專利名稱：：用于治療或預(yù)防由革蘭氏陽性細(xì)菌引起的病癥的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及革蘭氏陽性感染的治療。更具體地，它涉及通ii拖用多種組合物(其發(fā)揮作用以從生物體中和和/或除去革蘭氏陽性毒素)進(jìn)行治療，以及應(yīng)用這些組合物進(jìn)行預(yù)防。最優(yōu)選地，這些組合物包含膽汁酸或膽汁酸鹽(如膽烷酸或膽烷酸鹽)、中性脂質(zhì)(如甘油三酯)和磷脂(如磷脂酰膽喊)，并用于治療或預(yù)防由革蘭氏陽性細(xì)菌引起的病癥，比如但不僅限于膿毒癥、膿毒性休克、全身炎癥反應(yīng)綜合征(SIRS)、具有器官功能異常和/或衰竭的SIRS、器官衰竭和器官功能異常。
背景技術(shù)：
：正常的血清含有許多脂蛋白顆粒，根據(jù)它們的密度對其進(jìn)行表征，即乳糜#^立、極低密度脂蛋白(VLDL)、低密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白(HDL)。它們由游離的和酯化的膽固醇、甘油三酯、磷脂、幾種其它次要的脂質(zhì)組分和蛋白質(zhì)組成。VLDL以甘油三酯的形式將能量運(yùn)輸至機(jī)體細(xì)胞用于]i&藏和利用。隨著甘油三酯被遞送，VLDL轉(zhuǎn)化為LDL。LDL將膽固醇和其它脂溶性物質(zhì)運(yùn)輸至機(jī)體內(nèi)的細(xì)胞，而HDL將過量的或不可用的脂類運(yùn)輸至肝臟用于消除。通常，這些脂蛋白處于平衡狀態(tài)，確保對脂溶性物質(zhì)適當(dāng)?shù)剡f送和去除。異常低的HDL可導(dǎo)致許多疾病狀態(tài)以及形成其它疾病的繼發(fā)并發(fā)癥。在正常情況下，天然HDL是表面覆蓋有磷脂單層的固體顆粒，所述磷脂單層封入疏水的核心。載脂蛋白A-I和A-II通過其a螺旋結(jié)構(gòu)域疏水面的相互作用附著于所&面。以其新生的或新分泌的形式，所述顆粒是圓盤形的并接受游離膽固醇i^其雙層內(nèi)。通過卵磷脂:膽固醇g轉(zhuǎn)移酶(LCAT)的作用，膽固醇被酯化并被移至所述圓盤的中心內(nèi)。膽固醇酯移動至所述中心是雙層內(nèi)空間和溶解度限制的結(jié)果。隨著越來越多的膽固醇被酯化并移到所述中心，HDL顆粒"膨脹"成球形顆粒。然后，集中在HDL"膨脹核心"的膽固醇酯和其它水不溶性脂質(zhì)通itfr臟被清除。Anantharamaiah在Segrest等人的Meth.Enzymol.128:627-647(1986)中描述了一系列形成"螺旋輪"的肽，其由該肽中氛基酸的彼此相互作用所致。這些螺旋輪在它們的構(gòu)型中表現(xiàn)出非極性面和極性面。該參考文獻(xiàn)顯示，通常，肽可以替換這些顆粒中的脫輔基蛋白質(zhì)。Jonasetal.，Meth.Enzym.128A:553-582(1986)已制備多種與HDL類似的重建顆粒。所述技術(shù)包括通過標(biāo)準(zhǔn)方法對HDL進(jìn)行分離和脫脂(Hatchetal"Adv.Lip.Res.6:1-68(1968);Scanuetal"Anal.Biochem.44:576-588(1971))以獲得脫輔基HDL蛋白質(zhì)。使用去垢劑透析，將脫輔基蛋白質(zhì)分級分離并與磷脂以及與或不與膽固醇進(jìn)行重建。Matzetal"J.Biol.Chem.257(8):4535-4540(1982)描述了磷脂酰^5^與載脂蛋白Al的膠束。描述了多種比例的該兩種組分，并提示所述方法可用于制造其它膠束。同時還提示使用所述膠束作為酶底物，或作為HDL分子的模型。然而，該文獻(xiàn)未討論應(yīng)用所述微團(tuán)除去膽固醇，也未給出有關(guān)診斷或治療用途的任何建議。Williamsetal"Biochem.&Biophys.Acta875:183-194(1986)教導(dǎo)引入血漿的磷脂脂質(zhì)體，其攜帶脫輔基蛋白質(zhì)和膽固醇。已公開了體內(nèi)收集脫輔基蛋白質(zhì)和膽固醇的脂質(zhì)體，并提示在與脫輔基蛋白質(zhì)相互作用并將其收集的磷脂脂質(zhì)體中膽固醇的攝取得到增強(qiáng)。Williamsetal"Persp.Biol.&Med.27(3):417-431(1984)討論了褲脂酰M脂質(zhì)體除去膽固醇。該文獻(xiàn)總結(jié)了先前的工作，表明含有脫輔基蛋白質(zhì)的脂質(zhì)體較之不含有脫輔基蛋白質(zhì)的脂質(zhì)體在體外更有效地從細(xì)胞中去除膽固醇。他們未討論體內(nèi)使用含有脫輔基蛋白質(zhì)的脂質(zhì)體或微團(tuán)，并勸告在任何情況下在體內(nèi)使用脂質(zhì)體時要小心。美國專利No.5,506,218;5,344,822;5,614,507;5,587,366;5,674,855(它們均通過參考并入本文)描述了含有磷脂(如磷脂跣膽喊)、天然脂類(如甘油三酯)以及膽汁酸或膽汁酸鹽(如膽烷酸或膽烷酸鹽如膽酸鈉)的制劑如何通過滅活脂質(zhì)A錨定分子"LPS"而行^^功能以防止或減輕革蘭氏陰性細(xì)菌感染(如通過鼠傷寒沙門氏菌(51.Jt^/"'附wnVi附)的感染)。在美國專利No.5,128,318(其公開內(nèi)容通過參考并入本文)中，其教導(dǎo)包含HDL相關(guān)的載脂蛋白以及能結(jié)合內(nèi)毒素以使其失活的脂質(zhì)的重建顆粒可用作減輕內(nèi)毒素毒性的有效物質(zhì)。已相當(dāng)驚人地發(fā)現(xiàn)，磷脂可以單獨(dú)使用或與另外的材料(如中性脂質(zhì)、膽汁酸鹽等)組^^吏用，作為減輕和/或防止革蘭氏陽性感染的有效藥劑。尤其優(yōu)選在基本不含肽和蛋白質(zhì)(如載脂蛋白(apolip叩rotein)或由其來源的肽)的組合物中單獨(dú)或與其它磷脂(如鞘脂類)組合使用磷脂酰膽堿(此后稱"PC")。中性脂質(zhì)(如甘油單酯、甘油二酯和甘油三酯)可以與所述磷脂組合，只要當(dāng)該組合物以靜脈內(nèi)推注的形式使用時中性脂質(zhì)的總量低于一定的重量百分比。當(dāng)以其它施用形式如靜脈內(nèi)(例如通過連續(xù)輸注)使用時，則所述重量百分比沒有這么關(guān)鍵，但^A所期望的。膽汁酸或膽汁酸鹽(如膽酸鹽(例如膽酸鈉))可以與所述其它兩種組分組合以得到特別有效的配方。本發(fā)明特別優(yōu)選的實(shí)施方案是那些其中中性脂質(zhì)是甘油三酯、膽固醇酯或膽固醇酯和甘油三酯的混合物的組合物。本文表明了膽汁酸和膽汁酸鹽(如膽酸鹽)和/或中性脂質(zhì)(如磷脂酰膽堿和/或甘油三酯)在治療、預(yù)防和/或防止革蘭氏陽性感染中中性脂質(zhì)的功效。這些膽汁酸可以單獨(dú)使用，或者與一種或多種磷脂和/或中性脂質(zhì)(如磷脂酰膽喊和/或甘油三酯)組^^吏用。這些組合物可用于治療或預(yù)防包括但不僅限于以上所述的那些病癥，優(yōu)選使用如以上所述的那些組合物，更優(yōu)選乳劑的形式。以下對本發(fā)明進(jìn)行更加詳細(xì)的描述優(yōu)選實(shí)施方案詳述實(shí)施例在以下的實(shí)驗(yàn)中，確定了含有磷脂酰膽喊、甘油三酯和膽酸鈉的乳劑可用于從血液中清除革蘭氏陽性毒素。制備乳劑，其在甘油水溶液(2.6%)中含有99.7mg/ml磷脂酰膽堿(此后稱"PC")、18mM膽酸鈉和占該乳劑脂質(zhì)總重量7.5%的甘油三酯(TG)的溶液。使用2.6%甘油溶液作為對照。將所述乳劑和對照均進(jìn)行1:10稀釋,將其添加至經(jīng)EDTA處理過的全血的測試溶液(以50%稀釋)，并向其添加各種稀釋度的從枯草芽孢桿菌(B.subtilis)獲得的5mg/ml脂罅壁酸(lipoteicholicacid)("LTA，，)溶液?；旌纤鰳悠凡⒃?7。C溫育4小時，之后將其在水上猝滅。將樣品離心(1000RPM,2000xg)，并使用市售的標(biāo)準(zhǔn)ELISA測定血漿腫瘤壞死因子("TNF")。表1(乳劑)和表2(對照)中的結(jié)果顯示了所述乳劑從血液中除去毒素的功效。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>表2:甘油對照<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>前面的實(shí)例對本發(fā)明在一方面進(jìn)行了詳述，其包括治療或預(yù)防由革蘭氏陽性細(xì)菌引起的膿毒癥、膿毒性休克、全身炎癥反應(yīng)綜合征(SIRS)、具有器官功能異常/衰竭的SIRS、器官衰竭和器官功能異常的方法。所述實(shí)例還顯示，膽汁酸或膽汁酸鹽家族的成員(如膽烷酸或膽烷酸鹽)還可以與磷脂和中性脂質(zhì)組合施用，或單獨(dú)與磷脂組合施用，用于例如預(yù)防、減輕、防止或治療革蘭氏陽性細(xì)菌感染。因此，含有膽汁^/膽汁酸鹽和磷脂之一或二者的不含肽和蛋白質(zhì)的組合物可用于治療這些感染。通過例如Hofmann,Hepatology4(5):4S-14S(1984)(通過參考并入本文)對膽烷酸進(jìn)行描述。特別注意第5S頁，圖1和2(通過參考并入本文)，其顯示膽烷酸的結(jié)構(gòu)特征。接受治療的對象優(yōu)itA，但本發(fā)明的實(shí)施同樣也適用于獸醫(yī)的情形。本文使用的"減輕"是指治療從而緩解由革蘭氏陽性細(xì)菌(例如枯草芽孢桿菌)產(chǎn)生的各種毒素中任何毒素所引起的感染的負(fù)擔(dān)?？梢酝ㄟ^以下方式實(shí)現(xiàn)預(yù)防在對象處于或?qū)⒁幱诳蓪?dǎo)致暴露于革蘭氏陽性細(xì)菌的情況下施用所述藥劑。通常，itiL生在手術(shù)期間。因此，可以在手術(shù)前向?qū)⒁M(jìn)行手術(shù)的對象施用該活性成分。治療所述對象所必需的磷脂和膽汁酸組合的有效量可以變化。通常，優(yōu)選總劑量可多達(dá)每千克所^f象體重約200mg到約800mg磷脂，盡管該量可根據(jù)感染的嚴(yán)重程度或在預(yù)防情形下風(fēng)險的程度而降低或增加。對于膽汁酸及鹽(如膽烷酸及其鹽)來說，使用每千克體重約10mg到約300mg的劑量，更優(yōu)選每千克體重15mg到約275mg的劑量。在還含有中性脂質(zhì)的組合物中施用膽汁^/膽汁酸鹽和磷脂是理想的，但不是必需的，因?yàn)椴缓行灾|(zhì)的磷脂乳劑也是預(yù)期的。聯(lián)合施用中性脂質(zhì)磷脂和中性脂質(zhì)比較理想是由以下事實(shí)中性脂質(zhì)和磷脂結(jié)合成類似于脂蛋白的顆粒，二者的不同在于所述顆粒不包含蛋白質(zhì)或肽組分(其當(dāng)然總是存在于脂蛋白中)。特別理想的治療形式是其中所述磷脂為磷脂酰膽堿(如卵黃磷脂酰膽堿、基于大豆的磷脂酰膽堿、或鞘脂)的治療形式。對于膽汁^/膽汁酸鹽來說，優(yōu)選膽烷酸和/或其鹽(如膽酸鈉、脫氧膽酸鈉和鵝脫氧膽酸鈉)。對于中性脂質(zhì)來說，優(yōu)選使用膽固醇酯或甘油三酯，但也可以使用其它中性脂質(zhì)，如角鯊烯或其它烴油、甘油二酯和甘油單酯和抗氧化劑(如維生素E)。所述組合物可施用的形式可以變化，尤其優(yōu)選推注或其它的靜脈內(nèi)形式。當(dāng)使用推注形式且所述組合物包含例如甘油三酯時，在給藥時一定要小心。眾所周知，如果施用量太大，則甘油三酯是有毒的。然而，普通技術(shù)人員可以容易地配制該組合物，從而降低或消除甘油三酯中毒的風(fēng)險。通常，當(dāng)使用推注形式時，所述組合物應(yīng)包含不超過約80wt。/。的甘油三酯或其它中性脂質(zhì)，優(yōu)選不超過70wt。/。。最優(yōu)選地，當(dāng)施用推注時，該組合物應(yīng)包含不超過約50Wt。/n的中性脂質(zhì)。然而，當(dāng)使用非推注形式如其它靜脈內(nèi)形式時，則中毒的風(fēng)險降低。但是，上述范圍優(yōu)選用于靜脈內(nèi)或其它施用形式，當(dāng)然應(yīng)當(dāng)理解它們不是必需的。優(yōu)選地，施用至多約200mg每千克體重的膽汁^/膽汁酸鹽或磷脂的劑量。施用至多約800mg/kg也是可行的。然而，劑量是常規(guī)的，并將取決于對象和施用形式而有所變化。如上所述，不含蛋白質(zhì)和肽的制劑需要存在至少一種磷脂或膽汁酸/膽汁酸鹽。對于磷脂來說，優(yōu)選存在至少一種中性脂質(zhì)，如甘油三酯、甘油二酯或甘油單酯。該組合物可以包含另外的物質(zhì)如甾醇(例如膽固醇、P-谷齒醇)、酯化或未酯化的脂類(例如膽固醇酯或未酯化的膽固醇)、烴油如角鯊烯、抗氧化劑如維生素E,但是這些不是必需的。當(dāng)然，在任何這樣的制劑中都可以使用多于一種磷脂和/或多于一種中性脂質(zhì)。當(dāng)使用中性脂質(zhì)和磷脂的組合時，中性脂質(zhì)應(yīng)以相對于所述組合物中脂類總量的約3%至多達(dá)約50%的重量存在。對于膽汁^/膽汁酸鹽來說，它們可以單獨(dú)使用或與磷脂、中性脂質(zhì)或與二者一起組合使用。關(guān)于這些另外的物質(zhì)(例如磷脂和中性脂質(zhì))，優(yōu)選的種類是以上所討論和提及的。任選的另外成分包括以上列出的那些。組合物在治療與細(xì)菌感染有關(guān)的特定病癥(如上述那些病癥)中的用途也是本發(fā)明的一部分。這些組合物優(yōu)選包含約5wt。/。到約30wt。/。的膽汁l膽汁酸鹽、約3wt。/o到約50wt。/o的中性脂質(zhì)、以及約10wt^。到約95wt。/。重量的磷脂，并且不含蛋白質(zhì)和肽。優(yōu)選地，這些組合物處于乳劑的形式。特別優(yōu)選含有約10-15wt。/。的膽汁^/膽汁酸鹽、約5wt。/。到約10wt。/。的中性脂質(zhì)，余量為磷脂的組合物。本文使用的短語"不含蛋白質(zhì)和肽"是指不含足以治療或防止如本文闡明的病癥的蛋白質(zhì)或肽或其二者的組合物，但可以存在殘余的、不足量的蛋白質(zhì)或肽。應(yīng)該注意到，這些重量百分?jǐn)?shù)^1相對于由三種組分組成的組合物而言的。當(dāng)該三組分體系與例如載體、佐劑或任選的成分(如以上討論的)組合時，相對于整個組合物的重量百分?jǐn)?shù)將降低；然而，每個組分相對于彼此之間的比例將保持不變。必須記住，這些治療性組合物總U本上不含蛋白質(zhì)和肽。對于不含膽汁酸或膽汁酸鹽的組合物來說，優(yōu)選地，這些不含蛋白質(zhì)、不含肽的組合物包含至少約3wt。/。到至多約50wt。/o的中性脂質(zhì)，余量為一種磷脂。優(yōu)選地，所述中性脂質(zhì)是甘油三酯，但可以是以上討論的其它中性脂質(zhì)中的任何類型。同樣，所述磷脂優(yōu)選為磷脂酰膽堿。本發(fā)明的組合物在治療或預(yù)防由革蘭氏陽性細(xì)菌引起的病癥中是有效的，所述病癥包括但不僅限于如由革蘭氏陽性細(xì)菌引起的膿毒癥、膿毒性休克綜合征、全身炎癥反應(yīng)綜合征或"SIRS"、具有器官功能異?；蛩ソ叩腟IRS、器官衰竭、和/或器官功能異常等。本發(fā)明的其它方面對于技術(shù)人員而言是清楚的，并且不需要在這里重中。應(yīng)當(dāng)理解，本發(fā)明的說明書和實(shí)施例是示例性的而非限制性的，并且本領(lǐng)域技術(shù)人員清楚在本發(fā)明的主旨和范圍內(nèi)的其它實(shí)施方案。權(quán)利要求1.一種用于治療或預(yù)防由革蘭氏陽性細(xì)菌引起的病癥的方法，所述病癥選自膿毒癥、膿毒性休克、全身炎癥反應(yīng)綜合征(SIRS)、具有器官功能異?；蛩ソ叩腟IRS、器官衰竭和器官功能異常，該方法包括向有此需要的對象靜脈內(nèi)施用有效量的不含蛋白質(zhì)、不含肽的組合物，所述組合物含有其量足以治療或防止所述對象中所述病癥的膽汁酸或膽汁酸鹽以及磷脂。2.權(quán)利要求l的方法，其中所述膽汁酸或膽汁酸鹽是膽烷酸或膽烷酸鹽。3.權(quán)利要求l的方法，其中所述磷脂是磷脂醜膽堿。4.權(quán)利要求l的方法，其中所述組合物還包含中性脂質(zhì)。5.權(quán)利要求4的方法，其中所述中性脂質(zhì)是甘油三酯。6.權(quán)利要求2的方法，其中所述膽汁酸是膽烷酸。7.權(quán)利要求l的方法，其中所述膽汁酸鹽是膽酸鹽。8.權(quán)利要求7的方法，其中所述膽烷酸鹽是膽酸鈉。9.權(quán)利要求2的方法，其中所述組合物還包含中性脂質(zhì)。10.權(quán)利要求9的方法，其中所述磷脂是磷脂酰膽堿并且所述中性脂質(zhì)是甘油三酯。11.權(quán)利要求l的方法，其包括靜脈內(nèi)施用所述組合物。12.權(quán)利要求l的方法，其中所述革蘭氏陽性細(xì)菌包括枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)。13.權(quán)利要求l的方法，其中所述革蘭氏陽性細(xì)菌產(chǎn)生脂磷壁酸(LTA)。14.權(quán)利要求l的方法，其中所述組合物處于乳劑的形式。15.權(quán)利要求4的方法，其中所述組合物包含約5wt。/。到約30wt%的膽汁酸或膽汁酸鹽、約3wt。/o到約50wt。/。的中性脂質(zhì)、以及約10wt%到約95wt。/o的磷脂。16.—種用于治療或預(yù)防由革蘭氏陽性細(xì)菌引起的感染的方法，該方法包括向有此需要的對象靜脈內(nèi)施用有效量的不含蛋白質(zhì)、不含肽的組合物，所述組合物含有其量足以治療或防止所述對象中所述感染的膽汁酸或膽汁酸鹽以及磷脂。全文摘要本發(fā)明描述了治療、防止和預(yù)防如膿毒癥、膿毒性休克、全身炎癥反應(yīng)綜合征或“SIRS”、具有器官功能異?；蛩ソ叩腟IRS、器官衰竭和器官功能異常等的病癥。這些病癥與被革蘭氏陽性細(xì)菌感染有關(guān)。所述治療包括施用包含磷脂、中性脂質(zhì)以及膽汁酸或膽汁酸鹽的組合物。文檔編號A61K35/50GK101252942SQ200680031406公開日2008年8月27日申請日期2006年8月25日優(yōu)先權(quán)日2005年8月29日發(fā)明者丹尼爾·萊文,托馬斯·S·帕克申請人:賽普斯治療有限責(zé)任公司