專利名稱：：利用吡喹酮治療炎性疾病的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及通過吡喹酮的治療抑制TNF-ot，NF-kB，IKK-a,IKK-p，ATF-2或p38激酶的方法。更具體地，本發(fā)明涉及吡喹酮治療或預(yù)防由這些蛋白的一種或者多種的數(shù)量和活性的增加導(dǎo)致的疾病，包括炎性疾病的用途。
背景技術(shù)：
：發(fā)炎是作為對多種傳染劑和/或毒素響應(yīng)的過程。促進(jìn)發(fā)炎的主要分子途徑之一涉及p38激酶的活化(磷酸化作用)，其通過IKK，IkB和NFkB直接或者間接導(dǎo)致了促炎性細(xì)胞因子TNF-ct的活化。TNF-ct、NF-kB、IKK-oc、IKK-P、ATF-2或p38激酶是各種炎性疾病，傳染疾病，免疫疾病和惡性疾病的介體。因為涉及發(fā)炎，長時間以來這些分子已經(jīng)是新型藥物研究的靶。真核因子kB(NF-kB)是在各種炎性和疾病狀態(tài)中的多向性轉(zhuǎn)錄活化因子，并且也調(diào)節(jié)了細(xì)胞因子的水平，包括TNF-oc。NF-kb通過提高TNF-oc的產(chǎn)生來促進(jìn)發(fā)炎，保護(hù)癌細(xì)胞免于凋亡細(xì)胞死亡，并且可提高它們的生長活性。此外，NF-KB作為HIV轉(zhuǎn)錄活化因子起作用。NF-kB的活性通過與抑制性IkB蛋白相互作用嚴(yán)格調(diào)節(jié)。在絕大部分其他細(xì)胞，NF-kb在細(xì)胞質(zhì)中以與抑制性分子例如IkBcx和IicBP相關(guān)的非活性形式被隔離。這種相互作用阻斷了NF-kB結(jié)合DM的能力并且導(dǎo)致了NF-kB主要局限于細(xì)胞質(zhì)。對各種誘導(dǎo)劑，例如細(xì)菌或病毒毒素的響應(yīng)的信號級聯(lián)NF-kB的活化導(dǎo)致IkB的降解，這使得NF-kB遷移到核中，在此NF-kB結(jié)合靶基因的增強子或促進(jìn)子并且調(diào)節(jié)它們的轉(zhuǎn)錄。通過胞外誘導(dǎo)物的活化取決于lKB蛋白的磷酸化作用和隨后的降解。NF-kB的活化通過含有兩個催化亞單元(IKKot和IKKP)的IKK蛋白激酶的作用獲得。IKKot和IKK0蛋白磷酸化IkB和NF-kB。這些磷酸化作用事件導(dǎo)致了IkB的快速降解?；罨D(zhuǎn)錄因子-2(ATF-2)是p38激酶的基質(zhì)蛋白并且通過由活化(磷酸化)的p38激酶的磷酸化作用來活化。這個途徑的凈結(jié)果是TNF-oc(主要的促炎性細(xì)胞因子之一)的產(chǎn)生。TNF-a是通過響應(yīng)各種免疫刺激包括脂多糖(LPS)的單核細(xì)胞性吞噬細(xì)胞釋放的。LPS是革蘭氏陰性菌的外部細(xì)胞膜的整個部分，它是在感染細(xì)菌并且激活了炎性路徑后釋放的。TNF-a的施用導(dǎo)致在感染和休克中發(fā)炎，出血，凝結(jié)和急性階段反應(yīng)。過量的TNF-a的產(chǎn)生是很多炎性疾病的標(biāo)志，這些疾病包括關(guān)節(jié)炎、移植物抗宿主病(GVHD)、腦型瘧、慢性肺炎和再灌注損傷。TNF-oc還作為在心肌梗塞，腦溢血和循環(huán)性休克的初始炎性階段中組織損壞的介體起作用。TNF-a也作為逆轉(zhuǎn)錄酶病毒(包括HIV-1)的復(fù)制的活化因子起作用。獲得性免疫缺陷綜合征(AIDS)是因通過人免疫缺陷病毒(HIV)感染T-淋巴細(xì)胞導(dǎo)致的。有三種類型的HIV:HIV-1、HIV-2和HIV-3。HIV損壞了T細(xì)胞-介導(dǎo)的免疫系統(tǒng)，產(chǎn)生了機會感染。HIV-1和HIV-2只在T細(xì)胞激活后感染T-淋巴細(xì)胞，因為病毒蛋白的表達(dá)和復(fù)制是通過T細(xì)胞激活介導(dǎo)和維持的。即使在活化的T細(xì)胞被HIV感染后，T-淋巴細(xì)胞仍必須維持產(chǎn)生HIV基因表達(dá)和/或復(fù)制的活性。通過保持T-淋巴細(xì)胞的活性，細(xì)胞因子，特別是TNF-a,與通過T細(xì)胞介導(dǎo)的HIV蛋白表達(dá)和/或病毒復(fù)制相關(guān)聯(lián)。這樣，如果TNF-a活性被抑制，通過HIV對T-淋巴細(xì)胞的維持能在被感染的個體中取消。細(xì)胞因子(例如TNF-a)也激活了在單核細(xì)胞和/或巨噬細(xì)胞內(nèi)HIV的復(fù)制。因此，抑制這種細(xì)胞因子的活性可以阻止T-淋巴細(xì)胞的激活。雖然已經(jīng)研發(fā)了TNF-a的抑制劑，但它們具有嚴(yán)重的副作用，包括嘔吐，惡心，頭昏眼花，腎上腺萎縮和抑制激素的產(chǎn)生。因此，需要一種安全有效的對TNF-ot產(chǎn)生的抑制劑。發(fā)明概述本發(fā)明提供了對涉及NF-kB、TNF-oc、IKK-oc、IKK-P、p38激酶或ATF-2數(shù)量和/或活性增加的疾病的治療方法，包括下述步驟確定需要這種治療的哺乳動物；并向所述哺乳動物施用吡喹酮，或其藥物上可接受的鹽、藥物前體、酯或酰胺。在一個實施方案中，該疾病是炎性疾病。在本實施方案的一個方面，炎性疾病是自體免疫疾病。在另一個實施方案中，該疾病是類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、膿毒病、膿毒性休克、支氣管炎、類風(fēng)濕性脊推炎、糖尿病、哮喘、禿頭癥、中毒性休克、再灌注損傷、瘧疾、腦膜炎、牛皮癬、出血性心力衰竭、纖維化疾病、急性炎癥、腫瘤、自體免疫疾病、AIDS、HIV感染、骨關(guān)節(jié)炎、關(guān)節(jié)炎、慢性喉阻塞。Crohn、s病、潰瘍性結(jié)腸炎、肝炎、出血性休克、多中心硬化癥、輻射損害和過量氧氣損害、過敏性鼻炎、皮炎、抑郁、牙模定位法綜合征(gnathostaticsyndrome)、腦梗死、致癲癇性肺炎、心肌梗塞、炎性疾病、動脈硬化、高血壓、心血管疾病或狼瘡。在另一實施方案中，哺乳動物為人類。本發(fā)明還提供了在需要治療的哺乳動物中抑制TNF-a產(chǎn)生和/或活性的方法，包括如下步驟確定需要這種治療的哺乳動物；并向所述哺乳動物施用吡喹酮，或其藥物上可接受的鹽、藥物前體、酯或酰胺。在一個實施方案中，該哺乳動物是人類。在另一個實施方案中，TNF-ot的產(chǎn)生和/或活性與炎性疾病相關(guān)。在另一個實施方案中，該炎性疾病是類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、膿毒病、膿毒性休克、支氣管炎、類風(fēng)濕性脊推炎、糖尿病、哞喘、禿頭癥、中毒性休克、再灌注損傷、癡疾、腦膜炎、牛皮癬、出血性心力衰竭、纖維化疾病、急性炎癥、腫瘤、自體免疫疾病、AIDS、HIV感染、骨關(guān)節(jié)炎、關(guān)節(jié)炎、慢性喉阻塞。Crohn、s病、潰瘍性結(jié)腸炎、肝炎、出血性休克、多中心硬化癥、輻射損害和過量氧氣損害、過敏性鼻炎、皮炎、抑郁、牙模定位法綜合征、腦梗死、致癲癇性肺炎、心肌梗塞、炎性疾病、動脈硬化、高血壓、心血管疾病或狼掩。本發(fā)明的另一個實施方案是在需要治療的哺乳動物中治療關(guān)節(jié)炎的方法，包括下述步驟確定需要這種治療的哺乳動物；并向所述哺乳動物施用吡壹酮，或其藥物上可接受的鹽，藥物前體，酯或酰胺。在這個實施方案的一個方面，該哺乳動物是人類。附圖簡述圖l顯示了在THP-l免疫細(xì)胞系中吡喹酮對TNF-a合成，p38激酶的活性，ATF-2的活性，NFkB的活性，IKK-a/p的活性和IkB的活性的抑制活性。圖2顯示了用LPS/D-半乳糖胺處理的小鼠中吡喹酮對TNF-a合成、p38激酶的活性、ATF-2的活性、NFkB的活性、IKK-a/P的活性和IkB的活性的抑制活性。圖3為顯示了當(dāng)不同量(12.5mg/kg，25mg/kg或50mg/kg)的吡喹酮被施用到用LPS/D-半乳糖胺處理之前的小鼠時，血液中TNF-a的數(shù)量的條形圖。優(yōu)選實施方案的詳述本發(fā)明涉及吡喹酮，或其藥物上可接受的鹽，藥物前體，酯或酰胺用于抑制如下蛋白的一種或多種的產(chǎn)生和/或活性的用途NF-kB、TNF-a、IKK-a、IKK-P、p38激酶或ATF-2,和用于涉及這些蛋白質(zhì)的一種或多種數(shù)量和/或活性增加的障礙或疾病的治療。這些疾病經(jīng)常包括這些蛋白(特別是TNF-a)的一種或多種介導(dǎo)的發(fā)炎。因此，吡喹酮可用于治療一系列炎性疾病。吡查酮是具有下述結(jié)構(gòu)的化合物也知其化學(xué)名稱為2-(環(huán)己基羰基)-1，2，3，6，7，11P-六氫-4H-吡嗪并[2，1-oc]異喹啉-4-酮。吡?xí)怯糜谥委熂纳膊⊙x病的抗寄生藥(Cioli等，ParasitologyRes.90:S3-S9，2002)。在20年中沒有關(guān)于這種用作抗寄生劑的藥物的顯著副作用的報道。在急性和長期實驗中，這種化合物的毒性都很低。在大鼠中的LD50是2，000-3，000mg/kg。在施以劑量為100mg/kg的狗或貓中沒有觀察到不利效果。吡?xí)ㄟ^抑制NF-kB，TNF-ot，IKK-oc，IKK-p，p38激酶或ATF-2的一種或多種的數(shù)量和/或活性發(fā)揮其抗炎性效果。吡喹酮，或其藥物上可接受的鹽，藥物前體，酯或酰胺可用于預(yù)防或治療疾病包括，但不限于，膿毒病、膿毒性休克、支氣管炎、類風(fēng)濕性脊椎炎、糖尿病、哮喘、禿頭癥、中毒性休克、再灌注損傷、瘧疾、腦膜炎、牛皮癬、出血性心力衰竭、纖維化疾病、急性炎癥、腫瘤、自體免疫疾病、AIDS、HIV感染、骨關(guān)節(jié)炎、關(guān)節(jié)炎、慢性喉阻塞。Crohn、s病、潰瘍性結(jié)腸炎、肝炎、出血性休克、多中心硬化癥、輻射損害和過量氧氣損害、過敏性鼻炎、皮炎、抑郁、牙模定位法綜合征、腦梗死、致癲癇性肺炎、心肌梗塞、炎性疾病、動脈硬化、高血壓、心血管疾病或狼疾。吡唾酮可用于治療各種脊推動物例如鳥類和哺乳動物。適于利用本文所述組合物和方法治療的哺乳動物包括人類、靈長類、狗、貓、兔類、豚鼠、馬、豬、牛等。確定具有炎性疾病，或者涉及NF-kB、TNF-ct、IKK-a、IKK-P、p38激酶或ATF-2的一種或多種的數(shù)量和/或活性增加的疾病的哺孔動物，然后施用包括吡喹酮，或其藥物上可接受的鹽，藥物前體，酯或酰胺的藥物組合物。在一個實施方案中，該疾病具有炎性因素，在另一個實施方案中，該疾病選自以上提供的列表中。術(shù)語"藥物組合物"是指吡喹酮，或其藥物上可接受的鹽，藥物前體，酯或酰胺和其他化學(xué)組分(例如稀釋劑或載體)的混合物。藥物組合物有利于把化合物施用到有機體。現(xiàn)有技術(shù)存在施用化合物的多種技術(shù)，包括，但不限于口服、注射、氣霧、非腸道和局部施用。藥物組合物也可通過使化合物和無機或有機酸，例如鹽酸、氬溴酸、硫酸、硝酸、磷酸、甲磺酸、乙磺酸、對曱苯磺酸、水楊酸等反應(yīng)來獲得。術(shù)語"載體"定義了一種有利于化合物被細(xì)胞或者組織結(jié)合的化學(xué)化合物。例如二甲亞砜(DMS0)是經(jīng)常使用的載體因為它有利于許多有機化合物被有機體的細(xì)胞或者組織攝入。術(shù)語"稀釋劑"定義了在水中稀釋的化合物，該化合物溶解目標(biāo)化合物并且穩(wěn)定該化合物的生物活性形式。在現(xiàn)有技術(shù)中緩沖溶液中溶解的鹽用作稀釋劑。一類通常使用的緩沖溶液是磷酸緩沖鹽溶液因為它模擬人類血液的狀況。由于緩沖鹽可以低濃度控制溶液的pH，因此緩沖稀釋劑幾乎不改變化合物的生物活性。術(shù)語"生理上可接受的"定義了不取消該化合物生物活性和性質(zhì)的載體或稀釋劑。術(shù)語"藥物上可接受的鹽"是指對不會引起對施用該化合物的有機體顯著刺激并且不會取消該化合物的生物活性和性質(zhì)的化合物的制劑。藥物鹽可通過使本發(fā)明化合物和無機酸，例如鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸、甲磺酸、乙磺酸、對甲苯磺酸、水楊酸等反應(yīng)而獲得。藥物鹽也可通過使本發(fā)明化合物和堿反應(yīng)形成以下鹽來獲得，例如氨鹽，堿金屬鹽，例如鈉或鉀鹽，堿土金屬鹽，例如鉀或鎂鹽，有機堿的鹽，例如二環(huán)己基胺，N-甲基-D-谷酰胺，三(羥甲基)曱胺，和與氨基酸例如精氨酸，賴氨酸等反應(yīng)產(chǎn)生的鹽。術(shù)語"酯"是指具有式-(R)n-C00R、的化學(xué)基團(tuán)，其中R和R、獨立選自烷基，環(huán)烷基，芳基，雜芳基(通過環(huán)碳連接)和雜脂環(huán)(通過環(huán)碳連接)，和n是0或1。"酰胺，，是指具有式-(R)n-C(0)NHR、或-(R)n-NHC(0)R、的化學(xué)基團(tuán)。其中R和R、獨立的選自烷基、環(huán)烷基、芳基、雜芳基(通過環(huán)碳連接)和雜脂環(huán)(通過環(huán)碳連接)，和n是0或l。酰胺可為連在本發(fā)明分子上的氨基酸或多肽分子，從而形成藥物前體。術(shù)語"代謝物"是指在哺乳動物細(xì)胞內(nèi)吡喹酮轉(zhuǎn)化成的化合物。本發(fā)明的藥物組合物可包括吡喹酮的代謝物而不是吡喹酮。本發(fā)明的方法的范圍包括這些實例其中吡喹酮施用給患者，而代謝物是生物活性實體。"藥物前體"是指在體內(nèi)轉(zhuǎn)化為母體藥物的試劑。因為，在一些情況下，藥物前體比母體藥物更容易施用，因此經(jīng)常使用藥物前體。例如，它們通過口服施用來生物獲得，而該母體卻不行。所述藥物前體也可具有比母體藥物提高的在藥物組合物中的溶解性。一個藥物前體非限制性的實例是本發(fā)明的化合物，其以酯("藥物前體")的形式施用以利于傳送過細(xì)胞膜(在此水的溶解性對移動性是有害的)，但是一旦在水溶性是有利的細(xì)胞內(nèi)，其則被水解代謝為羧酸，為活性實體。藥物前體的其他實施方案可為與酸基團(tuán)結(jié)合的短鏈肽(聚氨基酸)，在此該肽新陳代謝以露出該活性基團(tuán)。在另一個方面，本發(fā)明涉及用此處所述的藥物組合物治療患者的方法。術(shù)語"治療"或"治療方法"不必須意為完全治愈。任何不期望的疾病征兆或癥狀任何程度的緩解或該疾病進(jìn)程的減緩都可認(rèn)為是治療。此外，治療可包括可惡化患者感受或表觀的整體感覺的行為。治療也包括延長患者的生命，即使該癥狀不緩解，該疾病狀況不改善，或者該患者的感受的整體感覺沒有提高。因此，本發(fā)明上下文中，提高尿的排出量，降低血清肌酸酐的水平，或提高肌酸酐的清除，可認(rèn)為是治療，即使該患者沒有被治愈或沒有一般感覺更好。本文所述藥物組合物可本身施用給患者，或以藥物組合物的形式施用，其中它們可與作為結(jié)合治療的其他活性組分或適合的載體或賦形劑混合。用于配制和施用本發(fā)明化合物的技術(shù)可在"Remington、sPharmaceuticalSciences,"MackPublishingCo.，Easton，PA，18thedition,1990中發(fā)現(xiàn)。施用的合適途徑例如可包括口服、直腸、局部、跨粘膜、和腸內(nèi)施用；非腸道的輸送，包括肌肉內(nèi)、皮下、靜脈內(nèi)、髓內(nèi)注射，以及鞘內(nèi)，直接心室、腹膜內(nèi)、鼻內(nèi)、或眼內(nèi)注射。可選地，人們可以局部而非全身方式施用該化合物，例如，通過直接在腎臟或心臟區(qū)域注射該化合物，經(jīng)常為儲庫型或緩釋型制劑。此外，人們可以經(jīng)靶定的藥物輸送系統(tǒng)，例如以涂覆有組織特異性抗體的脂質(zhì)體施用該藥物。該脂質(zhì)體會被器官選擇性靶定和吸收。本發(fā)明的藥物組合物可以自身已知的方式生產(chǎn)，例如通過傳統(tǒng)的混合方式，溶解，?；?，制作糖衣丸，研磨，乳化，包覆，包埋和片劑化工藝。從而用于根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物可以常規(guī)的方式使用一種或多種生理上可接受的栽體配制，該載體包括賦形劑和輔助劑，其可有利于該活性化合物加工成可藥物學(xué)使用的制劑。正確的配方依賴于所選擇的施用途徑?？墒褂帽绢I(lǐng)域適合和理解的任何公知的技術(shù)，載體，和賦形劑；例如上述的Remington、sPharmaceticalScience。用于注射，本發(fā)明的試劑可配制成含水溶液，優(yōu)選生理上相容的緩沖液，例如Hank、s溶液，Ringer、s溶液，或者生理緩沖鹽溶液。對于跨粘膜施用，適用于將被滲透的屏障的滲透劑在該配方中使用，這種滲透劑在本領(lǐng)域普遍公知。對于口腔施用，可通過將該活性化合物和本領(lǐng)域公知的藥物上可接受的載體結(jié)合來容易地配制該化合物。這種載體可使本發(fā)明的化合物配制成片劑、丸劑、糖錠、膠嚢、液劑、凝膠、糖漿、漿液、懸浮液等用于待治療患者的口服攝取。用于口服施用的藥物配方可通過混合一種或多種固體賦形劑和本發(fā)明的藥物組合物來獲得，優(yōu)選研磨所得混合物，并且將該粒劑混合物，如果需要，在加入合適的輔助劑之后，加工獲得片劑和糖衣丸。合適的賦形劑為，特別地，填料例如糖，包括乳糖、蔗糖、甘露糖、或山梨糖；纖維素配方例如，玉米淀粉、小麥淀粉、大米淀粉、土豆淀粉、凝膠、樹脂、黃芪膠、甲基纖維素、羥丙基甲基-纖維素、羧曱基纖維素鈉、和/或聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。如果需要，可加入崩解劑，例如交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮，瓊脂，或褐藻酸或其鹽例如褐藻酸鈉。對于局部施用，該化合物可配制成用以軟骨，凝膠，霜劑，貼劑，藥骨，凝膠，霜劑或洗劑，或以經(jīng)皮貼劑的形式施用到表皮。例如，軟貪和霜劑可使用水性和油狀基質(zhì)通過加入合適的增稠劑和/或膠凝劑來配制。洗劑可使用水性和油狀基質(zhì)和通常也含有一種或者多種乳化劑，穩(wěn)定劑，分散劑，懸浮劑，增稠劑，和著色劑來配制。通過合適的涂料來提供糖衣丸。為了這個目的，使用濃糖溶液，其可任選地含有阿拉伯樹膠，云母，聚乙烯吡咯烷酮，卡巴普凝膠，聚乙二醇，和/或二氧化鈦，漆用溶液，和適合的有機溶劑或溶劑混合物。也可在片劑或糖衣丸涂料中加入染料或色素以鑒定或特征化不同活性化合物劑的組合。可用于口服，包括舌下施用的藥物配方，其包括由凝膠制成的推入配合膠嚢，以及軟的，封閉的由凝膠和增塑劑，例如甘油或山梨糖醇構(gòu)成的膠嚢。該推入配合膠嚢可含有與填料例如乳糖，粘合劑例如淀粉，和/或潤滑劑例如云母或硬脂酸鎂和，任選地，穩(wěn)定劑共混的活性組分。在軟膠嚢中，該活性化合物可溶解或懸浮于合適的液體中，例如脂肪油類，液體石蠟，或液體聚乙二醇。此外，可加入穩(wěn)定劑。用于口腔施用的所有配方應(yīng)該以適于這種施用的劑量形式。對于口腔施用，該組合物可采取傳統(tǒng)方式配制的片劑或錠劑形式。對于通過吸入的施用，使用根據(jù)本發(fā)明的該化合物方便地通過使用合適的推進(jìn)劑，例如，二氯二氟甲烷，三氯氟代甲烷，二氯四氟乙烷，二氧化碳，或其他合適的氣體，以從加壓包裝或噴霧器中提供的氣霧型噴射裝置的形式輸送。在使用加壓氣霧劑的情況下，劑量單元可通過提供一個閥用于輸送計量量來確定。在吸入器和吹入器中使用的例如凝膠的膠嚢和藥筒可配制成含有該化合物和適合的粉型基質(zhì)(例如乳糖和淀粉)的粉末混合物。該化合物可配制成通過注射，例如，通過大藥丸注射和連續(xù)注射來非腸道施用。用于注射的配方以添加防腐劑的單位劑量形式，例如以安瓿或多劑量容器提供。該組合物可采取在油狀或水性介質(zhì)中的懸浮液，溶液或乳濁液的形式，和可含有配制劑例如懸浮劑，穩(wěn)定劑和/或分散劑。用于非腸道施用的藥物配方包括該活性化合物以水溶形式的水性溶液。此外，該活性化合物的懸浮液可制備成恰當(dāng)?shù)挠托宰⑸鋺腋∫?。合適的親脂性溶劑或介質(zhì)包括脂肪油例如蓖麻油，或者合成脂肪酸酯，例如油酸乙酯或三甘油酯，或脂質(zhì)體。水性注射懸浮物可含有提高該懸浮液粘度的物質(zhì)，例如羧甲基纖維素鈉，山梨醇，或右旋糖苷。任選地，該懸浮液也可含有合適的穩(wěn)定劑或提高該化合物的溶解度以允許用于高濃度溶液的制備的試劑?？蛇x地，該活性組分在使用前可為用于與合適的介質(zhì)，例如消毒無熱源水重構(gòu)的粉末形式。該化合物還可以以配制成直腸組合物，諸如栓劑或保留灌腸劑，例如其含有傳統(tǒng)的諸如可可脂或其它甘油類的傳統(tǒng)栓劑基質(zhì)。除了前述配方，該化合物也可配制成儲庫型配方。這種長效作用制劑可通過植入(例如皮下或肌肉內(nèi))或通過肌肉注射來施用。這樣，例如該化合物可與合適的聚合物或憎水材料(例如以可接受的油的形式的乳濁液)或離子交換樹脂，或以微溶的衍生物，例如，微溶的鹽配制。用于本發(fā)明的憎水化合物的藥物栽體是含有苯曱醇，非極性表面活性劑，水可混溶的有機聚合物，和水相的共溶劑體系。所用的通常共溶劑體系是VPD共溶劑體系，其是由3。/。w/v苯甲醇，8。/。w/v的非極性表面活性劑聚山梨醇酯80,和65^w/v聚乙二醇300，由乙醇補充剩余部分構(gòu)成的溶液。自然地，共溶劑系統(tǒng)的比例可在沒有破壞其溶解性和毒性特征的情況下適當(dāng)變化。此外，該共溶劑組分的個體可以變化例如，可使用其他低毒性非極性表面活性劑來替代聚山梨醇酯80TM;聚乙二醇的級分大小可以變化；其他生物相容性的聚合物可取代聚乙二醇，例如聚乙烯吡咯烷酮；和其他糖和聚糖類可替代葡萄或者，可使用其他用于憎水藥物化合物的輸送系統(tǒng)。脂質(zhì)體和乳狀液是用于憎水藥物的本領(lǐng)域公知的輸送介質(zhì)或載體。某些有機溶劑例如二甲亞砜也可使用，盡管通常毒性更大。此外，該化合物可使用緩釋系統(tǒng)輸送，例如含有治療劑的固體憎水聚合物的半滲透基質(zhì)。各種緩釋材料已經(jīng)確定并且是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的。緩釋膠囊可以，根據(jù)它們的化學(xué)性質(zhì)，在幾周到最多超過100天釋放該化合物。根據(jù)該治療劑的化學(xué)性質(zhì)和生物穩(wěn)定性，用于蛋白質(zhì)穩(wěn)定的其他策略也可使用。用于本發(fā)明藥物組合物的許多化合物以與藥物相容的抗衡離子的鹽的形式提供。藥物相容性鹽可與許多酸，包括但不限于鹽酸，硫酸，醋酸，乳酸，酒石酸，蘋果酸，琥珀酸等形成。與相應(yīng)的自由酸和堿的形式相比，鹽類在水性和其他質(zhì)子溶劑中溶解度更大。適用于本發(fā)明的藥物組合物包括含有實現(xiàn)其意圖的有效量的活性組分的組合物。更特定地，治療有效量是指可有效預(yù)防，緩解或改善疾病癥狀或延長治療受體存活的化合物的量。治療有效量的確定是在本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員能力范圍內(nèi)，特別是參照本文的詳細(xì)公開內(nèi)容的情況下。用于本發(fā)明藥物組合物的確切配方、施用路徑和劑量可根據(jù)患者的狀況由各個醫(yī)師來選擇。(參見例如，F(xiàn)ingl等1975，in"ThePharmacologicalBasisofTherapeutics"，ch.1p.1)。典型的，該施用到患者的劑量范圍可為約0.5-1000mg/kg該患者體重。根據(jù)患者所需要的，該劑量可以是在一天或者多天過程中給定的單一的或者兩個或多個的劑量。注意幾乎所有在本發(fā)明公開中提到的特定化合物，用于治療至少某些狀況的人用劑量已經(jīng)確定了。因此，在絕大部分情況下，本發(fā)明會使用這些相同的劑量，或約0.l%-500%，更優(yōu)選約25%-250%確定的人用劑量的劑量。對于沒有確定人用劑量說明書第12/16頁的，例如新發(fā)現(xiàn)的藥物化合物的情況，適用的人用劑量可根據(jù)EDs。或ID5。值來推導(dǎo)出，或從生物體外或生物體內(nèi)研究推導(dǎo)出的其他合適的值，如在動物的毒性研究和功效研究而限定的。雖然該確切的劑量根據(jù)藥物的不同而不同，在絕大部分情況下，可以制定該劑量的大概范圍。用于成年人類患者的日常劑量攝入量可為，例如每組分0.l--6000mg的口服劑量，優(yōu)選l--5000mg，例如25—5000mg或每組分0.01-100mg的靜脈內(nèi)，皮下，或肌肉劑量，優(yōu)選O.l-60mg，例如以游離堿計算，本發(fā)明藥物組合物或其藥物可接受鹽的每組分的l-40mg,每天施用該組合物1-4次。可選地本發(fā)明組合物可通過連續(xù)靜脈內(nèi)輸注施用，優(yōu)選以每天最多400mg每組分劑量。因此，通過口服施用的每個組分的總的日常劑量一般在l-2500mg范圍內(nèi)，并且通過非腸道施用的總的日常劑量通常為0.l-400mg。適合地，會在連續(xù)治療期間，例如一個星期或更多，或者數(shù)月或者數(shù)年施用該化合物。在一個實施方案中，該包括吡喹酮或其藥物上可接受的鹽，藥物前體，酯或酰胺的藥物組合物的劑量為約10-50mg每天。劑量和間隔可根據(jù)個體調(diào)整以提供該活性基團(tuán)的血漿水平，該水平足以維持調(diào)節(jié)效果，或最小的有效濃度(MEC)。該MEC對于每個化合物是變化的，但是可從體外數(shù)據(jù)中估測。獲得該MEC的所需劑量取決于個體的特性和施用的途徑。但是，HPLC測試或生物測試可用于確定血漿濃度。劑量間隔也可使用MEC值來確定，組合物應(yīng)該以維持血漿水平在10-90%,優(yōu)選30-90%,最優(yōu)選50-90。/。的時間內(nèi)高于該MEC的療法來施用。在局部施用或者選擇性攝入的情況下，該藥物的有效局部濃度可能不與血漿濃度相關(guān)。當(dāng)然，施用的藥物組合物的量取決于治療受體，該受體的體重，疾病的嚴(yán)重性，施用的方式以及處方醫(yī)師的判斷。如果需要，該組合物可以包裝或者分配器設(shè)備的形式提供，該包裝或設(shè)備可含有一種或者多種含有該活性組分的單位劑量形式。例如，該包裝可包括金屬和塑料薄片，例如泡軍包裝。該包裝或者該分配器設(shè)備帶有使用說明。該包裝或者分配器也可帶有與該容器有關(guān)的規(guī)范藥物的生產(chǎn)，使用，或銷售的政府部門規(guī)定形式的通知，該通知反應(yīng)了該部門對該藥物對人類或者脊稚動物的施用形式的批準(zhǔn)。例如，這類通知可標(biāo)示為通過美國食品和藥品監(jiān)督管理局(U.S.FoodandDrugAdministration)對于處方藥的批準(zhǔn)，或者該批準(zhǔn)產(chǎn)品的插件。也可制備含有在相容性藥物載體中配制本發(fā)明的化合物的組合物，放置在合適的容器內(nèi)，并且標(biāo)明治療的癥狀指征。本文所述組合物也可用于制備治療上述任何癥狀的藥物。實施例1樣品的制備從SIGMAAldrich(cat#p4668)獲得吡?xí)?，并將其溶解在三倍蒸餾水中用于下述研究中。實施例2抑制在THP-1細(xì)胞中的NF-kB活性和TNF-oc合成該THP-1人類單核細(xì)胞系用200nM佛波醇肉豆蔻醋酸酯(PMA)處理24小時，產(chǎn)生分化為功能性巨噬細(xì)胞。分化的thp-1細(xì)胞用2mg/ml脂多糖(lps)處理，并且總蛋白或核蛋白在0.5，1,2和3小時后分離。在一些分化的THP-1細(xì)胞培養(yǎng)物中，在總蛋白和核蛋白分離之前在相同的時間點添加LPS和100nM吡喹酮的組合物?？偟鞍缀秃说鞍锥伎赏ㄟ^蛋白質(zhì)印記法定量。如圖1所示，在LPS處理后一，二和三個小時TNF-ot的量有顯著的提高。相反，在用LPS和吡奮酮處理的THP-1細(xì)胞中在相同的時間點觀察少的多的TNF-oc。事實上，在兩個和三個小時的時間點，TNF-ot在用LPS和吡奮酮處理的THP-1細(xì)胞中幾乎觀察不到。在用LPS和吡喹酮處理的THP-1細(xì)胞中也觀察到p38，ATF-2和IKK-ot/P的活性形式(磷酸化)與單獨使用LPS相比顯著降低(圖1)?？侼F-kB水平在存在LPS時沒有變化，并且不受吡喹酮的影響；但是，這種轉(zhuǎn)錄因子向該核的移動在存在吡喹酮時不會發(fā)生，因為NF-kB在該核的級分中不存在(圖1)。因此，吡喹酮通過阻止LPS-誘導(dǎo)的NF-kB向發(fā)揮其轉(zhuǎn)錄活性作用的核內(nèi)的移動而抑制LPS-誘導(dǎo)的NF-kB的活性。oc-微管蛋白和核纖層蛋白B蛋白都不受LPS或吡查酮處理的影響(圖1)。實施例3吡?xí)獙?dǎo)致的TNF-oc水平在體內(nèi)的減少急性小鼠體內(nèi)膿毒病模型用于確定吡喹酮減少TNF-ot水平的能力。使用7-8周大，重25-30克的C57BL/6小鼠。隨意施用飼料(DaehanBiolink)和水，并且伺養(yǎng)籠的溫度和相對濕度分別保持在21-241C和4.0-80%。此外，該飼養(yǎng)籠的光線控制在每12小時白天和黑天轉(zhuǎn)化。八到十只小鼠分為一個實驗組。每只小鼠腹膜內(nèi)施用8ngLPS(SigmaAldrich)和8mgD-半乳糖胺(SIGMA)，每種溶解在100jnl蒸餾水中，以誘導(dǎo)急性膿毒病。為了觀察吡喹酮對在血液中TNF-cx水平的作用效果，吡喹酮以12.5mg/kg，25mg/kg，50mg/kg的劑量在用LPS/D-半乳糖胺處理之前30分鐘口服施用到每個實驗組中。該血液在用吡喹酮處理后1,3和5個小時抽樣。將血清從抽樣血液中分離出來，并且用ELISA(R&D系統(tǒng)，Minneapolis,MN)測量TNF-oc的量。在存在LPS/D-半乳糖胺和不存在吡?xí)獣r，在5個小時后TNF-oc的量有一個很大的提高至該對照量的6倍(圖2)。用吡喹酮預(yù)處理的小鼠導(dǎo)致血液血清中TNF-ot量的劑量依賴型降低。因此，吡喹酮顯著抑制在體內(nèi)LPS/D-半乳糖胺誘導(dǎo)的TNF-a的產(chǎn)生。實施例4通過吡喹酮提高LPS/D-半乳糖胺處理小鼠的存活雌性C57BL6小鼠(每實驗組8-10只)如上所述處理以誘導(dǎo)急性膿毒病，并且在用LPS/D-半乳糖胺處理之前30分鐘施用相同劑量的吡壹酮。該實驗重復(fù)三次，存活率顯示在表l中。<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>在每個實驗組中的小鼠在三個重復(fù)實驗中誘導(dǎo)膿毒病后5到6個小時開始死亡。并且在24小時內(nèi)，小鼠死亡97%，導(dǎo)致3°/。存活率。相反，在用LPS/D-半乳糖胺處理之前30分鐘已經(jīng)口服吡喹酮的小鼠中表現(xiàn)出在大于24小時存活率的顯著提高(使用12.5mg/kg存活率為14%，25mg/kg為64%和50mg/kg為93%)。因此，以劑量依賴的方式發(fā)生存活的增加。實施例5通過吡喹酮對NF-kb，IkB，KK和p38活性，和TNF-oc合成的抑制在ip注射8ngLPS和8mgD-半乳糖胺之前30分鐘，給小鼠口服施用50mg/kg吡喹酮。血液樣品在3小時后取得，并且使用Histopaque(SigmaAldrich，貓#1080)分離單核細(xì)胞。然后蛋白水平和它們的磷酸化狀態(tài)可通過蛋白質(zhì)印跡法測定。如圖3所示，用LPS/D-半乳糖胺的處理之后，p38激酶的磷酸化提高。使用吡?xí)A(yù)處理不會改變p38蛋白的數(shù)量，但是抑制了p38激酶的磷酸化。p38激酶通過磷酸化激活，并且也磷酸化(和活化)ATF-2。ATF-2的磷酸化在用LPS/D-半乳糖胺處理后提高，但是通過用吡喹酮預(yù)處理被抑制(圖3)。IKK-ot和IKK-P蛋白的數(shù)量和它們的磷酸化狀態(tài)也可以檢查。這些蛋白的數(shù)量在用LPS/D-半乳糖胺處理后沒有發(fā)生變化；但是，它們的磷酸化提高。這種磷酸化作用通過用吡喹酮預(yù)處理而抑制。IKK-a和IKK-p已知磷酸化IkB，并且磷酸化的lKB通過蛋白酶降解。在用LPS/D-半乳糖胺處理后，IicB蛋白的數(shù)量急遽減少，且其磷酸化作用提高。用吡喹酮預(yù)處理不會降低IkB蛋白的數(shù)量，但會抑制其磷酸化。實施例6小鼠膠原質(zhì)誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎模型將獲自JacksonLaboratory的雄性DBA/1小鼠在聚碳酸酯籠子內(nèi)維持在三到五只為一組，并且隨意喂食標(biāo)準(zhǔn)小鼠食品和水。環(huán)境設(shè)定為特定無菌環(huán)境。如前所述的(ArthritisRheum.2002，46:1109，2002;J.Immunol.,5846,2005)在8到12周大的小鼠中用牛型II膠原質(zhì)(CII)免疫。簡而言之，CII以2mg/ml溶解在0.05N醋酸，并且用Freund、s完全佐劑(CFA)在4X:乳化(1:1比例)。該小鼠接受該乳化劑O.lml，其含有CIIlOOjag，在尾根部進(jìn)行初次免疫。在初次免疫之后14天，以用CFA(1:1)類似的溶解和乳化的50jjg的CII注射腳掌進(jìn)行加強注射。CIA早在3wk開始發(fā)展，在5-7wk出現(xiàn)峰值，之后在10wk自動消除。小鼠被分成兩組。在該CII加強注射之后2周開始，一組施用介質(zhì)(鹽溶液)，和另一組施用在鹽溶液中的50mg/kg吡喹酮口服懸浮液。在初始施用后三周內(nèi)每天1-2次繼續(xù)施用p比會酮。然后，如上所述測試血液TNF-ot和p38的水平，并且在兩組小鼠中關(guān)節(jié)炎的發(fā)生率和嚴(yán)重性通過肉眼檢測來測定。施用吡?xí)慕M表現(xiàn)出TNF-a和p38血清水平的顯著降低，并且極大的降低了關(guān)節(jié)炎的嚴(yán)重性。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解，在不偏離本發(fā)明精神下可以作出許多和各種改變。因此，應(yīng)該清楚地理解本發(fā)明的形式只是說明性的而不是意圖對本發(fā)明的范圍進(jìn)行限制。以上引用的所有文件和其他信息此處全部并入?yún)⒖?。?quán)利要求1.一種用于治療涉及選自NF-KB，TNF-α，IKK-α，IKK-β，p38激酶和ATF-2的蛋白的數(shù)量和/或活性增加所致的疾病的方法，包括下述步驟確定需要這種治療的哺乳動物；并向所述哺乳動物施用吡喹酮，或其藥物上可接受的鹽、藥物前體、酯或酰胺。2.權(quán)利要求1的方法，其中所述疾病是炎性疾病。3.權(quán)利要求l的方法，其中所述炎性疾病是自體免疫疾病。4.權(quán)利要求l的方法，其中所述疾病選自類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、膿毒病、膿毒性休克、支氣管炎、類風(fēng)濕性脊推炎、糖尿病、哞喘、禿頭癥、中毒性休克、再灌注損傷、瘧疾、腦膜炎、牛皮癬、出血性心力衰竭、纖維化疾病、急性炎癥、腫瘤、自體免疫疾病、AIDS、HIV感染、骨關(guān)節(jié)炎、關(guān)節(jié)炎、慢性喉阻塞，Crohn、s病、潰瘍性結(jié)腸炎、肝炎、出血性休克、多中心硬化癥、輻射損害和過量氧氣損害、過敏性鼻炎、皮炎、抑郁、牙模定位法綜合征、腦梗死、致癲癇性肺炎、心肌梗塞、炎性疾病、動脈硬化、高血壓、心血管疾病和狼齊。5.權(quán)利要求l的方法，其中所述哺乳動物是人類。6.—種用于抑制在有此需要的哺乳動物中TNF-oc的產(chǎn)生和/或活性的方法，包括下述步驟確定需要這種治療的哺乳動物；并向所述哺乳動物施用吡喹酮，或其藥物上可接受的鹽、藥物前體、酯或酰胺。7.權(quán)利要求6的方法，其中所述哺乳動物是人類。8.權(quán)利要求6的方法，其中TNF-ot的產(chǎn)生和/或活性與炎性疾病有關(guān)。9.權(quán)利要求8的方法，其中所述炎性疾病選自類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、膿毒病、膿毒性休克、支氣管炎、類風(fēng)濕性脊椎炎、糖尿病、哞喘、禿頭癥、中毒性休克、再灌注損傷、瘧疾、腦膜炎、牛皮癬、出血性心力衰竭、纖維化疾病、急性炎癥、腫瘤、自體免疫疾病、AIDS、HIV感染、骨關(guān)節(jié)炎、關(guān)節(jié)炎、慢性喉阻塞、Crohn、s病、潰瘍性結(jié)腸炎、肝炎、出血性休克、多中心硬化癥、輻射損害和過量氧氣損害、過敏性鼻炎、皮炎、抑郁、牙模定位法綜合征、腦梗死、致癲癇性肺炎、心肌梗塞、炎性疾病、動脈硬化、高血壓、心血管疾病或狼掩。10.—種治療需要治療的哺乳動物關(guān)節(jié)炎的方法，包括下迷步驟確定需要這種治療的哺乳動物；并向所述哺乳動物施用吡喹酮，或其藥物上可接受的鹽、藥物前體、酯或酰胺。11.權(quán)利要求10的方法，其中，所述哺乳動物是人類。全文摘要本發(fā)明涉及治療炎性疾病，特別是自體免疫疾病(例如關(guān)節(jié)炎)的方法，包括施用吡喹酮或其藥物上可接受的鹽。文檔編號A61P31/00GK101106993SQ200680002639公開日2008年1月16日申請日期2006年1月17日優(yōu)先權(quán)日2005年1月18日發(fā)明者崔泰生,趙珉卿,辛得龍,陳東勛申請人:金克羅斯公司