專利名稱：：一種藏藥洪連提取物及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種藏藥洪連提取物，更確切地講本發(fā)明涉及了藏藥洪連總苷提取物的提取方法及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：藏藥洪連，又名藏黃連，屬兔耳草屬植物，主要分布在甘肅西南部、青海東部及西藏等地。生長(zhǎng)于海拔30006000米的高山草甸的亂石堆碎石地帶?！恫厮幹尽酚涊d洪連全草具有清熱解毒，治血旺、急慢性肝炎、肺病、高熱的功效；《中華藥?！酚涊d洪連全草可以治療肺炎、肝炎；《全國(guó)中草藥匯編》記載洪連全草具有治療肺炎、高血壓、乳腺癌的功效；《新華本草綱要》及《抗癌中草藥大詞典》中均記載洪連全草具有抗乳腺癌及縱隔癌的作用。雖然民間早就證明洪連全草具有抗癌的功效，有人在近期發(fā)現(xiàn)紅連的總提取物也具有一定的抗癌功效，但具體是洪連的那一類成分在行使抗癌的功效卻鮮有研究，目前僅有張雪等研究發(fā)現(xiàn)洪連的苷類可以抑制肺癌細(xì)胞增殖，并誘導(dǎo)其凋亡?，F(xiàn)有文獻(xiàn)中尚未發(fā)現(xiàn)洪連苷類作用于其它腫瘤細(xì)胞的報(bào)告，同時(shí)對(duì)洪連苷類提取物、提取方法也未見報(bào)道。本發(fā)明提供了一種藏藥洪連總苷提取物的提取制備方法及其在治療胃癌藥物中的應(yīng)用。參考文獻(xiàn)1《抗癌中藥大詞典》，劉村安，彭明。湖北科學(xué)技術(shù)出版社，1994，32《中華藥?！罚较鹊?。哈爾濱出版社，1993，83《藏藥志》，中國(guó)科學(xué)院西北高原生物所，青海人民出版社，1991，114《全國(guó)中草藥匯編》，謝宗萬(wàn)，《全國(guó)中草藥匯編》編寫組，人民衛(wèi)生出版社，19965張雪。兔耳草的小鼠體內(nèi)抑瘤作用及其抑瘤機(jī)理研究，吉林大學(xué)碩士論文，20016金蘭，陳志。短管兔耳草抗癌作用的研究，青海師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)，2006(2):85-8
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明涉及的洪連提取物是洪連總苷，包括脫去提取物中部分脂類雜質(zhì)成分后的產(chǎn)物以及它們的應(yīng)用。本發(fā)明的洪連提取物的提取方法，是將洪連的全草粉碎，將其置入乙醇中，或者置入乙醇水溶液中，用回流或室溫滲漉，提取液蒸去乙醇后將所得的浸膏溶解，液體用石油醚或乙醚洗滌。再對(duì)水相用水飽和的正丁醇或戊醇反復(fù)抽提，合并抽提液，減壓蒸餾濃縮，得到固體狀總苷?；蛘?，將洪連全草粉碎，用甲醇或乙醇提取，提取物蒸餾后再溶于少量甲醇或乙醇中，逐滴加入數(shù)倍于醇體積的丙酮、乙醚或丙酮乙醚的混合溶劑中，邊加邊搖，總苷可成粉質(zhì)析出，抽濾，干燥，得到固體狀總苷?；蛘撸瑢⒑檫B全草粉碎，用甲醇或乙醇提取，濃縮提取物，在濃醇溶液中加入新煅燒過(guò)的氧化鎂拌勻，烘干，磨碎，用甲醇或乙醇抽提，濃縮抽提液，得到固體狀總苷。采用本發(fā)明所提供的洪連總苷提取物處理人胃癌MGC-803，結(jié)果抑制了人胃癌MGC-803的增殖，并誘導(dǎo)其凋亡。這些結(jié)果提示本發(fā)明所提供的洪連總苷提取物可以在制備胃癌治療藥物中應(yīng)用。具體實(shí)施例方式實(shí)施例一洪連總苷提取物的提取方法l將洪連的全草粉碎，過(guò)40目篩，備用。將經(jīng)上處理的洪連草粉200g置入四倍量體積的70。/。乙醇溶液中，反復(fù)加熱回流三次，合并提取液后將提取液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸去乙醇，所得的浸膏用溫水溶解，所得液體用石油醚洗滌，直至石油醚相或乙醚相透亮顏色不再變化為止。再對(duì)水相用水飽和的正丁醇或戊醇反復(fù)抽提至抽出液蒸干后殘?jiān)苌贋橹?，合并抽提液，用水洗去還原糖，減壓蒸餾濃縮，得固體狀總苷。實(shí)施例二洪連總苷提取物的提取方法2將洪連全草粉碎，過(guò)40目篩，備用。將經(jīng)上處理的洪連草粉200g用四倍體積的甲醇溶液加熱回流提取，提取物蒸餾后再溶于少量甲醇中，逐滴加入數(shù)倍于醇體積的丙酮中，邊加邊搖，總苷成粉質(zhì)析出，抽濾，干燥，得到固體狀總苷。實(shí)施例三洪連總苷提取物的提取方法3將洪連全草粉碎，過(guò)40目篩，備用。將經(jīng)上處理的洪連草粉200g用四倍體積的70。/。乙醇溶液提取，濃縮提取物，在濃醇溶液中加入新煅燒過(guò)的氧化鎂拌勻，烘干，磨碎，用甲醇或乙醇抽提，濃縮抽提液，得到固體狀總苷。實(shí)施例四洪連總苷提取物抑制腫瘤細(xì)胞增殖細(xì)胞系人胃癌MGC-803。試驗(yàn)藥物將洪連總苷提取物用O.P/。DMS0配成12mg/ml。細(xì)胞培養(yǎng)人胃癌MGC-803細(xì)胞株培養(yǎng)于RPMI-1640完全細(xì)胞培養(yǎng)液中，培養(yǎng)液中含10%滅活小牛血清、L-谷氨酰胺2mmol/ml、青霉素和鏈霉素各100U/L。實(shí)驗(yàn)將培養(yǎng)于RPMI-1640完全細(xì)胞培養(yǎng)液中的指數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞，以1.0Xl(^個(gè)/ml的濃度接種于96孔塑料板，每孔100yl，以不加藥物僅加O.P/。DMSO的試驗(yàn)組為陰性對(duì)照組；藥物實(shí)驗(yàn)組分為五組，各組所加的洪連總苷濃度分別為12mg/ml、10mg/ml、8mg/ml、6mg/ml、4mg/ml。另設(shè)空白組、即不加藥物，而僅以RPMI-1640完全培養(yǎng)液代替細(xì)胞。再將以上陰性對(duì)照組、藥物組和空白組置于37。C、5。/。C02飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h、48h、和72h，實(shí)驗(yàn)終止前4小時(shí)在每個(gè)實(shí)驗(yàn)孔中加入MTT液10yl，孵育結(jié)束時(shí)棄去上層清液，所余物加入DMSO150yl，再用振蕩器搖勻，用酶標(biāo)儀于570nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔0D值。按下式求出抑制率抑制率(％)=(對(duì)照組OD均值-實(shí)驗(yàn)組OD均值)/對(duì)照組OD均值X100%洪連提取物對(duì)胃癌細(xì)胞MGC-803增殖實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1表l洪連總苷抑制胃癌細(xì)胞MGC-803增殖的結(jié)果(n=6x±s與對(duì)照組比較p〈0.05)<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>結(jié)果表明，洪連總苷提取物可以抑制MGC—803細(xì)胞增殖實(shí)施例五洪連總苷提取物誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的凋亡細(xì)胞系人胃癌MGC-803。試驗(yàn)藥物將洪連總苷提取物用O.P/。DMS0配成12mg/ml。細(xì)胞培養(yǎng)人胃癌MGC-803細(xì)胞株培養(yǎng)于RPMI-1640完全細(xì)胞培養(yǎng)液中，培養(yǎng)液中含10%滅活小牛血清、L-谷氨酰胺2mmol/ml、青霉素和鏈霉素各100U/L。實(shí)驗(yàn)將生長(zhǎng)于RPMI-1640完全細(xì)胞培養(yǎng)液中的指數(shù)生長(zhǎng)細(xì)胞，以1.0Xl(^個(gè)/ml的濃度接種于75ml的細(xì)胞瓶中，每瓶8ml。以不加藥物僅加O.P/。DMSO的試驗(yàn)組為陰性對(duì)照組；藥物組所加洪連總苷提取物濃度分別為6mg/ml，4mg/ml。經(jīng)洪連總苷提取物處理48h后，對(duì)受試細(xì)胞進(jìn)行的流式細(xì)胞儀測(cè)定中還發(fā)現(xiàn)，在GoAh峰前出現(xiàn)了凋亡峰，凋亡率分別為14.9%和7.6%，而對(duì)照組細(xì)胞的GoAh峰前卻無(wú)此現(xiàn)象，結(jié)果見表2。表2洪連總苷提取物對(duì)MGC-803細(xì)胞凋亡及細(xì)胞周期分布的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>結(jié)果表明洪連總苷提取物能誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，產(chǎn)生抗胃癌的作用。因此洪連總苷可以作為一種抗胃癌的藥物，或者作為抗胃癌藥物的原料應(yīng)用，也可應(yīng)用在其它腫瘤治療藥物中。權(quán)利要求1.一種藏藥洪連提取物，其特征是該提取物為洪連總苷。2.根據(jù)權(quán)利要求l所述的洪連總苷提取物，其特征在于將所得的總苷脫去了脂類、糖類等成分。3.根據(jù)權(quán)利要求1至2所述的洪連總苷提取物的提取方法，其特征是將洪連的全草粉碎，將其置入乙醇中，或者置入70%95%乙醇水溶液中，用回流或室溫滲漉，提取液蒸去乙醇后將所得的浸膏溶解，再用石油醚或乙醚洗滌，直至石油醚相或乙醚相透亮顏色不再變化為止。再對(duì)水相用水飽和的正丁醇或戊醇反復(fù)抽提至抽出液蒸干后殘?jiān)苌贋橹?，合并抽提液，用水洗去還原糖，減壓蒸餾濃縮。4.根據(jù)權(quán)利要求1至2所述的洪連總苷提取物的提取方法，其特征是將洪連草全草粉碎，用甲醇或乙醇提取，提取物蒸餾后再溶于少量甲醇或乙醇中，逐滴加入數(shù)倍于醇體積的丙酮、乙醚或丙酮乙醚的混合溶劑中，邊加邊搖，總苷可成粉質(zhì)析出，抽濾，干燥。5.根據(jù)權(quán)利要求1至2所述的洪連總苷提取物的提取方法，其特征是將洪連全草粉碎，用甲醇或乙醇提取，濃縮提取物，在濃醇溶液中加入新煅燒過(guò)得氧化鎂拌勻，烘干，磨碎，再用甲醇或乙醇抽提，濃縮抽提液。6.根據(jù)權(quán)利要求1至5所述的洪連總苷提取物，其特征在于該提取物可以在制備胃癌及其它腫瘤治療藥物中應(yīng)用。全文摘要洪連是生長(zhǎng)于西藏、青海、甘肅、新疆、內(nèi)蒙古等地的玄參科兔耳草屬的藥用植物。本發(fā)明涉及了洪連總苷提取物的提取方法及其在癌癥治療上的應(yīng)用。本發(fā)明所提供的洪連總苷提取物的提取方法是將洪連全草粉碎，用乙醇、甲醇等提取，再用石油醚等脫脂，正丁醇萃取，得到洪連總苷。本發(fā)明所提供的洪連總苷提取物能夠抑制胃癌細(xì)胞的增殖，并誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞的凋亡，可在制備胃癌治療藥物中應(yīng)用。文檔編號(hào)A61P35/00GK101310742SQ20061020102公開日2008年11月26日申請(qǐng)日期2006年10月26日優(yōu)先權(quán)日2006年10月26日發(fā)明者張春江,李紅玉,王曉琴申請(qǐng)人:蘭州大學(xué)