2-腎上腺素能受體；乙酰膽堿酯酶；Na+/K+-ATP酶或Na-K-2C1協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白。與這類病癥有關(guān)的目艮部結(jié)構(gòu)可能包括例如眼、視網(wǎng)膜、脈絡(luò)膜、晶狀體、角膜、小梁、虹膜、視神經(jīng)、視盤、鞏膜、眼房、玻璃體房或睫狀體。受試者也可能是眼部細(xì)胞、細(xì)胞培養(yǎng)物、器官或活體外(exvivo)器官或組織。制劑和劑量藥物制劑包括重量比可高達(dá)99%的本發(fā)明的干擾RNA或其鹽，其與生理可接受的眼科栽體介質(zhì)如水、緩沖液、生理鹽水、甘氨酸、透明質(zhì)酸、甘露醇等等混合。本發(fā)明的干擾RNA以溶液、懸浮液或乳劑的形式施用。下面是本發(fā)明可能實(shí)施的制劑的實(shí)例。<table>tableseeoriginaldocumentpage62</column></row><table>重量含量％干擾RNA達(dá)到99;0.1-99;0.1-50;0.5-10.0磷酸鹽緩沖液l，O糾氯銨0.01多乙氧基醚0.5純凈水(不含RNA酶)q.s.達(dá)到100%重量含量％干擾RNA達(dá)到99;0.1-99;0.1-50;0.5-10.0磷酸二氬鈉0.05磷酸氳二鈉0.15(無(wú)水)氯化鈉0.75EDTA二鈉鹽0.05聚氧乙烯蓖麻油0.1糾氯銨0.01HC1和/或NaOHpH7.3-7.4純凈水(不含RNA酶)q.s.達(dá)到100%重量含量％干擾RNA達(dá)到99;0.1-99;0.1-50;0.5-10.0磷酸鹽緩沖液1.0羥丙基-p-環(huán)糊精4.0純凈水(不含RNA酶)q.s.達(dá)到100%一般來(lái)說(shuō)，本發(fā)明實(shí)施方案中有效量的干擾RNA在靶細(xì)胞表面產(chǎn)生的細(xì)胞外濃度從100pM至100nM，或從1nM至50nM，或從5nM至約IOnM或至約25nM。達(dá)到這一局部濃度所需的劑量取決于許多的因素，包括給藥方法、給藥位點(diǎn)、在給藥位點(diǎn)和耙細(xì)胞或組織之間的細(xì)胞層數(shù)、局部給藥還是全身給藥等等。給藥位點(diǎn)上的濃度比在靶細(xì)胞或組織表面的濃度可能高出很多。將組合物局部施用到眼睛表面，每天一至四次，或根據(jù)臨床醫(yī)師的常規(guī)判斷按更大范圍的給藥時(shí)間表如每日、每周、雙周、每月或更長(zhǎng)時(shí)間施用。制劑的pH大約是pH4-9或pH4.5-pH7.4。通過(guò)增加作用的持續(xù)時(shí)間，從而允許減少給藥次數(shù)和增強(qiáng)受試者M(jìn)性，用針對(duì)高眼壓耙標(biāo)mRNA的siRNA對(duì)受試者的治療比用小分子局部眼藥滴劑被期望更為有利。雖然正確的給藥方案取決于臨床醫(yī)師的決定，干擾RNA可以按臨床醫(yī)師指導(dǎo)在每只眼中滴一滴的方法施用。制劑的有效量可能取決于許多因素，例如受試者的年齡、種族和性別，高B艮壓的嚴(yán)重性、靶標(biāo)基因轉(zhuǎn)錄物/蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)換的比率、干擾RNA效能和干擾RNA穩(wěn)定性。在一個(gè)實(shí)施方案中，將干擾RNA按治療劑量局部施用到眼睛并到達(dá)小梁、視網(wǎng)膜或視盤，從而改善與高眼壓相關(guān)的疾病。可接受的栽體目W"可接受的栽體指那些至多引起很少到無(wú)眼刺激的載體，如果需要提供適當(dāng)?shù)姆栏?，并且以均勻劑量輸送一種或多種本發(fā)明的干擾RNA。用作施用本發(fā)明實(shí)施方案的干擾RNA的可接受栽體包括陽(yáng)離子脂質(zhì)體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染試劑TransIT-TKO(MinisCorporation,Madison,WI)、LIPOFECTIN、Lipofectamine、OLIGOFECTAMINETM(Invitrogen,Carlsbad,CA)或DHARMAFECTTM(Dharmacon，Lafayette,CO);聚陽(yáng)離子如聚乙烯亞胺；陽(yáng)離子肽如Tat、多^t氨酸或穿膜肽(Antp肽)；或脂質(zhì)體。脂質(zhì)體形成于標(biāo)準(zhǔn)的小泡形成脂質(zhì)和固醇，如膽固醇，并可包括把標(biāo)分子例如對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞表面抗原具有結(jié)合親和力的單克隆抗體。此外，脂質(zhì)體可以是加入PEG的脂質(zhì)體?？梢栽谌芤?、懸浮液或者在生物溶蝕的或非生物溶蝕的給藥裝置中傳遞干擾RNA。可以將干擾RNA單獨(dú)施用，也可以作為共價(jià)綴合物的組成成分，與陽(yáng)離子脂質(zhì)體、陽(yáng)離子多肽或陽(yáng)離子聚合物^或包裹在靶向的64或非把向的納米顆粒中施用。為了眼部給藥，可將干擾RNA與眼科可接受的防腐劑、共溶劑、表面活性劑、增粘劑、滲透促進(jìn)劑、緩沖液、氯化鈉或水結(jié)合，以形成水溶的無(wú)菌眼科懸浮液或溶液?？赏ㄟ^(guò)將干擾RNA溶解于生理上可接受的等滲水溶緩沖液來(lái)制備眼科溶液制劑。另外，眼科溶液可能包括眼科學(xué)的可接受的表面活性劑來(lái)協(xié)助溶解抑制劑?？蓪⒃稣硠┤缌u甲基纖維素、羥乙基纖維素、甲基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮或類似物添加到本發(fā)明的組合物中，以提高化合物的滯留。為了制備無(wú)菌眼藥骨制劑，將干擾RNA與防腐劑在合適載體(如礦物油、液體羊毛脂或白凡士林)上結(jié)合。根據(jù)本領(lǐng)域已知的用于制備其它目艮科制劑的方法，通過(guò)將干擾RNA懸浮于由例如CARBOPOL-940(BFGoodrich,Charlotte,NC)或其相似物的組合制備的親水基質(zhì)中可制備無(wú)菌眼用^^制劑。例如VISCOAT(AlconLaboratories,Inc.,FortWorth,TX)可用作眼內(nèi)注射.本發(fā)明的其他組合物可能包含滲透促進(jìn)藥劑如cremephor和TWEEN⑧80(聚氧乙烯山梨醇單月桂酸酯，SigmaAldrich，StLouis,MO)，其中干擾RNA較少滲透入眼中。試劑盒本發(fā)明的實(shí)施方案提供試劑盒，其包括用于減弱在這里所述mRNA在細(xì)胞中的表達(dá)的試劑。試劑盒包含siRNA或shRNA表達(dá)載體。對(duì)于siRNA和非病毒的shRNA表達(dá)載體，該試劑盒也可能包含轉(zhuǎn)染試劑或其他合適的傳遞載體。對(duì)于病毒的shRNA表達(dá)載體，該試劑盒也可能包含病毒載體和/或用于產(chǎn)生病毒載體的必需組分(例如，包裝細(xì)胞系以及用于包裝的包含病毒載體模板和額外的輔助栽體的載體)，該試劑盒也可能包含陽(yáng)性和陰性對(duì)照siRNA或shRNA表達(dá)載體(例如，無(wú)耙向?qū)φ誷iRNA或靼向無(wú)關(guān)mRNA的siRNA)。該試劑盒也可能包含用作評(píng)估指定耙標(biāo)基因的敲除的試劑(例如，用于檢測(cè)耙標(biāo)mRNA的定量PCR的引物和探針和/或針對(duì)western印跡的相應(yīng)蛋白質(zhì)的抗體)。備選地，該試劑盒可能包含siRNA序列或shRNA序列和使用說(shuō)明以及用于通過(guò)體外轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生siRNA或構(gòu)建shRNA表達(dá)栽體的必需物質(zhì)。還提供試劑盒形式的藥物組合，其包括(在包裝的組合中)適于接受與此的密閉容器裝置的載體裝置，和包括干擾RNA組合物和眼科可接受載體的第一種容器裝置。如果需要，該試劑盒還可以包括一種或多種常規(guī)的藥物學(xué)試劑盒組分，例如含有一種或多種藥物可接受載體的容器、額外的容器等等，這對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見(jiàn)的。該試劑盒也可以包括作為插件或作為標(biāo)簽的用于指示施用的組分量的印刷的使用說(shuō)明、用于施用的指南和/或用于混合組分的指南。干擾RNA在例如人體小梁(TM)細(xì)胞中敲除內(nèi)源靶標(biāo)基因表達(dá)水平的能力在體外按以下方式評(píng)估。將轉(zhuǎn)化的人TM細(xì)胞，例如指定的細(xì)胞系GTM-3或HTM畫3(見(jiàn)Pang，I.H.等人，1994.Curr.EyeRes.13:51-63)，在轉(zhuǎn)染之前24小時(shí)在標(biāo)準(zhǔn)生長(zhǎng)培養(yǎng)基(如用10%牛胎兒血清增補(bǔ)的DMEM)中鋪板培養(yǎng)。根據(jù)制造商的說(shuō)明書，使用Dharmafectl(DhLafayette,CO)在干擾RNA濃度從0.1nM至100nM范圍內(nèi)進(jìn)行轉(zhuǎn)染。無(wú)把向?qū)φ涨_RNA和核纖素蛋白A/C干擾RNA(Dharmacon)作為對(duì)照。在轉(zhuǎn)染后24小時(shí)，使用例如TAQMAN⑧正向和反向引物和包含耙位點(diǎn)的探針系列(AppliedBiosystems,FosterCity，CA)，通過(guò)定量PCR來(lái)評(píng)估乾標(biāo)mRNA水平?？稍谵D(zhuǎn)染后約72小時(shí)(實(shí)際時(shí)間取決于蛋白質(zhì)的更新率)例如通過(guò)western印跡評(píng)估靶標(biāo)蛋白質(zhì)水平。從培養(yǎng)細(xì)胞中分離RNA和/或蛋白質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)是本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的。為減少非特異性、脫乾效應(yīng)的幾率，應(yīng)該使用會(huì)產(chǎn)生期望的敲除耙基因表達(dá)水平的可能的最低濃度干擾RNA。本發(fā)明的干擾RNA敲除CA2蛋白質(zhì)表達(dá)7jC平的能力在如下的實(shí)施例1中得以進(jìn)一步例證。實(shí)施例1用于在HeLa細(xì)胞中特異性沉默CA2的干擾RNA本研究檢測(cè)CA2-干擾RNA在培養(yǎng)的Hda細(xì)胞中敲除內(nèi)源CA2表達(dá)水平的能力。HeLa細(xì)胞的轉(zhuǎn)染是使用CA2siRNA的標(biāo)準(zhǔn)體外濃度(IOOnM和1nM)或無(wú)乾向?qū)φ誷iRNA和DharmaFECTTM1轉(zhuǎn)染試劑(DhLafayette,CO)完成的。所有的siRNA溶解在1xsiRNA緩沖液中，該緩沖液是含有20mMKC1、6mMHEPES(pH7.5)、0.2mMMgCl2的水溶液。在轉(zhuǎn)染后72小時(shí)，通過(guò)western印跡分析來(lái)評(píng)估CA2蛋白質(zhì)表達(dá)和肌動(dòng)蛋白蛋白質(zhì)表達(dá)(上樣對(duì)照)。CA2siRNA是雙鏈干擾RNA，其對(duì)以下乾標(biāo)序列具有特異性siCA2#l靶向SEQIDNO:721;siCA2#3把向SEQIDNO:15;siCA2糾耙向SEQIDNO:720;siCA2弁5乾向SEQIDNO:141。如圖1中western印跡數(shù)據(jù)顯示，相對(duì)于非乾向?qū)φ誷iRNA，四個(gè)CA2siRNA中的每一個(gè)在100nM和1nM都顯著降低CA2表達(dá)。把向SEQIDNO:720的SiCA2糾和靼向SEQIDNO:141的siCA2#5顯得特別有效。這里引用的參考文獻(xiàn)被特別并入作為參考，其提供示例性的操作或其他的細(xì)節(jié)作為對(duì)在此闡明的那些內(nèi)容的補(bǔ)充。在本公開的指導(dǎo)下，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員將會(huì)認(rèn)可，可以對(duì)這里公開的實(shí)施方案進(jìn)行明顯的修飾而不背離本發(fā)明的精神或范圍。在^/>開的指導(dǎo)下，在這里公開的所有實(shí)施方案都能夠得到實(shí)現(xiàn)和執(zhí)行而無(wú)需過(guò)度的實(shí)驗(yàn)。在^/>開及其等同的實(shí)施方案中公布本發(fā)明的全部范圍。說(shuō)明書不應(yīng)該被過(guò)于狹隘的解釋為本發(fā)明要求保護(hù)的全部范圍。除非另有說(shuō)明，在這里使用的術(shù)語(yǔ)"a"和"an"意指"一個(gè)"、"至少一個(gè)"或"一個(gè)或多個(gè)"。序列表〈110〉愛(ài)爾康公司<120〉RNAi介導(dǎo)的眼部靶標(biāo)抑制<130>45263P008W02〈140〉尚未指定〈141>2006-02-01<150>US60/648,926<151>2005-02-01<歸US60/753,364<151>2005-12-22〈歸724<170>Patentlnversion3.3<210〉1<211〉1551〈212〉DNA<213>智人(Homos即iens)<400〉1accgccagcg60tggcata鄉(xiāng)120ceitacagcca180tccctgagga240a犯gcagtgc300cactggggtt360gcagaacttc420c犯cctgatg480cttcagaaag540actaacttcg600tcactgacca660agcgtcagca720cccgaagaac780aaagcttcct840tttcccttta900agttttctag960ccaattgtca1020ttttctgtaa1080agcatgtagg1140幼3gtag幼t1200tcaggtaaaa1260tcaagatgtt1320tta犯tatga1380ttatctgtaa1440tatatcataa1500t1551〈210〉2〈211〉1104<212〉DNA<213>智人ggcgcccaagcgaccatgtcacttccccatagtatgaccctcctc幼caatc卿gg鄉(xiāng)cacUgatggacttggttcagactggccgtttgttgatgtatcctcgtggcccctcctctgcgagcaggttgstggtggagCta￡LgC￡LC￡Lacccttcatctgcttgacaccacag犯tatgtgatgagcaggttgagtgctagtcatgatatatt肌agaattctgttgtaaattgttatcttaataaatccgccgccgcccatcactggtgccaagggattccctgaagtggtcatgctacccctggatacaaggttcactggaacacctctaggtattgctggattcccctccttccttctggaatgtgttgaaattccaactggcgctggtcccatagatctacctttcttacttgaaactgctgtgaggataag犯ctcacaattg犯atccat6Lgtctatgtaataaaac11taaaatttaatgaaattagagttattgtattttcagatcggtggggtacggcagagcgccagtcccctgtctgttcaacgtggggcacttacagagcatactgaaatatggggtttttgaaggattaaaacaagaatccctgggtgacctggaccagctcagcgtctgtatccggtg8LUtggtagacttactgctggttggtcacaagataagta犯ccagacttttgaattgtgatacaga兆atatattcCCgELttCCtgaacacaacggcccctgttgatttcctatgaagtttgatgagattgattcaattttgggaattggcagcgcagggc卿agattactggacttgtgctcaaacttcaatggcactgei6Lgaeiaaataatgaaaccctggttgaataaaatgtgctttgtttaagtaccttgatgctgcttttattgagctagacagagatatgtatatttcctctaataaaaccctgccccgacctgagcaccatcgacacttc犯gc犯ctctctcaggacgtttcactttgaaatatgctagctgtgcagtaaaccgggctgctgacttcctacccaggcggaacccatcggagggtgaacaggcaaatctcttcgggtgctttgtgtctgaagactagatggtagtagtctttgttcaca幼ac3taggtt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)序列<626tgatggatcagccaaccta<210〉627<211>19<212〉DNA<213>人工序列<220><223〉靶標(biāo)序列<400〉627gatggatcagccaacctaa<210>628<211〉19<212〉隨<213〉人T:序列<220〉<223>耙標(biāo)序列<400>628atggatcagccaacctaaa<210〉629<211>19<212>DNA<213〉人工序列<220〉<223〉靶標(biāo)序列<400>629gcatagtatgagtaggata<210>630<211>19<212>DNA<213〉人工序列<220><223〉耙標(biāo)序列<400〉630catagtatgagtaggatat<210〉631<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>耙標(biāo)序列<400>631ggatatctccacagagtaa191919191919201<210>632〈211〉19<212>DNA<213>人工序列<220><223>耙標(biāo)序列<400>632gatatctccacagagtaaa<210〉633<211>19<212>飄<213>人工序列<220><223>靶標(biāo)序列<400>633agaaaggtgtgtggtacat<210〉634<211>19<212>DNA<213〉人工序列<220〉<223>靶標(biāo)序列<400>634ataacgtgcttccagatca<210>635<211>19<212〉腿<213>人工序列<220><223〉耙標(biāo)序列<400>635taacgtgcttccagatcat<210>636<211〉19<212〉畫<213>人工序列<220〉<223>靶標(biāo)序列■>636agtgtacagtcgccagata<210〉637<211>19<212>腿<formula>formulaseeoriginaldocumentpage203</formula><400>642gccgtgctatgtaaatatt<210>643<211〉19<212>腿<213〉人工序列<220〉<223>靶標(biāo)序列<400〉643tgcaagaaatgtggtatgt<210>644<211>19<212>DNA<213>人工序列<220〉<223>靶標(biāo)序列<400>644atgctgaattagcctcgat<210〉645<211〉19<212〉DNA〈213〉人工序列<220〉<223〉靶標(biāo)序列<400〉645ttgattaagagcacaaact<210>646<211〉19〈212〉DNA<213〉人工序列<220><223〉靶標(biāo)序列〈400〉646agcagactgtggactgtaa<210>647<211〉19<212>隨<213>人工序列<220><223>靶標(biāo)序列<400>647gcagactgtggactgtaat191919191919<210>648<211〉19〈212〉DNA<213〉人工序列<220><223〉靶標(biāo)序列<400〉648cagactgtggactgtaata<210〉649〈211〉19<212〉DNA<213〉人工序列<220><223〉耙標(biāo)序列<400〉649taataccaatcgctttcaa<210>650<211〉19<212〉DNA<213>人工序列〈220〉<223〉靶標(biāo)序列<400〉650accaatcgctttcaagtta<210〉651<211>19<212>隨<213>人工序列<220><223〉靶標(biāo)序列<400〉651caatcgctttcaagttagt<210〉652<211〉19<212>DNA<213>人工序列<220〉<223>靶標(biāo)序列<400〉652atagagtactatcgtaaca<210>653<211〉19<212>DNA〈213〉人工序列19191919<220><223〉靶標(biāo)序列<400>653ccagcctgcttgagattca<210>654<211>19<212>DNA<213>人工序列〈220〉<223>靶標(biāo)序列<400>654ctgtagtagatctacttaa<210>655〈211〉19<212>隠<213〉人工序列<220〉<223>靶標(biāo)序列<400〉655accaatgacatccggatta<210>656〈211〉19<212>DNA<213>人工序列<220><223〉靶標(biāo)序列<400>656ccaatgacatccggattat<210>657<211〉19<212>陽(yáng)<213〉人工序列<220>〈223〉靶標(biāo)序列<400〉657c組gacatccggattata<210〉658〈211>19<212〉DNA<213〉人工序列<220><223>耙標(biāo)序列19191919<400〉658ggctatgacttctcaagat<210>659<211>19<212>DNA<213>人工序列<220〉<223>耙標(biāo)序列<400〉659gcctcatatgcacttatta<210〉660<211>19<212〉纖<213〉人工序列<220><223〉靶標(biāo)序列<400>660agacctgcgtatggaattt<210>661<211〉19<212〉隨<213>人.匸序列<220><223>靶標(biāo)序列<400〉661acgtctatgtgacttgtaa<210〉662<211〉19<212>腿<213>人工序列<220><223〉靶標(biāo)序列<400>662gtctatgtgacttgtaaga<210>663<211>19<212>DNA<213〉人工序列<220><223>靶標(biāo)序列<400〉663ttcctacgtgagtgcttta<210〉664<211>19<212>DNA<213>人工序列<220〉<223〉靶標(biāo)序列<400>664gacaatgctctggaattaa<210>665<211>19<212>DNA<213〉人工序列<220〉<223〉靶標(biāo)序列<婦665ctctggtgattggatataa<210〉666<211〉19<212>DNA<213>人工序列<220〉<223>耙標(biāo)序列〈400〉666tgacagetg3ttg3gaacta<210〉667<211〉19<212>腿<213>人工序列〈220〉<223〉耙標(biāo)序列<400〉667tgagattggcgtggttata<210〉668<211>19<212>腿<213>人工序列<220><223〉耙標(biāo)序列<400〉668gcatccgaggcttgtttaa<210〉669<211>19<212>DNA<213>人工序列208<220><223〉靶標(biāo)序列<400>669accatatcgtctccatgaa<210>670<211>19<212>腿<213〉人工序列<220><223〉靶標(biāo)序列<400〉670ccatatcgtctccatgaaa<210〉671〈211〉19<212>腿<213〉人工序列<220><223>靶標(biāo)序列<400>671tgaaagctgcaaagattta<210〉672<211〉19<212>DNA<213>人工序列<220><223〉靶標(biāo)序列<400>672tcgactgaatgaactctta<210〉673<211>19<212>DNA<213〉人工序列<220><223>靶標(biāo)序列<400>673ccatatcggatttgttgta<210>674<211>19<212>DNA〈213〉人工序列<220〉<223>靶標(biāo)序列<400>674ggttggaaatcctcacaaa<210>675<211>19<212>DNA<213>人工序列〈220〉<223>靶標(biāo)序列<400〉675cttactagttagaggaaat<210>676<211>19<212>腿<213〉人工序列<220〉<223>靶標(biāo)序列<400〉676accaccagcactactatta<210〉677<211>19〈212>DNA<213>人工序列<220><223〉耙標(biāo)序列<400〉677ccaccagcactactattat<210>678<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>耙標(biāo)序列<400〉678cagcactactattatgata<210〉679<211>19〈212〉DNA<213〉人工序列<220><223〉耙標(biāo)序列<400>679ctatcagtccttgtaataa19<210>680<211>19<212>DNA<213〉人工序列<220><223〉靶標(biāo)序列<400>680attgtctacttcagcaata<210>681<211〉19<212〉DNA<213〉人工序列<220>〈223〉靶標(biāo)序列<400>681tattggtgatttcgtcata<210〉682<211>19<212>腿<213〉人工序列<220><223>靶標(biāo)序列<400〉682ttcgtcataggaacattta〈210〉683<211>19<212〉DNA<213〉人工序列<220><223〉靶標(biāo)序列<400〉683taatgacactatcgtaaca<210〉684<211>19<212>DNA<213〉人工序列<220><223〉靶標(biāo)序列<400>684gatgtttgctaaaggttat<210〉685<211〉19<212〉DNA<213〉人工序列211<formula>formulaseeoriginaldocumentpage212</formula>agagatgtccatcgatcaa〈210>691<211>19<212>DNA<213>人工序列<220〉<223>靶標(biāo)序列<400>691ccatcgatcaagccaaata<210>692<211>19<212〉DNA〈213〉人工序列<220〉<223>靶標(biāo)序列<400>692catcgatcaagccaaatat<210>693〈211〉19<212>DNA<213〉人「序列<220><223〉靶標(biāo)序列<400〉693ggtcgtatgaagccaaaca<210〉694<211〉19<212〉DNA<213〉人工序列<220〉<223〉靶標(biāo)序列<400>694cacttgtccttggatttaa<210〉695<211〉19〈212〉腿<213>人工序列<220><223〉靶標(biāo)序列<400〉695tagtggttattcgcctaaa<210〉696<211〉191919191919<212〉DNA<213>人工序列<220><223〉靶標(biāo)序列<400>696atctcatcttcaaggacaa<210〉697<211〉19<212〉腿<213>人工序列<220〉<223>靶標(biāo)序列<400〉697cgatttagatacttccaaa<210>698<211〉19<212>DNA<213>人工序列<220〉<223〉靶標(biāo)序列<400>698tcattggtggaaagataaa<210>699<211〉19<212〉DNA<213〉人工序列<220〉<223〉靶標(biāo)序列<699ttagcaagUccggataga<210>700<211>19<212〉畫<213〉人工序列<220〉<223〉靶標(biāo)序列<400〉700gaaatcattgagccataca<210〉701<211>19<212〉DNA<213>人工序列<220〉19191919<223>耙標(biāo)序列<400>701agcaagatattgcagataa<210>702<211〉19<212>■<213〉人工序列<220><223〉耙標(biāo)序列<400〉702gatgaaccatggcgaataa<210〉703<211〉19<212〉DNA<213>人工序列<220〉<223>耙標(biāo)序列<400>703cattcaagcacagctaata<210〉704<211>19<212>DNA<213〉人工序列<220〉<223〉靶標(biāo)序列<400〉704ttcagtgcctagtgtagta<210〉705<211〉19<212>隨<213>人工序列<220〉<223>靶標(biāo)序列<400>705aggaaagttgctccattga<210>706<211〉19<212>腿<213>人工序列<220〉<223>耙標(biāo)序列<400>706aaagttgctccattgataa191919191919<210〉707<211>19<212〉腿<213>人工序列<220〉<223〉靶標(biāo)序列<400>707caatcttaatggtgattct<210〉708<211〉19<212>腿<213〉人工序列<220><223>靶標(biāo)序列<400>708ttgacatcatagtctagta<210>709<211>19<212>畫<213〉人工序列<220><223>靶標(biāo)序列<400>709gacatcatagtctagtaaa<210>710<211〉19<212〉腿<213〉人T.序列<220><223>靶標(biāo)序列<400>710gtgtgtgtgtgtgtatata<210〉711<211〉19<212〉DNA<213〉人工序列<220〉<223〉靶標(biāo)序列<400>711gtgtgtgtgtgtatatata<210〉712〈211〉19<212〉腿1919191919<213>人工序列<220>〈223〉靶標(biāo)序列<400>712taggcaaactttggtttaa<210>713〈211>19<212>腿<213>人工序列<220〉〈223〉耙標(biāo)序列<400〉713ggagaatacttcgcctaaa<210>714<211〉19<212>腿<213〉人工序列<220〉<223>耙標(biāo)序列<400〉714tgagtatgacctaggtata<210>715<211〉19<212〉DNA<213>人工序列<220><223>耙標(biāo)序列<400〉715agagatctgataacttgaa<210>716<211〉19<212>腿<213〉人工序列<220><223>耙標(biāo)序列<400〉716ggtaasgac3gtagaaata<210〉717<211>19<212>脆〈213〉人工序列<220><223〉靶標(biāo)序列19191919<400〉717tttaagctctggtggatga19<210><211><212〉〈213〉71825RNA人工序列<220〉<223>有義鏈<400〉718cccugaggauccucaacaaugguca25<210>719<211〉27<212>隨<213>人工序列<220><223>反義鏈<400〉719ugaccmiuguugaggauccucaggguu27<210>720<211>19<212〉腿<213>人工序列<220><223>靶標(biāo)序列<400>720ggatggcacttacagattg<210>721<211>19<212〉DNA<213>人工序列<220〉<223>靶標(biāo)序列<400>721gaaatatgctgcagaactt<210〉722<211〉19<212〉RNA<213>人工序列<220><223〉有義鏈<400〉722cccugaggauccucaacaa<210>723<211〉19<212>隨<213〉人工序列<220><223>反義鏈<400〉723uuguugaggauccucaggg<210>724<211〉25<212>DNA<213>人工序列<220><223〉靶標(biāo)序列<400>724ccctgaggatcctcaacaatggtca19192權(quán)利要求1.在受試者中減弱高眼壓靶標(biāo)mRNA表達(dá)的方法，該方法包括向受試者施用包含有效量的長(zhǎng)度為19-49個(gè)核苷酸的干擾RNA和藥物可接受載體的組合物，該干擾RNA包含至少13個(gè)連續(xù)核苷酸的區(qū)域，該連續(xù)核苷酸與以下任一序列的3′端次末端的13個(gè)核苷酸具有至少90％的序列互補(bǔ)性或至少90％的序列同一性，所述序列為SEQIDNO8、SEQIDNO14-SEQIDNO32、SEQIDNO83-SEQIDNO100、SEQIDNO102-SEQIDNO122、SEQIDNO135-SEQIDNO219、SEQIDNO720和SEQIDNO721。2.權(quán)利要求l的方法，其中高眼壓耙標(biāo)mRNA編碼碳酸酐酶II，且所述干擾RNA包含至少13個(gè)連續(xù)核苷酸的區(qū)域，該連續(xù)核苷酸與以下任一序列的3'端次末端的13個(gè)核苷酸具有至少卯％的序列互補(bǔ)性或至少90%的序列同一性，所述序列為SEQIDNO:8、SEQIDNO:14-SEQIDNO:22、SEQIDNO:83-SEQIDNO:100、SEQIDNO:135-SEQIDNO:155、SEQIDNO:720和SEQIDNO:721,3.權(quán)利要求l的方法，其中高眼壓靶標(biāo)mRNA編碼碳酸6f酶IV，且所述千擾RNA包含至少13個(gè)連續(xù)核苷酸的區(qū)域，該連續(xù)核苷酸與以下任一序列的3'端次末端的13個(gè)核苷酸具有至少90%的序列互補(bǔ)性或至少90%的序列同一性，所述序列為SEQIDNO:23-SEQIDNO:32和SEQIDNO:156-SEQIDNO:177。4.權(quán)利要求1的方法，其中高目艮壓靶標(biāo)mRNA編碼碳酸酐酶XII,且所述干擾RNA包含至少13個(gè)連續(xù)核苷酸的區(qū)域，該連續(xù)核苷酸與以下任一序列的3'端次末端的13個(gè)核普酸具有至少90%的序列互補(bǔ)性或至少90%的序列同一性，所述序列為SEQIDNO:102-SEQEDNO:122和SEQIDNO:178-SEQIDNO:219。5.權(quán)利要求1的方法，其中連續(xù)核苷酸的區(qū)域是至少14個(gè)連續(xù)核苷酸的區(qū)域，該區(qū)域與序列標(biāo)識(shí)符的序列的3'端次末端14個(gè)核苷酸具有至少85%的序列互補(bǔ)性或至少85%的序列同一性。6.權(quán)利要求l的方法，其中連續(xù)核苷酸的區(qū)域是至少15、16、17或18個(gè)連續(xù)核苷酸的區(qū)域，該區(qū)域分別與序列標(biāo)識(shí)符的序列的3'端次末端15、16、17或18個(gè)核苷酸具有至少80%的序列互補(bǔ)性或至少80%的序列同一性。7.權(quán)利要求1的方法，其中干擾RNA是shRNA。8.權(quán)利要求1的方法，其中干擾RNA是miRNA。9.權(quán)利要求l的方法，其中干擾RNA是siRNA。10.組合物在制備用于治療受試者高眼壓的藥物中的用途，該組合物包含有效量的長(zhǎng)度為19-49個(gè)核苷酸的干擾RNA和藥物可接受載體,該干擾RNA包含至少13個(gè)連續(xù)核苷酸的區(qū)域，該連續(xù)核苷酸與以下任一序列的3'端次末端的13個(gè)核苷酸具有至少卯％的序列互補(bǔ)性或至少90%的序列同一性，所述序列為SEQIDNO:8、SEQIDNO:14-SEQIDNO:32、SEQIDNO:83-SEQIDNO:100、SEQIDNO:102-SEQIDNO:122、SEQIDNO:135-SEQIDNO:219、SEQIDNO:720和SEQIDNO:721。11.權(quán)利要求10的用途，其中干擾RNA包含至少13個(gè)連續(xù)核苷酸的區(qū)域，該連續(xù)核苦酸與以下任一序列的3'端次末端的13個(gè)核苷酸具有至少90%的序列互補(bǔ)性或至少90%的序列同一性，所述序列為SEQIDNO:8、SEQIDNO:14-SEQIDNO:22、SEQIDNO:83-SEQIDNO:IOO、SEQIDNO:135-SEQIDNO:155、SEQIDNO:720和SEQIDNO:721。12.權(quán)利要求10的用途，其中該干擾RNA包括至少13個(gè)連續(xù)核苷酸的區(qū)域，該連續(xù)核苷酸與以下任一序列的3'端次末端的13個(gè)核苷酸具有至少卯％的序列互補(bǔ)性或至少90%的序列同一性，所述序列為SEQIDNO:23-SEQIDNO:32和SEQIDNO:156-SEQIDNO:177。13.權(quán)利要求10的用途，其中干擾RNA包括至少13個(gè)連續(xù)核苷酸的區(qū)域，該連續(xù)核苷酸與以下任一序列的3'端次末端的13個(gè)核苷酸具有至少90%的序列互補(bǔ)性或至少90。/。的序列同一性，所述序列為SEQIDNO:102-SEQIDNO:122和SEQIDNO:178-SEQIDNO:219。14.權(quán)利要求10的用途，其中干擾RNA是shRNA。15.權(quán)利要求10的用途，其中制備組合物用于局部、玻璃體內(nèi)、鞏膜睫狀體、眼周、結(jié)膜、筋膜嚢、前房?jī)?nèi)、視網(wǎng)膜下、結(jié)膜下、目姊后或淚管內(nèi)的施用。16.權(quán)利要求10的用途，其中從能表達(dá)干擾RNA的表達(dá)栽體經(jīng)由體內(nèi)表達(dá)制備用于施用的組合物。17.權(quán)利要求10的用途，其中干擾RNA是miRNA。18.權(quán)利要求10的用途，其中干擾RNA是siRNA。19.減弱受試者高眼壓靶標(biāo)mRNA第一種變體表達(dá)而不減弱高眼壓靶標(biāo)mRNA第二種變體表達(dá)的方法，其包括對(duì)受試者施用組合物，該組合物包含有效量的長(zhǎng)度為19-49個(gè)核苷酸的干擾RNA和藥物可接受栽體，該干擾RNA包含至少13個(gè)連續(xù)核苷酸的區(qū)域，該連續(xù)核苷酸與第一種變體的3'端次末端的13個(gè)核苷酸具有至少90%的序列互補(bǔ)性或至少90%的序列同一性，其中第一種變體mRNA的表達(dá)被減弱，而沒(méi)有減弱第二種變體mRNA的表達(dá)，并且其中第一種變體靶標(biāo)mRNA是SEQIDNO:101，和第二種變體把標(biāo)mRNA是SEQIDNO:134。20.減弱受試者高眼壓靶標(biāo)mRNA第一種變體表達(dá)而不減弱高眼壓靶標(biāo)mRNA第二種變體表達(dá)的方法，其包括對(duì)受試者施用組合物，該組合物包含有效量的長(zhǎng)度為19-49個(gè)核苷酸的干擾RNA和藥物可接受載體，該干擾RNA包含至少13個(gè)連續(xù)核苷酸的區(qū)域，該連續(xù)核苷酸與第一種變體的3，端次末端的13個(gè)核苷酸具有至少90%的序列互補(bǔ)性或至少90%的序列同一性，其中第一種變體mRNA的表達(dá)被減弱，而沒(méi)有減弱第二種變體mRNA的表達(dá)，并且其中第一種變體耙標(biāo)mR]VA是SEQIDNO:134,和第二種變體靶標(biāo)mRNA是SEQIDNO:101。21.減弱受試者高眼壓耙標(biāo)mRNA表達(dá)的方法，其包括對(duì)受試者施用組合物，該組合物包含有效量的長(zhǎng)度為19-49個(gè)核苷酸的干擾RNA和藥物可接受載體，該干擾RNA包舍有義核苷酸鏈、反義核苷酸鏈和至少19個(gè)核苷酸的至少近乎完全連續(xù)互補(bǔ)的區(qū)域；其中反義鏈在生理?xiàng)l件下與對(duì)應(yīng)于SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:101或SEQIDNO:134的mRNA的部分雜交，并且具有至少19個(gè)核苷酸的、分別與對(duì)應(yīng)于SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:101或SEQIDNO:134的mRNA的雜交部分至少近乎完全連續(xù)互補(bǔ)的區(qū)域，其中高眼壓靶標(biāo)mRNA的表達(dá)被減弱。22.權(quán)利要求21的方法，其中高目艮壓靶標(biāo)mRNA編碼碳酸酐酶II，并且反義鏈在生理?xiàng)l件下與對(duì)應(yīng)于SEQIDNO:l的mRNA的部分雜交，且含有至少19個(gè)核普酸的、與對(duì)應(yīng)于SEQIDNO:l的mRNA的雜交部分至少近乎完全連續(xù)互補(bǔ)的區(qū)域。23.權(quán)利要求21的方法，其中高眼壓粑標(biāo)mRNA編碼碳酸酐酶IV，并且反義鏈在生理?xiàng)l件下與對(duì)應(yīng)于SEQIDNO:2的mRNA的部分雜交，且含有至少19個(gè)核苷酸的、與對(duì)應(yīng)于SEQIDNO:2的mRNA的雜交部分至少近乎完全連續(xù)互補(bǔ)的區(qū)域。24.權(quán)利要求21的方法，其中高目艮壓靶標(biāo)mRNA編碼碳酸酐酶XII，并且反義鏈在生理^ff下與對(duì)應(yīng)于SEQIDNO:101或SEQIDNO:134的mRNA的部分雜交，且含有至少19個(gè)核苷酸的、與對(duì)應(yīng)于SEQIDNO:lOl或SEQIDNO:134的mRNA的雜交部分至少近乎完全連續(xù)互補(bǔ)的區(qū)域。25.權(quán)利要求21的方法，其中將反義鏈設(shè)計(jì)為乾向?qū)?yīng)于SEQIDNO:l的mRNA，所述mRNA包含核苷酸232、527、721、728、809、810、855、856、921、1139、506、547、548、740、911、1009、1140、1149、1150、1151、1188、1194、1195、1223、1239、1456、1457、1458、100、158、166、247、286、318、322、328、371、412、482、504、505、541、734、772、777、814、972、998、1232、317或401。26.權(quán)利要求21的方法，其中將反義鏈設(shè)計(jì)為靶向?qū)?yīng)于SEQIDNO:2的mRNA，所述mRNA包含核苷酸213、252、258、266、399、457、463、490、595、1064、109、112、125、126、150、261、265、280、398、453、459、462、467、492、534、785、801、825、827、876、1003或1012。27.權(quán)利要求21的方法，其中將反義鏈設(shè)計(jì)為靶向?qū)?yīng)于SEQIDNO:101的mRNA,所述mRNA包含核苷酸191、239、274、275、341、389、412、413、423、687、689、695、710、791、792、794、983、993、994、995、691、1039、1568、2326、2332、2425、2433、2844、2845、2880、2884、2891、2954、2955、2956、2957、2964、2965、3006、3007、3012或3026。28.權(quán)利要求21的方法，其中將反義鏈設(shè)計(jì)為靶向?qū)?yīng)于SEQIDNO:134的mRNA，所述mRNA包含核苷酸687、1535、2293、2299、2392、2400、2811、2812、2847、2851、2858、2921、2922、2923、2924、2931、2932、2973、2974、2979或2993。29.權(quán)利要求21的方法，其還包括向受試者施用長(zhǎng)度為19-49個(gè)核苷酸的第二種干擾RNA，并且所述第二種干擾RNA包括有義核苷酸鏈、反義核苷酸鏈和至少19個(gè)核香酸的至少近乎完全互補(bǔ)的區(qū)域；其中第二種干擾RNA的反義鏈在生理?xiàng)l件下與對(duì)應(yīng)于SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:101或SEQIDNO:134的mRNA的第二部分雜交，且反義鏈含有至少19個(gè)核苷酸的、與分別對(duì)應(yīng)于SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:101或SEQIDNO:134的mRNA的第二雜交部分至少近乎完全連續(xù)互補(bǔ)的區(qū)域。30.權(quán)利要求21的方法，其中通過(guò)環(huán)形核苷酸序列連結(jié)有義核苷酸鏈和反義核苦酸鏈。31.組合物在制備用于治療受試者高眼壓的藥物中的用途，該組合物包含有效量的長(zhǎng)度為19-49個(gè)核苷酸的干擾RNA和藥物可接受載體，該干擾RNA包含有義核苷酸鏈、反義核苦酸鏈和至少19個(gè)核苷酸的至少近乎完全互補(bǔ)的區(qū)域；其中反義鏈在生理M下與對(duì)應(yīng)于SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:101或SEQIDNO:134的mRNA的部分雜交，并且具有至少19個(gè)核苷酸的、與分別對(duì)應(yīng)于SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:101或SEQIDNO:134的mRNA的雜交部分至少近乎完全連續(xù)互補(bǔ)的區(qū)域。32.權(quán)利要求31的用途，其中通過(guò)環(huán)形核苷酸序列連結(jié)有義核苷酸鏈和反義核香酸鏈。33.權(quán)利要求31的用途，其中制備組合物用于局部、玻璃體內(nèi)、鞏膜睫狀體、眼周、結(jié)膜、筋膜嚢、前房?jī)?nèi)、視網(wǎng)膜下、結(jié)膜下、B姊后或淚管內(nèi)的施用。34.權(quán)利要求31的用途，其中從能表達(dá)干擾RNA的表達(dá)載體經(jīng)由體內(nèi)表達(dá)制備用于施用的組合物。35.減弱受試者高眼壓耙標(biāo)mRNA的表達(dá)的方法，其包括向受試者施用組合物，該組合物包含有效量的長(zhǎng)度為19-49個(gè)核苷酸的干擾RNA和藥物可接受載體，其中單鏈干擾RNA在生理?xiàng)l件下與對(duì)應(yīng)于SEQIDNO:l的mRNA的部分雜交，所述部分包含核苷酸232、527、721、728、809、810、855、856、921、1139、506、547、548、740、911、1009、1140、1149、1150、1151、1188、1194、1195、1223、1239、1456、1457、1458、100、158、166、247、286、318、322、328、371、412、482、504、505、541、734、772、777、814、972、998、1232、317或401，并且該干擾RNA含有與對(duì)應(yīng)于SEQIDNO:l的mRNA的雜交部分至少近乎完全連續(xù)互補(bǔ)的區(qū)域；或其中單鏈干擾RNA在生理?xiàng)l件下與對(duì)應(yīng)于SEQIDNO:2的mRNA的部分雜交，所述部分包含核苷酸213、252、258、266、399、457、463、4卯、595、1064、109、112、125、126、150、261、265、280、398、453、459、462、467、492、534、785、801、825、827、876、1003或1012，并且該干擾RNA含有至少19個(gè)核苷酸的、與對(duì)應(yīng)于SEQIDNO:2的mRNA的雜交部分至少近乎完全連續(xù)互補(bǔ)的區(qū)域；或其中單鏈干擾RNA在生理?xiàng)l件下與對(duì)應(yīng)于SEQIDNO:lOl的mRNA的部分雜交，所迷部分包含核苷酸191、239、274、275、341、389、412、413、423、687、689、695、710、791、792、794、983、993、994、995、691、1039、1568、2326、2332、2425、2433、2844、2845、2880、2884、2891、2954、2955、2956、2957、2964、2965、3006、3007、3012或3026，并且該干擾RNA含有至少19個(gè)核苷酸的、與對(duì)應(yīng)于SEQIDNO:101的mRNA的雜交部分至少近乎完全連續(xù)互補(bǔ)的區(qū)域；或其中單鏈干擾RNA在生理?xiàng)l件下與對(duì)應(yīng)于SEQIDNO:134的mRNA的部分雜交，所迷部分包含核苷酸687、1535、2293、2299、2392、2400、2811、2812、2847、2851、2858、2921、2922、2923、.2924、2931、2932、2973、2974、2979或2993，并且該干擾RNA含有至少19個(gè)核苷酸的、與對(duì)應(yīng)于SEQIDNO:134的mRNA的雜交部分至少近乎完全連續(xù)互補(bǔ)的區(qū)域；其中高眼壓乾標(biāo)mRNA的表達(dá)由此被減弱。36.權(quán)利要求35的方法，其中千擾RNA是miRNA。37.權(quán)利要求35的方法，其中千擾RNA是siRNA。38.包含干擾RNA和藥物可接受載體的組合物，所述干擾RNA長(zhǎng)度為19-49個(gè)核苷酸并且含有SEQIDNO:8、SEQIDNO:14-SEQIDNO:32、SEQIDNO:83-SEQIDNO:100、SEQIDNO:102-SEQIDNO:122、SEQIDNO:135—SEQIDNO:219、SEQIDNO:720和SEQIDNO:721中任一的核香酸序列或其互補(bǔ)序列。39.權(quán)利要求38的組合物，其中干擾RNA是shRNA。40.權(quán)利要求38的組合物，其中干擾RNA是siRNA。41.權(quán)利要求38的組合物，其中干擾RNA是miRNA。全文摘要提供抑制高眼壓靶標(biāo)mRNA表達(dá)的RNA干擾以降低開角型青光眼或高眼壓患者中升高的眼內(nèi)壓。高眼壓靶標(biāo)包括碳酸酐酶II、IV和XII；β1和β2腎上腺素能受體；乙酰膽堿酯酶；Na⁺/K⁺-ATP酶和Na-K-2Cl協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白。通過(guò)施用本發(fā)明的干擾RNA來(lái)治療高眼壓。文檔編號(hào)A61K31/713GK101444525SQ200810213139公開日2009年6月3日申請(qǐng)日期2006年2月1日優(yōu)先權(quán)日2005年2月1日發(fā)明者A·F·克拉克,A·R·謝帕德,J·E·查特爾頓,M·B·瓦克斯申請(qǐng)人:愛(ài)爾康公司