專利名稱：一種治療眼部免疫性疾病及抑制增殖、新生血管的眼表用藥的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及眼科藥物制劑，特別提供了一種通過眼表給藥的以雷帕霉素為主要活性成分的治療眼部免疫性疾病治療眼部免疫性疾病及抑制增殖、新生血管的眼表用藥的藥物。
背景技術(shù)：
眼部免疫性疾病是眼科頑固性眼病，目前眼局部用藥主要有皮質(zhì)類固醇激素、環(huán)孢霉素A，一方面有些疾病不能得到有效的控制，另一方面皮質(zhì)類固醇激素長期應(yīng)用可引起青光眼、白內(nèi)障，繼發(fā)感染等嚴(yán)重危害眼的健康。角膜移植術(shù)后免疫排斥反應(yīng)廣義上亦為免疫性疾病，角膜移植是治療角膜盲的重要復(fù)明手術(shù)，也是治療某些頑固角膜病變的主要措施。在所有器官移植中，角膜移植是成功率最高的手術(shù)。盡管如此，免疫排斥仍是導(dǎo)致角膜移植失敗的最常見原因，尤其是血管化角膜及二次角膜移植患者。目前臨床上抑制角膜移植排斥反應(yīng)的藥物有皮質(zhì)類固醇激素，環(huán)孢霉素A以及FK506，雖然大大地提高了角膜移植的成功率及植片長期存活率，但仍有部分患者排斥不能被逆轉(zhuǎn)。另外，眼部外傷及手術(shù)后患者常因新生血管及大量瘢痕形成導(dǎo)致治療失敗。因此尋找高效低毒的抑制免疫、增殖及新生血管形成的藥物一直是防治眼部免疫性疾病及瘢痕粘連的重要課題。
雷帕霉素(Rapamycin，RPM，RAPA，Sirolimus)是1975年從吸水性鏈霉菌(Streptomyces hygroslopicus)發(fā)酵液中提取出來的一種大環(huán)內(nèi)酯類抗真菌抗生素，自1989年發(fā)現(xiàn)它具有強大的免疫抑制作用后，其研究進展相當(dāng)迅速。它不但對多種自身免疫性異常有顯著療效，而且在不同種類的器官移植動物模型上顯示出顯著的抗排斥反應(yīng)活性，是一種療效好、低毒、無腎毒性及神經(jīng)毒性的新型免疫抑制劑。比他克莫司(FK506)或環(huán)孢素A(CsA)更有效，近來還發(fā)現(xiàn)它抑制腫瘤內(nèi)新生血管的產(chǎn)生，具有良好的抗腫瘤及新生血管形成作用。現(xiàn)已把其作為器官移植抗排斥作用新藥進行III期臨床試驗。
RPM的作用機制不同于Calcineurin抑制劑如CsA和FK506。CsA和FK506分別與細胞漿內(nèi)的免疫親素環(huán)孢親和素和FKBP12結(jié)合，抑制Calcineurin，抑制第1/第2信號，阻止細胞因子如IL-2的表達和轉(zhuǎn)錄，抑制T細胞活化的早期階段，抑制T細胞由G0期向G1期轉(zhuǎn)變。RPM則從另外途徑發(fā)揮作用，它不直接阻斷T細胞生長因子的生成，而是阻斷這些細胞因子提供的增生信號，抑制多種刺激引起的T和B淋巴細胞增生，使細胞停留在細胞周期G1期的晚期，阻止這些細胞進入S期，RPM屬T細胞晚期激活抑制劑。RPM可抑制對CsA和FK506不敏感的免疫激活途徑。在同種移植后發(fā)生的對CsA不敏感的排斥反應(yīng)中，有CD28介入。T淋巴細胞上CD28受體的反應(yīng)為TH細胞產(chǎn)生抗原依賴性細胞因子提供了重要的輔助信號，它的傳播不能被CsA或FK506抑制，但對RPM敏感，RPM影響CD28介導(dǎo)的持續(xù)上調(diào)IL-2的轉(zhuǎn)錄。雖然RPM阻斷IL-2誘導(dǎo)的T細胞增殖，但不影響這一信號引起的活化誘導(dǎo)凋亡。
RPM不局限于對免疫系統(tǒng)的細胞產(chǎn)生作用，還抑制bFGF，PDGF引起的平滑肌細胞、內(nèi)皮細胞和成纖維細胞等的增殖。
聯(lián)合應(yīng)用較小劑量的RPM與CsA或FK506后，由于在免疫抑制作用上的協(xié)同，既可產(chǎn)生足夠的療效，又可避免或減輕它們各自的毒性反應(yīng)。
但是，目前雷帕霉素只有全身性用藥制劑，無眼科專用制劑。由于血眼屏障的存在，全身性用藥的體內(nèi)生物利用率差，眼內(nèi)的藥物濃度極低。通常情況下，雷帕霉素口服生物利用率僅有15％，藥物吸收入血后95％的藥物分布于紅細胞內(nèi)，血漿中的含量僅占3％，游離狀態(tài)的藥物極少。由此帶來全身性的用藥的劑量加大，不僅增加了治療成本，特別是具有很大的毒副作用。
為此，史偉云等人也曾經(jīng)提出采用眼內(nèi)用藥的雷帕霉素制劑，并向中國專利局提交了專利申請，申請?zhí)?00410086255.0，名稱為“雷帕霉素在制備眼內(nèi)植入緩釋藥物中的應(yīng)用”。在該專利的申請文件中，申請人特別指出，免疫抑制劑在眼內(nèi)的藥物濃度很低時，不能起到治療眼科與免疫有關(guān)的疾病。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種治療眼部免疫性疾病及抑制增殖、新生血管的眼表用藥，既可避免全身性用藥的副作用又可達到治療效果，同時可與小量的皮質(zhì)類固醇激素、環(huán)孢霉素A及FK506聯(lián)合應(yīng)用，既可產(chǎn)生足夠的療效，又可避免或減輕它們各自的毒性反應(yīng)。
本發(fā)明提供了一種治療眼部免疫性疾病及抑制增殖、新生血管的眼表用藥，以雷帕霉素為主活性成分，雷帕霉素的濃度范圍0.01％～2％重量，較佳的濃度范圍為0.02％～0.5％重量。
本發(fā)明治療眼部免疫性疾病及抑制增殖、新生血管的眼表用藥，還可以含有皮質(zhì)類固醇激素、環(huán)孢霉素A或FK506。
本發(fā)明治療眼部免疫性疾病及抑制增殖、新生血管的眼表用藥，可以以棕櫚油、橄欖油、蓖麻油、月見草油、維生素A、D、E、K、魚肝油、硬脂酸、單硬脂酸之一的油酯為賦型劑制備成滴眼液。以卡波姆、聚乙二醇、聚三梨醇、甲殼素、透明質(zhì)酸、泊洛沙姆之一為賦型劑制備成凝膠。以羊毛脂、液體石蠟、黃凡士林之一為賦型劑制備成眼膏。以西黃嗜膠為為賦型劑制備成乳劑。
本發(fā)明的發(fā)明人經(jīng)過大量的試驗證明正如史偉云等在前述專利中所描述的，雷帕霉素藥物濃度過高穩(wěn)定性差、分散不均勻；但是與史偉云等在前述專利中指出的“免疫抑制劑在眼內(nèi)的藥物濃度很低時，不能起到治療眼科與免疫有關(guān)的疾病”的論斷正好相反，雷帕霉素藥物濃度在較低的范圍時可以產(chǎn)生良好的療效，而超過最大有效濃度之后可見明顯的毒副反應(yīng)。
本發(fā)明治療眼部免疫性疾病及抑制增殖、新生血管的眼表用藥可以用于治療sjgren綜合征，變應(yīng)性結(jié)膜炎，巨乳頭性結(jié)膜炎，春季結(jié)膜炎，特應(yīng)性角膜結(jié)膜炎，翼狀胬肉，Mooren潰瘍，Stevens-Johnson綜合征，干眼、鞏膜炎和表層鞏膜炎等眼表疾??；各種類型的色素膜炎癥；角膜移植術(shù)后；眼部外傷及手術(shù)后預(yù)防纖維增生、粘連及瘢痕形成、抑制新生血管。
具體實施例方式實施例1滴眼液處方雷帕霉素分別為0.01、0.02、0.05、0.1、0.2、0.5、0.9、2g尼泊金乙脂 0.03g維生素E、維生素A或月見草油 加至100ml
工藝將尼泊金乙脂用維生素E、維生素A或月見草油加熱溶解，放冷。另取雷帕霉素加維生素E、維生素A或月見草油使溶。將兩溶液合并，加維生素E、維生素A或月見草油至足量即得。
雷帕霉素滴眼液穩(wěn)定性試驗以CH3COOK.1.5H2O飽和溶液，調(diào)整相對濕度22.5％，溫度25℃，進行2％雷帕霉素滴眼液穩(wěn)定性考察，HPLC測定雷帕霉素含量，結(jié)果如下2％雷帕霉素滴眼液儲存6個月考察結(jié)果時間 1個月 2個月 3個月 6個月雷帕霉素含量 2.04％ 2.04％ 2.04％ 2.02％PH6.4 6.4 6.4 6.6外觀檢測 符合規(guī)定符合規(guī)定符合規(guī)定符合規(guī)定結(jié)論儲存6個月，按標(biāo)準(zhǔn)檢查，該制劑符合規(guī)定實施例2凝膠處方雷帕霉素 分別為0.5、1g尼泊金乙脂 0.03g卡波姆 2g蒸餾水 加至100ml工藝將尼泊金乙脂用滅菌蒸餾水加熱溶解，放冷；取卡波姆，加蒸餾水適量，待溶脹完全，備用；另取雷帕霉素加少量無水乙醇使溶。將上述溶液合并，攪拌至均勻，加蒸餾水至足量即得。
實施例3眼膏處方雷帕霉素 2g
尼泊金乙脂 0.03g液體石蠟3g無水羊毛脂 10g黃凡士林85g工藝將尼泊金乙脂、雷帕霉素加入到經(jīng)滅菌、濾過后放冷的液體石蠟中，攪勻，再加入到已干熱滅菌、濾過并冷至約50℃的凡士林和羊毛脂中攪勻凝固，即得。
實施例4乳劑處方雷帕霉素 0.01-2g尼泊金乙脂 0.03g蓖麻油 30g阿拉伯膠6.75g西黃嗜膠0.75g蒸餾水適量制成 100ml工藝將尼泊金乙脂用滅菌蒸餾水加熱溶解，放冷。將雷帕霉素以蓖麻油溶解。取阿拉伯膠、西黃嗜膠與蓖麻油置研缽內(nèi)略研勻，使膠分散于油中，一次加入15ml蒸餾水，迅速急烈研磨1-2分鐘至發(fā)出吱吱聲，即得初乳，加入尼泊金乙脂、雷帕霉素溶液邊加邊研磨，最后加入蒸餾水至配制量，研勻即得。
實施例6不同濃度RPM滴眼液眼局部耐受性及安全性的評價(1)RPM滴眼液眼部刺激性試驗結(jié)果采用Draize眼部刺激性試驗評分方法；健康Wistar大鼠20只，鼠齡8-12周，體重150-200克，隨機分成4組，每組4只。一組為空白對照組，其他三組為實驗組，右眼為實驗眼。對照組實驗眼點RPM滴眼液基質(zhì)成分50μl一次，實驗組實驗眼點分別滴0.5％RPM滴眼液50μl、0.2％RPM滴眼液50μl、0.05％RPM滴眼液50μl一次，給藥后輕合眼瞼約1秒鐘，紀(jì)錄給藥后1、24、48、72小時角膜熒光素鈉染色，裂隙燈檢查角膜、虹膜、結(jié)膜以及其他所觀察到的損傷情況，以Draize眼部刺激實驗評分表示。
結(jié)果判定將每只動物的角膜、虹膜、結(jié)膜的刺激反應(yīng)分值相加，即是全部受試動物眼刺激反應(yīng)的總分值。將總分值除以動物數(shù)，即為該受試動物眼刺激的最后分值。刺激程度積分0-3分為無刺激、4-8分輕度刺激、9-12分中度刺激、13-16分重度刺激。
結(jié)果全部受試動物眼刺激反應(yīng)評分均為0分。
結(jié)論0.5％RPM滴眼液、0.2％RPM滴眼液、0.05％RPM滴眼液眼局部應(yīng)用無刺激性。
(2)PM滴眼液眼部長期給藥的眼毒性試驗方法健康Wistar大鼠20只，鼠齡8-12周，體重150-200克，隨機分成4組，每組4只。一組為空白對照組，其他三組為實驗組，右眼為實驗眼。對照組實驗眼點RPM滴眼液基質(zhì)成分，實驗組實驗眼滴0.5％RPM滴眼液50μl、0.2％RPM滴眼液50μl、0.05％RPM滴眼液，每次50μl，每日四次，給藥后輕合眼瞼約1秒鐘，連續(xù)給藥4周。觀察其全身狀態(tài)如營養(yǎng)狀態(tài)、飲食情況、體重等；裂隙燈+檢眼鏡觀察結(jié)膜、角膜、虹膜、晶狀體、脈絡(luò)膜、視網(wǎng)膜的損害，并對角膜組織進行組織學(xué)檢查。
結(jié)果所有實驗動物營養(yǎng)狀態(tài)良好、飲食正常、體重均增加；裂隙燈+檢眼鏡觀察，結(jié)膜、角膜、虹膜、晶狀體、脈絡(luò)膜、視網(wǎng)膜未見損害；角膜組織學(xué)檢查未見異常。
結(jié)論0.5％RPM滴眼液、0.2％RPM滴眼液、0.05％RPM滴眼液眼局部應(yīng)用安全，無毒副作用。
實施例7雷帕霉素滴眼液的藥效學(xué)評價方法建立大鼠穿透性角膜移植動物模型，以SD大鼠為受體，Wistar大鼠為供體，分為5組，每組6只。手術(shù)后第二日起分別以雷帕霉素滴眼液基質(zhì)100μl、0.2％雷帕霉素滴眼液100μl、0.1％雷帕霉素滴眼液100μl、0.05％雷帕霉素滴眼液100μl、1％環(huán)孢霉素A100μl滴眼，每日四次，用藥至排斥反應(yīng)發(fā)生。對角膜植片進行臨床觀察，以混濁、水腫和新生血管3項指標(biāo)作為臨床評估標(biāo)準(zhǔn)。
結(jié)果5組角膜植片的存活時間分別為11.00±1.85d、31.71±8.44d、22.17±4.07d及19.71±3.86d，25.00±8.85d，各用藥組與對照組比較差異有顯著性(P＜0.01)。
結(jié)論0.2％、0.1％及0.05％的雷帕霉素滴眼液能顯著延長角膜植片的存活時間，對大鼠穿透性角膜移植排斥反應(yīng)具有抑制作用，隨著藥物濃度的增大抗排斥作用增強。
實施例8雷帕霉素滴眼液對低危角膜移植免疫排斥反應(yīng)的抑制作用方法建立大鼠穿透性角膜移植動物模型，以SD大鼠為受體，Wistar大鼠為供體，分為4組，每組6只。手術(shù)后第二日起分別以雷帕霉素滴眼液基質(zhì)100μl、0.2％雷帕霉素滴眼液100μl、1％環(huán)孢霉素A100μl、0.2％雷帕霉素50μl+1％環(huán)孢霉素A滴眼50μl滴眼，每日四次，用藥至排斥反應(yīng)發(fā)生。對角膜植片進行臨床觀察，以混濁、水腫和新生血管3項指標(biāo)作為臨床評估標(biāo)準(zhǔn)。
結(jié)果4組角膜植片的存活時間分別為11.00±1.85d、31.71±8.44d、25.00±8.85d及41.33±1.63d，各用藥組與對照組比較差異有顯著性(P＜0.01)，聯(lián)合用藥組與各單藥物治療組比較差異有顯著性(P＜0.01)，雷帕霉素與環(huán)孢霉素A組比較差異無顯著性(P＞0.01)。
結(jié)論雷帕霉素滴眼液能顯著延長角膜植片的存活時間，對大鼠穿透性角膜移植排斥反應(yīng)具有抑制作用，聯(lián)合用藥組效果更加，具有協(xié)同作用。
實施例9雷帕霉素滴眼液對高危角膜移植免疫排斥反應(yīng)的抑制作用方法建立大鼠高危穿透性角膜移植動物模型，以SD角膜新生血管化大鼠為受體，Wistar大鼠為供體，分為4組，每組6只。手術(shù)后第二日起分別以雷帕霉素滴眼液基質(zhì)100μl、0.2％雷帕霉素滴眼液100μl、1％環(huán)孢霉素A100μl、0.2％雷帕霉素50μl+1％環(huán)孢霉素A滴眼50μl滴眼，每日四次，用藥至排斥反應(yīng)發(fā)生。對角膜植片進行臨床觀察，以混濁、水腫和新生血管3項指標(biāo)作為臨床評估標(biāo)準(zhǔn)。
結(jié)果4組角膜植片的存活時間分別為7.67±1.03d、16.67±1.63d、15.50±2.43d及21.33±2.94d，各用藥組與對照組比較差異有顯著性(P＜0.01)，聯(lián)合用藥組與各單藥物治療組比較差異有顯著性(P＜0.01)，雷帕霉素與環(huán)孢霉素A組比較差異無顯著性(P＞0.01)。
結(jié)論雷帕霉素滴眼液能顯著延長角膜植片的存活時間，對大鼠高危穿透性角膜移植排斥反應(yīng)具有抑制作用，聯(lián)合用藥組效果更加，具有協(xié)同作用。
實施例10雷帕霉素滴眼液免疫性角膜病的臨床效果評價方法局部應(yīng)用0.2％RPM滴眼液治療免疫性角膜病患者13例(13眼)，其中二次穿透性角膜移植術(shù)后5例(5眼)，蠶食性角膜潰瘍3例(3眼)，眼部化學(xué)傷及熱燒傷患者5例(5眼)。全部患者均局部應(yīng)用0.2％RPM滴眼液，4次/日，穿透性角膜移植術(shù)后加用1％CsA滴眼液4次/日。
結(jié)果(1)二次穿透性角膜移植術(shù)后5例，平均隨訪8.5個月，角膜植片全部透明。
(2)蠶食性角膜潰瘍3例(3眼)全部治愈，平均治愈時間28.3天。
(3)眼部化學(xué)傷及熱燒傷4例眼表穩(wěn)定，無瘢痕形成，一例輕微粘連。
結(jié)論(1)雷帕霉素滴眼液能有效抑制同種異體角膜移植術(shù)后免疫排斥反應(yīng)。
(2)雷帕霉素滴眼液能阻止蠶食性角膜潰瘍的破壞過程，促進角膜表面的愈合及上皮化。
(3)抑制眼外傷后纖維增生、瘢痕形成。
權(quán)利要求
1.一種治療眼部免疫性疾病及抑制增殖、新生血管的眼表用藥，以雷帕霉素為主活性成分，雷帕霉素的濃度范圍0.01％～2％重量。
2.按照權(quán)利要求1所述治療眼部免疫性疾病及抑制增殖、新生血管的眼表用藥，其特征在于雷帕霉素的濃度范圍為0.02％～0.5％重量。
3.按照權(quán)利要求1所述治療眼部免疫性疾病及抑制增殖、新生血管的眼表用藥，其特征在于還含有皮質(zhì)類固醇激素、或環(huán)孢霉素A、他克莫司。
4.按照權(quán)利要求1、2或3所述治治療眼部免疫性疾病及抑制增殖、新生血管的眼表用藥，其特征在于以棕櫚油、橄欖油、蓖麻油、月見草油、維生素A、D、E、K、魚肝油、硬脂酸、單硬脂酸之一的油酯為賦型劑制備成滴眼液。
5.按照權(quán)利要求1、2或3所述治療眼部免疫性疾病及抑制增殖、新生血管的眼表用藥，其特征在于以卡波姆、聚乙二醇、聚三梨醇、甲殼素、透明質(zhì)酸、泊洛沙姆之一為賦型劑制備成凝膠。
6.按照權(quán)利要求1、2或3所述治療眼部免疫性疾病及抑制增殖、新生血管的眼表用藥，其特征在于以羊毛脂、液體石蠟、黃凡士林之一為賦型劑制備成眼膏。
7.按照權(quán)利要求1、2或3所述治療眼部免疫性疾病及抑制增殖、新生血管的眼表用藥，其特征在于以西黃嗜膠為為賦型劑制備成乳劑。
8.按照權(quán)利要求1或2所述治療眼部免疫性疾病及抑制增殖、新生血管的眼表用藥，其特征在于以尼泊金乙脂為防腐劑。
9.權(quán)利要求1所述藥物在制備治療Sjgren綜合征，變應(yīng)性結(jié)膜炎，巨乳頭性結(jié)膜炎，春季結(jié)膜炎，特應(yīng)性角膜結(jié)膜炎，翼狀胬肉，Mooren潰瘍，Stevens-Johnson綜合征，干眼、鞏膜炎和表層鞏膜炎等眼表疾??；各種類型的色素膜炎癥；角膜移植術(shù)后；眼部外傷及手術(shù)后預(yù)防纖維增生、粘連及瘢痕形成、抑制新生血管形成藥物中的用途。
全文摘要
一種治療眼部免疫性疾病及抑制增殖、新生血管的眼表用藥，以雷帕霉素為主活性成分，雷帕霉素的濃度范圍0.01％～2％重量。本發(fā)明治療眼部免疫性疾病及抑制增殖、新生血管的眼表用藥可以用于治療Sjgren綜合征，變應(yīng)性結(jié)膜炎，巨乳頭性結(jié)膜炎，春季結(jié)膜炎，特應(yīng)性角膜結(jié)膜炎，翼狀胬肉，Mooren潰瘍，Stevens－Johnson綜合征，干眼、鞏膜炎和表層鞏膜炎等眼表疾??；各種類型的色素膜炎癥；角膜移植術(shù)后；眼部外傷及手術(shù)后預(yù)防纖維增生、粘連及瘢痕形成、抑制新生血管。
文檔編號A61K9/06GK1965825SQ20051004773
公開日2007年5月23日 申請日期2005年11月17日 優(yōu)先權(quán)日2005年11月17日
發(fā)明者洪晶, 李兵 申請人:洪晶, 李兵