專利名稱：：一種過逸型氣虛證候動物模型的建立方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及中醫(yī)藥評價領域，具體涉及一種建立氣虛證候動物模型的方法。
背景技術：
：證候研究一直是中醫(yī)藥評價研究的熱點領域，其規(guī)范化與標準化是傳統(tǒng)中醫(yī)藥邁向現(xiàn)代化的必由之路，而自上世紀60年代中醫(yī)證候動物模型的引入則為此進程架起了一座橋梁。氣虛證是中醫(yī)臨床常見基本證候，近年來中醫(yī)基礎實驗發(fā)展了多種不同的氣虛動物模型的造模方法，包括限日攝食量法、單純?yōu)a下法、疲勞法、煙熏法、化療藥物、X線照射、耗氣破氣、苦寒渴下加耗氣破氣降氣、手術法、失血法等等，實驗動物多采用大鼠或小鼠。綜觀這些方法，總體上仍以疲勞法為主，正如《素問，舉痛論》云"勞則氣耗""勞則喘急汗出，內夕卜皆越，故氣耗也"，勞力過度則傷氣，此法符合中醫(yī)理論，在疲勞的基礎上加用卩艮食；《靈柩.玉版篇》云"人之所以受氣者，谷也，，；《靈柩，無味篇》云"谷不入半日則氣衰，一日則氣少矣"；瀉下(以大黃、芒硝、番瀉葉等瀉下藥物為主)的方法使氣之生成更加不足，氣虛證候更加明顯。結合臟腑辯證，脾氣虛癥的造模方法最多，有疲勞加飲食失節(jié)或瀉下法，偏食苦味或酸味，耗氣破氣或苦寒瀉下加耗氣破氣等；心氣虛動物模型的制作常在疲勞、控食等的基礎上使用心得安或垂體后葉素這兩種藥物；肺氣虛的造模方法比較單純，主要采用一氧化硫、香煙、鋸末等進行煙熏以傷肺臟，耗損肺氣；腎氣虛動物模型的研究相對較少。在現(xiàn)有的氣虛動物的造模方法中存在著許多問題，如(1)造模方法大多復雜；利用多因素造模較多，在實驗過程中不利于操作和推廣；(2)有些造模因素與臨床不貼近，如偏食苦味造模、食用過量醋造模等，不是臨床上常見的導致氣虛的原因；(3)—些方法所造的模型是否屬于氣虛證還存在著爭論，如瀉下法所用藥物大黃、番瀉葉等苦性寒，不能排除造成脾陽虛的可能；(4)有一些方法盡管類似，但所用強度和時間都不同，各有不同的標準，不夠統(tǒng)一；(5)模型大多偏重一些臟腑的氣虛，單純氣虛證較少。如上所述，疲勞法是制備氣虛證模型的主要方法，所謂"勞則氣耗"，與之相反，過逸是否也可以造成氣虛證的產生呢？過逸，即過度安逸，包括體力過逸和腦力過逸等。清代醫(yī)家陸九芝說逸之為病，正不少也，逸乃逸豫，安逸之所生病，與勞相反，，；《素問，宣明五氣篇》云"久臥傷氣"；《醫(yī)學入門》也強調久臥久坐"尤傷人也"；張介賓云"久臥則陽氣不申，故傷氣；久坐則血脈滯于四肢，故傷肉"。人體每天需要適當?shù)幕顒?，氣血才能流暢，陽氣才得以振奮，若較長時間少動安閑，或者臥床過久或者長期用腦過少等，可使人體臟腑經絡及精氣血神的失調而導致病理變化。過逸致病的特點主要表現(xiàn)在三個方面一是安逸少動，氣機不暢。如果長期運動減少，則人體氣機失于暢達，可以導致脾胃等臟腑的功能活動呆滯不振，出現(xiàn)食少、胸悶、腹脹、肢閑、肌肉軟弱、或發(fā)胖臃腫等(脾氣虛的表現(xiàn))；二是陽氣不振，正氣虛弱。過度安逸或長期臥床，陽氣失于振奮，以致臟腑組織功能減退，體質虛弱，正氣不足，抵抗力下降等。故過逸致病，常見動則心悸，氣喘出汗等(心氣虛的表現(xiàn))，或抗邪無力，易感外邪致病(肺氣虛的表現(xiàn))；三是長期用腦過少，加之陽氣不振，可致神氣衰弱，常見精神萎靡、健忘、反應遲鈍等(腎氣虛的表現(xiàn))?？梢娺^逸可致機體整體的生理功能減退，導致氣的生成不足或運行不暢，從而導致氣虛證的發(fā)生，且并不偏重于某一臟腑。臨床上部分人群，尤其是肥胖群體，由于生活習慣過于安逸，飲食嗜食肥甘厚味，且日常缺乏勞動及體育鍛煉，往往可致氣虛證候的產生。但是，目前卻沒有關于過逸致氣虛證候動物模型的相關文獻的報道，因此，對相應藥物的評價也缺少規(guī)范、標準、科學的方法。
發(fā)明內容本發(fā)明目的在于提供一種新的建立過逸型氣虛證候動物模型的方法。本發(fā)明中的過逸型氣虛證候的"過逸"主要是指高脂飲食復合久臥引起的氣虛證候。本發(fā)明建立過逸型氣虛證候動物模型的方法為將大鼠置于代謝籠中，伺以高脂飼料，自由飲水，經過8-10周造模時間的培養(yǎng)即得。本發(fā)明中使用的高脂飼料可以在本發(fā)明的啟示下采用本領域常規(guī)技術進行配制，以使大鼠產生過逸型氣虛證候為目的。本發(fā)明中高脂飼料優(yōu)選包含以下成分，以100份基礎祠料計全脂奶粉10-15份、豬油3-5份、蛋黃40-50份、黃豆10-15份、魚肝油0.2-0.5份、膽酸鈉0.5份；優(yōu)選以100份基礎飼料計全脂奶粉15份、豬油5份、蛋黃50份、黃豆15份、魚肝油0.35份、膽酸鈉0.5份。為了更好的實現(xiàn)本發(fā)明，本發(fā)明中大鼠使用的代謝籠為單籠，籠內空間以保持大鼠基本安靜、且能夠轉身移動為標準，籠內空間隨大鼠的生長狀況可進^f于調整。本發(fā)明過逸型氣虛證候動物才莫型中，造模時間優(yōu)選為10周；大鼠優(yōu)選為清潔級Wistar雄性大鼠，體重在160-180g之間。為更好的實現(xiàn)本發(fā)明目的，本發(fā)明選用以下方法對過逸型氣虛大鼠模型進行評價經過8-10周造模時間培養(yǎng)的大鼠，按觀察指標觀察大鼠的生物學表征，其生物學表征半定量評分應在4分以上。中醫(yī)證候模型是利用動物的某些生物體征來模擬人體證候特征的一類生物表征模型，在證候自身的生物學基礎病理生理依據(jù)還沒有完全被揭示的今天，不能一味追尋生物化學、病理或病理生理指標為證候動物模型成立的依據(jù)。癥狀在中醫(yī)證候的臨床診斷中起著最重要的作用，因此，中醫(yī)證〃陵動物模型的評價標準應以癥狀為主，以動物體表特征如舌象、唇象、爪象、耳輪、尾尖、眼球、毛皮以及動物行為等表現(xiàn)為依據(jù)。本發(fā)明過逸型氣虛證候動物模型的評價標準中，優(yōu)選了精神狀況、皮膚及毛發(fā)、耳尾顏色和糞便四類生物學表征作為觀察指標，并制定了相應的半定量評分標準，其中，按精神狀況不同分為活潑好動為0分，反應稍有遲鈍、自主活動減少為1分，倦怠懶動、精神萎頓、四肢蜷縮、行動遲緩為2分，精神萎靡不振、攻擊性、對抗性行為消失為3分；按皮膚及毛發(fā)不同分為皮膚與脂肪連接緊密、柔韌有彈性、毛發(fā)光亮柔順為0分，皮膚略松弛、松軟、張力減少、毛發(fā)枯黃無光澤為1分，皮膚松弛、少許脂肪、易抓取、毛發(fā)干枯或結穗打巻、無光澤為2分，皮膚松弛、皮下無脂肪、抓之觸骨、全身毛發(fā)枯槁、稀疏脫落為3分；按耳尾顏色不同分為紅潤光澤為0分，淡紅少澤為l分，淡白少澤為2分，蒼白或透青色為3分；按糞便不同分為糞便干、成形為0分，糞便粘軟有形為l分，糞便不成形、但不稀溏為2分，糞便稀溏、綠褐粘膩惡臭為3分。為更好的實現(xiàn)本發(fā)明目的，本發(fā)明更進一步優(yōu)選選用以下方法對過逸型氣虛大鼠模型進行評價按觀察指標觀察大鼠的生物學表征之后，再釆用力竭游泳的方法進行評價，其中力竭游泳的具體方法包括使大鼠在游泳釭中強迫負重游泳，游泳至力竭為止時，統(tǒng)計游泳時間，其游泳時間與相同條件下正常大鼠游泳時間相比應縮短^1/3。乏力為氣虛證的代表癥狀之一，而力竭游泳由于能使動物全身的肌肉參與運動，比爬竿實驗或攀網實驗更能體現(xiàn)實驗動物的耐力情況，因此本發(fā)明同時還采用了大鼠力竭游泳實驗的方法對過逸型氣虛模型進行驗證。本發(fā)明大鼠游泳優(yōu)選在25-27。C水溫的專用游泳缸中，強迫負重游泳，采用兩次游泳法，前后相差10分鐘，游泳至力竭為止；其中游泳至力竭的標準為游泳范圍逐漸縮小，動作明顯失調、慌張、鼻部在水面上下浮動，頭部沒入水面下3秒不能上浮。大鼠4吏用的游泳缸優(yōu)選為60cmx40cmx100cm的專用泳缸，j旦并不限于上述規(guī)格的游泳缸，還可以是其它常用的泳缸；其中在負重游泳時，每只大鼠的負重優(yōu)選為按每只大鼠自身體重的5%計算。本發(fā)明解決了目前沒有過逸型氣虛證候動物模型的不足，為規(guī)范、標準、科學的評價中醫(yī)藥提供了一種新方法，具有造模方法簡單、易于操作和推廣，貼近臨床的特點。具體實施例方式以下通過實施例對本發(fā)明進行進一步的闡述，但本發(fā)明并不受限于此。實施例1、模型制備材料及方法1.1、動物清潔級的Wistar;維性大鼠，體重160-180g,購于北京維通利華實驗動物技術有限/>司，許可證編號SCXK(京)2007—0001。1.2、藥物人參凍干粉，由石家莊以嶺藥業(yè)股份有限公司提供，為淡黃色凍干劑,使用前取102.86mg干粉加入100ml0.5簡C-Na中,相當于0.12g生藥/ml，4。C保存?zhèn)溆谩?.3、高脂飲料的配制每100g基礎飼料中加入全脂奶粉15g，豬油5g,蛋黃50g,黃豆15g,魚肝油10滴(約0.35g)，膽酸鈉0.5g;1.4、儀器代謝籠，大鼠專用泳缸；1.5、實驗分組及其方法，清潔級Wistar雄性大鼠45只，隨機分為3組空白對照組、氣虛模型組、人參干預組，每組15只；空白對照組大鼠分別置于代謝籠中(單籠)，飼以普通飼料，自由飲水;氣虛模型組大鼠分別置于經改造的代謝籠中(單籠)，籠內的空間以保持其基本安靜、且能夠轉身移動為標準(空間據(jù)大鼠的生長狀況可隨時調整)，祠以高脂肪飼料，自由飲水；人參干預組大鼠于實驗開始按lml/100g給予人參凍干粉CMC-Na混懸溶液灌胃(1.2g生藥/kg/d),l次/天，其它處理同氣虛模型組。實驗共計10周。1.6、觀察指標及^企測方法1.6.1、大鼠生物學表征觀察制定半定量評分表(見表1)于實驗結束后對大鼠生物學表征進行觀察。表l、實驗大鼠生物學表征半定量評分觀察表<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>1.6.2、力竭游泳實一驗實驗結束后，每只大鼠在25-27。C水溫的專用游泳缸(60cmx40cmx100cm)中，被強迫負重(每只大鼠的負重按自身體重的5°/。計算)游泳，采用兩次游泳法，前后相差10分鐘，游泳至力竭為止，以最大限度耗竭動物體力(力竭標準游泳范圍逐漸縮小，動作明顯失調、慌張、鼻部在水面上下浮動，頭部沒入水面下3秒不能上浮為力竭標準)。1.7、統(tǒng)計分析應用SPSS12.0軟件統(tǒng)計，采用單因素方差分析法，組間兩兩比較用LSD法檢驗，所有數(shù)據(jù)均以均數(shù)士標準差(；±s)的形式表示，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。2結果2.1、各組大鼠生物學表征評分結果見表2。表2、實驗各組大鼠生物學表征觀察評分結果(；±s)組別N(只)分值空白7于照紐_151.00±0.50氣虛模型組154.25±1.21*人參口服組152.08±0.90#注與空白對照組比4交，*P<0.01;與氣虛模型組比較，#P<0.01;實驗結果顯示，對照組大鼠活潑好動，反應靈敏，氣虛才莫型組大鼠則表現(xiàn)^巻怠懶動，精神萎頓、四月支蜷縮，行動遲緩，甚則迷眼、縮肩拱背；皮膚^弛，背部毛色無光澤；尾、鼻顏色淡白少潤；大<更稀軟但有形，生物學表征評分與空白組比較顯著升高(P<0.Ol),人參口服組大鼠反應稍有遲鈍，自主活動少，皮膚略松弛，松軟，尾、鼻顏色淡紅少潤；大便干燥、有形、生物學表征評分與氣虛模型組比較顯著降低(P<0.01)。2.2、各組大鼠力竭游泳時間，結果見表3表3、實驗各組大鼠力竭游泳時間比較結果(x±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>注與空白對照組比較，*P<0.01;與氣虛模型組比較，#P<0.01;實驗結果顯示，與空白對照組比較，氣虛才莫型組大鼠力竭游泳時間明顯縮短，統(tǒng)計有顯著性差異(P<0.01);與氣虛模型組比較，人參口服組大鼠力竭游泳時間明顯延長，統(tǒng)計有顯著性差異(P<0.01)。由上述試驗結果可以看出，氣虛模型組大鼠評分顯著升高，其表征改變基本可以體現(xiàn)臨床神疲、懶言、氣短、乏力的氣虛證候表現(xiàn)；同時，氣虛模型大鼠力竭游泳時間顯著縮短，也表明其整體運動耐力降低，乏力癥狀明顯。其次、治療作用的反證也是衡量模型是否成功的一個重要標志。人參是中醫(yī)典型的補氣藥之一，本發(fā)明將人參用于氣虛證候模型的治療，結果顯示其可顯著改善模型大鼠的生物學表征，延長大鼠的力竭游泳時間，從而反正了氣虛證候模型的成功建立。權利要求1、一種建立過逸型氣虛證候動物模型的方法，其特征在于，該方法包括以下步驟將大鼠置于代謝籠中，飼以高脂飼料，自由飲水，經過8-10周造模時間的培養(yǎng)即得。2、根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于，所述高脂飼料的配方含以下成分，以100份基礎飼料計全脂奶粉10-15份、豬油3-5份、蛋黃40-50份、黃豆10-15<分、魚肝油0.2-0.5<分、膽酸鈉0.5份。3、根據(jù)權利要求2所述的方法，其特征在于，所述高脂飼料的配方含以下成分，以100份基礎飼料計全脂奶粉15份、豬油5份、蛋黃50份、黃豆15份、魚肝油0.35份、膽酸鈉0.5份。4、根據(jù)權利要求3所述的方法，其特征在于，所述代謝籠為單籠，籠內空間以保持大鼠基本安靜、且能夠轉身移動為標準，籠內空間隨大鼠的生長狀況可進^f于調整。5、根據(jù)權利要求4所述的方法，其特征在于，所述造模時間為10周。6、根據(jù)權利要求5所述的方法，其特征在于，所述大鼠為Wistar雄性大鼠,體重在160-180g。全文摘要本發(fā)明公開了一種建立過逸型氣虛證候動物模型的方法，其包括將大鼠置于代謝籠中，飼以高脂飼料，自由飲水，經過8-10周造模時間的培養(yǎng)即得，本發(fā)明解決了目前沒有過逸型氣虛證候動物模型的不足，為中醫(yī)藥評價提供了一種新方法。文檔編號A61K49/00GK101427938SQ20071016610公開日2009年5月13日申請日期2007年11月7日優(yōu)先權日2007年11月7日發(fā)明者吳以嶺,袁國強申請人:河北以嶺醫(yī)藥研究院有限公司