專利名稱：：黑乳海參中新的抗腫瘤化合物黑乳海參皂苷壬的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
，是一種從海洋動(dòng)物黑乳海參中分離到的新的抗腫瘤化合物黑乳海參皂苷壬。
背景技術(shù)：
：黑乳海參(2T2e/e"otofl"朋MJ.)，又名"鳳梨參"，屬海洋棘皮動(dòng)物門海參綱刺參科。其體形很大，長(zhǎng)一般為700mm,寬約100mm，高約80mm，廣泛分布于我國西沙群島和臺(tái)灣南端。其體內(nèi)含有豐富的蛋白質(zhì)、多糖、維生素、皂苷類物質(zhì)，具有補(bǔ)肝腎，益精，養(yǎng)血的功效。有關(guān)其所含的皂苷類成分的化學(xué)結(jié)構(gòu)及抗腫瘤活性迄今尚未見有過報(bào)道。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明是從生長(zhǎng)于中國福建海域的黑乳海參中提取分離一種新的皂苷類化合物，命名為黑乳海參皂苷壬，其化學(xué)結(jié)構(gòu)如下<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>黑乳海參皂苷壬為無色結(jié)晶性粉末，熔點(diǎn)194-195°C(MeOH-H20),[a]D22.r(c=0.2，MeOH)，Liebermann-Burchard反應(yīng)和Molish反應(yīng)均呈陽性。電噴霧質(zhì)譜信號(hào)/n/zll41[M+Na]+和m/zl095[M-Na]-。紅外光譜(cm"):max-3416，強(qiáng)寬峰(羥基)，1744(羰基)，1637(雙鍵)。'H-和UC核磁共振數(shù)據(jù)見表1。<table>tableseeoriginaldocumentpage4</column></row><table>本發(fā)明還提供了從黑乳海參提取分離黑乳海參皂苷壬的方法，其步驟如下(1)提取將黑乳海參洗凈，切碎，用5倍量(重量)95%乙醇浸泡7天，濾出提取液，再用85%乙醇浸泡提取2次，每次7天，合并3次提取液，減壓回收乙醇，得流浸膏。將流浸膏溶于水中，通過大孔樹脂柱，依次用水和50%乙醇洗脫。收集50%乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，得總皂苷提取物。(2)分離將上述總皂苷提取物應(yīng)用硅膠柱層析，以二氯甲烷甲醇水為8~5:1~4:l混合溶劑洗脫，薄層層析檢測(cè)，收集含黑乳海參皂苷壬的流份，再經(jīng)ZorbaxSBC18高效液相柱層析，以甲醇水為80:20為流動(dòng)相洗脫，得黑乳海參皂苷壬純品。本發(fā)明對(duì)黑乳海參皂苷黑乳海參皂苷壬進(jìn)行了體外抗腫瘤試驗(yàn)，表明其具有明顯的抑制腫瘤的效果。試驗(yàn)所用細(xì)胞株為國際通用的腫瘤細(xì)胞株，即A-549肺癌和IA-9卵巢癌腫瘤細(xì)胞株。試驗(yàn)方法為國際通用的SRB法根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)速率，將處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的腫瘤細(xì)胞以90pl/孔接種于96孔培養(yǎng)板，貼壁生長(zhǎng)24小時(shí)再加藥10pl/孔。每個(gè)濃度設(shè)三復(fù)孔。并設(shè)相應(yīng)濃度的生理鹽水溶媒對(duì)照及無細(xì)胞調(diào)零孔。腫瘤細(xì)胞在37°C、5%0)2條件下培養(yǎng)72小時(shí)，然后傾去培養(yǎng)液，用10W令TCA固定細(xì)胞，4'C放置1小時(shí)后用蒸餾水洗滌5次，空氣干燥。最后加入15(Hil/孔的Tris溶液，酶標(biāo)儀520nm波長(zhǎng)下測(cè)定OD值。試驗(yàn)結(jié)果見表2。表2黑乳海參皂苷壬對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制作用腫瘤細(xì)胞株A-549IA-9IC50(ng/ml)1.10.2ic5():表示本發(fā)明化合物的半數(shù)有效抑制濃度上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，黑乳海參皂苷壬對(duì)2種腫瘤細(xì)胞株顯示明顯的抑制作用。本發(fā)明為研制新的抗腫瘤藥物提供了新的先導(dǎo)化合物，為開發(fā)利用中國的海洋藥用生物資源具有重要意義。具體實(shí)施例方式以下結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步描述黑乳海參皂苷壬的分離制備。將黑乳海參1000克洗凈，切碎，分別用5倍量(重量)的95%、85%、85%乙醇依次浸泡，每次浸泡7天，合并乙醇浸出液，減壓回收乙醇，得流浸膏。將流浸膏溶于3倍量水中，過濾，濾液通過DA201-B大孔樹脂柱，依次用水和50%乙醇洗脫，收集50%乙醇洗脫液，減壓回收乙醇至干，得總皂苷5.6克。將總皂苷進(jìn)行硅膠柱層析，以二氯甲烷甲醇水為7.3:2.7:i的溶劑洗脫，收集含黑乳海參皂苷壬的流份。再經(jīng)ZorbaxSBC18高效液相柱層析，以甲醇水為80:20為流動(dòng)相洗脫，得黑乳海參皂苷壬純品16毫克。權(quán)利要求1.一種抑制腫瘤的化合物，其特征在于化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下2.權(quán)利要求l所述抑制腫瘤的化合物的制備方法，其具體步驟如下(1)提取將原料黑乳海參洗凈，切碎，用95%乙醇浸泡7天，濾出提取液，再用85%乙醇浸泡2次，每次7天；合并3次提取液，減壓回收乙醇，得流浸膏；將流浸膏溶于水中，通過大孔樹脂柱，依次用水和50%乙醇洗脫；收集50%乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，得總皂苷提取物；(2)分離將上述總皂苷提取物應(yīng)用硅膠柱層析，以二氯甲烷甲醇水為8~5:1~4:l混合溶劑洗脫，薄層層析檢測(cè)，收集含權(quán)利要求l所述化合物的流份，再經(jīng)ZorbaxSBC18高效液相柱層析，以甲醇水為80:20為流動(dòng)相洗脫，得權(quán)利要求l所述化合物純品。3.權(quán)利要求1所述抑制腫瘤的化合物用于制備抗腫瘤藥物的用途-全文摘要本發(fā)明涉及醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體為一種從黑乳海參中分離的抗癌化合物黑乳海參皂苷壬，分子式C₅₄H₈₆O₂₄。經(jīng)多種現(xiàn)代光譜分析，特別是應(yīng)用先進(jìn)的二維核磁共振譜和高分辨質(zhì)譜的綜合解析，確定了該化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)及立體構(gòu)型。體外抗腫瘤試驗(yàn)表明，該化合物對(duì)A-549肺癌和IA-9卵巢癌2種腫瘤細(xì)胞株有明顯的抑制作用。本發(fā)明可為研制新的抗腫瘤藥物提供先導(dǎo)化合物，對(duì)開發(fā)利用中國的海洋藥用生物資源具有重要價(jià)值。文檔編號(hào)A61K31/7048GK101544680SQ200810162019公開日2009年9月30日申請(qǐng)日期2008年11月13日優(yōu)先權(quán)日2008年11月13日發(fā)明者丁萍月,凌慶枝,軍巫,張佳佳,朱一瑋,王忠華申請(qǐng)人:浙江醫(yī)藥高等專科學(xué)校