專利名稱：一種降低血脂、溶解血栓的藥物組合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種藥物組合物及其制備方法和質(zhì)量控制方法，特別涉及一種降低血脂、溶解血栓的藥物組合物及其制備方法和質(zhì)量控制方法。
背景技術(shù)：
血脂異?？蓪?dǎo)致動脈粥樣硬化和冠心病、腦中風(fēng)已被公認。近十幾年來，國內(nèi)開展的有關(guān)血脂的流行病學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，全國血脂異常的成人高達42.9％。由此推斷，我國人群中具有血脂異常的人群總數(shù)應(yīng)逾億人。由于血脂異常很少出現(xiàn)臨床癥狀，長期服用藥物治療大多數(shù)人難以接受，因此，探索如何有效地通過飲食保健干預(yù)或改變生活方式來控制和預(yù)防人群中血脂代謝異常是我們面對的巨大挑戰(zhàn)。
隨著人們生活水平的提高，血脂異常的發(fā)病率逐年增高，在中青年人群中尤為明顯。我國血脂異常治療現(xiàn)狀的調(diào)查報告指出，目前血脂異常治療三項指標(biāo)全部達標(biāo)者僅占10.1％。血脂異常危害性大，發(fā)病率高，趨向年輕化，控制率低是目前現(xiàn)狀。
高脂血癥早期多數(shù)沒有臨床表現(xiàn)，這也是很多人不重視的主要原因。該病對身體的損害是隱匿、逐漸、進行性和全身性的。它的直接損害是加強全身動脈粥樣硬化，因為全身的重要器官是依靠動脈供血、供氧的，一但粥樣斑塊堵塞動脈，就會造成嚴(yán)重后果。動脈硬化引起腎功能衰竭等都與高脂血癥密切相關(guān)。大量研究表明，高脂血癥是腦卒中、冠心病、心肌梗塞、心臟猝死的重要的危險因素。高脂血癥患者體內(nèi)產(chǎn)生大量的脂質(zhì)過氧化物，使該物質(zhì)沉積在血管內(nèi)皮，造成內(nèi)皮細胞破壞逐步形成動脈粥樣硬化和微血管病變。高血脂還可增加血漿的粘稠度，造成血細胞聚集性增強，從而引起高凝和高粘狀態(tài)，有形成血栓和出現(xiàn)微循環(huán)障礙之傾向。由于高脂血癥患者血中纖溶系統(tǒng)平衡失調(diào)，這可能是高脂血癥患者出現(xiàn)高凝狀態(tài)或血栓的重要因素。
大多數(shù)患者的血脂異常是由于飲食不當(dāng)造成的。因此，對于由于飲食因素所致的高脂血癥患者來說，采取適當(dāng)?shù)娘嬍炒胧┙Y(jié)合長期規(guī)律的體育鍛煉和維持理想的體重，高脂血癥是可以預(yù)防的。對由于內(nèi)分泌或代謝因素及少數(shù)遺傳因素引起的高脂血癥，只有通過藥物和綜合治療措施加以控制和改善，才能糾正脂質(zhì)代謝紊亂，并減輕臨床癥狀。
目前，我國保健品市場正處于快速發(fā)展時期，每年的銷售額都高達幾百億，調(diào)節(jié)血脂類保健品品種較多占市場比重較大，達到16％左右。然而在調(diào)節(jié)血脂類保健品中絕大多數(shù)降血脂作用較差，并且只注重表面癥狀沒有考慮到高血脂會引起微血栓的形成，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認為微血栓對人體的危害遠大于高脂血癥。
納豆作為一種大豆發(fā)酵制品，在日本作為主要佐餐食品已有1000多年的歷史了。目前，納豆已盛行于日本、加拿大、美國和歐洲一些國家。納豆含有豐富的納豆激酶、卵磷脂、亞油酸以及生理活性蛋白質(zhì)和肽，它們降低血液粘稠度、降血脂、降血清膽固醇及維護血管彈性，進而預(yù)防冠心病、腦中風(fēng)、高血壓，這已是廣為認知的。因此，納豆已成為舉世公認的醫(yī)療保健食品。
葛根是一種既食又藥的藥材，近年來廣大學(xué)者對其進行了深入的研究，發(fā)現(xiàn)其具有(1)調(diào)節(jié)血脂的作用可降低高脂血癥中已升高的膽固醇、甘油三脂、LDL水平，減少脂質(zhì)沉積。(2)改善血液流變學(xué)的作用可降低血液黏滯度，減少紅細胞電泳時間，減慢血沉和降低纖維蛋白原含量。(3)葛根素對脂質(zhì)過氧化所致的內(nèi)皮細胞損害具有保護作用，可提高內(nèi)皮細胞的活性，促進內(nèi)皮細胞的增殖。
該產(chǎn)品具有確切的降低血脂、防治血栓形成及溶栓的功能等特點，這具有重要保健意義。它不但具有傳統(tǒng)保健品降低血脂的優(yōu)勢，同時還具備激活纖溶系統(tǒng)清除血管中微血栓、防止血栓再形成的作用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的在于提供一種藥物組合物及其制劑制備方法，本發(fā)明另一目的在于提供該藥物組合物制劑的質(zhì)量控制方法及用途。
本發(fā)明目的是通過如下技術(shù)方案實現(xiàn)的本發(fā)明藥物組合物的原料藥組成如下大豆100-500重量份葛根100-200重量份。
上述原料藥的優(yōu)選重量配比如下大豆500重量份葛根100重量份；大豆400重量份葛根100重量份；大豆300重量份葛根100重量份；大豆200重量份葛根100重量份或大豆100重量份葛根200重量份。
本發(fā)明中藥組合物原料藥，加入常規(guī)輔料，按照常規(guī)工藝，制成臨床可接受的劑型，如膠囊劑、丸劑、片劑、顆粒劑、口服液體制劑。
本發(fā)明組合物的具體制備工藝如下大豆經(jīng)過精選，洗凈，在30℃溫水中浸泡8-12小時，然后于110℃-121℃滅菌30-40分鐘，放置室溫，接入納豆菌種1，2，3級菌種(由中國農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏管理中心提供編號ACCC10614)，接種量0.3-2％，于36-38℃發(fā)酵，培養(yǎng)24-48小時，冷置室溫；用組織搗碎機將其破碎，裝入自制層析柱，上樣體積為柱高的1/3-1/2，加入1-3倍體積份90％-95％乙醇后自然沉降2-4小時，在恒流泵的幫助下進行逆時針循環(huán)2-3次，流速3-5ml/min，每次提取3-4小時，抽濾后藥粉用90％-95％乙醇脫水，脫水藥粉放入40-60℃真空干燥，粉碎，備用；葛根去雜質(zhì)洗凈，70℃-90℃低溫干燥12-16小時，破碎，過20目篩，藥粉上提取罐，用7-8倍重量份80％乙醇回流提取2-4次，板框過濾。乙醇液回收乙醇至無醇味。藥渣加水7-10倍重量份煎煮2-4次，過濾，棄渣，保留藥液；乙醇提取藥液合并水煎液濃縮成膏，40-60℃真空干燥36-48小時，粉碎成粉與上述大豆備用粉混勻，加入常規(guī)輔料，按常規(guī)方法制成膠囊劑、丸劑、片劑、顆粒劑、口服液體制劑。
本發(fā)明組合物的優(yōu)選制備工藝如下大豆經(jīng)過精選，洗凈，在30℃溫水中浸泡10小時，然后于121℃滅菌35分鐘，放置室溫，接入納豆菌種1，2，3級菌種(由中國農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏管理中心提供編號ACCC10614)，接種量0.5％，于37℃發(fā)酵，培養(yǎng)36小時，冷置室溫。用組織搗碎機將其破碎，裝入自制層析柱，上樣體積為柱高的1/3，加入2倍體積份95％乙醇后自然沉降3小時，在恒流泵的幫助下進行逆時針循環(huán)2次，流速4ml/min，每次提取4小時，抽濾后藥粉用95％乙醇脫水，脫水藥粉放入50℃真空干燥，粉碎，備用。
葛根去雜質(zhì)洗凈，80℃低溫干燥12小時，破碎，過20目篩，藥粉上提取罐，用8倍重量份80％乙醇回流提取2次，板框過濾。乙醇液回收乙醇至無醇味。藥渣加水7倍重量份煎煮2次，過濾，棄渣，保留藥液。乙醇提取藥液合并水煎液濃縮成膏，50℃真空干燥48小時，粉碎成粉與上述納豆備用粉混勻，制成膠囊劑。
上述重量份和體積份的關(guān)系為g/ml。
本發(fā)明的質(zhì)量檢測方法包括如下鑒別和/或含量測定鑒別方法包括如下鑒別中的一種或幾種A.取本發(fā)明藥物組合物制劑1.5g，加甲醇10ml，放置2小時，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇0.5ml使溶解，作為供試品溶液；另取葛根素對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各3μl，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以7∶2.5∶0.25氯仿-甲醇-水為展開劑，展開，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光條斑；B.取本發(fā)明藥物組合物制劑1.5g，加甲醇10ml，放置2小時，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇0.5ml使溶解，作為供試品溶液；另取大豆苷元對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各2μl，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以8∶2氯仿-甲醇為展開劑，展開，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光條斑。
質(zhì)量檢測方法中的含量測定包括如下一種或幾種A.高效液相法測定色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗；色譜柱大連依利特，5μm，4.6mm×150mm十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以23∶77甲醇-水為流動相；檢測波長為250nm；理論板數(shù)按葛根素峰計算應(yīng)不低于3000；對照品溶液的制備取葛根素對照品適量，精密稱定，加甲醇制成1ml含80μg的溶液，即得；供試品溶液的制備取本發(fā)明藥物組合物0.4g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，稱定重量，功率250w，頻率33kHz超聲處理20分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5μl，注入液相色譜儀，測定，即得；每克藥物組合物含葛根素不低于1.5mg。
B.高效液相法測定色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗；色譜柱大連依利特，5μm，4.6mm×150mm十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以30∶8∶62甲醇-加腈-0.1磷酸為流動相；檢測波長為250nm；對照品溶液的制備取大豆苷元對照品適量，精密稱定，加甲醇制成1ml含60μg的溶液，即得；供試品溶液的制備取本品適量，研細，取0.4g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，稱定重量，功率250w，頻率33kHz超聲處理20分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5μl，注入液相色譜儀，測定，即得；每克藥物組合物含大豆苷元不低于5mg。
C.纖維蛋白平板法測定供試品溶液的制備取本發(fā)明藥物組合物制劑10g，用3倍量生理鹽水浸提10小時，離心取上清液，80％乙醇沉淀，沉淀用無水乙醇脫水后，用生理鹽水定溶至5ml，備用；Uk標(biāo)準(zhǔn)曲線制定將Uk精密配成10U/ml、20U/ml、30U/ml、40U/ml、50U/ml、60U/ml的溶液；用纖維蛋白原、凝血酶和瓊脂糖制成瓊脂糖纖維蛋白平板，待平板凝結(jié)后，各取50μl不同濃度的Uk標(biāo)準(zhǔn)液點在平板上，37溫箱中放置2h，根據(jù)溶圈面積及濃度，制定標(biāo)準(zhǔn)曲線；活性測定取供試品50μl點在用纖維蛋白原、凝血酶和瓊脂糖制成瓊脂糖纖維蛋白平板上，重復(fù)5次，將平板置37溫箱中放置2h，測定溶圈面積，取平均值；將其與Uk標(biāo)準(zhǔn)曲線對比測定活性；然后，換算為每克含有納豆激酶不低于33個活性單位。
本發(fā)明藥物組合物膠囊劑藥效學(xué)實驗表明本發(fā)明藥物組合物膠囊能夠降低高脂血癥大鼠血中TG、TC、LDL-C含量，升高HDL-C含量；具有延長動脈血栓形成時間、降低靜脈血栓重量、加速體外血栓溶解的作用。
下述實驗和實施例用于進一步說明但不限于本發(fā)明。
實驗例1對高脂血癥大鼠血脂的影響實驗動物模型的建立給大鼠喂以高脂飼料(膽固醇1％，甲基硫氧啥陡0.2％，豬膽鹽0.3％a，豬油7.5％，蛋黃粉10％n，基礎(chǔ)飼料81％)，42d后，受試動物血中TC，TG，LDL一C顯著升高，同時HDL一C顯著降低，說明高脂血癥模型復(fù)制成功。
動物分組及給藥方法取上述大鼠50只適應(yīng)性飼養(yǎng)1周，按體重和血脂水平隨機分成5組，即空白對照組、模型對照組、本發(fā)明藥物組合物膠囊低劑量組、本發(fā)明藥物組合物膠囊中劑量組、本發(fā)明藥物組合物膠囊高劑量組。除空白對照組喂基礎(chǔ)飼料外，其余各組均喂高脂飼料；每天在給予高脂飼料同時，給藥組按2ml/100g體積灌胃給予本發(fā)明藥物組合物膠囊低劑量0.378g/kg、中劑量0.756g/kg、高劑量1.512g/kg，空白對照組和模型對照組每日給予同體積水，連續(xù)給藥15d；每周稱量體重1次，以便調(diào)整給藥劑量。末次給藥后，禁食12h，摘取眼球取血。按試劑盒操作，在半自動生化分析儀上測定大鼠血清TC、TG、LDL-C、HDL-C。結(jié)果見表1表1 本發(fā)明藥物組合物膠囊對高脂血癥大鼠血清TC、TG、LDL-C、HDL-C的影響(X±SD n＝10)

注與空白組比較#P＜0.05，##P＜0.01；與模型組比較ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01實驗結(jié)果與空白組比較，在TC、TG、LDL-C、HDL-C個指標(biāo)中模型組差異具有極為顯著性意義(p＜0.01)；與模型組比較在TC、TG只有本發(fā)明藥物組合物膠囊高、中劑量差異具有極為顯著性意義(p＜0.01)，本發(fā)明藥物組合物膠囊低劑量組雖降低但無統(tǒng)計學(xué)意義；與模型組比較在LDL-C中本發(fā)明藥物組合物膠囊各劑量差異具有極為顯著性意義(p＜0.01)；與模型組比較在HDL-C只有本發(fā)明藥物組合物膠囊高劑量差異具有極為顯著性意義(p＜0.01)，本發(fā)明藥物組合物膠囊中劑量差異具有顯著性意義(p＜0.05)，本發(fā)明藥物組合物膠囊低劑量組雖升高但無統(tǒng)計學(xué)意義。
實驗例2對大鼠體內(nèi)動脈血栓形成的影響實驗取大鼠40只，體重在180~220g，雌雄各半，將其隨機分為4組，每組10只，雌雄各5只，即本發(fā)明藥物組合物膠囊高劑量組1.13g/kg；本發(fā)明藥物組合物膠囊中劑量組0.568g/kg；本發(fā)明藥物組合物膠囊低劑量組0.284g/kg；空白對照組給予等容量生理鹽水。采用灌胃給藥，每天一次，連續(xù)七天，末次給藥后30分鐘，將大鼠用20％烏拉但麻醉，剝離大鼠頸總動脈，在遠心端進行動脈插管用四道生理記錄儀加測血壓，在近心端用45％的三氯化鐵溶液浸泡的0.5cm寬的濾紙條包裹動脈，記錄從包裹到血壓降為0時的時間為動脈血栓形成時間，記錄數(shù)據(jù)，各組進行組間t檢驗統(tǒng)計分析。結(jié)果見表2表2 本發(fā)明藥物組合物膠囊對大鼠體內(nèi)動脈血栓形成的影響(X±SD)

注與空白對照組比較Δp＜0.05 ΔΔp＜0.01實驗結(jié)果本發(fā)明藥物組合物膠囊各劑量及脈血康膠囊組與空白對照組比較均能延長動脈血栓形成時間，本發(fā)明藥物組合物膠囊高、中劑量組差異有顯著性意義(p＜0.05)。實驗結(jié)論統(tǒng)計結(jié)果分析表明，本發(fā)明藥物組合物膠囊具有延長動脈血栓形成時間的作用。
實驗例3對大鼠體內(nèi)靜脈血栓形成的影響實驗取大鼠40只，體重在180-220g，雌雄各半，將其隨機分為4組，每組10只，雌雄各5只，即本發(fā)明藥物組合物膠囊高劑量組1.13g/kg；本發(fā)明藥物組合物膠囊中劑量組0.568g/kg；本發(fā)明藥物組合物膠囊低劑量組0.284g/kg；空白對照組給予等容量生理鹽水。采用灌胃給藥，每天一次，連續(xù)七天，末次給藥后30分鐘，將大鼠用20％烏拉但麻醉，剝離大鼠下腔總靜脈，在左腎靜脈下端用線結(jié)扎下腔總靜脈，3h后打開下腔總靜脈取出血栓稱重，記錄數(shù)據(jù)，各組進行組間t檢驗統(tǒng)計分析。
結(jié)果見表3表3 本發(fā)明藥物組合物膠囊對大鼠體內(nèi)靜脈血栓形成的影響(X±SD)

注與空白對照組比較Δp＜0.05 ΔΔp＜0.01，實驗結(jié)果本發(fā)明藥物組合物膠囊各劑量與空白對照組比較均能減少靜脈血栓重量，本發(fā)明藥物組合物膠囊高、中劑量組差異有顯著性意義(p＜0.05)。實驗結(jié)論統(tǒng)計結(jié)果分析表明，本發(fā)明藥物組合物膠囊具有降低靜脈血栓重量的作用。
實驗例4對家兔體內(nèi)外血栓溶解的影響實驗取健康家兔一只，頸動脈采血，靜止2小時，用手術(shù)刀仔細分取0.5g血塊40粒，稱重后放入試管中。將試管分為5組，即空白對照組、本發(fā)明藥物組合物膠囊低劑量組、本發(fā)明藥物組合物膠囊中劑量組、本發(fā)明藥物組合物膠囊高劑量組。每只試管加5ml相應(yīng)試藥?？瞻讓φ战M家蒸餾水，本發(fā)明藥物組合物膠囊低、中、高劑量組分別加2.8％、5.6％、11.2％的本發(fā)明藥物組合物膠囊混懸液。放入37水浴箱中水浴3h，取出吸去水分后稱重，按下列公式計算溶解率溶解率＝(溶解前重量-溶解后重量)/溶解前重量×100％結(jié)果見表5，表4本發(fā)明藥物組合物膠囊對體外血栓溶解的影響(X±SD)

注與空白對照組比較Δp＜0.05 ΔΔp＜0.01，實驗結(jié)果本發(fā)明藥物組合物膠囊各劑量與空白對照組比較均能增加體外血栓溶解率，本發(fā)明藥物組合物膠囊各劑量組差異有極為顯著性意義(p＜0.01)。實驗結(jié)論統(tǒng)計結(jié)果分析表明，本發(fā)明藥物組合物膠囊具有加速體外血栓溶解的作用。
下述實施例均能實現(xiàn)上述實驗例的效果。
具體實施例方式
實施例1 顆粒劑的制備大豆500kg 葛根100kg大豆經(jīng)過精選，洗凈，在30℃溫水中浸泡12小時，然后于121℃滅菌40分鐘，放置室溫，接入納豆菌種1，2，3級菌種(由中國農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏管理中心提供編號ACCC10614)，接種量0.5％，于37℃發(fā)酵，培養(yǎng)40小時，冷置室溫。用組織搗碎機將其破碎，裝入自制層析柱上樣體積為柱高的1/3，加入2倍體積份90％乙醇后自然沉降3小時，在恒流泵的幫助下進行逆時針循環(huán)3次，流速3-5ml/min，每次提取3小時，抽濾后藥粉用90％乙醇脫水，脫水藥粉放入60℃真空干燥，粉碎，備用。
葛根去雜質(zhì)洗凈，70℃低溫干燥12小時，破碎，過20目篩，藥粉上提取罐，用7倍重量份80％乙醇回流提取2次，板框過濾。乙醇液回收乙醇至無醇味。藥渣加水7倍重量份煎煮2次，過濾，棄渣，保留藥液；乙醇提取藥液合并水煎液濃縮成膏，40℃真空干燥36小時，粉碎成粉與上述大豆備用粉混勻，加入常規(guī)輔料，按常規(guī)方法制成顆粒劑。
實施例2 膠囊劑的制備大豆400kg 葛根100kg大豆經(jīng)過精選，洗凈，在30℃溫水中浸泡10小時，然后于121℃滅菌35分鐘，放置室溫，接入保藏號ACCC10614的納豆菌種1，2，3級菌種，接種量0.5％，于37℃發(fā)酵，培養(yǎng)36小時，冷置室溫；用組織搗碎機將其破碎，裝入自制層析柱，上樣體積為柱高的1/3，加入2倍體積份95％乙醇后自然沉降3小時，在恒流泵的幫助下進行逆時針循環(huán)2次，流速4ml/min，每次提取4小時，抽濾后藥粉用95％乙醇脫水，脫水藥粉放入50℃真空干燥，粉碎，備用；葛根去雜質(zhì)洗凈，80℃低溫干燥12小時，破碎，過20目篩，藥粉上提取罐，用8倍重量份80％乙醇回流提取2次，板框過濾；乙醇液回收乙醇至無醇味；藥渣加水7倍重量份煎煮2次，過濾，棄渣，保留藥液；乙醇提取藥液合并水煎液濃縮成膏，50℃真空干燥48小時，粉碎成粉與上述納豆備用粉混勻，制成膠囊劑。
實施例3 丸劑的制備大豆300kg 葛根100kg大豆經(jīng)過精選，洗凈，在30℃溫水中浸泡12小時，然后于121℃滅菌40分鐘，放置室溫，接入納豆菌種1，2，3級菌種(由中國農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏管理中心提供編號ACCC10614)，接種量0.5％，于37℃發(fā)酵，培養(yǎng)40小時，冷置室溫。用組織搗碎機將其破碎，裝入自制層析柱上樣體積為柱高的1/3，加入2倍體積份90％乙醇后自然沉降3小時，在恒流泵的幫助下進行逆時針循環(huán)3次，流速3-5ml/min，每次提取3小時，抽濾后藥粉用90％乙醇脫水，脫水藥粉放入60℃真空干燥，粉碎，備用。
葛根去雜質(zhì)洗凈，70℃低溫干燥12小時，破碎，過20目篩，藥粉上提取罐，用7倍重量份80％乙醇回流提取2次，板框過濾。乙醇液回收乙醇至無醇味。藥渣加水7倍重量份煎煮2次，過濾，棄渣，保留藥液；乙醇提取藥液合并水煎液濃縮成膏，40℃真空干燥36小時，粉碎成粉與上述大豆備用粉混勻，加入常規(guī)輔料，按常規(guī)方法制成丸劑。
實施例4片劑的制備大豆200kg葛根100kg大豆經(jīng)過精選，洗凈，在30℃溫水中浸泡11小時，然后于121℃滅菌35分鐘，放置室溫，接入保藏號ACCC10614的納豆菌種1，2，3級菌種，接種量1％，于36℃發(fā)酵，培養(yǎng)45小時，冷置室溫；用組織搗碎機將其破碎，裝入自制層析柱上樣體積為柱高的1/2，加入2倍體積份95％乙醇后自然沉降2小時，在恒流泵的幫助下進行逆時針循環(huán)2-3次，流速3-5ml/min，每次提取4小時，抽濾后藥粉用95％乙醇脫水，脫水藥粉放入40-60℃真空干燥，粉碎，備用；葛根去雜質(zhì)洗凈，90℃低溫干燥14小時，破碎，過20目篩，藥粉上提取罐，用8倍重量份80％乙醇回流提取3次，板框過濾。乙醇液回收乙醇至無醇味；藥渣加水10倍重量份煎煮4次，過濾，棄渣，保留藥液；乙醇提取藥液合并水煎液濃縮成膏，55℃真空干燥40小時，粉碎成粉與上述大豆備用粉混勻，加入常規(guī)輔料，按常規(guī)方法制成片劑。
實施例5 口服液的制備大豆100kg葛根200kg大豆經(jīng)過精選，洗凈，在30℃溫水中浸泡10小時，然后于121℃滅菌40分鐘，放置室溫，接入保藏號ACCC10614的納豆菌種1，2，3級菌種，接種量0.8％，于38℃發(fā)酵，培養(yǎng)48小時，冷置室溫；用組織搗碎機將其破碎，裝入自制層析柱上樣體積為柱高的1/2，加入3倍體積份90％乙醇后自然沉降4小時，在恒流泵的幫助下進行逆時針循環(huán)3次，流速5ml/min，每次提取3小時，抽濾后藥粉用90％乙醇脫水，脫水藥粉放入40-60℃真空干燥，粉碎，備用；葛根去雜質(zhì)洗凈，70℃低溫干燥16小時，破碎，過20目篩，藥粉上提取罐，用7倍重量份80％乙醇回流提取4次，板框過濾。乙醇液回收乙醇至無醇味；藥渣加水7倍重量份煎煮4次，過濾，棄渣，保留藥液；乙醇提取藥液合并水煎液濃縮成膏，40℃真空干燥48小時，粉碎成粉與上述大豆備用粉混勻，加入常規(guī)輔料，按常規(guī)方法制成口服液體制劑。
實施例6質(zhì)量檢測中的鑒別方法取實施例3的內(nèi)容物進行鑒別A.取本發(fā)明藥物組合物制劑1.5g，加甲醇10ml，放置2小時，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇0.5ml使溶解，作為供試品溶液；另取葛根素對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各3μl，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以7∶2.5∶0.25氯仿-甲醇-水為展開劑，展開，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光條斑；
B.取本發(fā)明藥物組合物粉末1.5g，加甲醇10ml，放置2小時，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇0.5ml使溶解，作為供試品溶液；另取大豆苷元對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各2μl，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以8∶2氯仿-甲醇為展開劑，展開，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光條斑。
實施例7質(zhì)量檢測中的含量測定方法取實施例2的內(nèi)容物進行含量測定A.高效液相法測定色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗；色譜柱大連依利特，5μm，4.6mm×150mm十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以23∶77甲醇-水為流動相；檢測波長為250nm；理論板數(shù)按葛根素峰計算應(yīng)不低于3000；對照品溶液的制備取葛根素對照品適量，精密稱定，加甲醇制成1ml含80μg的溶液，即得；供試品溶液的制備取本發(fā)明藥物組合物適量，研細，取0.4g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，稱定重量，功率250w，頻率33kHz超聲處理20分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5μl，注入液相色譜儀，測定，即得；B.高效液相法測定色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗；色譜柱大連依利特，5μm，4.6mm×150mm十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以30∶8∶62甲醇-加腈-0.1磷酸為流動相；檢測波長為250nm；對照品溶液的制備取大豆苷元對照品適量，精密稱定，加甲醇制成1ml含60μg的溶液，即得；供試品溶液的制備取本品適量，研細，取0.4g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，稱定重量，功率250w，頻率33kHz超聲處理20分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5μl，注入液相色譜儀，測定，即得；C.纖維蛋白平板法測定供試品溶液的制備取本發(fā)明藥物組合物10g，用3倍量生理鹽水浸提10小時，離心取上清液，80％乙醇沉淀，沉淀用無水乙醇脫水后，用生理鹽水定溶至5ml，備用；Uk標(biāo)準(zhǔn)曲線制定將Uk精密配成10U/ml、20U/ml、30U/ml、40U/ml、50U/ml、60U/ml的溶液；用纖維蛋白原、凝血酶和瓊脂糖制成瓊脂糖纖維蛋白平板，待平板凝結(jié)后，各取50μl不同濃度的Uk標(biāo)準(zhǔn)液點在平板上，37溫箱中放置2h，根據(jù)溶圈面積及濃度，制定標(biāo)準(zhǔn)曲線；活性測定取供試品50μl點在用纖維蛋白原、凝血酶和瓊脂糖制成瓊脂糖纖維蛋白平板上，重復(fù)5次，將平板置37溫箱中放置2h，測定溶圈面積，取平均值；將其與Uk標(biāo)準(zhǔn)曲線對比測定活性；然后，換算為每克含有納豆激酶的活性單位。
實施例8質(zhì)量檢測方法取實施例1的內(nèi)容物進行鑒別A.取本發(fā)明藥物組合物制劑1.5g，加甲醇10ml，放置2小時，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇0.5ml使溶解，作為供試品溶液；另取葛根素對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各3μl，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以7∶2.5∶0.25氯仿-甲醇-水為展開劑，展開，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光條斑；B.取本發(fā)明藥物組合物粉末1.5g，加甲醇10ml，放置2小時，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇0.5ml使溶解，作為供試品溶液；另取大豆苷元對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各2μl，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以8∶2氯仿-甲醇為展開劑，展開，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光條斑。
取實施例2的內(nèi)容物進行含量測定A.高效液相法測定色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗；色譜柱大連依利特，5μm，4.6mm×150mm十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以23∶77甲醇-水為流動相；檢測波長為250nm；理論板數(shù)按葛根素峰計算應(yīng)不低于3000；對照品溶液的制備取葛根素對照品適量，精密稱定，加甲醇制成1ml含80μg的溶液，即得；供試品溶液的制備取本發(fā)明藥物組合物適量，研細，取0.4g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，稱定重量，功率250w，頻率33kHz超聲處理20分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5μl，注入液相色譜儀，測定，即得；B.高效液相法測定色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗；色譜柱大連依利特，5μm，4.6mm×150mm十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以30∶8∶62甲醇-加腈-0.1磷酸為流動相；檢測波長為250nm；對照品溶液的制備取大豆苷元對照品適量，精密稱定，加甲醇制成1ml含60μg的溶液，即得；供試品溶液的制備取本品適量，研細，取0.4g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，稱定重量，功率250w，頻率33kHz超聲處理20分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5μl，注入液相色譜儀，測定，即得；C.纖維蛋白平板法測定供試品溶液的制備取本發(fā)明藥物組合物10g，用3倍量生理鹽水浸提10小時，離心取上清液，80％乙醇沉淀，沉淀用無水乙醇脫水后，用生理鹽水定溶至5ml，備用；Uk標(biāo)準(zhǔn)曲線制定將Uk精密配成10U/ml、20U/ml、30U/ml、40U/ml、50U/ml、60U/ml的溶液；用纖維蛋白原、凝血酶和瓊脂糖制成瓊脂糖纖維蛋白平板，待平板凝結(jié)后，各取50μl不同濃度的Uk標(biāo)準(zhǔn)液點在平板上，37溫箱中放置2h，根據(jù)溶圈面積及濃度，制定標(biāo)準(zhǔn)曲線；活性測定取供試品50μl點在用纖維蛋白原、凝血酶和瓊脂糖制成瓊脂糖纖維蛋白平板上，重復(fù)5次，將平板置37溫箱中放置2h，測定溶圈面積，取平均值；將其與Uk標(biāo)準(zhǔn)曲線對比測定活性；然后，換算為每克含有納豆激酶的活性單位。
權(quán)利要求
1.一種降低血脂、溶解血栓的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物是由如下方法制成原料藥大豆100-500重量份 葛根100-200重量份；工藝步驟大豆經(jīng)過精選，洗凈，在30℃溫水中浸泡8-12小時，然后于110℃-121℃滅菌30-40分鐘，放置室溫，接入保藏號ACCC10614的納豆菌種1，2，3級菌種，接種量0.3-2％，于36-38℃發(fā)酵，培養(yǎng)24-48小時，冷置室溫；用組織搗碎機將其破碎，裝入自制層析柱，上樣體積為柱高的1/3-1/2，加入1-3倍體積份90％-95％乙醇后自然沉降2-4小時，在恒流泵的幫助下進行逆時針循環(huán)2-3次，流速3-5ml/min，每次提取3-4小時，抽濾后藥粉用90％-95％乙醇脫水，脫水藥粉放入40-60℃真空干燥，粉碎，備用；葛根去雜質(zhì)洗凈，70℃-90℃低溫干燥12-16小時，破碎，過20目篩，藥粉上提取罐，用7-8倍重量份80％乙醇回流提取2-4次，板框過濾；乙醇液回收乙醇至無醇味；藥渣加水7-10倍重量份煎煮2-4次，過濾，棄渣，保留藥液；乙醇提取藥液合并水煎液濃縮成膏，40-60℃真空干燥36-48小時，粉碎成粉與上述大豆備用粉混勻，加入常規(guī)輔料，按常規(guī)方法制成膠囊劑、丸劑、片劑、顆粒劑、口服液體制劑。
2.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于其中的原料藥為大豆500重量份 葛根100重量份。
3.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于其中的原料藥為大豆400重量份 葛根100重量份。
4.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于其中的原料藥為大豆100重量份 葛根200重量份。
5.如權(quán)利要求1-4任一所述的藥物組合物，其特征在于其中的工藝步驟為大豆經(jīng)過精選，洗凈，在30℃溫水中浸泡10小時，然后于121℃滅菌35分鐘，放置室溫，接入保藏號ACCC10614的納豆菌種1，2，3級菌種，接種量0.5％，于37℃發(fā)酵，培養(yǎng)36小時，冷置室溫；用組織搗碎機將其破碎，裝入自制層析柱，上樣體積為柱高的1/3，加入2倍體積份95％乙醇后自然沉降3小時，在恒流泵的幫助下進行逆時針循環(huán)2次，流速4ml/min，每次提取4小時，抽濾后藥粉用95％乙醇脫水，脫水藥粉放入50℃真空干燥，粉碎，備用；葛根去雜質(zhì)洗凈，80℃低溫干燥12小時，破碎，過20目篩，藥粉上提取罐，用8倍重量份80％乙醇回流提取2次，板框過濾；乙醇液回收乙醇至無醇味；藥渣加水7倍重量份煎煮2次，過濾，棄渣，保留藥液；乙醇提取藥液合并水煎液濃縮成膏，50℃真空干燥48小時，粉碎成粉與上述納豆備用粉混勻，制成膠囊劑。
6.如權(quán)利要求1-4任一所述的藥物組合物，其特征在于其中的工藝步驟為大豆經(jīng)過精選，洗凈，在30℃溫水中浸泡10小時，然后于121℃滅菌40分鐘，放置室溫，接入保藏號ACCC10614的納豆菌種1，2，3級菌種，接種量0.8％，于38℃發(fā)酵，培養(yǎng)48小時，冷置室溫；用組織搗碎機將其破碎，裝入自制層析柱上樣體積為柱高的1/2，加入3倍體積份90％乙醇后自然沉降4小時，在恒流泵的幫助下進行逆時針循環(huán)3次，流速5ml/min，每次提取3小時，抽濾后藥粉用90％乙醇脫水，脫水藥粉放入40-60℃真空干燥，粉碎，備用；葛根去雜質(zhì)洗凈，70℃低溫干燥16小時，破碎，過20目篩，藥粉上提取罐，用7倍重量份80％乙醇回流提取4次，板框過濾；乙醇液回收乙醇至無醇味；藥渣加水7倍重量份煎煮4次，過濾，棄渣，保留藥液；乙醇提取藥液合并水煎液濃縮成膏，40℃真空干燥48小時，粉碎成粉與上述大豆備用粉混勻，加入常規(guī)輔料，按常規(guī)方法制成口服液體制劑。
7.如權(quán)利要求1-4任一所述的藥物組合物，其特征在于其中的工藝步驟為大豆經(jīng)過精選，洗凈，在30℃溫水中浸泡11小時，然后于121℃滅菌35分鐘，放置室溫，接入保藏號ACCC10614的納豆菌種1，2，3級菌種，接種量1％，于36℃發(fā)酵，培養(yǎng)45小時，冷置室溫；用組織搗碎機將其破碎，裝入自制層析柱上樣體積為柱高的1/2，加入2倍體積份95％乙醇后自然沉降2小時，在恒流泵的幫助下進行逆時針循環(huán)2-3次，流速3-5ml/min，每次提取4小時，抽濾后藥粉用95％乙醇脫水，脫水藥粉放入40-60℃真空干燥，粉碎，備用；葛根去雜質(zhì)洗凈，90℃低溫干燥14小時，破碎，過20目篩，藥粉上提取罐，用8倍重量份80％乙醇回流提取3次，板框過濾；乙醇液回收乙醇至無醇味；藥渣加水10倍重量份煎煮4次，過濾，棄渣，保留藥液；乙醇提取藥液合并水煎液濃縮成膏，55℃真空干燥40小時，粉碎成粉與上述大豆備用粉混勻，加入常規(guī)輔料，按常規(guī)方法制成片劑。
8.一種降低血脂、溶解血栓的藥物組合物的制備方法，其特征在于該方法為原料藥大豆100-500重量份 葛根100-200重量份；工藝步驟大豆經(jīng)過精選，洗凈，在30℃溫水中浸泡8-12小時，然后于110℃-121℃滅菌30-40分鐘，放置室溫，接入保藏號ACCC10614的納豆菌種1，2，3級菌種，接種量0.3-2％，于36-38℃發(fā)酵，培養(yǎng)24-48小時，冷置室溫；用組織搗碎機將其破碎，裝入自制層析柱，上樣體積為柱高的1/3-1/2，加入1-3倍體積份90％-95％乙醇后自然沉降2-4小時，在恒流泵的幫助下進行逆時針循環(huán)2-3次，流速3-5ml/min，每次提取3-4小時，抽濾后藥粉用90％-95％乙醇脫水，脫水藥粉放入40-60℃真空干燥，粉碎，備用；葛根去雜質(zhì)洗凈，70℃-90℃低溫干燥12-16小時，破碎，過20目篩，藥粉上提取罐，用7-8倍重量份80％乙醇回流提取2-4次，板框過濾；乙醇液回收乙醇至無醇味；藥渣加水7-10倍重量份煎煮2-4次，過濾，棄渣，保留藥液；乙醇提取藥液合并水煎液濃縮成膏，40-60℃真空干燥36-48小時，粉碎成粉與上述大豆備用粉混勻，加入常規(guī)輔料，按常規(guī)方法制成膠囊劑、丸劑、片劑、顆粒劑、口服液體制劑。
9.如權(quán)利要求8所述的的藥物組合物的制備方法，其特征在于該方法中原料藥為大豆300重量份 葛根100重量份。
10.如權(quán)利要求8所述的的藥物組合物的制備方法，其特征在于該方法中原料藥為大豆500重量份 葛根100重量份。
11.如權(quán)利要求8所述的的藥物組合物的制備方法，其特征在于該方法中原料藥為大豆200重量份 葛根100重量份。
12.如權(quán)利要求8所述的的藥物組合物的制備方法，其特征在于該方法中的工藝步驟為大豆經(jīng)過精選，洗凈，在30℃溫水中浸泡10小時，然后于121℃滅菌35分鐘，放置室溫，接入保藏號ACCC10614的納豆菌種1，2，3級菌種，，接種量0.5％，于37℃發(fā)酵，培養(yǎng)36小時，冷置室溫；用組織搗碎機將其破碎，裝入自制層析柱，上樣體積為柱高的1/3，加入2倍體積份95％乙醇后自然沉降3小時，在恒流泵的幫助下進行逆時針循環(huán)2次，流速4ml/min，每次提取4小時，抽濾后藥粉用95％乙醇脫水，脫水藥粉放入50℃真空干燥，粉碎，備用；葛根去雜質(zhì)洗凈，80℃低溫干燥12小時，破碎，過20目篩，藥粉上提取罐，用8倍重量份80％乙醇回流提取2次，板框過濾；乙醇液回收乙醇至無醇味；藥渣加水7倍重量份煎煮2次，過濾，棄渣，保留藥液；乙醇提取藥液合并水煎液濃縮成膏，50℃真空干燥48小時，粉碎成粉與上述納豆備用粉混勻，制成膠囊劑。
13.如權(quán)利要求8所述的的藥物組合物的制備方法，其特征在于該方法中的工藝步驟為大豆經(jīng)過精選，洗凈，在30℃溫水中浸泡10小時，然后于121℃滅菌40分鐘，放置室溫，接入保藏號ACCC10614的納豆菌種1，2，3級菌種，接種量0.8％，于38℃發(fā)酵，培養(yǎng)48小時，冷置室溫；用組織搗碎機將其破碎，裝入自制層析柱上樣體積為柱高的1/2，加入3倍體積份90％乙醇后自然沉降4小時，在恒流泵的幫助下進行逆時針循環(huán)3次，流速5ml/min，每次提取3小時，抽濾后藥粉用90％乙醇脫水，脫水藥粉放入40-60℃真空干燥，粉碎，備用；葛根去雜質(zhì)洗凈，70℃低溫干燥16小時，破碎，過20目篩，藥粉上提取罐，用7倍重量份80％乙醇回流提取4次，板框過濾；乙醇液回收乙醇至無醇味；藥渣加水7倍重量份煎煮4次，過濾，棄渣，保留藥液；乙醇提取藥液合并水煎液濃縮成膏，40℃真空干燥48小時，粉碎成粉與上述大豆備用粉混勻，加入常規(guī)輔料，按常規(guī)方法制成口服液體制劑。
14.如權(quán)利要求8所述的的藥物組合物的制備方法，其特征在于該方法中的工藝步驟為大豆經(jīng)過精選，洗凈，在30℃溫水中浸泡11小時，然后于121℃滅菌35分鐘，放置室溫，接入保藏號ACCC10614的納豆菌種1，2，3級菌種，接種量1％，于36℃發(fā)酵，培養(yǎng)45小時，冷置室溫；用組織搗碎機將其破碎，裝入自制層析柱上樣體積為柱高的1/2，加入2倍體積份95％乙醇后自然沉降2小時，在恒流泵的幫助下進行逆時針循環(huán)2-3次，流速3-5ml/min，每次提取4小時，抽濾后藥粉用95％乙醇脫水，脫水藥粉放入40-60℃真空干燥，粉碎，備用；葛根去雜質(zhì)洗凈，90℃低溫干燥14小時，破碎，過20目篩，藥粉上提取罐，用8倍重量份80％乙醇回流提取3次，板框過濾；乙醇液回收乙醇至無醇味；藥渣加水10倍重量份煎煮4次，過濾，棄渣，保留藥液；乙醇提取藥液合并水煎液濃縮成膏，55℃真空干燥40小時，粉碎成粉與上述大豆備用粉混勻，加入常規(guī)輔料，按常規(guī)方法制成片劑。
15.如權(quán)利要求1、2、3或4所述藥物組合物在制備降低血脂、溶解血栓藥物中的應(yīng)用。
16.如權(quán)利要求5所述藥物組合物在制備降低血脂、溶解血栓藥物中的應(yīng)用。
17.如權(quán)利要求6所述藥物組合物在制備降低血脂、溶解血栓藥物中的應(yīng)用。
18.如權(quán)利要求7所述藥物組合物在制備降低血脂、溶解血栓藥物中的應(yīng)用。
19.如權(quán)利要求1、2、3或4所述的藥物組合物的質(zhì)量檢測方法，其特征在于該方法包括如下鑒別中的一種和/或幾種A.取本發(fā)明藥物組合物制劑1.5g，加甲醇10ml，放置2小時，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇0.5ml使溶解，作為供試品溶液；另取葛根素對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各3μl，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以7∶2.5∶0.25氯仿-甲醇-水為展開劑，展開，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光條斑；B.取本發(fā)明藥物組合物制劑1.5g，加甲醇10ml，放置2小時，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇0.5ml使溶解，作為供試品溶液；另取大豆苷元對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各2μl，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以8∶2氯仿-甲醇為展開劑，展開，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光條斑。
20.如權(quán)利要求5所述的藥物組合物的質(zhì)量檢測方法，其特征在于該方法包括如下含量測定A.高效液相法測定色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗；色譜柱大連依利特，5μm，4.6mm×150mm十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以23∶77甲醇-水為流動相；檢測波長為250nm；理論板數(shù)按葛根素峰計算應(yīng)不低于3000；對照品溶液的制備取葛根素對照品適量，精密稱定，加甲醇制成1ml含80μg的溶液，即得；供試品溶液的制備取本發(fā)明藥物組合物0.4g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，稱定重量，功率250w，頻率33kHz超聲處理20分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5μl，注入液相色譜儀，測定，即得；每克藥物組合物含葛根素不低于1.8mg；B.高效液相法測定色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗；色譜柱大連依利特，5μm，4.6mm×150mm十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以30∶8∶62甲醇-加腈-0.1磷酸為流動相；檢測波長為250nm；對照品溶液的制備取大豆苷元對照品適量，精密稱定，加甲醇制成1ml含60μg的溶液，即得；供試品溶液的制備取本品適量，研細，取0.4g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，稱定重量，功率250w，頻率33kHz超聲處理20分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5μl，注入液相色譜儀，測定，即得；每克藥物組合物含大豆苷元不低于7mg；C.纖維蛋白平板法測定供試品溶液的制備取本發(fā)明藥物組合物制劑10g，用3倍量生理鹽水浸提10小時，離心取上清液，80％乙醇沉淀，沉淀用無水乙醇脫水后，用生理鹽水定溶至5ml，備用；Uk標(biāo)準(zhǔn)曲線制定將Uk精密配成10U/ml、20U/ml、30U/ml、40U/ml、50U/ml、60U/ml的溶液；用纖維蛋白原、凝血酶和瓊脂糖制成瓊脂糖纖維蛋白平板，待平板凝結(jié)后，各取50μl不同濃度的Uk標(biāo)準(zhǔn)液點在平板上，37溫箱中放置2h，根據(jù)溶圈面積及濃度，制定標(biāo)準(zhǔn)曲線；活性測定取供試品50μl點在用纖維蛋白原、凝血酶和瓊脂糖制成瓊脂糖纖維蛋白平板上，重復(fù)5次，將平板置37溫箱中放置2h，測定溶圈面積，取平均值；將其與Uk標(biāo)準(zhǔn)曲線對比測定活性；然后，換算為每克含有納豆激酶不低于40個活性單位。
21.如權(quán)利要求6所述的藥物組合物的質(zhì)量檢測方法，其特征在于該方法包括如下含量測定A.高效液相法測定色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗；色譜柱大連依利特，5μm，4.6mm×150mm十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以23∶77甲醇-水為流動相；檢測波長為250nm；理論板數(shù)按葛根素峰計算應(yīng)不低于3000；對照品溶液的制備取葛根素對照品適量，精密稱定，加甲醇制成1ml含80μg的溶液，即得；供試品溶液的制備取本發(fā)明藥物組合物0.4g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，稱定重量，功率250w，頻率33kHz超聲處理20分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5μl，注入液相色譜儀，測定，即得；每克藥物組合物含葛根素不低于1.5mg；B.高效液相法測定色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗；色譜柱大連依利特，5μm，4.6mm×150mm十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以30∶8∶62甲醇-加腈-0.1磷酸為流動相；檢測波長為250nm；對照品溶液的制備取大豆苷元對照品適量，精密稱定，加甲醇制成1ml含60μg的溶液，即得；供試品溶液的制備取本品適量，研細，取0.4g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，稱定重量，功率250w，頻率33kHz超聲處理20分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5μl，注入液相色譜儀，測定，即得；每克藥物組合物含大豆苷元不低于5mg；C.纖維蛋白平板法測定供試品溶液的制備取本發(fā)明藥物組合物制劑10g，用3倍量生理鹽水浸提10小時，離心取上清液，80％乙醇沉淀，沉淀用無水乙醇脫水后，用生理鹽水定溶至5ml，備用；Uk標(biāo)準(zhǔn)曲線制定將Uk精密配成10U/ml、20U/ml、30U/ml、40U/ml、50U/ml、60U/ml的溶液；用纖維蛋白原、凝血酶和瓊脂糖制成瓊脂糖纖維蛋白平板，待平板凝結(jié)后，各取50μl不同濃度的Uk標(biāo)準(zhǔn)液點在平板上，37溫箱中放置2h，根據(jù)溶圈面積及濃度，制定標(biāo)準(zhǔn)曲線；活性測定取供試品50μl點在用纖維蛋白原、凝血酶和瓊脂糖制成瓊脂糖纖維蛋白平板上，重復(fù)5次，將平板置37溫箱中放置2h，測定溶圈面積，取平均值；將其與Uk標(biāo)準(zhǔn)曲線對比測定活性；然后，換算為每克含有納豆激酶不低于35個活性單位。
22.如權(quán)利要求7所述的藥物組合物的質(zhì)量檢測方法，其特征在于該方法包括如下含量測定A.高效液相法測定色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗；色譜柱大連依利特，5μm，4.6mm×150mm十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以23∶77甲醇-水為流動相；檢測波長為250nm；理論板數(shù)按葛根素峰計算應(yīng)不低于3000；對照品溶液的制備取葛根素對照品適量，精密稱定，加甲醇制成1ml含80μg的溶液，即得；供試品溶液的制備取本發(fā)明藥物組合物0.4g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，稱定重量，功率250w，頻率33kHz超聲處理20分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5μl，注入液相色譜儀，測定，即得；每克藥物組合物含葛根素不低于1.6mg；B.高效液相法測定色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗；色譜柱大連依利特，5μm，4.6mm×150mm十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以30∶8∶62甲醇-加腈-0.1磷酸為流動相；檢測波長為250nm；對照品溶液的制備取大豆苷元對照品適量，精密稱定，加甲醇制成1ml含60μg的溶液，即得；供試品溶液的制備取本品適量，研細，取0.4g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，稱定重量，功率250w，頻率33kHz超聲處理20分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5μl，注入液相色譜儀，測定，即得；每克藥物組合物含大豆苷元不低于6mg；C.纖維蛋白平板法測定供試品溶液的制備取本發(fā)明藥物組合物制劑10g，用3倍量生理鹽水浸提10小時，離心取上清液，80％乙醇沉淀，沉淀用無水乙醇脫水后，用生理鹽水定溶至5ml，備用；Uk標(biāo)準(zhǔn)曲線制定將Uk精密配成10U/ml、20U/ml、30U/ml、40U/ml、50U/ml、60U/ml的溶液；用纖維蛋白原、凝血酶和瓊脂糖制成瓊脂糖纖維蛋白平板，待平板凝結(jié)后，各取50μl不同濃度的Uk標(biāo)準(zhǔn)液點在平板上，37溫箱中放置2h，根據(jù)溶圈面積及濃度，制定標(biāo)準(zhǔn)曲線；活性測定取供試品50μl點在用纖維蛋白原、凝血酶和瓊脂糖制成瓊脂糖纖維蛋白平板上，重復(fù)5次，將平板置37溫箱中放置2h，測定溶圈面積，取平均值；將其與Uk標(biāo)準(zhǔn)曲線對比測定活性；然后，換算為每克含有納豆激酶不低于33個活性單位。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種降低血脂、溶解血栓藥物組合物及其制備方法。該藥物組合物主要由大豆、葛根100重量份組成。本組合物經(jīng)過常規(guī)工藝直接或間接加入藥學(xué)上可接受的賦型劑制成臨床可接受的劑型，如片劑、口服液、顆粒劑、膠囊、注射劑等，本組合物能夠治療原發(fā)性帕金森病，本發(fā)明藥物組合物具有溶解血栓、防止骨質(zhì)疏松癥、抗菌消毒、預(yù)防高血壓、抑制高血糖、防止腦的老化、提高免疫力和美容養(yǎng)顏的作用。
文檔編號A61P3/06GK101062086SQ200610074529
公開日2007年10月31日 申請日期2006年4月27日 優(yōu)先權(quán)日2006年4月27日
發(fā)明者王偉明, 方自若, 王朝宇, 白秀云 申請人:黑龍江省祖研北藥科技開發(fā)有限責(zé)任公司