專利名稱：：甜葉菊有效部位及其活性和應用的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明屬食品醫(yī)藥
技術領域：
，具體涉及甜葉菊有效部位甜菊苷類和黃酮類，以及該有效部位的降糖降脂活性和應用。技術背景近幾年來，人們營養(yǎng)過剩的問題日益嚴重，戒糖的呼聲越來越高，食用蔗糖過量給人們帶來的眾多危害促使科學家不斷尋找開發(fā)新型的糖源。甜葉菊葉片提取物中的甜菊苷及其它雙萜糖苷相關物作為一類高甜度、低熱值的天然甜味劑產品越來越受到廣大消費者的青睞。它不僅符合現(xiàn)代飲食健康的要求，而且也為糖尿病、肥胖病、高血壓、心臟病的患者提供了不誘發(fā)病情的甜味代替品，有著廣闊的發(fā)展前途。近年來，甜菊苷在食品、飲料和醫(yī)藥衛(wèi)生方面獲得了廣泛的應用，被譽為世界"第三糖源"。1985年6月我國衛(wèi)生部審定批準甜菊苷可以在各種食品、飲料及藥品中使用。甜葉菊(5YeWayfe&"G^朋5erz^7y.)屬菊科甜菊屬多年生草本植物，別名甜茶。甜葉菊原產于巴拉圭東北部與巴西接壤的阿曼拜山脈，當?shù)鼐用癜阉鳛樘鹚庯嬘靡延幸话俣嗄甑臍v史。甜葉菊性味甘、平，甜葉菊葉中富含甜葉菊苷類成分，除此之外，還含有留醇類和黃酮類成分。目前，從甜葉菊中確定出降糖降脂有效部位尚未見報道。
發(fā)明內容本發(fā)明的目的在于提供一種甜葉菊有效部位，該有效部位主要包括甜菊苷類和黃酮類。本發(fā)明的另一個目的在于提供甜葉菊有效部位的降糖降脂活性。本發(fā)明的再一個目的在于提供甜菊苷有效部位的制劑及其在藥品、食品領域的應用。本發(fā)明的目的是通過以下途徑實現(xiàn)的-本發(fā)明提出的甜葉菊有效部位系從甜葉菊干燥葉中提取分離得到。其提取工藝為甜葉菊干燥葉片加3090%乙醇，回流提取23次，每次提取12小時，溶劑用量為515倍量(L/kg)。大孔吸附樹脂純化工藝為選用AB-8、HPD400等中等極性或弱極性大孔吸附樹脂作為純化用樹脂,甜葉菊乙醇提取物上樣液濃度1:41:12(以生藥量(g):分散毫升數(shù))，吸附流速29BV/h，樹脂柱徑高比1:51:10，上樣量為100500mg/mL(以生藥量計)，040%乙醇洗脫14倍樹脂體積進行除雜，用4090%乙醇洗脫36倍樹脂體積，洗脫流速為29BV/h。收集4090%乙醇洗脫液，回收溶劑，殘留物減壓干燥，即得甜葉菊有效部位。聚酰胺柱色譜純化工藝為甜葉菊乙醇提取物上樣液濃度l:41:12(以生藥量(g):分散毫升數(shù))，吸附流速29BV/h，樹月旨柱徑高比1:51:10，上樣量為100500mg/mL(以生藥量計)，先用040%乙醇洗脫14倍樹脂體積，收集洗脫液，回收溶劑，殘留物減壓干燥，得到甜菊苷部位；聚酰胺柱再用4090%乙醇洗脫36倍樹脂體積，洗脫流速為29BV/h，收集洗脫液，回收溶劑，殘留物減壓干燥，得到黃酮部位。將甜菊苷部位與黃酮部位適當調配，即為甜葉菊有效部位。本發(fā)明提出的甜葉菊有效部位主要包括甜菊苷類和黃酮類，其中甜菊苷部位主要包含有甜菊苷、斯替維伯苷、萊鮑迪苷A、B、C、D、E、F和杜爾可苷A及其衍生物等；黃酮部位主要包含有木犀草素，槲皮素，木犀草素-7-O-p-D-葡萄糖苷，芹菜素-7-0+D-葡萄糖苷，槲皮苷，槲皮素-3-0-P-D-阿拉伯糖苷，槲皮素-3-0-[4-0-反式-咖啡酰基-a-L-鼠李糖-(1—6)-j3-D-半乳糖苷]及其衍生物，以及4,5-雙咖啡酰奎寧酸及其衍生物等。甜菊苷部位中甜菊苷類成分百分含量的總和為5100%，黃酮部位中黃酮類成分百分含量的總和為5100%(w/w)。本發(fā)明提出的甜菊苷有效部位具有顯著的降糖與降脂作用。1實驗材料1.1藥物與試劑甜葉菊有效部位。四氧嘧啶購自SIGMA公司，貨號A7413—25G，樣品批號073K1626,白色粉末狀。葡萄糖北京試劑二廠，批號910208。鹽酸二甲雙胍貴州天安藥業(yè)股份有限公司產品，國藥準字H52020469。吉非羅齊膠囊哈藥集團制藥總廠產品，國藥準字H23020994。1.2動物ICR小鼠，SPF級，雌雄各半，體重1822g，由維通利華實驗動物技術有限公司提供，許可證號SCXK(京)2002-0003SD大鼠，SPF級，雌雄各半，體重為180-200g，由維通利華實驗動物技術有限公司提供，許可證號SCXK(京)2002-0003。詞料購自北京科澳協(xié)力公司，每天喂食1次。2試驗方法2.1對四氧嘧啶所致糖尿病小鼠模型的影響造模ICR小鼠80只，雌雄各半，初始體重1820g，適應性喂養(yǎng)2天。禁食(不禁水)12h后，尾靜脈注射四氧嘧啶70mg/kg，72小時后尾部取血，用血糖儀測禁食不禁水36h后的空腹血糖值，篩選空腹血糖〉ll.lmmol/L的小鼠40只作為糖尿病模型小鼠。分組將糖尿病模型小鼠按血糖值分層隨機分為4組①甜葉菊有效部位組，②正常對照組，③模型對照組，④二甲雙胍對照組。每組10只動物，雌雄各半。按10ml/kg灌胃給藥，每天l次，連續(xù)給藥21天。指標測定(1)食量和飲水量測定給藥期間，每天稱體重，每周測食量和飲水量。(2)糖耐量測定給藥第21天，禁食不禁水36h，取血測定血糖作為服糖前的血糖值，立即灌胃葡萄糖2.5g/kg，測定給糖后0.5小時，l小時及2小時的血糖值。統(tǒng)計方法對各試驗組測定血糖值取均值，采用孫瑞元，陳志揚，鄭青山教授等主編的DAS軟件對上述結果進行組間，f檢驗判定顯著性差異。2.2對高脂飼料喂養(yǎng)所致高血脂模型大鼠血脂含量的影響造模SD大鼠32只，雌雄各半，初始體重180200g。適應性喂養(yǎng)3天后，按體重分層隨機分為4組①甜葉菊有效部位組，②正常對照組，③模型對照組，吉非羅齊對照組(110mg/kg)。每組8只動物，雌雄各半。除空白對照組用基礎詞料喂養(yǎng)外，其余各組均采用高脂詞料(0.3%膽酸鹽，15%豬油，10%蛋黃粉，74.7%基礎飼料)飼養(yǎng)4w。給藥造模期間，大鼠按10ml/kg灌胃給藥，每天l次，連續(xù)6w。正常對照組和模型對照組分別給等體積溶媒。指標測定于給藥第29天，摘眼球取血2ml，離心，制備血清。用自動生化儀測定血清TG(甘油三酯)、T-CHO(總膽固醇)、低密度脂蛋白和高密度脂蛋白水平。剖取肝臟和腹后壁脂肪稱重。統(tǒng)計方法對各試驗組測定血清TG、T-CHO、低密度脂蛋白和高密度脂蛋白值取均值，采用孫瑞元，陳志揚，鄭青山教授等主編的DAS軟件對上述結果進行組間檢驗判定顯著性差異。3結果3.1對四氧嘧啶所致糖尿病小鼠模型的影響造模后，試驗各組小鼠血糖值與正常對照比較，均有顯著性的升高，表明四氧嘧啶造成的糖尿病模型成功。糖尿病小鼠給與試藥甜葉菊有效部位組治療后，血糖值逐步下降，給藥21天后血糖值顯著性下降，與模型對照組比較有生物統(tǒng)計學意義，表明甜葉菊有效部位組對四氧嘧啶造成的胰島(3細胞損傷而引起的實驗性糖尿病具有治療作用，結果見表l。糖耐量試驗結果如表2，二甲雙胍有效地抑制了葡萄糖灌胃后血糖的升高(P<0.001)，受試藥甜葉菊有效部位組也顯示了一定的抑制作用，在1小時及2小時血糖水平出現(xiàn)了顯著性下降。表明試藥能顯著抑制葡萄糖負荷糖尿病小鼠的血糖值升高，具有顯著的降糖作用。表i甜葉菊有效部位對糖尿病小鼠血糖的影響(i±s)組別血糖值(mmo1/1)降糖率給藥前給藥后10d給藥后21d(%)正常對照組6.5±0.76.6±0.96.7±1.3-模型對照組17.3±4.6##23.7±5.5##20.4±7.23##-二甲雙胍組17.9士4.920.4±5.9*13.8±4.6**32.35甜葉菊有效部位組16.0±4.121.0±3.814.9±2.3*26.96表2甜葉菊有效部位組對葡萄糖負荷小鼠糖耐量的影響(i±S)組別血糖值(mmo1/1)給糖前給糖30min給糖60min給糖120min正常對照組6.7±1.310,4±5.27.3±2.26.9±1.2模型對照組20.4±7.2##23.8±2.10##25.8±2.6##24.2士4.5"二甲雙胍組13.8士4.6"18.1±4.7*12.5±3.5**12.01±3.4**甜葉菊有效14.90±2.3*19.3±7.313.3±5.8**13.1±5.7**部位組注-給藥組與模型組比較，牽/5〈0.05,**尸<0.01;模型與對照組比較#尸<0.05，3.2對高脂飼料喂養(yǎng)所致高血脂模型大鼠血脂含量的影響3.2.1對血脂的影響通過高脂飼料造模后，模型組大鼠血脂各項指標甘油三酯、總膽固醇、LDL均顯著高于空白對照組，說明高脂模型造模成功。陽性對照藥物吉非羅齊組顯著降低血清中甘油三酯(P<0.05)、顯著升高HDL(P<0.05)，本試驗結果與本品的作用機制及文獻報道結果基本一致。甜葉菊有效部位組顯著降低血清中甘油三酯(PO.05)和LDL、顯著升高HDL(P<0.05)。表明受試藥甜葉菊有效部位具有顯著降低血脂作用。表3對高脂<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>注與空白對照組比較，#P<0.05，##P<0.01;與模型組比較，P<0.05，PO.Ol，PO.001本發(fā)明提出的有效部位可以單獨或與其它任何中西藥物或食物按任意比例配伍，用于制備藥物或功能性食品。含有本發(fā)明提出的有效部位的制劑可根據(jù)本領域公知的方法制備?？蓪⒈景l(fā)明提出的有效部位與一種或多種固體或液體藥物賦形劑和/或輔料結合，制成可作為人藥或獸藥使用的適當?shù)氖┯眯问交騽┝啃问?。含有本發(fā)明提出的有效部位的制劑，可以單位劑量形式給藥，給藥途徑可為腸道或非腸道，如口服、肌肉、鼻腔、口腔粘膜、皮膚、透皮、皮下、皮內、腹膜、直腸等。給藥劑型可以是液體劑型、固體劑型，如液體劑型可以是真溶液劑型、膠體溶液劑型、微粒劑型、乳劑劑型、混懸劑型。液體劑型形式可以是糖漿劑、酒劑、注射溶液、非水溶液、懸浮液或L液等；固體劑型例如片劑、錠劑、膠囊、滴丸劑、丸劑、顆粒劑、粉劑、霜劑、栓劑、散劑、膏劑等。含有本發(fā)明提出的有效部位的制劑，可以是普通制劑，也可以是緩釋制劑、控釋制劑、靶向制劑及各種微粒給藥系統(tǒng)等。為了將單位給藥劑型制成片劑，可以廣泛使用本領域公知的各種載體。關于載體的例子包括，賦形劑如碳酸銬、乳糖、磷酸f丐、磷酸鈉；稀釋劑與吸收劑如淀粉、糊精、硫酸轉、乳糖、甘露醇、蔗糖、氯化鈉、葡萄糖、尿素、碳酸f丐、白陶土、微晶纖維素、硅酸鋁、葡聚糖、膠態(tài)二氧化硅、阿拉伯膠、明膠、三硅酸鎂、角蛋白等;濕潤劑與粘合劑如水、甘油、聚乙二醇、乙醇、丙醇、淀粉漿、糊精、糖漿、蜂蜜、葡萄糖溶液、阿拉伯膠漿、明膠漿、羧甲基纖維素鈉、紫膠、甲基纖維素、磷酸鉀、聚乙烯吡咯烷酮等；崩解劑如干燥淀粉、海藻酸鈉、瓊脂粉、褐藻淀粉、碳酸氫鈉與枸櫞酸、碳酸鈣、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸鈉、甲基纖維素、乙基纖維素等；崩解抑制劑如蔗糖、三硬脂酸甘油酯、可可酯、氫化植物油等；吸收促進齊咖季銨鹽、十二烷基硫酸鈉等；潤滑劑如滑石粉、三乙胺硬脂酸鎂、三乙胺硬脂酸、二氧化硅、玉米淀粉、硬脂酸鹽、硼酸、液體石蠟、聚乙二醇等。還可以將片劑進一步制成包衣片，如糖包衣片、薄膜包衣片、腸溶包衣片，或雙層片和多層片等。為了將單位給藥劑型制成丸劑，可以廣泛使用本領域公知的各種載體。關于載體的例子是，例如稀釋劑與吸收劑，如葡萄糖、孚L糖、淀粉、可可酯、氫化植物油、聚乙烯吡咯烷酮、高嶺土、滑石粉等；粘合劑如阿拉伯膠、黃耆膠、明膠、乙醇、蜂蜜、米糊或面糊等；崩解劑如瓊脂粉、干燥淀粉、海藻酸鈉、十二烷基磺酸鈉、甲基纖維素、乙基纖維素等。為了將單位給藥劑型制成膠囊，可將本發(fā)明提出的有效部位與上述各種載體混合，并將由此得到的混合物置于硬明膠膠囊或軟膠囊中。也可將本發(fā)明提出的有效部位制成微囊劑，混懸于水性介質中形成混懸劑，亦可裝入硬膠囊中或制成注射劑應用。為了將單位給藥劑型制成口服液體制劑，如乳液、溶液、懸浮液、糖漿等，可根據(jù)需要任選添加劑如著色劑、防腐劑、乳化劑、懸浮劑、矯味劑(如薄荷、冬青油等)、甜味劑(如蔗糖、乳糖等)或其他材料。為了將單位給藥劑型制成注射用含水或非7lC制劑，如溶液劑、混懸型溶液劑、乳劑、凍千粉針劑，可含一種和/或多種藥效學上可接受的載體，如稀釋劑、潤濕劑、乳化劑、潤滑劑、防腐劑、表面活性劑或分散劑，以及常規(guī)的助溶劑、緩沖劑、pH調節(jié)劑等。稀釋劑可選自水、乙醇、聚乙二醇、1,3-丙二醇、乙氧基化的異硬脂醇、多氧化的異硬脂醇、植物油(如橄欖油、玉米油等)、明膠、可注射用有機酯(如油酸乙酯、月旨肪酸酯等)、聚氧乙烯山梨醇等。為了制備等滲注射劑，還可以添加適量的氯化鈉、葡萄糖或甘油。具體實施方式實施例l:甜葉菊有效部位膠囊劑的制備取甜葉菊有效部位200g，粉碎，過80目篩，與微晶纖維素100g混合均勻，以95%乙醇制粒，干燥，以20目篩整粒，灌裝膠囊。實施例2:甜葉菊有效部位片劑的制備取甜葉菊有效部位50g，粉碎，過80目篩，與微晶纖維素70g、羧甲基淀粉鈉5g混合均勻，以5XPVP制粒，干燥，以20目篩整粒，加入硬脂酸鎂2g，壓片。實施例3:甜葉菊有效部位滴丸劑的制備取甜葉菊有效部位60g，粉碎，過80目篩，混合均勻，投入180g加熱熔融的聚乙二醇6000中，攪拌至溶解，轉移至貯液瓶中，密閉并保溫在809(TC，調節(jié)滴丸機液滴定量閥門，由上往下滴入1015t:的液體石蠟中，將形成的滴丸瀝干并擦除液體石蠟，干燥。實施例4:甜葉菊有效部位口服液的制備取甜葉菊有效部位70g，粉碎，過80目篩，混合均勻，與蜂蜜1000g、蔗糖200g、苯甲酸鈉10g及蒸餾水2000ml混合，加熱至8590。C,攪拌使溶解，保溫30min，濾過，濾液加水稀釋至4000ml，攪拌均勻，灌封，滅菌。實施例5:甜葉菊有效部位注射液的制備取甜葉菊有效部位100g，加注射用水適量使、溶解，加配置量的0.02%的活性炭攪拌510min，濾過，濾液稀釋至10L左右，加氯化鈉調節(jié)滲透壓至等滲，調節(jié)pH7.58.0，超濾，灌封，10(TC滅菌30min。實施例6:甜葉菊有效部位粉針劑的制備取甜葉菊有效部位100g，加注射用水及稀氫氧化鈉適量使溶解，加配置量的0.02%的活性炭攪拌510min，濾過，濾液稀釋至1L，調節(jié)pH6.57.8，超濾，噴霧干燥，干粉無菌分裝。每支100mg，臨用前加注射用水適量使溶解，用氯化鈉輸液250500ml稀釋后緩慢靜脈滴注。權利要求1、一種甜葉菊有效部位，其特征在于該有效部位包括甜菊苷類和黃酮類，系從甜葉菊干燥葉中提取分離得到，其中甜菊苷部位主要包含有甜菊苷、斯替維伯苷、萊鮑迪苷A、B、C、D、E、F和杜爾可苷A及其衍生物等；黃酮部位主要包含有木犀草素，槲皮素，木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷，芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷，槲皮苷，槲皮素-3-O-β-D-阿拉伯糖苷，槲皮素-3-O-[4-O-反式-咖啡?；?α-L-鼠李糖-(1→6)-β-D-半乳糖苷]及其衍生物，以及4，5-雙咖啡?？鼘幩峒捌溲苌锏取?、如權利要求1所述的甜葉菊有效部位，其特征在于甜菊苷部位中甜菊苷類成分百分含量的總和為5100%(w/w)，黃酮部位中黃酮類成分百分含量的總和為5100X(w/w)。3、如權利要求1所述的甜葉菊有效部位，其特征在于該有效部位具有顯著的降糖與降脂作用。4、如權利要求l所述的甜葉菊有效部位的應用，其特征在于，該有效部位可以單獨或與其它任何中西藥物或食物按任意比例配伍，用于制備藥物或功能性食品。5、如權利要求4所述的甜葉菊有效部位的應用，其特征在于，將該有效部位與一種或多種固體或液體藥物賦形劑和/或輔料結合，制成可作為人藥或獸藥使用的適當?shù)氖┯眯问交騽┝啃问?，包括普通制劑、緩釋制劑、控釋制劑、耙向制劑及各種微粒給藥系統(tǒng)等，給藥途徑可為腸道或非腸道，給藥劑型可為液體劑型或固體劑型，如膠囊劑、片劑、丸劑、滴丸劑、顆粒劑、口服液、糖漿、沖劑、酒劑、注射劑、膏劑、散劑等。全文摘要本發(fā)明公開了一種甜葉菊有效部位及其活性和應用。該有效部位主要包括甜菊苷類和黃酮類，系從甜葉菊干燥葉中提取分離得到，其中甜菊苷部位中甜菊苷類成分百分含量的總和為5～100％(w/w)，主要包含有甜菊苷、斯替維伯苷、萊鮑迪苷A、B、C、D、E、F和杜爾可苷A及其衍生物等；黃酮部位中黃酮類成分百分含量的總和為5～100％(w/w)，主要包含有木犀草素，槲皮素，木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷，芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷，槲皮苷，槲皮素-3-O-β-D-阿拉伯糖苷，槲皮素-3-O-[4-O-反式-咖啡?；?α-L-鼠李糖-(1→6)-β-D-半乳糖苷]及其衍生物，以及4，5-雙咖啡酰奎寧酸及其衍生物等。該有效部位具有顯著的降糖與降脂作用，可單獨或與其它任何中西藥物或食物按任意比例配伍，用于制備藥物或功能性食品，用于高血糖和高血脂癥的治療。文檔編號A61K36/185GK101156883SQ20071016345公開日2008年4月9日申請日期2007年10月24日優(yōu)先權日2007年10月24日發(fā)明者斌劉,張來旺,石任兵,賓駱申請人:石任兵