專利名稱：：在其中包封有抗結(jié)核藥物的聚dl-丙交酯-共-乙交酯納米微粒的制備方法在其中包封有抗結(jié)核藥物的聚DL-丙交酯-共-乙交酯納米微粒的制備方法發(fā)明領域本發(fā)明涉及一種聚DL-丙交酯-共-乙交酯納米微粒(PLG-NP)制品，該納米微粒中包封有一種或多種活性物質(zhì)(ATD)，并且使得所述包封的物質(zhì)相對于彼此是穩(wěn)定的。尤其，本發(fā)明涉及一種制品，該制品含有穩(wěn)定的第一包封活性物質(zhì)和相對于所述第一物質(zhì)而言不穩(wěn)定的第二包封活性物質(zhì)。提到活性物質(zhì)旨在包括治療性和/或生物活性物質(zhì)。因此，例如，該納米微粒可用于包封抗結(jié)核藥物(ATD)。
背景技術(shù)：
：需要為期6-9個月每天施用多種ATD是造成患者不依從性以及與藥物相關的肝毒性的原因，而所述不依從性和肝毒性導致治療的失敗。不完全/不規(guī)則治療的另一個結(jié)果是抗藥性的出現(xiàn)?；诩{米技術(shù)的藥物遞送系統(tǒng)使用生物可降解的聚合物，在過去十年中被廣泛研究?？捎糜谥苽浼{米微粒的若干方法例如雙乳劑溶劑蒸發(fā)法、油中溶劑擴散法、微乳液法、氣體抗溶劑沉淀法、陰離子多糖膠凝法等等中，沒有一種在顆粒大小、藥物包封效率和藥物釋放動力學方面是完美的。進一步地，在單一制劑中包封多種藥物還未見報道。最常用的雙乳劑溶劑蒸發(fā)法包括2個主要步驟-在初級乳劑中形成小滴以及隨后從次級乳劑小滴中去除溶劑，然后進行聚合物沉淀。顆粒穩(wěn)定性以及藥物釋放動力學通過使用乳化劑/穩(wěn)定劑例如聚乙烯醇(PVA)而得到控制。公知INH、PZA和RIF是用于治療結(jié)核病的活性物質(zhì)或藥物。因此，專利申請?zhí)?65/Del/2003提出了一種將上述藥物中的兩種或多種同時或共同包封的方法，但所述藥物相對于彼此是穩(wěn)定的。除了上述三種藥物或活性物質(zhì)之外，還已知EMB是也用于治療結(jié)核病的藥物。然而，EMB在INH、PZA或RIF存在時不穩(wěn)定，尤其是在INH存在時。從而，發(fā)現(xiàn)EMB不能與INH同時共同包封，因為任何這樣的共同包封將導致EMB的降解。例如，專利申請?zhí)?65/Del/95具有共同包封就穩(wěn)定性而言彼此相容的活性物質(zhì)或藥物的有用應用。對EMB的包封迄今仍是未知的。發(fā)明目的本發(fā)明的一個目的是提出一種含有包封的活性物質(zhì)的制品及其制備方法，所述活性物質(zhì)相對于彼此不穩(wěn)定。本發(fā)明的另一個目的是提出一種其中包封有ATD并且消除了現(xiàn)有技術(shù)相關不足的制品及其制備方法，其中ATD包含利福平(RIF)+異煙肼(INH)+吡溱酰胺(PZA)+乙胺丁醇(EMB)或利福平(RIF)+異煙肼(INH)的組合。本發(fā)明的另一個目的是提出一種其中包封有ATD的制品及其制備方法，其提供延長和持續(xù)的藥物釋放。本發(fā)明還有另一個目的是提出一種其中包封有ATD的制品及其制備方法，其能夠被調(diào)節(jié)以包封最多藥物。本發(fā)明的另一個目的是提出一種其中包封有ATD的制品及其制備方法，其能夠使藥物均勻地分布于結(jié)核菌存在的不同器官。本發(fā)明還有另一個目的是提出一種其中包封有ATD的制品及其制備方法，其可以被凍干并且重配以用作口服制劑。而本發(fā)明的另一個目的是提出一種其中包封有ATD的制品及其制備方法，其不呈現(xiàn)肝毒性。發(fā)明簡述根據(jù)本發(fā)明，提供了一種其中包封有抗結(jié)核藥物的聚DL-丙交酯-共-乙交酯納米微粒的制備方法，其包括(i)在DW/NS/PBS中制備穩(wěn)定的水溶性藥物的水溶液，(ii)在DW/NS/PBS中制備不穩(wěn)定藥物，(iii)在有機溶劑中制備聚合物和疏水藥物溶液，(iv)將步驟(i)和(U)的溶液分別與步驟(iii)的溶液混合并且在低溫條件下超聲處理，(v)將上述乳劑加入PVA水溶液并且在低溫條件下再次超聲處理，(vi)攪拌該乳劑并對其進行離心，(vii)洗滌所述微粒，對其進行重配并凍干。根據(jù)本發(fā)明，親水藥物的水溶液在DW/NS/PBS中以1:0.1-100的重量/體積比制備。聚合物溶液在有機溶劑優(yōu)選二氯甲烷(DCM)中以1:0.3-1的重量/體積比制備，還含有重量/體積比為1:0.5-5的疏水藥物。將水溶液按1:5-20的體積/體積比倒入有機溶液并在4°-15°C下超聲處理45-120秒。將初級乳劑倒入0.8-2.5%PVA溶液，保持DCM:PVA的比例在1:0.5-1.5，在4。-15。C下超聲處理2-5分鐘并攪拌18-30小時。將經(jīng)攪拌的混合物在4。-20。C下以8000-U000rpm離心15-30分鐘以獲得沉淀并用DW/NS/PBS洗滌3-4次，重懸在其中并凍干。藥物和聚合物之比保持在1:lw/w。用這種方式，制得三種類型的制劑，即PLG-NP包封RIF+INH+PZA,PLG-NP包封RIF+INH，和PLG-NP包封醒。已發(fā)現(xiàn)乙胺丁醇在異煙肼存在時非常不穩(wěn)定。從而，如果需要包5昏一種活性物質(zhì)時，本來便利的是將乙醇丁胺聯(lián)合其它活性物質(zhì)共同包封，并采用同時待審的專利申請?zhí)?65/Del/2003中所述的方法。然而，與之相關的不足是乙醇丁胺將會由于其不穩(wěn)定特性而降解。從而，為了消除這樣的不足，乙醇丁胺被分開單獨包封。如此分開單獨包封乙醇丁胺還改善了乙醇丁胺口服施用時的生物利用度。另一個特性是有關最小抑菌濃度(MIC)。已發(fā)現(xiàn)當乙醇丁胺作為其中一種活性物質(zhì)包封四種活性物質(zhì)時無法獲得MIC。然而，分開單獨包封乙醇丁胺提供了所需的MIC。包封有ATD的PLG-NP的制備方法通過下列實施例解釋說明。實施例將10mgINH和10mgPZA溶于lmLDW中。將10mgRIF和30mgPLG混懸于10mLDCM中。將水溶液加入DCM溶液中，在4。C下超聲處理lmin并倒入1%PVA溶液(8mL)，隨后在4'C下超聲處理3min。將乳劑攪拌18hr并以10，OOOrpm離心20min。將沉淀用DW洗滌3次并接著重懸于其中以進行凍干。將10mgEMB溶解在lmLM中。將10mgPLG混懸在10mlDCM中。將水溶液加入DCM溶液，在4。C下超聲處理lmin并倒入1%PVA溶液(8mL),隨后在4。C下超聲處理3min。將乳劑攪拌18hr并以10,Q00rpm離心20min。將沉淀用DW洗滌3次并接著重懸于其中以進行凍干。將凍干的微?；鞈以贜S中并且口服施用于小鼠，所得結(jié)果在表1中給出。表l-藥物治療后小鼠器官中的結(jié)核分枝桿菌菌落形成單位(CFU)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>.數(shù)值是平均值士SD,每組11=5.logcfu值在組2a/b/c和組4(a)之間相當(P〉0.05),然而，其顯著低于(P復001)組1。.*是指在接種未稀釋和以1比IO稀釋的組織勻漿后第28天沒有可測得的cfu。單次口服施予小鼠PLG納米微粒，只有當EMB被分開單獨包封并給藥時才在血漿中獲得最小抑菌濃度(乙醇丁胺的MIC=1.5ng/ml)。這從TB治療角度而言是重要的，因為如果藥物水平低于MIC，治療將變得無效。事實上，當將共同包封EMB連同其它3種藥物的PLG-NP施用于小鼠時，血液中的EMB水平在整個研究期間均低于MIC。此外，參照于生物利用度視為-1的游離EMB，PLG-NP-包封的EMB(單獨)的生物利用度是-IO.6，而PLG-NP-包封的EMB(連同其它3種藥物)的生物利用度是5.1。PLG-NP中藥物含量的測定PLG-NP的藥物包封效率如下RIF56.99±2.72%INH66.31±5.83%PZA68.02±5.58%EMB43.11±4.21%如通過血漿膽紅素、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶和堿性磷酸酶所評估的，PLG-NP不包含任何肝毒性。權(quán)利要求1.其中包封有抗結(jié)核藥物的聚DL-丙交酯-共-乙交酯納米微粒的制備方法，包括(i)在DW/NS/PBS中制備穩(wěn)定的水溶性藥物的水溶液，(ii)在DW/NS/PBS中制備不穩(wěn)定藥物，(iii)在有機溶劑中制備聚合物和疏水藥物溶液，(iv)將步驟(i)和(ii)的溶液分別與步驟(iii)的溶液混合并且在低溫條件下超聲處理，(v)將上述乳劑加入PVA水溶液并且在低溫條件下再次超聲處理，(vi)攪拌該乳劑并對其進行離心，(vii)洗滌所述微粒，對其進行重配并凍干。2.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述有機溶劑是二氯甲烷。3.如權(quán)利要求1和2所述的方法，其中所述聚合物以1:0.3-1w/v的比例溶解在所述溶劑中。4.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述藥物以1:l-1000w/v的比例溶解于DW/NS/PBS中和以1:0,5-5w/v的比例溶解于DCM中。5.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述水溶液和有機溶液以1:5-20v/v的比例混合。6.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述藥物和聚合物的比例是1:lw/w。7.如權(quán)利要求1所述的方法，其中第一次超聲處理進行45-120秒并且第二次超聲處理進行2-5分鐘，各自均在4°C-15。C下進行。8.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述聚乙烯醇的濃度為0.8-2.5%并且DCM:PVA的比例是1:0.5-1.5。9.如權(quán)利要求1所述的方法，其中離心是在4。-20。C下以8000-12000rpm進行15-30分鐘。10.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述微粒用DW/NS/PBS(pH7.2-7.4)洗滌3-4次并凍干。'11.實質(zhì)上如本文描述和實施例例示說明的其中包封有抗結(jié)核藥物的聚DL-丙交酯-共-乙交酯納米微粒的制備方法。全文摘要在其中包封有抗結(jié)核藥物的聚DL-丙交酯-共-乙交酯納米微粒的制備方法，包括(i)在DW/NS/PBS中制備穩(wěn)定的水溶性藥物的水溶液，(ii)在DW/NS/PBS中制備不穩(wěn)定藥物，(iii)在有機溶劑中制備聚合物和疏水藥物溶液，(iv)將步驟(i)和(ii)的溶液分別與步驟(iii)的溶液混合并且在低溫條件下超聲處理，(v)將上述乳劑加入PVA水溶液并且在低溫條件下再次超聲處理，(vi)攪拌該乳劑并對其進行離心，(vii)洗滌所述微粒，對其進行重配并凍干。文檔編號A61K9/51GK101160119SQ200580049436公開日2008年4月9日申請日期2005年4月11日優(yōu)先權(quán)日2005年4月11日發(fā)明者G·K·庫勒,J·N·沃瑪,R·潘迪,S·沙瑪申請人:萊富凱爾創(chuàng)新私人有限公司