專利名稱：治療奶牛乳房炎的乳房用無菌粉針制劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及治療奶牛乳房炎的藥物，尤其是一種治療奶牛乳房炎的乳房用無菌粉針制劑，以及該種無菌粉針制劑的制備方法。
背景技術(shù)：
奶牛乳腺炎是危害奶牛養(yǎng)殖業(yè)最常見的疾病之一。全世界約有50％的奶?；几鞣N類型的乳腺炎?；疾∧膛５哪坍a(chǎn)量和質(zhì)量下降。美國每年因奶牛乳腺炎造成的直接經(jīng)濟損失達20億美元。奶牛乳腺炎造成的損失約70％是由隱性乳腺炎引起的產(chǎn)奶量下降，中國每年僅隱性乳腺炎造成的損失至少是1.35億元人民幣。引起奶牛乳房炎的主要原因是乳腺感染了病原微生物。因此，目前對該病的治療是以抗生素為主?？股亻L期、廣泛、大劑量用于治療奶牛乳房炎已經(jīng)導(dǎo)致一系列不良后果。首先是食品公共衛(wèi)生問題用抗生素治療之后，潛在著牛奶中藥物殘留的危險，對人的健康產(chǎn)生不利影響；其次是耐藥菌株增加致病菌產(chǎn)生耐藥性，使乳房炎變得越來越難治愈，牛場獸醫(yī)不得不加大抗生素的使用劑量，這又加重藥物殘留的危險；藥殘的其他危害還包括乳制品生產(chǎn)中的發(fā)酵過程受到抑制，導(dǎo)致產(chǎn)品的產(chǎn)量和質(zhì)量降低。因此，長期以來人們一直在尋找比抗生素更加安全有效的奶牛乳腺炎治療藥物。
有關(guān)這方面的研究，目前以中草藥和溶菌酶等制劑較多。
在長期的實踐中，中獸醫(yī)學(xué)對防治奶牛乳腺炎積累了豐富的臨床經(jīng)驗及大量的中草藥方劑，但這些方劑的有效成分及其含量不確定，質(zhì)量難以得到有效控制；傳統(tǒng)中草藥直接采用原藥材，用藥量大，藥效不顯著；而且草藥成分復(fù)雜，應(yīng)用于乳房內(nèi)灌注，具有刺激性。目前中草藥主要用于防治隱性乳腺炎，對急性乳腺炎的治療效果不如抗生素。
溶菌酶能通過裂解細胞壁，溶解及殺滅多種致病菌，以達到防治疾病的目的。但酶的滲透作用不強，當細菌在乳腺組織深部或寄生在細胞內(nèi)時，溶菌酶是沒有作用的。另外酶制劑的穩(wěn)定性較差，質(zhì)量不易控制。
根據(jù)報道，1970年Gross和Morell闡明了乳酸鏈球菌素(Nisin)分子的結(jié)構(gòu)。Nisin是一種新型低聚肽，存在6種類型，分別為A、B、C、D、E和Z。其中對Nisin A和Nisin Z兩種類型的研究最活躍，兩者僅在27位氨基酸殘基有差別，其抗菌特性幾乎無差別。Nisin一級結(jié)構(gòu)由34個氨基酸組成，分子末端有氨基和羧基，還有5個硫橋構(gòu)成內(nèi)環(huán)，其分子式是C143H228N42O37S7，平均分子量為3510。Nisin活性分子常為二聚體和四聚體，分子量分別為7000和14000。
Nisin對微生物的作用機理有大量研究，Nisin能吸附G+菌的細胞膜，然后在細胞膜上形成空洞，使胞內(nèi)物質(zhì)排出，導(dǎo)致細胞解體死亡。Nisin主要抑制大部分G+菌的生長。常見的奶牛乳房炎致病菌主要是G+菌，如金黃色葡萄球菌、無乳鏈球菌、停乳鏈球菌和乳房鏈球菌等，研究表明，Nisin對這些致病菌的活性很高，而且對耐青霉素的致病菌也有較強的殺滅作用。
Nisin是乳制品中所含的天然產(chǎn)物，若干年來，它隨著食品被人們攝入，并沒發(fā)現(xiàn)毒性問題。現(xiàn)在已對Nisin的安全性問題進行了系統(tǒng)的研究，大鼠經(jīng)口服LD50約為7000mg/kg體重。研究表明，Nisin對蛋白水解酶(如胰蛋白酶等)特別敏感，因此食用后在消化道中即可很快被蛋白水解酶水解成氨基酸。人在攝入10min后，在唾液中就檢測不到Nisin的活性，故不會在體內(nèi)殘留，也不會改變腸道正常菌群，是一種安全的防腐劑。1969年FAO/WHO食品添加劑聯(lián)合專家委員會批準Nisin作為食品添加劑使用；1990年3月29日我國衛(wèi)生部將其列入GB2760-86的1990年增補品種中，可用于罐藏食品、植物蛋白食品、乳制品和肉制品。目前已有50多個國家和地區(qū)批準Nisin可以作為一種純天然食品防腐劑使用。
美國專利US5762948和中國專利CN1186413公開了一種預(yù)防和治療奶牛乳腺炎的濕巾，其成分為乳酸鏈球菌素。但該制劑僅能用于奶牛乳區(qū)外部的消毒，并不能用于乳房內(nèi)注射，中國專利CN03115388公開了一種用于預(yù)防奶牛乳腺炎的殺菌制劑，其主要成分為一種合成的抗菌肽和溶葡萄球菌酶，但目前尚未有任何國家批準將該抗菌肽用于奶牛乳房炎治療，而且溶葡萄球菌酶通常在干燥條件下可在室溫下長期保存，在水溶液中穩(wěn)定性較差，而且不耐高溫，在生產(chǎn)注射液的過程中，不能通過最終高溫滅菌的方式生產(chǎn)。
中國專利申請?zhí)枮?00510011522.2描述了以Nisin為主要成分治療奶牛乳房炎的乳房用無菌溶液制劑。但溶液劑存在運輸不便，重量加大，運輸費用增加的缺點。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種適合乳房內(nèi)使用的以Nisin為主要成分治療奶牛乳房炎的乳房用無菌粉針制劑，具有運輸方便，成本降低的特點。
本發(fā)明的另一個目的是提供上述乳房用無菌粉針制劑的制備方法。
為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取如下技術(shù)方案治療奶牛乳房炎的乳房用無菌粉針制劑，其中該無菌粉針制劑是含有乳酸鏈球菌素的無菌粉末。
尤其是，乳酸鏈球菌素的效價為100000-5000000單位/克。
該無菌粉針制劑的水溶液pH值為1-5，優(yōu)選pH值為2-3。
本發(fā)明的治療奶牛乳房炎的乳房用無菌粉針制劑的制備方法，包括如下步驟(1)用蒸餾水加入適當酸性物質(zhì)，配制pH值為2-3的溶液；(2)向步驟(1)制備的溶液中加入乳酸鏈球菌素，使乳酸鏈球菌素的效價為10000-500000單位/毫升，過濾，滅菌，干燥，除去90％的水分，即得100000-5000000單位/克的無菌粉針。
本發(fā)明的無菌粉針制劑的優(yōu)點和積極效果在于本發(fā)明的無菌粉針制劑是含乳酸鏈球菌素的凍干粉，用于治療奶牛乳房炎，不會在牛奶中形成對人體有害的殘留，治療之后無停藥期，無需棄奶；該制劑質(zhì)量可控制、熱穩(wěn)定性好，適合乳房用藥；而且具有運輸方便的特點。
具體實施例方式
關(guān)于“乳酸鏈球菌素的效價”的說明乳酸鏈球菌素的效價用于衡量Nisin抗菌活性的大小，用國際單位表示。WHO的生物標準化專家委員會(The WorldHealth Organization Expert Committee in Biological Standardization)規(guī)定了一種標準物質(zhì)，每克該物質(zhì)含純品Nisin 25毫克，相當于100萬國際單位。在檢測Nisin活性時，用該標準物質(zhì)作為對照品。
實施例1 制備效價為1500000單位/克、水溶液pH值為3的乳酸鏈球菌素奶牛乳房用無菌粉針制劑的方法包括如下步驟(1)將5克維生素C溶解于1000毫升蒸餾水中，配制成維生素C含量為0.5％，pH值為3的水溶液；(2)將10克乳酸鏈球菌素，效價為15000單位/毫克，溶解在步驟(1)的溶液中；(3)過濾除菌，干燥，除去90％的水分。
實施例2 制備效價為3000000單位/克、水溶液pH值為2的乳酸鏈球菌素奶牛乳房用無菌粉針制劑的方法包括如下步驟(1)將50克維生素C溶解于1000毫升蒸餾水中，配制成維生素C含量為5％，pH值為2的水溶液；(2)將20克效價為15000單位/毫克的乳酸鏈球菌素，溶解在步驟(1)的溶液中；(3)過濾除菌，干燥，除去90％的水分。
實施例3 制備效價為500000單位/克、水溶液pH值為3的乳酸鏈球菌素奶牛乳房用無菌粉針制劑的方法包括如下步驟(1)將25克維生素C溶解5000毫升蒸餾水中，配制成pH值為3的水溶液；(2)將2.5克效價為20000單位/毫克的乳酸鏈球菌素溶解在步驟(1)的溶液中；(3)過濾除菌，干燥，除去90％的水分。
實施例4 制備效價為3000000單位/克、水溶液pH值為2.5的乳酸鏈球菌素奶牛乳房用無菌粉針制劑的方法包括如下步驟(1)將21克檸檬酸和16毫升濃鹽酸加入1000毫升蒸餾水中，再加入8.4克氫氧化鈉，調(diào)節(jié)pH值至2.5；(2)將16.7克效價為18000單位/毫克的乳酸鏈球菌素溶解在步驟(1)制得的水溶液中；
(3)將步驟(2)制得的溶液在121℃、20分鐘條件下高壓滅菌，干燥，除去90％的水分。
實施例5 制備效價為4000000單位/克、水溶液pH值為2的乳酸鏈球菌素奶牛乳房用無菌粉針制劑的方法包括如下步驟(1)將濃鹽酸數(shù)滴加入1000毫升蒸餾水中，調(diào)節(jié)pH值至2；(2)將20克效價為20000單位/毫克的乳酸鏈球菌素，溶解在步驟(1)制得的水溶液中；(3)將步驟(2)制得的溶液在121℃、20分鐘條件下高壓滅菌，干燥，除去90％的水分。
實施例6 制備效價為5000000單位/克、水溶液pH值為1的乳酸鏈球菌素奶牛乳房用無菌粉針制劑的方法包括如下步驟(1)將濃鹽酸數(shù)滴加入1000毫升蒸餾水中，調(diào)節(jié)pH值至1；(2)將25克效價為20000單位/毫克的乳酸鏈球菌素，溶解在步驟(1)制得的水溶液中；(3)將步驟(2)制得的溶液在121℃、20分鐘條件下高壓滅菌，干燥，除去90％的水分。
實施例7 制備效價為1000000單位/克、水溶液pH值為4的乳酸鏈球菌素奶牛乳房用無菌粉針制劑的方法包括如下步驟(1)將4克維生素C溶解于1000毫升蒸餾水中，配制成維生素C含量為0.4％，pH值為5的水溶液；(2)將10克乳酸鏈球菌素，效價為10000單位/毫克，溶解在步驟(1)的溶液中；(3)過濾除菌，以無菌操作分裝于20毫升的滅菌玻璃安瓿中，干燥，除去90％的水分即得。
觀察例1采用乳酸鏈球菌素無菌粉針制劑，加無菌水稀釋后，乳房內(nèi)灌注治療20例自然發(fā)病的奶牛乳房炎病例，每天治療2次，每次280萬單位/瓶×2，治療次數(shù)最多為7次，最少2次，平均4.3次，20個病例全部臨床治愈。
觀察例2采用乳酸鏈球菌素無菌粉針制劑，無菌粉針制劑，加無菌水稀釋后，乳房內(nèi)灌注治療10例自然發(fā)病的奶牛乳房炎病例，每天治療2次，每次280萬單位/瓶×2，治療次數(shù)最多為3次，最少2次，平均2.3次，10個病例臨床治愈。
觀察例3采用乳酸鏈球菌素無菌粉針制劑乳房內(nèi)灌注治療15例自然發(fā)病的奶牛乳房炎病例，每天治療2次，每次280萬單位/瓶×2，治療次數(shù)最多為10次，最少3次，平均6.8次，15個病例全部臨床治愈。
權(quán)利要求
1.治療奶牛乳房炎的乳房用無菌粉針制劑，其特征在于該制劑是含有乳酸鏈球菌素的無菌粉末。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的無菌粉針制劑，其特征在于乳酸鏈球菌素的效價為100000-5000000單位/克。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的無菌粉針制劑，其特征在于該無菌粉針制劑水溶液的pH值為1-5。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的無菌粉針制劑，其特征在于該無菌粉針制劑水溶液的pH值為2-3。
5.一種如權(quán)利要求1所述的治療奶牛乳房炎的無菌粉針制劑的制備方法，其特征在于包括如下步驟(1)用蒸餾水加入一些酸性物質(zhì)，配制pH值為1-5的溶液；(2)向步驟(1)制備的溶液中加入乳酸鏈球菌素，使乳酸鏈球菌素的效價為10000-500000單位/毫升，過濾，滅菌，干燥，除去90％的水分，即得乳酸鏈球菌素的效價為100000-5000000單位/克的無菌粉針。
全文摘要
本發(fā)明涉及治療奶牛乳房炎的藥物，尤其是一種治療奶牛乳房炎的無菌粉針制劑，以及該種制劑的制備方法。該制劑是含有乳酸鏈球菌素的無菌粉針制劑。本發(fā)明的無菌粉針制劑的優(yōu)點和積極效果在于本發(fā)明的制劑是含乳酸鏈球菌素的無菌粉針制劑，用于取代抗生素治療奶牛乳房炎，不會在牛奶中形成對人體有害的殘留，用藥期間無停藥期，無需棄奶；該制劑質(zhì)量可控制、熱穩(wěn)定性好，適合乳房用藥；而且具有運輸方便的特點。
文檔編號A61P15/00GK1961956SQ200510117670
公開日2007年5月16日 申請日期2005年11月9日 優(yōu)先權(quán)日2005年11月9日
發(fā)明者莫云, 劉彤, 胡松華 申請人:北京大北農(nóng)農(nóng)業(yè)科技研究院