專利名稱：4'－去甲表鬼臼毒素衍生物及制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬有機(jī)化合物的合成方法，涉及一種4’-去甲表鬼臼毒素衍生物及制備方法，主要涉及4β-取代氨基-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素衍生物及制備方法，以及在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
依托泊苷是天然產(chǎn)物鬼臼毒素的半合成衍生物，作為一類高抗腫瘤活性的糖苷化合物，廣泛用于睪丸癌，淋巴癌，白血病，非小細(xì)胞肺癌、急性粒細(xì)胞白血病等癌癥的臨床治療。
依托泊苷作為Topo II抑制劑發(fā)揮抗腫瘤作用。由于Topo II是細(xì)胞周期依賴性酶，又是P170糖蛋白的良好底物，所以與Topo I相比，腫瘤細(xì)胞對(duì)Topo II更易產(chǎn)生耐藥性；此外，癌細(xì)胞是從正常細(xì)胞轉(zhuǎn)化而來，兩類細(xì)胞的差異并不顯著，依托泊苷在殺死癌細(xì)胞的同時(shí)，對(duì)體內(nèi)的正常細(xì)胞，特別是分裂較快的骨髓和腸黏膜細(xì)胞等有損害作用，產(chǎn)生骨髓抑制、中性粒細(xì)胞減少、惡心、肺透明膜病及改變正常的呼吸功能等毒副作用，從而抑制了用藥量，阻礙了藥物療效的發(fā)揮。所以對(duì)依托泊苷進(jìn)行結(jié)構(gòu)改造，克服耐藥性，降低毒副作用成為該類化合物抗腫瘤化學(xué)治療得以繼續(xù)的關(guān)鍵。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種4’-去甲表鬼臼毒素衍生物，化學(xué)名為4β-取代氨基-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素衍生物，具有如下的結(jié)構(gòu)通式 其中R取代基為氨基化合物，a-h為氨基雜環(huán)取代基，i-n為鏈狀取代基
R＝a時(shí)，目標(biāo)化合物IIIa為4β-[N-(4H-1，2，4-三唑-4基)]氨基-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素；R＝b時(shí)，目標(biāo)化合物IIIb為4β-[N-(6-氨基吡啶-2基)]氨基-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素；R＝c時(shí)，目標(biāo)化合物IIIc為4β-[N-(2-氯吡啶-3-基)]氨基-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素；R＝d時(shí)，目標(biāo)化合物IIId為4β-[N-(5，6-二苯基-1，2，4-三嗪-3-基)]氨基-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素；R＝e時(shí)，目標(biāo)化合物IIIe為4β-[N-(1H-吲哚-6-基)]氨基-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素；R＝f時(shí)，目標(biāo)化合物IIIf為4β-[N-(咪唑并[1，2-a]吡啶-8-基)]氨基-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素；R＝g時(shí)，目標(biāo)化合物IIIg為4β-[N-(9H-嘌呤-6-基)]氨基-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素；R＝h時(shí)，目標(biāo)化合物IIIh為4β-[N-(1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-基)]氨基-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素；R＝i時(shí)，目標(biāo)化合物IIIi為4β-(4-二乙胺基甲基-苯胺基)-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素；R＝j(luò)時(shí)，目標(biāo)化合物IIIj為4β-(3-二乙胺基甲基-苯胺基)-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素；R＝k時(shí)，目標(biāo)化合物IIIk為4β-[4-(1-吡咯烷基甲基)-苯胺基]-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素；R＝1時(shí)，目標(biāo)化合物IIIl為4β-[3-(1-吡咯烷基甲基)-苯胺基]-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素；R＝m時(shí)，目標(biāo)化合物IIIm為4β-[4-(1-哌啶基甲基)-苯胺基]-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素；R＝n時(shí)，目標(biāo)化合物IIIn為4β-[3-(1-哌啶基甲基)-苯胺基]-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供4’-去甲表鬼臼毒素衍生物的制備方法，通過以下步驟實(shí)現(xiàn)將依托泊苷(化合物I)與碘化鈉(NaI)反應(yīng)發(fā)生4位碘代，得到中間體4β-碘代-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素(化合物II)，此步反應(yīng)所用的溶劑為二氯甲烷，催化劑為三甲基氯硅烷(TMSCl)，反應(yīng)在室溫條件下進(jìn)行。攪拌約1小時(shí)后，加入碳酸鋇(BaCO3)，并以三乙胺(Et3N)調(diào)節(jié)反應(yīng)體系至pH 7-8，然后加入R＝a-n的另一個(gè)原料氨基化合物(RNH2)，繼續(xù)室溫反應(yīng)8-10小時(shí)，得到化合物IIIa-n。所得的產(chǎn)物經(jīng)制備層析可得純產(chǎn)物。
本發(fā)明的合成路線 本發(fā)明的又一個(gè)目的是提供4’-去甲表鬼臼毒素衍生物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。初步的體外篩選發(fā)現(xiàn)它們對(duì)多種腫瘤細(xì)胞株，包括K562、KB、KB-R、A549、U251等均有抑制增殖作用，絕大部分產(chǎn)物顯示出較依托泊苷更強(qiáng)的細(xì)胞毒活性，尤其是對(duì)依托泊苷的耐藥腫瘤細(xì)胞株KB-R，除化合物IIIc外，其他產(chǎn)物的細(xì)胞毒活性較依托泊苷有顯著性提高，約提高10-1000倍。
總的來看，鏈狀取代基產(chǎn)物(IIIi-n)較氨基雜環(huán)取代基產(chǎn)物(IIIa-h)有更高的細(xì)胞毒活性，證實(shí)該類基團(tuán)(i-n)的長(zhǎng)度合適，有利于抗腫瘤活性的提高。在氨基雜環(huán)取代基產(chǎn)物(IIIa-h)中，雙雜環(huán)產(chǎn)物(IIIe-h)的細(xì)胞毒活性較單雜環(huán)產(chǎn)物(IIIa-d)更強(qiáng)，說明4位大體積取代基有利于抗腫瘤活性的提高。在鏈狀取代基產(chǎn)物(IIIi-n)中，取代基是以雜環(huán)通過一個(gè)碳原子與苯胺進(jìn)行取代，對(duì)位取代(IIIi，IIIk，IIIm)較間位取代(IIIj，IIIl，IIIn)有更強(qiáng)的細(xì)胞毒活性；取代基中的雜環(huán)對(duì)細(xì)胞毒活性的影響為哌啶雜環(huán)(IIIm，IIIn)＞吡咯烷雜環(huán)(IIIk，IIIl)＞二乙胺(IIIi，IIIj)。
本發(fā)明的特點(diǎn)是以依托泊苷為原料，在依托泊苷的4位上進(jìn)行氨基化合物的取代，合成抗耐藥性的4’-去甲表鬼臼毒素衍生物(IIIa-n)，與鬼臼毒素為原料的方法相比較，避免了4位表異構(gòu)化和4’位去甲基化。該類化合物經(jīng)初步的藥理活性篩選試驗(yàn)表明絕大多數(shù)化合物對(duì)腫瘤細(xì)胞有體外抑制作用，尤其是針對(duì)依托泊苷的耐藥株KB-R，細(xì)胞毒活性與母體化合物依托泊苷相比有顯著提高，說明這類雜環(huán)的引入能克服依托泊苷的耐藥性缺陷是成功的，可降低毒副作用。本方法操作簡(jiǎn)便，產(chǎn)率較高。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明結(jié)合實(shí)施例和附圖
作進(jìn)一步的說明。以下的實(shí)施例是說明本發(fā)明的，而不是以任何方式限制本發(fā)明。
實(shí)施例14β-[N-(4H-1，2，4-三唑-4基)]氨基-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素(化合物IIIa)的制備將依托泊苷88mg(0.15mmol)與碘化鈉90mg(0.6mmol)溶于1.5mL無水乙腈中，室溫?cái)嚢?；另將干燥的三甲基氯硅?6μL溶于1.5mL無水乙腈中，將此溶液緩慢滴加到反應(yīng)液中，室溫?cái)嚢?小時(shí)，得到中間體4β-碘代-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素(化合物II)，反應(yīng)液中加無水碳酸鋇90mg(0.45mmol)，攪拌10分鐘，加入無水三乙胺數(shù)滴至反應(yīng)液呈堿性，加入3-氨基-4H-1，2，4-三唑(0.18mmol)，室溫?cái)嚢?-10小時(shí)，抽濾，濾液減壓濃縮，殘留物少量二氯甲烷溶解，制備層析純化，得到黃色固體IIIa 54mg，收率78％。熔點(diǎn)123-127℃。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.32(s，1H，triazole-H)8.04(brs，2H，4’-OH，4-NH)，6.86(s，1H，H-5)，6.60(s，1H，H-8)，6.24(s，2H，H-2’，H-6’)，5.98(m，2H，OCH2O)，5.67(brs，1H，NH)，5.39(brs，1H，H-4)，4.48(m，1H，H-1)，4.32(m，1H，H-11a)，4.00(m，1H，H-11b)，3.64(s，6H，3’，5’-OCH3)，3.34(m，1H，H-2)，3.05(m，1H，H-3).
實(shí)施例24β-[N-(6-氨基吡啶-2基)]氨基-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素(化合物IIIb)的制備操作過程與實(shí)施例1同，只是用2，6-二氨基吡啶代替3-氨基-4H-1，2，4-三唑。得到黃色固體IIIb 62mg，收率84％。熔點(diǎn)131-135℃。
1H NMR(400MHz，DMSO)δ8.27(brs，1H，4’-OH)，7.05(t，J＝8.0Hz，1H，pyridine-H)，6.83(s，1H，H-5)，6.52(s，1H，H-8)，6.45(d，J＝8Hz，1H，4-NH)，6.26(s，2H，H-2’，H-6’)，5.97(d，J＝11.6Hz，2H，OCH2O)，5.69(dd，J＝17.6，8.0Hz，2H，pyridine-H)，5.45(brs，2H，NH2)，5.37(m，1H，H-4)，4.50(d，J＝5.2Hz，1H，H-1)，4.34(t，J＝7.8Hz，1H，H-11a)，3.74(m，1H，H-11b)，3.64(s，6H，3’，5’-OCH3)，3.26(dd，J＝14.4，5.2Hz，1H，H-2)，2.91(m，1H，H-3).
實(shí)施例34β-[N-(2-氯吡啶-3-基)]氨基-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素(化合物IIIc)的制備操作過程與實(shí)施例1同，只是用2-氯-3-氨基吡啶代替3-氨基-4H-1，2，4-三唑。得到黃色固體IIIc 61mg，收率80％。熔點(diǎn)129-134℃。
1H NMR(400MHz，DMSO)δ7.84(brs，1H，4’-OH)，7.27(s，1H，pyridine-H)，7.17(m，1H，pyridine-H)，6.84(m，1H，pyridine-H)，6.74(s，1H，H-5)，6.59(s，1H，H-8)，6.34(s，2H，H-2’，H-6’)，5.99(m，2H，OCH2O)，4.69(m，2H，H-4，4-NH)，4.57(m，1H，H-1)，4.36(t，J＝8.0Hz，1H，H-11a)，3.87(m，1H，H-11b)，3.80(s，6H，3’，5’-OCH3)，3.15(dd，J＝14.4，5.2Hz，1H，H-2)，3.07(m，1H，H-3).
實(shí)施例44β-[N-(5，6-二苯基-1，2，4-三嗪-3-基)]氨基-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素(化合物IIId)的制備操作過程與實(shí)施例1同，只是用3-氨基-5，6-二苯基-1，2，4-三嗪代替3-氨基-4H-1，2，4-三唑。得到黃色固體IIId 43.5mg，收率46％。熔點(diǎn)135-138℃。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.32(s，1H，4’-OH)，7.40(m，8H，Ph-H)，7.01(d，J＝7.2Hz，2H，Ph-H)，6.96(s，1H，H-5)6.61(s，1H，H-8)，6.30(m，3H，H-2’，H-6’，4-NH)，6.02(s，2H，OCH2O)，4.64(d，J＝5.2Hz，1H，H-4)，4.50(t，J＝8.0Hz，1H，H-11a)，4.26(m，1H，H-1)4.12(m，1H，H-11b)，3.66(s，6H，3’，5’-OCH3)，3.48(m，2H，H-2，H-3).
實(shí)施例54β-[N-(1H-吲哚-6-基)]氨基-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素(化合物IIIe)的制備操作過程與實(shí)施例1同，只是用6-氨基-1H-吲哚代替3-氨基-4H-1，2，4-三唑。得到黃色固體IIIe 36mg，收率46％。熔點(diǎn)136-139℃。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ12.40(brs，1H，NH)，7.77(s，1H，indole-H)，7.42(d，J＝8.0Hz，1H，indole-H)，6.80(s，1H，H-5)，6.63(dd，J＝8.4，1.6Hz，1H，H-8)，6.57(m，2H，indole-H)，6.30(m，3H，indole-H，H-2’，H-6’)，5.98(d，J＝8.0Hz，2H，OCH2O)，4.93(m，1H，H-4)，4.55(d，J＝5.2Hz，1H，H-1)，4.35(m，1H，H-11a)，3.75(t，J＝9.2Hz，1H，H-11b)，3.64(s，6H，3’，5’-OCH3)，3.37(m，1H，H-2)，3.06(m，1H，H-3).
實(shí)施例64β-[N-(咪唑并[1，2-a]吡啶-8-基)]氨基-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素(化合物IIIf)的制備操作過程與實(shí)施例1同，只是用8-氨基-咪唑并[1，2-a]吡啶代替3-氨基-4H-1，2，4-三唑。得到黃色固體IIIf 35mg，收率45％。熔點(diǎn)132-137℃。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.30(s，1H，4’-OH)，7.85(m，2H，heterocyclic-H)，7.40(s，1H，4-NH)，6.79(s，1H，H-5)，6.72(t，J＝7.2Hz，1H，heterocyclic-H)，6.56(s，1H，H-8)，6.32(d，J＝7.2Hz，1H，heterocyclic-H)，6.28(s，2H，H-2’，H-6’)，5.97(m，3H，OCH2O，heterocyclic-H)，5.09(m，1H，H-4)，4.51(d，J＝5.2Hz，1H，H-1)，4.43(t，J＝8.0Hz，1H，H-11a)，3.74(m，1H，H-11b)，3.65(s，6H，3’，5’-OCH3)，3.57(dd，J＝14.8，5.2Hz，1H，H-2)，3.06(m，1H，H-3).
實(shí)施例74β-[N-(9H-嘌呤-6-基)]氨基-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素(化合物IIIg)的制備操作過程與實(shí)施例1同，只是用6-氨基-9H-嘌呤代替3-氨基-4H-1，2，4-三唑。得到黃色固體IIIg 45mg，收率58％。熔點(diǎn)134-138℃。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ12.15(brs，1H，adenine-NH)，8.54(brs，1H，4’-OH)，7.93(s，1H，adenine-H)，7.52(s，1H，adenine-H)，6.96(s，1H，H-5)，6.86(s，1H，H-8)，6.20(s，2H，H-2’，H-6’)，5.95(s，1H，OCH2O)，5.87(s，1H，OCH2O)，5.42(brs，2H，H-4，4-NH)，5.00(m，H-11a)，4.41(m，2H，H-1，H-11b)，3.78(s，6H，3’，5’-OCH3)，3.06(m，1H，H-2)，2.98(m，1H，H-3).
實(shí)施例84β-[N-(1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-基)]氨基-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素(化合物IIIh)的制備操作過程與實(shí)施例1同，只是用3-氨基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶代替3-氨基-4H-1，2，4-三唑。得到黃色固體IIIh 63mg，收率82％。熔點(diǎn)135-138℃。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ10.15(s，0.65H，4’-OH)，8.52(d，J＝4.0Hz，1H，heterocyclic-H)，7.89，(d，J＝4.0Hz，1H，heterocyclic-H)，7.04(m，1H，heterocyclic-H)，6.86(s，1H，H-5)6.57(s，1H，H-8)，6.36(s，2H，H-2’，H-6’)，5.97(d，J＝6.4Hz，2H，OCH2O)，5.25(brs，1H，H-4)，4.63(d，J＝4.8Hz，1H，H-1)，4.47(t，J＝8.0Hz，1H，H-11a)，4.31(m，1H，4-NH)，3.96(t，J＝8.0Hz，1H，H-11b)，3.80(s，6H，3’，5’-OCH3)，3.19(dd，J＝14.0，5.2Hz，1H，H-2)，3.06(m，1H，H-3)；13C NMR(100MHz，CDCl3)δ174.88，170.39，152.70，149.01，148.32，147.19，146.51，134.71，131.88，131.66，130.38，129.82，113.97，109.53，109.26，108.50，101.18，94.15，72.41，69.85，67.69，56.02，50.35，43.00，41.22，37.84.
實(shí)施例94β-(4-二乙胺基甲基-苯胺基)-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素(化合物IIIi)的制備操作過程與實(shí)施例1同，只是用4-二乙胺基甲基苯胺代替3-氨基-4H-1，2，4-三唑。得到黃色固體IIIi 71.4mg，收率85％。熔點(diǎn)101-103℃。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.20(d，J＝8.0Hz，2H，Ph-H)，6.78(s，1H，H-5)，6.52(m，3H，Ph-H，H-8)，6.33(s，2H，H-2’，H-6’)，5.96(d，J＝6.8Hz，2H，OCH2O)，4.67(m，1H，H-4)，4.58(d，J＝5.2Hz，1H，H-1)，4.38(t，J＝8.0Hz，1H，H-11a)，3.99(t，J＝8.0Hz，1H，H-11b)，3.88(m，1H，4-NH)，3.76(m，6H，3’，5’-OCH3)，3.56(s，2H，N-CH2-Ph)，3.15(m，1H，H-2)，3.00(m，1H，H-3)，2.61(m，4H，CH2CH3)，1.10(t，J＝6.8Hz，6H，CH2CH3).
實(shí)施例104β-(3-二乙胺基甲基-苯胺基)-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素(化合物IIIj)的制備操作過程與實(shí)施例1同，只是用3-二乙胺基甲基苯胺代替3-氨基-4H-1，2，4-三唑。得到黃色固體IIIj 70mg，收率84％。熔點(diǎn)99-102℃。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.19(m，1H，Ph-H)，6.76(m，2H，H-5，Ph-H)，6.61(m，1H，Ph-H)，6.53(s，1H，H-8)，6.47(dd，J＝8.0，1.6Hz，1H，Ph-H)，6.33(s，2H，H-2’，H-6’)，5.96(d，J＝7.6Hz，2H，OCH2O)，4.65(m，1H，H-4)，4.59(d，J＝5.2Hz，1H，H-1)，4.37(m，1H，H-11a)，3.96(m，2H，H-11b，4-NH)，3.79(m，6H，3’，5’-OCH3)，3.50(m，2H，N-CH2-Ph)，3.22(m，1H，H-2)，3.01(m，1H，H-3)，2.64(m，4H，CH2CH3)，1.36(m，6H，CH2CH3)實(shí)施例114β-[4-(1-吡咯烷基甲基)-苯胺基]-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素(化合物IIIk)的制備操作過程與實(shí)施例1同，只是用4-(1-吡咯烷基甲基)-苯胺代替3-氨基-4H-1，2，4-三唑。得到黃色固體IIIk 53mg，收率63％。熔點(diǎn)95-99℃。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.27(brs，1H，4’-OH)，7.22(d，J＝8.4Hz，2H，Ph-H)，6.75(s，1H，H-5)，6.69(d，J＝8.4Hz，2H，Ph-H)，6.53(s，1H，H-8)，6.25(s，2H，H-2’，H-6’)，5.97(d，J＝10.8Hz，2H，OCH2O)，4.89(m，1H，H-4)，4.51(d，J＝5.2Hz，1H，H-1)，4.34(t，J＝8.0Hz，1H，H-11a)，3.98(m，2H，H-11b，4-NH)，3.65(m，8H，3’，5’-OCH3，N-CH2-Ph)，3.13(dd，J＝14.4，4.8Hz，1H，H-2)，3.00(m，1H，H-3)，2.16(m，2H，pyrrolidine-H)，2.03(m，2H，pyrrolidine-H)，1.25(s，4H，pyrrolidine-H).
實(shí)施例124β-[3-(1-吡咯烷基甲基)-苯胺基]-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素(化合物IIIl)的制備操作過程與實(shí)施例1同，只是用3-(1-吡咯烷基甲基)-苯胺代替3-氨基-4H-1，2，4-三唑。得到黃色固體IIIl 53mg，收率63％。熔點(diǎn)97-102℃。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.12(m，2H，Ph-H)，6.78(s，1H，H-5)，6.58(dd，J＝8.0，2.0Hz，1H，Ph-H)，6.50(s，1H，H-8)，6.45(d，J＝8.0Hz，1H，Ph-H)，6.33(s，2H，H-2’，H-6’)，5.95(d，J＝8.4Hz，2H，OCH2O)，4.74(m，1H，H-4)，4.57(d，J＝4.8Hz，1H，H-1)，4.37(t，J＝8.0Hz，1H，H-11a)，3.95(m，2H，H-11b，4-NH)，3.78(s，6H，3’，5’-OCH3)，3.58(s，2H，N-CH2-Ph)，3.13(dd，J＝14.0，5.2Hz，1H，H-2)，3.00(m，1H，H-3)，2.17(m，4H，pyrrolidine-H)，1.25(s，4H，pyrrolidine-H)實(shí)施例134β-[4-(1-哌啶基甲基)-苯胺基]-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素(化合物IIIm)的制備操作過程與實(shí)施例1同，只是用4-(1-哌啶基甲基)-苯胺代替3-氨基-4H-1，2，4-三唑。得到黃色固體IIIm 66mg，收率77％。熔點(diǎn)94-99℃。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.21(d，J＝8.8Hz，2H，Ph-H)，6.78(s，1H，H-5)，6.51(m，3H，Ph-H，H-8)，6.33(s，2H，H-2’，H-6’)，5.96(d，J＝7.2Hz，2H，OCH2O)，4.74(m，1H，H-4)，4.58(d，J＝5.6Hz，1H，H-1)，4.37(t，J＝8.0Hz，1H，H-11a)，3.96(m，2H，H-11b，4-NH)，3.78(s，6H，3’，5’-OCH3)，3.54(m，2H，N-CH2-Ph)，3.15(dd，J＝13.6，5.2Hz，1H，H-2)，3.01(m，1H，H-3)，1.47(m，6H，piperidine-H)，1.25(td，J＝7.2，1.2Hz，2H，piperidine-H)，0.92(td，J＝7.2，3.2Hz，2H，piperidine-H).
實(shí)施例144β-[3-(1-哌啶基甲基)-苯胺基]-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素(化合物IIIn)的制備操作過程與實(shí)施例1同，只是用3-(1-哌啶基甲基)-苯胺代替3-氨基-4H-1，2，4-三唑。得到黃色固體IIIn 64mg，收率75％。熔點(diǎn)95-100℃。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.14(t，J＝8.0Hz，1H，Ph-H)，6.80(s，1H，H-5)，6.70(m，2H，Ph-H)，6.52(s，1H，H-8)，6.46(dd，J＝7.6，1.6Hz，1H，Ph-H)，6.34(s，2H，H-2’，H-6’)，5.95(d，J＝7.6Hz，2H，OCH2O)，4.74(t，J＝4.8Hz，1H，H-4)，4.58(d，J＝5.2Hz，1H，H-1)，4.41(t，J＝8.0Hz，1H，H-11a)，3.97(m，2H，H-11b，4-NH)，3.79(s，6H，3’，5’-OCH3)，3.49(m，2H，N-CH2-Ph)，3.15(dd，J＝14.0，5.0Hz，1H，H-2)，3.24(m，1H，H-3)，1.47(m，8H，piperidine-H)，1.26(t，J＝7.2Hz，1H，piperidine-H)，0.92(td，J＝7.2，1.6Hz，1H，piperidine-H).
實(shí)施例154β-取代氨基-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素衍生物對(duì)不同腫瘤細(xì)胞的體外抑制作用1.實(shí)驗(yàn)材料細(xì)胞株人白血病細(xì)胞株K562、人口腔表皮癌細(xì)胞株KB及其耐藥株KB-R、人肺癌細(xì)胞株A549、人神經(jīng)膠質(zhì)瘤U251。
培養(yǎng)基HG-DMEM培養(yǎng)基或RPMI1640培養(yǎng)基，含10％小牛血清或胎牛血清。
藥物及配制藥物為4β-取代氨基-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素衍生物IIIa-n，藥物溶于DMSO，并按一定比例稀釋得到5個(gè)濃度。
2.實(shí)驗(yàn)方法將上述處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的腫瘤細(xì)胞，以2×104個(gè)/ml接種于96孔培養(yǎng)板中，每孔加細(xì)胞懸液200μl，在培養(yǎng)24h后，分別加入上述配制的藥液1μl，每個(gè)濃度設(shè)3個(gè)復(fù)孔。細(xì)胞在37℃，5％CO2培養(yǎng)箱中孵育48小時(shí)后，加入濃度為2.5mg/ml的MTT溶液20μl，繼續(xù)培養(yǎng)4小時(shí)。吸去上清液，加入100μlDMSO搖勻，用酶標(biāo)儀于570nm波長(zhǎng)下測(cè)定各孔的OD值，細(xì)胞抑制率的計(jì)算公式為細(xì)胞抑制率％＝(對(duì)照組OD值-用藥組OD值)/對(duì)照細(xì)胞OD值×100％用Bliss法求出IC50。
3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果4β-取代氨基-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素衍生物作用48小時(shí)后，分別測(cè)定IC50值。結(jié)果表明，絕大多數(shù)化合物對(duì)5種腫瘤細(xì)胞有較依托泊苷更強(qiáng)的細(xì)胞毒活性，其中IC50值小于10μg/ml有化合物IIIa-h、IIIj-n對(duì)人白血病細(xì)胞株K562；化合物IIIa、IIIe、IIIg-n對(duì)人口腔表皮癌細(xì)胞株KB；化合物IIIi、IIIk-n對(duì)人肺癌細(xì)胞株A549；化合物IIId、IIIf、IIIk-n對(duì)人神經(jīng)膠質(zhì)瘤U251。針對(duì)依托泊苷的耐藥株人口腔表皮癌耐藥細(xì)胞株KB-R，化合物IIIa、IIIe-i、IIIk-n的IC50值小于10μg/ml，除化合物IIIc外，其他化合物的細(xì)胞毒活性較依托泊苷有顯著性提高(10-1000倍)。它們對(duì)腫瘤細(xì)胞的體外抑制作用結(jié)果參見表1。
綜合測(cè)試此類化合物對(duì)不同腫瘤細(xì)胞的體外抑制作用，化合物IIIk-n對(duì)依托泊苷耐藥株KB-R的抑制作用最顯著，細(xì)胞毒活性明顯比依托泊苷強(qiáng)，達(dá)到了克服依托泊苷耐藥性效果。
表1 4β-取代氨基-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素衍生物作用48小時(shí)對(duì)腫瘤細(xì)胞的體外抑制作用。


權(quán)利要求
1.一種4’-去甲表鬼臼毒素衍生物，化學(xué)名為4β-取代氨基-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素衍生物，其特征是具有以下結(jié)構(gòu)通式 其中R為氨基化合物，a-h為氨基雜環(huán)取代基，i-n為鏈狀取代基
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的4’-去甲表鬼臼毒素衍生物，其特征是目標(biāo)化合物IIIa為4β-[N-(4H-1，2，4-三唑-4基)]氨基-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素，其R＝a；目標(biāo)化合物IIIb為4β-[N-(6-氨基吡啶-2基)]氨基-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素，其R＝b；目標(biāo)化合物IIIc為4β-[N-(2-氯吡啶-3-基)]氨基-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素，其R＝c；目標(biāo)化合物IIId為4β-[N-(5，6-二苯基-1，2，4-三嗪-3-基)]氨基-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素，其R＝d；目標(biāo)化合物IIIe為4β-[N-(1H-吲哚-6-基)]氨基-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素，其R＝e；目標(biāo)化合物IIIf為4β-[N-(咪唑并[1，2-a]吡啶-8-基)]氨基-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素，其R＝f；目標(biāo)化合物IIIg為4β-[N-(9H-嘌呤-6-基)]氨基-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素，其R＝g；目標(biāo)化合物IIIh為4β-[N-(1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-基)]氨基-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素，其R＝h；目標(biāo)化合物IIIi為4β-(4-二乙胺基甲基-苯胺基)-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素，其R＝i；目標(biāo)化合物IIIj為4β-(3-二乙胺基甲基-苯胺基)-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素，其R＝j(luò)；目標(biāo)化合物IIIk為4β-[4-(1-吡咯烷基甲基)-苯胺基]-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素，其R＝k；目標(biāo)化合物IIIl為4β-[3-(1-吡咯烷基甲基)-苯胺基]-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素，其R＝l；目標(biāo)化合物IIIm為4β-[4-(1-哌啶基甲基)-苯胺基]-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素，其R＝m；目標(biāo)化合物IIIn為4β-[3-(1-哌啶基甲基)-苯胺基]-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素，其R＝n。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的4’-去甲表鬼臼毒素衍生物的制備方法，其特征是通過一下步驟實(shí)現(xiàn)將依托泊苷與碘化鈉反應(yīng)發(fā)生4位碘代，得到化合物II的中間體4β-碘代-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素，此步反應(yīng)所用的溶劑為二氯甲烷，催化劑為三甲基氯硅烷，反應(yīng)在室溫條件下進(jìn)行，攪拌約1小時(shí)后，加入碳酸鋇，并以三乙胺調(diào)節(jié)反應(yīng)體系至pH 7-8，然后加入R＝a-n的氨基化合物原料，繼續(xù)室溫反應(yīng)8-10小時(shí)得到目標(biāo)化合物IIIa-n。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的4’-去甲表鬼臼毒素衍生物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明提供一類4’－去甲表鬼臼毒素衍生物IIIa－n，是以依托泊苷為原料，將其與碘化鈉反應(yīng)發(fā)生4位碘代，得到中間體II，攪拌后加入碳酸鋇，調(diào)節(jié)反應(yīng)體系至pH7－8，然后加入另一個(gè)原料氨基化合物，繼續(xù)室溫反應(yīng)8－10小時(shí)，得到目標(biāo)化合物IIIa－n。本發(fā)明方法避免了4位表異構(gòu)化和4’位去甲基化，操作簡(jiǎn)便，產(chǎn)率高。本發(fā)明提供的化合物IIIa－n對(duì)多種腫瘤細(xì)胞株有較強(qiáng)的體外抑制作用，其中絕大多數(shù)的細(xì)胞毒活性大于母體化合物依托泊苷，尤其是針對(duì)依托泊苷的耐藥細(xì)胞株KB－R，細(xì)胞毒活性較依托泊苷有顯著性提高，并降低毒副作用。結(jié)構(gòu)通式為上式。
文檔編號(hào)A61K31/403GK101074233SQ200710069640
公開日2007年11月21日 申請(qǐng)日期2007年6月22日 優(yōu)先權(quán)日2007年6月22日
發(fā)明者胡永洲, 杜文婷, 何俏軍, 楊波, 楊曉春 申請(qǐng)人:浙江大學(xué)