專利名稱：堿性成纖維生長因子聚乳酸緩釋納米微球凝膠及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種藥物劑型，具體的涉及一種堿性成纖維生長因子聚乳酸緩釋納米微球凝膠及其制備方法。
背景技術(shù)：
細(xì)胞生長因子自從他們的生理特性被發(fā)現(xiàn)后，有各種商品化產(chǎn)品在醫(yī)藥領(lǐng)域中使用，如已經(jīng)開發(fā)的藥物金因肽的主要成分為重組表皮生長因子，用于治療難愈性創(chuàng)面，如足靴區(qū)潰瘍、糖尿病性潰瘍、褥瘡及口腔潰瘍等。藥物貝復(fù)濟(jì)主要成分為堿性成纖維生長因子，堿性成纖維生長因子是一種具有廣譜作用的細(xì)胞因子，研究表明它可以有效促進(jìn)成骨細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞等增殖和分化。加速骨組織、軟組織和血管等各種組織的損傷愈合。廣泛使用于外傷、刀割切、凍傷、手術(shù)傷口及激光創(chuàng)面、醫(yī)學(xué)美容術(shù)后創(chuàng)面。各種原因引起的潰瘍、傷口延期不愈，糖尿病潰瘍、放射性潰瘍、褥瘡、瘺竇、宮頸糜爛、口腔潰瘍等，燒燙傷、包括淺II度、深I(lǐng)I度、肉芽創(chuàng)面。但是堿性成纖維生長因子等細(xì)胞因子在體內(nèi)存在著半衰期短(半衰期僅有3～10分鐘左右)，容易降解等缺點。一般作用時間不超過1小時。無論是全身和局部使用療效都不能令人滿意。在口腔使用時很快會被唾液溶解和稀釋，在皮膚使用很快會被蒸發(fā)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的就是針對現(xiàn)有的缺陷和不足，提供堿性成纖維生長因子聚乳酸緩釋納米微球凝膠及其制備方法。
為實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案一種堿性成纖維生長因子聚乳酸緩釋納米微球凝膠制劑，由下列重量份的組分制成堿性成纖維生長因子1～4份重均分子量為1～35萬的1％～60％聚乳酸溶液 5000～20000份注射用水或緩沖液 25000～100000份重均分子量為3～25萬的聚乙烯醇樹脂 100～500份聚氧乙烯聚氧丙烯醚2500～30000份其中，所述的緩沖液為磷酸鹽緩沖液、D-Hank’s中的一種；所述的重均分子量為1～35萬的1％～60％聚乳酸溶液，所用的溶劑為由二氯甲烷∶甘油＝3～6∶1的混合溶劑。
一種制備上述堿性成纖維生長因子聚乳酸緩釋納米微球凝膠的制備方法，包括以下步驟a)、按重量份稱取各組分，將堿性成纖維生長因子溶于緩沖液中，制成濃度為0.025％～0.1％的水相溶液；b)、將聚乳酸溶于二氯甲烷∶甘油＝3～6∶1的混合溶劑中，制成濃度為1％～60％的油相溶液；c)、將上述水相溶液、油相溶液混合，制備油包水型乳液，然后加入到由重均分子量為3～25萬的聚乙烯醇樹脂與緩沖液制成10～20％的溶液中，超聲分散1～60min，制成微乳液；d)、將步驟c)得到的微乳液在室溫下低速攪拌3～5h，通過自然揮發(fā)或抽提，除去有機(jī)溶劑二氯甲烷，即得堿性成纖維生長因子納米微球膠體溶液；e)、在堿性成纖維生長因子納米微球膠體溶液中，低溫攪拌下加入聚氧乙烯聚氧丙烯醚，使之溶解，制備成低溫4～5℃下為可流動的膠體，20～38℃下為凝膠的堿性成纖維生長因子聚乳酸緩釋納米微球凝膠制劑。
高分子微球包裹技術(shù)在醫(yī)藥領(lǐng)域得到了廣泛運(yùn)用，以高分子為載體的載藥納米微球不但可以控制藥物以一定的速度釋放，而且可以通過合適的釋藥途徑延長藥物的生理活性，提高藥物的穩(wěn)定性，而且具有一定的靶向性，從而使藥物的藥理活性達(dá)到較理想的效果。本研究中采用的高分子包埋材料聚乳酸在醫(yī)藥界已經(jīng)得到廣泛的應(yīng)用，具有組織相容性好，對人體安全無害等特點。而且是美國FDA批準(zhǔn)的少數(shù)可以在人體中使用的高分子可降解材料。聚氧乙烯聚氧丙烯醚(泊洛沙姆)是一種高分子非離子型表面活性劑，為美國國家處方集新增加的藥物輔助材料，具有在低溫下(4～5℃)為液體，體溫下為凝膠的獨特性質(zhì)。通過采用聚乳酸包封后制成納米微球具有長時間緩釋特點，而且凝膠具有黏附性能好，不易在皮膚和粘膜脫落和揮發(fā)的優(yōu)點。
吸取堿性成纖維生長因子聚乳酸膠體溶液約10ul，共10份樣本，用磷鎢酸(PTA)染色3分鐘，室溫下干燥15分鐘后掃描電鏡觀察，微球表面光滑圓整，球體大小均勻。掃描電鏡平均粒徑為0.045±0.013μm，粒徑分布范圍較窄。激光粒度分布測試儀測定粒徑，委托重慶科美納米醫(yī)藥有限公司完成。徑距＝(D90-D10)/D50。
取堿性成纖維生長因子對照品約10mg，精密稱重，置于100g量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，依次稀釋，使實際配置的對照品溶液濃度分別為1，5，10，20，50，100，250，500，1000ng/ml，加入到微量反應(yīng)板的微孔中。按照Chemicon公司提供的操作程序，采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)在HTS7000紫外熒光高效分析儀測定標(biāo)準(zhǔn)樣品在在490nm波長的吸光度(OD)。以O(shè)D值為縱坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)的bFGF濃度C進(jìn)行對數(shù)直線回歸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。回歸方程為A＝-0.3671+0.3276LnC，r＝0.9634。由圖像分析可知，在1-1000nm范圍內(nèi)為線性關(guān)系較好的直線方程，堿性成纖維生長因子濃度的對數(shù)與吸收度有定量關(guān)系。
本研究進(jìn)一步研究了制劑的藥物濃度、形態(tài)和粒經(jīng)分布、載藥量和包封率以及體外緩釋特性。
將制備的3批緩釋堿性成纖維生長因子微球溶液在4℃、40000rpm條件下離心，2h后分離樣品中上清液，測定bFGF濃度，分別計算bFGF的載藥量和包封率。其中載藥量公式 包封率公式為 再根據(jù)載藥量精密稱取含有1.5μg緩釋堿性成纖維生長因子微球放入EP管中(共3組)，加入生理鹽水至1g。模擬體內(nèi)環(huán)境在水浴箱中恒速振蕩(37±1℃，20rpm)，分別于0.5，1，1.5，2，2.5，3，3.5，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14d定時取樣，測定不同時點樣品上清液含量。以累計釋放量和時間擬合方程，作出緩釋bFGF微球體外釋藥曲線圖。
納米微球的包封率和載藥量分別為(91.72±1.31)％和[(27.65±0.44)×10-3]％。微球在14d內(nèi)，不僅一直持續(xù)釋放堿性成纖維生長因子，而且所釋放出的堿性成纖維生長因子濃度可以保持在一定的水平(67.25～89 81)n g.m L-1，平均濃度為(72.47±6 26)n g.m L-1。經(jīng)檢測表明突釋期僅為18.37％，14d后釋放度達(dá)75.72％。以累積釋放率和時間進(jìn)行擬合，微球的體外釋藥規(guī)律符合Higuichi方程Q＝27.7636 t1/2-13.4247，r＝0 9975(n＝3)。堿性成纖維生長因子微球的體外釋藥曲線也顯示PLA微球體外能夠持續(xù)釋藥，具有明顯的緩釋作用。
本發(fā)明的一種堿性成纖維生長因子聚乳酸緩釋納米微球凝膠制劑，可加速骨組織、軟組織和血管等各種組織的損傷愈合，廣泛使用于外傷、刀割切、凍傷、手術(shù)傷口及激光創(chuàng)面、醫(yī)學(xué)美容術(shù)后創(chuàng)面，以及各種原因引起的潰瘍、傷口延期不愈，糖尿病潰瘍、放射性潰瘍、褥瘡、瘺竇、宮頸糜爛、口腔潰瘍等，燒燙傷、包括淺II度、深I(lǐng)I度、肉芽創(chuàng)面等，通過合適的釋藥途徑延長藥物的生理活性，提高藥物的穩(wěn)定性，而且具有一定的靶向性，從而使藥物的藥理活性達(dá)到較理想的效果。本發(fā)明的制備方法科學(xué)合理，可以將堿性成纖維生長因子聚乳酸緩釋納米微球凝膠制劑制成低溫4～5℃下為可流動的膠體，20～38℃下為凝膠物理狀態(tài)。
具體實施例方式
下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)說明，但并不因此將本發(fā)明限制在所述的實施例范圍之中。
實施例1稱取0.5mg堿性成纖維生長因子藥物溶于1g磷酸鹽緩沖液中，待其全部溶解后作為水相；稱取50mg聚乳酸溶于5g有機(jī)溶劑中(二氯甲烷∶甘油＝6∶2)作為油相；將上述水相、油相混合，超聲分散1min制備乳劑；備用。將上述乳劑緩慢加入25g磷酸鹽緩沖液(磷酸鹽緩沖液中含50mg聚乙烯醇樹脂)，超聲分散5min，并繼續(xù)在室溫低速攪拌3-5h，除去有機(jī)溶劑即得bFGF納米微球膠體溶液。上述膠體溶液中在低溫(溫度低于20℃)攪拌下，少量多次加入3.75g聚氧乙烯聚氧丙烯醚，使之完全溶解即得。
實施例2稱取1mg堿性成纖維生長因子藥物溶于2g磷酸鹽緩沖液中，待其全部溶解后作為水相；稱取100mg聚乳酸溶于10g有機(jī)溶劑中(二氯甲烷∶甘油＝6∶1)作為油相；將上述水相、油相混合，超聲分散1min制備乳劑；備用。將上述乳劑緩慢加入50g磷酸鹽緩沖液(磷酸鹽緩沖液中含100mg聚乙烯醇樹脂)，超聲分散5min，并繼續(xù)在室溫低速攪拌3-5h，除去有機(jī)溶劑即得bFGF納米微球膠體溶液。上述膠體溶液中在低溫(溫度低于20℃)攪拌下，少量多次加入7.5g聚氧乙烯聚氧丙烯醚，使之完全溶解即得。
實施例3稱取2mg堿性成纖維生長因子藥物溶于4g磷酸鹽緩沖液中，待其全部溶解后作為水相；稱取200mg聚乳酸溶于20g有機(jī)溶劑中(二氯甲烷∶甘油＝6∶2)作為油相；將上述水相、油相混合，超聲分散1min制備乳劑；備用。將上述乳劑緩慢加入100g磷酸鹽緩沖液(磷酸鹽緩沖液中含200mg聚乙烯醇樹脂)，超聲分散5min，并繼續(xù)在室溫低速攪拌3-5h，除去有機(jī)溶劑即得bFGF納米微球膠體溶液。上述膠體溶液中在低溫(溫度低于20℃)攪拌下，少量多次加入20g聚氧乙烯聚氧丙烯醚，使之完全溶解即得。
實施例4稱取0.5mg堿性成纖維生長因子藥物溶于1g D-Hank’s緩沖液中，待其全部溶解后作為水相；稱取50mg聚乳酸溶于5g有機(jī)溶劑中(二氯甲烷∶甘油＝6∶1)作為油相；將上述水相、油相混合，超聲分散1min制備乳劑；備用。將上述乳劑緩慢加入25g D-Hank’s緩沖液(D-Hank’s緩沖液中含50mg聚乙烯醇樹脂)，超聲分散5min，并繼續(xù)在室溫低速攪拌3-5h，除去有機(jī)溶劑即得bFGF納米微球膠體溶液。上述膠體溶液中在低溫(溫度低于20℃)攪拌下，少量多次加入3.75g聚氧乙烯聚氧丙烯醚，使之完全溶解即得。
實施例5稱取1mg堿性成纖維生長因子藥物溶于2g D-Hank’s緩沖液中，待其全部溶解后作為水相；稱取100mg聚乳酸溶于10g有機(jī)溶劑中(二氯甲烷∶甘油＝6∶2)作為油相；將上述水相、油相混合，超聲分散1min制備乳劑；備用。將上述乳劑緩慢加入50gD-Hank’s緩沖液(D-Hank’s緩沖液中含100mg聚乙烯醇樹脂)，超聲分散5min，并繼續(xù)在室溫低速攪拌3-5h，除去有機(jī)溶劑即得bFGF納米微球膠體溶液。上述膠體溶液中在低溫(溫度低于20℃)攪拌下，少量多次加入7.5g聚氧乙烯聚氧丙烯醚，使之完全溶解即得。
實施例6稱取2mg堿性成纖維生長因子藥物溶于4gD-Hank’s緩沖液中，待其全部溶解后作為水相；稱取200mg聚乳酸溶于20g有機(jī)溶劑中(二氯甲烷∶甘油＝6∶2)作為油相；將上述水相、油相混合，超聲分散1min制備乳劑；備用。將上述乳劑緩慢加入100gD-Hank’s緩沖液(D-Hank’s緩沖液中含200mg聚乙烯醇樹脂)，超聲分散5min，并繼續(xù)在室溫低速攪拌3-5h，除去有機(jī)溶劑即得bFGF納米微球膠體溶液。上述膠體溶液中在低溫(溫度低于20℃)攪拌下，少量多次加入20g聚氧乙烯聚氧丙烯醚，使之完全溶解即得。
實施例7稱取0.5mg堿性成纖維生長因子藥物溶于1g注射用水中，待其全部溶解后作為水相；稱取50mg聚乳酸溶于5g有機(jī)溶劑中(二氯甲烷∶甘油＝6∶2)作為油相；將上述水相、油相混合，超聲分散1min制備乳劑；備用。將上述乳劑緩慢加入25g注射用水(含50mg聚乙烯醇樹脂)，超聲分散5min，并繼續(xù)在室溫低速攪拌3-5h，除去有機(jī)溶劑即得bFGF納米微球膠體溶液。上述膠體溶液中在低溫(溫度低于20℃)攪拌下，少量多次加入3.75g聚氧乙烯聚氧丙烯醚，使之完全溶解即得。
實施例8稱取1mg堿性成纖維生長因子藥物溶于2g注射用水中，待其全部溶解后作為水相；稱取100mg聚乳酸溶于10g有機(jī)溶劑中(二氯甲烷∶甘油＝6∶2)作為油相；將上述水相、油相混合，超聲分散1min制備乳劑；備用。將上述乳劑緩慢加入50g注射用水(含100mg聚乙烯醇樹脂)，超聲分散5min，并繼續(xù)在室溫低速攪拌3-5h，除去有機(jī)溶劑即得bFGF納米微球膠體溶液。上述膠體溶液中在低溫(溫度低于20℃)攪拌下，少量多次加入7.5g聚氧乙烯聚氧丙烯醚，使之完全溶解即得。
實施例9稱取2mg堿性成纖維生長因子藥物溶于4g注射用水中，待其全部溶解后作為水相；稱取200mg聚乳酸溶于20g有機(jī)溶劑中(二氯甲烷∶甘油＝6∶2)作為油相；將上述水相、油相混合，超聲分散1min制備乳劑；備用。將上述乳劑緩慢加入100g注射用水(含200mg聚乙烯醇樹脂)，超聲分散5min，并繼續(xù)在室溫低速攪拌3-5h，除去有機(jī)溶劑即得bFGF納米微球膠體溶液。上述膠體溶液中在低溫(溫度低于20℃)攪拌下，少量多次加入30g聚氧乙烯聚氧丙烯醚，使之完全溶解即得。
動物實驗驗證上述9種堿性成纖維生長因子聚乳酸緩釋納米微球凝膠的療效具體實驗方法實驗用兔90支，每支約2.5kg，分為9組，9組實施例各10只兔。購置后實驗室飼養(yǎng)一周。硫化鈉背部備皮，肌注速眠新麻醉后，在每個兔子背部備3個創(chuàng)面，創(chuàng)面破壞少許肌肉組織。每個創(chuàng)面約1.0×1.5cm大小，壓迫止血。實驗組創(chuàng)面搽布堿性成纖維生長因子聚乳酸緩釋納米微球凝膠。兩個對照組創(chuàng)面一個滴注貝復(fù)濟(jì)(珠海億勝公司)，一天滴注一次。另外一個滴注生理鹽水，一天滴注一次。
實驗結(jié)果

結(jié)果分析通過動物試驗表明堿性成纖維生長因子聚乳酸緩釋納米微球凝膠療效確切，統(tǒng)計學(xué)分析表明在傷后7天實驗組和貝復(fù)濟(jì)組療效比較接近，但都好于生理鹽水組。傷后10天實驗組和貝復(fù)濟(jì)組療效明顯要好于生理鹽水組，而且因為藥物的緩釋效應(yīng)，實驗組療效要好于貝復(fù)濟(jì)組。同時實驗組不像對照的兩組，不用每天換藥，減少了工作量。因此動物實驗表明堿性成纖維生長因子聚乳酸緩釋納米微球凝膠具有實用性和創(chuàng)新姓。
權(quán)利要求
1.一種堿性成纖維生長因子聚乳酸緩釋納米微球凝膠制劑，其特征在于由下列重量份的組分制成堿性成纖維生長因子 1～4份重均分子量為1～35萬的1％～60％聚乳酸溶液5000～20,000份注射用水或緩沖液25,000～100,000份重均分子量為3～25萬的聚乙烯醇樹脂 100～500份聚氧乙烯聚氧丙烯醚 2500～30,000份其中，所述的緩沖液為磷酸鹽緩沖液、D-Hank’s緩沖液中的一種；所述的重均分子量為1～35萬的1％～60％聚乳酸溶液，所用的溶劑為水或由二氯甲烷∶甘油＝3～6∶1的混合溶劑。
2.一種制備如權(quán)利要求1所述堿性成纖維生長因子聚乳酸緩釋納米微球凝膠的制備方法，其特征在于包括以下步驟a)、按重量份稱取各組分，將堿性成纖維生長因子溶于緩沖液中，制成濃度為0.025％～0.1％的水相溶液；b)、將聚乳酸溶于二氯甲烷∶甘油＝3～6∶1的混合溶劑中，制成濃度為1％～60％的油相溶液；c)、將上述水相溶液、油相混合溶液，制備油包水型乳液，然后加入到由重均分子量為3～25萬的聚乙烯醇樹脂與緩沖液制成10～20％的溶液中，超聲分散1～60min，制成微乳液；d)、將步驟溶c)得到的微乳液在室溫下低速攪拌3～5h，通過自然揮發(fā)或抽提，除去有機(jī)溶劑二氯甲烷即得堿性成纖維生長因子納米微球膠體溶液；e)、在堿性成纖維生長因子納米微球膠體溶液中，攪拌下加入聚氧乙烯聚氧丙烯醚，使之溶解，制備成低溫4～5℃下為可流動的膠體，20～38℃下為凝膠的堿性成纖維生長因子聚乳酸緩釋納米微球凝膠制劑。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種堿性成纖維生長因子聚乳酸緩釋納米微球凝膠及其制備方法，由堿性成纖維生長因子、聚乳酸溶液、緩沖液、聚乙烯醇樹脂、聚氧乙烯聚氧丙烯醚等組分制成，包括以下步驟將堿性成纖維生長因子溶于緩沖液中，制成水相溶液；將聚乳酸溶于混合溶劑中，制成濃度油相溶液；將水相、油相溶液混合，制成微乳液；除去有機(jī)溶劑，加入聚氧乙烯聚氧丙烯醚使之溶解，制備成低溫下為可流動的膠體，20～38℃下為凝膠的堿性成纖維生長因子聚乳酸緩釋納米微球凝膠制劑。本發(fā)明的凝膠制劑，可加速骨組織、軟組織和血管等各種組織的損傷愈合，廣泛使用于外傷、潰瘍、傷口延期不愈、燒燙傷，通過合適的釋藥途徑延長藥物的生理活性，提高藥物的穩(wěn)定性，從而使藥物的藥理活性達(dá)到較理想的效果。
文檔編號A61P1/02GK1985989SQ20061009531
公開日2007年6月27日 申請日期2006年12月20日 優(yōu)先權(quán)日2006年12月20日
發(fā)明者張綱, 盧來春, 譚穎徽 申請人:張綱