專利名稱：流感病毒活體外快速結(jié)合轉(zhuǎn)化滴鼻液制取方法
技術(shù)領(lǐng)域：
流感病毒活體外快速結(jié)合轉(zhuǎn)化滴鼻液制取方法是根據(jù)存在于馬齒莧體內(nèi)的半乳糖醛酸具有結(jié)合磷脂、膽固醇、蛋白質(zhì)、糖蛋白、核酸生成易溶于水的半乳糖醛酸苷的生物學(xué)功能與病毒特性、流感病毒囊膜、核衣殼結(jié)構(gòu)及其化學(xué)組成、理化性質(zhì)綜合研制的生物化學(xué)技術(shù)。
背景技術(shù)：
目前，市售的各類抗流感病毒藥物的生產(chǎn)技術(shù)先進(jìn)、治療效果顯著，但所有的抗流感病毒藥物必須要先進(jìn)入機(jī)體方能產(chǎn)生相應(yīng)的抗體或在血液中提高干擾素的水平。為了要達(dá)到高速、高效地中和流感病毒的目的，必須要大劑量的使用，這就注定給機(jī)體帶來相當(dāng)大的毒副作用，而且對(duì)流感病毒的侵染幾乎不起防護(hù)作用。

發(fā)明內(nèi)容
一、機(jī)理馬齒莧是一年生肉質(zhì)草本植物，豐富的粘液是循環(huán)體液。粘液中富含半乳糖醛酸，多以鈣、鎂離子的形式存在。半乳糖醛酸是強(qiáng)極性結(jié)合物質(zhì)，分子內(nèi)含有一個(gè)羧酸根負(fù)離子基團(tuán)，能與含帶正電荷離子基團(tuán)的化合物形成離子鍵；分子內(nèi)含有一個(gè)半縮醛羥基很活潑，能與含有羥基、羧基、氨基、硫氫基、硫酚基、酚基的化合物結(jié)合生成易溶于水的、無毒的半乳糖醛酸苷分子。
流感病毒在活體外只具有一般大分子特性。流感病毒結(jié)構(gòu)是最外層囊膜，次外層蛋白質(zhì)，核心是核酸。流感病毒囊膜由內(nèi)向外可分為內(nèi)膜蛋白、類脂和糖蛋白三層。糖蛋白層由兩種糖蛋白刺突組成，一種是血凝素，一種是神經(jīng)氨酸酶。糖蛋白的糖基部分是由半乳糖、甘露糖、巖藻糖、氨基葡萄糖、氨基半乳糖、葡萄糖、唾液酸等結(jié)合的多糖。該糖基側(cè)鏈與肽鏈N末端片段上的蘇氨酸、絲氨酸、天門冬酰氨以糖苷鍵相互結(jié)合成為糖蛋白大分子。
血凝素N末端有一個(gè)疏水區(qū)，是流感病毒侵入宿主細(xì)胞的必須結(jié)合部位。血凝素是由3條糖基多肽鏈以非共價(jià)形式聚合成的三聚體。也就是說三聚體的3條糖基多肽鏈之間是以弱的次級(jí)鍵相互吸引的。用強(qiáng)極性半乳糖醛酸分子接觸三聚體時(shí)，3條糖基多肽鏈之間的次級(jí)鍵發(fā)生斷裂，糖基多肽鏈上自由的羥基，氨基極性基團(tuán)與半乳糖醛酸分子的半縮醛羥基脫水縮合，生成易溶于水的半乳糖醛酸苷糖基多肽鏈。三聚體發(fā)生變構(gòu)、質(zhì)變。沒有了N末端的疏水區(qū)，失去與宿主細(xì)胞受體糖蛋白結(jié)合的部位，不能進(jìn)行吸附。
神經(jīng)氨酸酶是由4條相同的糖基多肽鏈組成的蘑菇狀四聚體，具有酶活性。同樣神經(jīng)氨酸酶4條糖基多肽鏈之間也是以弱的次級(jí)鍵相互吸引的。用強(qiáng)極性的半乳糖醛酸接觸四聚體時(shí)，4條糖基多肽鏈之間的次級(jí)鍵發(fā)生斷裂，糖基多肽鏈上的自由羥基、氨基極性基團(tuán)與半乳糖醛酸分子的半縮醛羥基脫水縮合，生成易溶于水的半乳糖醛酸苷糖基多肽鏈。四聚體發(fā)生變構(gòu)、質(zhì)變，導(dǎo)致神經(jīng)氨酸酶失活。
(反應(yīng)式見說明書第6頁(1))類脂層是雙分子層結(jié)構(gòu)，它來自宿主細(xì)胞膜或核膜。在雙層膜結(jié)構(gòu)中，蛋白質(zhì)約占52％。在雙分子層中的蛋白質(zhì)有兩種，一種是外周蛋白，一種是結(jié)構(gòu)蛋白。兩種蛋白質(zhì)的親水基團(tuán)都浮露在雙分子層外部，N末端露在雙分子外側(cè)層，C末端露在雙分子內(nèi)側(cè)層。用強(qiáng)極性半乳糖醛酸接觸蛋白質(zhì)分子時(shí)，親水的氨基、羧基、羥基與半乳糖醛酸分子的半縮醛羥基脫水縮合，生成易溶于水的半乳糖醛酸苷分子多肽鏈。
(反應(yīng)式見說明書第7頁(2))在雙分子層膜結(jié)構(gòu)中，脂質(zhì)約占40％，其中磷脂約占脂質(zhì)的60％，還有少量膽固醇。在雙分子層中的磷脂有兩種，一種是磷脂酰膽堿，一種是絲氨酸磷脂。兩種磷脂在內(nèi)外側(cè)層均有分布。外側(cè)層磷脂酰膽堿數(shù)量多；內(nèi)側(cè)層絲氨酸磷脂數(shù)量多。用強(qiáng)極性半乳糖醛酸接觸雙層磷脂分子，磷脂分子極性頭部帶正電荷的氨基與半乳糖醛酸分子上的帶負(fù)電荷的羧酸根相互吸引形成離子鍵，生成易溶于水的磷脂半乳糖醛酸鹽。膽固醇第3號(hào)位上有一個(gè)自由羥基，與半乳糖醛酸分子中的半縮醛羥基脫水縮合，生成易溶于水的半乳糖醛酸苷分子膽固醇。
(反應(yīng)式見說明書8頁(3)、(4))內(nèi)膜蛋白是包圍在病毒核蛋白外的一層膜六結(jié)構(gòu)，介于核蛋白與類脂雙層膜之間，與脂質(zhì)雙分子層的外周蛋白以弱的次級(jí)鍵相互吸引，用強(qiáng)極性的半乳糖醛酸接觸內(nèi)膜蛋白結(jié)構(gòu)時(shí)，內(nèi)膜蛋白與外周蛋白之間的次級(jí)鍵發(fā)生斷裂，自由的羥基、氨基極性基團(tuán)與半乳糖醛酸分子上的半縮醛羥基脫水縮合，生成易溶于水的半乳糖醛酸苷分子多肽鏈。
(反應(yīng)式見說明書第7頁(2))流感病毒的蛋白質(zhì)卷曲螺旋包繞著螺旋形RNA，該蛋白質(zhì)中有三種分子量較大的蛋白質(zhì)P1、P2、P3蛋白，均為RNA多聚酶，此酶與RNA轉(zhuǎn)錄有關(guān)，其它均為核蛋白。核蛋白是核酸和組蛋白結(jié)合的復(fù)合體。組蛋白是堿性蛋白質(zhì)，富含絲氨酸、精氨酸兩種堿性氨基酸，帶有自由氨基。在核酸外的蛋白質(zhì)呈螺旋狀有規(guī)律地排列，各亞基之間靠二硫鍵、疏水鍵等次級(jí)鍵相互吸引形成穩(wěn)定的空間結(jié)構(gòu)。用強(qiáng)極性的半乳糖醛酸分子接觸核蛋白時(shí)，各亞基間的二硫鍵、次級(jí)鍵發(fā)生斷裂，同時(shí)，維系亞基分子內(nèi)三級(jí)結(jié)構(gòu)的各次級(jí)鍵也發(fā)生斷裂，自由的氨基、羥基、羧基極性基團(tuán)與半乳糖醛酸分子的半縮醛羥基脫水縮合，生成易溶于水的半乳糖醛酸苷分子多肽鏈，從螺旋狀的核酸分子表面一條條地脫落下來，RNA多聚酶也變構(gòu)失活。
(反應(yīng)式見說明書第7頁(2))流感病毒核酸為單股負(fù)鏈RNA。在流感病毒RNA中含腺苷酸23％、鳥苷酸20％、胞苷酸24％、尿苷酸23％。用強(qiáng)極性的半乳糖醛酸接觸裸露的RNA鏈時(shí)，RNA的二級(jí)結(jié)構(gòu)之間的氫鍵發(fā)生斷裂，各堿基分子的自由氨基與半乳糖醛酸分子上的半縮醛羥基脫水縮合，生成易溶于水的半乳糖醛酸苷分子RNA鏈。流感病毒RNA發(fā)生質(zhì)變，喪失遺傳功能。
(反應(yīng)式見說明書第9頁(5))流感病毒血凝素N末端有一個(gè)疏水區(qū)是病毒侵入宿主細(xì)胞的結(jié)合部位。流感病毒的受體是糖蛋白，存在于敏感動(dòng)物紅血細(xì)胞及粘膜細(xì)胞表面。既然血凝素N末端有一個(gè)疏水區(qū)是結(jié)合部位，那么在粘膜細(xì)胞表面也一定有一個(gè)疏水區(qū)的空間結(jié)構(gòu)，而且兩個(gè)疏水區(qū)具有相同的烴基組成，烴基分子間又必須在分子結(jié)構(gòu)上構(gòu)成互補(bǔ)，才能形成疏水鍵，達(dá)到病毒與宿主細(xì)胞結(jié)合的目的。用強(qiáng)極性半乳糖醛酸接觸粘膜細(xì)胞表面，受體糖蛋白分子上的自由氨基、羥基極性基團(tuán)與半乳糖醛酸分子上的半縮醛羥基脫水縮合，生成易溶于水的半乳糖醛酸苷糖基多肽鏈。受體糖蛋白的空間構(gòu)象發(fā)生嚴(yán)重的改變，血凝素與宿主細(xì)胞失去結(jié)合位點(diǎn)，無法進(jìn)行吸附，阻斷和關(guān)閉病毒進(jìn)入細(xì)胞的途徑。
已經(jīng)侵入宿主細(xì)胞的流感病毒，其子代會(huì)以芽生的形式從鼻腔、口腔粘膜表面釋放出來，此時(shí)鼻腔、口腔粘膜表面的受體糖蛋白已經(jīng)被結(jié)合成為半乳糖醛酸苷糖基多肽鏈，病毒喪失結(jié)合部位，另外，在鼻腔、口腔中過剩的半乳糖醛酸分子會(huì)在粘膜表面將釋放出的病毒子代逐一結(jié)合轉(zhuǎn)化成半乳糖醛酸苷分子，溶于水，使其無法進(jìn)行再侵染和傳播。
RNA基因片段不同的序列組合，導(dǎo)致流感病毒血凝素和神經(jīng)氨酸酶活性部位的頻繁改變，進(jìn)而產(chǎn)生不同抗原類型的流感病毒，甚至有些病毒使人群在長(zhǎng)期生命過程中積累的特異性免疫功能失去效力，嚴(yán)重危害生命。
從理論上講，RNA基因片段無論是怎樣的組合方式，也無論怎樣與外來基因片段發(fā)生重組，RNA只有A、U、G、C四種堿基是固定不變的，它也只能轉(zhuǎn)錄、合成出二十幾種氨基酸。因此，各種流感病毒糖蛋白上的自由羥基、氨基、羧基都會(huì)與強(qiáng)極性的半乳糖醛酸分子結(jié)合，生成易溶于水的半乳糖醛酸苷分子糖基多肽鏈，喪失與宿主細(xì)胞結(jié)合的部位。
綜合分析和理論推斷；SARS病毒和禽流感病毒也是囊膜和核蛋白結(jié)構(gòu)，也是與粘膜受體糖蛋白結(jié)合，侵入宿主細(xì)胞。然而，粘膜細(xì)胞受體糖蛋白的糖基序列和氨基酸序列是固定不變的；不斷變化的只是病毒糖蛋白的氨基酸序列。用強(qiáng)極性半乳糖醛酸覆蓋結(jié)合轉(zhuǎn)化口腔、鼻腔粘膜受體糖蛋白，使之生成易溶于水的半乳糖醛酸苷分子糖基多肽鏈結(jié)構(gòu)。當(dāng)SARS病毒或禽流感病毒進(jìn)入口腔、鼻腔時(shí)，第一沒有結(jié)合位點(diǎn)；第二會(huì)被鼻腔、口腔中過剩的半乳糖醛酸分子迅速結(jié)合轉(zhuǎn)化，生成易溶于水的半乳糖醛酸苷分子，如此，病毒與宿主細(xì)胞雙雙喪失結(jié)合能力，無法侵染與傳播，達(dá)到在活體外摧毀SARS病毒和禽流感病毒的理想目的。
二、滴鼻液制取方法6-10月間采收野生馬齒莧，用剪刀剪下馬齒莧地上部分，摘去有潰爛和創(chuàng)傷的枝葉，在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上輕輕磕下馬齒莧種子，收集起來，隨時(shí)可以在溫室里播種。將馬齒莧植株用剪刀剪成約5厘米的小段，用清水沖凈馬齒莧表面的塵土，將洗凈的馬齒莧裝入一個(gè)40目的尼龍紗網(wǎng)袋中，扎口，放入甩干桶中，甩去植株表面清水。將實(shí)驗(yàn)用具全部用75％酒精殺菌處理，取一個(gè)不銹鋼盆倒入75％酒精約1000毫升，將洗凈的馬齒莧植株放入酒精盆中，殺菌10秒鐘，取出裝入40目尼龍紗網(wǎng)袋中，扎口，放入甩干桶中，甩去植株表面的酒精，放入一個(gè)瓷盤中，稱取馬齒莧2000克，用榨汁機(jī)(九陽牌)榨取馬齒莧汁液，將榨出的汁液倒入雙層尼龍綢布袋中，放入不銹鋼盆中，用左手抓緊布袋口，右手用不銹鋼飯勺在布袋上來回推擠，隨時(shí)將擠壓出的汁液倒入另一個(gè)不銹鋼盆中，將汁液倒入離心管中4000轉(zhuǎn)/分，離心5分鐘，取上清液倒入磨口瓶中，蓋緊蓋子，瓶口再用塑料膜覆蓋，用皮筋扎緊，勿使染菌，1℃冰箱存放，2000克馬齒莧植株可制取200毫升馬齒莧滴鼻液。
采收的鮮馬齒莧植株用清水和酒精處理后，可以放入-10℃以下冰箱存放備用。該技術(shù)、原料豐富、無毒可食、成本低、工藝簡(jiǎn)單、無污染產(chǎn)生、符合環(huán)保和綠色醫(yī)藥要求。
具體實(shí)施例方式
馬齒莧滴鼻液適用于健康人和流感患者，無毒、無副作用。
1、健康人使用方法從冰箱取出馬齒莧滴鼻液，倒入表面皿8毫升，立即用75％酒精棉簽擦干凈磨口瓶?jī)?nèi)外瓶口，蓋緊蓋子，用塑料膜和皮筋扎緊，放入冰箱，用注射器(不加針頭)抽取表面皿中的滴鼻液，仰頭慢慢滴入雙鼻孔中2毫升，仰頭1分鐘，讓滴鼻液順鼻腔流到咽部，咽下，取2毫升涂抹在臉上，殺菌、護(hù)膚，將注射器中剩余的部分滴入口中，用此液刷牙處理1分鐘(馬齒莧無毒，有殺菌、抑菌功能，半乳糖醛酸是羧酸鹽，有乳化、凈化作用，強(qiáng)似牙膏。)，每4天處理一次，可以有效地預(yù)防流感病毒。
2、流感患者使用方法與上述處理方法相同，取10毫升滴鼻液，滴入雙鼻孔2毫升，鼻腔內(nèi)的清鼻涕在10秒鐘內(nèi)可吸收干凈并立即恢復(fù)通氣，且再無清鼻涕產(chǎn)生，連續(xù)處理兩次，取2毫升涂抹在臉上，特別是鼻孔周圍，剩余的滴鼻液滴入口中，刷牙、漱口，每天處理3次，3日內(nèi)恢復(fù)健康。
(1)糖蛋白分子與半乳糖醛酸分子結(jié)合反應(yīng)如下
(2)蛋白質(zhì)分子與半乳糖醛酸分子反應(yīng)如下
(3)磷脂與半乳糖醛酸反應(yīng)如下 (4)膽固醇與半乳糖醛酸分子的半縮醛羥基脫水縮合，生成半乳糖醛酸苷分子膽固醇如下 半乳糖醛酸苷分子膽固醇
(5)半乳糖醛酸分子上的半縮醛羥基與RNA分子堿基上的自由氨基脫水縮合，生成半乳糖醛酸苷分子RNA
權(quán)利要求
1.滴鼻液制取方法6-10月間采收野生馬齒莧，用剪刀剪下馬齒莧地上部分，摘去有潰爛和創(chuàng)傷的枝葉，在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上輕輕磕下馬齒莧種子，收集起來，隨時(shí)可以在溫室里播種。將馬齒莧植株用剪刀剪成約5厘米的小段，用清水沖凈馬齒莧表面的塵土，將洗凈的馬齒莧裝入一個(gè)40目的尼龍紗網(wǎng)袋中，扎口，放入甩干桶中，甩去植株表面清水。將實(shí)驗(yàn)用具全部用75％酒精殺菌處理，取一個(gè)不銹鋼盆倒入75％酒精約1000毫升，將洗凈的馬齒莧植株放入酒精盆中，殺菌10秒鐘，取出裝入40目尼龍紗網(wǎng)袋中，扎口，放入甩干桶中，甩去植株表面的酒精，放入一個(gè)瓷盤中，稱取馬齒莧2000克，用榨汁機(jī)(九陽牌)榨取馬齒莧汁液，將榨出的汁液倒入雙層尼龍綢布袋中，放入不銹鋼盆中，用左手抓緊布袋口，右手用不銹鋼飯勺在布袋上來回推擠，隨時(shí)將擠壓出的汁液倒入另一個(gè)不銹鋼盆中，將汁液倒入離心管中4000轉(zhuǎn)/分，離心5分鐘，取上清液倒入磨口瓶中，蓋緊蓋子，瓶口再用塑料膜覆蓋，用皮筋扎緊，勿使染菌，1℃冰箱存放，2000克馬齒莧植株可制取200毫升馬齒莧滴鼻液。采收的鮮馬齒莧植株用清水和酒精處理后，可以放入-10℃以下冰箱存放備用。該技術(shù)、原料豐富、無毒可食、成本低、工藝簡(jiǎn)單、無污染產(chǎn)生、符合環(huán)保和綠色醫(yī)藥要求。
全文摘要
流感病毒活體外快速結(jié)合轉(zhuǎn)化滴鼻液制取方法是根據(jù)存在于植物體內(nèi)的半乳糖醛酸具有結(jié)合磷脂、膽固醇、蛋白質(zhì)、糖蛋白、核酸生成易溶于水的半乳糖醛酸苷的生物學(xué)功能與病毒特性、流感病毒結(jié)構(gòu)、化學(xué)組成綜合研制的生化技術(shù)。實(shí)驗(yàn)證明該技術(shù)在流感高發(fā)生期間和區(qū)域內(nèi)能有效地防止流感病毒的侵染；已經(jīng)被感染的患者10秒鐘內(nèi)可將鼻腔內(nèi)的清鼻涕吸收干凈，且12小時(shí)內(nèi)干燥成痂，3日內(nèi)恢復(fù)健康。該發(fā)明解決了在鼻腔內(nèi)快速結(jié)合轉(zhuǎn)化摧毀流感病毒和阻斷、關(guān)閉流感病毒侵染途徑的問題。該技術(shù)原料豐富、無毒可食、成本低、工藝簡(jiǎn)單、無污染、符合環(huán)保和綠色醫(yī)藥要求。
文檔編號(hào)A61P31/16GK1843391SQ200510065460
公開日2006年10月11日 申請(qǐng)日期2005年4月8日 優(yōu)先權(quán)日2005年4月8日
發(fā)明者王麗華, 何金榮, 韓文樵, 于合月, 于一鳴, 于敏 申請(qǐng)人:王麗華, 何金榮, 韓文樵