專利名稱：：2-(氨基酰色氨酰)-β-四氫咔啉-3-羧酸芐酯及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及咔啉羧酸的衍生物，尤其涉及具有抗腫瘤活性的2-(氨基酰色氨酰)-|3-四氫咔啉-3-羧酸芐酯及其制備方法，本發(fā)明還涉及它們作為抗腫瘤抑制劑的應(yīng)用，屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域。惡性腫瘤是一種嚴(yán)重威脅人類健康的常見病和多發(fā)病，人類因惡性腫瘤而引起的死亡率是所有疾病死亡率的第二位，僅次于心腦血管疾病。腫瘤的治療方法有手術(shù)治療，放射治療和藥物治療(化學(xué)治療)。目前，化學(xué)治療仍然是臨床治療腫瘤的主要手段。尋找抗腫瘤藥物是新藥研究的熱點(diǎn)之一。發(fā)明人認(rèn)識(shí)到，將四氫咔啉羧酸和L-色氨酸偶聯(lián)后再羧基端引入氨基酸可能產(chǎn)生抗腫瘤作用。按照這種構(gòu)想，發(fā)明人提出本發(fā)明。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明目的之一是提供一類具有抗腫瘤活性的化合物；本發(fā)明目的之二是提供一種制備上述具有抗腫瘤活性化合物的方法；本發(fā)明上述目的是通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的具有抗腫瘤活性的通式I化合物其中，AA選自纈氨酸殘基、天冬氨酸-4-環(huán)已酯、谷氨酰胺殘基、叔丁氧羰基賴氨酸殘基、亮氨酸殘基、丙氨酸殘基、色氨酸殘基、O-芐基絲氨酸殘基、苯丙氨酸殘基、異亮氨酸殘基、甘氨酸殘基、叔丁氧羰基組氨酸殘基、蛋氨酸殘基、谷氨酸-5-環(huán)已酯、天冬酰
背景技術(shù)：
：通式I胺殘基、脯氨酸殘基、硝基精氨酸殘基、蘇氨酸殘基或酪氨酸殘基。一種制備上述通式I化合物的方法，該方法包括(1)(在NaOH、(Boc)20和二氧六環(huán)存在下)將色氨酸轉(zhuǎn)變?yōu)锽oc-色氨酸；(2)(在稀H2S04和甲醛的存在下)將色氨酸轉(zhuǎn)變?yōu)閜-四氫咔啉-3-羧酸；(3)(在多聚磷酸和芐醇存在下加熱)將p-四氫咔啉-3-羧酸轉(zhuǎn)變?yōu)閜-四氫咔啉-3-羧酸芐酯；(4)(在SOCl2和甲醇存在下)將L-色氨酸轉(zhuǎn)變?yōu)長-色氨酸甲酯；(5)(在DCC、HoBt存在下)將Boc-L-氨基酸與L-色氨酸甲酯縮合制備Boc-氨基酰色氨酸甲酯；(6)(在NaOH、甲醇的存在下，冰浴條件下)將BoC-氨基酰色氨酸甲酯轉(zhuǎn)化為BoC-氨基酰色氨酸；(7)(在DCC、HoBt存在下)將Boc-氨基酰色氨酸和p-四氫咔啉羧酸芐酯縮合為2-(Boc-氨基酰色氨酰)-卩-四氫咔啉-3-羧酸芐酯；(8)(在HOAc、氯化氫和乙酸乙酯的存在下)將2-(BOC-氨基酰色氨酰)-|3-四氫咔啉-3-羧酸芐酯轉(zhuǎn)變?yōu)?-(氨基酰色氨酰)-卩-四氫咔啉-3-羧酸芐酯。其中，步驟(6)中所述的Boc-L-氨基酸選自Boc-L-纈氨酸、Boc-L-天冬氨酸-4-環(huán)已酯、Boc-L-谷氨酰胺、Boc-L-叔丁氧羰基賴氨酸、Boc-L-亮氨酸、Boc-L-丙氨酸、Boc-L-色氨酸、Boc-L-O-芐基絲氨酸、Boc-L-苯丙氨酸、Boc-L-異亮氨酸、Boc-甘氨酸、Boc-L-叔丁氧羰基組氨酸、Boc-L-蛋氨酸、Boc-L-谷氨酸-5-環(huán)已酯、Boc-L-天冬酰胺、Boc-L-脯氨酸、Boc-L-硝基精氨酸、Boc-L-蘇氨酸或Boc-L-酪氨酸。本發(fā)明的又一目的是提供一種治療腫瘤的藥用組合物，該藥用組合物由治療上有效劑量的本發(fā)明通式I化合物與藥學(xué)上可接受的賦型劑或者輔加劑組成,即將有效量的本發(fā)明通式I化合物與藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑配合后，按本領(lǐng)域常規(guī)的制劑方法將其制備成任意一種適宜的藥物組合物。通常該組合物適合于口服給藥和注射給藥，也適合其他的給藥方法。該組合物可以是片劑、膠囊劑、粉劑、顆粒劑、錠劑、栓劑，或口服液等液體制劑形式。根據(jù)不同的給藥方法，本發(fā)明藥物組合物可以含有0.1%-99%重量，優(yōu)選10-60%重量的本發(fā)明化合物。本發(fā)明在腫瘤細(xì)胞模型和小鼠S哪肉瘤模型上評(píng)價(jià)本發(fā)明通式I化合物(4a-t)的抗腫瘤活性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明通式l化合物具有優(yōu)秀的抗腫瘤活性，可作為抗腫瘤劑應(yīng)用。圖1本發(fā)明通式1化合物的結(jié)構(gòu)式。圖2本發(fā)明通式1化合物的合成路線圖。具體實(shí)施例方式為了進(jìn)一步闡述本發(fā)明，下面給出一系列實(shí)施例。這些實(shí)施例完全是例證性的，它們僅用來對(duì)本發(fā)明進(jìn)行具體描述，不應(yīng)當(dāng)理解為對(duì)本發(fā)明的限制。實(shí)施例l.制備Boc-L-氨基酸冰浴下2mmol先將L-氨基酸溶于10mlNaOH水溶液(2N)，然后加入4.9g(2.2mmo1)(Boc)20與5ml1,4-二氧六環(huán)的溶液。攪拌反應(yīng)。反應(yīng)過程中需要減壓抽去生成的C02氣體。反應(yīng)約需要48小時(shí)。TLC檢測反應(yīng)結(jié)束后，減壓蒸去l,4-二氧六環(huán)，殘留物用飽和KHS04水溶液調(diào)pH2，50ml乙酸乙酯萃取三次，合并的乙酸乙酯層用飽NaCl水溶液洗三次后用無水NaS04干燥過夜，過濾、濾液減壓濃縮得到的無色固體用乙酸乙酯-石油醚重結(jié)晶。產(chǎn)率在80%-96%之間。依此通法合成了Boc-L-纈氨酸、Boc-L-谷氨酰胺、Boc-L-(Boc)賴氨酸、Boc-L-亮氨酸、Boc-L-丙氨酸、Boc-L-色氨酸、Boc-L-O-芐基絲氨酸、Boc-L-苯丙氨酸、Boc-L-異亮氨酸、Boc-L-甘氨酸、Boc-L-(Boc)組氨酸、Boc-L-蛋氨酸、Boc-L-天冬酰胺、Boc-L-脯氨酸、Boc-L-蘇氨酸和Boc-L-酪氨酸等16種叔丁氧羰基保護(hù)的L-氨基酸。實(shí)施例2制備p-四氫昨啉-3-羧酸將400ml水置于500的圓底燒瓶中,緩慢加入0.2濃硫酸搖勻.在得到的稀硫酸溶液中加入5.0g(24.5mmol)L-色氨酸。攪拌至L-色氨酸完全溶解,往得到的溶液中加入10ml濃度為35。/。的甲醛,攪拌10min后析出大量固體,TLC板檢測L-色氨酸原料點(diǎn)消失，停止攪拌，在反應(yīng)液中緩慢滴入8ml氨水，調(diào)pH7,靜置6h,減壓濾出生成的沉淀,用水沖洗幾次，干燥得4.9g(95%)標(biāo)題化合物，為淺黃色固體。MP:ESI-MS(m/z):217[M+H]+.實(shí)施例3制備p-四氫咔啉-3-羧酸芐酯取2g多聚磷酸加熱攪拌使之溶于20ml芐醇(加熱溫度不高于5(TC),待完全溶解后加入lgP-四氫咔啉-3-羧酸，升溫至80'C攪拌使之溶解，反應(yīng)液由黃綠色逐漸變棕色,TLC板檢測反應(yīng)12小時(shí)，(3-四氫味啉-3-羧酸消失后冷卻,加入50ml乙醚和70ml水強(qiáng)力攪拌過夜，有大量黃色固體析出,過濾,得到的黃色塊狀固體用乙醚和水反復(fù)洗，得到1.3g粉末狀淺黃色昨啉羧酸節(jié)酯磷酸鹽。該鹽混懸于乙酸乙酯和水的混合液中，冰浴下滴加三乙胺溶液至反應(yīng)液中無不溶顆粒且反應(yīng)液透明。繼續(xù)攪拌6h，分出的乙酸乙酯層用5%碳酸氫鈉水溶液洗6次，飽和氯化鈉水溶液洗3次,分出乙酸乙酯層用無水硫酸鈉固體千燥、過濾、濾液減壓濃縮，殘留物重結(jié)晶得0.9g(67%)標(biāo)題化合物，為淺黃白色粉末。ESI(m/e)307[M+H]+。實(shí)施例4制備L-色氨酸甲酯鹽酸鹽50ml無水甲醇在冰浴下滴加3.75ml(50mmo1)氯化亞砜，30min內(nèi)滴加完畢后，分批加入10g(42mmol)L-色氨酸，室溫?cái)嚢?4h，TLC(CHCyMeOH二2:3)監(jiān)測至原料消失終止反應(yīng)。水泵抽走未反應(yīng)完的氯化亞砜SOCl2和HCl，用乙醚反復(fù)研磨得無色固體，甲醇-乙醚重結(jié)晶，得14.8g(95%)L-色氨酸甲酯鹽酸鹽為無色固體。實(shí)施例5制備Boc-氨基酰色氨酸甲酯的通法將11.8mmolBoc-AA溶于35ml無水四氫呋喃(THF),冰浴下往里加L4g(14.2mmoDN-羥基苯并三唑(HOBt)、2.1g(14.2mmo1)二環(huán)己基羰二亞胺(DCC)和15ml無水四氫呋喃(THF)的溶液。反應(yīng)混合物冰浴攪拌20分鐘后加入2.9g(9.5mmoDL-色氨酸甲酯與6ml無水四氫呋喃(THF)并用N-甲基嗎啉調(diào)節(jié)(NMM)調(diào)pH9的溶液。得到的混合液室溫反應(yīng)24h，TLC(展開劑CHCl3:MeOH=10:1)顯示咔啉羧酸芐酯消失。停止反應(yīng)，濾除二環(huán)己基脲(DCU)，濾液減壓濃縮至干。殘留物用乙酸乙酯溶解，乙酸乙酯溶液分別用飽和NaHC03水溶液，5XKHS04ZK溶液，飽和NaCl水溶液洗5次。分出的乙酸乙酯溶液用無水Na2S04干燥過夜。濾除Na2S04，濾液減壓濃縮，得到無色固體,收率在70%-86%之間。實(shí)施例6Boc-氨基酰色氨酸的制備通法在50ml的圓底燒瓶中加入1.12mmol化合物Boc-氨基酰色氨酸甲酯，適量甲醇，攪拌至澄清。冰浴冷卻下加入氫氧化鈉水溶液(2)，冰浴反應(yīng)10h.，TLC監(jiān)測原料斑點(diǎn)消失，緩慢加入2N鹽酸調(diào)節(jié)反應(yīng)液pH7，減壓回收溶劑，殘留物用20ml乙酸乙酯和20ml水溶解，繼續(xù)緩慢加入2N鹽酸調(diào)節(jié)水相pH2，水相用乙酸乙酯提取(20mlx3)，乙酸乙酯層棄去，水層用固體氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH7，析出大量固體，過濾，濾餅用水洗滌，干燥，得標(biāo)題化合物。實(shí)施例72-(Boc-氨基酰色氨酰)-卩-四氫咔啉-3-羧酸芐酯的制備通法冰浴下往2.4mmo1Boc-氨基酰色氨酸與15ml無水四氫呋喃(THF)的溶液中里加600mg(2.5mmo1)N-羥基苯并三唑(HOBt)、800mg(2.5mmo1)二環(huán)己基羰二亞胺(DCC)和10ml無水四氫呋喃(THF)的溶液。反應(yīng)混合物冰浴攪拌20分鐘后加入3.6g(2.4mmo1)咔啉羧酸芐酯和6ml無水四氫呋喃(THF)并用N-甲基嗎啉調(diào)節(jié)pH9的溶液。得到的反應(yīng)混合物室溫反應(yīng)過夜。TLC(展開劑CHCl3:MeOH=10:1)顯示咔啉羧酸芐酯消失。停止反應(yīng)，濾除二環(huán)己基脲(DCU)，濾液減壓濃縮至干。殘留物用乙酸乙酯溶解，乙酸乙酯溶液分別用飽和NaHC03水溶液，5%KHS04水溶液，飽和NaCl水溶液洗5次。分出的乙酸乙酯溶液用無水Na2S04干燥過夜。濾除Na2S04，濾液減壓濃縮，殘留物經(jīng)硅膠柱層析純化得標(biāo)題化合物。實(shí)施例82-(Boc-纈氨酰色氨酰)-p-四氫咔啉-3-羧酸節(jié)酯(3a)的數(shù)據(jù)1.31g(63.3%)。Mp111-114°C;ESI(m/e)364[M+H]+;[a]D20=41.00(c=1.0,甲醇);工H-NMR(DMSO-d6,500MHz)5=10.87(d,J=10Hz,1H),8.33(t,J=7.5Hz,1H),7.67(d，J=5Hz，1H),7.51(d,J=10Hz,1H),7.41(m,4H),7.21(m,4H),4.95(s,1H),4.33(m,4H),4.18(m,2H),4.03(t,J=10Hz,IH)，3.305(d,J=5Hz,1H),3.14(m,2H)，1.38(s,3H),0.83(s,3H)。實(shí)施例92-(Boc卞環(huán)已酯基谷氨酰色氨酰)-p-四氫咔啉-3-羧酸芐酯(3b)的數(shù)據(jù)L06g(60.6%)。Mp121-124°C;ESI(m/e)364[M+H]+;[a]D20=36.33(c二l.O,甲醇)i腦MR(DMSO-d6,500MHz)S=10.80(s,1H),8.01(s,1H),8.65(d,J=5Hz,IH)，8.27(d,J=5Hz,1H),7.65(d，J=10Hz，1H),7.515(d,J=10Hz，1H),7.20(m,4H),7.18(m,4H)，5.64(d,J=10Hz，2H)，4.99(m,2H),4.22(s，1H),3.26(s,1H),3.12(m,2H)，1.35(s,4H)。實(shí)施例102-(Boc-谷氨酰胺酰色氨酰)-P-四氫咔啉-3-羧酸芐酯(lc)的數(shù)據(jù)0.53g(74.6%)。Mp165-167°C;ESI(m/e)721[M+H]+;[a〗D20=16.86(。=1.0,甲醇乂H-NMR(DMSO-d6,500MHz)S=10.93(s，1H),8.33(s，1H),7.63(m,5H),7.31(m,4H),7.11(t,J=10Hz，IH)，5.64(d,J=10Hz,2H),5.61(d,J=5Hz,2H),5.14(q，J=15Hz,1H),4.27(d,J=15Hz,2H),3.15(m，2H)，2.27(q,J=5Hz,2H),2.10(s,2H),1.26(t,1H)。實(shí)施例112-(Boc-賴氨酰色氨酰)-p-四氫咔啉-3-羧酸節(jié)酯(3d)的數(shù)據(jù)1.43g(79.4%)。Mp109-111。C;ESI(m/e)830[M+H]+;[汰]020=49.43(c^.0,甲醇);4陽NMR(DMSO-d6,500MHz)5=10.90(d,J=15Hz,1H)，8.45(d，J=5Hz,1H),8.36(d,J=10Hz,IH)，7.36(d,J=10Hz,IH)，7.22(m,5H),7.19(m,4H),7.13(m,3H),5.74(d，J=5Hz，2H),4.99(m,2H),4.49(d，J=5Hz,2H),3.09(d,J=5Hz,IH),2.88(m,3H)，1.37(s,3H),1.22(s,6H),1.05(m,9H)。實(shí)施例132-(Boc-亮氨酰-色氨酰)-P-四氫昨啉-3-羧酸芐酯(3e)的數(shù)據(jù)1.31g(63.3%).Mp:123墨155°C;ESI(m/e)707[M+H]+;[a]D20=72.93(c:l.O,甲醇);力-NMR(DMSO-c/6,500MHz)5=10.94(d,J=15Hz，IH),8.31(d，J=10Hz,IH),7.56(dd,J=10Hz,J=5Hz,IH)，7.23(m，5H),7.19(m，5H),7.07(t,J=7.5Hz，IH),5.88(s,2H),5.33(dd,J=20Hz,J=15Hz,IH),4.86(m,2H),2.97Cm,2H),1.41(m,2H)，1.38(s,3H),0.87(d,J=5Hz,3H)。實(shí)施例142-(Boc-丙氨酰色氨酰)-p-四氫咔啉-3-羧酸芐酯(3f)的數(shù)據(jù)1.66g(73.2%);Mp115-117。C;ESI(m/e)664[M+H]+;[ct]D20=71.16(c=1.0,甲醇);iH-NMR(DMSO-4,500MHz)S=10.95(d，J=15Hz,1H),8.58(d,J=5Hz,IH),7.226(t,J=10Hz,IH),7.22(m，5H),7.16(m，4H),6.76(dd,J=10Hz,J=5Hz,IH),5.68(d,J=5Hz,IH),5.30(s,2H),5.08Cm,2H),4.25(t,J=7.5Hz,2H),3.97(m,2H),1.41(s,3H),1.38(s,3H)。實(shí)施例152-(Boc-色氨酰-色氨酰)-p-四氫咔啉-3-羧酸芐酯(3g)的數(shù)據(jù)1.22g(69.23%);Mp137-139°C;ESI(m/e)801[M+H]+;[a]D20=20.90(c=1.0,甲醇);工H-NMR(DMSO-4,500MHz)S=10.91(d，J=10Hz,IH),8.43(d,J=10Hz，IH),8.23(d,J=5Hz,IH),7.66(d,J=5Hz,1H),7.51(m,4H),7.25(m,4H),7.03(m,4H),6.37(s,IH),5.21(d,J=5Hz，2H),5.03(d,J=5Hz，2H),4.50(t,J=7.5Hz,IH),4.26(q，J=5Hz,IH),3.00(q,J=5Hz,2H),1.40(s,3H)。實(shí)施例162-(Boc-0-芐基絲氨酰色氨酰)-p-四氫咔啉-3-羧酸芐酯(3h)的數(shù)據(jù)0.89g(79.4%);Mp:100-104。C;ESI(m/e)758[M+H]+;[a]D20=20.36(c1.0，甲醇),H-NMR(DMSO-4,500MHz)S=10.92(s，1H),10.85(s,1H)，8.42(q,J=5Hz,1H),7.53(d,J=10Hz,1H),7.47(t,J=7.5Hz,IH),7.22(m,4H),7.19(m,4H),6.84(d,J=5Hz,IH),6.34(s,IH),5.19(t，J=5Hz,IH),5.01(d,JN5Hz,2H),4.73(q,J=5Hz,2H),3.54(t,J=Hz，2H),1.37(s，3H)。實(shí)施例172-(Boc-異亮氨酰色氨酰)-p-四氫咔啉-3-羧酸芐酯(3i)的數(shù)據(jù)1.20g(73.3%);Mp100-103°C;ESI(m/e)706[M+H]+;[a]D20=-40.93(c=1.0,甲醇)；l關(guān)MR(DMSO-4,500MHz)S=10.88(s,IH),8.14(d,J=5Hz，IH),8.13(s,IH),7.55(d,J=10Hz,IH),7.35(t,J=7.5Hz,IH)，7.33(t,J=7.5Hz,IH),7.17(m,4H),7.14(m,4H),7.09(d,J=5Hz,IH),6.99(s,IH)，5.43(d,J=5Hz,2H)，5.01(d,J=10Hz,2H),4.98(t,J=10Hz,2H)，3.90(t，J=5Hz,IH),3.26(d,J=10Hz,IH),2.99(m,IH)，1.37(s,3H)1.28(m,2H),1.155(d,J=5Hz,2H),0.78(t,J=5Hz,3H)。實(shí)施例182-(Boc-苯丙氨酰色氨酰)-p-四氫咔啉-3-羧酸芐酯(3j)的數(shù)據(jù)1.32g(73.1%);Mp:101-103。C;ESI(m/e)740[M+H]+;[a]D20=75.53(c=l.O,甲醇)；iH-NMR(DMSO-4,500MHz)5=10.99(s,IH),10.87(d,J=5Hz,IH),8.37(d，J=5Hz,IH),7.94(d，J=10Hz,IH),7.36(t,J=7.5Hz,IH)，7.30(m,4H),7.21(m,4H),6.99(m,4H)，5.08(s,2H),5.00(d,J=5Hz,2H),4.88(q，J=5Hz,IH),4.31(t,J=5Hz,IH),4.25(d,J=5Hz,IH),3.17(d,J=5Hz,2H),2.50(s,2H),1.37(s，3H)。實(shí)施例192-(Boc-甘氨酰色氨酰)-p-四氫咔啉-3-羧酸芐酯(3k)的數(shù)據(jù)1.25g(73.7%);Mp102-105°C;ESI(m/e)650[M+H]+;[a]D20=18.50(c二l.O,甲醇)；工H陽NMR(DMSO-4500MHz)S=10.87(d,J=5Hz,IH),10.82(s,IH),8.43(dd,J=10Hz,J=5Hz,IH),8.21(s，IH)，7.52(d,J=5Hz,IH),7.41(d,J=10Hz，IH),7.22(m,4H),7.18(m,4H),7.01(d,J=15Hz,IH),6.38(d,J=5Hz，2H),5.01(d,J=5Hz,IH),4.87(d,J=5Hz,2H),4.27(s，IH)，4.03(s,IH)，3.06(dd,J=10Hz,J=5Hz,2H),1.39(s.3H)。實(shí)施例202-(Boc-組氨酰色氨酰)-P-四氫咔啉-3-羧酸芐酯(31)的數(shù)據(jù)1.65g(59.66%);Mp115-116。C;ESI(m/e)730[M+H]+;[ot]D20=19.67(c=1.0,甲醇)；!HNMR(CDCl3):S/ppn^13.1(s,1H),10.94(s,1H)，10.86(s,1H),10.80(s,1H),7.45(s,1H),7.41(d,J=5Hz,1H),7.22(m,5H),7.19(m，4H),5.89(s，1H),5.81(d,J=7.5Hz,1H),5.65(d，J=5Hz,1H),4.87(s,2H),4.59(d,J=7.5Hz,2H)，3.61(s,2H),3.81(t,J=7.5Hz,1H)，3.06(d,J=5Hz,2H),3.00(d，J=10Hz,2H),2.51(m，1H),1.99(s,2H),1.39(s,9H)。實(shí)施例212-(Boc-蛋氨酰色氨酰)-p-四氫咔啉-3-羧酸芐酯(3m)的數(shù)據(jù)0.99g(58.0%);Mp96-97°C;ESI(m/e)746[M+H]+;[a]D20=43.30(c4.0，甲醇)；！H-N證(DMS0-4,500MHz)5=10.91(d,J=15Hz,1H),8.11(s,1H)，7.57(d,J=10Hz,1H)，7.30(m,5H),7.18(m,4H),6.97(d,J=5Hz，1H),5.88(d,J=5Hz,2H)，4.63(t,J=7.5Hz,2H),3.45(d,J=5Hz,2H),2.95(q,J=10Hz,2H),2.32(s,3H),1.39(s,3H)。實(shí)施例222-(Boc個(gè)環(huán)已酯谷氨酰色氨酰)-P-四氫咔啉-3-羧酸芐酯(3n)的數(shù)據(jù)l.llg(66.3%);Mp72.6-76.3°C;ESI(m/e)834[M+H]+;[a]D20=11.36(c^.0，甲醇);iH-NMR(DMSO-^500MHz)5=10.95(d,J=10Hz,1H),8.46(d,J=5Hz,1H)，8.37(d，J=5Hz,1H),7.47(d，J=5Hz,1H),7.35(t,J=5Hz,1H),7.22(m,4H),7.18(m,4H),5.62(d,J=5Hz,2H),5.13(m,1H),4.92(s,2H),3.36(m,2H),1.31(s,3H)。實(shí)施例232-(Boc-天冬酰氨酰色氨酰)-p-四氫味啉-3-羧酸芐酯(3o)的數(shù)據(jù)1.03g(44.4%);Mp101-102°C;ESI(m/e)726[M+H]+;[a]D20=7.70(。=1.0,甲醇);NMR(DMSO-c4,500MHz)5=10.89(s,1H),10.72(s,1H),8.14(d,J=5Hz,1H),7.54(d,J=5Hz,1H),7.47(d,J=5Hz,1H),7.22(m,5H),7.18(m,4H),5.18(d,J=10Hz,2H),4.52(t,J=7.5Hz,1H),4.12(t,J=7.5Hz,1H),4.08(s,2H),3.58(t,J=5Hz,1H),3.35(d，J=10Hz,2H),3.12(m,2H),2.46(d,J=5Hz,2H),1.39(s,3H)。實(shí)施例242-(Boc-脯氨酰色氨酰)-P-四氫咔啉-3-羧酸芐酯(3p)的數(shù)據(jù)0.89g(77.1%);Mp126-127。C;ESI(m/e)690[M+H]+;[a]D20=22.46(c^.0,甲醇);iH-畫R(DMSO-c4,500MHz)5=10.84(d,J=10Hz,1H),7.66(d,J=5Hz,1H),7.64(m,1H),7.22(m,4H),7.20(m,4H),5.89(d,J=10Hz,2H),4.29(m,2H),4.20(t,J=10Hz,2H),3.65(m,2H),3.08(m,2H),1.36(s,3H)。實(shí)施例252-(Boc-硝基精氨酰色氨酰)-p-四氫咔啉-3-羧酸芐酯(3r)的數(shù)據(jù)0.96g(71.3%);Mp102-105。C;ESI(m/e)795[M+H]+;[et]D20=35.64(。=1.0,甲醇)；工H-NMR(DMSO-^，500MHz)S=10.88(s,1H),10.85(s，1H)，8.31(d,JN10Hz,1H),8.20(s,1H)，7.64(d,J=10Hz,1H),7.54(d,J=10Hz,IH),7.47(d,J=5Hz,IH),7.22(m,4H),7.17(m,4H),5.30(d，J=10Hz,2H),5.13(t,J=7.5Hz,2H),4.81(m，2H),4.13(t,J=5Hz,2H),3.56(t，J=5Hz,2H),2.09(s,IH),1.41(m，IH),1.35(s,3H)。實(shí)施例262-(Boc-蘇氨酰色氨酰)-P-四氫咔啉-3-羧酸芐酯(3s)的數(shù)據(jù)1.02g(73.7%);Mp115-117。C;ESI(m/e)694[M+H]+;[a]D20=21.65(。=1.0，甲醇)；工H-NMR(DMSO-4,500MHz)S=10.89(t,J=5Hz,IH),8.22(s,IH),8.11(d,J=10Hz,IH),7.49(d,J=10Hz,IH),7.35(m,5H),7.18(m,4H),7.08(q,J=10Hz,IH)，4.87(d,J=15Hz,2H),4.05(m，2H)，3.11(m,2H),3.09(m,2H),2.10(s,IH),1.40(s,3H),1.01(s,3H)。實(shí)施例272-(Boc-酪氨酰色氨酰)-P-四氫咔啉-3-羧酸芐酯(3t)的數(shù)據(jù)1.03g(33.7%);Mp111-113。C;ESI匿MS(m/e)778[M+H]+;[a]D20=19.63(c二l.O,甲醇)；iH-NMR(DMSO-4500MHz)5=10.06(d,J=10Hz，IH),8.00(d,J=5Hz，IH),7.72(d,J=10Hz,IH),7.54(t,J=7.5Hz,IH),7.22(m,5H),7.18(m，5H),6.68(d,J=10Hz,IH),5.61(d,J=5Hz,IH),4.28(m,2H),3.48(m,2H),2.93(d,J=10Hz,2H)，1.43(s,3H)。實(shí)施例282-(氨基酰色氨酰)-p-四氫咔啉-3-羧酸芐酯的制備通法將3.18mmol2-(Boc-氨基酰色氨酰)-P-四氫咔啉-3-羧酸芐酯置于50mL茄形瓶中并用2mL乙酸乙酯溶解。冰浴下往得到的溶液中緩慢滴入2mL4NHCl/EtOAc。反應(yīng)混合物0°C攪拌3小時(shí)后減壓濃縮至干,加10ml左右乙醚反復(fù)抽取3-4次，甲醇-乙醚重結(jié)晶，得到標(biāo)題化合物。實(shí)施例292-(纈氨酰色氨酰)-p-四氫咔啉-3-羧酸芐酯(4a)的數(shù)據(jù)0.076g(83.2%);ESI(m/e)590[M-H]..[tt]D20=19.30(c=1.0,甲醇)；^-NMR(DMSO-&，500MHz)5=10.92(s,1H),8.19(s,1H),7.25(t,J=5Hz,1H),7.22(m,5H),7.19(m，4H),7.14(t,1H),7.00(d,J=5Hz，1H),6.94(d,J=3Hz，1H)，6.92(s,1H),5.45(s,2H),5.00(t，J=10Hz,1H),4.98(t，J=5Hz,1H),4.96(s,2H)，3.45(m，1H),3.16(d,J=7.5Hz,2H),3.02(d,J=7.5Hz,2H),2.51(m,1H),0.98(d,J=7.5Hz,6H)。實(shí)施例302-(5-環(huán)己酯-谷氨酰色氨酰)-p-四氫咔啉-3-羧酸芐酯(4b)的數(shù)據(jù)0.113g(84.6%);ESI(m/e)701[M-H]..[汰]020=11.6(c=1.0,甲醇)；！H-NMR(DMSO-&,500MHz)S=10.95(s,IH)，7.99(s,IH),7.21(m,5H)，7.18(m,4H),6.54(d,J=5Hz,IH)，5.53(s,2H)，4.95(m,IH)，4.70(t，J=7.5Hz,IH),4.65(s,2H),4.20(m,2H),3.81(m,IH),3.06(d,J=5Hz,2H),2.91(d，J=10Hz,2H),2.82(d,J=7.5Hz,2H),1.99(s,2H),1.77(m,2H),1.47(m,2H)，1.40Cm,2H)。實(shí)施例312-(賴氨酰色氨酰)-p-四氫咔啉-3-羧酸芐酯(4d)的數(shù)據(jù)0.120g(81.3%);ESI(m/e)619[M-H]—.[a]D20=59.36(c=1.0，甲醇)；^-NMR(DMSO-d6，500MHz)5=10.94(s,IH),8.09(s,2H),7.20(m,5H),7.17(m,4H),7.12(t,J=10Hz,H),6.98(d,J=7.5Hz，IH),6.93(d,J=7.5Hz,IH)，5.19(s，2H),5.01(m,IH),5.00(s,2H)，8.09(t,J=7.5Hz,H),8.09(s,2H),3.49(m,IH)，3.13(d，J=7.5Hz,2H),3.03(d,J=5Hz,2H),2.51(m，2H),2.09(s，2H)，1.79(m,2H),1.55(m,2H),1.18(m,2H)。實(shí)施例322-(亮氨酰色氨酰)-p-四氫咔啉-3-羧酸芐酯(4e)的數(shù)據(jù)0.059g(91.2%);ESI(m/e)604[M-H]..[a]D20=25.90(c=1.0,甲醇)；IH陽NMR(DMSO-d6,500MHz)5=10.89(s,IH),8.18(s,IH),7,25(t,J=5Hz,IH)，7.19(m,5H),7.18(m,4H),7.14(t,J=5Hz,IH),6.98(d,J=5Hz,IH),6.94(d，J=5Hz,IH),6.92(s,IH),5.33(d,J=5Hz，2H),5.01(s，2H),4.98(t，J=7.5Hz,IH),4.99Cm,IH),3.46Cm,IH),3.16(d，J=7.5Hz,2H),3.04(d,J=5Hz,2H),2.07(s,2H),1.92(m,IH),1.78(t,J=5Hz,IH)，0.92(d，J=5Hz,6H)。實(shí)施例332-(丙氨酰色氨酰)-p-四氫咔啉-3-羧酸節(jié)酯(4f)的數(shù)據(jù)0.074g(89.4%);ESI(m/e)562[M-H]—.[a]D20=51.46(cl.O,甲醇);lH-NMR(DMSO-d6,500MHz)5=10.88(s,IH),8.19(s,IH),7.25(t,J=5HzlH)，7.22(t,J=7.5IH),7.20(m,5H),7.19Cm,4H),7.01(d,J=5Hz,IH),6.96(d,J=7.5Hz,IH)，6.94(s,IH),5.90(s,2H),5.01(d,J=7.5Hz，IH),5.00Cm,IH),4.27(s,2H),3.81(m,IH),3.19(d，J=7.5Hz,2H),3.04(d,J=5Hz,2H),1.99(s,2H),1.23(d,J=5Hz,3H)。實(shí)施例342-(色氨酰色氨酰)-P-四氫咔啉-3-羧酸芐酯(4g)的數(shù)據(jù)0.085g(82.3%);ESI(m/e)677[M-H]—.[a]D20=33.5(c=1.0,甲醇)；！H-NMR(DMSO-d6,500MHz)5=10.93(s,IH),8.13(s,IH),7.36(t,J=5Hz,lH),7.27(t,J=7.5Hz,IH),7.19(m,5H)，7.17(m,4H),6.93(d,J=5Hz,1H),6.89(d,J=7.5Hz,IH),5.34(d，J=5Hz,2H),4.95(m,IH),4.94(t,J=7.5Hz,IH),4.75(s,2H),4.02(m,IH),3.16(d,J=10Hz,2H)，3.06(d，J=7.5Hz，2H),2.96(d,J=7.5Hz,2H),1.99(s,2H)。實(shí)施例352-(0-節(jié)基絲氨酰色氨酰)-p-四氫咔啉-3-羧酸芐酯(4h)的數(shù)據(jù)0.103g(85.4%);ESI(m/e)654[M-H]扁.[ol]d20=19.47(c=1.0，甲醇)；！H-NMR(DMSO-d6,500MHz)S=10.97(s，IH),8.33(s,IH),7.27(m，IH),7.19(m,5H),7.17(m，4H)，7.16(m,IH),7.02(d,J=5Hz,IH),7.01(d,J=5Hz,IH),6.97(s,IH),5.34(s,2H),5.04(m,IH),4.89(s,2H)，4.64(s,2H)，4.62(t,J=7.5Hz,IH),4.09(m，IH),3.94(d,J=5Hz,2H),3.75(d，J=7.5Hz,2H),3.15(d,J=7.5Hz,2H),3.08(d,J=10Hz,2H),2.18(s,2H)。實(shí)施例362-(異亮氨酰色氨酰)-p-四氫咔啉-3-羧酸芐酯(4i)的數(shù)據(jù)0.086g(91()%);ESI(m/e)604[M-H]扁.[a]D20=43.60(rl.0,甲醇)；^-NMR(DMSO-d6，500MHz)5=10.91(s,IH),8.20(s，IH)，7.27(t,J=7.5HzIH),7.21(m,5H),7.18(m,4H),7.16(t，J=5Hz,IH),7.00(d,J=5Hz,IH),6.95(d,J=5Hz,IH),6.94(s,IH),5.00(t,J=7.5Hz,IH),4.95(m,IH),4.82(s,2H)，3.63(m,IH),3.14(d,J=5Hz,2H),3.03(d,J=7.5Hz,2H),2.50(m,H),1.92(s,2H),1.24(m,2H),1.09(d,J=10Hz,3H),0.92(q,J=7.5Hz,3H)。實(shí)施例372-(苯丙氨酰色氨酰)-p-四氫咔啉-3-羧酸芐酯(4j)的數(shù)據(jù)0.095g(92.6%);ESI(m/e)638[M-H]-.[a]D20=16.10(c=1.0,甲醇)；！H-NMR(DMSO-d6，500MHz)5=10.95(s,IH),8.22(s,IH),7.28(t,J=7.5Hz,IH),7.24(t,J=7.5Hz,IH)，7.21(m,5H),7.18(m,4H),7.08(t,J=5Hz,IH),7.01(d,J=5Hz,IH),6.97(d,J=5Hz,IH)，6.91(s,IH),5.49(s，2H),4.96(m,IH),4.95(m,IH),4.14(m,IH),3.15(dd,J=7.5Hz,J=5.0Hz,4H),3,08(d，J=7.5Hz,2H),1.92(s，2H)。實(shí)施例382-(甘氨酰色氨酰)-P-四氫咔啉-3-羧酸芐酯(4k)的數(shù)據(jù)0.063g(90.3%);ESI(m/e)547[M-H]扁[a]D20=14.86(c=1.0,甲醇)；'H-NMR(DMSO-d6,500MHz)5=10.89(s，1H),9.92(s,1H),8.12(s，1H),7.26(m,1H),7.23(m，5H)，7.19(m,4H),7.17(t，J=7.5Hz,1H),7.07(q,J=7.5Hz,J=7.5Hz,2H),7.03(s，1H),8.09(s,2H),5.06(d，J=5Hz，2H),4.95(m,1H)，4.74(s，2H),3.54(t,J=7.5Hz，2H),3,06(d,J=5Hz,2H),3.00(d,J=7.5Hz,2H)，1.99(s,2H)。實(shí)施例392-(組氨酰色氨酰)-p-四氫咔啉-3-羧酸芐酯(41)的數(shù)據(jù)0.076g(83.6%);ESI(m/e)628[M-H]-.[汰]。20=19.卯(c=1.0,甲醇)；！H-NMR(DMSO陽d6,500MHz)3=10.94(s,2H),8.45(s,2H),7.44(d,J=7.5Hz,1H),7.21(m，5H),7.18(m,4H),7.16(t,J=7.5Hz,1H),6.97(d,J=7.5Hz,1H),6.90(d,J=7.5Hz,1H),6.68(d,J=5Hz,IH),5.10(s,2H),5.04(s，IH),5,01(m,IH)，3.84(m,IH),3.18(d,J=5Hz,2H),2.90(d,J=7.5Hz,2H),2.81(d,J=7.5Hz,2H),2.18(s,2H)。實(shí)施例402-(蛋氨酰色氨酰)-P-四氫咔啉-3-羧酸芐酯(4m)的數(shù)據(jù)0.098g(86.3%);ESI(m/e)618[M-H]\[ct]D20=74.13(c=1.0,甲醇)；1H-NMR(DMSO-d6，500MHz)5=10.88(s,IH)，8.28(s,2H),7.27(t,J=7.5Hz,IH),7.19(m,5H),7.17(m:4H),7.10(t,J=7.5Hz,2H),6.97(d,J=5Hz,IH),6.94(d,J=5Hz,IH),6.92(s,IH),5.47(s，2H),5.01(m,2H),4.84(s,2H)，4.81(t,J=7.5Hz,IH)，3.57(m,IH),3.16(d,J=5Hz,2H),3.11(d,J=7.5Hz,2H),2.53(m,2H),2.44(t,J=5Hz,2H),2.09(s，3H),2.00(s,2H)。實(shí)施例412-(S-環(huán)已酯基谷氨酰色氨酰)-p-四氫咔啉-3-羧酸節(jié)酯(4n)的數(shù)據(jù)0.130g(83.5%);ESI(m/e)714[M-H]-.[a]D20=42.13(c=1.0,甲醇)；！H-NMR(DMSO-^,500MHz)5=10.95(s,IH),9.96(s,IH),8.01(s,IH),7.26(t,J=5Hz,IH),7.19(m,5H),7.18(m,4H),7.16(t,J=7.5Hz,IH),7.10(t,J=5Hz,IH),5.45(s,2H),4.91(m,IH),4.88(t，J=5Hz,IH),4.60(s,2H),3.72(m,IH),3.58(m,IH)，3.11(d,J=5Hz,2H),3.09(d,J=5Hz,2H),2.96(m,2H):2.51(t，J=5Hz,2H),1.99(s,2H)，1.79(m,2H),1.32(s,2H)。實(shí)施例422-沃冬酰氨酰色氨酰)-P-四氫咔啉-3-羧酸芐斷4o)的數(shù)據(jù)0.123g(86.3%);ESI(m/e)605[M-H]扁.[汰〗020=44.80(c=1.0,甲醇)；^-NMR(DMSO-4,500MHz)5=10.95(s,IH),10.92(s,IH),8.11(s,IH),7.25(t,J=5Hz,IH)，7.20(m,5H),7.17(m，4H),7.15(t，J:7.5Hz,IH),7.03(d,J=7.5Hz,IH),6.76(d，J=5Hz,IH),6.79(s,IH),5.89(d,J=5Hz,2H),5.34(s,2H)，5.01(m,1H)，4.83(t，J=5Hz,1H),4.72(s，2H),3.66(s,2H),3.15(d,J=10Hz,2H)，3.13(d,J=7.5Hz,2H)，2.97(d,J=5Hz,2H),2.55(d,J=7.5Hz,2H),1.99(s,2H)。實(shí)施例432-(脯氨酰色氨酰)-P-四氫咔啉-3-羧酸芐酯(4p)的數(shù)據(jù)0.0.042g(88.2%);ESI(m/e)588[M-H]-.[tt]D20=5.40(c=1.0,甲醇)；^-NMR(DMSO-4,500MHz)5=10.06(s,IH)，10.05(s,IH),7.26(t,J=7.5Hz,IH),7.20(m,5H),7.19(m,4H),7.18(t,J=7.5Hz,IH)，8.09(s,2H),6.98(dd,J=7.5Hz,J=5Hz,2H)，6.90(d,J=7.5Hz,IH)，5.19(s,2H),5.00(s,2H),4.98(m，IH),4.97(t,J=5Hz,IH),3.52(m,IH),3.06(d,J=5Hz,2H),3.00(m,2H)，1.99(s,IH)，1.68(m,2H)。實(shí)施例442-(硝基精氨酰色氨酰)-P-四氫咔啉-3-羧酸芐酯(4r)的數(shù)據(jù)0.065g(85.6%);ESI(m/e)692[M-H]—.[a]D20=23.10(c=1.0,甲醇)；^-NMR(DMSO-^，500MHz)5=9.31(s,IH),8.15(s,IH),7.26(t,J=7.5Hz,IH)，7.20(m，5H),7.19(m，4H),7.03(t,J=7.5Hz,IH),6.98(d,J=5Hz，IH),6.95(s,IH)，5.34(d,J=5Hz,2H),4.92(m,IH)，4.84(t,J=5Hz,IH),4.53(s,2H)，3.45(m，IH),3.32(d,J=7.5Hz,2H),3.12(d，J=5Hz,2H),2.51(m,2H),2.07(s,IH),1.78(m,2H),1.52(m,2H)。實(shí)施例452-(蘇氨酰色氨酰)-p-四氫咔啉-3-羧酸節(jié)酯(4s)的數(shù)據(jù)0.101g(86.7%);ESI(m/e)592[M陽H]..[a]D20=21.66(c:1.0,甲醇)；！H-NMR(DMSO-^，500MHz)S=10.99(s,IH),8.21(s,IH),7.19(m,5H)，7.18(m,4H),7.14(t,J=7.5Hz,IH),7.11(t,J=7.5Hz,IH),6.99(s,IH),5,34(s,2H),5.03(m，IH),5.02(t,IH)，4.58(s,2H),3.85(m,IH):3.65(m,IH),3.17(d,J=5Hz,2H),3.11(d,J=7.5Hz,2H),2.50(s,2H),2.09(s,2H),1.20(d,J=5Hz,3H)。實(shí)施例462-(酪氨酰色氨酰)-p-四氫咔啉-3-羧酸芐酯(4t)的數(shù)據(jù)0.098g(82.6%);ESI(m/e)654[M-H]..[a]D20=-15.56(。=1.0,甲醇)；！H-NMR(DMSO-^500MHz)5=10.39(s,IH),8.10(s,IH),7.34(t,J=7.5Hz,IH)，7.20(m，5H),7.19(m,4H)，7.16(t,J=5Hz,IH),6.98(d,J=5Hz,IH),6.96(d,J=5Hz，2H),6.78(s,IH)，6.71(d，J=5Hz,IH),6.67(d，J=7.5Hz,2H),5.36(s,2H),5.31(d,J=10Hz,IH)，5.72(m，IH),4.70(t,J=5Hz,IH),4.42(s,2H),4.01(m,IH),3.17(d，J=7.5Hz,2H)，3.08(d,J=5Hz,2H),2.90(d,J=10Hz,2H),1.99(s,2H)。實(shí)驗(yàn)例1本發(fā)明化合物(4a-t)抗腫瘤細(xì)胞增殖活性評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)1)受試樣品本發(fā)明實(shí)施例29-46所分別制備的化合物4a-t;分別用含lXDMSO的PBS配制成所需濃度溶液。2)人癌細(xì)胞株S180細(xì)胞(腹水型肉瘤細(xì)胞)，H22細(xì)胞(小鼠腹水型肝癌細(xì)胞株)；3)主要儀器酶標(biāo)儀450，Biorad公司高壓滅菌鍋400Ep-Z，Bruckmanning公司細(xì)胞孵育箱INC153，memmer公司低溫離心機(jī)SPD111V，Thermo公司96孔細(xì)胞培養(yǎng)板Costar公司石英自動(dòng)雙重純水蒸餾器1810—B，江蘇榮華儀器制造有限公司4)主要試劑MTT:四噻唑藍(lán)(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)2，5陽diphenyl-tetrazoliumbromide)(Flka)，溶于PBS中沐度為5mg/ml,過濾除菌,4°C避光保存。PBS:每升溶液中含有NaCl8.2g，KCl0.20g，Na2HP04.H201.56g，KH2P040.2g，pH為7.4RPMI-1640培養(yǎng)基Gibco公司DMEM培養(yǎng)基Gibco公司改良的Mccy，s5Amedium+L-Glutamine培養(yǎng)基Gibco公司胎牛血清Hyclone公司青霉素石藥集團(tuán)中諾藥業(yè)(石家莊)有限公司鏈霉素石藥集團(tuán)中諾藥業(yè)(石家莊)有限公司DMSO:Hyclone公司。其余所用試劑均為市售分析純.5)實(shí)驗(yàn)方法分別將生長狀態(tài)良好、處于對(duì)數(shù)生長期的HL-60細(xì)胞以5xl0MVmL的密度接種于96孔板，每孔100pl,按預(yù)設(shè)的濃度梯度加入待測、經(jīng)滅菌處理的樣品，對(duì)照組加入等體積的溶解樣品的溶媒。繼續(xù)培養(yǎng)48小時(shí)后，每孔加25tilMTT溶液濃度為5mg/m1,繼續(xù)置于37'C孵育四個(gè)小時(shí)，離心5min(2500rpm)小心吸出上清液，每孔紫色殘留物(甲瓚)加入100WDMSO溶解，振蕩約15min沉淀全部溶解，于570nm酶標(biāo)儀上測定aD.(吸收值)，波長570nm。按照公式"相對(duì)生存率畔D含藥-Z)空白)/(D對(duì)照-D空白)"00%"計(jì)算每一個(gè)樣品濃度下的樣品對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制率。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次,以抑制率對(duì)藥物濃度作圖，按作圖法求出ICso(半數(shù)有效抑制濃度)值。6)實(shí)驗(yàn)結(jié)果結(jié)果見表l。表l本發(fā)明化合物4a-t抗腫瘤細(xì)胞增殖活性實(shí)驗(yàn)結(jié)果(IC5()±SDfiM)<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>實(shí)驗(yàn)例2本發(fā)明化合物(4a-t)抗腫瘤活性實(shí)驗(yàn)1)實(shí)驗(yàn)材料受試化合物本發(fā)明實(shí)施例29-46所分別制備的化合物4a-t;陽性對(duì)照品阿糖胞苷實(shí)驗(yàn)動(dòng)物SCI小鼠(清潔級(jí))，雄性，體重20士2g(J土s);由北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。每12只小鼠一組，空白及陽性對(duì)照各一組。瘤源小鼠S咖肉瘤，由北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，自行傳代維持。溶劑生理鹽水，0.5XCMC-Na溶液。2)劑量設(shè)置受試化合物4a-t及陽性對(duì)照設(shè)為8.9timol/kg，均采用腹腔單次給藥。3)藥物配制受試化合物4a-t加入少量吐溫80潤濕助溶，逐漸加入0.5XCMC-Na溶液至所需要濃度即可。陽性對(duì)照品阿糖胞苷采用生理鹽水溶解。4)給藥劑量及給藥方案受試化合物4a-t以腹腔單次給藥。按相應(yīng)的給藥劑量每天一次，0.2ml/鼠，連續(xù)給藥7天，共給藥7次。阿糖胞苷以等體積的相應(yīng)溶液腹腔給藥，按8.9pmol/kg劑量每天一次，0.2ml/鼠，連續(xù)給藥7天，共給藥7次。5)動(dòng)物模型采用體內(nèi)抗腫瘤腋皮下接種模型在無菌條件下抽取接種7d，后取生長旺盛S^腹水瘤瘤液，用生理鹽水稀釋成(1:2)的液體充分混合，將腫瘤細(xì)胞懸液用新鮮配制的0.2%臺(tái)盼藍(lán)染色,混勻后按白細(xì)胞計(jì)數(shù)方法計(jì)數(shù)，染藍(lán)色者為死細(xì)胞，不染色者為活細(xì)胞，按如下公式計(jì)算細(xì)胞濃度和細(xì)胞存活率。細(xì)胞濃度=4大方格內(nèi)活細(xì)胞數(shù)/4><104><稀釋倍數(shù)=細(xì)胞數(shù)/1111細(xì)胞存活率=活細(xì)胞數(shù)/(活細(xì)胞數(shù)+死細(xì)胞數(shù))><100%將存活率大于90X的瘤液用勻漿法制備成lxl0MVml的細(xì)胞懸液，于相應(yīng)宿主腋皮下接種0.21111/鼠，制成實(shí)體瘤動(dòng)物模型。6)實(shí)體瘤抑瘤率測定各組連續(xù)給藥7天后，于第8天脫頸椎處死小鼠，稱取體重(處死體重)，然后用鑷子固定小鼠右腋腫瘤生長部位，剪開皮膚，暴露腫瘤，鈍性剝離，稱重，按如下公式計(jì)算抑瘤率。抑瘤率％=[(陰性對(duì)照組平均瘤重-給藥組平均瘤重)/陰性對(duì)照組平均瘤重]x100體重增長(g)=處死體重-原始體重-瘤重7)統(tǒng)計(jì)方法本實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)均采用^檢驗(yàn)和方差分析，以(7iSD)表示。8)實(shí)驗(yàn)結(jié)果結(jié)果列入表2。表2受試化合物4a-t抗腫瘤活性實(shí)驗(yàn)結(jié)果給藥組抑瘤率％瘤重NS—0.76±0.16Arc26.79±0.44a0.54±0.134a-0.46±7.650.7U0.154b24.15±2.03a0.50±0.244c36.16±1.680.40±0.244d-1.039±5.320.77±0.084e28.39±2,30b0.43±0.264f-3.32±7.140.86±0.284g54.40±1.04e0.29±0.144h33.15±0.89b0.40±0,244i23.54±2.160.45±0.184j21.60±2.530.50±0.294k-0.05±9.650.63±0.304123.24±3.150.48±0.204m56.27±0.98e0.29±0.174n15.94±3.650.52±0.194o22.75±2.98b0.44±0.294p37.65±1.56b0.43±0.154r58.99士0.99110.32±0.074s37.63±2.58a0.4U0.204t43.72±1.88a0.39±0.10a)阿糖胞苷)和4a-t給藥劑量為8.9pmol/kg,NS-溶媒，n=12，平均瘤重表示為5±SDg;b)與NS比較pO.01,與阿糖胞苷比較pX).05;c)與NS比較pO.Ol，與阿糖胞苷比較p<0.05。權(quán)利要求1、具有抗腫瘤活性的通式I化合物id="icf0001"file="A2008101145640002C1.tif"wi="48"he="39"top="43"left="72"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="yes"/>通式I其中，AA選自纈氨酸殘基、天冬氨酸-4-環(huán)己酯、谷氨酰胺殘基、叔丁氧羰基賴氨酸殘基、亮氨酸殘基、丙氨酸殘基、色氨酸殘基、O-芐基絲氨酸殘基、苯丙氨酸殘基、異亮氨酸殘基、甘氨酸殘基、叔丁氧羰基組氨酸殘基、蛋氨酸殘基、谷氨酸-5-環(huán)己酯、天冬酰胺殘基、脯氨酸殘基、硝基精氨酸殘基、蘇氨酸殘基或酪氨酸殘基。2、一種制備權(quán)利要求1所述通式I化合物的方法，該方法包括(1)將色氨酸轉(zhuǎn)變?yōu)锽0C-色氨酸；(2)將色氨酸轉(zhuǎn)變?yōu)镻-四氫咔啉-3-羧酸；(3)將p-四氫咔啉-3-羧酸轉(zhuǎn)變?yōu)閜-四氫咔啉-3-羧酸芐酯；(4)將L-色氨酸轉(zhuǎn)變?yōu)長-色氨酸甲酯；(5)將Boc-L-氨基酸與L-色氨酸甲酯縮合制備Boc-氨基酰色氨酸甲酯；>(6)將Boc-氨基酰色氨酸甲酯轉(zhuǎn)化為Boc-氨基酰色氨酸；(7)將Boc-氨基酰色氨酸和p-四氫咔啉羧酸芐酯縮合為2-(Boc-氨基酰色氨酰)-p-四氫咔啉-3-羧酸芐酯；(8)將2-(Boc-氨基酰色氨酰)-p-四氫咔啉-3-羧酸芐酯脫去保護(hù)基Boc，即得。3、按照權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于步驟(6)中所述的Boc-L-氨基酸選自Boc-L-纈氨酸、Boc-L-天冬氨酸-4-環(huán)已酯、Boc-L-谷氨酰胺、Boc-L-叔丁氧羰基賴氨酸、Boc-L-亮氨酸、Boc-L-丙氨酸、Boc-L-色氨酸、Boc-L-0-芐基絲氨酸、Boc-L-苯丙氨酸、Boc-L-異亮氨酸、Boc-甘氨酸、Boc-L-叔丁氧羰基組氨酸、Boc-L-蛋氨酸、Boc-L-谷氨酸-5-環(huán)已酯、Boc-L-天冬酰胺、Boc-L-脯氨酸、Boc-L-硝基精氨酸、Boc-L-蘇氨酸或Boc-L-酪氨酸。4、一種治療腫瘤的藥物組合物，由治療上有效量的權(quán)利要求l所述的化合物和藥學(xué)上可接受的載體或輔料組成。5、權(quán)利要求l所述的化合物在制備抗腫瘤藥物中的用途。全文摘要本發(fā)明公開了具有抗腫瘤活性的通式I化合物及其制備方法，本發(fā)明還公開了它們作為抗腫瘤劑的應(yīng)用。通式I中，AA選自纈氨酸、天冬氨酸-4-環(huán)己酯、谷氨酰胺、叔丁氧羰基賴氨酸、亮氨酸、丙氨酸、色氨酸、O-芐基絲氨酸、苯丙氨酸、異亮氨酸、甘氨酸、叔丁氧羰基組氨酸、蛋氨酸、谷氨酸-5-環(huán)己酯、天冬酰胺、脯氨酸、硝基精氨酸、蘇氨酸或酪氨酸殘基。本發(fā)明采用細(xì)胞模型評(píng)價(jià)了通式I化合物的體外抗腫瘤活性，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明通式I化合物具有優(yōu)秀的抗腫瘤細(xì)胞增殖活性。采用S₁₈₀小鼠模型評(píng)價(jià)了通式I化合物的抗腫瘤作用，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明通式I化合物具有優(yōu)秀的抗腫瘤作用，臨床上可作為抗腫瘤劑應(yīng)用。文檔編號(hào)A61K38/06GK101597291SQ20081011456公開日2009年12月9日申請(qǐng)日期2008年6月4日優(yōu)先權(quán)日2008年6月4日發(fā)明者崔國輝,張麗娜,彭師奇,明趙申請(qǐng)人:首都醫(yī)科大學(xué)