專利名稱：：一種含有褐藻多糖硫酸酯和人參的組合物和其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明公開了一種組合物，特別公開了一種以褐藻多糖硫酸酯和人參或其有效成分為活性成分的藥物組合物或保健品。進一步的，本發(fā)明公開了組合物在化學性肝損傷、免疫力調(diào)節(jié)的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：化學性肝損傷主要來自于工作環(huán)境、食物、藥品和大量飲酒帶來的有害物質(zhì)，這些物質(zhì)類型涵蓋無機毒物(重金屬、氯化物等)、農(nóng)藥、藥品和酒精等。作為人體重要解毒器官的肝臟，具有肝動脈和肝靜脈兩個渠道血液供應(yīng)，化學物質(zhì)可通過胃腸道門靜脈或者體循環(huán)進入肝臟進行轉(zhuǎn)化，因此肝臟容易受到這些物質(zhì)中化學毒物的損害。自工業(yè)革命以來，大自然和工業(yè)生產(chǎn)中存在一些對肝臟有毒性的物質(zhì)，研究人員稱之為"親肝毒物"，這些物質(zhì)在人體中易導致患病，潛伏期短，病變過程與吸入劑量或者感染劑量呈現(xiàn)正相關(guān)，可引起肝臟細胞不同程度的壞死、脂肪變形、肝硬化和肝癌。工業(yè)生產(chǎn)中的原料、中間產(chǎn)物和最終產(chǎn)品均可能具有肝毒性，因此需要十分警惕化學性肝損傷的發(fā)生。同時這也要求研究人員能夠研究一些有效的防治肝損傷的藥品和保健品。肝臟是人體的重要器官，目前人類肝臟疾病患者越來越多，但是迄今為止尚缺乏療效明顯兼具副作用小的藥物。一般認為，肝細胞損傷是多種作用的結(jié)果?；瘜W物質(zhì)(比如氯化碳、酒精等)所致肝損傷的病理機制多認為與肝內(nèi)脂肪酸代謝障礙和自由基及其引發(fā)的過氧化有關(guān)。研究認為，化學毒物可能通過如下病理機制侵染肝臟1.脂肪變性、四氯化碳、黃磷等干擾脂質(zhì)蛋白的合成轉(zhuǎn)運路徑，最后形成脂肪肝。2.脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，這是一種毒性肝損傷的特定表現(xiàn)形式，例如四氯化碳等在體內(nèi)代謝時產(chǎn)生一種氧化能力很強的中間產(chǎn)物，這種中間產(chǎn)物作用于生物細胞膜上的脂質(zhì)形成過氧化，從而破壞膜的磷脂層空間結(jié)構(gòu)，導致細胞的結(jié)構(gòu)和功能發(fā)生病理性改變。3.膽汁郁積反應(yīng)，主要源于肝臟細胞膜和微絨毛受損，引起膽汁酸排泄障礙。化學物質(zhì)導致的肝損傷可由其在肝細胞內(nèi)的物質(zhì)代謝引起。比如細胞內(nèi)的酒精能夠通過升高NADH/NAD的值抑制線粒體三羧酸循環(huán)，導致肝內(nèi)脂肪酸代謝障礙，氧化減弱以及NADH增多，促進了脂肪酸的合成，使得中性脂肪在肝細胞內(nèi)堆積發(fā)生脂肪變性，嚴重的脂肪變性甚至導致肝細胞壞死和肝內(nèi)纖維組織增生。肝損傷疾病，尤其是脂肪肝和肝功能異常多伴隨血脂水平增高，這揭示脂肪酸代謝紊亂與脂肪肝和肝損傷有一定關(guān)系。近年來的研究證實脂質(zhì)過氧化是一個重要的化學性肝損傷路徑，體內(nèi)過氧化反應(yīng)增強可引起機體抗氧化能力下降，從而自由基的生成增加。隨之而來的自由基不僅氧化細胞膜脂質(zhì)，更重要的是會氧化細胞膜蛋白，從而導致肝細胞功能和結(jié)構(gòu)失常。SOD和CAT等自由基清除劑可分別清除脂質(zhì)過氧化作用中產(chǎn)生的具備高度反應(yīng)活性的超氧陰離子和羥自由基，防治脂質(zhì)過氧化導致的細胞損傷。免疫系統(tǒng)是人體內(nèi)最重要的生物系統(tǒng)之一，其功能對人體至關(guān)重要。一旦出現(xiàn)免疫系統(tǒng)功能失調(diào)，將會導致人體對疾病體康能力弱化。近年來免疫失調(diào)、免疫功能低下人群比例越來越大，長期以往導致免疫系統(tǒng)疾病患者急劇增多。免疫系統(tǒng)是人體抵御病原菌侵犯最重要的保衛(wèi)系統(tǒng)，這個系統(tǒng)由免疫器官(骨髓、胸腺、脾臟、淋巴結(jié)、扁桃體、小腸集合淋巴結(jié)、闌尾等)、免疫細胞(淋巴細胞、單核吞噬細胞、中性粒細胞、嗜堿粒細胞、嗜酸粒細胞、肥大細胞、血小板等)，以及免疫分子(補體、免疫球蛋白、細胞因子等)組成。它是機體防衛(wèi)病原體入侵最有效的武器，但其功能的亢進會對自身器官或組織產(chǎn)生傷害。在很多自身疾病中，免疫系統(tǒng)功能失常往往是一個重要致病原因。免疫系統(tǒng)各組分功能的正常是維持機體免疫功能相對穩(wěn)定的保證，任何組分的缺陷或功能的亢進都會給機體帶來損害。免疫系統(tǒng)各組分廣布全身，錯綜復雜，特別是免疫細胞和免疫分子在機體內(nèi)不斷地產(chǎn)生、循環(huán)和更新。免疫系統(tǒng)具有高度的辨別力，能精確識別自己和非己物質(zhì)，以維持機體的相對穩(wěn)定性；同時還能接受、傳遞、擴大、儲存和記憶有關(guān)免疫的信息，針對免疫信息發(fā)生正和負的應(yīng)答并不斷調(diào)整其應(yīng)答性，因此免疫系統(tǒng)功能的失調(diào)也會對人體極為不利人體的識別能力異常容易導致過敏現(xiàn)象的發(fā)生(使用某種食物、注射藥物出現(xiàn)過敏反應(yīng)，甚至導致休克)，反之則會引起反復感染；人體的自我穩(wěn)定能力異常，會使免疫系統(tǒng)對自身的細胞作出反應(yīng)，引發(fā)自身免疫疾病。由此可見，人體免疫系統(tǒng)對人類的健康起著舉足輕重的作用，如果它的功能不穩(wěn)定，人類很有可能會被病毒、細菌這些病原體侵害、折磨。海藻是海洋水產(chǎn)資源的重要組成部分，海藻門褐子綱海帶目海帶科海帶屬的海帶(Lam/nar/aj即onicaaresch)是產(chǎn)量最高的海藻，我國的海帶產(chǎn)量位居世界首位。海帶又稱海洋蔬菜，含有豐富的功能性物質(zhì)，如碘、甘露醇、維生素(A、B、C、F)、?；撬嵋约叭梭w所需要的微量元素硒、鈷、鉻，是一種既有食用價值，又有藥用、保健、工業(yè)、農(nóng)業(yè)價值的大型藻類產(chǎn)品。褐藻多糖硫酸酯是一類硫酸化的多糖，存在于褐藻中，根據(jù)國際命名原則統(tǒng)一稱為fucoidan(褐藻糖膠或褐藻聚糖，巖藻聚糖，褐藻多糖硫酸酯)?，F(xiàn)在人們對褐藻多糖硫酸酯的組成有了較為清晰地了解，它是一類化學組成和結(jié)構(gòu)非常復雜的多糖，以巖藻糖和硫酸基為主，隨著藻類的不同還含有半乳糖，木糖，糖醛酸等其他成分。海帶Fucoidan由巖藻糖。半乳糖，木糖，糖醛酸，阿拉伯糖等單糖組成。以巖藻糖和半乳糖為主，二者比例大約為3:1。研究證實褐藻多糖硫酸酯能增加某些抗氧化酶的活性，減少自由基的產(chǎn)生，從而減輕自由基對肝臟、腎臟組織的攻擊。因此，通過清除自由基及抗氧化作用，褐藻多糖硫酸酯可發(fā)揮肝保護作用。另外，褐藻多糖硫酸酯在體外能直接清除超氧陰離子自由基和羥基自由基(0H),是一種很好的抗氧化劑；在體內(nèi)也有較強的清除活性氧自由基的能力，能顯著降低血清和組織中高脂質(zhì)過氧化物(LP0)的含量，顯著增強血清和組織中SOD活性。海帶硫酸多糖對小鼠腹腔巨噬細胞激活及細胞毒作用的影響(聊城大學學報，2004.17(2)56-57)研究認為海帶硫酸多糖能激活小鼠腹腔巨噬細胞，增強其免疫機能，對抵抗和殺死腫瘤細胞具有積極作用。海帶硫酸多糖對小鼠腹腔巨噬細胞的免疫調(diào)節(jié)作用(中國免疫學，2000.2(16))研究了一種包含L-巖藻糖、D-半乳糖等平均分子量為15000D的海帶多糖對小鼠吞噬細胞的激活作用。以腫瘤抑制率衡量，抑制腫瘤細胞病變有效率達到了86.5%。說明海帶多糖可以有效激活巨噬細胞，分泌細胞毒效應(yīng)分子，提高巨噬細胞過氧化物酶活性以及吞噬功能。已有多篇文獻公開了褐藻多糖硫酸酯的制備方法。日本專利昭46-2248采用十六烷氯化吡啶或十六烷三甲基溴化銨與褐藻多糖硫酸酯反應(yīng)成季胺鹽復合物，再利用該復合物對鹽的溶解度差異，用乙醇、甲醇和離子交換樹脂處理，純化除去褐藻膠、中性多糖和其它雜質(zhì)，而得到比較純化的褐藻多糖硫酸酸酯。CN1129109A則公開了由干海帶浸泡、數(shù)次過濾、二次乙醇提取、一次乙醇洗滌、配合調(diào)節(jié)ra范圍等的堿凝析法。CN1344565A則公開了另一種制備方法，包括原料預處理、控溫攪拌浸提、離心、濃縮、乙醇沉淀、無水乙醇脫水等步驟。CN1517356A則將巖藻聚糖硫酸酯配制成水溶液，加入過氧化氫、次氯酸或亞硝酸及其鹽，將所得混合溶液加熱，用截留分子量3000-5000的膜超濾，得到巖藻聚糖硫酸酯低聚糖。CN1616494A以天然海藻硫酸多糖為原料，將海藻硫酸糖溶液中加入抗壞血酸和過氧化氫，控制反應(yīng)溫度，恒溫降解時間為0.5-3hr，再透析或超濾，減壓濃縮，制得4-100KDa的低分子量海藻硫酸多糖產(chǎn)物。另外，CN1670028A、CN1392160A、CN1197674A也分別公開了采用絮凝等方法制備海藻多糖。在本發(fā)明中，以上發(fā)明公開的技術(shù)方案均可被引入獲得本發(fā)明所用的褐藻多糖硫酸酯。人參是一種常見的中藥材，本發(fā)明所述的人參是指植物分類學上五加科人參屬的植物，包括人參、西洋參、三七、苦參、黨參、太子參等。人參是一種名貴中藥，《神農(nóng)本草經(jīng)》將其列為上品，言其"補五臟、安精神、定魂魄、祛邪氣、明目、開心益智"。人參在臨床上一直以治療慢性虛損而著稱，人參中含有人參皂苷、多種氨基酸、多糖類、低分子肽類、維生素等成分，單體有人參皂苷Ral、Ra2、Rbl、Rb2、Rb3、Rc、Rd、Re、Rf、Rgl等，人參皂苷是其增強免疫功能的活性成分。人參對物理、化學、生物等各種有害刺激因素有非特異性的抵抗能力，可以使紊亂的人體機能恢復正常，主要表現(xiàn)在血壓、腎上腺、甲狀腺機能和血糖方面的雙向調(diào)節(jié)作用。現(xiàn)有的動物實驗證明，人參皂苷對小鼠的體液免疫和細胞免疫均有刺激作用，能促進周圍血液中的白細胞增加。在白細胞減少時，這種作用尤為明顯。還能增強小鼠腹腔巨噬細胞的吞噬功能，提高對血液中惰性膠體顆粒、金黃色葡萄球菌、雞血細胞等吞噬能力。劑量增大，給藥次數(shù)越多，作用越強。業(yè)已證實人參皂苷具有刺激體液免疫和細胞免疫的作用，能增強機體免疫功能，防止多種原因引起的白細胞下降。人參皂苷能增強網(wǎng)狀內(nèi)皮細胞和巨噬細胞的吞噬功能。即使停藥后激活狀態(tài)也可保持一周左右。人參還可促進抗體的生成，增加血清免疫球蛋白IgG,IgA，IgM的含量。人參皂苷Rgl能選擇性地增強老年大鼠免疫功能。目前針對人參皂苷防治化學性肝損傷的文獻報道和實際應(yīng)用并不多。人參皂苷CK對CC14致慢性肝損傷的影響(時珍國醫(yī)國藥，2006.17(1)38-39)用CC14致大鼠慢性肝損傷模型，觀察人參皂苷CK(O.3，1，3mg/kg)對大鼠血清天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(aspartatetransaminase,ALT)、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(alaninetransaminase,AST)、超氧化物歧化酶(superoxidedismutase,SOD)、丙二醛(malondialdehyde，MDA)及透明質(zhì)酸(hyaluronicacid,HA)、III型前膠原(pre-collagenIII，PCIII)的影響，并對肝臟組織進行病理學觀察證實了人參皂苷對肝損傷的防治效果。由于人參被認為是一種珍貴的中藥，多年來研究人員提出了多種提純?nèi)藚⒃碥盏募夹g(shù)方案。不同提取方法對人參皂苷提取率的影響(吉林農(nóng)業(yè)大學學報，2003.25(1)71-72)研究了采用甲醇、乙醇、超聲波等提取方法對人參皂苷提取率的影響。中國專利申請CN200410010936.9、CN200610093608.9、CN200610093612.5、CN200610201364.1等均研究了從人參中提取皂苷的方法。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種的組合物、制劑，同時本發(fā)明也公開了該組合物、制劑的制備方法、應(yīng)用。申請人研究發(fā)現(xiàn)通過將褐藻多糖硫酸酯、人參組合，本發(fā)明組合物防治化學性肝損傷、調(diào)節(jié)免疫力具有協(xié)同的效果。安全研究發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明制劑沒有明顯的毒性反應(yīng)，適合長期服用。本發(fā)明在本領(lǐng)域第一次引入褐藻多糖硫酸酯和人參或其有效成分進行組合用于作為防治化學性肝損傷的組合物。本發(fā)明申請人通過大量實驗研究首次確定了將褐藻多糖硫酸酯和人參或其有效成分組成的組合物用于防治化學性肝損傷的可行性。本發(fā)明在本領(lǐng)域第一次引入褐藻多糖硫酸酯和人參組合物用于調(diào)節(jié)人體免疫力。本發(fā)明申請人:通過大量實驗研究首次確定了將褐藻多糖硫酸酯和人參組合物用于調(diào)節(jié)人體免疫力的可行性。本發(fā)明技術(shù)方案提供了一種褐藻多糖硫酸酯和人參的組合物，包含活性成分褐藻多糖硫酸酯和具有明顯協(xié)同作用活性的人參。將本發(fā)明組合物用于藥物制劑時，還可選擇性的包括藥學上可接受的載體。相應(yīng)的，本發(fā)明提供了將該組合物用于防治化學性肝損傷的用途。在本發(fā)明提供的技術(shù)方案中，提供了本發(fā)明組合物的口服制劑，其中含有本發(fā)明組合物和藥學上可接受的載體。褐藻多糖硫酸酯和人參或其有效成分重量份數(shù)比可以是l:100-100:1，優(yōu)選為l:30-30:1，最優(yōu)選為1:10-10:1。本發(fā)明所用的褐藻多糖硫酸酯取材于海藻類生物，包括任何可以提供褐藻多糖硫酸酯的植物，包括馬尾藻、裙帶菜、羊棲菜、鼠尾藻、海黍子、昆布、泡葉藻或墨角藻等，優(yōu)選的植物為海帶，無論是人工養(yǎng)殖的還是天然生長的。從這些植物中獲得的褐藻多糖硫酸酯方法可以引用
背景技術(shù)：
中所述的技術(shù)方法，所獲得的分子量在十萬數(shù)量級水平上。從海帶、馬尾藻、海黍子中獲得的褐藻多糖硫酸酯平均分子量分別為350KD、550KD、980KD。本發(fā)明應(yīng)用時，可以使用這些分子量比較高的褐藻多糖硫酸酯，優(yōu)先選用分子量在5000D-200KD之間的低分子量的褐藻多糖硫酸酯，所用低分子量褐藻多糖硫酸酯可以從海藻中提取也可以從高分子量褐藻多糖硫酸酯解聚而來。需要指出的是，隨著技術(shù)的持續(xù)進步，可供本發(fā)明應(yīng)用的褐藻多糖硫酸酯分子量變化是落在本發(fā)明范圍內(nèi)的。所用的褐藻多糖硫酸酯的純度不小于50%，優(yōu)選為不小于70%，更優(yōu)選為不小于90%，最佳是不小于95%。根據(jù)所用藻類種類不同，所獲得的褐藻多糖硫酸酯主要的基團巖藻糖、硫酸基含量存在一定的差異，但這種差異不影響本發(fā)明應(yīng)用于防治化學性肝損傷，所帶來的只是保健效果的強化或者弱化，這是屬于本發(fā)明范圍之內(nèi)的。本發(fā)明所指的褐藻多糖硫酸酯涵蓋化學上所普遍接受的褐藻多糖硫酸酯定義的一類化學物質(zhì)。本發(fā)明所用人參有效成分不受提取工藝的限制，可以引用多種方法來獲得。本發(fā)明
背景技術(shù)：
中公開的技術(shù)方案均可以用來獲得本發(fā)明所述的人參。本發(fā)明應(yīng)用的人參有效成分是人參中的皂苷，因此本發(fā)明所應(yīng)用的人參可以是人參藥材進行粉碎后的藥粉、或?qū)⑷藚⑻崛『蟛捎闷涮崛∥铩⒒蛘呖梢灾苯硬捎萌藚⒌幕钚猿煞秩藚⒏奋?。這些人參皂苷單體包括Ral、Ra2、Rbl、Rb2、Rb3、Rc、Rd、Re、Rgl、Rh2、Rg3、Rl等的一種或多種的組合。具體到人參屬下面的植物，比如人參、三七、西洋參等上述各成分類別和含量會有所區(qū)別。人參屬人參主要含有Rg，三七主要含有Re、Rl,西洋參主要含有Rbl、Rb2、Rd、Re、Rgl。在結(jié)構(gòu)和功效上人參屬植物提取的皂苷單體是相似的，因此本發(fā)明所指人參涵蓋了五加科人參屬植物可獲得的所有人參皂苷單體。本發(fā)明所用人參優(yōu)選人參提取物，更優(yōu)選采用人參的水溶性或脂溶性提取物，最優(yōu)選的人參提取物為人參的醇或/和水提取物。在本發(fā)明中，一個優(yōu)選的提取工藝可以是將人參葉用水煎煮后獲得的煎煮液過吸附柱，用乙醇洗脫，優(yōu)選濃度為50%-95%乙醇，用量為5-IO倍量，溫度4-3CTC，1-5小時，回流提取3-8次即可得人參提取物。本發(fā)明發(fā)明人同時研究了將褐藻多糖硫酸酯人參組合物加入維生素C所帶來的效果改善，申請人的實驗顯示維生素C可以在本發(fā)明組合的基礎(chǔ)上進一步對本發(fā)明效果有所提高，因此本發(fā)明還包括著這樣一個技術(shù)方案在本發(fā)明組合物的基礎(chǔ)上，加入適量維生素C來改善本發(fā)明的實施效果。本發(fā)明組合物可以直接制成制劑，也可以選擇性地加入藥學載體然后制成口服制劑。本發(fā)明組合物對防治人體化學性肝損傷、調(diào)節(jié)免疫力具有積極作用，因此可以適用于亞健康人群做保健品。本發(fā)明所述的保健品泛指可以提高和保護人體健康狀態(tài)的產(chǎn)品，包括食物和飲料。所指的食物包括但不限于小麥制品、淀粉制品、肉類制品、植物提取物、奶乳、保健糖等；所指的飲料包括所有人體可飲用的液體制品包括普通的飲用飲料和用于提高特定機能的功能飲料，比如運動飲料。本發(fā)明在應(yīng)用于保健品時，還可以在最終制備為產(chǎn)品時加入其他營養(yǎng)成分使用，這些營養(yǎng)物質(zhì)包括淀粉、葡萄糖、乳糖、甘露糖、蔗糖、糖漿、蜂蜜、多種氨基酸、鈣鐵鋅、維生素等。本發(fā)明保健品具體生產(chǎn)時，可以與輔料結(jié)合使用。輔料可包括賦形劑、抗氧劑、PH調(diào)節(jié)劑、防腐劑、等滲劑等任何營養(yǎng)學上可接受的、安全性有保證的輔料。本發(fā)明的組合物可以制備為多種類型，包括膠囊、片劑、粉劑、顆粒劑、口服液或糖漿等，優(yōu)選為膠囊和口服液。改變產(chǎn)品的外表存在形式屬于本領(lǐng)域技術(shù)人員可以聯(lián)想到的技術(shù)方案，因此改變最終產(chǎn)品的形狀屬于本發(fā)明的覆蓋范圍。申請人對本發(fā)明組合物功能進行了研究，發(fā)現(xiàn)與褐藻多糖硫酸酯或人參單獨應(yīng)用相比，本發(fā)明組合物應(yīng)用可顯著降低肝臟、腦組織和血液中的過氧化物含量、提高體內(nèi)抗氧化劑活性、清除自由基和脂質(zhì)過氧化作用，具有協(xié)同的療效。長期服用本發(fā)明產(chǎn)品具有護肝作用，并對預防和/或治療化學性肝損傷有積極作用。本發(fā)明應(yīng)用可顯著提高調(diào)節(jié)人體免疫力的效果，并且能同時調(diào)節(jié)體液、淋巴、細胞等多個免疫系統(tǒng)，具有協(xié)同的療效。具體實施例方式如下實施例旨在說明本發(fā)明具體實施方案，并不限定本發(fā)明保護范圍。需要特別指出的是，以下制備實施例中所述的人參提取物，是人參的醇提取物，優(yōu)選采用本發(fā)明說明書第6頁中優(yōu)選的提取方法提取獲得，其中含有多種人參皂苷成分。當然，組合物中還可直接采用人參藥材或市售的人參提取物或人參皂苷或人參單體皂苷，這些均在本申請的保護范圍之內(nèi)。制備實施例1褐藻多糖硫酸酯人參提取物淀粉2rag20mg18mg15mg10mg2mg微晶纖維素硅膠將上述成分攪拌混勻成組合物，制備實施例2褐藻多糖硫酸酯人參提取物淀粉甘露醇葡萄糖微品纖維素硅膠20mg8mg20mg22mg15mg10mg2mg將上述成分攪拌混勻成組合物，i制備實施例3褐藻多糖硫酸酯50mg人參提取物6mg淀粉24mg甘露醇24mg葡萄糖15mg微品纖維素10mg硅膠3mg將上述成分攪拌混勻成組合物，》制備實施例4褐藻多糖硫酸酯40mgl定重量后制成膠囊l定重量后制成膠囊l定重量后制成膠囊c人參提取物血紅素鐵維生素C葉酸10mg"7mg8ug300ug將上述成分混勻研磨成粉末溶解于去離子水至1000ml，進行密封、滅菌和分裝，制備為符合特定規(guī)格的口服液。在大規(guī)模生產(chǎn)中本發(fā)明制備口服液可以在用量上進行放大，充分溶解后進行罐裝然后密封、滅菌和分裝為符合規(guī)格的口服液，比如500ral，1L等。對比實施例1褐藻多糖硫酸酯淀粉甘露醇微晶纖維素硅膠20mg20mg24mg16mg10rag2mg將上述成分攪拌混勻成組合物，對比實施例2l定重量后制成膠囊人參提取物淀粉葡萄糖微晶纖維素硅膠8mg20mg20mg16mg10mg2mg將上述成分攪拌混勻成組合物，測定重量后制成膠囊。實驗例1實驗材料小白鼠，健康狀況良好。本發(fā)明組合物，褐藻多糖硫酸酯人參提取物4:1，溶于水制為混懸液。實驗項目急性毒性試驗，30天喂養(yǎng)試驗實驗方法l.急毒性試驗選擇小白鼠40只，雌雄各20只，體重為18-22g。雌雄小鼠各隨機分成四個劑量組16.00，7.27，3.31,1.50g/KG(bw),小鼠灌胃后連續(xù)觀察15d，記錄毒性表現(xiàn)和死亡情況。2.30d喂養(yǎng)試驗采用的樣品同急毒性試驗，選用體重為55-70g的Wistar大鼠，將大鼠分為對照組和三個劑量組，高劑量B組采用4.50g/kg(bw)，中劑量C組0.90g/kg(bw),低劑量D組0.16g/kg(bw)，每組十只大鼠，對照A組喂食正?；A(chǔ)飼料，飼料攝入量按照大鼠體重10%計算。連續(xù)觀察三十天。觀察指標包括(1)臨床觀察動物的一般表現(xiàn)、行為、中毒癥狀、死亡癥狀，每周稱取一次體重和攝入量，計算食物總利用率。(2)血常規(guī)及生化指標在試驗第三十一天微靜脈取血，測定血紅蛋白HGB、紅細胞RBC、白細胞WBC。試驗結(jié)果1.表l:小鼠急毒性試驗結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>假定生產(chǎn)的保健品以成人60kg體重日攝入量0.05g/kg.bw，對照我們采用的最高對照組，相當于成人攝入量的320倍。試驗觀察十四天未見中毒癥狀，死亡數(shù)為零。受試物對兩種性別的小鼠急毒性LD5C均大于15.OOg/kg.bw.根據(jù)現(xiàn)行的毒性分級，屬于無毒級別。2.30天喂養(yǎng)試驗結(jié)果(1)對大鼠體重的影響表2對大鼠體重的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>由上表可知，各組動物生長正常。與對照組比較，各劑量組與之不存在統(tǒng)計學差異(P〉0.05).(2)對大鼠食物吸收率的影響表3對大鼠食物吸收率的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>動物喂食30天，動物未出現(xiàn)拒食現(xiàn)象。各劑量組動物與對照組動物食物吸收率不存在統(tǒng)計學差異(P〉0.05)(3)血清學檢查結(jié)果表4血清學檢査結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>由此可見，劑量組與對照組沒有顯著的統(tǒng)計學差異(P>0.05)。經(jīng)過上述實驗分析，可以認為本品無副作用實驗例2材料與方法Wistar大鼠，188-212g;本發(fā)明組合物，褐藻多糖硫酸酯人參提取物4:1,溶于水制為混懸液；四氯化碳；谷丙轉(zhuǎn)氨酶ALT;谷草轉(zhuǎn)氨酶AST;甘油三酯TG。劑量分組設(shè)置三個劑量組500，250，120mg/kd.bw.d，受試物稀釋至所需要的濃度，另外設(shè)置褐藻多糖硫酸酯對照組(簡寫為A對照組)、人參提取物對照組(B對照組)和四氯化碳模型組、陰性對照組。褐藻多糖硫酸酯對照組給與褐藻多糖硫酸酯250mg/kd.bw.d,人參提取物對照組給與人參提取物250mg/kg.bw.d，四氯化碳模型組，陰性對照組給與蒸餾水。實驗方法以2%四氯化碳造急性化學肝臟損傷模型各劑量組依據(jù)設(shè)定劑量給予本發(fā)明組合物(灌胃量5.00ml/kg.bw),A，B對照組分別給予褐藻多糖硫酸酯、人參提取物。空白對照組、模型組給予蒸餾水，連續(xù)三十天。第30天將各組動物隔夜禁食16小時，然后將模型組、組合物劑量組、A，B對照組一次性灌胃給予四氯化碳(2%濃度、5ml/kg.Bw).劑量組、A、B對照組繼續(xù)給與受試物至24小時后結(jié)束試驗，處死動物。，取血分離血清，測定ALT、AST以及肝組織中TG含量，并取肝臟作病理切片。病理組織學觀察肝細胞以變性、壞死等為技術(shù)指標，試驗結(jié)果表5肝損傷模型治療效果<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>由上表可見，本發(fā)明組合物高劑量組的ALT低于四氯化碳模型組，差異顯著；中、高劑量組的AST低于四氯化碳模型組，差異顯著。同時還可以看出，在同等劑量250mg/kg.bw.d下，本發(fā)明效果明顯優(yōu)于單獨的褐藻多糖硫酸酯、人參提取物，以(ALT、AST、TG)指標評價，分別取得了相對于褐藻多糖硫酸酯、人參提取物(26.6%，8%，4.8%)、(28.7%,9.5%，8.7%)的改善。同時我們注意到，在高劑量下本發(fā)明組合物相對于中劑量改善效果并沒有明顯改進。肝臟組織病理學檢査結(jié)果如下表(病理改變程度采用平均打分法)表6肝臟病理學檢査結(jié)果<formula>formulaseeoriginaldocumentpage13</formula><table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>山上可見，在病理改變程度上，本發(fā)明組合物明顯優(yōu)于褐藻多糖硫酸酯、人參提取物的單獨應(yīng)用，以同等劑量下病理改變程度評價，相對于褐藻多糖硫酸酯、人參提取物取得了11.4%、12.8%的改善。綜合上述結(jié)果，可以看到本發(fā)明組合物應(yīng)用防治化學性肝損傷藥物或者保健品是一種無毒性、長期服用安全的組合物，并且防治效果非常明顯。對比文獻中記載的現(xiàn)有的防治化學性肝損傷的效果，本發(fā)明應(yīng)用效果更好。實驗例3材料與方法選用雌性小鼠，隨機分為四組，體重18-22g。本發(fā)明組合物，其中褐藻多糖硫酸酯人參提取物3:l，溶解于去離子水制成混懸液。注射用環(huán)磷酰胺(cyclophospha—mide，Cy)，用于免疫力低下模型構(gòu)建。綿羊紅細胞(she印e-rythrocyte，SRBC)。劑量分組按照人體正常使用量成人60kg體重日攝入量0.05g/kg.Bw,涉及分成高中低三個劑量組(劑量分別相當于TH常人使用量的5，2，l倍)，每組十只。另外設(shè)置褐藻多糖硫酸酯對照組、人參提取物對照組、模型組、對照組，分別給予正常人體用量2倍的褐藻多糖硫酸酯、人參提取物、蒸餾水、蒸餾水，分別記為A對照組、B對照組、模型組。采用灌胃給藥，每R—次。20天后測定各項免疫指標。其中在第十五天時除對照組外每只小鼠腹腔注射Cy50mg/kg(對照組給予等容量生理鹽水)連續(xù)2d，制備免疫功能低下的動物模型.第二十天每鼠尾靜脈注入離心后50%的印度墨汁(O.10.lml/10g)，2min禾口10min后分別從眼球取血401，并將其加到4ml0.1%MaHC03溶液中，600nm波長測定吸光度值，按文獻方法測定吞噬指數(shù)。記錄小鼠體重，活殺取胸腺并稱濕重，以小鼠胸腺重/體重(mg/g)作為胸腺指數(shù)。半數(shù)溶血值、淋巴細胞轉(zhuǎn)化率的測定方法采用常規(guī)的文獻方法，比如文獻淮山藥多糖免疫調(diào)節(jié)作用研究(時珍國醫(yī)國藥，2007.18(5))所采用的方案。DTH測試方法如下制備DTH模型，第十五天每鼠腹部涂1%DNFB丙酮麻油溶液50ml致敏，次日同劑量強化l次，同時除對照組外制備免疫低下模型，該模型構(gòu)建方法參考上述用于測試胸腺指數(shù)、吞噬指數(shù)的模型構(gòu)建方法。致敏后三天，將1%DNFB溶液均勻涂抹于小鼠右耳進行攻擊。攻擊24h，引頸處死小鼠，剪下左右耳殼，用直徑9mm打孔器打下圓耳片稱重，左右耳片之差為腫脹度?？蛊谀芰y試無關(guān)于免疫力，因此沒有模型組，也無需采用免疫力低下模型構(gòu)建，只需對照組即可。結(jié)果1表7對小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)DTH的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>結(jié)果2:表8對正常小鼠免疫器官胸腺指數(shù)的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>結(jié)果3:表9對小鼠巨噬細胞功能的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>結(jié)果4:<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>結(jié)果5:<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>結(jié)果6:<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>中劑量10859.37±11.5020高劑量101108.0002±10.50上述試驗結(jié)果顯示，本發(fā)明所公開的組合物用途有效提高了人體免疫能力。對比對照實驗組的的數(shù)據(jù)，本發(fā)明提高免疫力的效果優(yōu)于使用單一成分。本發(fā)明調(diào)節(jié)免疫功能涵蓋了調(diào)節(jié)體液系統(tǒng)和吞噬細胞及淋巴系統(tǒng)，能夠全方位的增強人體免疫力。表現(xiàn)在l.在正常劑量下全方位的增強免疫功能，包括體液免疫、吞噬細胞、淋巴免疫。2.把組合物單位濃度提高一定劑量(比如5倍量)，可以抑制人體免疫機能的增強，或者降低人體免疫機能。說明本發(fā)明用途可以雙向調(diào)節(jié)免疫機能，高劑量下對免疫力亢奮有一定抑制作用。權(quán)利要求1.一種口服的組合物，含有褐藻多糖硫酸酯和人參或其有效成分，其中，人參為五加科人參屬植物的藥材，人參有效成分選自人參提取物或人參皂苷，所述人參提取物為水提取物、醇提取物、或脂溶性提取物，人參皂苷選自人參皂苷Ra1、Ra2、Rb1、Rb2、Rb3、Rc、Rd、Re、Rg1、Rh2、Rg3、R1的一種或多種，。2.根據(jù)權(quán)利要求1的組合物，其含有褐藻多糖硫酸酯和人參提取物。3.根據(jù)權(quán)利要求1的組合物，其含有褐藻多糖硫酸酯和人參藥材。4.根據(jù)權(quán)利要求1的組合物，其其含有褐藻多糖硫酸酯和人參皂苷。5.根據(jù)權(quán)利要求1的組合物，其中褐藻多糖硫酸酯和人參或其有效成分的重量比為1:100-跳1。6.根據(jù)權(quán)利要求1的組合物，其中的組合物可以是藥物或保健品的形式。7.根據(jù)權(quán)利要求1的組合物，所述組合物中還含有藥學可接受的載體或保健品可接受的添加劑。8.根據(jù)權(quán)利要求1的組合物，所述組合物為片劑、丸劑、膠囊劑、顆粒劑、粉劑、口服液或糖漿。9.權(quán)利要求18的組合物在制備保肝藥物或保健品中的用途。10.權(quán)利要求18的組合物在制備治療或預防化學性肝損傷的藥物或保健品中的用途。11.權(quán)利要求18的組合物在制備調(diào)節(jié)免疫力的藥品或保健品中的用途。全文摘要本發(fā)明公開了一種組合物，該組合物含有褐藻多糖硫酸酯和人參。本發(fā)明公開了本發(fā)明組合物在防治化學性肝損傷、調(diào)節(jié)免疫力藥品和保健品中的應(yīng)用。發(fā)明人的研究表明，本發(fā)明組合物應(yīng)用于藥品或者保健品長期服用對調(diào)節(jié)人體免疫系統(tǒng)平衡、增強對疾病抵御能力、治療化學性肝損傷均有良好的效果。本發(fā)明同時公開了組合物的制備工藝。文檔編號A61K9/20GK101361774SQ200810119498公開日2009年2月11日申請日期2008年9月1日優(yōu)先權(quán)日2008年9月1日發(fā)明者郝守祝申請人:北京世紀博康醫(yī)藥科技有限公司